CN1940057A - 真菌菌种纯化器及利用其进行真菌菌种纯化的方法 - Google Patents

Abstract

真菌菌种纯化器及利用其进行真菌菌种纯化的方法，涉及一种菌种纯化器和利用该纯化器对真菌菌种进行纯化的方法。为了克服野外工作分离纯化大型真菌成功率低、外业接种工序繁琐等不足，本发明真菌菌种纯化器为一类U型管状容器，它由左侧管(1)、中间管(2)和右侧管(3)组成，左侧管(1)和右侧管(3)之间磨口连接有中间管(2)，纯化方法为：在左侧管中接种上大型真菌组织切块，待菌丝布满PDA培养基后，大型真菌分解木屑培养基，扩散到右侧管中；在超净工作台中，从右侧管中挑取生长旺盛的菌丝于PDA培养基中，25℃培养。本发明可以便捷、快速、准确地获得大型真菌的纯培养，受霉菌污染少，分离纯化成功率达到90％左右。

Description

真菌菌种纯化器及利用其进行真菌菌种纯化的方法

技术领域

本发明涉及一种菌种纯化器和利用该纯化器对真菌菌种进行纯化的方法。

背景技术

在野外，对采集到的大型真菌新鲜子实体进行分离纯化，因为受接种条件的限制，获得纯菌种的操作过程中，容易被陆生性强、分布广泛的霉菌污染，成功率非常低；即使从采集地将新鲜子实体运回实验室内，在超净工作台中进行分离纯化，同样也存在上述问题；另外由于路途、天气等外因影响子实体的新鲜度，也给分离纯化造成一定的困难。因此提倡野外采集，就地分离。这就要求在分离器材上有所改进。

大型真菌分布、种类与气温、降水量所控制的植被类型密切相关，中国植物种类居世界第3位，仅维管植物就有27150种，是世界公认的12个生物高度多样性的国家和地区之一。植被类型多样性、植物种类多样性决定了菌物的多样性。中国已知有大型真菌3800种以上，其中伞菌1500种，多孔菌类1300种，这与中国实际自然分布的种类比较差距很大，且我国现保藏的大型真菌菌种(株)不足已知的大型真菌3800种的1/10，主要原因是菌种分离技术、分类手段限制了人们对大型真菌的认识。大型真菌是极其重要的生物资源，为了防止因其生存的生态环境或寄生(腐生)对象的破坏或丧失，而永远失去某些、某类大型真菌，必须做好大型真菌菌种采集、分离、纯化和保藏工作。

现有的野外大型真菌菌种分离、纯化技术成功率低，操作复杂；运回实验室内受腐烂、染菌等问题困扰，一些伞菌根本无法长距离携带。大型真菌菌种分离无论室内还是野外，一直都没有解决霉菌污染的问题。

为了把我国拥有的大型真菌种质资源以菌种(株)形式永久保存起来，建立大型真菌菌种资源库，给科学研究者提供菌种(株)资源这一最基础的条件，同时为了发现认识更多的大型真菌，必须克服野外工作分离纯化大型真菌成功率低、外业接种工序繁琐等不足，需要发明特殊的器材和培养方法。

发明内容

为了克服野外工作分离纯化大型真菌成功率低、外业接种工序繁琐等不足，本发明提供一种真菌菌种纯化器及利用其进行真菌菌种纯化的方法。

本发明的真菌菌种纯化器为一类U型管状容器，它由左侧管、中间管和右侧管组成，左侧管和右侧管之间通过磨口连接中间管，其中左侧管和右侧管中装有PDA培养基，中间管中装有木屑培养基。

本发明利用上述大型真菌菌种纯化器进行真菌菌种纯化：a、分离：在真菌菌种纯化器的左侧管中接种上面积为0.5cm²的大型真菌组织切块，大型真菌和杂菌一起生长在PDA培养基上，待菌丝布满PDA培养基后，大型真菌分解木屑培养基，利用纤维素和木质素作为碳源，正常生长，并扩散到右侧管中，在右侧管中获得大型真菌的纯培养；b、纯化：在超净工作台中，从右侧管中挑取生长旺盛的菌丝于斜面PDA试管中，25℃培养即可获得纯菌丝体，将获得的纯菌种保藏即可。

本发明采用选择性培养基，并设计了特殊培养器材——大型真菌菌种纯化器，可以便捷、快速、准确地获得大型真菌的纯培养，受霉菌污染少，分离纯化成功率达到90％左右，与以往分离纯化成功率相比提高70％左右；操作比以往省去9种材料。

附图说明

图1为左侧管结构示意图，图2为中间管结构示意图，图3为右侧管结构示意图，图4为本发明的真菌菌种纯化器整体结构示意图，图5为具体实施方式四的真菌菌种纯化器整体结构示意图。

具体实施方式

具体实施方式一：如图1～4所示，本实施方式的真菌菌种纯化器为一类U型管状容器，它由左侧管1、中间管2和右侧管3组成，左侧管1和右侧管3之间磨口连接有中间管2，左侧管1和右侧管3与外界相通处均用试管塞塞紧，以防止内外气体流通产生杂菌，其中左侧管1和右侧管3中装有PDA培养基4，中间管2中装有木屑培养基5。

本实施方式中的培养基配方如下：

①PDA培养基：

马铃薯去皮200g；

葡萄糖20g；

琼脂20g；

水1000ml；

pH自然；

121℃灭菌20min。

②改进的木屑培养基：

阔叶树/针叶树粗木屑99％；

石膏1％；

加水适量，达到培养基握于手中时水悬而不滴即可；

121℃灭菌30min。

具体实施方式二：本实施方式利用真菌菌种纯化器对真菌菌种进行纯化，

具体纯化方法如下：

a、分离：在左侧管中接种上面积为0.5cm²左右的大型真菌组织切块(大型真菌表面先用75％酒精拭擦，降低污染率)，大型真菌和杂菌一起生长在PDA培养基上，待菌丝布满PDA培养基后，其他杂菌不易利用中间管中的改进木屑培养基，因为改进的木屑培养基里不含简单糖或含简单糖量极低，霉菌及其他杂菌碳的营养来源主要是简单糖类，所以在这里生长受到限制，而大型真菌分解中间管中的木屑培养基，利用纤维素和木质素作为碳源，正常生长，并扩散到右侧管中，这样在右侧管中得到大型真菌的纯培养；

b、纯化：在超净工作台中，拔下右侧管上的胶塞，从右侧管中挑取生长旺盛的菌丝于PDA培养基中，25℃培养即可获得纯菌丝体，将获得的纯菌种保藏即可。

本实施方式中所用真菌菌种纯化器需要由三部分构成，左右两管加有PDA培养基，中间管加有木屑培养基。在产品摆放平稳的基础上，三部分可以由任意比组成。

具体实施方式三：本实施方式与以往分离纯化方法进行对比：

(一)以往在外业或实验室分离纯化大型真菌操作步骤：

材料：(1)灭菌的试管/平板PDA培养基，(2)镊子，(3)解剖刀，(4)75％酒精，(5)75％酒精棉，(6)无菌水，(7)1％升汞，(8)酒精灯，(9)记号笔，(10)酒精喷壶，(11)火柴，(12)灭菌空培养皿。

具体操作步骤：

1、室内灭菌——外业地普通房间：向室内喷洒酒精，沉淀室内灰尘。

实验室：紫外灯灭菌30min；

2、点燃酒精灯；

3、取5个灭菌空培养皿，分别标号1、2、3、4、5，1、2培养皿依次倒入75％酒精20ml、1％升汞20ml，3、4、5培养皿倒入无菌水20ml；

3、用75％酒精棉拭擦新鲜子实体表面；

4、切取其生长最旺盛部位的组织切块约0.5cm²；

5、浸入75％酒精5s→取出→浸入1％升汞30s→取出→依次浸入3、4、5培养皿无菌水30s；

6、在酒精灯附近用镊子夹取组织切块，移入装有PDA培养基的试管；

7、在试管口标记菌种名称以及接种日期；

8、25℃培养至菌丝布满整个试管；

9、保藏获得的纯菌种。

(二)使用本发明真菌菌种纯化器后在外业或实验室分离纯化大型真菌操作步骤：

材料：(1)按要求在真菌菌种纯化器中装入PDA培养基和木屑培养基(注：木屑培养基要塞实塞紧)，(2)解剖刀，(3)75％酒精棉。

具体操作步骤：

1、切取新鲜子实体生长最旺盛部位的组织切块约0.5cm²；

2、移入左侧管PDA培养基中；

3、在左侧管口标记菌种名称以及接种日期；

4、25℃培养，待菌丝布满整个左侧管后，沿着中间管生长，至逐渐布满右侧管；

5、挑取右侧管内大型真菌菌丝，移入斜面PDA试管中，保藏获得的纯菌种。

与以往操作相比，本方法操作便利，平均每接种一个菌种节约时间近3min；分离纯化成功率可达到90％，与以往分离纯化成功率相比提高70％左右；操作比以往省去9种材料。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一、二不同的是，真菌菌种纯化器可以由左侧管1和右侧管3两部分构成(图5)，左侧管1和右侧管3磨口相连，其中左侧管1中从左到右依次装有PDA培养基4和木屑培养基5，右侧管3中装有PDA培养基4。

本发明真菌菌种纯化器的组成形状可以各式各样，比如三角锥形、方形、不规则形状等等，凡是在本发明技术方案的基础上进行的改进，均属于本发明的保护范围。

Claims (3)

1、真菌菌种纯化器，其特征在于所述真菌菌种纯化器为一类U型管状容器，它由左侧管(1)、中间管(2)和右侧管(3)组成，左侧管(1)和右侧管(3)之间磨口连接有中间管(2)，其中左侧管(1)和右侧管(3)中装有PDA培养基(4)，中间管(2)中装有木屑培养基(5)。

2、真菌菌种纯化器，其特征在于所述真菌菌种纯化器为一类U型管状容器，它由左侧管(1)和右侧管(3)两部分构成，左侧管(1)和右侧管(3)磨口相连，其中左侧管(1)中从左到右依次装有PDA培养基(4)和木屑培养基(5)，右侧管(3)中装有PDA培养基(4)。

3、利用权利要求1或2所述的真菌菌种纯化器进行真菌菌种纯化的方法，其特征在于所述方法为：

a、分离：在真菌菌种纯化器的左侧管(1)中接种上面积为0.5cm²的大型真菌组织切块，大型真菌和杂菌一起生长在PDA培养基(4)上，待菌丝布满PDA培养基(4)后，大型真菌分解木屑培养基(5)，利用纤维素和木质素作为碳源，正常生长，并扩散到右侧管(3)中，在右侧管(3)中获得大型真菌的纯培养；

b、纯化：在超净工作台中，从右侧管(3)中挑取生长旺盛的菌丝于PDA培养基中，25℃培养即可获得纯菌丝体，将获得的纯菌种保藏即可。

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