CN1938325B - 合成分子构造 - Google Patents
合成分子构造 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1938325B CN1938325B CN200580009170.5A CN200580009170A CN1938325B CN 1938325 B CN1938325 B CN 1938325B CN 200580009170 A CN200580009170 A CN 200580009170A CN 1938325 B CN1938325 B CN 1938325B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dope
- cell
- glycolipid
- gal
- synthetic molecules
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 151
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 69
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 64
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 64
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 100
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 68
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 66
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 claims description 51
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 30
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 21
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 claims description 19
- SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N N-acetylneuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N 0.000 claims description 18
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 18
- 229940060155 neuac Drugs 0.000 claims description 18
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- -1 5-Aminopentyl Chemical group 0.000 claims description 16
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 11
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 8
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 8
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 7
- ZQPPMHVWECSIRJ-MDZDMXLPSA-N elaidic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-MDZDMXLPSA-N 0.000 claims description 6
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- YGEHCIVVZVBCLE-FSYGUOKUSA-N 3alpha-galactobiose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](O)C=O)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YGEHCIVVZVBCLE-FSYGUOKUSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N cis-palmitoleic acid Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- QVSVMNXRLWSNGS-UHFFFAOYSA-N (3-fluorophenyl)methanamine Chemical compound NCC1=CC=CC(F)=C1 QVSVMNXRLWSNGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DPUOLQHDNGRHBS-UHFFFAOYSA-N Brassidinsaeure Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCCCCCC(O)=O DPUOLQHDNGRHBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- URXZXNYJPAJJOQ-UHFFFAOYSA-N Erucic acid Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCCCCCC(O)=O URXZXNYJPAJJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- DPUOLQHDNGRHBS-KTKRTIGZSA-N erucic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCCCCC(O)=O DPUOLQHDNGRHBS-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CNVZJPUDSLNTQU-SEYXRHQNSA-N petroselinic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC\C=C/CCCCC(O)=O CNVZJPUDSLNTQU-SEYXRHQNSA-N 0.000 claims description 3
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims 4
- DJCQJZKZUCHHAL-UHFFFAOYSA-N (Z)-9-Pentadecensaeure Natural products CCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O DJCQJZKZUCHHAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims 1
- UWHZIFQPPBDJPM-FPLPWBNLSA-M Vaccenic acid Natural products CCCCCC\C=C/CCCCCCCCCC([O-])=O UWHZIFQPPBDJPM-FPLPWBNLSA-M 0.000 claims 1
- UWHZIFQPPBDJPM-FPLPWBNLSA-N cis-vaccenic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCCCC(O)=O UWHZIFQPPBDJPM-FPLPWBNLSA-N 0.000 claims 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 25
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 abstract description 4
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 142
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 138
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 61
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 61
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 48
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 33
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 33
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 32
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 30
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 30
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 22
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 19
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 19
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 19
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 19
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 14
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 14
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 14
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 14
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 8
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 8
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 6
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 5
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 208000025661 ovarian cyst Diseases 0.000 description 5
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 101710088235 Envelope glycoprotein C homolog Proteins 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 4
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- PPMPLIBYTIWXPG-UHFFFAOYSA-N Glycolipid A Natural products CCCCCCCC(CC(O)=O)OC(=O)CC(CCCCCCC)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O PPMPLIBYTIWXPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- PPMPLIBYTIWXPG-MSJADDGSSA-N L-rhamnosyl-3-hydroxydecanoyl-3-hydroxydecanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(CC(O)=O)OC(=O)CC(CCCCCCC)O[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O PPMPLIBYTIWXPG-MSJADDGSSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.ClC(Cl)Cl SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 150000008103 phosphatidic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N diphosphatidyl glycerol Natural products OP(O)(=O)OCC(OP(O)(O)=O)COP(O)(O)=O FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 239000010408 film Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 125000003976 glyceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C(O[H])([H])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N hexanedioic acid Natural products OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 2
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxybutanediamide Chemical compound NC(=O)CCC(=O)NO HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 2
- 229940067626 phosphatidylinositols Drugs 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 2
- 125000002593 sialoyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 210000004340 zona pellucida Anatomy 0.000 description 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- JSPNNZKWADNWHI-PNANGNLXSA-N (2r)-2-hydroxy-n-[(2s,3r,4e,8e)-3-hydroxy-9-methyl-1-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoctadeca-4,8-dien-2-yl]heptadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)C(=O)N[C@H]([C@H](O)\C=C\CC\C=C(/C)CCCCCCCCC)CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JSPNNZKWADNWHI-PNANGNLXSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- AFSHUZFNMVJNKX-CLFAGFIQSA-N 1,2-dioleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC AFSHUZFNMVJNKX-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- HOMYIYLRRDTKAA-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-N-[3-hydroxy-1-[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoctadeca-4,8-dien-2-yl]hexadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(C(O)C=CCCC=CCCCCCCCCC)COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HOMYIYLRRDTKAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPIQXPLWZCDIHI-ISLYRVAYSA-N 5-hydroxy-1-(4-sulfophenyl)-4-[(e)-(4-sulfophenyl)diazenyl]-1h-pyrazole-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=NN(C=2C=CC(=CC=2)S(O)(=O)=O)C(O)=C1\N=N\C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KPIQXPLWZCDIHI-ISLYRVAYSA-N 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 1
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102000018614 Uromodulin Human genes 0.000 description 1
- 108010027007 Uromodulin Proteins 0.000 description 1
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- WPIHMWBQRSAMDE-YCZTVTEBSA-N beta-D-galactosyl-(1->4)-beta-D-galactosyl-N-(pentacosanoyl)sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC WPIHMWBQRSAMDE-YCZTVTEBSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 description 1
- RIZIAUKTHDLMQX-UHFFFAOYSA-N cerebroside D Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC)COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O RIZIAUKTHDLMQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000068 chlorophenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- GIGAVEHCPDOYLJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;propan-2-ol;hydrate Chemical compound O.CC(C)O.CCOC(C)=O GIGAVEHCPDOYLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002298 globosides Chemical class 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000982 limb bud Anatomy 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 125000005630 sialyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000943 tartrazine Drugs 0.000 description 1
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 1
- 150000003538 tetroses Chemical class 0.000 description 1
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 description 1
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 1
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
- C07H15/10—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical containing unsaturated carbon-to-carbon bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0006—Modification of the membrane of cells, e.g. cell decoration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0604—Whole embryos; Culture medium therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0641—Erythrocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Laminated Bodies (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及自发和稳定地掺入脂双层(包括细胞膜)的合成分子。本发明特别是，但并非仅仅涉及这些分子用作合成膜锚着点或者合成分子构造，从而在细胞表面抗原表达中实现定性和定量变化的用途。
Description
技术领域
本发明涉及自发和稳定地结合入脂质双层(包括细胞膜)的合成分子。本发明特别而言，并非仅仅，涉及这些分子用作合成膜锚着点或者合成分子构造，从而在细胞表面抗原表达中实现定性和定量变化的用途。
背景技术
细胞表面抗原介导大量细胞和它们环境之间的相互作用。这些相互作用包括细胞-细胞相互作用、细胞-表面相互作用和细胞-溶质相互作用。细胞表面抗原还介导着细胞内信号传输。
细胞通过表达的细胞表面抗原中的定性和定量差异进行特征化。在表达的细胞表面抗原中的定性和定量变化改变了细胞功能(作用方式)和细胞功能(提供的作用)。
能够在通过细胞表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化具有诊断学和治疗学价值。在通过细胞表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化的转基因和非转基因方法是已知的。
蛋白质着色是一种在通过细胞表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化的非转基因方法。这种方法利用了GPI连接蛋白质经它们的脂质末端自发固着到细胞膜上的能力。描述于国际申请号PCT/US98/15124(WO99/05255)附属说明书中的方法包括将从生物源分离的GPI连接蛋白质插入到膜内的步骤。据称这些分离的GPI-固着蛋白质具有不寻常的与细胞表膜重新结合的能力。
细胞存在于含水的环境中。细胞膜为在细胞的细胞质和此含水环境之间充当半渗透屏障的脂双层。将抗原定位在细胞表面上还可以通过使用糖脂作为膜锚着点而得到实现。
描述于国际申请号PCT/NZ02/00214(WO03/034074)附属说明书中的方法包括将可控量的糖脂插入到膜内的步骤。对插入的糖脂量进行控制，从而提供具有期望抗原表达水平的细胞。
描述于国际申请号PCT/NZ03/00059(WO03/087346)附属说明书中的方法包括将修饰的糖脂插入到作为“膜锚着点”的膜内的步骤。修饰的糖脂供抗原在细胞或者多细胞结构表面定位之用。从而，新的特征可以给予到细胞或者多细胞结构。
这些方法一般都包括从生物源分离糖脂或者连接糖脂的抗原。从生物源分离糖脂或者连接糖脂的抗原是非常昂贵和易变的，并且可分离量通常会受到限制。从动物源获得试剂用于治疗学应用是尤其存在问题的，特别是意欲将该试剂或者其衍生物产品给药至人类主体时。
优选使用合成分子，因为由此受动物病原体污染的危险可以得到排除。已经了报道天然存在糖脂的合成相应物和合成新糖脂。然而，对于欲用作膜锚着点的合成糖脂而言，它必须能够自发和稳定地结合入含水环境中的脂双层中。合成糖脂在诊断学和治疗学应用中的使用进一步受限于那些合成糖脂需要在盐水中形成溶液。
用于促进糖脂在盐水中溶解的有机溶剂和/或净洗剂必须是生物相容的。由于它们会对一些细胞膜造成损伤，因此通常必须将溶剂和净洗剂除去或者快速消除。溶剂或者净洗剂从所述制剂中的除去会成为一个难题。
对细胞膜的损伤可以得到防止，特别是其中细胞或者多细胞结构的供给源(例如胚胎)得到限制或者细胞为对摄动特别敏感的细胞(例如肝细胞)时。
就它们自发和稳定地结合入脂双层(包括细胞膜)的能力而言，需要与天然存在的糖脂和连接糖脂的抗原功能等效的水溶性合成分子。
提供这种合成分子可以避免从生物源分离的糖脂和连接糖脂的抗原的局限性，并且可以促进在通过细胞表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化。
本发明的目的是提供这种合成分子和它们的制备方法。本发明的另一目的是提供用于诊断学和治疗学应用中的合成分子。上述目的将分别进行阐述，同时目的是至少为公众提供一种可用的选择。
发明内容
本发明的第一方面在于结构为F-S1-S2-L的水溶性合成分子构造，其中：
F是糖表位(glycotope)；
S1是3-氨基丙基、4-氨基丁基或5-氨基戊基；
S2是-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-或-CO(CH2)5CO-；
L为选自二酰基-和二烷基-甘油脂的脂；并且
F、S1、S2和L共价连接。
优选L选自二酰基甘油脂、磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和衍生于一种或多种以下物质的双磷脂酰甘油：反式-3-十六烯酸、顺式-5-十六烯酸、顺式-7-十六烯酸、顺式-9-十六烯酸、顺式-6-十八烯酸、顺式-9-十八烯酸、反式-9-十八烯酸、反式-11-十八烯酸、顺式-11-十八烯酸、顺式-11-二十烯酸或者顺式-13-二十二烯酸。更优选L衍生于一种或多种顺式-不饱和脂肪酸。最优选L选自：1，2-O-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)和1，2-O-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)。
优选L为甘油基磷酸脂，并且所述分子包括以下亚结构：
其中n＝3～5，X为H或者C，并且*不为H。优选n为3。
当分子溶液与脂双层解除时，优选该分子自发结合入脂双层中。更优选该分子稳定地结合入脂双层中。
对S1-S2进行选择，从而提供水溶性的合成膜锚着点或者合成分子构造。
优选F为三个(三糖)或者更多个糖单元组成的天然存在或者合成糖表位。更优选F为选自以下的糖表位：乳糖-新-四酰基(lacto-neo-tetraosyl)、乳糖四酰基(lactotetraosyl)、乳糖-正-己酰基(lacto-nor-hexaosyl)、乳糖-异-辛酰基(lacto-iso-octaosyl)、球四酰基(globoteraosyl)、球-新-四酰基(globo-neo-tetraosyl)、球戊酰基(globopentaosyl)、神经节四酰基(gangliotetraosyl)、神经节三酰基(gangliotriaosyl)、神经节戊酰基(gangliopentaosyl)、异球三酰基(isoglobotriaosyl)、异球四酰基(isoglobotetraosyl)、粘三酰基(mucotriaosyl)和粘四酰基(mucotetraosyl)系列低聚糖。最优选F选自包括以下末端糖基的糖表位：GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ；Galα1-3Galβ；Galβ；Galα1-3(Fucα1-2)Galβ；NeuAcα2-3Galβ；NeuAcα2-6Galβ；Fucα1-2Galβ；Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Fucα1-2Galβ1-4G1cNAcβ1-6(Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcα1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；或者GalNAcβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc。
优选S1为3-氨基丙基。
在第一实施方案中，F为介导细胞-细胞相互作用或者细胞-表面相互作用的分子。优选F为对表达在靶细胞或者表面上的组分具有亲合力的碳水化合物。更优选F对表达在上皮细胞或者细胞外间质的组分具有亲和力。更优选F对表达在子宫内膜上皮细胞或者细胞外间质的组分具有亲和力。最优选表达在子宫内膜上皮细胞或者细胞外间质上的组分可以为天然表达的组分或者为外源性含有组分。
在第二实施方案中，F为介导细胞溶质间相互作用的分子。优选F为键接分子的配体，其中键接分子的存在用于诊断病理症状。更优选F为抗体(免疫球蛋白)配体。
在具体的实施方案中，所述水溶性合成分子构造具有以下结构：
表示为Atri-sp-Ad-DOPE(I)；结构：
表示为Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；结构：
表示为Atri-sp-Ad-DSPE(III)；结构：
表示为Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；结构：
表示为Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；结构：
表示为Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；结构：
表示为Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；结构：
表示为Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；或者结构
表示为Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
M一般为H，但是可以被其它一价阳离子替换，比如Na+、K+或者NH4 +。
本发明的第二方面在于制备结构为F-S1-S2-L的水溶性合成分子构造的方法，包括以下步骤：
1.使活化剂(A)与脂(L)反应，从而提供活化脂(A-L)；
2.对抗原(F)进行衍生，从而提供衍生化的抗原(F-S1)；和
3.使A-L与F-S1缩合，从而提供分子；
其中：
A为选自以下的活性剂，包括：(C3～C7)含碳二酸(carbodioic acids)的二(N-羟基琥珀酰亚胺基)、二(4-硝基苯基)、二(五氟苯基)、二(五氯苯基)酯。
L为选自二酰基-和二烷基-甘油脂的脂。
F是糖表位；
S1是3-氨基丙基、4-氨基丁基或5-氨基戊基；
S2是CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-或-CO(CH2)5CO-；并且
F、S1、S2和L共价连接。
当分子溶液与脂双层解除时，优选该分子自发结合入脂双层中。更优选该分子稳定地结合入脂双层中。
优选F选自天然存在或者合成的糖表位。
优选L为甘油基磷脂。更优选L选自磷脂酸酯、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和由以下一种或多种物质衍生得到的双磷脂酰甘油：反式-3-十六烯酸、顺式-5-十六烯酸、顺式-7-十六烯酸、顺式-9-十六烯酸、顺式-6-十八烯酸、顺式-9-十八烯酸、反式-9-十八烯酸、反式-11-十八烯酸、顺式-11-十八烯酸、顺式-11-二十烯酸或者顺式-13-二十二烯酸。更优选L衍生于一种或多种顺式-不饱和脂肪酸。最优选L选自：1，2-O-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)、1，2-O-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)和rac-1，2-二油酰基丙三醇(DOG)。
优选L为甘油基磷酸脂，并且所述分子包括以下亚结构：
其中n＝3～5，X为H或者C，并且*不为H。优选n为3。
优选对A(R-S2)和S1进行选择，从而提供水溶性的合成分子构造。
优选F为三个(三糖)或者更多糖单元组成的天然存在或者合成糖表位。更优选F为选自以下的糖表位：乳糖-新-四酰基(lacto-neo-tetraosyl)、乳糖四酰基(lactotetraosyl)、乳糖-正-己酰基(lacto-nor-hexaosyl)、乳糖-异-辛酰基(lacto-iso-octaosyl)、球四酰基(globoteraosyl)、球-新-四酰基(globo-neo-tetraosyl)、球戊酰基(globopentaosyl)、神经节四酰基(gangliotetraosyl)、神经节三酰基(gangliotriaosyl)、神经节戊酰基(gangliopentaosyl)、异球三酰基(isoglobotriaosyl)、异球四酰基(isoglobotetraosyl)、粘三酰基(mucotriaosyl)和粘四酰基(mucotetraosyl)系列低聚糖。最优选F选自包括以下末端糖基的糖表位：GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ；Galα1-3Galβ；Galβ；Galα1-3(Fucα1-2)Galβ；NeuAcα2-3Galβ；NeuAcα2-6Galβ；Fucα1-2Galβ；Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcα1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；或者GalNAcβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc。
当F为糖表位时，L为甘油基磷脂和S2选自包括以下的基团：-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-(己二酸酯)、-CO(CH2)5CO-和-CO(CH2)5NHCO(CH2)5CO-，优选S1为选自3-氨基丙基、4-氨基丁基或者5-氨基戊基的C3-5-氨基烷基。更优选S1为3-氨基丙基。
在第一实施方案中，F为介导细胞-细胞相互作用或者细胞-表面相互作用的分子。优选F为对表达在靶细胞或者表面上的组分具有亲合力的碳水化合物。更优选F对表达在上皮细胞或者细胞外间质上的组分具有亲和力。更优选F对表达在子宫内膜上皮细胞或者细胞外间质上的组分具有亲和力。最优选表达在子宫内膜上皮细胞或者细胞外间质上的组分可以为天然表达的组分或者为外源性含有组分。
在第二实施方案中，F为介导细胞溶质间相互作用的分子。优选F为键接分子的配体，其中键接分子的存在用于诊断病理症状。更优选F为抗体(免疫球蛋白)配体。
在具体的实施方案中，所述水溶性的合成分子构造具有以下结构：
表示为Atri-sp-Ad-DOPE(I)；结构：
表示为Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；结构：
表示为Atri-sp-Ad-DSPE(III)；结构：
表示为Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；结构：
表示为Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；结构：
表示为Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；结构：
表示为Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；结构：
表示为Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；或者结构：
表示为Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
M一般为H，但是它可以被其它一价阳离子替换，比如Na+、K+或者NH4 +。
本发明的第三方面在于根据本发明第二方面的方法制备的水溶性合成分子构造。
本发明的第四方面在于在通过细胞或者多细胞结构表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化的方法，包括以下步骤：
1.在足以在通过细胞或者多细胞结构表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化的时间和温度下，使细胞或者多细胞结构的悬浮液与根据本发明第一方面或者第三方面的水溶性合成分子构造接触。
优选所述细胞或者多细胞结构源于人类。
优选水溶性合成膜锚着点或者合成分子构造在悬浮液中的浓度为0.1～10mg/mL。
优选所述温度为2～37℃。更优选所述温度为2～25℃。最优选所述温度为2～4℃。
在第一实施方案中，所述细胞为红血球。
在此实施方案中，优选F选自包括以下末端糖基的糖表位：GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ；Galα1-3Galβ；Galβ；Galα1-3(Fucα1-2)Galβ；NeuAcα2-3Galβ；NeuAcα2-6Galβ；Fucα1-2Galβ；Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcα1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；或者GalNAcβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc。更优选F为选自低聚糖GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ和Galα1-3(Fucα1-2)Galβ的glycotopes。
优选所述合成分子构造选自以下，包括：Atri-sp-Ad-DOPE(I)；Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；Atri-sp-Ad-DSPE(III)；Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
在第二实施方案中，所述多细胞结构为胚胎。
在此实施方案中，优选F为连接分子，其中该连接分子对表达在子宫内膜上皮细胞或者细胞外间质上的组分具有亲和力。
表达在子宫内膜上皮细胞或者细胞外间质上的组分可以为天然表达的组分或者为外源性含有组分。
优选所述水溶性合成分子构造选自以下，包括：Atri-sp-Ad-DOPE(I)；Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；Atri-sp-Ad-DSPE(III)；Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
在第三实施方案中，所述细胞为红血球。
在此实施方案中，优选F为键接分子的配体，其中键接分子的存在用于诊断病理症状。更优选F为抗体(免疫球蛋白)配体。
本发明的第五方面在于含有根据本发明第一或者第三方面的水溶性合成分子构造的细胞或者多细胞结构。
优选所述细胞或者多细胞结构源于人类。
在第一实施方案中，所述细胞为含有选自以下水溶性合成分子构造的红血球，包括：Atri-sp-Ad-DOPE(I)；Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；Atri-sp-Ad-DSPE(III)；Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
在第二实施方案中，所述多细胞结构为含有选自以下水溶性合成分子构造的胚胎：Atri-sp-Ad-DOPE(I)；Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；Atri-sp-Ad-DSPE(III)；Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
本发明的第六方面在于包括根据本发明第一或者第三方面的水溶性合成分子构造的干燥制品或者溶液的试剂盒。
优选根据本发明第一或者第三方面的水溶性合成分子构造选自：Atri-sp-Ad-DOPE(I)；Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；Atri-sp-Ad-DSPE(III)；Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
本发明的第七方面在于，包括根据本发明第五方面的细胞或者多细胞结构的悬浮溶液形式的混悬物的试剂盒。
优选所述悬浮溶液基本不含脂。
优选所述细胞或者多细胞结构源于人类。
优选所述细胞为不天然表达A-或者B-抗原并且含有选自以下的水溶性合成分子构造的红血球：Atri-sp-Ad-DOPE(I)；Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)；Atri-sp-Ad-DSPE(III)；Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；Htri-sp-Ad-DOPE(VII)；Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)；Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)；Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)；和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。更优选所述细胞为灵敏度对照。
本发明的第八方面在于包括根据本发明第一或者第三方面的水溶性合成膜锚着点或者合成分子构造的干燥制品或者溶液的药物制剂。
优选所述药物制剂为吸入给药的制剂形式。
优选所述药物制剂为注射给药的制剂形式。
本发明的第九方面在于包括根据本发明第五方面的细胞或者多细胞结构的药物制剂。
优选所述细胞或者多细胞结构源于人类。
优选所述药物制剂为吸入给药的制剂形式。
优选所述药物制剂为注射给药的制剂形式。
发明详述
当分子溶液与脂双层接触时，本发明的合成分子构造自发和稳定地结合入脂双层(比如膜)中。虽然并不希望由理论对其进行限定，但是可以相信，脂(L)的脂末端插入膜内是热力学有利地。随后合成分子构造从脂质膜的解离被认为是热力学不利地。惊人地，还发现在此确定的合成分子构造具有水溶性。
本发明的合成分子构造用于转化导致表达的表面抗原中产生定性和/或定量变化的细胞。可以识别，根据本发明的细胞转化作用不同于通过基因工程进行的细胞转化作用。本发明提供细胞的表型转化作用，不提供遗传转化作用。
在本说明书上下文中，关于细胞而使用的术语“转化作用”是指将外源性制备的合成分子构造插入或者结合入细胞膜中，从而在通过细胞表达的细胞表面抗原中实现定性和定量变化。
本发明的合成分子构造包括经间隔基团(S1-S2)与脂质部分(或根)(L)连接的抗原(F)。所述合成分子构造可以通过缩合抗原的伯氨基烷基、仲脂族氨基烷基或者伯芳香胺衍生物与活化脂质而进行制备。制备新甘油共轭物方法已经得到了综述(Bovin，N.Biochem.Soc.Symp.，69，143-160)。
使用本发明的合成分子构造，期望的表型转化作用可以通过一步法或者二步法实现。在一步法中，水溶性合成分子构造(F-S1-S2-L)包括表面抗原作为F。
在二步法中，合成分子构造(F-S1-S2-L)包括作为官能团的抗原(F)，表面抗原可以连接到该官能团上，随后将合成分子构造插入到膜中。所述官能团可以为比如外源凝集素、抗生物素蛋白或者维生素H的基团。当用于两步法时，所述合成分子构造充当合成膜锚着点的作用。
根据本发明对伯氨基烷基、仲脂族氨基烷基或者伯芳香胺以及脂质活化剂进行选择，从而提供具有水溶性的合成分子构造，并且当该合成分子构造溶液与脂双层接触时它将自发和稳定地结合入脂双层。
在此说明书上下文中，措词“水溶性”是指在不存在有机溶剂或者净洗剂下，当合成分子构造与水或者盐水接触时稳定的单相系统得到形成，并且术语“溶液”具有相应的含义。
在本说明书上下文中，措词“稳定地结合”是指合成分子构造结合入脂双层或者膜内，同时在脂双层或者膜与脂双层或者膜的外部含水环境之间具有最小继发交换。
伯氨基烷基、仲脂族氨基烷基或者伯芳香胺乙基活化剂的选择取决于要连接到脂质(L)的抗原(F)的理化性质。
本领域熟练的技术人员应当理解，对于非特异性相互作用，比如二酰基-或者二烷基-甘油酯和膜之间的相互作用，天然存在脂质的结构异构体和立体异构体也是功能等效的。例如，发明人可以预期二酰甘油2-磷酸酯可以被磷脂酸酯(二酰甘油3-磷酸酯)代替。此外，本发明发明若可以预期磷脂酸酯的绝对构型可以为或者R或者S。
本发明发明人已经确定，为了制备其中抗原(F)是选自ABO血型A-、B-和H-抗原的糖表位的本发明合成分子构造，应当对伯氨基烷基、仲脂族氨基烷基或者伯芳香胺以及活性剂进行选择，从而提供具有一种根据下表中结构的间隔基团(S1-S2)：
本领域熟练的技术人员应当理解，一旦用于给定类型抗原的间隔基团(S1-S2)的结构得到确定，可以采用相同结构的间隔基团制备具有类似理化性质的其它类型抗原的合成分子构造。
例如，对于其中F是ABO血型A-、B-和H-抗原的糖表位的合成分子构造(F-S1-S2-L)的间隔基团结构，也可以对该间隔基团结构进行选择，以制备理化性质与ABO血型A-、B-和H-抗原的糖表位相似的其它抗原的合成分子构造。
原则上，糖脂或者糖蛋白相关的大量血型的糖表位都可以是合成分子构造F-S1-S2-L的抗原(F)，其中S1-S2-L与表示为以下的合成分子构造的相应部分相同或者等效：Atri-sp-Ad-DOPE(I)，Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)，Atri-sp-Ad-DSPE(III)，Btri-sp-Ad-DOPE(VI)，Htri-sp-Ad-DOPE(VII)，Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)，Galβ-sp-Ad-DOPE(IX)，Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)和Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)。
已知的相关血型糖脂和糖蛋白(参见参考文献)的结构提供于以下：
糖脂
＊
(＊通常，对于几乎所有的A-抗原实施例，末端A糖基GalNAc都可以替换为B糖基Gal。另外，缺乏A或者B定子就形成等量的H定子。)
A-6-1
A-6-2
A-7-2(ALey)
A-7-1(ALeb)
A-7-4
A-8-2
A-9-3
A-12-2
A-14-2
A-16-2
乳糖基酰基鞘氨醇(Lactosylceramide)
Galβ1→4Glcβ1→1Cer
血糖苷脂/GM3
NeuAcα2→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Lactotriaosylceramide
GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Globotriaosylceramide/PK
Galα1→4Galβ1→4Glcβ1→1Cer
红细胞糖苷脂/P
GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Paragloboside/neolactotetraosylceramide
Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Lec-4/Lactotetraosylceramide
Galβ1→3GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Sialoyl paragloboside/sialoyl neolactotetraosylceramide
NeuAcα2→3Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
H-5-1
Lex-5
H-5-2
Lea-5
Sialyl Lex
Sialyl Lea-6/胃肠癌症抗原(GlCA或者Ca 19-9)
Disialoyl Lea-7
Leb-6
Ley-6
P-like
GalNAcβ1→3Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
福斯曼抗原
GalNAcα1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Cad红血球
Cad肝癌抗原
P1
Gaα1→4Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
LKE/’GL 7/SSEA-4
NeuAcα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1→1Cer
B-6-1
H-6-4
B-6-2
BLeb-7
BLey-7
i抗原/乳糖基-N-nor-hexaosylceramide
Galβ1→4GlcNAclβ1→3Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Sialyl-nor-hexaosylceramide/sialoyl-lacto-N-nor-hexaosylceramide
NeuAcα2→3Galβ1→4GlcNAclβ1→3Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer
Lex-7
H-8-3
Lex-8
Leb-8
Lea-11
B-8-2
I抗原
Lec-9(fucosylated backbone)
Lec-9(fucosylated branch)
VIM-2
红血球Fl抗原
Lex-11
B-12-2
B-14-2
B-16-2
I-active polyglycosylceramide
O-连接糖蛋白
Monosialotrisaccharide
Disialotetrasaccharide
Disialoyl group oligosaccharide
H-活化三糖
Sialylated H-活性四糖
Cad寡糖
GlcNAc寡糖
粘蛋白寡糖/A-活性糖蛋白
卵巢囊肿A-活性糖蛋白-6a
卵巢囊肿A-活性糖蛋白-6b
卵巢囊肿Lea-活性糖蛋白-7
卵巢囊肿Lea-活性糖蛋白-10
卵巢囊肿A-活性糖蛋白-18
N-连接糖蛋白
复型/碱金属-稳定链
混合型
Tamm-Horsfall糖蛋白
高-甘露糖型
二烷基胎儿红血球抗原
Trisialoyl胎儿红血球抗原(disialoyl group on branch)
Monofucosyl-monosialyl foetal erythrocyte antigen(fucosylated backbone)
Monofucosyl-monosialyl foetal erythrocyte antigen(fucosylated branch)
Monofucosyl-disialyl foetal erythrocyte antigen(disialyl group on branch)
Difucosyl foetal erythrocyte antigen
Foetal lactosaminoglycan
Adult lactosaminoglycan
Monofucosyl-monosialoyl adult erythrocyte antigen
Monofucosyl-monosialoyl adult erythrocyte antigen
Difucosyl adult erythrocyte antigen
关键：Gl＝D-Gal，Gc＝D-Glc，GcN＝D-GlcNAc，M＝D-Man，F＝L-Fuc，NA＝NeuAc.
本领域熟练技术人员应当理解，其中F是寡糖的本发明合成分子构造(F-S1-S2-L)可以用作“合成糖脂”并且可以代替从生物(植物或者动物)源获得的糖脂。
在本发明说明书上下文中，术语“糖脂”是指两亲性质碳水化合物的脂质，包括：糖基化甘油脂，比如糖基化磷酸甘油脂和糖基甘油脂；糖基化鞘脂(中性糖脂)，比如糖基神经酰胺或者脑苷脂；和神经节苷脂(酸性糖脂)。
在本发明说明书上下文中，措词“连接糖脂的抗原”是指含有碳水化合物的脂质，其中抗原(例如蛋白质)经分子的碳水化合物部分连接到糖脂上。连接糖脂的抗原的实例包括GPI-连接蛋白质。
本领域熟练技术人员可以理解，糖脂本身为一种抗原。术语和措词“糖脂”和“连接糖脂的抗原”用来区分其中抗原是糖脂的天然存在分子和其中抗原(例如蛋白质)经糖脂的碳水化合物部分连接到糖脂上的天然存在分子。照此类推，根据抗原可以是合成糖脂自身或者可以连接到合成糖脂上，本发明的合成分子构造既可以称为“合成糖脂”也可以称为“合成膜锚着点”。
本领域熟练的技术人员应当理解，通过描述于国际申请号PCT/NZ2003/00059(公开为WO03087346)附属说明书的方法，糖脂的碳水化合物部分还可以进行修饰或者连接其它抗原。
在本发明说明书上下文中，术语“糖表位(glycotope)”是指位于糖脂的碳水化合物部分的抗原决定部位。在血型血清学中，糖脂质抗原的分类基于糖脂的碳水化合物部分的结构进行。
在血型血清学中，熟知A-抗原的糖表位的末端糖基为GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ，和B-抗原的糖表位的末端糖基为Galα1-3(Fucα1-2)Galβ。结合入膜内的本发明其中F为GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ或者Galα1-3(Fucα1-2)Galβ的水溶性合成分子构造分别提供了与A-抗原或者B-抗原表达RBCs血清学相当的RBCs。
天然存在的A-或者B-抗原碳水化合物部分的末端三个糖基是A和B血型鉴定的定子。天然存在A-抗原碳水化合物部分的末端四或者五个糖基是血液亚型A型1、A型2等等的定子。据此，结合有本发明合成分子构造的RBCs可以用于对不同特异性的血型测定试剂(抗体)进行特征化和区分。
本发明发明人对排除了碳水化合物部分的本发明水溶性合成分子构造进行了预期。在所述“合成糖脂”中，不是碳水化合物或者寡糖但是具有类似理化性质的抗原可以代替F。
本发明发明人还对包括与碳水化合物或者寡糖理化性质不同的抗原(F)的本发明合成分子构造进行了预期。含有这些抗原的水溶性合成分子构造可以通过选择不同的间隔基团而得到制备。
当用于国际申请号PCT/N02/00212(公开为WO03/034074)和PCT/NZ03/00059(公开为WO03087346)说明书所述的发明实践中时，将会产生由本发明合成分子构造提供的优点。这些申请的附属说明书在此引入作为参考。
在本发明实践中，所述合成分子构造克服了许多使用天然糖脂的局限性。所述合成分子构造的具体优点是它们的性能优越并且它们具有在低温(例如4℃)下转化细胞的能力。
如本文中所述，并非所有的间隔基团(S1-S2)结构都能提供具有水溶性并且自发和稳定地结合入脂双层(比如细胞膜)中的合成分子构造(F-S1-S2-L)。表示为Atri-sp-lipid(IV)和Atri-PAA-DOPE(V)的合成分子构造确定不具有水溶性和/或不能自发和稳定地结合入脂双层(比如细胞膜)中。
本发明现在将参考以下非限制性实施例和附图进行说明，其中：
图1显示了在(从左到右)为10mg/mL、5mg/mL、2mg/mL、2mg/mL*和1mg/mL下，通过天然A糖脂转化溶液转化的CellstabTM贮存的细胞的Diamed结果。使用的抗血清为Albaclone(顶部)和Bioclone(底部)。(*——在培养之后未对转化溶液(含有糖脂)进行冲洗，将其放置过夜和第二天对其进行冲洗。)
图2显示了在(从左到右)为10mg/mL、5mg/mL、2mg/mL、2mg/mL*和1mg/mL下，通过天然B糖脂转化溶液转化的CellstBbTM贮存的细胞的Diamed结果。使用的抗血清为Albaclone(顶部)和Bioclone(底部)。(*——在培养之后未对转化溶液(含有糖脂)进行冲洗，将其放置过夜和第二天对其进行冲洗。)。
图3表示在三种转化温度下，37℃(顶部)、22℃(中间)和4℃(底部)，使用天然Leb-6糖脂进行的人类Le(a-b-)红血球体外转化作用的FACS分析随时间的变化。
图4表示在4℃下通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)转化溶液进行的细胞转化的Diamed结果，所述转化溶液(从左到右)：洗涤的0.08mg/mL；未洗涤的0.08mg/mL；洗涤的0.05mg/mL；未洗涤的0.05mg/mL；洗涤的0.03mg/mL；和未洗涤的0.03mg/mL。使用的抗血清为Bioclone anti-A。
图5显示了在试验之前不进行洗涤的细胞，在4℃下通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)转化溶液进行转化的细胞的Diamed结果，所述转化溶液(从左到右)：0.08mg/mL、0.05mg/mL和0.03mg/mL。使用的抗血清为Bioclone anti-A。
图6在左侧栏显示了在4℃下，通过Btri-sp-Ad-DOPE(VI)转化溶液进行的细胞转化Diamed结果，所述转化溶液(从左到右)：洗涤的0.6mg/mL；未洗涤的0.6mg/mL；洗涤的0.3mg/mL；未洗涤的0.3mg/mL；洗涤的0.15mg/mL；和未洗涤的0.15mg/mL；和在右侧栏中显示了在4℃下，通过Btri-sp-Ad-DOPE(VI)转化溶液进行的细胞转化Diamed结果，转化溶液(从左到右)：洗涤的0.08mg/mL；未洗涤的0.08mg/mL；洗涤的0.05mg/mL；未洗涤的0.05mg/mL；洗涤的0.03mg/mL；和未洗涤的0.03mg/mL。使用的抗血清为Bioclone Bnti-B。
图7显示了在试验之前不进行洗涤的细胞，在4℃下通过Btri-sp-Ad-DOPE(VI)转化溶液进行转化的细胞的Diamed结果，转化溶液(从左到右)：0.6mg/mL、0.3mg/mL和0.15mg/mL。
图8显示了在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含经洗涤的A0.07+B0.3mg/mL。针对抗A和抗B，管3和4包含未洗涤的A0.07+B0.3mg/mL。
图9显示了在试验之前不进行洗涤的细胞在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含未洗涤的A0.07+B0.3mg/mL。
图10显示了在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含经洗涤的A0.07+B0.2mg/mL。针对抗A和抗B，管3和4包含未洗涤的A0.07+B0.2mg/mL。
图11显示了在试验之前不进行洗涤的细胞在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含未洗涤的A0.07+B0.2mg/mL。
图12显示了在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含经洗涤的A0.06+B0.3mg/mL。针对抗A和抗B，管3和4包含未洗涤的A0.06+B0.3mg/mL。
图13显示了在试验之前不进行洗涤的细胞在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含未洗涤的A0.06+B0.3mg/mL。
图14显示了在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含经洗涤的A0.06+B0.2mg/mL。针对抗A和抗B，管3和4包含未洗涤的A0.06+B0.2mg/mL。
图15显示了在试验之前不进行洗涤的细胞，在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含未洗涤的A0.06+B0.2mg/mL。
图16显示了在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含经洗涤的A0.05+B0.3mg/mL。针对抗A和抗B，管3和4包含未洗涤的A0.05+B0.3mg/mL。
图17显示了在试验之前不进行洗涤的细胞，在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含未洗涤的A0.05+B0.3mg/mL。
图18显示了在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含经洗涤的A0.05+B0.2mg/mL。针对抗A和抗B，管3和4包含未洗涤的A0.05+B0.2mg/mL。
图19显示了在试验之前不进行洗涤的细胞，在4℃下，通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)平行转化作用转化的细胞的Diamed结果。针对抗A和抗B，管1和2(从左到右)包含未洗涤的A0.05+B0.2mg/mL。
对比实施例
这些对比实施例并不构成本发明权利要求部分。这些对比实施例描述了使用天然糖脂进行的红血球转化。
对比实施例1-天然糖脂的制备
通过HPLC纯化
在第一阶段，在每次运行之前都用干燥二氧化硅(15～25μm)对柱进行填充。因为二氧化硅可以进行排除以及理论上其可以高水平不可逆地粘结杂质，因此可以对相对脏的样品使用HPLC。
在硅胶上对糖脂进行分离，使用高极性流动相。洗脱程序为线性梯度，开始为100％的氯仿-甲醇-水80∶20∶1(v/v)，最终为100％的氯仿-甲醇-水40∶40∶12(v/v)。
使用的HPLC设备是能够以程序比例泵入和混合四种分离溶剂的Shimadzu系统。由于氯仿、甲醇和水以不同的速率蒸发，因此对程序进行开发，使得所述溶剂组分在未进入HPLC不进行混合。
所述Shimadzu HPLC通过依次从四个烧瓶之一中提取“弹药”混合四种不同的液体。在管道中氯仿和水“弹药”彼此直接相接会引起混溶性问题。甲醇需要夹在这两个不互溶的组分之间。另外，将水与甲醇按1∶1的比例进行预混合，以进一步避免混溶性问题。
对比实施例2-使用天然糖脂进行的红血球转化的转化作用
凝集
除了使用常规的试管血清学之外，使用Diamed-ID Micro Typing System通过凝聚作用对红血球的转化作用进行评价。不使用Diamed ABO分型卡。使用的卡为NaCl、酶试验和冷凝集素卡，它们不预装载任何抗血清或者其它试剂。这允许以两种方法应用特异抗血清。
表1凝胶-卡片
在试管血清学和Diamed系统之间进行对比试验，以确定两个系统的性能。细胞在25℃下转化4小时。使用计量相等的Seraclone和Alba-clone抗A血清。所得结果示于下表3中。
表2.在试管血清学与Diamed系统对比中使用的抗血清。
表3.试管血清学与Diamed系统比较的凝聚结果
在此试验中，经证实，使用Seraclone抗A而非Albaclone时Diamed系统比试管血清学对弱反应更为敏感。这些试剂进行了不同配制，由此不能期望它们等同进行。然而，根据操作者说明，Seraclone抗A试管血清学组合可能确实不能检测确定性。由此，弱反应就非常难以得到精确鉴定，在试管血清学中，1+和0之间的差异可能难以辨别。
最优化
对变量糖脂浓度、培养温度、培养持续时间、稀释剂和贮存溶液进行了测定，以测定它们对细胞健康的影响。通过与相关抗体的凝聚作用对转化作用的效率和稳定性进行了评价。
表4.天然糖脂A转化细胞在不同时间和温度下的试管血清学凝聚作用。
糖脂浓度
使用高度纯化(HPLC)的Leb糖脂样品和纯度较差的血型A糖脂样品进行初始转化试验。转化作用在37℃下进行1.5小时。
A糖脂样品含有其它脂质杂质，并且由此与相同浓度(w/v)的Leb糖脂样品相比，它含有按重量计相对较少的血型A分子。这由与Leb糖脂相比，产生同等的凝聚评价(参见表6)需要更高浓度的A糖脂而得到证实。
A糖脂样品中杂质的浓度还可能有助于降低其在62天周期内的稳定性——A-转化细胞在最高浓度时“死亡”(接收了最高剂量的杂质)。
表5.用于天然糖脂转化作用初始试验的抗-A和抗-Leb。
表6.在62天周期内，通过试管血清学凝聚作用评价的使用天然A和Leb糖脂转化的RBCs的稳定性。
还对上述细胞的溶血强度速率进行了测定并且这些结果示于下表7中。
表7.直观评价的溶血作用。第1天——转化之后第一次洗涤的上清液；第25和62天——在贮存后细胞再
悬浮之前的细胞防腐液中。评价尺度类似于从4+～0的凝聚作用评价尺度：hhhh-剧烈溶血，hhh-非常溶血，hh-中等溶血，h-适度溶血，w-微弱溶血和0-未观察到溶血。
这些结果表明，细胞溶血作用可以被证明与高浓度糖脂的转化作用相关。现在还不清楚进行上述作用的机制是否是通过大量插入的糖脂分裂胞质膜、上述插入速率或者可能是由于相关杂质的数量导致。然而，Leb在第62天时的结果看来支持第一种解释。
在进行溶解之前，Leb样品是高度纯化的，它是一种纯白颜色的粉末，并且因此所述溶血作用不可能是由于杂质的有害作用。参照第62天时很显然，溶血作用的量随着糖脂浓度的降低产生了减少。
培养温度
进行此试验以研究在插入步骤期间降低RBCs溶血作用的其它可能机制。先前试验已经表明，同低浓度时相比，较高糖脂浓度的溶血作用较差，由此可以认为溶血作用还可能与糖脂插入的速率相关。因为人们认为温度会影响插入的速率，因此进行试验，比较37℃时的转化作用和室温下(RT；25℃)的转化作用。
因为预计速率会由于温度降低而下降，因此室温试验的培养期为4小时。在插入后，对溶血作用进行直观估定和评价。还在细胞上进行血清学试验。结果示于表8中。
表8.在将糖脂插入RBC膜期间，培养温度对溶血作用和凝聚作用的影响。在三次洗涤的每次洗涤之时对溶血作用进行直观评价。
培养持续时间
在37℃下培养进行1和2小时，以及它对细胞健康和通过与相关抗体的凝聚作用进行评价的转化作用的影响。
表9.在培养试验持续期间使用的抗血清。
表10.培养时间对用天然糖脂转化的细胞凝聚作用的影响
这些结果表明，在天然糖脂插入期间增加培养持续时间不会增强凝聚作用。事实上，在两小时培养之后凝聚作用评价还会降低。这可能是由于膜的去稳定性或者糖脂重新返回溶液所致。
稀释
还进行了下述试验以确定改变糖脂稀释溶液是否会降低溶血作用。将PBS工作强度与2×PBS以及有2％牛血清蛋白(BSA)的PBS工作强度进行比较。细胞在37℃下培养1.5小时。结果示于表11中。
表11.在将糖脂插入RBC膜期间，改变糖脂稀释溶液对溶血作用影响的研究。
稳定性
在将A和B血型糖脂HPLC纯化至可接受的程度后，进行试验以寻找用于稳定性试验的适当浓度。
表12.用天然A糖脂转化的细胞的早期稳定性试验。
表13.用于稳定性试验(表14和表15)的抗血清。
表14.为了确定用于稳定性试验的适当浓度，用A糖脂转化的O RBCs试管血清学。
1&2在25℃下转化4小时
表15.表14.为了确定用于稳定性试验的适当浓度，用B糖脂转化的O RBCs试管血清学。
1&2在25℃下转化4小时
两组细胞使用不同浓度的天然A糖脂进行转化。转化作用在25℃下进行。对一组细胞进行长期试验，而另一组细胞每周进行凝聚作用试验。由试管血清学和Diamed得到的凝聚作用结果示于下表16中。所有细胞都贮存在CellstabTM中，放在平底烧瓶中。在任何时候，这些细胞都表现最低程度的溶血作用，甚至没有溶血作用。
表16.使用不同浓度天然A糖脂进行转化的细胞的凝聚结果。结果使用Albaclone抗-A获得。
＊-Albaclone，，同时其它都使用Seraclone抗-A.
贮存溶液
对两种细胞贮存溶液(CelpresolTM(CSL)和CellstabTM(Diamed))进行比较，以试验它们保持修饰的RBCs的相抵能力。
当贮存入两种不同的防腐液-CellstabTM和AlseversTM中时，对使用不同浓度血型A和B抗原溶液转化的RBCs的稳定性进行了试验。
将来自两种不同来源的A和B抗血清用于血清学试验中。
全部细胞都使用标准试管血清学平台试验高达42天，此时细胞凝聚反应已经达到了难以人工评价的程度(A结果参见表17，和R结果参见表18)。
对Alsevers贮存细胞进行Diamed凝胶-卡片试验至56天，该试验在第63天时由于真菌污染而停止(虽然仍然返回阳性评价)。对CellstabTM贮存细胞持续试验至高达70天，并且此时仍然可行(A结果参见图1，和B结果参见图2)。
用于稳定性试验的试剂示于表13中。
表17.使用不同浓度的A糖脂转化和贮存在或者CellstabTM或者AlseversTM中的细胞稳定性试验的试管血清学结果
＊-在培养之后未对转化溶液(含有糖脂)进行洗涤，将其放置过夜和第二天对其进行洗涤。
≠-阳性细胞标志，但是细胞负性减少(不可能评价)
表18.使用不同浓度的B糖脂转化和贮存在或者CellstBbTM或者AlseversTM中的细胞稳定性试验的试管血清学结果
＊-在培养之后未对转化溶液(含有糖脂)进行洗涤，将其放置过夜和第二天对其进行洗涤。
≠-阳性细胞标志，但是细胞负性减少(不可能评价)。
糖脂插入的FACS分析
使用天然Leb-6糖脂进行的人类Le(a-b-)红血球体外转化作用的FACS分析随时间的变化在三种转化温度下(37℃、22℃和4℃)下进行(图3)。将天然Leb-6糖脂溶于血浆中并且其用于转化RBCs，最终浓度为2mg/mL和最终悬浮为10％。
通过FACS分析，使用γ抗-Leb对反应性进行确定。(血清学检测级别为102个分子。天然糖脂在4℃下进行的8小时插入通过与抗体的凝聚作用是不可检测的。)由FACS分析得到插入曲线的速率射影并没有表明在4℃下，插入速率在24小时内将会达到凝聚作用检测水平。
低培养温度
使用天然A或B糖脂的RBCs转化作用在37℃下进行1小时和在2℃下进行不同的时间。细胞与Bioclone抗-A或者Bioclone抗-B凝聚在一起。所得结果提供于表19和20中。
表19.天然A糖脂转化作用在37℃下进行1小时和在2℃下进行不同时间的对比Diamed结果。
表20.天然B糖脂转化作用在37℃下进行1小时和在2℃下进行不同时间的对比DiBmed结果。
对于天然A糖脂和天然B糖脂而言，在2℃下，它们的转化速率都缓慢，如1小时之后的负凝聚作用评价所表明。在37℃，在此时间间隔下表现了显著的插入作用。
在2℃下，天然A糖脂需要插入48小时才能达到通过在37℃下转化作用可获得的相同插入水平。在此时间之后，没有观察到进一步的插入作用。同样地，天然B糖脂在2℃下的插入作用也没有37℃下的转化作用迅速。通过继续培养并不能促进凝聚作用评价，由此看来，对于这些浓度此时已经达到了最大插入。
实施例
以下实施例描述了使用本发明合成分子构造的红血球转化作用。在这些实施例范围内，术语“合成糖脂”用来指代上述这些构造。
实施例1-合成糖脂的制备
物质和方法
TLC分析在硅胶60F254板(Merck)上进行，化合物通过用8％磷酸水溶液点板，随后在超过200℃的温度下加热进行检测。柱色谱在硅胶60(0.2～0.063mm，Merck)或者葡聚糖凝胶LH-20(Amersham)上进行。1H NMR光谱在Bruker DRX-500波谱仪上获得。化学位移以ppm(δ)相对于CD3OD给出。
活化1，2-O-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)和1，2-O-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)(甘油基磷酸脂)的合成
向二(N-羟基琥珀酰亚胺基)己二酸酯(A)(70mg，205μmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中加入DOPE或者DSPE(L)(40μmol)的氯仿(1.5ml)溶液，随后向其中加入三乙胺(7μl)。将上述混合物在室温下保持2小时，然后用乙酸对其进行中和并且在真空中进行部分浓缩。
对所得残余物进行柱色谱(葡聚糖凝胶LH-20，1∶1氯仿-甲醇，0.2％乙酸)分离，得到为无色浆状的活化脂质(A-L)(37mg，95％)；TLC(氯仿-甲醇-水，6∶3∶0.5)：Rf＝0.5(DOPE-A)，Rf＝0.55(DSPE-A).
1H NMR(CDCl3/CD3OD，2∶1)，δ：
DOPE-A-5.5(m，4H，2×(-CH＝CH-)，5.39(m，1H，-OCH2-CHO-CH2O-)，4.58(dd，1H，J＝3.67，J＝11.98，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，4.34(dd，1H，J＝6.61，J＝11.98，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，4.26(m，2H，PO-CH2-CH2-NH2)，4.18(m，2H，-CH2-OP)，3，62(m，2H，PO-CH2-CH2-NH2)，3.00(s，4H，ONSuc)，2.8(m，2H，-CH2-CO(Ad)，2.50(m，4H，2×(-CH2-CO)，2.42(m，2H，-CH2-CO(Ad)，2.17(m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)，1.93(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，1.78(m，4H，2×(COCH2CH2-)，1，43，1.47(2bs，40H，20 CH2)，1.04(m，6H，2CH3).
DSPE-A-5.39(m，1H，-OCH2-CHO-CH2O-)，4.53(dd，1H，J＝3.42，J＝11.98，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，4.33(dd，1H，J＝6.87，J＝11.98，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，4.23(m，2H，PO-CH2-CH2-NH2)，4.15(m，2H，-CH2-OP)，3，61(m，2H，PO-CH2-CH2-NH2)，3.00(s，4H，ONSuc)，2.81(m，2H，-CH2-CO(Ad)，2.48(m，4H，2×(-CH2-CO)，2.42(m，2H，-CH2-CO(Ad)，1.93(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，1.78(m，4H，2×(COCH2CH2-)，1，43，1.47(2 bs，40H，20 CH2)，1.04(m，6H，2 CH3).
活化DOPE(或者DSPE)与氨基丙基糖苷的缩合。
向活化DOPE(或者DSPE)(A-L)(33μmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入30μmol Sug-S1-NH2(F-S1-NH2)和5μl三乙胺。例如，所述Sug可以为或者为GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ三糖(A-glycotope)(F)或者为Galα1-3(Fucα1-2)Galβ三糖(B-glycotope)(F)的氨基丙基糖苷(F-S1-NH2)。
将上述混合物在室温下搅拌2h。对上述混合物进行柱色谱(在1∶1氯仿-甲醇下用葡聚糖凝胶LH-20，随后在乙酸乙酯-异丙醇-水(4∶3∶1(v/v/v))下用硅胶)分离，一般得到85～90％的合成分子构造，例如Atri-sp-Ad-DOPE(I)或者Btri-sp-Ad-DOPE(VI)。
1H NMR(CDCl3/CD3OD，1∶1)，δ：
Atri-sp-Ad-DOPE(I)-5.5(m，4H，2×(-CH＝CH-)，5.43-5，37(m，2H，H-1(GalNHAc)and-OCH2-CHO-CH2O-)，5.32(d，1H，H-1，J＝3.5H-1 Fuc)，2.50(m，4H，2×(-CH2-CO)，2.40(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，2.20(m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)，2.1(s，3H，NHAc)，1.92(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.8(m，8H，COCH2CH2CH2CH2CO and 2×(COCH2CH2-)，1，43，1.47(2bs，40H，20CH2)，1.40(d，3H，J＝6.6，CH3Fuc)，1.05(m，6H，2 CH3).
Atri-spsp1-Ad-DOPE(II)-5.5(m，4H，2×(-CH＝CH-)，5.43-5，37[m，2H，H-1(GalNHAc)and-OCH2-CHO-CH2O-]，5.32(d，1H，H-1，J＝3.6H-1 Fuc)，2.50(m，4H，2×(-CH2-CO)，2.40-2.32(m，6H，COCH2CH2CH2CH2CO and COCH2-(sp1)，2.18[m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)]，2.1(s，3H，NHAc)，1.95(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.8[m，10H，COCH2CH2CH2CH2CO，2×(COCH2CH2-...)，-COCH2 CH2(CH2)3NH-]，1.68(m，2H，CO(CH2)3CH2CH2NH-)，1，43，1.47(2 bs，42H，22 CH2)，1.37(d，3H，J＝5.6，CH3Fuc)，1.05(m，6H，2 CH3).
Atri-sp-Ad-DSPE(III)-5.42-5.38(m，2H，H-1(GalNHAc)and-OCH2-CHO-CH2O-)，5.31(d，1H，H-1，J＝3.5H-1 Fuc)，2.48[m，4H，2×(-CH2-CO)]，2.42(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，2.18(s，3H，NHAc)，1.95(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.8[m，8H，COCH2CH2CH2CH2CO and2×(COCH2CH2-)]，1，43，1.47(2 bs，56H，28CH2)，1.38(d，3H，J＝6.6，CH3Fuc)，1.05(m，6H，2 CH3).
Btri-sp-Ad-DOPE(VI)-5.5(m，4H，2×(-CH＝CH-)，5.42-5，38[m，2H，H-1(Gal)and-OCH2-CHO-CH2O-]，5.31(d，1H，H-1，J＝3.7，H-1 Fuc)，2.48[m，4H，2×(-CH2-CO)]，2.39(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，2.18[m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)]，1.93(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.8[m，8H，COCH2CH2CH2CH2CO and 2×(COCH2CH2-)]，1，43，1.47(2 bs，40H，20 CH2)，1.36(d，3H，J＝6.6，CH3Fuc)，1.05(m，6H，2 CH3).
Htri-sp-Ad-DOPE(VII)-5.5[m，4H，2×(-CH＝CH-)]，5.4(m，1H，-OCH2-CHO-CH2O-)，5.35(d，1H，H-1，J＝3.2，H-1 Fuc)，4.65，4.54(2d，J＝7.4，J＝8.6，H-1 Gal，H-1 GlcNHAc)，4.46(dd，1H J＝3.18，J＝12，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，4.38-4.28(m，2H，H-5 Fuc，CCOOHCH-CHO-CH2O-)，2.48[m，4H，2×(-CH2-CO)]，2.40(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，2.18[m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)]，2.08(s，3H，NHAc)，1.92(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.82-1.72[m，8H，COCH2CH2CH2CH2CO and 2×(COCH2CH2-)]，1，48，1.45(2 bs，40H，20 CH2)，1.39(d，3H，J＝6.5，CH3Fuc)，1.05(m，6H，2 CH3).
Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)-5.49(m，4H，2×(-CH＝CH-)，5.37(m，1H，-OCH2-CHO-CH2O-)，5.24(d，1H，H-1，J＝2.95，H-1 Fuc)，4.46(d，J＝7.34，H-1Gal)，2.48[m，4H，2×(-CH2-CO)]，2.42-2.35(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，2.17[m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)]，1.95(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.81-1.74[m，8H，COCH2CH2CH2CH2CO and 2×(COCH2CH2-)]，1，45，1.41(2bs，40H，20 CH2)，1.39(d，3H，J＝6.5，CH3Fuc)，1.03(m，6H，2 CH3).
Galβ-sp-Ad-DOPE(IX)-5.51[m，4H，2×(-CH＝CH-)]，5.4(m，1H，-OCH2-CHO-CH2O-)，4.61(dd，1H J＝3.18，J＝12，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，4.41(d，J＝7.8，H-1 Gal)，4.37(dd，1H，J＝6.6，J＝12，-CCOOHCH-CHO-CH2O-)，2.50[m，4H，2×(-CH2-CO)]，2.40(m，4H，COCH2CH2CH2CH2CO)，2.20[m，8H，2×(-CH2-CH＝CH-CH2-)]，1.97(m，2H，O-CH2CH2CH2-NH)，1.82-1.72[m，8H，COCH2CH2CH2CH2CO and2×(COCH2CH2-)]，1，48，1.45(2bs，40H，20 CH2)，1.05(m，6H，2 CH3).
实施例2-合成糖脂的溶解性
为了用于细胞转化中，第一个条件就是合成糖脂必须满足它们可以溶于含水溶剂中，例如磷酸盐缓冲盐水中。为了使测试的合成糖脂(表21)的溶解度最大化，最初使用了许多技术，包括热处理和/或超声处理。
所述合成糖脂还必须能够插入膜中和能够被用于转化的适当抗体识别以通过凝聚作用进行检测。对分子的初期试验将确定溶解性，并且由此除去那些不适于用于细胞转化中的分子。
这些初期试验的结果提供于表22中。
表21.试验的合成糖脂分子的范围。
表22.在热PBS中合成糖脂的溶解性和转化能力。
认为Galβ-sp-Ad-DOPE(IX)和Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)不具有可检测的转化作用是由于抗体不具有识别这些合成分子糖表位的能力。Atri-sp-lipid(IV)具有单酰基而非二酰基末端，由此认为这种合成分子并没有插入到膜双层中去。
实施例3-通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)合成糖脂进行的RBCs低温转化作用
RBCs在4℃贮存时较为健康，由此认为在4℃转化时同样较为健康。根据先前所述研究(参见对比实施例)和他人研究(Schwarzmann，2000)，并不认为合成糖脂在4℃下会产生显著的插入速率。这些研究使用天然糖脂进行。惊人地发现，这些研究并不能预测本发明合成糖脂的行为。
虽然并不希望与理论结合，但是在Schwarzmann的研究中，天然糖脂插入的低速率可能是由于天然糖脂末端(鞘脂和脂肪酸)的物理化学性能而导致。
糖脂的二酰基末端在确定插入速率中可能是重要的。某些二酰基末端在低温下可以保持较大的流动性。另外，这些糖脂二酰基末端插入的胞质膜区域可以保持此较大流动性。
众所周知，天然糖脂的鞘脂末端在刚性区域内聚集，这些区域在低温下可能不允许糖脂的进一步结合。具有顺式不饱和二酰基末端的合成糖脂可以有利于应用。
首先对RBCs与具有不同脂质末端的合成糖脂的转化进行了评价(表22和24)。
表23.用于获得列于表24～27中的结果的抗血清。
表24.对不同脂质末端通过与相关抗血清凝聚而插入的评价
在4℃时，使用Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)合成糖脂进行的RBCs转化作用，然后对其进行评价(表25～28)。这些转化作用直接指向A、B或者A和B糖表位的低水平表达的细胞(“弱A、B和AB细胞”)的制备。
为了制备弱A和B细胞，将在1×PBS中的转化溶液(20μL，Atri-sp-Ad-DOPE(I)为0.08、0.05和0.03mg/mL，和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)为0.6、0.3、0.15、0.08、0.05和0.03mg/mL)与经洗涤、封装的O型RBCs(60μL)混合。
为了制备弱AB细胞，将在1×PBS中的转化溶液(20μL，Atri-sp-Ad-DOPE(I)为0.07、0.06和0.05mg/mL，和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)为0.3和0.2mg/mL)与洗涤、包装的O型RBCs(60μL)合并在封闭滴定管中。所述组合为：0.07mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)+0.3mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；0.07mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)+0.2mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；0.06mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)+0.3mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；0.06mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)+0.2mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；0.05mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)+0.3mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)；和0.05mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)+0.2mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)。
将细胞和转化溶液置于4℃的冷冻机中。每隔一段时间进行一次移液混合。细胞由于每隔一段时间与相关抗血清进行一次试验而得到了消除，并且细胞以洗涤态和未洗涤态(即，洗涤样品除去了转化溶液)均进行试验。
48小时之后，将CelpresolTM加入到细胞中，使得最终细胞：非细胞的比例为3∶5(v/v)。继续每隔一段时间对细胞进行一次试验。10之后将试验终止，因为此时细胞变成了褐色。
这种变色可以归结为多种因素，包括：当进行转化时，细胞已经生存了21天；48小时转化作用在PBS而非CelpresolTM中进行，因此此时细胞受到了压迫；和在转化室和测试实验室之间运送中，细胞可能处理不当。上述变色可以通过在CelpresolTM而非PBS中转化细胞而得到缓解。
表25.在4℃下通过抗-A转化的弱A RBCs的Diamed结果。
表26.在4℃下通过抗-B转化的弱B RBCs的Diamed结果。
表27.在4℃下在封闭滴定管中通过抗-A转化的弱AB RBCs的Diamed结果。
表28.在4℃下在封闭滴定管中通过抗-B转化的弱AB RBCs的Diamed结果。
实施例4-通过Atri-sp-Ad-DOPE(I)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)合成糖脂进行的RBCs转化作用的插入效率
将转化后上清液溶液(得自于浓度为0.08mg/mL、0.05mg/mL和0.03mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)和0.6mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)，20μL)以1∶2稀释溶液加入到干净和经洗涤、封装的基团ORBCs(60μL)中。将该试管在37℃水浴中培养一小时，每15分钟进行一次混合。
转化的RBCs用PBS洗涤3×，然后将其悬浮在适当浓度的CellstabTM中以进行血清学测试。
表29.试管血清学
由转化后上清液溶液(得自于0.08mg/mL的预转化溶液)给出的评价甚至不及第一通道中0.03mg/mL转化溶液的评价。这些结果表明，在第一通道中＞75％的分子插入到了RBC膜中。
此外，将转化后溶液浓缩20×并且将其与已知浓度的转化溶液进行平行比较。仅仅对来源于0.08mg/mL Atri-sp-Ad-DOPE(I)和0.6mg/mLBtri-sp-Ad-DOPE(VI)溶液的转化后溶液进行试验。
将转化后溶液(20μL)渗析(孔径500Da)通过去离子水2天。然后将该样品放置在通分橱(fumehood)中10天以进行干燥。在此时间结束后，将它们转移入旋转蒸发烧瓶中，和启动旋转蒸发在真空和无加热下旋转过夜。
在40℃的水浴中对样品进行干燥并且用氯仿-甲醇2∶1将其冲入较小的容器内，剩余了大量的无水多细胞物质。将2∶1氯仿-甲醇洗液全部除去，然后再次用2∶1氯仿-甲醇冲洗入试管中和将洗液全部除去。将这些样品再溶于1mL 1×PBS中并且将其用于转化试验中。烧瓶底部的多细胞材料用水冲洗入另一套试管中。
将转化后溶液(得自于0.08mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)和0.6mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)，20μL)加入到经洗涤、封装的RBCs(60μL)中。平行地，将转化溶液(0.08mg/mL的Atri-sp-Ad-DOPE(I)和0.6mg/mL的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)，20μL)加入到经洗涤、封装的RBCs(60μL)中。
将该试管在37℃水浴中培养一小时，每15分钟进行一次混合。转化的RBCs用PBS洗涤3×，然后将其悬浮在适当浓度的CellstabTM中以进行血清学测试。
表30.Diamed血清学
这些结果表明，在转化后溶液中，即使浓缩20×时都没有通过血清学检测的充分分子。
实施例5-通过Htri-sp-Ad-DOPE(VII)合成糖脂进行的鼠RBCs的转化作用
鼠细胞在37℃下转化1小时。
表31.用于表32和33结果中的抗-H试剂。
表32.试管血清学
表33.Diamed
实施例6-通过过滤的Atri-sp-Ad-DOPE(I)合成糖脂进行的RBCs转化
将一些Atri-sp-Ad-DOPE(I)无菌滤过0.2μm的过滤器。为了研究是否转化作用与该产品一样，进行对比试验。
表34.用于产生列于表35中结果的抗-A。
这些结果表明在Atri-sp-Ad-DOPE(I)的两种制剂之间不存在显著差异，并且表明滤过0.2μM过滤器不会除去分子或者改变组合物或者使流体性能改变到转化作用受影响的程度。
实施例7-转化细胞的贮存
为了研究在4℃或者37℃下贮存是否会改变Atri-sp-Ad-DOPE(I)和转化O RBCs的天然的A糖脂的凝集结果，分别将其确定为“Syn-A”和“Nat-A”细胞，并且将其分为两份和以5％的浓度悬浮在CellstabTM中。
将一组细胞贮存在4℃水浴中和将另一组细胞贮存在37℃水浴中。对贮存的转化细胞的凝聚作用进行评价(表36)。
表36.
实施例8-使用带有不同的非碳水化合物结构的A-和B-抗原合成糖脂进行的RBC转化
表示为Atri-sp-Ad-DOPE(I)、Atri-sp1sp2-Ad-DOPE(II)、Atri-sp-Ad-DSPE(III)和Btri-sp-Ad-DOPE(VI)的水溶性合成糖脂根据实施例1中所述方法与必要变形进行制备。
将经洗涤的封装O型红血球(RBCs)(3体积份)和合成糖脂溶液(1体积份，不同浓度)加入到微量离心管中。将该试管在37℃水浴中培养一小时，每15分钟进行一次混合。转化的RBCs用PBS洗涤3×，然后将其悬浮在适当浓度的CellstabTM中以进行血清学测试。
使用不同合成分子构造转化的RBCs的试管血清学和Diamed凝胶-卡片结果提供于表38中。使用不同浓度的不同合成糖脂转化的RBCs的稳定性结果提供于表39～44中。
表37.用于产生列于表38～44中的结果的抗血清。
表38.使用不同浓度A-抗原合成糖脂的RBCs转化作用的对比
缩略语： n.d. 末测定出
表39.使用高浓度(1mg/mL、0.5mg/mL和0.25mg/mL)Atri-sp-Ad-DOPE(I)转化的RBCs的稳定性试验。通过人工试管血清学进行凝聚。
缩略语： ° 干扰
表40.使用低浓度(0.1mg/mL、0.05mg/mL和0.025mg/mL)Atri-sp-Ad-DOPE(I)转化的RBCs的稳定性试验。通过人工试管血清学进行凝聚。
缩略语： n.d 未测定出
° 干扰
表41.使用高浓度(1mg/mL、0.5mg/mL和0.25mg/mL)Atri-sp-Ad-DOPE(I)转化的RBCs的稳定性试验。在Diamed凝胶-卡片上进行凝聚。
其中存在不足以进行测试的细胞，对此表示为空白。
表42.使用低浓度(0.1mg/mL、0.05mg/mL和0.025mg/mL)Atri-sp-Ad-DOPE(I)转化的RBCs的稳定性试验。在Diamed凝胶-卡片上进行凝聚。
其中存在不足以进行测试的细胞，对此表示为空白。
表43.使用高浓度(1mg/mL、0.5mg/mL和0.25mg/mL)Btri-sp-Ad-DOPE(VI)转化的RBCs的稳定性试验。通过人工试管血清学进行凝聚。
缩略语： ° 干扰
表44.使用高浓度(1mg/mL、0.5mg/mL和0.25mg/mL)Btri-sp-Ad-DOPE(VI)转化的RBCs的稳定性试验。在Diamed凝胶-卡片上进行凝聚。
其中存在不足以进行测试的细胞，对此表示为空白。
实施例9-与H-抗原合成糖脂进行的红血球转化作用
表示为Htri-sp-Ad-DOPE(VII)、Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)和Galβ-sp-Ad-DOPE(IX)的水溶性合成糖脂根据实施例1中所述方法与必要变形进行制备。
将经洗涤的封装鼠O RBCs(3体积份)和合成糖脂溶液(1体积份，不同浓度)加入到微量离心管中。将该试管在37℃水浴中培养一小时，每15分钟进行一次混合。转化的RBCs用PBS洗涤3×，然后将其悬浮在适当浓度的CellstabTM中以进行血清学测试。
使用不同合成糖脂转化的RBCs的试管血清学和Diamed凝胶-卡片结果存在于表46中。结果表明，三糖(Htri)需要通过抗-H IgM，至少需要通过所用试剂进行检测。
表45.用于产生存在于表46中的结果的抗血清。
表46.使用制成不同浓度的带有不同糖表位的H-抗原合成糖脂的RBCs转化作用的对比
缩略语： n.d. 未测定出
实施例10-Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)和Galβ-sp-Ad-DOPE(IX)合成糖脂向鼠红血球的插入
表示为Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)和Galβ-sp-Ad-DOPE(IX)的水溶性合成糖脂根据实施例1中所述方法与必要变形进行制备。
鼠RBCs在1×PBS中洗涤3×。将30μl封装的RBCs与30μlHdi-sp-Ad-DOPE(VIII)合并，并且将30μl封装的RBCs与30μlGalβ-sp-Ad-DOPE(IX)合并。两种合成分子构造的浓度都为1.0mg/ml。将30μl1×PBS加入到30μl封装的RBCs，作为对照组。将细胞在37℃的振荡水浴中培养90分钟。RBCs在1×PBS中洗涤3×。
在室温下，将三组封装的RBCs与等体积量的选择素UEA-1一起培养30分钟。选择素在1×PBS中进行制备，浓度为0.1mg/ml。在Immunofuge中，将50μl 3％的细胞悬浮液以低速旋转15秒钟。所得结果通过试管血清学进行读取。所得结果存在于表48中。结果表明，抗-H IgM和UEA-1都没有检测到二糖(Hdi)。
表47.用于产生列于表48中的结果的抗血清。
表48.使用Galβ-sp-Ad-DOPE或者Hdi-sp-Ad-DOPE转化的鼠RBCs，通过凝聚作用进行评价。
缩略语： n.d. 未测定出
实施例11-敏感性控制制剂
本发明的合成糖脂可以用于制备如国际申请号PCT/NZ02/00214(WO03/034074)附属说明书中所述的“敏感性控制”(还称为“质量控制细胞”、“血清学控制”或者“工艺控制”)。本发明合成糖脂提供了RBCs的转化作用可以在低温下实现的优点。
RBC转化溶液
使用了两种母液：
溶液1：悬浮在CelpresolTM溶液中的1mg/mL Atri-sp-Ad-DOPE(I)。
溶液2：悬浮在CelpresolTM溶液中的5mg/mL Btri-sp-Ad-DOPE(VI)。
糖脂被制备成白色干燥粉末。如此形式的糖脂(将其装入控制温度下的密封容器中)可以无限期的稳定。为了配制转化溶液，将上述糖脂按重量计悬浮在溶液(例如CelpresolTM)中。
一旦转化溶液在CSL处得到接收，在无菌条件下对它们进行过滤(滤过-GV 0.22μ过滤装置)。
RBCs的处理
使用连续流动离心洗涤器在无菌条件下对RBC给体进行处理。在缓冲盐水中对RBC给体进行洗涤，随后在CelpresolTM溶液中对其进行洗涤。在Beckman Coulter AcT Diff分析器上对RBC给体的PCV进行测定。然后，在加入CelpresolTM的同时，将给体调节至50％的红细胞压积(PCV)。
转化RBCs从而提供“弱AB细胞”
在缓冲盐水和CelpresolTM中对RBCs进行洗涤。将细胞悬浮在CelpresolTM溶液中，以使PCV＞50％。使用Beckman Coulter AcT Diff对红血球的PCV进行测定。对红血球溶液的质量进行称重。
用于转化的Atri-sp-Ad-DOPE(I)、Btri-sp-Ad-DOPE(VI)和CelpresolTM的量通过使用以下方程进行计算：
a＝P x F
S
b＝P x F
S
c＝P-(1-P)-a-b
其中：
a＝要加入到每1mL红细胞中的Atri-sp-Ad-DOPE(I)的量(mL)
b＝要加入到每1mL红血球中的Btri-sp-Ad-DOPE(VI)的量(mL)
c＝要加入到每1mL红血球中的CelpresolTM的量(mL)，从而将细胞稀释至50％PCV
P＝红细胞溶液的PCV
F＝糖脂的最终期望浓度
S＝原料糖脂溶液的浓度
为了确定加入到红血球总试样中的糖脂和CelpresolTM的量，使红血球体积分别乘以a、b和c。将Atri-sp-Ad-DOPE(I)、Btri-sp-Ad-DOPE(VI)和CelpresolTM无菌加入到红血球总试样中。
在20℃下，在控温和恒定温和搅拌下，将样品培养3小时。在3小时时间结束时，将红血球无菌除去，并且对样品进行测试以确定RBCs的转化作用。使用试管、平铺和柱凝集技术(CAT)工艺对血型进行鉴定。
在2～8℃下，在控温下将红血球样品培养3小时，并进行恒定温和搅拌18小时。在3小时时间结束时，将红血球无菌除去，并且对样品进行测试以确定红血球的转化作用。使用试管、平铺和CAT方法对血型进行鉴定。
在使用CelpresolTM溶液的无菌条件下，使用连续流动离心法洗涤转化的红血球。测量经洗涤的红细胞的PCV，并且通过加入CelpresolTM溶液调节至50％PCV。
制剂和分配
将一定量的转化RBCs与一定量的模拟血浆稀释剂(SPD)无菌组合。所述血浆可以含有单克隆和多克隆抗体。根据期望的敏感性控制特性对抗体进行选择。所述血浆可以另外含有酒石黄和牛血清蛋白。
使用试管、平铺和CAT方法对全样进行血型鉴定和抗体屏蔽。然后，将转化的RBC-SPD混合物无菌地分配入BD Vacutainer试管中并且相应地对试管进行标记。
证实性测试
通过利用合成糖脂(在表51～53中表示为AwBw)形成的弱AB细胞用于与天然存在的弱A、弱B和弱AB细胞平行地证实大量试验平台。
表49.用于证实测试中的试剂和卡片
表50.证实测试的试验平台方法
表51.所有方法对抗-A的证实结果
表52.所有方法对抗-B的证实结果
表53.所有方法对抗-AB的证实结果
实施例12-修饰胚胎与转化子宫内膜细胞的连接
对在通过细胞类型而非RBCs表达的细胞表面抗原内实现定性和定量差异的能力进行研究。将能够增强胚胎与子宫内膜细胞粘结的选定为模型系统。
合成分子可以用作合成膜锚着点和/或合成分子构造。因此，它们还可以用于入国际专利申请号PCT/NZ2003/000059(公开为WO03/087346)中所述的增强胚胎植入的方法中，此申请在此引入作为参考。
●子宫内膜细胞转化作用
水溶性合成分子构造的插入
对子宫内膜上皮细胞的单细胞悬浮液进行制备。通过再悬浮在CMFHBSS中和在2000rpm下离心3分钟，将子宫内膜细胞洗涤3×。将经洗涤的细胞制剂再悬浮在50μl M2中。
准备各自含有50μl 5M/ml子宫内膜细胞的溶液的微离心管。向分离的子宫内膜细胞试管中加入50μl合成糖脂Atri-sp-Ad-DOPE(I)或者Btri-sp-Ad-DOPE A(VI)，或者将50合成ul M2加入到对照细胞中。在37℃下，在混合器上将细胞培养90分钟。通过再悬浮在CMF HBSS介质中和在2000rpm下离心3分钟，将子宫内膜细胞洗涤3×。将经洗涤的细胞制剂再悬浮在50μl M2中。
使用荧光探针进行的插入测试
将50μl相应的原生鼠单克隆抗体加入到各个试管中。在室温下将各个试管培养10分钟。在M2介质将细胞洗涤3×。将10μl鼠抗-IgG FITC加入到各个试管中。在黑暗环境中，将试管在室温下培养10分钟。将子宫内膜细胞载片到载玻片并且在荧光显微镜下对其进行观察。
直接凝集测试
将5μl各血型细胞放置在分离的显微镜载片上。向5μl各血型细胞中加入5μl相应的抗体。在载片上将各细胞温和地混合2分钟。在显微镜下对凝聚作用进行观察。所得结果存在于表55中。
表54.用于产生列于表55中的结果的抗血清。
表55.使用Atri-sp-Ad-DOPE(I)或者Btri-sp-Ad-DOPE A(VI)转化的子宫内膜细胞，通过荧光进行观察。
●胚胎变体
水溶性合成分子构造的插入：
通过在37℃烘箱中，用0.5％链霉蛋白酶处理胚胎6分钟将胚胎透明带除去，或者直至所有的透明带都得到消除。Atri-sp-Ad-DOPE(I)orBtri-sp-Ad-DOPE(VI)通过将5μl浓度为1mg/mL的合成糖脂加入到45μl覆盖有矿物油的M2介质滴中，微滴得到制备。在37℃下，将所有的胚胎组在50μl上述微滴中培养1小时。试验和对照组的胚胎都用M2介质细度3×。
插入试验：
将试验和对照组胚胎都放入相应抗体微滴中，并且将其在37℃下培养30分钟。试验和对照组的胚胎都用M2介质细度3×。
将所有的试验和对照组胚胎都放入抗-鼠Ig FITC(抗-鼠Ig FITC在M2中1∶50的稀释液)微滴中并且将其在37℃下培养30分钟。试验和对照组的胚胎都用M2介质细度3×。将胚胎载片在显微镜载片的5μl M2滴中，所述M2滴用油覆盖。
在荧光显微镜下对载片进行观察。结果列于表56和57中。
Btri-sp-Ad-DOPE使用(VI)转化的否定结果是由于缺少11°抗体敏感性。
缩略语： n.d 未测定出
转化子宫内膜细胞与修饰胚胎的增强连接
修饰的(BioG-Avidin-BioIgGB和BioG-Avidin-BioIgMA)胚胎根据国际申请号PCT/NZ03/00059(公开为WO03/087346)附属说明书所述的方法进行制备。
准备两个凹面载玻片，其中一个具有两个合成糖脂Atri-sp-Ad-DOPE(I)插入子宫内膜细胞，另一个具有两个合成糖脂Btri-sp-Ad-DOPE(VI)插入子宫内膜细胞。
将两组胚各自胎转移到一个凹面载玻片上：
载玻片1 Atri/IgGB胚胎
Atri/IgMA胚胎
载玻片2 Btri/IgGB胚胎
Btri/IgMA胚胎
所述胚胎周围环绕有子宫内膜细胞。用矿物油对所述细胞进行覆盖并且在37℃下将其培养15分钟。用大开口把手移液管将各组胚胎小心地转移到新鲜的M2介质滴中。对所述胚胎进行温和洗涤。将所述胚胎温和地转移入标记的显微镜载片上的M2介质中。每滴都用矿物油进行覆盖。
在Olympus显微镜的焦点中心面下，对各组中粘附到胚胎上的子宫内膜细胞数目进行估定。对粘附到各个胚胎上的细胞数目进行记录。所得结果列于表58中。
在上述说明书中，已经对已知等价物进行了整体或者部分参考，上述等价物在此作为单独阐述引入。
虽然本发明已经通过实施例和参考其可能的实施方案进行了描述，但是应当理解，可以对本发明进行改进和/或变形，这并不背离本发明的精神和范围。
参考文献
Abe K，McKibbin JM&Hakomori SI.(1983)The monoclonal antibodydirected to difucosylated type 2 chain(Fucα1→2Galβ1→4[Fucα1→3]GlcNAc；Y determinant).J.Biol.Chem.258：11793-11797.
Adamany AM，Blumenfeld OO，Sabo B&McCreary J.(1983)Acarbohydrate structural variant of MM glycoprotein(glycophorin A).J.Biol.Chem.258：11537-11545.
Blanchard D，Cartron JP，Fournet B，Mountreuil J，van Halbeek H&Vliegenthart JFG.(1983)Primary structure of the oligosaccharidedeterminant of blood group Cad specificity.J.Biol.Chem.258：7691-7695.
Fukuda M，Dell A&Fukuda M.(1984a)Structure of fetallactosaminoglycan.The carbohydrate moiety of band 3 isolated from humanumbilical cord erythrocytes.J.Biol.Chem.259：4782-4791.
Fukuda M，Dell A，Oates JE&Fukuda M.(1984b)Structure of branchedlactosaminoglycan，the carbohydrate moiety of band 3isolated from adult humanerythrocytes.J.Biol.Chem.259：8260-8273.
Fukuda M，Lauffenberger M，Sasaki H，Rogers ME&Dell A.(1987)Structures of novel sialylated O-linked oligosaccharides isolated from humanerythrocyte glycophorins.J.Biol.Chem.262：11952-11957.
Fukuda MN，Dell A，Oates JE，Wu P，Klock JC&Fukuda M.(1985)Structures of glycosphingolipids isolated from human granulocytes.Thepresence of a series of linear poly-N-acetyllactosaminylceramide and itssignificance in glycolipids of whole blood cells.J.Biol.Chem.260：1067-1082.
Gillard BK，Blanchard D，Bouhours JF，Cartron JP，van Kuik JA，KamerlingJP，Vliegenthart JFG&Marcus DM.(1988)Structure of a ganglioside withCad blood group antigen activity.Biochemistry.27：4601-4604.
Hakomori SI，Nudelman E，Levery SB&Kannagi R.(1984)Novelfucolipids accumulating in human adenocarcinoma.I.Glycilipids with di-ortrifucosylated type 2chain.J.Biol.Chem.259：4672-4680
Hanfland P.(1975)Characterisation of B and H blood group activeglycosphingolipids from human B erythrocyte membranes.Chem.Phys.Lipids.15：105-124.
Hanfland P，Kordowicz M，Niermann H，Egge H，Dabrowski U，Peter-Katalinic J&Dabrowski J.(1984)Purification and structures ofbranched blood-group-B-active glycosphingolipids from human erythrocytemembranes.Eur.J.Biochem.145：531-542.
Hanfland P，Kordowicz M，Peter-Katalinic J，Pfannschmidt G，Crawford RJ，Graham HA&Egge H.(1986)Immunochemistry of the Lewis blood-groupsystem：isolation and structures of Lewis-c active and related glycosphingolipidsfrom the plasma of blood-group O Le(a-b-)nonsecretors.Arch.Biochem.Biophys.246：655-672.
Hiraiwa N，Tsuyuoka K，Li YT，Tanaka M，Seno T，Okubo Y，Fukuda Y，Imura H&Kannagi R.(1990)Gangliosides and sialoglycoproteins carrying arare blood group antigen determinant，Cad，associated with human cancers asdetected by specific monoclonal antibodies.Cancer Res.50：5497-5503.
Kannagi R，Nudelman E，Levery SB，&Hakomori SI.(1982)A series ofhuman erythrocytes glycosphingolipids reacting to the monoclonal antibodydirected to a developmentally regulated antigen，SSEA-1.J.Biol.Chem.257：14865-14874.
Kewitz S，GroβHJ，Kosa R&Roelcke D.(1995)Anti＝Pr coldagglutinins recognise immunodominantα2，3-orα2，6-sialyl groups onglycophorins.Glycocon.J.12：714-720.
Koscielak J，Miller-Podraza H，Krauze R&Piasek A.(1976)Isolationand characterisation of poly(glycosyl)ceramides(megaloglycolipids)with A，H，and I blood group activities.Eur.J.Biochem.71：9-18.
Laine RA.(1994)Invited commentary.Glycobiol 4：759-767
Lidowska E，Duk M&Dahr W.(1980)Comparison of alkali-labileoligosaccharide chains of M and N blood-group glycopeptides from humanerythrocyte membrane.Carbohydr.Res.79：103-113.
Lloyd KO&Kabat EA.(1968)Immunochemical studies on blood groups.XLI.Proposed structures for the carbohydrate portions of blood group A，B，H，Lewisa，and Lewisbsubstances.Proc.Natl.Acad.Sci USA.61：1470-1477.
Lundblad A.(1977)Urinary glycoproteins，glycopeptides，andoligosaccharides.In：The Glycoconjugates Eds Horowitz MI&Pigman W.Vol 1：441-458.
Magnani JL，Nilsson B，Brockhaus M，Zopf D，Steplewski Z，Koprowski H&Ginsburg V.(1986)A monoclonal antibody-defined antigen associatedwith gastrointestinal cancer is a ganglioside containing sialylatedlacto-N-fucopentaose II.J.Biol.Chem.257：14365-14369.
Nudelman E，Fukushi Y，Levery SB，Higuchi T&Hakomori SI.(1986)Novel fucolipids of human adenocarcinoma：disialoyl Lea antigen(III4FucIII6NeuAcIV3NeuAcLc4)of human colonic adenocarcinoma and themonoclonal antibody(FH7)defining this structure.J.Biol.Chem.261：5487-5495.
Slomiany A，Zdebska E&Slomiany BL.(1984)Structures of the neutraloligosaccharides isolated from A-active human gastric mucin.J.Biol.Chem.259：14743-14749.
Takasaki S，Yamashita K&Kobata A.(1978)The sugar chainstructures of ABO blood group active glycoproteins obtained from humanerythrocyte membrane.J.Biol.Chem.253：6086-6091.
Tanaka M，Dube VE&Anderson B.(1984)Structures ofoligosaccharides cleaved by base-borohydride from an I，H，and Leaactiveovarian cyst glycoprotein.Biochim.Biophys.Acta.798：283-290.
Thomas DB&Winzler RJ.(1969)Structural studies on humanerythrocytes glycoprotein.Alkali-labile oligosaccharides.J.Biol.Chem.244：5943-5946.
Watkins WM.(1966)Blood group substances.Science.152：172-181.
Yoshima H，Furthmayr H&Kobata A.(1980)Structures of theasparagine-linked sugar chains of glycophorin A.J.Biol.Chem.255：9713-9718.
Claims (36)
1.一种结构为F-S1-S2-L的水溶性合成分子构造，其中：
-F是糖表位；
-S1是选自3-氨基丙基、4-氨基丁基或5-氨基戊基的C3-5-氨基烷基；
-S2选自-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-和-CO(CH2)5CO-；
-L是选自二酰基-或二烷基-甘油基磷脂；并且
-F、S1、S2和L共价连接。
2.根据权利要求1的合成分子构造，包括以下子结构：
其中，n＝3～5和*不是H。
3.根据权利要求2的合成分子构造，其中L选自：衍生于一种或多种反式-3-十六烯酸、顺式-5-十六烯酸、顺式-7-十六烯酸、顺式-9-十六碳烯酸、顺式-6-十八碳烯酸、顺式-9-十八碳烯酸、反式-9-十八碳烯酸、反式-11-十八碳烯酸、顺式-11-十八碳烯酸、顺式-11-二十烯酸或者顺式-13-二十二烯酸的磷脂酰乙醇胺。
4.根据权利要求3的合成分子构造，其中L衍生于一种或多种顺式-不饱和脂肪酸。
5.根据权利要求3的合成分子构造，其中L选自：1，2-O-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)和1，2-O-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)。
6.根据权利要求1的合成分子构造，其中F为由三个或者更多个糖单元组成的糖表位。
7.根据权利要求6的合成分子构造，其中F为选自以下的糖表位：乳糖-新-四酰基、乳糖四酰基、乳糖-正-己酰基、乳糖-异-辛酰基、球四酰基、球-新-四酰基、球戊酰基、神经节四酰基、神经节三酰基、神经节戊酰基、异球三酰基、异球四酰基、粘三酰基和粘四酰基系列寡糖。
8.根据权利要求6的合成分子构造，其中F选自包括以下末端糖基的糖表位：GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ；Galα1-3Galβ；Galβ；Galα1-3(Fucα1-2)Galβ；NeuAcα2-3Galβ；NeuAcα2-6Galβ；Fucα1-2Galβ；Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；
Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；
Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；
NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-6(NeuAcα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3)Galβ；
Galα1-4Galβ1-4Glc；GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；
GalNAcα1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc；或者GalNAcβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc。
9.根据权利要求1的合成分子构造，其中S1为3-氨基丙基。
10.以下结构的合成分子构造：
表示为Atri-sp-Ad-DOPE(I)，其中M是一价阳离子。
11.以下结构的合成分子构造：
表示为Atri-spsp 1-Ad-DOPE(II)，其中M是一价阳离子。
12.以下结构的合成分子构造：
表示为Atri-sp-Ad-DSPE(III)，其中M是一价阳离子。
13.以下结构的合成分子构造：
14.以下结构的合成分子构造：
表示为Htri-sp-Ad-DOPE(VII)，其中M是一价阳离子。
15.以下结构的合成分子构造：
表示为Hdi-sp-Ad-DOPE(VIII)，其中M是一价阳离子。
16.以下结构的合成分子构造：
表示为Galβi-sp-Ad-DOPE(IX)，其中M是一价阳离子。
17.以下结构的合成分子构造：
表示为Fucα1-2Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XII)，其中M是一价阳离子。
18.以下结构的合成分子构造：
表示为Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc-sp-Ad-DOPE(XIII)，其中M是一价阳离子。
19.根据权利要求10-18任何一项所述的合成分子构造，其中M选自H+、Na+、K+或NH4 +。
20.一种根据权利要求1的水溶性合成分子构造用于制备在细胞表达的表面抗原中实现定性和/或定量变化的方法的试剂盒或药物中的用途，所述方法包括以下步骤：
-使细胞的悬浮液与所述水溶性合成分子构造在足以使细胞表达的表面抗原实现定性和/或定量变化的时间和温度下接触。
21.根据权利要求20的用途，其中所述水溶性合成分子构造在悬浮液中的浓度为0.1～10mg/mL。
22.根据权利要求20的用途，其中所述细胞或者多细胞结构悬浮液在2～37℃的温度下与水溶性合成分子构造接触。
23.根据权利要求22的用途，其中所述细胞或者多细胞结构的悬浮液在2～25℃的温度下与所述水溶性合成分子构造溶液接触。
24.根据权利要求23的用途，其中所述细胞或者多细胞结构的悬浮液在2～4℃的温度下与所述水溶性合成分子构造溶液接触。
25.根据权利要求20的用途，其中所述细胞源于人类。
26.根据权利要求20的用途，其中所述细胞为红血球。
27.一种试剂盒，包括根据权利要求1的水溶性合成分子构造的干燥制品或者溶液。
28.一种试剂盒，包括一种结合权利要求1的水溶性合成分子构造的细胞的悬浮溶液形式的混悬物。
29.根据权利要求28的试剂盒，其中所述悬浮溶液不含有脂质。
30.根据权利要求29的试剂盒，其中所述细胞源于人类。
31.一种药物制剂，包括根据权利要求1的水溶性合成分子构造的干燥制品或者溶液。
32.根据权利要求30的药物制剂，其中所述药物制剂为吸入给药的形式。
33.根据权利要求31的药物制剂，其中所述药物制剂为注射给药的形式。
34.一种药物制剂，包括一种结合权利要求1的水溶性合成分子构造的细胞。
35.根据权利要求34的药物制剂，其中所述药物制剂为吸入给药的形式。
36.根据权利要求34的药物制剂，其中所述药物制剂为注射给药的形式。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NZ531866 | 2004-03-22 | ||
| NZ53186604 | 2004-03-22 | ||
| NZ537941 | 2005-01-28 | ||
| NZ53794105 | 2005-01-28 | ||
| PCT/NZ2005/000052 WO2005090368A1 (en) | 2004-03-22 | 2005-03-22 | Synthetic membrane anchors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1938325A CN1938325A (zh) | 2007-03-28 |
| CN1938325B true CN1938325B (zh) | 2015-07-15 |
Family
ID=34993634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200580009170.5A Active CN1938325B (zh) | 2004-03-22 | 2005-03-22 | 合成分子构造 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US8013131B2 (zh) |
| EP (1) | EP1735323B1 (zh) |
| JP (1) | JP5456250B2 (zh) |
| CN (1) | CN1938325B (zh) |
| AU (3) | AU2005223715A1 (zh) |
| CA (1) | CA2560781C (zh) |
| DK (1) | DK1735323T3 (zh) |
| EA (1) | EA013183B1 (zh) |
| ES (1) | ES2654578T3 (zh) |
| IL (1) | IL178008A (zh) |
| NZ (2) | NZ587442A (zh) |
| WO (1) | WO2005090368A1 (zh) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10858384B2 (en) | 2004-03-22 | 2020-12-08 | Kode Biotech Limited | Synthetic molecule constructs |
| CA2560781C (en) | 2004-03-22 | 2011-10-11 | Kode Biotech Limited | Synthetic membrane anchors |
| CN101679849B (zh) * | 2006-09-06 | 2014-01-01 | 科德生物工程有限公司 | 荧光细胞标记物 |
| AU2011202876B2 (en) * | 2006-09-06 | 2011-09-01 | Kode Biotech Limited | Fluorescent cell markers |
| US20080160003A1 (en) * | 2006-10-31 | 2008-07-03 | University Of Delaware | Fertility Enhancement Using Lipid Carriers and Bioactive Molecules |
| GB2463584B (en) * | 2007-04-27 | 2012-02-01 | Kode Biotech Ltd | Carbohydrate-lipid constructs and their use in preventing or treating viral infection |
| AU2008297660B2 (en) * | 2007-09-11 | 2013-10-24 | Kode Biotech Limited | Peptide-lipid constructs and their use in diagnostic and therapeutic applications |
| NZ584558A (en) | 2007-09-11 | 2012-10-26 | Kode Biotech Ltd | Peptide-lipid constructs and their use in diagnostic and therapeutic applications |
| AU2013201431B2 (en) * | 2007-10-12 | 2015-02-19 | Kode Biotech Limited | Functional lipid constructs |
| US10919941B2 (en) | 2007-10-12 | 2021-02-16 | Kode Biotech Limited | Functional lipid constructs |
| CN101970460B (zh) * | 2007-10-12 | 2014-09-24 | 科德生物工程有限公司 | 功能性脂类构造物 |
| US20110229511A1 (en) | 2008-10-02 | 2011-09-22 | Stephen Michael Henry | Method of modifying the immune response |
| US11052141B1 (en) | 2008-10-02 | 2021-07-06 | Kode Biotech Limited | Method of modifying the immune response |
| AU2008362921B2 (en) | 2008-10-13 | 2012-07-26 | Semiotik Llc | Multiligand constructs |
| SG177338A1 (en) * | 2009-06-29 | 2012-02-28 | Nicolai Vladimirovich Bovin | Printing of fsl constructs |
| US10408717B2 (en) | 2009-06-29 | 2019-09-10 | Nicolai Vladimirovich Bovin | Printing of FSL constructs |
| WO2012099477A1 (en) * | 2011-01-06 | 2012-07-26 | Nicolai Vladimirovich Bovin | Biosurface engineering |
| EP2912182B1 (en) | 2012-10-23 | 2021-12-08 | Caris Science, Inc. | Aptamers and uses thereof |
| US10942184B2 (en) | 2012-10-23 | 2021-03-09 | Caris Science, Inc. | Aptamers and uses thereof |
| US9939443B2 (en) | 2012-12-19 | 2018-04-10 | Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh | Compositions and methods for aptamer screening |
| AU2014357817B2 (en) | 2013-12-02 | 2019-02-14 | Bovin, Nikolai | Functionalizing nanofibres |
| AU2015350669B2 (en) | 2014-11-21 | 2018-11-29 | Nicolai Vladimirovich Bovin | Multivalent ligand-lipid constructs |
| US10544842B2 (en) * | 2017-03-24 | 2020-01-28 | Ford Global Technologies, Llc | One-way clutch for a vehicle |
| AU2019277908A1 (en) | 2018-05-27 | 2021-01-07 | Biolinerx Ltd. | AGI-134 combined with a checkpoint inhibitor for the treatment of solid tumors |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0102319B1 (de) * | 1982-07-23 | 1987-08-19 | Ciba-Geigy Ag | Verwendung von Muramylpeptiden oder deren Analogen zur Prophylaxe und Therapie von Virusinfektionen |
| US5334583A (en) | 1982-07-23 | 1994-08-02 | Ciba-Geigy Corp. | Use of sugar derivatives for the prophylaxis and treatment of virus infections |
| US4622294A (en) * | 1985-02-08 | 1986-11-11 | Kung Viola T | Liposome immunoassay reagent and method |
| US4873322A (en) * | 1986-01-24 | 1989-10-10 | Ciba-Geigy Corporation | Saccharide derivatives and processes for their manufacture |
| IT1229514B (it) | 1989-01-30 | 1991-09-03 | Farmhispania S A A Montme | Glicoconiugati anfifilici sintetici per impiego neurologico. |
| US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
| JP3408271B2 (ja) | 1992-07-17 | 2003-05-19 | 生化学工業株式会社 | 糖のアミノ化法 |
| US5329029A (en) | 1992-11-05 | 1994-07-12 | Wan Barbara Y | Phosphatidylalkanolamine derivatives and their use in generating phospholipid conjugates |
| US5854218A (en) * | 1993-05-14 | 1998-12-29 | Cytel Corporation | Sialyl Lex analogues as inhibitors of cellular adhesion |
| US5344583A (en) * | 1993-08-26 | 1994-09-06 | Dotolo Research Corp. | Composition for removing nail enamel from artificial nails |
| JP3942205B2 (ja) | 1995-07-24 | 2007-07-11 | 生化学工業株式会社 | 神経疾患の治療剤 |
| DE19624345B4 (de) * | 1996-06-19 | 2004-12-23 | Südzucker AG Mannheim/Ochsenfurt | Acylierte Kohlenhydrate mit mindestens einer mit dem Kohlenhydrat veretherten Carboxyalkyl-Gruppe, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung in Waschmitteln |
| US5973128A (en) | 1996-11-22 | 1999-10-26 | The Hospital For Sick Children Research And Development Lp | Glycolipid mimics and methods of use thereof |
| WO1999005255A1 (en) | 1997-07-23 | 1999-02-04 | Northeastern University | Methods for enhancing or reducing preimplantation embryo survival rates |
| US5962423A (en) | 1998-08-07 | 1999-10-05 | The Governors Of The University Of Alberta | Treatment of bacterial dysentery |
| AU1861001A (en) | 1999-11-29 | 2001-06-12 | Syntesome Gesellschaft Fur Medizinische Biochemie Mbh | Arrays of glycan molecules (glycoarrays) on the surface of biochips (glycochips)and uses thereof |
| WO2001051003A2 (en) | 2000-01-10 | 2001-07-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of disease |
| US7101859B2 (en) | 2000-01-10 | 2006-09-05 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
| US20060189571A1 (en) | 2000-01-10 | 2006-08-24 | Saul Yedgar | Use of lipid conjugates in the treatment of infection |
| EP1289565B1 (en) * | 2000-06-02 | 2015-04-22 | Bracco Suisse SA | Compounds for targeting endothelial cells |
| JP4226324B2 (ja) * | 2000-11-10 | 2009-02-18 | 学校法人早稲田大学 | カルボン酸型脂質 |
| US7678574B2 (en) | 2001-10-16 | 2010-03-16 | Kiwi Ingenuity Limited | Sensitivity controls for blood serology prepared from modified cells |
| NZ518163A (en) * | 2002-04-05 | 2005-04-29 | Kiwi Ingenuity Ltd | Embryo modified with a glycolipid to enhance implantation into the endometrium |
| AU2003280761B2 (en) * | 2002-11-15 | 2009-10-01 | Nipro Corporation | Liposome |
| US7989602B2 (en) * | 2003-11-18 | 2011-08-02 | The Malaghan Institute Of Medical Research | Synthetic molecules having immune activity |
| CA2560781C (en) | 2004-03-22 | 2011-10-11 | Kode Biotech Limited | Synthetic membrane anchors |
| JP4639055B2 (ja) | 2004-05-20 | 2011-02-23 | 公益財団法人野口研究所 | ベロ毒素中和剤としてのスフィンゴ糖脂質類似体 |
| JP2006241095A (ja) | 2005-03-04 | 2006-09-14 | National Univ Corp Shizuoka Univ | フィラグリン合成促進剤および紫外線傷害緩和剤 |
| CN101282985B (zh) | 2005-09-21 | 2013-07-10 | 科德生物工程有限公司 | 用透明质酸低聚衍生物覆盖的细胞表面 |
-
2005
- 2005-03-22 CA CA2560781A patent/CA2560781C/en active Active
- 2005-03-22 CN CN200580009170.5A patent/CN1938325B/zh active Active
- 2005-03-22 EP EP05722123.6A patent/EP1735323B1/en active Active
- 2005-03-22 AU AU2005223715A patent/AU2005223715A1/en not_active Abandoned
- 2005-03-22 DK DK05722123.6T patent/DK1735323T3/en active
- 2005-03-22 NZ NZ587442A patent/NZ587442A/en unknown
- 2005-03-22 US US10/593,829 patent/US8013131B2/en active Active
- 2005-03-22 ES ES05722123.6T patent/ES2654578T3/es active Active
- 2005-03-22 EA EA200601753A patent/EA013183B1/ru unknown
- 2005-03-22 NZ NZ550705A patent/NZ550705A/en unknown
- 2005-03-22 JP JP2007504907A patent/JP5456250B2/ja active Active
- 2005-03-22 WO PCT/NZ2005/000052 patent/WO2005090368A1/en active Application Filing
-
2006
- 2006-09-11 IL IL178008A patent/IL178008A/en active IP Right Grant
-
2010
- 2010-07-20 AU AU2010203098A patent/AU2010203098B2/en active Active
- 2010-07-20 AU AU2010203099A patent/AU2010203099B2/en active Active
-
2011
- 2011-05-03 US US13/067,021 patent/US8637473B2/en active Active
-
2013
- 2013-12-17 US US14/108,749 patent/US9353349B2/en active Active
-
2016
- 2016-05-30 US US15/168,144 patent/US9809614B2/en active Active
-
2017
- 2017-11-06 US US15/804,427 patent/US10414786B2/en active Active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| G. Blume 等.《Specific targeting with poly(ethylene glycol)-modifiedliposomes:coupling of homing devices to the ends of the polymericchainscombines effective target binding with long circulation times》.《Biochimica et Biophysica Acta,》 1149.1993,(1149),180-184页. * |
| Massagure A.等.《Synthesis of RGD containing peptides. Comparative studyof their incorporation to the surface of 5-fluorouridine loadedliposomes》.《Journal of Liposome Research》11 1.2001,11(1),103-113页. * |
| Osamu Ishida 等.《Liposomes BearingPolyethyleneglycol-CoupledTransferrin with IntracellularTargeting Property to the SolidTumors In Vivo》.《Pharmaceutical Research》18 7.2001,18(7),1042-1048页. * |
| Thomas Haselgriibler 等.《Synthesis and Applications of a New Poly(ethy1ene glycol)Derivative for the Crosslinking of Amines with Thiols》.《Bioconjugate Chem.》6 3.1995,6(3),242-248页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK1735323T3 (en) | 2017-12-11 |
| EA200601753A1 (ru) | 2007-04-27 |
| EP1735323A1 (en) | 2006-12-27 |
| US9809614B2 (en) | 2017-11-07 |
| CA2560781C (en) | 2011-10-11 |
| US20140186950A1 (en) | 2014-07-03 |
| US20180057518A1 (en) | 2018-03-01 |
| US10414786B2 (en) | 2019-09-17 |
| JP5456250B2 (ja) | 2014-03-26 |
| US20110213134A1 (en) | 2011-09-01 |
| EP1735323B1 (en) | 2017-08-30 |
| IL178008A (en) | 2011-10-31 |
| US20070197466A1 (en) | 2007-08-23 |
| WO2005090368A1 (en) | 2005-09-29 |
| NZ550705A (en) | 2010-12-24 |
| AU2010203098A1 (en) | 2010-08-12 |
| AU2010203098B2 (en) | 2012-07-12 |
| US8013131B2 (en) | 2011-09-06 |
| EA013183B1 (ru) | 2010-02-26 |
| US8637473B2 (en) | 2014-01-28 |
| AU2010203099A1 (en) | 2010-08-12 |
| US20160333044A1 (en) | 2016-11-17 |
| AU2005223715A1 (en) | 2005-09-29 |
| CN1938325A (zh) | 2007-03-28 |
| JP2007530532A (ja) | 2007-11-01 |
| US9353349B2 (en) | 2016-05-31 |
| EP1735323A4 (en) | 2009-11-04 |
| NZ587442A (en) | 2012-02-24 |
| CA2560781A1 (en) | 2005-09-29 |
| ES2654578T3 (es) | 2018-02-14 |
| IL178008A0 (en) | 2006-12-31 |
| AU2010203099B2 (en) | 2012-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1938325B (zh) | 合成分子构造 | |
| CN101970460B (zh) | 功能性脂类构造物 | |
| Stocker et al. | Chemical tools for studying the biological function of glycolipids | |
| US10858384B2 (en) | Synthetic molecule constructs | |
| Endo et al. | Intermolecular interaction between glycolipids and glycophorin on liposomal membranes | |
| US11052141B1 (en) | Method of modifying the immune response | |
| US10919941B2 (en) | Functional lipid constructs | |
| Xiao | Chemical and Chemoenzymatic Synthesis of Outer Core Oligosaccharide of Escherichia Coli R3 and a Library of Human Milk Oligosaccharides & Design and Synthesis of Glycoconjugates | |
| Marcus | My career as an immunoglycobiologist | |
| Gilliver | Novel Mechanisms for Controlled Antigen Expression (KODE™ CAE) on Erythrocyte Membranes | |
| Harrison et al. | Their Structure and Function |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |