CN1944454B - 一种抗癌化合物、该化合物的提取方法、含有该化合物的组合物、及其在制药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新颖的结构式(I)的霞草苷II。本发明还涉及以霞草根为原料的霞草苷II的提取方法，以霞草苷II为活性成份的药物组合物，以及霞草苷II和其药用组合物在制备抗癌药物中的应用。

Description

一种抗癌化合物、该化合物的提取方法、含有该化合物的组合物、及其在制药中的应用

技术领域

本发明涉及一种新化合物，具体地说是一种具有抗癌活性的化合物、该化合物的提取方法、在制药中的应用、以及含有该化合物的药物组合物。 

背景技术

癌症严重威胁着人类的生命。据世界卫生组织统计，全球58亿人口中，有近4000万人患了癌症，而且随着工业化、城市化进程的加快和环境污染的加重，癌症发病率还在继续上升，年增长率高达2-3％。目前全球每年新发癌症病人870万，因之死亡的人数达600至700万，占人口总死亡数的十分之一。我国的肿瘤发病率同样十分惊人，据卫生部统计，过去20年内我国肿瘤发病率总体呈上升之势(也有少数癌症的发病率比较稳定或下降)；90年代我国肿瘤发病率已上升为0.127％。近几年来国内每年新增肿瘤病人200万人，死亡130多万人左右，目前全国肿瘤患者总数估计在450万人左右。近年来，我国癌症发病率持续上升，多数常见实体瘤如肺癌、肝癌、结肠癌及胰腺癌等还缺乏有效药物，不少抗肿瘤药在临床应用过程中产生耐药性、毒副作用大。因此，寻找安全有效的抗肿瘤药物研究仍然是摆在科研工作者面前的一个极为重要的课题。 

从天然产物中寻找新的活性成分，并进而研制新的药物是当今攻克临床顽疾的重要途径；本发明应用最新科技手段，结合现代分离鉴定方法，通过对霞草进行系统的化学成分研究和抗肿瘤活性研究，以期为寻找新的治疗肿瘤的药物或先导化合物提供科学的依据。 

霞草根为石竹科石头花属植物霞草Gypsophila oldhamiana Miq.的根。本品全国分布较广，主产于山东、山西、陕西、宁夏、内蒙古、甘肃、新疆、河北、黑龙江等地。该植物为我国民间常用草药，《中药大辞典》收载，有些地区作为银柴胡的代用品入药。该药性甘、微寒，具有清热凉血、活血散瘀、消肿 止痛、化腐生肌等功效。主要治疗虚劳肌热、骨蒸、阴虚久疟、小儿疳热等疾患，同时还可用于跌打损伤、骨拆、外伤等。欧洲的植物化学家对该植物进行过一些研究，分得三萜、三萜皂甙、黄酮、甾醇、多糖、有机酸等化合物。药理实验研究表明，霞草中提取的三萜皂甙，给家兔在形成动脉粥样硬化的同时或以后每天内服，可降低血清胆甾醇浓度，使胆甾醇/脑磷脂系数降低，使主动脉类脂质含量降低。有人认为皂甙可作用于血浆脂蛋白，阻止胆甾醇的酯化及其在血管壁的沉积，也有人认为可以阻止胆甾醇从肠道吸收。有文献报道丝石竹皂甙、九糖甙没有抗菌效果，酶解后除去羧基上的甙键，去5个糖，生成次皂甙具有显著的抗菌作用。国内对该植物研究较少，化学成分及药理作用方面的研究均未见报道。 

在专利公开号为CN 1723951A的专利文献(文献一)中，申请人公开了具抗癌活性的霞草提取物；在公开号为CN 1760202A的专利文献(文献二)中，申请人公开了一种以霞草根为原料提取的具有抗癌性性的新化合物霞草苷I。两都都具有较好的抗癌、抗病毒作用，可以用于制备抗癌药物及抗病毒药物。但文献一中的霞草提取物的具体成人尚不明确，而文献二中公开的霞草苷I在霞草根中的含量较低，提取成本较高。 

发明内容

本发明的技术任务是，提供一种具有抗癌活性的化合物——霞草苷II。 

霞草苷II： 

英文名称为：3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)[β-D-xylopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl quillaic acid28-O-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl-(1→3)-β-D-xylopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranoside 

中文名称为：3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖醛基皂树酸28-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃夫糖苷。 

本发明的另一个技术任务是提供一种从霞草根中提取该化合物的方法。

本发明的进一步的技术任务是提供一种具有抗癌活性的药物组合物。 

本发明的另一技术任务是提供上述化合物和组合物在制备抗癌药物中的应用。 

本发明的具有抗癌活性的化合物——霞草苷II的结构式为： 

本发明的化合物是从霞草根中提取的，提取方法主要包括以下步骤： 

(1)霞草根干燥粉碎后用溶剂提取，提取液浓缩至干，即得粗提物，所述溶剂为水、丙酮、醇类或水醇混合物，其中醇为C₁-C₄的短链醇； 

(2)粗提物用ODS开口柱层析纯化，薄层监控，合并相同流分，干燥得标的化合物，洗脱剂为40％—70％醇水溶液，所述醇为甲醇、乙醇、异丙醇。 

步骤(2)中，粗提物还可以用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为氯仿-甲醇-水系统，采取梯度洗脱。 

从霞草根中提取本发明化合物的另一种方法，包括以下步骤： 

(1)霞草根干燥粉碎后用溶剂提取，提取液浓缩成相对密度为1.10～1.2的浸膏，所述溶剂为水、丙酮、醇类或水醇混合物，其中醇为C₁-C₄的短链醇； 

(2)浸膏用水溶解后，以有机溶剂萃取；萃取后的母液通过大孔树脂色谱柱，先用水洗脱弃去，再用70％以上的醇水溶液洗脱，所述醇为甲醇、乙醇、异丙醇。 

(3)醇洗脱液浓缩至干，即得粗提物； 

(4)粗提物用ODS开口柱层析纯化，薄层监控，合并相同流分，干燥得 标的化合物，洗脱剂为40％—70％醇水溶液，醇为甲醇、乙醇、异丙醇。 

步骤(2)中所述有机溶剂为乙醚、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇中的任何一种、任何两种或两种以上的组合配合使用。 

步骤(4)中，粗提物还可以用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为氯仿-甲醇-水系统，采取梯度洗脱。 

权利要求书及说明书中所涉及的浸膏的相对密度均是在60℃下测得。 

所述ODS开口柱为：装有C₁₈反相硅胶开口填充柱。 

所述梯度洗脱是指：氯仿-甲醇-水系统采用不同配比进行洗脱。 

化合物结构鉴定分析如下： 

化合物为白色粉末。 

ESIMS阴离子检测给出准分子离子峰m/z1643.7[M-H]^-，结合碳氢谱推测其分子组成为C₇₄H₁₁₆O₄₀。红外光谱分别在3417，1720和1615cm^-1处有吸收峰，提示结构中存在羟基和羰基。碳谱给出74个碳信号，其中30个碳信号归属于苷元部分，剩余的44个碳信号归属于糖单元(表1和2)。氢谱在高场给出6个角甲基信号，δ1.76，1.45，1.01，0.99，0.96和0.86，在低场给出1个烯氢信号δ5.63，结合碳谱上对应的6个角甲基信号，δ27.1，10.6，17.4，24.4，33.0和15.7，2个烯碳信号δ144.1和122.4，推测该化合物的苷元具有olean-12-ene骨架，进一步通过2D-NMR解析，并与文献数据相比较，确定该化合物的苷元为Quillaic acid。观察到苷化位移发生在C(3)(δ84.9)和C(28)(δ176.5)可推知该化合物为双糖链苷。碳谱的糖单元部分给出8个端基碳信号，δ106.1，106.0，104.6，104.1，103.3，103.3，100.9和94.5，氢谱给出8个端基氢信号，δ6.18(s)，5.85(d，J＝8.1Hz)，5.41(d，J＝7.8Hz)，5.27(d，J＝7.8Hz)，5.11(d，J＝6.7Hz)，5.07(d，J＝7.8Hz)，4.93(d，J＝7.3Hz)和4.86(d，J＝5.9Hz)，说明该化合物的结构中含有8个单糖单元。碳谱在低场给出一个羰基信号δ175.4，说明结构中存在1个葡萄糖醛酸，在高场区除了苷元的6个角甲基，还有2个糖单元的甲基信号δ18.2和16.7，结合对应的氢谱δ1.67(d，J＝6.7Hz)和1.52(d，J＝6.2Hz)，说明结构中存在两个6-去氧糖。 

将该化合物进行酸水解，水解液冷却后EtOAc萃取3次，浓缩后与Quillaic acid共薄层，R_f值相同，进一步说明该化合物的苷元为Quillaic acid。水层中和后浓缩，与标准糖共薄层，检测到葡萄糖醛酸，半乳糖，木糖，夫糖，鼠李糖和阿拉伯糖。结合DQFCOSY，TOCSY，HMQC，HMQC-TOCSY，HMBC和NOESY谱对各个单糖的碳氢核磁数据进行了归属。从表2中可以看到葡萄糖醛酸，半乳糖，木糖和夫糖的³J_H1，H2偶合常数较大，说明它们的端基氢为β构型；而两个阿拉伯糖的³J_H1，H2偶合常数分别为6.7和7.3Hz说明阿拉伯糖为⁴C₁构象，端基氢为α构型，该构象和构型进一步被NOESY谱所证实，即观测到两个阿拉伯糖的H-C(1)，H-C(3)和H-C(5)两两之间有相关信号。对于鼠李糖，端基氢为一单峰，HMBC谱中清楚的观测到该端基氢分别与C(3)和C(5)有相关，说明鼠李糖具有¹C₄构象，而端基氢为α构型。该化合物的糖链连接顺序是通HMBC实验得以确证，即δ5.27(Xyl H-C(1))与δ85.5(GlcA C(3))相关，δ5.41(GalH-C(1))与δ77.6(GlcA C(2))相关，δ4.86(GalA H-C(1))与δ84.9(C(3))相关。此外，由于夫糖端基碳有明显的酯苷键特征(δ94.5)，确定夫糖直接与C(28)相连接，该连接以及C(28)上其它单糖的连接顺序也进一步通过HMBC相关确定，即δ4.93(Ara′H-C(1))与δ78.7(Ara C(2))相关，δ5.11(Ara H-C(1))与δ85.8(Xyl′C(3))相关，δ5.07(Xyl′H-C(1))与δ83.8(Rhm C(4))相关，δ6.18(Rha H-C(1))与δ74.1(Fuc C(2))相关，δ5.85(Fuc H-C(1))与δ176.5(C(28))相关。 

此外，还通过ESI-MS/MS实验对该化合物的糖链连接顺序进行了确证，MS给出准分子离子峰[M-H]-(m/z1643.7)，该离子的MS²谱给出一子离子m/z1511.5[(M-H)-132]^-，即该化合物失掉一个末端的五碳糖(木糖或阿拉伯糖)。MS²谱图中还有一个丰度很高的碎片峰m/z955.5，表明C(28)上的五糖糖链彻底断裂，该离子的MS³谱进一步给出一个失去C(3)糖链末端木糖的碎片峰m/z823.3，同时还观测到两条糖链均失去的苷元碎片峰m/z485.2。 

根据以上解析，确定该化合物为一种新化合物。命名为霞草苷II(Oldhamianoside II)。 

其英文名称为：3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)[β-D-xylopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl quillaic acid28-O-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl-(1→3)-β-D-xylopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-fu copyranoside 

中文名称为：3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖醛基皂树酸28-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃夫糖苷。 

表1.¹H-NMR(500MHz)and¹³C-NMR(125MHz)data for Aglycon Moiety of 1in C₅D₅N.δin ppm，Jin Hz. 

^*Overlapped signals 

Assignments were based onDEPT，DQF-COSY，TOCSY，HMQC，HMBC，HMQC-TOCSY and NOESY experiments.

表2.¹H-NMR(500MHz)and¹³C-NMR(125MHz)datafor Sugar Moiety of 1 inC₅D₅N.δin ppm，J in Hz. 

^*Overlapped signals 

Assignments were based on DEPT，DQF-COSY，TOCSY，HMQC，HMBC，HMQC-TOCSY and NOESY experiments.

发明人发现本发明的霞草苷II在抗癌方面具有显著效果，在动物试验中也显示出优异的抗癌作用。 

本发明的药物组合物含有有效量的霞草苷II或其药用盐为活性成分，并含有一种或多种药学上可接受的载体。 

其中霞草苷II或其药用盐的优选含量以重量百分比计为10％-99％。 

上述本发明所说的化合物的盐是指药学上可接受的盐，例如与氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等无机碱形成的盐，或是与甲胺、乙胺、乙丙胺等有机胺形成的盐，或与天然非天然氨基酸成的盐等。 

上述药学上可接受的载体是指药学领域常规载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；湿润剂如甘油等；崩解剂如琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠等；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇等；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。另外，还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂、甜味剂等。 

本发明的化合物和药物组合物可以用于制备治疗肝癌或肺癌或口腔癌或肉瘤的药物。 

本发明的化合物、组合物可以经口服或注射等形式给药，给药量因给药途径不同而各有不同，对成人来说，每天10mg-200mg比较合适。 

用于口服给药时，可将其制成常规的固体制剂，如颗粒剂、胶囊、片剂等；制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂，如糖浆等。用于非口服给药时，可将其制成注射液、输液剂或栓剂等。 

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如将活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需剂型。 

实施方式 

下面的实施例、制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。 

〔实施例1〕： 

本发明的药物组合物含有有效量的霞草苷II或其药用盐为活性成分，并含有一种或多种药学上可接受的载体。 

其中霞草苷II或其药用盐的优选含量以重量百分比计为10％—99％。 

上述本发明所说的化合物的盐是指药学上可接受的盐，例如与氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等无机碱形成的盐，或是与甲胺、乙胺、乙丙胺等有机胺形成的盐，或与天然非天然氨基酸成的盐等。 

上述药学上可接受的载体是指药学领域常规载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等；填充剂如淀粉等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；湿润剂如甘油等；崩解剂如琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠等；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇等；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、聚乙二醇等。另外，还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂、甜味剂等。 

本发明的化合物和药物组合物可以用于制备抗癌药物。 

本发明的化合物、组合物可以经口服或注射等形式给药，给药量因给药途径不同而各有不同，对成人来说，每天10mg—200mg比较合适。 

用于口服给药时，可将其制成常规的固体制剂，如颗粒剂、胶囊、片剂等；制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂，如糖浆等。用于非口服给药时，可将其制成注射液、输液剂或栓剂等。 

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如将活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需剂型。 

实施方式 

下面的实施例、制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。 

〔实施例1〕： 

霞草根自然干燥后粉碎。取5kg霞草根与80％乙醇加热回流提取3次(第一次用30L乙醇回流1小时；第二、三次各用25L乙醇回流0.5小时)，合并乙 醇提取液，减压浓缩后，干燥得粗提物(500g)。 

取粗提物5g，经ODS开口柱层析，以60％甲醇洗脱，薄层检测，合并相同组分。对含霞草苷II流分(987mg)进行2次ODS柱层析，合并相同组分，减压干燥得霞草苷II320mg。 

〔实施例2〕： 

取实施例1中所得粗提物5g，硅胶柱层析纯化，以氯仿-甲醇-水系统为洗脱液，采取梯度洗脱(先用氯仿-甲醇-水比例为9:1:0.1的混合溶剂洗脱；接着用8:2:0.2的混合溶剂洗脱；再用65:35:10的混合溶剂洗脱；收集65:35:10的洗脱液)，薄层监控，合并相同流分，减压干燥得霞草苷II(178mg)。 

〔实施例3〕： 

霞草根自然干燥后粉碎。取5kg霞草根与丙酮加热回流提取3次(第一次用30L丙酮回流1.5小时；第二、三次各用30L丙酮回流1小时)，合并丙酮提取液减压浓缩得丙酮浸膏550g(相对密度1.2～1.3)。 

丙酮浸膏用1.5L水溶解后，用2L石油醚萃取；萃取后的母液通过大孔树脂D101色谱柱，先用3L水洗脱弃去，再用90％乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，即得粗提物260g； 

取粗提物10g，经ODS开口柱层析，以60％甲醇洗脱，薄层检测，合并相同组分。对含霞草苷II流分(2211mg)进行3次ODS柱层析，合并相同组分，减压干燥得霞草苷II(1100mg)。 

〔实施例4〕： 

霞草根自然干燥后粉碎。取5kg霞草根与40Kg60％的甲醇水溶液混合，煮沸提取2小时，过滤，得甲醇提取液。将甲醇提取液减压浓缩得甲醇浸膏650g(相对密度1.18～1.22)。 

甲醇浸膏用3L水溶解后，分别用3L乙醚、1.5L的正丁醇萃取；萃取后的母液通过大孔树脂D101色谱柱，先用3L水洗脱弃去，再用95％异丙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，即得粗提物136g； 

取粗提物5g，经ODS开口柱层析，以70％异丙醇洗脱，薄层检测，合并相同组分。对含霞草苷II流分(971mg)进行3次ODS柱层析，合并相同组分， 喷雾干燥得霞草苷II(730mg)。 

〔实施例5〕： 

霞草根自然干燥后粉碎。取5kg霞草根与水40Kg混合，煮沸提取2小时，过滤，得水提取液。将水提取液减压浓缩得水浸膏750g(1.11～1.23)。 

水浸膏用2L水溶解后，分别用4L的乙酸乙酯、1L异丙醇萃取；萃取后的母液通过大孔树脂D101色谱柱，先用水18L水洗脱弃去，再用90％甲醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，即得粗提物212g； 

取粗提物5g，经ODS开口柱层析，以50％乙醇洗脱，薄层检测，合并相同组分。对含霞草苷II流分(893mg)进行3次ODS柱层析，合并相同组分，喷雾干燥得霞草苷II(430mg)。 

〔实施例6〕： 

霞草根自然干燥后粉碎。取5kg霞草根与丙酮30L混合，煮沸提取2.5小时，过滤，得丙酮提取液。将丙酮提取液减压浓缩得丙酮浸膏460g(1.12～1.35)。 

丙酮浸膏用2L水溶解后，分别用的3L乙醚、2L乙酸乙酯、2L的异丙醇萃取；萃取后的母液通过大孔树脂D101色谱柱，先用水12L洗脱弃去，再用95％异丙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，即得粗提物103g； 

取粗提物5g，硅胶柱层析纯化，以氯仿-甲醇-水系统为洗脱液，梯度洗脱(先用氯仿-甲醇-水比例为10:1:0.1的混合溶剂洗脱；接着用8:3:0.2的混合溶剂洗脱；再用65:35:10的混合溶剂洗脱；收集65:35:10的洗脱液)，薄层监控，合并相同流分，减压干燥得霞草苷II(389mg) 

〔实施例7〕： 

霞草根自然干燥后粉碎。取5kg霞草根与90％丙醇30L混合，煮沸提取2.5小时，过滤，得丙醇提取液。将丙醇提取液减压浓缩得丙醇浸膏460g(1.22～1.35)。 

丙醇浸膏用2L水溶解后，分别用的4L石油醚、2L乙酸乙酯、1.5L的正丁醇萃取；萃取后的母液通过大孔树脂D101色谱柱，先用水10L洗脱弃去，再用99％乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩至干，即得粗提物103g； 

取粗提物5g，经ODS开口柱层析，以70％甲醇洗脱，薄层检测，合并相同组分。对含霞草苷II流分(1023mg)进行3次ODS柱层析，合并相同组分，喷 雾干燥得霞草苷II(530mg)。 

〔实施例8〕： 

霞草苷II0.5g用10ml水溶解后，搅拌下滴加5％氢氧化钠水溶液，PH值大于7时停止滴加，冷冻干燥得到霞草苷II钠盐(0.55g)。 

经发明人对比得，同样以5kg霞草根为原料，最多可以提取霞草苷I400mg，而霞草苷II可得到6g，而且提取过程高效低毒。 

通过下面的试验说明本发明化合物的活性。 

〔试验实施例1〕对6种人癌细胞的体外细胞毒作用观察 

1.1样品 

实施例7中所得的霞草苷II，实验时用双蒸水配成所需浓度，过滤除菌后以含10％小牛血清的RPMI1640培养液稀释成所需浓度备用。 

1.2细胞株 

本实验采用6种人癌细胞株，其中包括： 

KB(口腔癌)，Bel-7402(肝癌)，SGC-7901(胃癌)，MCF-7(乳腺癌)，A549(肺腺癌)，Hela(宫颈癌)。以上细胞均在含10％小牛血清的RPMI1640培养液(内含青霉素100IU/ml，链霉素100μg/ml)中，于37℃、5％CO₂培养箱中传代培养。 

上述细胞株由山东省医学科学院药物研究所药理室传代保存。 

1.3实验方法(MTT法) 

以0.25％胰酶1.0ml消化贴壁的肿瘤细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640培养液配成浓度为1×10⁴个细胞/ml的细胞悬液。于96孔培养板内每孔接种100μl(含1000个肿瘤细胞)，37℃培养24小时。给药组加入不同浓度药液，每药设3个剂量组，分别为50μg/ml，5μg/ml，0.5μg/ml，每剂量设三个平行孔，每孔加药100μl。对照组加入等体积的培养液。置37℃，5％CO₂培养箱中培养72小时后弃去培养液，每孔加入200μl0.2％MTT溶液(RPMI1640配制)。4小时后弃上清，每孔加入DMSO150μl，振荡后，在酶标仪波长570nm下测定光密度值(OD)。 

结果计算：以对照孔的肿瘤细胞为对照组，求药物对肿瘤细胞的抑制率。

以药物不同浓度对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中得出药物的半数抑制浓度(IC₅₀)。 

1.4实验结果 

实验结果见表3。 

表3.霞草苷II在体外对人肿瘤细胞生长的影响 

霞草苷II对KB，A549和Bel-7402三种人肿瘤细胞株有一定的细胞毒作用；对SGC-7901，MCF-7，Hela三种人肿瘤细胞株未见明显细胞毒作用。 

〔试验实施例2〕对小鼠移植性肿瘤生长的抑制作用 

2.1实验目的 

观察霞草苷II对动物移植性肿瘤生长的影响，对该药进行抗肿瘤药效学评价。 

2.2实验材料 

2.2.1受试药物：实施例7中所得的霞草苷II，实验时用双蒸水配制成所需浓度。 

2.2.2其他药物：注射用顺铂(CDDP)，10mg，批号：0301003，齐鲁制药厂生产。使用时用生理盐水溶解，制成溶液备用。 

2.2.3动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，许可证号：SCXK鲁20030006，由山东鲁抗医药集团有限公司提供。C57小鼠，雌性。 

2.2.4瘤株：小鼠S180肉瘤，小鼠肝癌H22，小鼠Lewis肺癌，由山东省医学科学院药物研究所药理室传代保种。 

2.3方法及结果

2.3.1对于小鼠S180肉瘤的影响 

<实验方法> 

无菌抽取接种瘤细胞7天的S180肉瘤小鼠腹水，经稀释后调整细胞数至2.0×10⁷/ml，接种于小鼠右侧腋部皮下，每只0.2ml。次日随机分组，每组10只。设空白对照组，顺铂阳性药对照(1.5mg/kg)组，样品给药组剂量为10.0mg/kg、7.5mg/kg、5.0mg/kg。给药体积25ml/kg，每天腹腔注射给药一次，连续给药10天。末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重及瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价，并将各组结果进行统计学处理。疗效评价公式： 

<实验结果> 

对于小鼠S180肉瘤的抑制作用见表4，霞草苷II10.0mg/kg组的抑瘤率为58.6％(P<0.01)；7.5mg/kg组的抑瘤率为35.4％(P<0.01)；5.0mg/kg组的抑瘤率为31.4％(P<0.05)。 

结果表明，霞草苷II对小鼠180肉瘤生长有一定的抑制作用，并呈一定的剂量依赖性。 

表4.霞草苷II对小鼠S180肉瘤生长的影响 

注：“*”与对照组比较p<0.05；“**”与对照组比较p<0.01。 

2.3.2对于小鼠肝癌H22的影响

<实验方法> 

无菌抽取接种瘤细胞7天的肝癌H22小鼠腹水，经稀释后调整细胞数至3.0×10⁷/ml，接种于小鼠右侧腋部皮下，每只0.2ml。次日随机分组，每组10只。设空白对照组，顺铂阳性药对照(1.5mg/kg)组，样品给药组剂量为10.0mg/kg、7.5mg/kg、5.0mg/kg。给药体积25ml/kg，每天腹腔注射给药一次，连续给药10天。末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重及瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价，并将各组结果进行统计学处理。疗效评价公式： 

<实验结果> 

对小鼠肝癌H22的抑制作用见表5。霞草苷II10.0mg/kg组对小鼠H22的抑瘤率为51.1％(P<0.01)；7.5mg/kg组的抑瘤率为32.8％(P<0.01)；5.0mg/kg组的抑瘤率为13.8％(P>0.05)。 

结果表明霞草苷II对小鼠肝癌H22生长有一定的抑制作用，并呈一定的剂量依赖性。 

表5.霞草苷II对小鼠肝癌H22生长的影响 

注：“*”与对照组比较p<0.05；“**”与对照组比较p<0.01。 

2.3.3对于小鼠Lewis肺癌的影响

<实验方法> 

无菌条件下，剖取接种瘤细胞7天的小鼠Lewis肺癌瘤块，以组织匀浆器制成细胞悬液，经1：2稀释后，接种于小鼠右侧腋部皮下，每只0.2ml。次日随机分组，每组10只。设空白对照组，顺铂阳性药对照(1.5mg/kg)组，样品给药组剂量为10.0mg/kg、7.5mg/kg、5.0mg/kg。给药体积25ml/kg，每天腹腔注射给药一次，连续给药8天。末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重及瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价，并将各组结果进行统计学处理。疗效评价公式： 

<实验结果> 

对小鼠Lewis肺癌的抑制作用见表6。 

表6.霞草苷II对小鼠Lewis肺癌生长的影响 

注：“**”与对照组比较p<0.01。 

霞草苷II10.0mg/kg组对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率为51.1％(P<0.01)；7.5mg/kg组的抑瘤率为49.6％(P<0.01)；5.0mg/kg组的抑瘤率为38.3％(P>0.05)。 

结果表明霞草苷II对小鼠Lewis肺癌生长有一定的抑制作用，并呈一定的剂量依赖性。 

2.4.结论

在本实验条件下，霞草苷II对小鼠S180肉瘤、小鼠肝癌H22和小鼠Lewis肺癌均具有一定的生长抑制作用，并呈一定的剂量依赖性，说明该样品具有一定的抗肿瘤活性。 

试验表明，本发明化合物霞草苷II具有良好的抗癌效果。 

下面的实施例说明包含由本发明提供的化合物的药用制剂。 

〔制剂实施例1〕片剂 

按照本领域已知的方法制备片剂，每片含有下述成份： 

霞草苷II20mg、乳糖80mg、硬脂酸镁3mg 

聚乙烯吡咯烷酮7mg。 

〔制剂实施例2〕胶囊 

按照本领域已知的方法制备胶囊，每个胶囊中含有下述成份： 

霞草苷II20mg、乳糖85mg、玉米淀粉20mg 

硬脂酸镁1mg、聚乙烯吡咯烷酮4mg。 

〔制剂实施例3〕注射液 

按照本领域已知的方法制备注射液，每个注射液中含有下述成份： 

霞草苷II80mg、注射用水2ml。 

用法：葡萄糖注射液稀释，肌肉注射，一日二次，每次1-2支；静脉点滴，一日一次，每次2-3支。 

〔制剂实施例4〕冻干制剂、无菌粉末 

按照本领域已知的方法制备冻干制剂、无菌粉末，每个冻干制剂、无菌粉末中可以含有下述成份： 

霞草苷II100mg、甘露醇120ml。 

用法：葡萄糖注射液稀释，肌肉注射，一日二次，每次1-2瓶；静脉点滴，一日一次，每次2-3瓶。

Claims (9)

1.一种具有抗癌活性的化合物，其特征在于该化合物为霞草苷II，其结构式为式(I)。

2.权利要求1所述化合物的提取方法，包括以下步骤：

(1)霞草根干燥粉碎后用溶剂提取，提取液浓缩至干，即得粗提物，所述溶剂为水、丙酮、醇类或水醇混合物，其中醇为C₁-C₄的短链醇；

(2)粗提物用ODS开口柱层析纯化，薄层监控，合并相同流分，干燥得标的化合物，洗脱剂为40％—70％醇水溶液，所述醇为甲醇、乙醇、异丙醇。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于步骤(2)中，粗提物还可以用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为氯仿-甲醇-水系统，梯度洗脱。

4.权利要求1所述化合物的提取方法，包括以下步骤：

(1)霞草根干燥粉碎后用溶剂提取，提取液浓缩成相对密度为1.18～1.35的浸膏，所述溶剂为水、丙酮、醇类或水醇混合物，其中醇为C₁-C₄的短链醇；

(2)浸膏用水溶解后，以有机溶剂萃取；萃取后的母液通过大孔树脂色谱柱，先用水洗脱弃去，再用70％以上的醇水溶液洗脱，所述醇为甲醇、乙醇、异丙醇。

(3)醇洗脱液浓缩至干，即得粗提物；

(4)粗提物用ODS开口柱层析纯化，薄层监控，合并相同流分，干燥得标的化合物，洗脱剂为40％—70％醇水溶液，醇为甲醇、乙醇、异丙醇。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于步骤(2)中所述有机溶剂为乙醚、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇中的任何一种、任何两种或两种以上的组合配合使用。

6.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于步骤(4)中，粗提物可以用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为氯仿-甲醇-水系统，梯度洗脱。

7.药物组合物，其中含有权利要求1的具有抗癌活性的化合物或其药用盐为有效成分，并含有常规药用载体。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，其中有效成分的含量以重量百分比计为10％—99％。

9.权利要求1的化合物在制备治疗肝癌或肺癌或口腔癌或肉瘤药物中的应用。