CN1930297A - 新的香瓜植物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的植物，具体地涉及能够产生具有令人愉悦的新味道的果实的香瓜植物及其种子。本发明还涉及本发明香瓜植物的果实，其中该果实含有有机酸、低pH和高糖含量。本发明还涉及制备和使用本文公开的植物和果实的方法。

Description

新的香瓜植物
                     技术领域
本发明涉及新的植物，具体地涉及能够产生具有令人愉悦的新味道的果实的香瓜植物。特别地，本发明的香瓜植物的果实具有与目前商业甜香瓜的果实相比改变的有机酸含量和较低的pH，并具有高糖含量。
                     背景技术
香瓜(melon，Cucumis melo L.)是一种全球种植的商业作物。香瓜(Cucumis melo)是葫芦科(Cucurbitaceae)的成员。葫芦科包括大约90个属和700至760个种，大多数为热带植物。该科包括西葫芦(pumpkin)、南瓜(squash)、葫芦(gourd)、西瓜(watermelon)、丝瓜(loofah)及几种杂草。香瓜包括种类十分繁多的栽培品种，这些品种产生具有不同形状、外观和果肉颜色的果实。商业香瓜一般产生甜的果实，例如称作Charentais、罗马甜瓜(cantaloupe)、蜜瓜(honeydew)、amarello、哈密瓜(Piel de sapo)、Kirkagak、Hamy、Ananas、Galia、Oriental，它们通常作为甜点水果食用。香瓜也包括在中东至远东于沙拉、烹调、腌渍中食用的、不甜的商业栽培品种，例如，Alficoz、Faqqous、Chito、Conomon(Pitrat等(2000)Eucarpiameeting Proceedings：29-36)。香瓜果实的味道和香气由多种因素确定，这些因素包括糖类、香气挥发物、游离氨基酸、有机酸、pH和可溶性矿物质(Wang等，(1996)J.Agric.Food Chem.44：210-216)。四种主要味道(甜、酸、苦、咸)中，甜味被认为是良好口味的香瓜果实的一个非常重要的成分。在商业香瓜果实中，甜味主要由高水平的蔗糖产生(Burger等(2002)J.Amer.Soc.Hort.Sci.127(6)：938-943)。蔗糖在果实发育结束时于成熟过程中积累(Shaffer等(1987)Phytochemistry 26：1883-1887)。香瓜果实最初也积累己糖，主要是果糖和葡萄糖，这些糖是主要的还原糖(Stepanski等(1999)Genetic Resources and Crop Evolution 46：53-62)。香瓜果实中的一个重要味道成分是甜味，其主要是糖类积累的结果。甜味不仅与总的糖含量有关，还与糖的类型有关。例如，1克葡萄糖的甜味等于0.7克蔗糖的甜味；1克果糖的甜味等于1.7克蔗糖的甜味；1克转化糖，即，自1克蔗糖产生的葡萄糖加果糖，的甜味等于1.3克蔗糖的甜味(J.A.BABOR等，J.IBARZ(1935)Quimica General Moderna)。
甜的香瓜果实的果肉具有通常高于6.0的pH，但是也已知存在具有低得多的pH，低至5.0以下的香瓜种质(accession)。这种低pH遍布于许多不同的香瓜类型中，例如Faqqous、Chito、Conomon、Momordica、Agrestis(Stepanski等)。在这些情况中的大多数情况下，这些类型的香瓜结合了低pH和低糖含量，例如蔗糖含量(Stepanski等)。这些果实在未经适当处理或烹调的情况下通常不能生吃，并且一些情况下它们甚至是苦的。在这些具有低pH的香瓜种质中，大多数香瓜种质的中果皮，果实的可食用部分，占果实全部的一小部分，而种子腔和胎座占据了果实总鲜重的大部分。这与作为甜点的甜香瓜不同，在甜香瓜中中果皮占果实的主要部分。此外，在许多情况下，具有低pH的香瓜的果实体积或重量低于商业可接受的范围。
一些香瓜的果肉具有酸味(Kubicki(1962)Genetica Polonica 3：265-274)。导致这种酸味的原因仍然不清楚，但其已经与果肉中的低pH关联(US 5,476,998和Danin-Poleg等(2002)Euphytica 125：373-384)。也已经报道了负责酸味(So)和pH的单基因，但是不清楚它们的遗传相关性(Danin-Poleg等)。
已经尝试过生产结合了酸味和甜味的香瓜果实。例如，已经报道了基于阿拉伯野生品种的Najd香瓜(Ibrahim和Alzeir(1992)Hortscience 27：276-277)。US 5,476,998也描述了具有酸味的香瓜，其具有4.8的平均pH值和大约11的总可溶性内容物。US 5,476,998中的香瓜来源于MR-1，MR-1也称作PI124111(Thomas，Eucarpia’92pp142)，是C.melo Var.Momordica(Roxburg)。这种香瓜的果实表现出低pH(Danin-Poleg等)。这种香瓜变种也包括差的果实性状，例如成熟时薄皮涨裂、非常粉质的、不香不甜的果肉以及非常大的呼吸跃变行为。这些不期望的性状难于通过育种除去，因此可以预期到，从该品种开发商业产品将是漫长而艰难的。因此，对于产生具有可替代的或改良的口味的果实的香瓜，仍存在需要。尤其是，仍需要具有新的器官感觉特征和香气的组合的香瓜果实。
                     发明概述
本发明解决了对具有可替代的或改良的口味的香瓜果实的需要。因此，本发明公开能够产生具有新的有机酸含量和组成、pH及糖含量和组成的组合的果实的香瓜植物。本发明还公开本发明植物及其果实的制备和使用方法。
本申请的发明人已经鉴定出在香瓜果实中有机酸的含量和组成有很大的变异性。尤其是，本发明的发明人已经鉴定出，香瓜植物可以产生具有变化的柠檬酸含量及变化的柠檬酸和苹果酸比率的果实。因此，本发明的发明人已经将适当含量的有机酸、低pH和期望的糖含量组合在香瓜果实中以获得极为令人愉悦的新味道。
因此，一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的香瓜植物，所述果实具有低pH及期望的柠檬酸与苹果酸含量的组合，同时保持了或增加了目前在甜香瓜中观察到的糖水平。一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的香瓜植物，所述果实具有低pH和期望的柠檬酸和苹果酸含量的组合并具有期望的蔗糖和己糖含量的组合。一个实施方案中，本发明提供能够产生果实的香瓜植物，所述果实与目前的商业香瓜相比具有升高的柠檬酸含量和较低的pH。一个实施方案中，通过将低pH性状引入不含所述性状的香瓜植物中而获得本发明香瓜植物。一个实施方案中，通过将低pH基因引入不含所述基因的香瓜植物中而获得本发明香瓜植物。一个实施方案中，所述低pH基因可以从以NCIMB41202保藏号保藏在NCIMB的IND-35系获得。因此，本发明公开包含低pH性状并产生包含期望的有机酸含量和组成、pH及糖含量和组成的果实的香瓜植物。一个实施方案中，在保持果实中低水平的苹果酸的同时，增加柠檬酸的含量。一个实施方案中，本发明香瓜植物的果实具有高的柠檬酸和苹果酸比率。
一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有等于或大于每100g鲜重(fwt)大约400mg的柠檬酸含量的果实。一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有大约4.2至大约5.6的pH的果实。一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有等于或大于每100g fwt大约5.0g的糖含量的果实。一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有等于或大于每100g fwt大约7.0g的糖含量的果实。
一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实具有等于或大于每100g fwt大约400mg的柠檬酸含量、大约4.2至大约5.6的pH、以及等于或大于每100g fwt大约5.0g的糖含量。
一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约400mg至大约1,200mg柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
一个实施方案中，本发明植物的果实的柠檬酸含量是每100g fwt大约400mg至大约1,000mg柠檬酸。一个实施方案中，本发明香瓜植物产生可食用果实，该果实优选为圆形或卵形，优选重450克以上。本发明香瓜的果肉优选是绿色、黄色、白色或橙色。
一个实施方案中，本发明公开能够产生具有尖酸提神的(tart-refreshing)酸味的、非常甜的多汁果实的香瓜植物，在本文中称作“Citric+”植物或果实。这些果实包含高含量的柠檬酸和低pH、增加了酸味并提供了尖酸感觉，这可以覆盖果实成熟早期的过于平淡和不良的味道。
一个实施方案中，本发明Citric+植物的果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约600至大约1,200mg柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.1的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
一个实施方案中，本发明植物的果实的柠檬酸含量是每100g fwt大约600mg至大约1,000mg柠檬酸。
一个实施方案中，本发明公开能够产生具有温和果酸味的甜香果实的香瓜植物，在此称作“Citric-”香瓜植物或果实。该果实包含相对高含量的柠檬酸和轻微低的pH。这种轻微低的pH造成果酸感觉，这种果酸感觉可以覆盖果实成熟早期的其它仍然过于平淡和不良的味道。
一个实施方案中，本发明Citric-植物的果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约400至大约650mg柠檬酸；
b)大约4.6至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
一个实施方案中，本发明公开能够产生具有低pH和深橙色果肉的果实的香瓜植物。一个实施方案中，本发明公开能够产生具有大约4.5至大约5.6的pH的果实的香瓜植物，其中所述果实具有评定为4级或更高级的橙色果肉。
一个实施方案中，在生长于露天田间或塑料大棚(plastichouses)中并于成熟时收获的香瓜植物果实上，测量本文描述的香瓜果实的特征。一个实施方案中，从成熟早期至成熟晚期(如本文描述的，第2-4阶段)收获果实。一个实施方案中，本发明果实在其蔗糖含量等于或大于每100g fwt 2g蔗糖时成熟。
一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大约1.6至大约3.8的酸味和大约4.3至大约5.8的甜味(sugar savor)。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大约2.5至大约3.8的酸味和大约4.3至大约5.6的甜味。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大约1.6至大约3.0的酸味和大约5.2至大约5.8的甜味。一个实施方案中，由专家组，例如按本文实施例12中所述，测定所述酸味和甜味。一个实施方案中，所述果实包含本文所述的pH和柠檬酸含量。一个实施方案中，所述果实包含本文所述的pH、有机酸含量及组成和糖含量及组成。
一个实施方案中，本发明公开包含与低pH性状共分离的DNA序列的香瓜植物。一个实施方案中，所述DNA序列是使用本文所述引物扩增本文所述DNA片段的模板。一个实施方案中，本发明公开该引物和使用这些引物扩增的DNA片段。一个实施方案中，本文所述DNA片段从所述植物的DNA使用本文所述的引物而扩增。该DNA片段用作低pH性状的分子标记。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，从所述植物的DNA扩增出大约168bp至大约178bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，扩增出168bp、173bp、169bp、172bp或178bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，扩增小于176bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，扩增小于175bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE0585标记的引物时，扩增大约218bp至大约253bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE0585标记的引物时，扩增230bp、232bp、218bp、229bp、234bp或239bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE1746标记的引物时，扩增大约121bp至大约145bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE1746标记的引物时，扩增124bp、127bp、133bp、142bp或145bp的DNA片段。
一个实施方案中，本发明公开包含如下DNA序列的香瓜植物，所述DNA序列是扩增指示所述植物中存在(酸性片段)或不存在(碱性片段)低pH性状的DNA片段的模板。一个实施方案中，本发明公开包含如下DNA序列的香瓜植物，所述DNA序列是扩增与低pH性状连锁的碱性片段的模板，其中所述DNA序列与所述低pH性状连锁。一个实施方案中，所述香瓜植物包含位于低pH基因一侧的这样的DNA序列。一个实施方案中，所述香瓜植物包含位于低pH基因两侧的这样的DNA序列。一个实施方案中，该植物的果实包含位于本文公开的范围内的pH。一个实施方案中，该植物的果实包含本文所述的糖含量和组成。一个实施方案中，该植物的果实包含本文所述的有机酸含量和组成。一个实施方案中，该植物的果实包含本文所述的pH、糖含量及组成和有机酸含量及组成。
一个实施方案中，本文所述的本发明果实的特征在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，在果实达到成熟后，当果实保留在植物上时，这些特征保持稳定。一个实施方案中，当果实被收获并于收获后被贮存时，这些特征保持稳定。这使得可以减少收获频率以及可以贮存或运输本发明的果实而不损失本发明果实的器官感觉特征和香气。一个实施方案中，本发明果实的pH在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的柠檬酸含量在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的苹果酸含量在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的柠檬酸和苹果酸比率在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的pH和有机酸含量及组成在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，这些特征在果实达到成熟后保持在本文所述的范围内。一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的植物，所述果实的特征在果实保留于植物上时持续至少2天保持稳定，一个实施方案中当果实保留于植物上时所述特征持续至少3天保持稳定，在一个实施方案中，当果实保留于植物上时所述特征持续至少4天保持稳定。一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的植物，其中当所述果实于20℃贮存时其特征持续至少5天保持稳定，在一个实施方案中当所述果实于20℃贮存时其特征持续至少7天保持稳定，在一个实施方案中，当所述果实于20℃贮存时其特征持续至少9天保持稳定。在一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的植物，其中当所述果实在8-12℃贮存至少7天并之后于20℃贮存至少2天时其特征保持稳定，在一个实施方案中，当所述果实在8-12℃贮存至少12天并之后于20℃贮存至少2天时其特征保持稳定，在一个实施方案中，当所述果实在8-12℃贮存至少26天并之后于20℃贮存至少2天时其特征保持稳定。一个实施方案中，本发明植物能够产生长保存期限的果实(LSL)或中等保存期限的果实(MSL)。一个实施方案中，本发明植物能够产生不转色的(non-turning)或低转色的(low turning)果实。一个实施方案中，本发明植物能够产生无呼吸跃变(non-climacteric)的果实或低呼吸跃变的果实。
本发明还公开本发明香瓜植物的种子和其后代的种子，其中所述后代种子能够产生本发明的植物。本发明还公开本发明香瓜植物的部分，例如，胚珠或花粉，以及本发明香瓜植物的果实。本发明还公开本发明香瓜植物的果实的果肉。本发明还公开本发明香瓜植物的果实的汁液。
本发明还公开本发明果实的果肉在鲜切产品(fresh cut product)中的应用。本发明还公开本发明果实的汁液在软饮料中的应用。
本发明还公开增加植物的柠檬酸含量的方法，包括获得第一香瓜植物；使所述第一香瓜植物与包含低pH性状的第二香瓜植物杂交；获得后代香瓜植物，确定所述后代植物的果实的pH和柠檬酸含量，选择与所述第一香瓜植物的果实相比具有增加的柠檬酸含量的所述后代香瓜植物的果实。一个实施方案中，所述后代香瓜植物与所述第一香瓜植物的果实相比具有较低的pH。在一个实施方案中，该方法包括使用本文所述引物检测本文所述的DNA片段。本发明还公开包含低pH性状的香瓜植物在获得本发明香瓜植物中的用途。一个实施方案中，包含低pH性状的香瓜植物还具有积累相应水平的糖，例如蔗糖的能力。一个实施方案中，包含低pH的香瓜植物积累高水平的柠檬酸。一个实施方案中，包含低pH的香瓜植物积累低水平的苹果酸。一个实施方案中，包含低pH性状的香瓜植物还具有积累相应水平的糖例如蔗糖以及积累高水平的柠檬酸及积累低水平的苹果酸的能力。一个实施方案中，包含低pH的香瓜植物是IND-35系的植物或其后代。
本发明还公开产生本发明植物的种子的方法，包括获得本发明的植物、使所述植物自花授粉或使所述植物与另一香瓜植物杂交、和收获后代种子。本发明还公开营养繁殖本发明的香瓜植物的方法。本发明还公开生产果实的方法，包括种植本发明的植物、使所述植物生长和收获果实，其中所述果实包含本文所述的特征。该方法还包括贮存所述果实，例如按本文所述的进行贮存。该方法还包括运输所述果实。一个实施方案中，本文所描述的所述果实的特征在所述果实的贮存期间保持稳定。一个实施方案中，本文所描述的所述果实的特征在所述果实的贮存期间保持稳定。一个实施方案中，本发明植物是自交系、杂种、双单倍体或营养繁殖的克隆。
本发明因此提供香瓜果实，所述果实提供令人愉悦的酸成分但避免了涩味。这将香瓜的味道增加或补充至其最大的可能性。这些有机酸含量及低pH与高糖的组合为果肉食用或鲜切或鲜果汁工业提供了新的吸引人的味道种类和类型。果肉中的低pH还防止鲜切工业和果汁工业加工中的细菌污染。
                     定义
性状：特征或表型。例如，在本发明上下文中，低pH性状使香瓜果实的果肉具有低pH，例如大约4.2至大约5.6的pH。性状可以以显性或隐性方式，或以部分的或不完全的显性方式遗传。性状可以是单基因的或多基因的，或者也可以由一个或多个基因与环境的相互作用而导致。
单基因的：由单个基因座决定的。
多基因的：由多于一个基因座决定的。
显性：在杂合或纯合状态下导致完全的表型显现。
隐性：仅在以纯合状态存在时才表现出自己。
部分或不完全显性：当以杂合状态存在时确定了纯合状态时或该性状不存在时的表型的中间表型。
回交：回交是杂种后代重复地与亲本之一杂交的过程。
基因座：染色体上包含对性状产生贡献的基因的区域。
遗传连锁：由于基因在同一染色体上位置紧邻而导致特征在遗传上相联。通过基因座之间的重组百分数测定(厘摩，cM)。
数量性状基因座(QTL)：数量性状基因座(QTL)指控制在一定程度上可以用数字来表示的性状的遗传座位，其中所述性状通常是连续分布的。
等基因的：除了可能因存在或不存在基因、赋予性状的基因座或异源DNA序列而不同外，在遗传上相同的植物。
标记辅助的选择：指通过从植物检测一个或多个核酸，在一个或多个植物中选择一个或多个期望性状的过程，其中所述核酸与所述期望性状相关。
双单倍体：单倍体(单染色体)状况的基因组的加倍(例如通过花药培养或小孢子培养)，产生完全纯合的植物。
“测交”植物：用于以遗传方式表征待测植物的性状的植物。典型地，待测植物与“测交”植物杂交，评定杂交后代中所述性状的分离比率。
基因：遗传单位。基因位于染色体上的固定基因座，并且可以存在一系列的称作等位基因的可变形式。
等位基因：由于位于同源染色体的相同基因座而可在遗传上相互替代的一对或一系列基因形式中的一种形式。
纯合：在同源染色体上的一个或多个相应基因座上具有相象的等位基因。
杂合：在同源染色体上的一个或多个相应基因座上具有不相象的等位基因。
低pH基因：当在植物基因组中存在时导致所述植物的果实的果肉与不含所述基因的植物相比具有较低pH的基因。
低pH香瓜植物：包含低pH性状的香瓜植物。一个实施方案中，低pH香瓜植物的果实的pH是大约4.2至大约5.6。
香瓜(Cucumis melo L)：也称作C.melo或melon。
腔：指含有种子和母本组织的香瓜果实的中心。
可溶性固体：指果实组织中发现的固体物质的百分数，其中绝大多数是糖。
呼吸跃变/无呼吸跃变：见例如Watkins(2002)“乙烯合成、作用模式、结果和控制”，Michael Knee(编)，《Fruit Quality and itsBiological Basis》，Sheffield Academic Press，Sheffield，UK.第8章，pp.180-224，尤其是第181页，第8.2.1节，头2段中的定义。
转色香瓜：转色(turning)指香瓜果实在达到成熟时果皮颜色的明显改变，例如在Galia型香瓜中由绿变黄，或者在Charentais型香瓜中由灰变奶黄色果皮，而不转色的和低转色的香瓜的果实的果皮颜色在成熟后不发生鲜明的变化，例如在Piel de Sapo型香瓜中黄色成分增加。
                     发明详述
本发明提供能够产生具有新的味道的果实的香瓜植物。具体地，本发明提供能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实具有新的有机酸含量、pH和糖含量的组合。本申请的发明人已经鉴定出香瓜果实含有不同水平的有机酸，例如柠檬酸。本申请发明人还鉴定出香瓜果实含有不同的相对柠檬酸和苹果酸含量。此外，本申请发明人还确定了，通过在甜香瓜背景中引入低pH性状，可以在果实中获得pH的降低和柠檬酸含量的增加，从而进一步扩展了操作香瓜果实味道的能力。在一个实施方案中，本发明香瓜果实具有低含量的苹果酸。因此，本发明公开香瓜植物，所述植物产生如本文所述的具有升高的柠檬酸含量和较低的pH的果实。一个实施方案中，在本发明植物的果实中观察到的糖水平保持在目前可获得的甜香瓜中存在的水平上或者有增加。因此，本发明植物能够产生具有新的令人愉悦的味道的果实。本文所述的pH、柠檬酸和苹果酸含量、及糖含量的测定按照实施例1至5所示进行。本文中表1A和1B公开本发明的代表性香瓜植物及其果实。
一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有等于或大于每100g鲜重(fwt)大约400mg柠檬酸含量的果实。一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有大约4.2至大约5.6的pH的果实。一个实施方案中，本发明香瓜植物能够产生具有等于或大于每100g fwt大约5.0g糖含量的果实。一个实施方案中，本发明公开能产生如下果实的香瓜植物，所述果实具有等于或大于每100g鲜重(fwt)大约400mg的柠檬酸含量、大约4.2至大约5.6的pH、及等于或大于每100g fwt大约5.0g的糖含量。
一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约400mg至大约1,200mg的柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g的糖。
在一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约400mg至大约1,000mg柠檬酸。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约450mg至大约950mg柠檬酸，一个实施方案中，包含每100g fwt大约475mg至大约900mg柠檬酸。一个实施方案中，所述果实具有大约4.3至大约5.4的pH，一个实施方案中，具有大约4.4至大约5.1的pH。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约5.5g至大约13.0g糖。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约7.0g至大约15.0g糖。
一个实施方案中，在所述植物的果实中柠檬酸与苹果酸的比大于4.4，一个实施方案中，大于5，一个实施方案中，大于10。一个实施方案中，在所述植物的果实中柠檬酸与苹果酸的比小于450，一个实施方案中，小于200，一个实施方案中，小于150。一个实施方案中，所述植物的果实包含每100g fwt小于大约85mg的苹果酸，一个实施方案中每100g fwt小于大约75mg的苹果酸。
一个实施方案中，所述植物的果实中蔗糖与己糖的比为大约1∶1，一个实施方案中为大约1∶1至大约1∶2，一个实施方案中为大约1∶1至大约2∶1。
一个实施方案中，所述植物的果实的果肉为橙色、白色、绿色或黄色。一个实施方案中，所述果实可以新鲜食用。一个实施方案中，所述植物的果实的中果皮占鲜果总重的50％以上。
一个实施方案中，所述香瓜植物包含低pH性状。一个实施方案中，所述低pH性状可以从IND-35系植物或所述IND-35系的后代获得，其中该IND-35系植物的代表性种子以保藏号NCIMB41202保藏。一个实施方案中，所述低pH性状在所述植物中是纯合的或是杂合的。
本发明一个实施方案中，公开称作“Citric+”植物的香瓜植物。该植物能够产生具有尖酸提神的酸味的、非常甜的多汁果实。该果实含有高含量的柠檬酸和低pH，增加了酸味并提供了尖酸感觉。这通过高糖含量弥补，在一个实施方案中，通过升高水平的还原糖(葡萄糖和果糖)弥补。高还原糖含量在成熟早期阶段尤其显著。这种不可能由目前现有的甜香瓜获得的、尖酸味和甜味的组合得到消费者的喜爱。该尖酸提神的酸甜香瓜组合满足了此需要。这种果味的尖酸感觉也覆盖了成熟早期果实的仍过于平淡和不良的口味。一个实施方案中，Citric+植物一般通过将低pH性状例如来自IND-35系的低pH性状引入Oriental香瓜背景中而获得。在一个实施方案中，根据一个或多个以下标准来选择所述Oriental香瓜背景：高柠檬酸含量、低苹果酸含量、高柠檬酸与苹果酸含量比、高糖含量、高己糖含量、高己糖与蔗糖比率、高汁液。引入低pH性状的过程中，保持对以上特征的仔细选择直到获得期望的后代。
例如，实施例9、10和11描述该植物的构建。也可以根据期望特征筛选可替代的香瓜植物，并用作本文所述的起始材料。
一个实施方案中，本发明Citric+植物的果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约600至大约1,200mg柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.1的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
一个实施方案中，果实包含每100g fwt大约600至大约1,000mg柠檬酸。一个实施方案中，果实包含每100g fwt大约650至大约950mg柠檬酸。
一个实施方案中，果实的pH是大约4.4至大约5.0。
一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约7.0g至大约13.0g糖。一个实施方案中，所述植物的果实中柠檬酸和苹果酸的比大于6，一个实施方案中大于7，一个实施方案中大于10。一个实施方案中，所述植物的果实中柠檬酸和苹果酸的比小于450，一个实施方案中小于200。一个实施方案中，所述植物的果实包含每100g fwt小于大约85mg的苹果酸，一个实施方案中每100g fwt小于大约75mg的苹果酸，一个实施方案中每100g fwt小于大约60mg的苹果酸。
一个实施方案中，本发明植物的果实具有绿色或白色果肉并且在成熟时包含：
a)每100g fwt大约600至大约1,200mg柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.1的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约600至大约1,000mg柠檬酸。一个实施方案中，具有绿色或白色果肉的所述果实在成熟时包含每100g fwt大约8.0g至大约12.0g糖。一个实施方案中，具有绿色或白色果肉的所述果实在成熟时具有大约25至200的柠檬酸和苹果酸比率。一个实施方案中，所述果实的苹果酸含量为每100g fwt小于大约50mg苹果酸，一个实施方案中，每100g fwt小于大约30mg苹果酸。一个实施方案中，在所述植物的果实中蔗糖和己糖的比率为大约1∶1，一个实施方案中为大约1∶1至大约2∶1。
一个实施方案中，本发明植物的果实具有橙色果肉并且在成熟时包含：
a)每100g fwt大约600mg至大约750mg柠檬酸；
b)大约4.5至大约5.1的pH；和
c)每100g fwt大约6.0至大约13.0g糖。
一个实施方案中，在所述果实中柠檬酸与苹果酸的比率为大约4.4至30。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约7.0g至大约13.0g糖。
一个实施方案中，本发明公开能够产生具有轻微果酸味的甜香果实的香瓜植物，在本文中称作“Citric-”香瓜植物或者果实。该果实包含相对高含量的柠檬酸和轻微低的pH。该轻微低的pH造成果味酸感觉，这可以覆盖成熟早期果实的其它仍过于平淡和不良的味道，而且不影响进一步完全成熟的果实的果肉风味和颜色的完全表达。进一步地在成熟过程中(成熟早期至晚期)，与来自低柠檬酸含量的弱缓冲潜力相符，果实随后出现相应的pH增加和酸性降低。这可以提供完全表达的非常甜香的香瓜风味中具有非常轻微的酸韵调(note)的完全成熟的果实。香瓜风味主要基于通常在果实成熟的真正晚期阶段得到完全表达的甜味和香味。成熟早期的香瓜由于糖和香味低于预期值并且不存在任何其它味道成分，故常常被描述为令人不愉快的乏味。在其它果实，例如草莓、桃或橙中，酸味在此成熟早期阶段成为一个非常令人认可的补充。该轻微果酸和甜的香瓜组合可以避免或限制成熟早期香瓜乏味的危险。
一个实施方案中，通过将低pH性状(例如来自IND-35系的)引入Charentais香瓜背景中，获得Citric-植物。一个实施方案中，基于一个或多个如下标准选择Charentais香瓜背景：低柠檬酸含量、低苹果酸含量、相对高的柠檬酸和苹果酸含量比、高糖含量、高蔗糖含量。在引入低pH性状过程中，保持对上述特征的仔细选择直到获得期望后代。
例如，实施例11描述了此类植物的制备。也可以基于期望的特征选择可替代的香瓜植物，并且可以将其用作本文所述的起始材料。
一个实施方案中，本发明Citric-植物的果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约400至大约650mg柠檬酸；
b)大约4.6至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约13.0g糖。
一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约450至大约600mg柠檬酸。一个实施方案中，所述果实包含大约4.8至大约5.4的pH，一个实施方案中包含大约5.2的pH。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约5.0g至大约13.0g糖，一个实施方案中每100g fwt大约6.0g至大约12.0g糖。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约7.0g至大约13.0g糖。
一个实施方案中，本发明植物的果实具有橙色果肉并且在成熟时包含：
a)每100g fwt大约400mg至大约550mg柠檬酸；
b)大约4.8至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约11.0g糖。
一个实施方案中，在所述果实中柠檬酸和苹果酸的比率为大约4.4至10。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约7.0g至大约11.0g糖。
表1A：品系数据的总结
表1A公开本发明的代表性品系。表1A中显示的数据是基于各单个试验的测量值得到的平均值。所述各单个试验的数据公开在以下实施例中表9-13中。
  品系(平均值)   nr.frt   总糖avgg/100g   蔗糖avgg/100g   己糖avgg/100g   己糖/蔗糖inv活性   pHavg   柠檬酸avgmg/100g   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avgmg/100g
大棚数据
  绿色  YUSOL果肉  YUSAZ AYUSAZ B   高pH低pH，Citric-低pH，Citric+   3424630   9.858.928.70   4.503.242.16   5.345.686.54   1.11.83.0   6.054.674.59   265577832   241916   113153
  白色  SOLAZ/1果肉  SOLAZ/2   品系品系   7143   6.976.19   2.161.92   4.814.27   2.22.2   4.594.64   579590   2347   2513
  橙色  L53AZA果肉  L53AZBL53   低pH，Citric-低pH，Citric+高pH   765210   7.098.118.29   2.514.245.05   4.423.873.23   1.80.90.6   4.894.816.67   50970192   3101   1536793
表1B：杂种数据总结
表1B公开本发明的代表性杂种。表1B中显示的数据是基于各单个试验的测量值得到的平均值。所述各单个试验的数据公开在以下实施例中表9-13中。Mehari指杂种MEHARI的雌性亲本。
  杂种(平均值)   nr.frt   总糖avgg/100g   蔗糖avgg/100g   己糖avgg/100g   己糖/蔗糖inv活性   pHavg   柠檬酸avgmg/100g   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avgmg/100g
  大棚(PS)& 田间 (OP)数据
  绿色  YUSAZ A X YUSOL果肉  MILENIUM-DENEVF1   低pH，Citric+高pH   1712   9.707.61   4.463.47   5.244.13   1.21.4   4.775.88   692444   46X   150   PSOP
  白色  SOLAZ/1 X YUSOL果肉  SOLAZ/2 X YUSOLSOLAR F1   Solaz1 x YusolSolaz2 x Yusol高pH   26138   9.719.088.93   6.406.264.39   3.312.824.54   0.50.51.2   4.754.706.48   760782305   5816235   1369   OPOPPS
  橙色  Mehari/L53AZ A果肉  Mehari/L53AZ BMehari/L53   低pH，Citric-低pH，Citric+高pH   131714   7.348.358.80   2.243.373.96   5.104.974.84   2.31.51.2   4.984.766.31   487663274   6115   786054   PSOPPS
本发明证明，操作果实中的酸度可以产生有价值的味道变化。酸味是几种参数相互作用的结果，其中pH是最重要的参数之一，有机酸的含量及组成也是。pH极大地影响味道中所涉及的酸类化合物的解离程度。每一种酸都有不同的解离常数(pKa)，解离常数指造成所述酸的50％解离成其相应的离子和H+时的pH。较低的pH导致较多的非解离形式的酸。酸味感觉主要来自于未解离形式的酸。这就说明了为什么在较高的pH水平下具有较高pKa的较弱的酸例如有机酸被感觉到比较强的酸有更大的酸味。
溶液的pH与酸的浓度和pKa有关。等摩尔的较强酸的溶液与较弱酸的溶液相比味道更酸，因为它们具有低得多的pH。酸的浓度(可滴定的酸度)越高，从该酸将感觉到越大的酸味。酸味也与酸化剂的化学结构、该分子的羧基数量、分子量和极性有关(见例如PURAC Biochem，Gorinchen，The Netherlands，“Flavor Special”，www.Purac.com)。
除了酸味，每种食物酸就持续时间、风味强度和对其它非酸味的风味韵调例如涩味、苦味和甜味的贡献而言都有其自身的风味特征。
香瓜果实中的主要有机酸是琥珀酸、苹果酸和柠檬酸(Wang等(1996)J.Agric.Food Chem.44：210-216)。苹果酸倾向于与极不成熟相有关或者与过成熟的果实的衰老和变质相有关，并且一般不优选其在味道中占主导地位。在该果实的果肉中，从靠近种子腔的位置到靠近果皮的位置观察到递增梯度的苹果酸含量。柠檬酸比苹果酸具有较低的pKa。柠檬酸具有更为尖酸的纯净效果，这常常压制住其它味道或者香味韵调。与苹果酸不同，从靠近种子腔的更成熟区域到靠近果皮的区域，观察到果肉中递减梯度的柠檬酸含量。对于糖，也观察到此梯度。
因此，在本发明的香瓜果实中，较高的糖含量和高柠檬酸含量倾向于在果肉中结合以在该果实的大多数有味道的区域提供高含量的两者，从而导致非常令人愉悦的新味道。
此外，在本发明的香瓜果实中，当pH低而且柠檬酸含量高时，酸味感觉更大。
一个实施方案中，由经过训练的品味员组成的专家组对本发明的果实进行了测试。按0至9的评估级别(scale of quotation)，测定果实的感观特征。此外，还测定了果实的pH、有机酸含量和糖含量。实施例12、表14和15描述了专家组的结果。感观分析显示，本发明果实中的酸味是果实中pH和柠檬酸含量的函数。基于从成熟的和未成熟的果实采集的数据，专家组对于果实中的酸味和pH及柠檬酸含量之间关系确定了如下公式：酸味＝13.12-(2.97×pH)+(0.00587×柠檬酸含量(mg/100g fwt))，其中r2＝0.70。
因此，在一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实按照专家组的确定包含大于大约0.5的酸味。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含等于或大于大约1.6的酸味。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大于大约0.5的酸味和等于或大于4.3的甜味。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大约1.6至大约3.8的酸味和大约4.3至大约5.8的甜味。
一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大约2.5至大约3.8的酸味和大约4.3至大约5.6的甜味。杂种YUSOL X SOLAZ和Mehari X L53 AZ B是此类植物的代表性例子。
一个实施方案中，该果实包含本文所述的pH和柠檬酸含量。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的香瓜植物，所述果实包含大约1.6至大约3.0的酸味和大约5.2至大约5.8的甜味。杂种YUSAZ X YUSOL、Mehari X L53 AZ A和TD X L53 AZ A是此类植物的代表性例子。
一个实施方案中，该果实包含本文所述的pH和柠檬酸含量。一个实施方案中，该果实包含本文所述的pH、有机酸含量及组成和糖含量及组成。
可以理解，随着果实的pH、柠檬酸含量和糖含量的变化，专家组的值可以不同。
本发明的发明人已经基于柠檬酸和糖的含量及组成筛选了多条(etnryies)和多份(accessions)香瓜种质，并且测定到香瓜类型中的变化(见表2)。例如，发现一些Charentais型香瓜具有低的柠檬酸含量(例如表2中的Lunastar)。还发现一些Charentais型果实具有相对低的柠檬酸和苹果酸比率以及高的蔗糖和己糖比率。另一方面，发现Oriental型香瓜例如日本Rocky型香瓜具有较高的柠檬酸含量(例如，表2中YUCA)。YUCA的一个代表，YUC-15，已经于2003年12月17日保藏在NCIMB，Aberdeen，AB24 3RY，苏格兰，保藏号NCIMB41203。这些香瓜还被发现具有高的柠檬酸和苹果酸比率和高的己糖和蔗糖比率。还发现一些Galia型香瓜，例如MG755，具有高柠檬酸含量。令人惊奇的是，根据本发明，在日本型香瓜和Charentais型香瓜的杂交(表2中Prince PF)中，日本型香瓜的高柠檬酸含量可以与高己糖和蔗糖比率分离并与Charentais型香瓜的高蔗糖和己糖比率组合。本发明还认识到，柠檬酸含量的变化也存在于不甜的种质例如Faqqous和IND-35中(与IND-35相比Faqqous中具有低柠檬酸含量，表2)。
此外，尽管本领域一般认为在同一香瓜果实中低pH和高糖积累并不常见或者甚至是不相容的(Stepanski等(1999))，但本发明的发明人已经能够将上述pH和有机酸特征与期望的糖含量组合在所述果实中(见例如表3)。
表2：在各种香瓜类型和品种中柠檬酸含量的变化(果实分析数据试验Sarrians，1997年8月)
  名称 果实数   Ri   pH   柠檬酸(mg/100g)   蔗糖(g/100g)   己糖Glucose   葡萄糖(g/100g)   果糖(g/100g)   总糖(g/100g)
  Lunastar(Charentais)Yuca-18-3-8MG 755 OAPrince PF(Japanese XCharentais)SanchoFagouss EgyptFagouss Jim MC GreigtFagouss JordanyIND35-1   68454106118   11.810.53.83.33.74.5   6.86.76.86.15.65.25.14.9   1592862944384093562125340   6.73.811.410.03.70.10.10.10.6   3.24.23.73.34.11.92.12.13.4   1.62.32.11.22.10.90.90.91.8   1.61.91.72.11.91.01.21.21.7   9.28.015.113.37.81.92.22.24.0
Ri：Brix，折射率(refractometer index)，测量可溶性固体
表3：糖积累相对于pH
在IND-35和YUCA或0GEL杂交的F2群体(Agadir’98)中统计学分析相对于pH的糖的积累(brix)。该分析显示brix值和pH之间不存在负相关性。
  pH＜5.5RI(Brix) pH   pH＞5.5RI(Brix) pH   ANOVAP＝0.05
IND35/YUCA-15F2 NR plts最大值平均值标准差最小值   68   68   22   22   P＝0.98brix群体中无显著性差异
  13.00   5.40   13.60   7.00
  8.03   4.53   8.01   5.85
  2.34   0.30   2.72   0.37
  2.40   3.80   2.40   5.50
IND35/OGEL-17F2 NR plts最大值平均值标准差最小值   98   98   39   39   P＝0.65brix群体中无显著性差异
  13.00   5.45   12.20   7.50
  7.75   4.70   7.93   5.97
  2.16   0.33   1.89   0.35
  2.80   3.90   4.20   5.50
IND.35 NR plts最大值平均值标准差最小值   29   29
  7.60   5.40
  5.45   4.63
  1.18   0.31
  3.00   4.10
本发明还公开在甜香瓜背景中掺入低pH性状。在甜香瓜背景中存在该低pH性状使得果肉中pH降低并且有机酸浓度增加，并且使得可以将期望的pH和柠檬酸含量与适当的糖浓度和含量组合在一起，而导致令人愉悦的新味道。
一个实施方案中，低pH性状由低pH基因决定。一个实施方案中，从野生的香瓜种质或栽培品种获得低pH基因。一个实施方案中，用作所述低pH基因的供体的野生香瓜种质或栽培品种包含利于构建如下商业香瓜的性状，所述商业香瓜具有可接受的农艺特征并产生具有期望味道的果实。一个实施方案中，该供体能够积累相应水平的糖，例如蔗糖。一个实施方案中，该野生香瓜种质或栽培品种具有至少一种以下特征：无呼吸跃变行为、相对更大的果实体积和中果皮成分、脆果肉。
一个实施方案中，低pH性状从IND-35系获得，IND-35系的代表性种子已经于2003年12月17日保藏在NCIMB，Aberdeen，AB24 3RY，苏格兰，保藏号NCIMB 41202。这是来自印度的香瓜种质，该种质可以分类到植物学变种Var.chito中，但是由于其较大的体积分类为Var.acidulous(Naudin，Pitrate等)可能更好。
柠檬酸是IND-35系的果实中主要的有机酸(每100g fwt多达911mg柠檬酸)，而苹果酸含量低于每100g fwt 50mg。令人惊奇地，IND-35的果实也能够积累相应水平的蔗糖(在长果实周期后，即，结果后50或53天晚收后，多达每100g fwt 1.7g蔗糖以及每100g fwt5.6g总糖)。表2也报道了对IND-35果实的分析，显示出大约4.9的pH、大约340mg/100g鲜重(fwt)的柠檬酸含量和大约4.0g/100g fwt的糖含量。
一个实施方案中，低pH性状和分子标记共分离。一个实施方案中，分子标记是通过PCR扩增的DNA片段，例如SSR标记或RAPDS标记。一个实施方案中，扩增的DNA片段的存在或缺乏指示着所述性状本身的存在与缺乏或者所述性状的特定等位基因的存在或缺乏。一个实施方案中，扩增的DNA片段的长度差异指示着性状的特定等位基因的存在，并由此使得可以区分性状的不同等位基因。一个实施方案中，本发明公开可以区分低pH性状的不同来源以及植物中是否存在低pH性状的标记。例如，该标记是Danin-Poleg等(2001)Theor.Appl.Genet.102：61-72和Danin-Poleg等(2002)Euphytica 125：373-384中描述的CMAT141。分子标记的其它例子是本文中公开的NE0585和NE1746(见实施例13)。这些标记与该pH基因的基因座紧密连锁。标记CMAT141和NE0585位于该低pH基因的一侧，而标记NE1746位于该低pH基因的另一侧。
一个实施方案中，本发明的发明人已经确定，当使用针对这些标记的引物时，低pH性状的不同来源扩增出不同长度的DNA片段(酸性片段，见实施例14，表16)。例如，在Faggous植物中，针对CMAT141，扩增出大约176bp的片段。在种质PI414723、PI414724、PI161375和PI124112的植物中，扩增出大约175bp的片段。相反，在本文描述的IND-35植物中，扩增出独特的大约168bp和大约173bp的片段。使用标记NE0585，对于IND-35，扩增出大约230bp和大约232bp的独特片段。使用标记NE1746，对于IND-35，扩增出大约127bp的独特片段。对于IND-35，还扩增出大约124bp的另一片段，该片段在例如Faggous中是不存在的。
一个实施方案中，还使用本文公开的引物分析了不含该低pH性状的植物。确定了与低pH性状的缺乏相关的多个DNA片段(碱性片段)。例如，使用CMAT141的引物，在不含低pH性状的植物中检测到长大约169bp、大约172bp和大约178bp的片段。使用NE0585的引物，检测到长大约218bp、大约229bp、大约234bp和大约239bp的片段。使用NE1746的引物，检测到大约133bp、大约142bp和大约145bp的片段。本领域技术人员将明了如何分析不含低pH性状的其它植物并确定与该低pH性状的缺乏相关的其它DNA片段。所述长度(单位bp)不是绝对的而是相对于使用相同引物对所检测到的其它大小的产物而言的。扩增片段的真实(确切)大小(例如，通过测序确定)可能与此处所述的大小稍有差异(+/-1bp)。
因此，一个实施方案中，本发明公开包含如下DNA序列的香瓜植物，所述DNA序列是使用本文所述的引物扩增本文所述DNA片段的模板。一个实施方案中，当使用能够鉴定标记CMAT141的引物时，从所述植物的该DNA扩增大约168bp至大约178bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，扩增168bp、173bp、169bp、172bp或178bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，扩增小于176bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定CMAT141标记的引物时，扩增小于175bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE 0585标记的引物时，扩增大约218bp至大约253bp的DNA片段。在一个实施方案中，当使用能够鉴定NE0585标记的引物时，扩增230bp、232bp、218bp、229bp、234bp或239bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE1746标记的引物时，扩增大约121bp至大约145bp的DNA片段。一个实施方案中，当使用能够鉴定NE1746标记的引物时，扩增124bp、127bp、133bp、142bp或145bp的DNA片段。
一个实施方案中，本发明发明人解开了指示低pH性状的DNA片段与低pH基因之间的连锁。在此情况下，作为扩增碱性片段的模板的DNA序列与低pH性状连锁。因此，一个实施方案中，本发明公开包含与指示碱性等位基因的标记(尤其是当使用本文所公开的标记时)共分离的低pH性状的植物。一个实施方案中，位于该pH基因一侧的标记是碱性的。一个实施方案中，位于该pH基因两侧的标记是碱性的。一个实施方案中，该植物的果实包含位于本文所公开的范围内的pH。一个实施方案中，该植物的果实包含本文所述的糖含量及组成。一个实施方案中，该植物的果实包含本文所述的有机酸含量及组成。一个实施方案中，该植物的果实包含本文所述的pH、糖含量及组成和有机酸含量及组成。
因此，一个实施方案中，本发明公开包含如下DNA序列的香瓜植物，所述DNA序列是用于扩增碱性DNA片段的模板，与低pH基因连锁。一个实施方案中，本发明公开包含含有如下DNA序列的染色体片段的香瓜植物，所述DNA序列是用于扩增碱性DNA片段和低pH基因的模板。一个实施方案中，该染色体片段在所述植物中是纯合的或杂合的。本文所述的SOLAZ/2系是此类香瓜植物的代表性实例。在SOLAZ/2中，使用标记CMAT141、NE0585和NE1746的引物，分别扩增出大约172bp、大约229bp和大约124bp的片段。
一个实施方案中，本发明公开香瓜植物，所述香瓜植物包含位于低pH基因一侧的用作扩增碱性DNA片段的模板的DNA序列、低pH基因和位于该低pH基因另一侧的用作扩增碱性DNA片段的模板的DNA序列，其中两个DNA序列在所述植物中与该pH基因连锁。一个实施方案中，本发明公开包含如下染色体片段的香瓜植物，所述染色体片段包含位于低pH基因一侧的用作扩增碱性DNA片段的模板的DNA序列、所述低pH基因和位于该低pH基因另一侧的用作扩增碱性DNA片段的模板的DNA序列。一个实施方案中，该染色体片段在所述植物中是纯合的或杂合的。本文描述的SOLAZ/1系是此类香瓜植物的代表性实例。在SOLAZ/1中，使用标记CMAT141、NE0585和NE1746的引物，分别扩增出大约172bp、大约239bp和大约142bp的片段。本文所述YUSOL/3系是此类香瓜植物的另一代表性实例。在YUSOL/3中，使用标记CMAT141、NE0585和NE1746的引物，分别扩增出大约172bp、大约239bp和大约145bp的片段。
因此，本发明公开包含低pH性状的香瓜植物在获取本发明香瓜植物中的用途。一个实施方案中，含有低pH性状的香瓜植物还能够积累相应水平的糖，例如蔗糖。一个实施方案中，包含低pH的香瓜植物积累高水平的柠檬酸。一个实施方案中，包含低pH的香瓜植物积累低水平的苹果酸。一个实施方案中，包含低pH的香瓜植物是IND-35系植物或其后代。
一个实施方案中，所述低pH性状从所述IND-35系的后代获得。本领域技术人员将意识到，还可以从其它来源获得低pH性状。一个实施方案中，在该其它来源中的低pH性状与IND-35中的低pH性状是等位的。一个实施方案中，进行测试以确定待检测低pH基因的品系是否包含IND-35的低pH基因的等位基因。IND-35系可以用作与待测品系杂交的测交系，在所获后代中确定低pH表型的分离比率。
一个实施方案中，IND-35系植物与香瓜繁殖系(优选地具有高柠檬酸含量和高水平的糖)杂交。每次杂交后，选择产生具有低pH的果实的植物。也基于增加的柠檬酸含量和高糖含量，进行选择。实施例7-11公开了将低pH性状引入原种品系(elite line)中的例子。
一个实施方案中，使用以上公开的分子标记将所述pH性状转移至期望的背景中，尤其是在本文所述增加香瓜植物果实的柠檬酸含量的方法中进行。一个实施方案中，选择可扩增出相应于低pH性状的片段的植物，并进一步使用。
一个实施方案中，在低pH性状引入甜香瓜植物中后，与不含该低pH性状的香瓜的果实相比，例如与不含该低pH性状的等基因或近等基因品系相比，获得大约1至大约2.5pH单位的降低，在一个实施方案中获得大约1.5至大约2.0pH单位的降低。一个实施方案中，在低pH性状引入香瓜植物中后，与不含该低pH性状的香瓜的果实相比，例如与不含该低pH性状的等基因或近等基因品系比较时，所述香瓜植物的果肉中柠檬酸含量增加大约1.5至大约3倍。比较各种植物的成熟果实。例如，表1A和1B显示了含有低pH性状的香瓜与不含低pH性状的香瓜之间的比较，例如YUSAZ X YUSOL和MILENIUM-DENEV F1、SOLAZ X YUSOL和SOLAR F1、Mehari/L53-L53 AZ A-L53 AZ B之间的比较。
因此，本发明香瓜果实与可比的不含低pH性状的现有香瓜相比具有更高浓度的有机酸(可滴定的酸度)。在本发明的香瓜果实中，有机酸的组成(优势酸的pKa)比有机酸的总浓度与pH的变化更为相关。一般在成熟晚期观察到pH的增加，并且此pH的增加与蔗糖的积累同时发生。pH的这种增加被有机酸含量缓冲。低有机酸含量导致高的pH增加和酸味感觉的减少。例如，在具有低柠檬酸含量的香瓜，例如一些现有的Charentais型香瓜，例如呼吸跃变的转色型Charentais香瓜中，pH的这种增加可以超过1.0pH单位(从pH6.0至7.0)。相反，正如在例如较少呼吸跃变的较少转色的香瓜中所见的那样，在成熟过程中较高的有机酸含量导致降低的pH增加量，并由此阻止或降低酸味感觉的下降。
因此，一个实施方案中，本发明公开基于稳定的低pH和高柠檬酸含量而具有更稳定的尖酸味的香瓜果实。一个实施方案中，本发明公开在成熟后或收获后具有改善的味道稳定性的香瓜果实。本发明还公开在香瓜植物的果实中延迟或减少pH的增加的方法，包括增加所述果实中有机酸的含量和在香瓜植物中引入低pH性状。一个实施方案中，该方法包括在具有低呼吸跃变或无呼吸跃变行为的植物中引入低pH性状。一个实施方案中，该方法包括在能够产生低转色或不转色的果实的植物中引入低pH性状。
一个实施方案中，本发明还公开香瓜果实，所述果实基于pH的适度增加(不超过0.5pH单位)和柠檬酸含量的适度升高，从最初的成熟早期的微酸味成熟为果味的风味丰满的味道。
根据本发明，将低pH性状引入产生具有不同糖含量及组成的果实的香瓜植物中。一个实施方案中，来自日本Oriental型香瓜，例如YUCA的植物用作糖的来源。一般的观察是，糖尤其是蔗糖的积累是以授粉后的天数理解的果实周期时间(从结果到果实成熟)的问题。一个实施方案中，在本发明中使用产生具有早期的并且实质性的糖积累的果实的香瓜植物。例如，使用Galia型植物，例如栽培品种OGEL，作为糖来源。一个实施方案中，在本发明中使用产生具有独立于最初的己糖水平高而快地积累蔗糖的潜力的果实的香瓜植物。例如，使用Charentais型植物，例如L53作为该蔗糖积累潜力的来源。
以下实施例公开了低pH性状向原种品系转移的实例。下表8还公开了在向原种品系转移的过程中获得的香瓜植物。然而，在本发明中也可以使用其它类型的香瓜或以上提及的香瓜类型的其它香瓜栽培品种或变种来构建根据本发明的香瓜植物。
一个实施方案中，包含低pH性状的香瓜植物与Oriental型或Galia型香瓜植物杂交。例如，包含低pH基因的香瓜植物是IND-35系。例如，Oriental型香瓜植物是YUCA，而Galia型香瓜植物是OGEL，见以下实施例7中的描述。所得后代可以例如进一步与Oriental型或Galia型香瓜植物杂交以获得期望的pH和有机酸及糖的含量及组成。可以通过按本文所公开的方式测量pH、有机酸和糖，辅助该方法的实施。也可以基于期望的特征选择可替代的Oriental型或Galia型香瓜植物，并用作起始材料以获得本文所述的香瓜植物。
一个实施方案中，包含低pH性状的香瓜植物与Charentais型香瓜植物例如实施例11中所述的L53杂交。也可以基于期望特征选择可替代的Charentais型香瓜植物，并用作起始材料以获得本文所述的香瓜植物。
也可以使其它类型的香瓜植物与包含低pH性状的香瓜植物杂交以获得本文所述的香瓜植物。
一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的植物，所述果实的特征在果实达到成熟并保留于植物上时或者在果实被收获并贮存时保持稳定。一个实施方案中，本文所述果实的特征在果实的商业收获后寿命期保持稳定。这使得可以对本发明的果实进行长期的贮存或运输而不损失其器官感觉特征和香味。
一个实施方案中，本发明果实的pH在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的pH在果实成熟后保持在大约4.2至大约5.6的范围内。一个实施方案中，本发明果实的柠檬酸含量在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的柠檬酸含量在果实达到成熟后保持在等于或大于每100g fwt 400mg的水平。一个实施方案中，本发明果实的苹果酸含量在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，本发明果实的柠檬酸和苹果酸比率在果实达到成熟后保持稳定。一个实施方案中，所述柠檬酸和苹果酸比率在果实达到成熟后保持大于4.4。一个实施方案中，这些特征在果实达到成熟后保持在本文所述范围内。一个实施方案中，这些特征保持在果实达到成熟时测量这些特征得到的值的大约70％至大约130％的范围内，一个实施方案中，保持在果实达到成熟时测量这些特征得到的值的大约80％至大约120％的范围内，一个实施方案中，保持在果实达到成熟时测量这些特征得到的值的大约90％至大约110％的范围内。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的植物，所述果实的特征在果实达到成熟后保留于植物上时、或在收获并贮存时保持稳定。一个实施方案中，本发明公开能够产生如下果实的植物，所述果实的特征在果实保留于植物上时持续至少2天保持稳定，一个实施方案中当果实保留于植物上时持续至少3天保持稳定，一个实施方案中当果实保留于植物上时持续至少4天保持稳定。一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的植物，所述果实的特征在果实于20℃贮存时持续至少5天保持稳定，一个实施方案中在果实于20℃贮存时持续至少7天保持稳定，一个实施方案中在果实于20℃贮存时持续至少9天保持稳定。一个实施方案中，本发明公开能够产生果实的植物，所述果实的特征在果实于8-12℃贮存时持续至少7天并之后在20℃贮存至少2天保持稳定，一个实施方案中在果实于8-12℃贮存时持续至少12天并之后在20℃贮存至少2天保持稳定，一个实施方案中在果实于8-12℃贮存时持续至少26天并之后在20℃贮存至少2天保持稳定。典型地，果实收获后，在将果实在本文所述的条件下贮存前，果实可以持续几小时保持在大田条件下。
实施例15，表17中显示了本发明植物的果实的特征在果实保留于植物上时的演变实例。实施例16，表18和19显示了本发明植物果实的特征在于收获之后的贮存后的演变实例。
一个实施方案中，可以将香瓜描述为短保存期限(SLS)、中等保存期限(MSL)或长保存期限(LSL)。LSL香瓜的实例是Milenium，Piel deSapo，Italo和不转色的Charentais LSL。MSL香瓜的实例是Galia和转色的Charentais MSL。短保存期限(SSL)香瓜的实例是经典的Charentais。
典型地，SSL香瓜的果实在植物上的寿命是大约1天至大约2天。这意味着果实必须大约每1至2天收获一次以避免损失。典型地，MSL香瓜的果实在植物上的寿命是大约3至大约4天。这意味着大约每3至4天收获果实一次以避免损失。典型地，LSL香瓜的果实在植物上的寿命是大约5天以上。典型地，SSL香瓜可以在8至12℃贮存大约4天至大约7天并之后再在20℃贮存2天，或者可以在20℃贮存大约3至4天。典型地，MSL香瓜可以在8至12℃贮存大约7至大约12天并之后再在20℃贮存2天，或者可以在20℃贮存大约5至10天。典型地，LSL香瓜可以在8至12℃贮存大约12天以上并之后再在20℃贮存2天，或者可以在20℃贮存大约10天以上。
一个实施方案中，本发明植物能够产生长保存期限的果实(LSL)或者中等保存期限的果实(MSL)。
本发明发明人确定了，低pH性状和高柠檬酸可以在果实达到成熟后加速香瓜果实(尤其是转色的呼吸跃变型香瓜)中呼吸跃变。这导致果实变质，这可以由例如pH和苹果酸含量的快速增加及柠檬酸含量的降低来显现。这也可以通过粉状的质地和醇分解的出现而显现。在转色的呼吸跃变型香瓜中，果实的保存期限被减少，而该现象在不转色的或/和无呼吸跃变的香瓜中较少被觉察到。因此，一个实施方案中，本发明植物具有不转色的或低转色的香瓜基因型。一个实施方案中，本发明植物能够产生无呼吸跃变的或低呼吸跃变的果实。
因此，一个实施方案中，本发明公开具有低呼吸跃变行为或无呼吸跃变行为的、包含低pH基因的香瓜植物。一个实施方案中，该香瓜植物的果实还包含本文所述的糖含量及组成的特征。在一个实施方案中，该香瓜植物的果实还包含本文所述的有机酸含量及组成的特征。一个实施方案中，该香瓜植物的果实包含本文所述的柠檬酸和苹果酸比率。一个实施方案中，该植物的果实还包含本文所述的pH。
一个实施方案中，本发明公开能够产生低转色或不转色的果实的香瓜植物，其中所述植物包含低pH基因。一个实施方案中，该香瓜植物的果实还包含本文所述的糖含量及组成的特征。在一个实施方案中，该香瓜植物的果实还包含本文所述的有机酸含量及组成的特征。一个实施方案中，该香瓜植物的果实包含本文所述的柠檬酸和苹果酸比率。一个实施方案中，该植物的果实还包含本文所述的pH。
一个实施方案中，本发明发明人已经鉴定到，香瓜果实果肉中的低pH与具有橙色果肉的果实的非常差的果肉颜色强度相关。尤其是，对于产生具有橙色果肉的果实的香瓜植物，观察到了轻微的橙色或者淡橙色(见例如表4)。令人惊奇的是，本发明发明人已经能够将低pH和深橙色结合在香瓜植物的果实中。
表4显示L53系(Syngenta杂种MEHARI的亲本)的果实的颜色强度为深的至非常深的橙色(平均5.17)。起源于为在L53中引入低pH性状而进行的回交程序但不含该低pH性状的植物(L53*高pH)，显示出颜色强度和pH的轻微降低(4.71和6.46)。起源于所述回交程序并含有该低pH性状的植物显示出颜色强度和pH的进一步降低。具有纯合状态的低pH性状的植物(L53*低pH)具有最低等级的橙色果肉颜色：4.04。具有杂合状态的低pH性状的植物(L53*酸)具有中等等级的橙色果肉颜色：4.36。这说明低pH和淡橙色果肉颜色之间的连锁或表型效应。因此，基于在低pH性状存在下浓郁的橙色果肉颜色(一个实施方案中在以下级别中评定为4级或更高级别，一个实施方案中，5级和更高级别，一个实施方案中6级)，选择植物。
一个实施方案中，本发明公开能够产生具有大约4.5至大约5.6pH的果实的香瓜植物，其中所述果实具有评定为4级或更高级别的橙色果肉。一个实施方案中，所述果实的橙色被评定为5级或更高级别，一个实施方案中为6级。一个实施方案中，所述果实的pH是大约4.5至大约5.4，一个实施方案中为大约4.8至大约5.2。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约400mg至大约900mg柠檬酸。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt大约450mg至大约750mg柠檬酸。一个实施方案中，所述果实包含每100g fwt等于或大于大约5g的糖含量，一个实施方案中包含每100g fwt大约5.0g至大约13.0g糖。一个实施方案中，该果实包含每100g fwt大约6.0g至大约12.0g糖。一个实施方案中，所述果实中柠檬酸和苹果酸的比率为大约4至30，一个实施方案中为大约5至大约15。一个实施方案中，所述植物的果实中蔗糖和己糖比率为大约1∶1和大约1∶2。
对于颜色评定，使用如下级别：1：白色；2：微橙色；3：淡橙色；4：橙色；5：深橙色；6：非常深的橙色(见表4)。一个实施方案中，使用分光光度计，例如Minolta CM-2500d分光光度计，评价果实的颜色。
表4
一个实施方案中，本发明香瓜果实的特征在成熟时收获的果实上，即在成熟的或熟了的果实上进行测量。香瓜果实的具体组成以及由此其味道受到其收获时的成熟阶段的影响。糖和有机酸在香瓜果实中的积累是动态过程。随着果实接近成熟，它们开始积累。随着成熟过程的推进，这些化合物均遵循时间特异性的积累或降解模式，该模式也受到环境和生长条件的影响。本领域技术人员明了如何识别成熟的香瓜果实和理解定义香瓜果实成熟的标准。
一个实施方案中，使用一种以下的外在成熟标记鉴定甜香瓜的成熟：
-侧果叶(side fruit leaf)(该香瓜果实结在位于一片称作侧果叶(side leaf fruit)的叶的花梗着生处腋下的花中)衰老。该侧果叶坏死。
-果皮颜色改变(在Galia型中由绿色转变为黄色，在Charentais型中由灰色转变为奶黄色，或者在Piel de Sapo型中黄色成分增加)。
-花梗开裂(尤其是对于Shipper香瓜而言，而对于Charentais而言较少，对于Galia而言较少)。
-果壳坚硬度下降，尤其是在果顶(blossom end)区域中。
一个实施方案中，“成熟”(maturity)包括介于鉴定为“2”的“成熟早期-部分成熟”的阶段至鉴定为“4”的“成熟晚期-完全成熟”的阶段之间的成熟的生理学过程。一个实施方案中，成熟早期-部分成熟阶段在香瓜中以等于或大于每100g fwt 2g蔗糖的最初蔗糖含量积累来鉴定。一个实施方案中，这与柠檬酸和还原糖(葡萄糖加果糖)含量的剧烈增加以及典型的成熟果实果肉颜色和质地相联系。一个实施方案中，成熟晚期-完全成熟阶段在香瓜中以蔗糖糖含量的剧烈增加的结束来定义。其也被定义为降解过程开始之前，例如果肉坚度的丧失、葡萄糖、柠檬酸含量的快速下降或者苹果酸含量的增加之前。因此，一个实施方案中，当果实中的蔗糖含量达到每100g fwt 2g时，果实开始成熟。一个实施方案中成熟持续到不再观察到蔗糖含量的增加。
本文公开的测量值通常是取自多个果实的测量结果或数据的平均值。可以理解，由于种植香瓜植物时通常观察的变异，在任何样品中，植物的单个果实或来自单个植物的果实不在所述范围内。一个实施方案中，本文所述香瓜果实的特征使用在本文所述条件下或在相似条件下生长的果实来测定(例如，以下实施例6，表5-7)。一个实施方案中，根据本发明的特征的数字是取自大棚木桩撑扶的植物(stakedplant)生长的果实的平均值(在木桩撑扶的植物中每植物一个果实)。
一个实施方案中，本发明植物是自交系、双单倍体或杂种。一个实施方案中，自交系包含低pH性状和本文所述的有机酸、pH和糖的特征。在此情况下，该自交系与另一香瓜植物，优选地另一自交系杂交，以获得根据本发明的杂种植物。一个实施方案中，所述杂交中的另一自交系也能够产生具有高柠檬酸含量和/或高糖含量的果实。根据本发明的代表性自交系公开在表1A中。
一个实施方案中，本发明植物是杂种植物。在此情况下，低pH、高柠檬酸含量和高糖含量特征中的一些由其中一个亲本贡献，而剩余的特征由另一亲本贡献。一个实施方案中，杂交中的一个亲本产生具有高柠檬酸含量、高糖含量但具有高pH(例如大约pH6.5)的果实，而杂交中的另一亲本产生具有低pH的果实。一个实施方案中，所述另一亲本的果实也具有高柠檬酸含量。根据本发明的代表性杂种公开在表1B中。在本文中，术语“植物”包括植物细胞、植物原生质体、可以再生香瓜植物的植物组织培养物细胞、植物愈伤组织、植物块、以及植物中完好的植物细胞或植物部分例如花粉、花、叶、茎等。一个实施方案中，本发明植物能够产生可食用的香瓜果实。中果皮为香瓜果实(果肉)的可食用部分。中果皮包围种子腔，而中果皮本身被果皮(或壳)包围。本发明果实的中果皮优选具有2cm以上的厚度，并且优选占果实果肉总重量的50％以上。一个实施方案中，本发明香瓜植物果实的果肉具有绿色、白色、黄色或橙色果肉。
一个实施方案中，本发明提供用于本发明植物的组织培养物中的可再生细胞。该组织培养物能够再生出具有本发明植物的特征的植物。优选地，在此组织培养物中所述可再生细胞是未成熟的胚、原生质体、分生组织细胞、愈伤组织、花粉、叶、花药、根、根尖或花。再有，本发明提供从本发明组织培养物再生的香瓜植物。再生的操作方案的例子公开在US 6,420,631中。本发明还提供无性繁殖本发明植物的方法，包括收集本发明植物的组织，培养所述组织以获得增殖芽(proliferated shoot)，使增殖芽生根以获得生根的小植物。本发明还公开产生本发明植物的种子的方法，包括获得本发明植物，使所述植物自花授粉或使所述植物与另一香瓜植物杂交，和收获后代种子。本发明还公开产生果实的方法，包括种植本发明的植物，使所述植物生长和收获果实，其中所述果实包含本文所述的特征。该方法还包括贮存所述果实，例如按本文所述进行。该方法还包括运输所述果实。一个实施方案中，本文所述的所述果实的特征在所述果实的贮存期间保持稳定。一个实施方案中，本文所述的所述果实的特征在所述果实的贮存期间保持稳定。
以下描述多种香瓜类型和品系的一些特征。对于这些不同的香瓜类型和品系，这些特征是例子，不意味着对这些香瓜类型和品系构成限制，而是对这些香瓜类型和品系的举例说明。可能出现自这些特征的变异。
Charentais型香瓜：
果实：圆形至高圆(hight round)形；大小为600至1200grs；果皮：白灰色带有绿灰色缝(suture)，光滑外皮(光滑的或稍带网纹的外皮)。橙色、易化的(melty)、非常芳香的甜果肉、呼吸跃变型。一些Charentais变种具有降低的呼吸跃变相和不转色的果皮颜色。
Var LUNASTAR：Lunastar是来自Nunhems的Charentais型雌雄同株杂种。
日本型香瓜：
果实：圆至高圆形；大小为700至1500grs；果皮：白灰色网纹外皮(例外情况，有缝)。绿黄色(例外情况为橙色)、脆的至易化的、很少香气的、非常甜的果肉，仅仅在有些情况下。长周期，无呼吸跃变。
Var YUCA：日本型绿色果肉的雄全同株杂种。
Var PRINCE：日本型橙色果肉的雄全同株杂种。
Galia型香瓜：
果实：圆至高圆形状；大小为600至1500grs；果皮：绿色转色为黄色的网纹外皮。绿白色、易化的、芳香甜果肉。短周期，中等保存期限，呼吸跃变型。
Var MG.755：Galia型雄全同株杂种。非常短的果实周期，具有高brix。
Piel de Sapo香瓜型：
果实：卵形至椭圆状长圆形(oblong-eliptic)的形状；大小2至5Kgrs；果皮：金绿色、带斑点，具有很少的纵向网纹的外皮。白色、脆的、多汁的芳香甜果肉。中等果实周期、长保存期间，无呼吸跃变。
Var Sancho：Piel de Sapo型雄全同株杂种。金色的果皮具有高brix。
Fagous型香瓜：
果实：中短圆柱形；大小300至1000grs；果皮：绿色外皮。白色、脆的、不甜果肉。对于食用，在沙拉中绿色蔬菜。雌雄同株的。
IND35：果实：卵状长梨形(long pear-ovoid)；大小300至1000grs；果皮：浅绿色带斑点的外皮，成熟时黄色。白色、脆的、不甜果肉。对于食用，沙拉中绿色蔬菜。雌雄同株的。Syngenta Seeds品系，无呼吸跃变。
YUSOL：圆形至高圆形；大小600至1300grs；果皮：黄色、很少的网纹、具有浅绿色缝的外皮。绿白色、易化的、很少香气的、甜的、不酸的果肉。短周期，中等保存期限，不转色的低呼吸跃变型。雄全同株的Syngenta Seeds品系。
YUSAZ A：圆形至高圆形；大小600至1300grs；果皮：白灰色、很少的网纹、具有绿灰缝的外皮。绿色、特别脆的、很少香气的、甜酸果肉。短周期，中长保存期限，不转色的，低至中等的呼吸跃变。雄全同株的Syngenta Seeds品系。
YUSAZ B：圆形至高圆形；大小600至1300grs；果皮：黄色、带网纹的、具有绿-灰缝的外皮。绿色、特别脆的、很少香气的、甜酸果肉。长周期，长保存期限，不转色的，低呼吸跃变型。雄全同株的Syngenta Seeds品系。
MILENIUN-DENEV：圆形至高圆形；大小600至1500grs；果皮：黄色、带网纹的、不带缝的外皮。绿-白色、脆的、无呼吸跃变的、不酸的、甜果肉。长周期、不转色、长保存期限、无呼吸跃变。雄全同株的Syngenta Seeds杂种。
SOLAZ/1：圆形至高圆形；大小700至1400grs；果皮：黄色、很少网纹的、具有浅绿色缝的外皮。白色、脆的、很少香气的、甜酸果肉。短周期、长保存期限、不转色的、非常低的呼吸跃变。雄全同株的Syngenta Seeds品系。
SOLAZ/2：圆形至高圆形；大小600至1300grs；果皮：黄色、很少的网纹、具有浅绿色缝的外皮。白色、脆的、很少香气的、甜酸果肉。短周期、长保存期限、不转色、非常低的呼吸跃变。雄全同株的Syngenta Seeds品系。
MEHARI：来自Syngenta的Charentais型雌雄同株杂种。转色的，中等保存期限。
L53：来自Syngenta的Charentais型雄全同株品系。转色的、中等保存期限。小体积、圆扁外形。来源于var LUNASTAR，一种转色的Charentais型Nunhems雌雄同株杂种
TD：来自Syngenta的Charentais型雌雄同株品系。不转色的、长保存期限。来源于var TORNADO，一种来自Limagrain的不转色Charentais型雌雄同株杂种。
本文引用的所有参考文献均完整地并入本申请中作为参考。当本文中公开范围时，理解为落入这些范围内的所有单个数也是本发明的一部分。
以下实施例旨在举例说明本发明的应用。以下实施例不旨在完整地定义或以其它方式限制本发明的范围。
实施例
实施例1：制备香瓜提取物
从香瓜果实取大约400g的楔形物，除去种子和外皮(1cm厚度)。将该果肉切成小块，在warring搅拌器中搅拌30秒直到获得无结块的浆液。用Whatman纸过滤器过滤浆液，在Eppendorf离心机中10,000g离心该汁液，贮存在-20℃。
实施例2：确定柠檬酸含量
在实施例1中制备的样品与柠檬酸裂合酶(CL)温育以将柠檬酸转化成草酰乙酸和乙酸。在苹果酸脱氢酶(MDH)和乳酸脱氢酶(LDH)存在下，用NADH将草酰乙酸和其脱羧基的衍生物丙酮酸分别还原为L-苹果酸和L-乳酸。NADH的减少与样品中柠檬酸的量成比例，并可以在340nm下确定。在微量板中进行该试验。向微量滴定板加入20μl稀释的样品。加入含有NADH、MDH和LDH的200μl试验混合物，并在板中混合。使用含有CL的15μl起始溶液来启动反应。混合板子并持续进行1小时反应。使用微量滴定板读数器(配备有KCJunior软件和计算机的Biotek EL808读数器)，测定340nm吸光度。使用校正曲线以计算样品中的柠檬酸浓度。所述酶购自Roche Diagnostics。
实施例3：测定苹果酸含量
将实施例1制备的样品与L-苹果酸脱氢酶(MDH)和NAD+一起温育以将L-苹果酸转化为草酰乙酸。反应平衡朝向苹果酸侧，但是使用肼通过衍生化作用迫使反应平衡朝向草酰乙酸侧。在该试验中形成的NADH与样品中的苹果酸含量成比例。可以在340nm测定NADH作为对苹果酸的测量。
在微量板中进行该试验。向微量滴定板中加入20μl稀释的样品。通过加入200μl含有肼、MDH和NAD+的、pH10的试验混合物，起始反应。混合板子，并允许反应进行1小时。使用微量滴定板读数器(配备有KCJunior软件和计算机的Biotek EL808读数器)，测定340nm吸光度。使用校正曲线以计算样品中的苹果酸浓度。MDH购自RocheDiagnostics。
实施例4：测定葡萄糖、果糖和蔗糖含量
葡萄糖：
使用己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)测定葡萄糖。用己糖激酶磷酸化葡萄糖得到葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)，之后在NADP和G-6-PDH的帮助下脱水为6-磷酸葡糖酸(分别为反应1和2)。所形成的NADPH(H受体)的浓度与初始葡萄糖浓度定量相关，并在光谱的UV范围内于340nm进行测定。
果糖：
在相同试验中测定果糖。果糖通过己糖激酶被磷酸化成果糖-6-磷酸(F-6-P)。用磷酸葡萄糖异构酶(PGI)将F-6-P转化为G-6-P，之后按以上反应2中所述转化成6-PG。
蔗糖：
使用β-果糖苷酶将蔗糖转化成葡萄糖和果糖。根据以上所述的反应1和2测定形成的葡萄糖。
在微量滴定板中进行该测定，使用微量滴定板读数器(配备有数据收集软件和计算机的Biotek ELx808)，测定吸光度值。酶购自RocheDiagnostics。
实施例5：测定pH
使用通过标准溶液校正到pH4和pH7的CRIMSON GLP21 pHmeter，测定实施例1所述样品的pH。
实施例6：香瓜植物的生长条件
在不同条件下在不同的场所种植香瓜植物(见下表5)。表6显示了这些试验的数据，表7描述了在不同试验中的生长条件。
表5：试验描述
  位于西班牙的场所   作物类型   条件   培养介质
  TORREPACHECO T.St   EL EJIDO T.St.   藤蔓蜜蜂授粉   stacked手工授粉   露天田间   大棚   土壤   水培
  FA02PS   X   X   X   X
  SP03PV   X   X   X   X
  SP03PS   X   X   X   X
  SP03OF   X   X   X   X
  SU03PS   X   X   X   X
  FA03PS   X   X   X   X
FA：秋，SP：春，SU：夏，PS：大棚木桩支撑的作物，PV：大棚藤蔓作物
表6：试验日期
  试验日期
  播种   移植   第一次授粉   中间收获
  FA02PSSP03PVSP03PSSP03OFSU03PSFA03PS   8/1/20021/18/20032/18/20033/10/20037/24/20038/7/2003   8/19/20022/18/20033/18/20034/11/20038/8/20038/22/2003   9/1/20024/4/20034/18/20035/20/20038/20/20039/8/2003   10/30/20035/15/20035/30/20036/28/200310/6/200311/3/2003
此处，SP03OF1是指2003年6月20日收获的果实的分析数据。SP03OF2是指2003年7月4日收获的果实。
表7A：FA02PS的生长条件
场所：EL EJIDO T.St.
大棚
  2002年周数   29/30/31/32   33/34/35/36   37/38/39/40   41/42/43/44   45/46/47/48
  白天温度   31.5   31   28.6   22.4   18.4
  夜间温度   25   23.1   22.4   17.8   14.4
  24小时温度   28.8   27.4   25.5   19.8   18
  白天相对湿度％   51   47   55   78   84
  夜间相对湿度％   73   72   78   89   90
  24小时相对湿度％   60   69   66   84   88
以1月1日起开始进行周的编号，29周是该年的第29周。
表7B：SP03PV、SP03PS、SU03PS、FA03PS的生长条件
场所：EL EJIDO T.St.，大棚
  2003年周数   1/2/3/4   5/6/7/8   9/10/11/12   13/14/15/16   17/18/19/20   21/22/23/24   25/26/27/28   29/30/31/32
  白天温度   15.9   16.7   25.1   26.9   26.9   31.2   37.4   37.1
  夜间温度   10.4   11.1   17.9   20.3   21.9   25.6   28.6   28.5
  24小时温度   12.6   13.5   21.4   23.8   24.8   28.9   33.9   33.5
  白天相对湿度％   71   59   46   53   63   54   38   32
  夜间相对湿度％   91   83   64   68   73   67   57   46
  24小时相对湿度％   83   73   55   61   67   59   45   38
场所：EL EJIDO T.St.，大棚
  2003年周数   33/34/35/36   37/38/39/40   41/42/43/44   45/46/47/48
  白天温度   30.9   25.3   20.8   19
  夜间温度   25.1   21.8   17.9   15
  24小时温度   28.3   23.6   19.2   16.7
  白天相对湿度％   60   82   89   86
  夜间相对湿度％   80   89   96   99
  24小时相对湿度％   69   86   92   93
表7C：SP03OF的生长条件
TORREPACHECO T.St.
露天田间
  2003年周数   9/10/11/12   13/14/15/16   17/18/19/20   21/22/23/24   25/26/27/28
  最高温度   28.0   36.0   34.0   33.0   37.0
  平均最高温度   19.9   26.2   27.0   28.0   34.5
  中间温度   14.3   20.1   19.9   22.1   27.1
  平均最低温度   8.8   14.0   12.7   16.2   19.7
  最低温度   5.0   8.0   9.0   12.0   17.0
实施例7：向原种系转移低pH性状
1.IND-35系与所选的一组Syngenta原种系在EI EJIDO试验站(西班牙)杂交。
所选的品系是：
a)YUCA-15：选择的原因是在中长周期(从结果至果实成熟的时间)中高的糖积累潜力。YUCA是通过5代自花授粉获得的专有SyngentaSeeds品系。它是日本Rocky型香瓜，不转色以及具有非常低的呼吸跃变。
b)OGEL-17：选择的原因是中短周期(从结果至果实成熟的时间)和中高的糖积累潜力。该品系是通过10代的自花授粉从通过商业杂种GUSTAL和RADICAL(Syngenta Seeds)亲本系之间的杂交而育种产生的F1获得的专有Syngenta Seeds品系。它是GALIA型香瓜，转色并具有中等的呼吸跃变。
F1杂种产生自花授粉的F2后代。基于低pH和糖选择F2果实(表8A)。
2.种植两F2代并与新选择的一组Syngenta原种系逐株植物地进行交叉授粉：
a)：IND35/YUCA-15F2代与MG.755-68(755)杂交，MG.755-68(755)是一种通过5代自花授粉从商业杂种BETULO(Syngenta Seeds)获得的专有Syngenta Seeds品系。它是GALIA转色的中等呼吸跃变型香瓜，由于绿色果肉、高糖、短周期及相对高的柠檬酸含量而被选择用于该目的。
b)IND35/OGEL-17F2代与SEN19C8(SN8)杂交。该品系是专有Syngenta Seeds品系，不转色的，非常低的呼吸跃变，通过商业杂种EARLS SEINU(Yae Nogey Seeds Co.Isahaya，Nagasaki，日本)的6代自花授粉获得。它是日本Rocky型香瓜，由于高糖和具有网纹(netting)而被选用于该目的。
在这些群体中，验证了低pH性状的单显性遗传调节，并且糖积累和所述低pH之间不存在连锁(表3)。从每一群体(各150株植物)，选择包括较高R.I.Brix程度和最低pH的重组体。收集交叉授粉的种子后代。从F2群体a)选择的杂交后代包括标识为755YUCIND-19、755YUCIND-49、755YUCIND-75的植物。
从F2群体b)选择的杂交后代包括标识为SN8OGLIND-03的植物。
755YUCIND系因蔗糖的积累而被选择。SN8OGLIND因为柠檬酸的积累而被选择。种植这些杂交后代，并产生了pH、糖和有机酸含量的数据。选择组合了高糖、低pH和高柠檬酸含量的品系。表8B显示所选植物的分析结果。
表8：中间物的分析
表8A：对在F2中所选植物的分析数据摘录(1998年秋Agadir)
  雌性   pH   BRIX   基因型
  YUCA-15.071.xIND35-1)-49.YUCA-15.071.xIND35-1)-75.YUCA-15.071.xIND35-1)-19.OGEL-17.974.xIND35-1)-03.   4.304.104.054.57   13.012.410.411.8   AaAaAAAa
表8B：后代B1F1的分析数据摘录(El Ejido 1999年春)
雄性 雌性   pH  柠檬酸(mg/100g)  苹果酸(mg/100g)   葡萄糖(g/100g)   果糖(g/100g)   蔗糖(g/100g)   总糖(g/100g)   BrixR.I.   果实数
SN8755755755 OGLIND-03.YUCIND-49.YUCIND-75.YUCIND-19.   4.74.54.75.05.04.85.05.45.35.54.75.1  773930809540619535549564568624648569  524856453967385240445344   2.31.82.02.61.72.02.52.62.31.51.91.7   2.42.02.22.72.42.52.72.72.52.22.02.1   1.74.42.41.73.31.82.72.22.64.53.73.3   6.38.26.66.97.46.37.97.47.58.27.67.2   10.012.010.210.011.59.912.011.010.712.013.011.1 5538
表8C：后代B2&3F1的分析数据摘录(El Ejido 1999年秋)
雄性 雌性   pH  柠檬酸(mg/100g)   葡萄糖(g/100g)   果糖(g/100g)   蔗糖(g/100g)   总糖(g/100g)   BrixR.I.   果实数
IOTYU755YUCA64 SN8   OGLIND-03.755   YUCIND-19.755)2 YUCIND-19.   4.74.75.14.7  8021036594771   2.52.32.52.3   2.52.42.62.4   2.93.72.42.4   7.98.47.47.1   12.514.512.012.6 9
表8D：后代B3F&2的分析数据摘录(Torrepacheco 2000年春)
雄性 雌性   pH  柠檬酸(mg/100g)   葡萄糖(g/100g)   果糖(g/100g)   蔗糖(g/100g)   总糖(g/100g)   BrixR.I.   果实数
  SOLAR-19SOLAR-19IOTYU   IOTYU  SN8   OGLIND-03.IOTYU  SN8   OGLIND-03.IOTYU  SN8   OGLIND-03.YUCA64 755)2 YUCIND-19 4.144.734.87 725523566 1.91.82.3 1.61.21.7 15.014.314.7 1333
表8E：分析数据摘录(El Ejido 2000年秋)
雄性 雌性   pH   柠檬酸(mg/100g)   葡萄糖(g/100g)   果糖(g/100g)   蔗糖(g/100g)   总糖(g/100g)   BrixR.I.   果实数
YUCA-40   SOLAZ4.4.4SOLAZ4.7.2.SOLAZ2.4.2SOLAZ2.4.5IOTYU)2 SN8   OGLIND-03.YUCA64  755)2 YUCIND-19.   4.324.444.524.434.484.79   573564494474453904   3.03.32.92.72.54.8   1.21.11.41.01.01.8   7.011.011.010.012.013.0
表8F：分析数据摘录(El Ejido 2001)
雄性 雌性   pH  柠檬酸(mg/100g)   葡萄糖(g/100g)   果糖(g/100g)   蔗糖(g/100g)   总糖(g/100g)   BrixR.I.   果实数
YUSOL27YUSOL27L53L53   SOLAZ1SOLAZ2YUCA-40 IOTY  SNC8OGLINU)2 D-03.YUCA-64 755)2 YUCIND-19.755     YUCIND-75.755     YUCIND-49.   4.594.634.65.054.804.68  940770741467718673   2.32.53.42.51.32.5   2.92.72.52.62.22.7   4.11.34.65.01.62.3   9.46.610.410.15.17.6   11.08.014.012.07.09.0
实施例8：性状渐渗入SOLAZ
在具有圆形和黄色带缝外皮及白色果肉的无呼吸跃变LSL香瓜中渐渗低pH性状。
1.选择的SN8OGLIND-103后代植物与IOTYU杂交，IOTYU是通过数代自花授粉从传统的开放授粉的日本品种Makuwauri EIJYU(Nantoseed Co.Ltd，Kashiwara，Nara，日本)获得的专有Syngenta Seeds系。由于无呼吸跃变、不转色、非常高的糖含量、高柠檬酸含量、和黄色果皮，而选择了该品系。
2.来自前面杂交的所选后代植物与SOLAR-19杂交，SOLAR-19是通过5代自花授粉从商业杂种SOLARKING F1(Nunhems Zaden BV，Haelen，Holland)获得的专有Syngenta Seeds品系。其是具有长保存期限的不转色Galia型香瓜，由于无呼吸跃变、非常高的糖含量、白色果肉、黄色带网纹的果皮而被选择用于该目的。
从这些杂交后代进行七轮自花授粉。使用pH、糖和有机酸含量的分析数据，在自花授粉后代上进行选择和固定(表8C和8D)。选择固定的品系后代：
A)SOLAZ1由于低pH和高糖积累的组合、白粉菌耐受性、和具有夏季生长适应性的植物而被选择(表8E和F)。
B)SOLAZ2由于低pH和中等糖积累的组合以及具有春季生长适应性的植物而被选择(表8E和F)。
3.使用SOLAZ1和SOLAZ2后代作为雄性授粉者与三种专有Syngenta Seeds品系YUSOL1，2和3杂交，这些Syngenta Seeds品系通过6代自花授粉从来自YUCA-15×SOLAR-48(两者是具有前述来源的专有Syngenta品系)杂交的繁殖杂种MD.997 F1获得。
获得了以下F1组合：
A)YUSOL1/SOLAZ1；当使用SOLAZ1作为YUSOL1品系的授粉者时；
B)YUSOL2/SOLAZ1；当使用SOLAZ1作为YUSOL2品系的授粉者时；
C)YUSOL3/SOLAZ2；当使用SOLAZ2作为YUSOL3品系的授粉者时。
表9和10显示这些所选植物和商业可获得的对照植物的分析结果。这些植物在实施例6所述条件下生长。显示每一实验中检测的果实数目(nr.Frt)。按实施例1-5所述进行测量。蔗糖(suc)、己糖(hex)和总糖的数值的单位是g每100g鲜重(fwt)。柠檬酸和苹果酸的数值单位是mg每100g鲜重(fwt)。
表9A
SOLAZ
  生长条件   nrfrt   sucavg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  SOLAZ/2平均SOLAZ/1SOLAZ/1SOLAZ/1平均   SP03PSFA03PSSP03PSFA03PSSP03PSFA03PSSP03PSFA03PS   637434354165771   2.411.431.922.901.852.011.802.352.022.16   1.700.810.861.180.220.740.881.36   3.415.124.273.935.883.825.323.796.144.81   0.340.360.420.330.200.270.370.35   5.826.556.196.837.735.837.136.148.156.97 1.341.601.251.65   1.423.582.501.353.171.902.951.613.042.34   4.64.74.64.64.54.64.54.84.54.6   0.20.20.00.10.10.10.20.1   605576590549663513591497664579   98868110753835886   42524716352052142827   14111333192611362425   21151517.511102424
  平均  SOLAZ/1和/2   114   2.10   4.68   6.77   4.6   582   27   22
表9B
YUSOL
  生长条件   nrfrt   sucavg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  YUSOL/1平均/1YUSOL/2平均/2YUSOL/3平均/3   SP03PSFA03PSSP03PSFA03PSSP03PSFA03PS   88166176511   4.255.014.632.583.923.255.046.235.63   1.180.580.621.430.67   4.775.335.054.997.306.144.045.644.84   0.820.850.810.810.47   9.0210.349.687.5711.219.399.0811.8710.47 1.160.54   1.121.071.091.940.541.240.800.910.85   6.06.36.15.85.95.96.16.26.2   0.30.10.10.20.2   295214255297344320225218221   8549839762   471330424X12911   61611101182421   101032110
  平均1，2，3   34   4.50   5.34   9.85   1.06   6.05   265   24   11
表10A：杂种SOLAZXYUSOL
生长条件   nrfrt   sucavg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  SOLAZ/1XYUSOL/1平均/1SOLAZ/1XYUSOL/2平均/2SOLAZ/2 XYUSOL/3平均/3   SP03PVSP03OF1SP03OF2SP03PSSP03OF1SP03OF2SP03PVSP03OF1SP03OF2   455143541244513   5.586.256.906.243.459.207.016.564.414.949.426.26   1.070.430.600.240.341.300.722.051.09   3.383.712.553.214.682.852.693.413.203.232.042.82   0.510.700.190.520.190.400.440.290.37   8.959.969.449.458.1412.059.709.977.618.1711.469.08   0.610.590.370.521.360.310.380.680.730.650.220.53   4.84.74.84.84.74.74.84.74.74.54.94.7   0.10.10.10.10.10.10.20.10.1   845794679773697800744747863789694782   872550322746628563   1124076479745423942100277109162   010148161919189366   212812741842
  平均   39   6.35   3.15   9.50   0.58   4.7   767   70   11
表10B：对照
  生长条件   nrfrt   sucavg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  SOLARF1平均MILENIUM   SP03PVFA03PSSP03PVSP03OF1SP03OF2   628453   5.283.504.392.992.295.15   0.930.051.230.153.82   2.526.554.544.944.163.30   0.320.170.670.100.99   7.8010.068.937.936.448.45   0.920.221.570.154.81   0.481.871.171.651.820.64   6.16.96.485.85.86.1   0.080.040.10.050.4   500109305546441345   5117252340   28X35XXX   1809000   260000
  平均   12   3.47   4.13   7.61   1.37   5.88   444   X   0
实施例9：性状渐渗入YUSAZ A
在具有圆形和黄色带缝外皮的绿色果肉无呼吸跃变LSL香瓜中渐渗低pH性状。
1.使用上述的MG.755-68系作为回归亲本，从755YUCIND-19进行直接回交。
来自前面杂交的所选后代植物与YUCA-64杂交，YUCA-64是通过5代自花授粉从与上述姐妹系相同的来源获得的专有Syngenta Seeds品系。
选择该品系的原因是：绿色果肉、不转色、无呼吸跃变，长保存期限、非常高的糖、非常脆的西瓜质地(texture)和缝。
从该杂交后代进行3轮自花授粉。使用pH、糖和有机酸含量的分析数据，在自花授粉后代上进行选择和固定(表8C-E)。
2.来自以上产生的后代的所选植物与YUSOL.3杂交，YUSOL.3是以上描述的一种专有Syngenta Seeds品系。该品系由于绿色果肉、较短的周期、非常高的糖、黄色果皮和缝而被选择。
从前面的杂交后代进行5轮自花授粉。选择和固定育种过程集中于具有短周期、绿色果肉、脆的西瓜质地和黄色果皮的自花授粉后代。使用pH、糖和有机酸含量的分析数据辅助进行选择和固定。由此选择和固定了YUSAZ A后代品系。
3.YUSAZ A系用作雄性授粉者与三种专有Syngenta Seeds品系，YUSOL1(上述的一种专有Syngenta Seeds系)，杂交。获得了F1组合：YUSOL 1/YUSAZ A。
表11显示这些所选植物的分析结果。这些植物在实施例6所述条件下生长。显示了每次实验中测试的果实数目(nr.Frt.)。按实施例1-5所述进行测量。蔗糖(suc)、己糖(hex)和总糖的数值单位是g每100g鲜重(fwt)。柠檬酸和苹果酸的数值单位是mg每100g鲜重(fwt)。
表11A：YUSAZ A
  生长条件   Nrfrt   sucavg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
 YUSAZ A/1平均YUSAZA/2平均   SP03PSFA02PSSU03PSFA03PSSP03PSFA02PSSU03PSFA03PS   163643682569552178   3.012.053.702.102.723.813.533.993.703.76   1.280.431.000.730.990.831.421.30   5.365.625.767.015.945.035.744.826.125.43   0.670.370.530.440.540.380.410.35   8.377.679.469.118.658.849.278.809.819.18 1.921.251.721.28   1.782.741.553.342.351.321.631.211.661.46   4.64.64.64.64.64.84.64.84.74.7   0.20.10.20.20.20.10.30.1   602655514558582586582543578572   901351158255708063   28212344291710161815   22312313223556333339   131181814151913
  平均YUSAZ A/1，/2   246   3.24   5.68   8.92   1.90   4.7   577   19   31
表11B：使用YUSAZ A的F1杂种
  生长条件   Nrfrt   sucavg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg  总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  F1杂种YUSAZA1/YUSOLF1杂种YUSAZ A2/YUSOL   SP03PSSP03PS   125   5.243.68   1.830.46   5.095.40   0.990.63   10.339.08   0.971.47   4.94.6   0.20.1   659724   11387   6935   1021   78
  平均   17   4.46   5.24   9.70   1.22   4.8   692   46   15
显示了YUSAZ A系的特征。YUSAZ A/1和YUSAZ A/2是两个姐妹品系。F1杂种由与YUSOL系的杂交产生。
实施例10：性状渐渗入YUSAZ B
在具有圆形和黄色带缝的果皮的绿色果肉无呼吸跃变LSL香瓜中渐渗低pH性状。
1.以上所述SN8OGLIND-103×IOTYU杂交后代的所选植物再次与IOTYU回交，IOTYU是不转色的，具有非常低的呼吸跃变和绿色果肉的香瓜(见表8D)。
来自之前杂交的所选后代植物与YUCA-40杂交，YUCA-40是一种通过5代自花授粉从与上述姐妹品系相同的来源获得的专有SyngentaSeeds品系(见表8E)。
选择该品系的原因是：绿色果肉、无呼吸跃变、长保存期限、非常高的糖、非常脆的西瓜质地和缝。
2.从前面的后代在一轮的自花授粉后产生的后代中选择的植物与YUSOL.3(前述一种专有Syngenta Seeds品系)杂交。选择该品系的原因是：绿色果肉、较短的周期、非常高的糖、黄色果皮和缝(见表8F)。
从前面的杂交后代开始进行5轮自花授粉。选择具有绿色果肉、脆西瓜质地、高柠檬酸含量和黄色果皮的自花授粉后代。
3.利用pH、糖和有机酸含量的分析数据辅助进行选择和固定。选择了固定的品系后代YUSAZ B(表12)。
YUSAZ B是“Citric+”香瓜植物的例子。
YUSAZ B系用作雄性授粉者与三种专有Syngenta Seeds品系，YUSOL1(上述的一种专有Syngenta Seeds系)，杂交。获得F1组合：YUSOL1/YUSAZ B(表12)。
植物在实施例6所述条件下生长。显示了每一实验中测试的果实数目(nr.Frt.)。按实施例1-5所述进行测量。蔗糖(Suc)、己糖(hex)和总糖的数值单位为g每100g鲜重(fwt)。柠檬酸和苹果酸的数值单位是mg每100g鲜重(fwt)。
表12：YUSAZ B
  生长条件   nrfrt   sucravg   sucstdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  YUSAZ B/O平均YUSAZ B/1平均   SP03PSFA02PSFA03PSSP03PSFA02PSFA03PS   7261561815   3.162.461.612.411.812.721.211.91   0.660.010.611.200.45   4.995.756.635.796.746.768.397.30   0.600.420.390.400.20   8.148.208.248.198.559.489.609.21 1.020.69   1.582.344.122.683.712.486.944.38   4.74.34.44.54.74.74.74.7   0.10.00.10.20.1   891848878872696739939791   731416913337   1711111339182628   7375787518413632   122571716
  平均YUSAZB/0，/1   30   2.16   6.54   8.70   3.53   4.6   832   16   53
显示了YUSAZ B系的特征。YUSAZ B/1和YUSAZ B/2是两个姐妹品系。F1杂种由与YUSOL的杂交获得。
实施例11：性状渐渗入MEHARI F1
在橙色果肉香瓜中渐渗低pH性状。所选择的靶是将商业杂种MEHARI(Syngenta Seeds)转化成两个低pH版本，其中一个具有较高的柠檬酸含量，而一个具有较低的柠檬酸含量。
1.使用L53系作为回归亲本(一种专有Syngenta Seeds)从755YUCIND-49和755YUCIND-75品系进行直接回交。L53是Charentais型香瓜，由于具有高糖、低柠檬酸含量而被选择用于该目的。L53是商业杂种MEHARI的亲本(见表8F)。
在回交过程中以及在每一杂交的后代中，选择具有低pH和较大或较小的酸感觉(较高或较低的柠檬酸含量)以及其它性状与回归亲本L53更接近的植物。
在第二次回交(第三次杂交)后，获得以下后代：
a)L53)3)×755YUCIND75-15/03/06/，因低pH和低柠檬酸含量而选择
b)L53)3+)×755YUCIND49-8/2/03/05/，因低pH和高柠檬酸含量而选择。
从这些杂交后代开始进行四轮自花授粉并再与L53进行一次回交。利用pH、糖和有机酸含量的分析数据辅助在自花授粉后代上进行的选择和固定育种过程。
2.选择了固定的品系后代：
A)从前面的群体a)选择的、固定了低柠檬酸含量和低pH、并且其它性状接近回归亲本L53的L53AZ A。
L53AZ A系是“Citric-”香瓜植物的例子。
B)从前面群体b)选择的、固定了低pH和高柠檬酸含量，并且其它性状接近回归亲本L53的L53AZ B。
还针对在低pH性状存在下浓郁的橙色果肉颜色，对植物进行了选择。必须特别选择果肉的橙色颜色强度，因为一般地差的橙色颜色强度倾向于与果肉中的低pH酸相关(见表4)。
使用后代品系L53AZ A和L53AZ B和L53系与MEHARI的另一亲本系杂交以分别获得MEHARI AZ A、MEHARI AZ B和MEHARI，目前商业F1。
所有这些产品、品系和杂交均在农艺试验中进行测试，从果实收集了分析数据(表13)。
植物在实施例6所述条件下生长。显示了每一实验中测试的果实数目(nr.Frt.)。按实施例1-5所述进行测量。蔗糖(suc)、己糖(hex)和总糖的数值单位为g每100g鲜重(fwt)。柠檬酸和苹果酸的数值单位是mg每100g鲜重(fwt)。
表13A：MEHARI，低pH/高pH
生长条件   nrfrt   sucavg   SucStdev   HexAvg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  雄性高pHcit/-(L53)平均/高雄性酸cit/-(L53AZ A)平均/低雄性酸(L53AZB)平均/低   FA02PSSP03PSFA03PSpH-SP03PSSU03PSFA03PSpH，citric-SP03PSSU03PSFA03PSpH，citric+   4361042448763123752   4.111.989.075.052.752.032.762.514.823.744.144.24   1.660.850.671.651.401.851.371.501.64   2.932.704.073.233.853.356.074.422.723.335.573.87   0.672.050.400.381.110.620.300.890.70   7.044.6813.148.296.615.828.827.097.547.089.718.11 1.061.832.191.641.76   0.711.360.451.401.652.200.560.891.35   6.96.26.96.75.04.84.84.95.04.74.74.8   0.200.20.30.30.40.10.10.2   655215992442484600509654670779701   261140168132158869574   111143339101211   114551099310915020015375646367   3826185164130232620
表13B：MEHARI的杂种，低pH/高pH
生长条件   nrfrt   sucavg   SucStdev   hexavg   hexstdev   总糖avg   总糖stdev   hex/sucinv活性   pHavg   pHstdev   柠檬酸avg   柠檬酸stdev   柠檬酸/苹果酸   苹果酸avg   苹果酸stdev
  F1 Hy杂种MEHARI高pH平均F1杂种低pH，citric-平均F1杂种低pH，citric+平均   SP03PSFA03PSSP03PSFA03PSSP03PSSP03OF1FA03PS   7714761373717   5.062.863.963.101.392.243.195.821.123.37   1.260.801.421.461.221.550.52   3.156.534.844.465.755.104.563.636.734.97   0.691.420.530.660.670.760.56   8.219.408.807.557.147.347.769.457.848.35 1.701.990.860.88   0.622.281.221.444.142.271.430.626.021.47   6.66.06.35.44.65.04.84.94.54.76   0.20.20.20.20.10.20.1   233316274447527487619718654663   7013785807857128   3956761220711   73345479767853379260   1023222723769
实施例12：感观分析
由专家组对本发明植物的果实进行感观分析。该专家组由12名成员组成，这些成员特别在描述香瓜质地、甜味和酸味方面进行了训练。在专家评定前进行了6项训练。本研究的训练计划是：
-训练1：阅读品味词典。在集会室(assembly room)中注释6种产品并进行讨论以查看哪一描述法难于获得一致意见。
-训练2：在感观分析实验室中注释2个产品+2次重复，以查看该专家组就个人而言如何评价这些描述法。
-训练3：将训练2的结果呈递给该专家组。在集会室中注释2个产品+2次重复，并进行讨论。在各单个小房间中分别进行2个产品的注释。
-训练4：以不同浓度的糖和酸溶液作为工作对象，以评价该专家组在这些描述法上的困难。将训练3的结果呈递给该专家组。在集会室中注释3个产品+1次重复，并进行讨论。在各单个小房间中分别进行3个产品的注释+1次重复。
-训练5：在集会室中注释4个产品，并在各单个小房间中注释2个产品+2次重复。这允许我们检查在该训练内品味员的可重复性。以酸溶液作为工作对象。
-训练6：在集会室中注释3个产品，在各单个小房间中注释2个产物+2次重复，以检查在该训练中品味员的可重复性。
在配备有独立小房间的空调感观分析实验室中进行感观分析。使用以下描述法以及有客观标准的10分评估级别(0至9)。
甜味：
定义：其涉及口中感觉到的甜味感觉。品评方式：咀嚼产品直到其消失。评估甜味的强度。注释：0＝不甜，9＝非常甜
酸味：
定义：其涉及口中感觉到的酸味感觉。品评方式：咀嚼产品直到其消失。评估酸味的强度。注释：0＝不酸，9＝非常酸。
准备方案
-在冷水中洗涤香瓜
-纵向切开香瓜
-除去瓤和种子
-每一半香瓜切成3份(纵切)
-除去3份的末端
-将每一份一切为2，以便一半香瓜有6份
产物的呈递
-根据呈递计划(Latin Square)以随机数字编码呈递样品，从而避免呈递顺序的影响。
-相继地提供产品。
表14和15显示在不同果实上进行的两种感观分析的结果。表14中，植物在三月初播种，并在四月初以藤蔓作物形式移植到受保护的露天田间(open protected field)。在7月初收获果实。表14A中，果实在10℃贮存7天至12天，之后在20℃贮存2天。在表14B中，果实在10℃贮存4天至8天，之后在20℃贮存2天。
表15中，植物在八月初播种，并在八月末以木桩撑扶的作物形式移植到大棚中。在11月初收获果实。果实在5℃贮存4天至8天，之后在20℃贮存3天。
对表中所示数目的果实进行感观分析。每一果实由12名合格的品味员进行检测。每个品系的酸味和甜味的数字是果实数目乘以12(因为有12名品味员)的平均值。表14和15也显示了对所测果实的pH和糖及有机酸的含量的测量结果。
表14A
  FRTnr   Brix pH   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g   酸味   甜味
  YUSOL/1 XSOLAZ/1 basicYUSAZAXYUSOLSOLAZ/2X YUSOL/3SOLAZ/1X YUSOL/1  AvgStd DevAvgStd DevAvgStd DevAvgStd Dev   1061010   11.72.112.70.513.51.413.20.8   6.240.304.790.094.680.174.580.22   1.20.31.10.21.50.51.80.6   7.22.37.70.67.91.07.21.2   2.10.32.00.22.00.32.40.4   10.61.910.70.511.31.011.40.6   309121808178323781637   4100018204132   0.50.32.10.73.60.53.11.2   5.61.05.40.54.70.34.70.6
  平均SOLAZXYUSOL 20 13.4 4.63 1.7 7.6 2.2 11.4 824 30 3.4 4.7
表14B
  FRTnr   Brix pH   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   总糖   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g   酸味   甜味
  雌性MehariX L53雌性MehariX L53 AZ A/1雌性MehariX L53 AZ A/2  AvgStd DevAvgStd DevAvgStd Dev   675   13.21.713.40.713.10.8   6.640.095.200.115.280.08   1.00.11.10.21.20.2   8.51.57.80.88.10.9   1.70.21.90.32.00.1   11.21.510.80.911.30.8   272546528758150   6332886910740   0.50.21.70.41.60.4   5.80.65.20.45.30.6
  AVG雌性MehariX L53 AZ A 12 13.3 5.24 1.2 8.0 2.0 11.1 617 98 1.7 5.3
  雌性MehariX L53 AZ B  AvgStd Dev   6   12.21.0   4.980.21   1.20.1   7.10.7   1.90.2   10.20.9   70878   10744   3.20.6   4.60.3
表15
  FRTnr   Brix   pH   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g   酸味   甜味
  SOLAZ/2X YUSOL/3SOLAZ/1X YUSOL/1  AvgStd DevAvgStd Dev   32   9.600.5311.000.85   4.530.064.740.09   1.970.362.140.35   2.980.304.040.00   2.470.363.050.09   7.410.949.240.44   71739574169   0000   3.780.842.541.20   4.310.555.630.06
  平均SOLAZX YUSOL 5 10.2 4.6 2.0 3.4 2.7 8.1 660 0 3.3 4.8
  YUSOLXYUSAZ A  AvgStd Dev   5   12.401.04   4.710.17   3.040.56   4.021.04   3.590.67   10.650.68   71342   1815   2.950.40   5.470.75
  FRTnr   Brix   pH   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g   酸味   甜味
  TD X L53AZ/AMehari雌性X L53 AZ/A  AvgStd DevAvgStd Dev   83   12.131.139.501.32   4.970.145.100.27   1.230.361.480.17   5.531.133.480.70   2.060.322.520.37   8.820.807.481.17   6968363279   74416225   2.560.852.170.43   5.720.395.500.55
实施例13：分子标记分析
从幼叶(15日龄幼苗)提取DNA。叶进行冷冻干燥并按照Dellaporta(Dellaporta 1983)的方法提取DNA。
PCR循环条件是：94℃变性15秒，之后54℃退火15秒、72℃延伸30秒，共40个循环。样品的DNA首先在94℃变性2分钟并在PCR之后72℃延伸2分钟。
PCR混合物包含1.65mM MgCl2、每种脱氧核糖核苷酸各60mM、1×Taq缓冲液、0.2单位Taq聚合酶、15-20ng模板DNA和非荧光引物各400nM或荧光标记的引物各200nM。荧光引物用6-FAM、NED或HEX标记。荧光PCR产物在ABI3700毛细管测序仪上分离，使用Applied Biosystem的Genescan和Genotyper片段分析软件测量产物大小。
非荧光PCR产物通过电泳在3％琼脂糖凝胶(Resophor，Eurobio)中以400V加上冷却系统进行分离。凝胶用溴化乙锭染色。使用三个标记，CMAT141(描述在Danin-Poleg等(2001)Theor.Appl.Genet.102：61-72和Danin-Poleg等(2002)Euphytica 125：373-384)和NE0585及NE1746。以下显示了用于这些标记的引物。
  正向引物(5′-3′)  反向引物(5′-3′)
CMAT141   AAGCACACCACCACCCGTAA(SEQ ID NO：1)  GTGAATGGTATGTTATCCTTG(SEQ ID NO：2)
NE0585   GTATCATGTCGGAGAAACG(SEQ ID NO：3)  CCTTTATCCCCACTTTTTC(SEQ ID NO：4)
NE1746   TTCTCCGATGTGTCCTCTC(SEQ ID NO：5)  GTCGCTTGGAATATATCGG(SEQ ID NO：6)
实施例14：分析种质
使用以上标记分析包含低pH性状的多份香瓜种质(accessions)。下表16中报道了扩增的片段的大小。所示大小(bp)不是绝对的而是相对于使用相同引物对检测到的其它大小的产物而言的。扩增片段的真实(确切)大小(例如通过测序确定的)可能与此处所示大小稍有不同(+/-1bp)。
表16
  CMAT141   NE0585   NE1746
  IND35-1.2.IND35-2.3.FAGOUS2：4-FAGOUS2：5-FAGOUS2：7-PI414723PI414724PI161375PI124112 168   173 175175175175 176176176 228228228   230 232 239 253253 121121 124124124124124   127 142142
实施例15：保留在植物上的果实的果实特征的演变
如在以上表15中的植物一样种植植物。在通过收获日期(HDT)和授粉日期(PDT)间的差异计算的不同成熟时间点(周期)收获果实。当在该周期中于特定时间点上果实的平均蔗糖含量达到每100g fwt 2.0g蔗糖时，以及使用其它成熟标志例如侧叶衰老，认为在该周期中的该时间点上达到成熟。表17显示了结果。
这些结果基于各单个果实的测量结果，可以理解一些果实可能由于损伤、异常发育或其它环境因素而产生偏离的数值。
表17
FRTnr PDT HDT 周期   果肉橙色1至5 pH Brix GLUg/100g SUCg/100g FRUg/100g HEXg/100g 总糖g/100g 柠檬酸mg/100g 苹果酸mg/100g
TD XL53 AZ A/1在大约周期40时达到成熟   1111111111111   17161416161414141414141414   37373740404040444444474747   20212324242626303030333333   1111122222223   5.094.834.944.554.664.884.444.364.474.704.374.594.85   5.05.44.64.85.06.57.06.77.07.06.57.013.6   1.61.81.41.41.21.91.42.31.72.32.01.22.3   0.00.00.00.00.00.00.60.40.50.20.01.03.9   1.41.71.41.21.71.42.72.02.22.41.61.71.9   2.63.92.72.82.92.34.13.23.94.73.22.94.0   3.03.52.82.62.93.34.74.64.35.03.63.98.2   169167128387387498852776528649730453876   4602732433141142551191787711174117199
    11111111     1417161614141414     5457575857575757     4040414243434343     33343444     5.024.834.794.754.965.245.065.00     13.011.514.013.312.714.012.512.5     1.01.51.82.11.71.41.01.3     7.34.56.95.25.58.45.95.7     2.22.42.12.01.92.31.82.2     3.23.93.93.14.33.72.83.4     10.58.410.99.29.012.18.79.2     663590890985893648623758     8915531104167404829
FRTnr PDT HDT 周期   果肉橙色1至5 pH Brix GLUg/100g SUCg/100g FRUg/100g HEXg/100g 总糖g/100g 柠檬酸mg/100g 苹果酸mg/100g
TDXL53 AZ A/2在大约周期38时达到成熟  1111111111111   17171417141417191417171716   37373740404044474451515151   20202323262627283034343435   1113232323333   4.454.534.434.554.484.444.364.334.654.434.774.914.31   4.85.24.17.06.06.24.98.96.010.111.010.58.6   1.71.91.01.31.31.91.52.81.02.91.91.32.2   0.10.00.00.80.30.00.00.01.31.03.55.30.9   1.82.01.11.71.81.91.32.72.42.92.51.92.1   3.55.02.33.03.21.52.84.43.45.94.43.25.0   3.53.92.13.83.53.82.95.54.86.87.98.55.3  307331572682590594640977715989836753970  319332323120136206295156561413196216
    1111111     16141417141414     54545458575758     38404041434344     3443454     4.764.805.034.994.975.205.06   14.114.815.014.512.014.016.0   2.32.10.81.60.81.21.6   5.57.09.08.05.86.38.5   2.22.11.82.11.71.71.7     3.84.02.63.62.52.93.4     10.111.311.611.68.29.211.9     983992843909635711986     164166575766450
  FRTnr PDT HDT 周期 颜色 PH Brix   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   HEXg/100g   总糖g/100g  柠檬酸mg/100g  苹果酸mg/100g
雌性MehariX L53 AZ A/1在大约周期36时达到成熟   111111111111111   211717141717171919191416171714   403740404444445151515053545451   202023262727273232323637373737   111222242335423   4.454.624.784.544.464.434.524.814.504.765.996.285.575.684.86   4.74.55.05.05.04.96.08.06.27.08.69.08.58.45.8   1.51.11.01.11.21.61.51.32.01.51.51.41.71.61.3   0.00.10.20.10.40.00.72.70.01.42.53.02.61.70.4   1.31.41.91.61.91.41.92.21.62.01.61.82.61.41.4   1.32.52.92.73.11.43.43.52.83.52.63.34.32.63.9 2.63.12.83.43.04.16.23.64.95.66.36.94.83.1  437295482397547561505575592465414297309339446  29298718138187187675105259166261276339
    111111     141716171717   515454575757   373738404040   445245   6.365.215.795.474.636.22   9.012.09.59.010.99.5   1.51.61.41.72.41.5   2.74.53.81.53.03.8     1.91.92.71.42.32.1     3.43.54.14.03.83.6     6.18.07.94.67.77.4     276532351410894360     16756264312111277
  FRTnr PDT HDT 周期 颜色 pH Brix   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   HEXg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g
雌性MehariX L53 AZ A/2在大约周期36时达到成熟   111111111111111   171717171717172117171717161614   373737444444445147475151515150   202020272727273030303434353536   111222232323442   4.845.255.314.524.496.694.474.634.534.604.684.505.354.775.84   4.54.74.34.95.05.36.09.57.46.56.59.910.511.77.1   0.71.61.41.70.81.52.12.62.41.52.02.71.72.21.4   0.30.00.00.00.30.00.01.40.11.00.21.54.03.20.6   1.71.51.21.41.70.81.72.42.12.31.92.52.92.21.5   2.52.52.62.42.53.47.54.34.03.82.64.94.63.72.6   2.73.12.63.12.82.43.86.44.64.84.16.78.67.63.5   368210200320423238437548672562713944723904224   333752881905160183150126449911832133168
    111111     141414141919     505050515757     363636373838     425433     6.095.956.515.135.604.62   7.08.39.510.013.112.2     1.11.61.71.52.33.0     2.11.72.93.84.13.7     2.11.82.72.42.22.7     3.23.74.43.93.35.2     5.35.17.37.78.69.4     2732793365996131011     2012352027715063
  FRTnr PDT HDT 周期 pH Brix   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   HEXg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g
SOLAZ/2X YUSOL/3在大约周期41时达到成熟   x2x2x21x2x2x2x21x1x21xx2x2x2   9999991099999999   373737373737404040404044444444   282828282828303131313135353535   4.234.304.214.534.194.374.184.214.254.374.154.214.704.184.17   5.05.15.96.05.34.65.56.47.26.85.58.67.07.37.3   1.61.82.42.31.61.42.02.12.92.31.92.82.12.32.1   0.10.00.01.00.10.00.00.00.00.30.00.01.70.00.0   1.71.92.02.61.81.41.92.12.92.82.03.33.02.82.7   4.04.83.74.83.92.93.23.54.85.14.76.45.05.35.8   3.33.74.45.93.52.83.94.15.85.43.96.26.75.14.8   664496674675703509545795723667728990706984992   116123771021232649471186551463403228
    x211x2x21x2x2x2x2x2x21x2x2x21     99999999999999999     4444474747474750505050505051545454   3535383838383841414141414142454545     4.064.344.494.244.214.604.214.444.694.764.774.564.514.554.284.234.44   6.57.210.29.010.59.210.39.210.510.210.412.29.410.512.410.812.9   2.31.92.42.63.11.72.92.21.81.82.72.42.7   0.00.53.30.60.92.71.22.03.62.93.33.04.7     2.32.32.83.13.42.53.02.42.82.12.62.62.4   4.94.25.26.77.34.26.24.74.63.95.04.73.6     4.64.78.56.27.56.97.16.68.26.98.78.09.8     99073676178283469510527018038536379436948879821026997     6714015410532466371000486152
 FRTnr PDT HDT 周期 pH Brix   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   HEXg/100g   总糖g/100g  柠檬酸mg/100g  苹果酸mg/100g
SOLAZ/1X YUSOL/1在大约周期41时达到成熟  x211111111111111  10109999999999999   373737374040404444444447474747   272728283131313535353538383838   4.364.844.514.494.424.384.254.534.244.444.384.424.534.744.50   4.84.04.55.46.25.05.87.08.77.68.610.48.08.510.1   1.71.42.12.11.81.61.92.22.72.02.31.82.02.22.3   0.00.40.01.10.40.10.01.60.50.81.42.41.81.61.8   1.72.12.12.42.82.02.13.23.02.63.12.63.02.72.5   3.73.54.24.54.63.63.65.45.34.65.54.44.95.43.4   3.33.94.25.65.13.73.97.06.15.46.96.96.76.56.7  526428476524598546642654977498640733540600568  1362786556294910700600315
    111x2111     9999999   50505051515454   41414142424545   4.454.804.674.424.754.404.47     10.210.411.611.18.611.28.5     1.71.92.42.21.8     2.64.04.02.51.3     2.23.03.12.41.9   4.04.95.54.43.8     6.68.99.57.15.1     676455694796767745705     8002881911
  FRTnr PDT HDT 周期 pH Brix   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   HEXg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g  苹果酸mg/100g
YUSAZ A/1XYUSOL/1在大约周期42时达到成熟   1x2x2x211x21x2x211x21x2   141099199999999999   373737374737404040444444444444   252728282828313131353535353535   5.224.384.674.375.234.654.664.504.324.394.624.394.414.775.85   7.15.95.56.25.87.27.07.45.97.39.28.48.89.68.0   2.52.12.02.11.92.82.02.32.22.72.53.03.02.71.9   0.00.00.00.00.60.00.40.10.00.31.20.00.31.63.1   2.61.82.72.03.13.42.82.82.12.43.03.53.03.43.4   5.16.74.74.05.06.24.85.14.04.25.56.75.46.25.3   5.13.94.74.15.66.25.25.24.35.46.76.66.37.88.4   284513530695410594490635495579689685702736387  406146931040221236102550552740
    x2x21x21x2x2x2x21x211x     999999999101099     47474147515151515153535454     38383838424242424243434545     4.464.856.464.754.874.454.574.414.736.246.184.584.54     8.911.49.49.212.411.414.411.613.811.010.513.513.2     3.13.91.32.82.82.62.72.52.72.5   0.32.43.61.44.33.93.05.34.84.2     3.64.72.83.13.13.22.63.52.82.3     6.98.64.15.95.95.85.16.04.84.4   7.111.07.87.310.29.78.311.310.49.0     653776274525696678791730679410350780751     37170019114752047486234
  FRTnr PDT HDT 周期 pH Brix   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   HEXg/100g   总糖g/100g   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g
YUSAZA/2X YUSOL/3在大约周期38至41时达到成熟   x2x21x211x2x2x2x2111x21   1010999109999101017109   373737373740404040404444514444   272728282830313131313434343435   4.554.525.464.404.674.714.514.624.584.484.764.694.724.484.66   7.07.68.36.19.49.56.67.77.68.311.213.110.112.113.0   2.72.82.22.52.93.12.43.02.72.93.43.13.43.3   0.00.01.10.02.51.30.00.00.00.01.03.12.04.2   3.13.12.92.54.13.32.73.23.23.44.03.94.03.5   5.76.04.94.47.06.45.26.15.22.67.29.76.76.8   5.85.96.25.09.57.75.16.16.06.38.510.09.411.0   543640457630618610460569655721844825612683733   2464166643054645041487490226442
    11x211x2x2111x2x2x21  9999910999119999  4747474747515151515453545454  3838383838414242424344454545  5.224.504.894.574.664.674.744.975.604.944.934.804.535.00     14.413.212.414.215.215.213.615.415.215.815.115.314.115.8     2.63.12.23.32.82.12.02.92.32.72.8     5.94.14.14.35.77.08.66.07.45.26.3     3.03.13.23.32.92.62.32.82.72.82.5     5.65.86.76.24.84.74.38.15.15.24.8     11.410.39.510.911.411.712.911.712.410.811.6     514899696725774818754507462680881831876641     8780216614144651976622110364188
实施例16：收获后果实特征的演变
A.收获试验SP 03OF植物的果实(见表6和7C)，12℃贮存1周之后20℃贮存3天或者12℃贮存6周之后20℃贮存2天。贮存后测量果实的特征并显示在表18中。
B.如以上表14中的植物一样种植植物。收获果实，12℃贮存1周之后20℃贮存3天。贮存后测量果实的特征并显示在表19中。
表18
收获后方案 Hv   FRTNr Brix pH   Glug/100g   Sucg/100g   Frug/100g   Hexg/100g   总糖   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g
Millenium  1w12°+3d20°6w12°+2d20°   AvgStdevAvgStdev   52   8.40.310.10.6   5.750.055.860.03   2.00.11.50.3   2.30.23.90.9   2.20.02.20.2   4.20.13.70.5   6.40.27.60.4   441254874   -84
YUSOL/1&2X SOLAZ/1  1w12°+3d20°6w12°+2d20°   AvgStdevAvgStdev   42   12.00.713.20.5   4.710.054.770.07   1.00.10.50.1   6.70.78.10.6   2.10.11.80.0   3.10.22.30.1   9.80.710.40.5   8023380836   -16
  YUSOL/3X SOLAZ/1  6w12°+2d20°   AvgStdev   4   11.90.9   4.890.07   1.10.4   6.21.6   1.90.3   3.00.7   9.21.1   63872
收获后方案 Hv   FRTNr Brix pH   Glug/100g   Sucg/100g   Frug/100g   Hexg/100g   总糖   柠檬酸mg/100g   苹果酸mg/100g
YUSOL/1X SOLAZ/2  1w12°+3d20°6w12°+2d20°   AvgStdevAvgStdev   94   9.51.49.51.4   4.460.124.650.17   1.00.21.10.2   4.51.53.71.4   1.90.22.00.3   2.90.43.10.5   7.41.26.71.0   7738566970   -55
YUSOL/2XSOLAZ/2  1w12°+3d20°6w12°+2d20°   AvgStdevAvgStdev   52   10.12.310.60.7   4.530.134.700.02   1.10.21.10.1   4.92.35.50.6   2.10.22.00.1   3.20.33.10.2   8.22.18.60.4   7899569751   3
YUSOL/3X SOLAZ/2  1w12°+3d20°6w12°+2d20°   AvgStdevAvgStdev   126   10.40.811.00.8   4.500.094.850.14   0.90.20.60.3   5.80.96.21.1   1.80.11.50.3   2.70.32.10.6   8.40.88.30.7   7773765646   -46
表19
  FRTNr Brix pH   GLUg/100g   SUCg/100g   FRUg/100g   总糖g/100g  柠檬酸mg/100g  苹果酸mg/100g   柠檬酸/苹果酸比率
  SOLAZ/2X YUSOL/3SOLAZ/1X YUSOL/1YUSOL/1XSOLAZ/1b asicMEHARY雌性MEHARIX L53 AZ/ATD x L53AZ/A   515151105949   13.113.813.414.812.413.9   4.754.716.146.515.455.16   1.41.81.40.50.80.6   7.27.98.010.47.49.0   2.02.32.31.31.41.3   10.612.011.712.29.710.9  771778354289491579  2321147321169   3553314211
                            序列表
<110>Syngenta Participations AG
<120>新的香瓜植物
<130>70317 WOPCT
<140>
<141>
<150>US 60/535,631
<151>2004-01-09
<150>ES 200400473
<151>2004-02-27
<160>6
<170>PatentIn Ver.2.1
<210>1
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：寡核苷酸
<400>1
aagcacacca ccacccgtaa
<210>2
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：寡核苷酸
<400>2
gtgaatggta tgttatcctt g
<210>3
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：寡核苷酸
<400>3
gtatcatgtc ggagaaacg
<210>4
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：寡核苷酸
<400>4
cctttatccc cactttttc
<210>5
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：寡核苷酸
<400>5
ttctccgatg tgtcctctc
<210>6
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述：寡核苷酸
<400>6
gtcgcttgga atatatcgg

Claims (49)

1.能够产生果实的香瓜(Cucumis melo)植物，其中所述果实在成熟时包含：
a)每100g fwt至少大约400mg柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt至少大约5.0g糖。
2.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实中柠檬酸与苹果酸的比率大于4.4。
3.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实包含每100g fwt少于大约85mg的苹果酸。
4.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实包含大约1.6至大约3.8的平均酸味和大约4.3至大约5.8的平均甜味。
5.权利要求4的香瓜植物，其中所述果实包含大约2.5至大约3.8的平均酸味和大约4.3至大约5.6的平均甜味。
6.权利要求4的香瓜植物，其中所述果实包含大约1.6至大约3.0的平均酸味和大约5.2至大约5.8的平均甜味。
7.权利要求1的香瓜植物，其中使用标记CMAT141的引物，从所述植物的DNA扩增出大约168bp至大约178bp的DNA片段。
8.权利要求7的香瓜植物，其中所述DNA片段长168bp、173bp、169bp、172bp或178bp。
9.权利要求1的香瓜植物，其中使用标记NE0585的引物，从所述植物的DNA扩增出大约218bp至大约253bp的DNA片段。
10.权利要求9的香瓜植物，其中所述DNA片段长230bp、232bp、218bp、229bp、234bp或239bp。
11.权利要求1的香瓜植物，其中使用标记NE1746的引物，从所述植物的DNA扩增出大约121bp至大约145bp的DNA片段。
12.权利要求11的香瓜植物，其中所述DNA片段长124bp、127bp、133bp、142bp或145bp。
13.权利要求1的香瓜植物，其中在所述果实达到成熟后当果实保留于植物上时，所述果实的pH持续至少2天保持在大约4.2至大约5.6的所述范围内。
14.权利要求1的香瓜植物，其中当果实被收获并于20℃贮存至少5天或者于8-12℃贮存至少7天、然后于20℃贮存3天时，所述果实的pH保持在大约4.2至大约5.6的所述范围内。
15.权利要求1的香瓜植物，其中在所述果实达到成熟后当所述果实保留在植物上时，所述果实的柠檬酸持续至少2天保持等于或大于每100g fwt大约400mg。
16.权利要求1的香瓜植物，其中当果实被收获并于20℃贮存至少5天或者于8-12℃贮存至少7天、然后于20℃贮存3天时，所述果实的柠檬酸保持等于或大于每100g fwt大约400mg。
17.权利要求2的香瓜植物，其中在所述果实达到成熟后当所述果实保留在植物上时，所述果实的柠檬酸与苹果酸的比率持续至少2天保持大于4.4。
18.权利要求2的香瓜植物，其中当果实被收获并于20℃贮存至少5天或者于8-12℃贮存至少7天、然后于20℃贮存3天时，所述果实的柠檬酸与苹果酸的比率保持大于4.4。
19.权利要求1的香瓜植物，其中所述植物能够产生低转色或不转色的果实。
20.权利要求1的香瓜植物，其中所述植物能够产生低呼吸跃变或无呼吸跃变的果实。
21.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实的果肉是橙色、白色、绿色或黄色。
22.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实的中果皮占所述果实总鲜重的50％以上。
23.权利要求1的香瓜植物，其中所述香瓜植物包含低pH基因。
24.权利要求1的香瓜植物，其中所述低pH性状能够从IND-35系植物或所述IND-35系的后代获得，IND-35系的代表性种子以保藏号NCIMB 41202保藏。
25.权利要求24的香瓜植物，其中所述低pH基因在所述植物中是纯合的或杂合的。
26.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约600mg至大约1,200mg柠檬酸；
b)大约4.2至大约5.1的pH；
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
27.权利要求1的香瓜植物，其中所述果实在成熟时包含：
a)每100g fwt大约400mg至大约650mg柠檬酸；
b)大约4.6至大约5.6的pH；和
c)每100g fwt大约5.0g至大约15.0g糖。
28.权利要求1-27之任一项的香瓜植物，其中所述植物是自交系。
29.权利要求1-27之任一项的香瓜植物，其中所述植物是杂种。
30.权利要求1-27之任一项的香瓜植物，其中所述植物是双单倍体。
31.权利要求1-30之任一项的香瓜植物的种子。
32.权利要求1-30之任一项的香瓜植物的果实。
33.权利要求1-30之任一项的香瓜植物的果肉。
34.权利要求32的香瓜植物的果实在鲜切产品中的用途。
35.权利要求33的香瓜植物的果肉在鲜切产品中的用途。
36.增加第一香瓜(Cucumis melo)植物的果实的柠檬酸含量的方法，包括：
a)获得第一香瓜植物；
b)将所述第一香瓜植物与包含低pH性状的第二香瓜植物杂交；
c)获得后代香瓜植物；
d)测定所述后代香瓜植物的果实的pH；和
e)选择与所述第一香瓜植物的果实相比具有增加的柠檬酸含量和较低的pH的所述后代香瓜植物的果实。
37.权利要求36的方法，其中与所述第一香瓜植物的果实相比，所述后代香瓜植物果实的柠檬酸含量增加大约1.5至大约3倍，而且所述果实的pH降低大约1至大约2.5个pH单位。
38.权利要求36的方法，其中所述第二香瓜植物是IND-35系的植物或所述IND-35系的后代，其中IND-35系的代表性种子以保藏号NCIMB41202保藏。
39.能够产生果实的香瓜植物，其中所述果实在成熟时包含平均大约1.6至大约3.8的酸味和平均大约4.3至大约5.8的甜味。
40.权利要求39的香瓜植物，其中所述果实在成熟时包含平均大约2.5至大约3.8的酸味和平均大约4.3至大约5.6的甜味。
41.权利要求39的香瓜植物，其中所述果实在成熟时包含平均大约1.6至大约3.0的酸味和平均大约5.2至大约5.8的甜味。
42.权利要求39的香瓜植物，其中所述果实具有大约4.2至大约5.6的pH。
43.权利要求39的植物，其中所述果实具有每100g fwt至少大约400mg的柠檬酸含量。
44.权利要求39的植物，其中所述果实具有每100g fwt至少大约5.0g糖的糖含量。
45.权利要求40-44之任一项的香瓜植物的种子。
46.权利要求40-44之任一项的香瓜植物的果实。
47.权利要求40-44之任一项的香瓜植物的果肉。
48.权利要求46的香瓜植物的果实在鲜切产品中的用途。
49.权利要求47的香瓜植物的果肉在鲜切产品中的用途。
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