CN1919274A - 一种治疗动物毛癣病的瑞香狼毒注射剂及制备方法 - Google Patents

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丁晓刚
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Abstract

本发明属于治疗皮肤病的中药技术领域，特别是治疗动物毛癣病的中药长效注射剂。本发明是提供一种一次施药疗效长达6个月以上的，治疗动物毛癣病的瑞香狼毒的水醇提取物注射剂，以及这种注射剂的制备方法。本注射剂的主要药物及配方是瑞香狼毒的水醇提取物用量2～10份、明胶用量3～8份、PEG－6000用量82～95份，瑞香狼毒的水醇提取物以瑞香狼毒为原料，经过水提、醇提、加入明胶和PEG－6000等赋型剂制成。兔、猫、小狗按每只一次注射2毫升，可长达8～10个月长效防止毛癣病，并且无毒性。临床给药非常简单，减少工作量，治疗效果好，适用性非常强。

Description

一种治疗动物毛癣病的瑞香狼毒注射剂及制备方法
                            技术领域
本发明属于治疗皮肤病的中药技术领域，特别是治疗动物毛癣病的中药长效注射剂。
                            背景技术
动物毛癣病是由毛癣菌属(Trichophyton)或小孢霉菌属(Microsporum)的小孢霉(Syzygites Ehrenberg或Sporodinia Lk.)的真菌(Fungus)感染皮肤表面及毛囊、毛干等附属结构所引起的人、畜、禽共患皮肤传染病。该病临床表现是感染皮肤呈不规则的块状或圆形结痂、脱毛、断毛及皮肤炎症。发病一般从皮肤较薄的嘴和眼周围开始。患病动物不停用嘴啃、脚抓，使其迅速扩大到嘴、脚、背及腹部皮肤，病变部出现淡黄色的圆形脓泡或结有灰白色圆形皮屑、灰白色或黄色痂屑，有时可见皮肤出现环行的覆盖珍珠灰(闪光鳞屑)的秃毛斑，痂块下皮肤呈鲜红色，部分有红色点状小疙瘩，皮肤粗糙，患部的结痂变硬，痂皮脱落后形成小溃疡，造成毛根和毛囊的破坏；继而脚爪上产生白色皮屑和血痂，食欲减退，动物迅速消瘦，重者衰竭死亡。目前常采用复方苯甲酸搽剂、克霉唑癣药水、达克宁霜、灰黄霉素等外用和部分抗生素添加剂进行预防和治疗，其有效率和治愈率较低。由于动物外用不方便，它们相互啃吃，极易产生中毒；内服的服用时间较长，效果不稳定，易产生动物体内残留和病菌耐药等现象，造成环境的污染，威胁人类的健康。运用现代生物、药理学技术从瑞香狼毒根部的水醇提取活性有效成分，制备长效注射剂应该是治疗动物毛癣病的较理想的给药方法，但瑞香狼毒这种具毒药用于注射剂，由于易产生中毒和刺激性强问题，而被人们视为从不用探索的技术领域。
                            发明内容
本发明是提供一种一次施药疗效长达6个月以上的，治疗动物毛癣病的瑞香狼毒的水醇提取物注射剂，以及这种注射剂的制备方法。
本发明关键解决了具毒植物提取物制成针剂的方法，并解决了注射时不产生严重刺激性和毒性的技术难题。克服了内服给药周期长的困扰，针对治疗毛癣真菌的长效注射剂；同时解决外用剂给药次数多，易反复的问题。
下述中，一种治疗动物毛癣病的瑞香狼毒注射剂，指本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒的水醇提取物注射剂，简称“本发明的注射剂”。
本发明所指的动物毛癣病是由毛癣菌属(Trichophyton)或小孢霉菌属(Microsporum)的小孢霉(Syzygites Ehrenberg或Sporodinia Lk.)的真菌(Fungus)感染皮肤表面及毛囊、毛干等附属结构所引起的人、畜、禽共患皮肤传染病。
本发明治疗动物毛癣病的瑞香狼毒的水醇提取物注射剂，主药包括瑞香狼毒的水醇提取物和赋型剂。主要的赋型剂是明胶和PEG-6000、戊二醛、亚硫酸氢钠或硫代硫酸钠等。其本发明的注射剂主药配方按全干基础的重量比为：
瑞香狼毒的水醇提取物2～10一份；明胶3～8份；PEG-6000占82～95份；
瑞香狼毒的水醇提取物：是用瑞香狼毒根为原料的水醇提取物；明胶：是医药用明胶；PEG-6000的化学名称为：医药用聚乙二醇-6000。本发明可用的配方如下表。
本发明的注射剂主药配方按全干基础的重量比可为如下具体配方：
  瑞香狼毒的水醇提取物   明胶   PEG-6000
  配方范围(份)   2～10   3～8   82～95
  配方1(份)   2   3   95
  配方2(份)   4   4   92
  配方3(份)   5   6   89
  配方4(份)   6   5   89
  配方5(份)   10   8   82
该病临床表现：感染皮肤呈不规则的块状或圆形结痂、脱毛、断毛及皮肤炎症。发病一般从皮肤较薄的嘴和眼周围开始。患病动物不停用嘴啃、脚抓，使其迅速扩大到嘴、脚、背及腹部皮肤，病变部出现淡黄色的圆形脓泡或结有灰白色圆形皮屑、灰白色或黄色痂屑，有时可见皮肤出现环行的覆盖珍珠灰(闪光鳞屑)的秃毛斑，痂块下皮肤呈鲜红色，部分有红色点状小疙瘩，皮肤粗糙，患部的结痂变硬，痂皮脱落后形成小溃疡，造成毛根和毛囊的破坏；继而脚爪上产生白色皮屑和血痂，食欲减退，动物迅速消瘦，重者衰竭死亡的病症。
各病症治疗后的症状评判和诊断标准：无效：病症无明显改善；有效：脓泡干缩，结痂脱落，但皮肤炎症现象及红色的小疙瘩仍在，灰白色的皮屑消失不好；痊愈：脓泡干缩，结痂脱落，红色的小疙瘩、灰白色的皮屑及皮肤炎症现象消失，皮肤呈粉红色，被毛开始恢复。
治疗动物毛癣病的长效注射剂的制备：
A、水提：取瑞香狼毒根，粉碎，加水浸泡1～2小时后，加热煮沸20～40分钟，过滤，收取滤液；重复2～4次加水，加热煮沸20～40分钟，过滤，收取滤液；合并多次收取的滤液，在摄氏50～80度环境中负压浓缩，至含水量为10～50份时获得膏状水浸提物为止；
B、醇提：把上述过滤的滤渣和获得的膏状水浸提物分别进行醇提。向滤渣和膏状水浸提物中分别加无水乙醇至乙醇浓度为40～60份，放置于摄氏50～80度的环境中18～24小时，取出过滤，在摄氏50～80度环境中负压浓缩，至膏状，成为膏状瑞香狼毒的水醇提取物备用；
C、干燥、制备瑞香狼毒的水醇提取物粉，在摄氏50～80度环境中烘干燥(负压干燥)，成含水量1～9份的不含乙醇的瑞香狼毒的水醇提取物粉；研磨成200目筛的微粉备用；
D、制备明胶加水溶液：将明胶浸泡于水中，充分溶胀后，加热至完全溶解；制备的明胶加水溶液浓度为3～5份；
E：粉胶混合：把瑞香狼毒的水醇提取物粉加入到明胶加水溶液中，在水浴摄氏50～55度环境中用超声振荡至充分分散，按全干基础计算，两者混合比为瑞香狼毒的水醇提取物粉∶明胶＝2～10份∶3～8份，获得瑞香狼毒的水醇提取物的明胶混悬液；
F、加入戊二醛：取得的瑞香狼毒的水醇提取物的明胶混悬液放入冰浴中，温度降至摄氏5～8度时加入25份浓度的戊二醛，(戊二醛的加入重量是瑞香狼毒的水醇提取物、明胶和PEG-6000三项总重量的2～8份)；置摄氏4～8度中24小时后，取出加水混匀，抽滤去除水，多次重复至无醛味并呈膏状后；摄氏30～45度坏境中减压干燥20～30小时，获得黄白色粉末状瑞香狼毒药物微球，干热灭菌；
G、加入抗氧化剂：按全干基础的重量比，瑞香狼毒的水醇提取物为2～10份、PEG-6000为82～95份的配方比例，同时加入占最终产品总重量的1～5％抗氧化剂亚硫酸氢钠或硫代硫酸纳，将步骤F获得的微球瑞香狼毒药物与PEG-6000溶液混合并分散混匀制得混悬状态的本发明的注射剂。
                        本发明的疗效试验：
瑞香狼毒是瑞香科植物，又名断肠草，红狼毒。其性味苦、平、辛、有毒，入肝、肺、脾三经，有逐水、祛痰、破积、杀虫之功效。发明中的水醇提取物有抑制和杀灭真菌的作用，是治疗动物毛癣有效、低毒长效注射剂。
疗效的评判和诊断标准：无效：病症无明显改善；有效：脓泡干缩，结痂脱落，但皮肤炎症现象及红色的小疙瘩仍在，灰白色的皮屑消失不好；痊愈：脓泡干缩，结痂脱落，红色的小疙瘩、灰白色的皮屑及皮肤炎症现象消失，皮肤呈粉红色，体毛逐渐恢复。
材料、方法与结果：
选购90只1月龄白色家兔，人工感染毛癣病(石膏状小孢子霉真菌)，实验：1组、注射生理盐水组(即空白对照组)；2组、皮下注射本发明最终产品瑞香狼毒注射剂，每只兔2毫升，只给一次药；3组、按每公斤体重15毫克灰黄霉素添加在饲料中，口服方式给药，连续给药20天(即阳性对照组)。停药后观察30天。结果见表1。
          表1全身用药疗效统计表*
  组别   病例数(只)   有效率％   痊愈率％
  空白对照组   15   0.0   0.0
  本发明药组   15   100.0   93.3
  灰黄霉素   15   100.0   66.7
本发明药组家兔的患病部位第3天开始见效，第三天患病的爪部、耳部有结痂皮肤痂屑软化脱落，第5天结痂消失，患病部位灰白色转变成粉红色的健康皮肤。未结痂的患病部位第3～4天就基本恢复。其有效率100％，治愈率93.3％，未见复发，未见毒性反应。
灰黄霉素组连续给药20天，给药的第6日患病爪部、耳部有结痂皮肤痂屑软化脱落，第8天结痂消失，患病部位山灰白色转变成粉红色的健康皮肤。未结痂的患病部位第11天就基本恢复。其有效率100％，治愈率66.7％。
                        本发明的毒性试验：
利用小鼠骨髓细胞微核试验对瑞香狼毒根部水醇提物的遗传毒理效应进行测定，为评价其对遗传物质的可能潜在危害提供实验依据。
试验材料与试验方法
昆明种小鼠，由四川省医学实验动物中心提供，批准号为鄂医动管字第19-007号；瑞香狼毒，采自四川省阿坝州红原县。1毫升水醇提取物相当于307mg药材；环磷酰胺(天津金世制药有限公司，批号020801)；新鲜小牛血清低温冰箱保存。
试验方法：
急性毒性试验：昆明种小鼠100只，体重18～20g，雌雄各半。腹腔注射浓度为307mg/毫升瑞香狼毒水提取物，连续观察，并记录动物中毒症状及死亡情况。计算出瑞香狼毒的半数致死量(LD50)为7.68g/kg(提取物干基)。
微核试验：小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验取健康昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重为20～25g。将小鼠随机分成五组：阴性对照，给予生理盐水；阳性对照，给予环磷酰胺50mg/kg腹腔注射；高、中、低剂量组分别以1/2LD50、1/5LD50、1/10LD50腹腔注射瑞香狼毒水醇提物。连续给药2次，给药前禁食4～6小时.两次给药间隔24小时，第二次给药后6小时处死小鼠，取出双铡股骨置于装有2毫升生理盐水的离心管中，夹碎，使其成为细胞悬液后。以1000r/分钟离心6分钟，弃去上清液，沉淀加入2滴已灭活的小牛血清，混匀涂片，晾干后用甲醇固定10分钟，用新鲜配置的Giemsa(姬姆萨)应用液染色30分钟。冲洗干净后晾干，在油镜下选择细胞分散好，形态完整，染色良好的部位，按一定顺序进行计数。计数嗜多染红细胞(PCE为蓝灰色，微核为紫红色，处于细胞质中)及带微核细胞的(MN-PCE)，微核的形态多数是单个圆形、边缘光滑整齐，偶有肾形、环形、马蹄形、椭圆形的微核出现；嗜色性与有核细胞的胞核相似；微核大小约占细胞1/20～1/4。共1000个，每只小鼠计数微核的千分率。
试验结果与分析：
本发明最终产品瑞香狼毒注射剂，达到1/2LD50剂量组对小鼠具有致突变作用。表现为微核出现率高，与阴性对照组相比较有显著性差异(P＜0.05)，但低剂量(1/10LD50)、中剂量(1/5LD50)组无致突变作用，与阴性对照组无显著性差异(P＞0.05)所有剂量组与阳性对照组间均有极显著性差异(P＜0.001)。阳性对照组用环磷酰胺，每公斤体重50毫克/腹腔注射。结果见表2。
           表3瑞香狼毒对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响
  组别   动物数   细胞数   微核细胞数   微核率
阴性对照组瑞香狼毒：1/2LD501/5LD501/10LD50阳性对照组 1212121212 1000×101000×101000×101000×101000×10 13804127382 1.38.04.12.738.2   2025
本发明的优点：本发明的注射剂具有施药时对动物体刺激性小，一次施药治疗时间长达6个月，对毛癣治疗效果优于灰黄霉素、克霉唑水等传统毛癣药物，克服了现有瑞香狼毒药物外用的不方便和内服易产生中毒、残留、耐药的缺点；本发明的注射剂治疗动物毛癣见效快，治愈效高于现有药品，对动物安全性好，药品的品质稳定，药品的性能稳定。本发明的注射剂最大优点是缓释性，对于一月龄的仔兔，仅一次注射2毫升，可防治兔毛癣病6个月，临床给药非常简单，减少工作量，治疗效果好，适用性非常强。
本发明的注射剂用于家兔，在獭兔、猫、狗身上的试验结果同于家兔，在人身上的试验也有良好的效果。
本发明的注射剂制作方法的优点是：制备工艺操作性强，不易程序混淆和药品混合现象，各种药品性质稳定，制备过程中不会出现挥发、腐败等损坏品质的现象。
                        具体实施例
本发明的注射剂主药配方按全干基础的重量比可为如下具体配方：
  瑞香狼毒的水醇提取物   明胶   PEG-6000
  配方范围(份)   2～10   3～8   82～95
  配方1(份)治A病   2   3   95
  配方2(份)治B病   4   4   92
  配方3(份)治C病   5   6   89
  配方4(份)治D病   6   5   89
配方5(份)治E病 10 8 82
实施例1、治疗家兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂
1、治疗家兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂，按全干基础的重量比，
瑞香狼毒的水醇提取物    2份
明胶                    3份
PEG-6000                95份
上述治疗家兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂的制备方法：
A、水提：取瑞香狼毒根，粉碎，加水浸泡1～2小时后，加热煮沸20～40分钟，过滤，收取滤液；重复2～4次加水，加热煮沸20～40分钟，过滤，收取滤液；合并多次收取的滤液，在摄氏50～80度环境中负压浓缩，至含水量为10～50份时获得膏状水浸提物为止；
B、醇提：向膏状水浸提物中加无水乙醇至乙醇浓度为40～60份停止加无水乙醇，放置于摄氏50～80度的环境中4～8小时，取出过滤，在摄氏50～80度环境中负压浓缩，至膏状，成为膏状瑞香狼毒的水醇提取物备用；
C、干燥、制备瑞香狼毒的水醇提取物粉，在摄氏50～80度环境中烘干燥，成含水量1～15份的不含乙醇的瑞香狼毒的水醇提取物粉；研磨成微粉，取过200目筛的微粉备用；
D、制备明胶加水溶液：将明胶浸泡于水中，充分溶胀后，制备的明胶加水溶液浓度为3～5份；
E：粉胶混合：把瑞香狼毒的水醇提取物粉加入到明胶加水溶液中，在水浴摄氏50～55度环境中用超声振荡至充分分散，按全干基础计算，两者混合比为瑞香狼毒的水醇提取物粉∶明胶＝2～10份∶3～8份，获得瑞香狼毒的水醇提取物的明胶混悬液；
F、加入戊二醛：取得的瑞香狼毒的水醇提取物的明胶混悬液放入冰浴中，温度降至摄氏5～8度时加入25份浓度的戊二醛，戊二醛的加入重量是瑞香狼毒的水醇提取物、明胶和PEG-6000三项总重量的2～8份；再放入摄氏4～8度中24小时后，取出加水混匀，抽滤去除水，多次重复至无醛味并呈膏状后；摄氏30～45度环境中减压干燥20～30小时，获得黄白色粉末状微球瑞香狼毒药物，干热灭菌；
G、加入抗氧化剂：氧化剂用PEG-6000，按全干基础的重量比，瑞香狼毒的水醇提取物为2～10份、PEG-6000为82～95份的配方比例，将步骤F获得的微球瑞香狼毒药物与PEG-6000溶液混合并分散混匀制得混悬状态的本发明的注射剂。
上述治疗家兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂用药量为：按每只一月龄幼兔或成年兔都注射上述步骤G获得的本发明的注射剂2毫升，可防止毛癣8-10个月。
实施例2、治疗獭兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂
治疗獭兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂，按全干基础的重量比，
瑞香狼毒的水醇提取物    4份
明胶                    4份
PEG-6000                92份
上述治疗獭兔毛癣病的瑞香狼毒注射剂用药量为：按每只一月龄幼獭兔或成年獭兔都注射本发明的注射剂2毫升，可防止毛癣8～10个月。本实施例的本发明的注射剂的制备方法同于实施例1。
实施例3、治疗猫毛癣病的瑞香狼毒注射剂
治疗猫毛癣病的瑞香狼毒注射剂，按全干基础的重量比，
瑞香狼毒的水醇提取物    5份
明胶                    6份
PEG-6000                89份
上述治疗猫毛癣病的瑞香狼毒注射剂用药量为：按每只一月龄幼猫或成年猫都注射本发明的注射剂2毫升，可防止毛癣8～10个月。本实施例的本发明的注射剂的制备方法同于实施例1。
实施例4、治疗小狗毛癣病的瑞香狼毒注射剂
治疗小狗毛癣病的瑞香狼毒注射剂，按全干基础的重量比，
瑞香狼毒的水醇提取物    6份
明胶                    5份
PEG-6000                89份
上述治疗小狗毛癣病的瑞香狼毒注射剂用药量为：按每只一月龄小狗注射本发明的注射剂2毫升，一年生长体重在3公斤以下的小型狗，可防止毛癣8～10个月。本实施例的本发明的注射剂的制备方法同于实施例1。
实施例5、治疗狗毛癣病的瑞香狼毒注射剂
治疗狗毛癣病的瑞香狼毒注射剂，按全干基础的重量比，
瑞香狼毒的水醇提取物    10份
明胶                    8份
PEG-6000                82份
上述治疗狗毛癣病的瑞香狼毒注射剂用药量为：按体重3公斤以下每只注射本发明的注射剂2毫升，体重在3公斤以上的每只注射本发明的注射剂3毫升，可防止毛癣8～10个月。本实施例的本发明的注射剂的制备方法同于实施例1。

Claims (3)

1、一种治疗动物毛癣病的瑞香狼毒注射剂，包括瑞香狼毒的水醇提取物、明胶和PEG-6000。
2、根据权利要求1所述的一种治疗动物毛癣病的瑞香狼毒注射剂，其特征在于：按全干基础的重量比，
瑞香狼毒的水醇提取物   2～10份
明胶                   3～8份
PEG-6000               82～95份。
3、根据权利要求1所述的一种治疗动物毛癣病的瑞香狼毒注射剂的制备方法如下：
A、水提：取瑞香狼毒根，粉碎，加水浸泡1～2小时后，加热煮沸20～40分钟，过滤，收取滤液；重复2～4次加水，加热煮沸20～40分钟，过滤，收取滤液；合并多次收取的滤液，在摄氏50～80度环境中负压浓缩，至含水量为10～50份时获得膏状水浸提物为止；
B、醇提：向膏状水浸提物中加无水乙醇至乙醇浓度为40～60份停止加无水乙醇，放置于摄氏50～80度的环境中4～8小时，取出过滤，在摄氏50～80度环境中负压浓缩，至膏状，成为膏状瑞香狼毒的水醇提取物备用；
C、干燥：制备瑞香狼毒的水醇提取物粉，在摄氏50～80度环境中烘干燥，成含水量1～15份的不含乙醇的瑞香狼毒的水醇提取物粉；研磨成微粉，取过200目筛的微粉备用；
D、制备明胶加水溶液：将明胶浸泡于水中，充分溶胀后，制备的明胶加水溶液浓度为3～5份；
E：粉胶混合：把瑞香狼毒的水醇提取物粉加入到明胶加水溶液中，在水浴摄氏50～55度环境中用超声振荡至充分分散，按全干基础计算，两者混合比为瑞香狼毒的水醇提取物粉∶明胶＝2～10份∶3～8份，获得瑞香狼毒的水醇提取物的明胶混悬液；
F、加入戊二醛：取得的瑞香狼毒的水醇提取物的明胶混悬液放入冰浴中，温度降至摄氏5～8度时加入25份浓度的戊二醛，戊二醛的加入重量是瑞香狼毒的水醇提取物、明胶和PEG-6000三项总重量的2～8％；再放入摄氏4～8度中24小时后，取出加水混匀，抽滤去除水，多次重复至无醛味并呈膏状后；摄氏30～45度环境中减压干燥20～30小时，获得黄白色粉末状微球瑞香狼毒药物，干热灭菌；
G、加入抗氧化剂：氧化剂用PEG-6000，按全干基础的重量比，瑞香狼毒的水醇提取物为2～10份、PEG-6000为82～95份的配方比例，将步骤F获得的微球瑞香狼毒药物与PEG-6000溶液混合并分散混匀制得混悬状态的本发明的注射剂。
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