CN1903227A - 一种发酵虫草菌粉的水溶性活性组分及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属医药技术领域，具体为一种发酵虫草菌粉的水溶性活性组分以及作为壮阳和抗疲劳作用的应用。该活性组分是由极性较大的溶媒优选水提取，经浓缩干燥(优选喷雾干燥)制备获得，具有壮阳、抗疲劳和增强体力的功效，主要用于治疗和预防性功能低下、增强体质和耐力、缓解和改善高工作强度和压力引起的身体疲劳和精神疲惫、改善老年虚症的症状。以该活性组分为主要原料可以制备成药物、保健品、复方制剂，或作为食品添加剂。所制备的药物等可以是片剂、胶囊、粉剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、糖浆或咀嚼剂等。和发酵虫草菌粉制剂相比，本发明制备获得的活性组分的制剂具有疗效提高、临床适应症明确、服用剂量减小和有效成分更容易溶出等优点。

Description

一种发酵虫草菌粉的水溶性活性组分及其应用

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种发酵虫草菌粉的活性组分及其用途。

背景技术

冬虫夏草为我国传统的名贵中药，具温和平补之性。据历代文献记载，虫草能保肺益肾，秘精益气，补虚损，补命门，止咳化痰；常用于痰饮咳嗽，咯血，自汗，盗汗，阳痿，遗精，肺结核，腰膝酸痛，病后久虚等。

发酵虫草菌粉具有与天然冬虫夏草类似的化学成分和药理功能。经证实无毒、无致畸、无致突变作用，临床广泛用于慢支、男性性功能低下、高血脂、老年虚证等，疗效确切。发酵虫草菌粉主要含有虫草多糖、腺嘌呤核苷(腺苷)、脲嘧啶核苷、麦角甾醇、天门冬氨酸等多种氨基酸，还含有锌、硒等重要微量元素和钾、镁、钙等金属离子和维生素B1、B2、E等多种成分。

冬虫夏草具有广泛的药理作用和临床用途，如降低血脂，增加心、脑供血，轻度降血压，抑制血小板聚集，延长缺氧动物生存时间，抗炎、止咳、镇静、抗流涎、促性腺等。同时，发酵虫草菌粉的化学成分复杂，其制剂多以菌粉的原药材入药，服用量大，药材中的有效成分的溶出度低。这种发酵虫草菌粉化学成分的复杂性、临床适应症的多样性必然影响虫草制剂的临床疗效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种发酵虫草菌粉的壮阳、抗疲劳功效的有效活性部位，该部位为发酵虫草菌粉的水溶性活性组分，主要用于性功能低下的治疗和预防，增强体质和耐力，缓解和改善高工作强度和压力引起的身体疲劳和精神疲惫，改善老年虚症的症状。

为了提高虫草菌粉的疗效，我们采用现代化学分离技术和活性筛选手段对发酵虫草菌粉的壮阳和抗疲劳的活性部位进行了筛选，以期发现疗效更好、作用更加明确的组分，使发酵虫草菌粉这个源于天然虫草、类似天然虫草的功效进一步提高，更好地造福人类。

按照化合物的极性，使用不同极性溶媒提取/萃取分离发酵虫草菌粉，获得虫草菌粉水提物、虫草菌粉醇提物和虫草菌粉石油醚提取物的不同制备物，并对这些制备物的壮阳和抗疲劳的活性进行了筛选，发现其水溶性组分为虫草菌粉的壮阳和抗疲劳的活性部位。利用本发明制备获得的有效部位制备物疗效明确、服用剂量减小，可以制备成药物、保健品、功能食品或食品添加剂，或者在复方制剂中含有该活性组分。

本发明利用现代化学分离和药理活性评价技术发现并证实了发酵虫草菌粉的水溶性组分为虫草壮阳和抗疲劳的有效活性部位。虫草的水提取物含有多糖类、氨基酸、多肽、蛋白质、甘露醇、生物碱、微量元素和金属离子等类化合物。

本发明提供了发酵虫草菌粉的水溶性组分在制备用于治疗和预防性功能低下、增强耐力、改善疲劳和老年虚症症状的药物、保健品或直接作为食品添加剂的应用以及在复方制备中含有本发明的活性组分的应用。

本发明提供的药物、保健品或复方制剂中，所述水溶性活性组分的质量含量为1-100％，其作为食品添加剂的含量为0.01-20％。

本发明所述的发酵虫草菌粉是指与天然虫草有着相似的化学成分，被用作天然虫草的人工替代品，包括多种菌株的发酵产物，如为由新鲜冬虫夏草分离所得拟青霉菌株Cs-4发酵生产的虫草菌粉、由中华头孢霉发酵生产的虫草头孢菌粉、或由蝙蝠蛾被孢霉发酵生产的虫草被孢菌粉、由蝙蝠蛾被毛孢生产的虫草被毛孢菌粉或蛹虫草菌粉等，也包括国家药典规定的天然冬虫夏草品种本身和具有虫草功效的品种或替代品种。

本发明提供了制备发酵虫草菌粉的水溶性活性组分的方法。该方法采用极性溶媒优选水提取，包括1)采用发酵虫草菌粉原料的直接水提取制备；2)渗漉制备；3)采用脂溶性溶剂提取发酵虫草菌粉后的药渣制备：4)采用CO₂超临界萃取发酵虫草菌粉后的药渣制备。将发酵虫草菌粉或所述药渣装入提取罐内，按1∶2-1∶10加入水，煮沸并维持1-3hr，过滤，滤渣以同样条件重复提取1-3hr，过滤并合并滤液，经减压浓缩或水蒸气加热浓缩至稠膏状，得到水溶性活性组分(浸膏)；或者滤液经喷雾干燥制备获得水溶性活性组分(粉术)。

所述由CO₂超临界萃取后的药渣或者脂溶性溶剂提取后的药渣生产制备水溶性活性组分的方法还提供了发酵虫草菌粉的综合利用，大大提高了发酵虫草菌粉的经济价值。

本发明提供的活性组分提高了疗效，增加了活性成分的溶出度，减小了服用剂量并使有效成分的含量更易于控制。和传统的发酵虫草菌粉制剂相比，更适用于治疗和预防性功能低下、工作压力等引起的身体疲劳和精神疲惫和老年虚症。

本发明提供的药物、保健品或者在复方制剂中均可以采用药学上常规方法制备，如可以是片剂、咀嚼剂、颗粒剂、口服液、糖浆、胶囊、软胶囊、滴丸、丸剂、注射剂或冻干粉针剂等；本发明的有效活性部位可以以任何形式作为食品添加剂用于性功能低下症、疲劳、老年虚症的功能食品的制备。

下面是本发明提供的发酵虫草菌粉水溶性活性组分的药理学实验结果。

实验1：发酵虫草菌粉的不同部位提取物对大鼠交配能力的影响

分别用水、乙醇和石油醚提取制备获得发酵虫草菌粉水提物、醇提物和石油醚提取物。

雌性大鼠50只，戊巴比妥钠麻醉，行双侧卵巢切除术，术后肌注青霉素2万U/kg.d，连续5天，2周后进行实验。实验前48hr，皮下注射苯甲酸雌二醇20ug/只，4hr前皮下注射黄体酮注射液500ug/只。雄性大鼠50只，随机分为5组，每组10只，正常对照组(1ml/100g)，阳性对照组(男宝胶囊，162mg/kg)，虫草水提物(150mg/kg)，虫草醇提物(125mg/kg)，虫草石油醚提取物组(125mg/kg)，各组均每日灌胃给药一次，连续21d。

观察方法：雄性大鼠末次给药后，放入实验笼中适应环境5min，每笼加入一只雌鼠，在夜间安静红色灯光下，记录捕捉潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次捕捉雌鼠的时间)、射精潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第一次射精的时间)、20min内各组内雄鼠捕捉雌鼠次数及射精次数，并计算20min内各组内雄鼠的捕捉百分率及射精百分率。

结果显示，虫草菌粉的不同提取物中，虫草水提取物具有明显的壮阳效果，能增强雄性大鼠的交配能力，表现为与雌鼠合笼后捕捉雌鼠的潜伏期和交配的潜伏期缩短，20min捕捉雌鼠的次数和交配次数明显增加。虫草醇提物和虫草石油醚提取物没有表现出类似的壮阳作用。

表1  发酵虫草菌粉的不同部位提取物对大鼠性功能交配能力的实验(x±s)

组别	剂量(mg/kg)	捕捉			交配
								潜伏期(s)	次数	％	潜伏期(s)	次数	％
		正常对照组		98.00±75.53	17.00±7.54		437.40±342.29							8.20±8.14
男宝胶囊组	162							53.50±34.46*	30.00±5.22**	63.8	116.00±60.19*	18.40±4.51*	69.2
		虫草水提物组	150	45.57±27.81*	32.43±11.62*	65.6	100.50±66.96*							21.83±8.75*	72.7
虫草醇提物组	125							86.14±105.73	21.43±14.44	55.8	483.67±389.80	11.33±9.29	58.0
		虫草石油醚提物组	125	168.86±105.47	14.57±5.71	46.2	341.25±160.08							9.5±10.66	53.7

^**P＜0.01，^*P＜0.05，与正常对照组比较。

实验2：发酵虫草菌粉的水溶性提取物对小鼠转棒耐力和游泳时间的影响

转棒耐力实验：昆明小鼠分组，水溶性提取物灌胃给药(150、300mg/kg)连续给药4天，于第3次给药后45min将动物放在小鼠转棒疲劳仪上，转速20r/min，观察动物在棒上的活动时间(从放上转棒到因疲劳而掉下的时间)。结果见表2。可以看出，水溶性提取物可明显延长小鼠转棒耐力时间。

游泳试验：以上小鼠于第4天给药后30min，给小鼠负体重5％的重量，将小鼠放于22℃的游泳箱水中。记录自游泳开始至头部全部沉入水中8sec不能浮出水面的时间作为小鼠游泳时间。结果显示水溶性提取物可明显延长小鼠游泳耐力时间，具有增强小鼠耐力和抗疲劳的作用。

表2  水溶性提取物对小鼠转棒疲劳的影响(x±s)

组别	剂量(mg/kg)	动物	棒上活动时间(min)	游泳时间(min)
					空白水溶性提取物	0150300	101515	2.9±1.14.7±3.45.2±4.8*	5.2±3.67.6±5.08.7±6.1*

^*p＜0.05，与空白对照组比较。

具体实施方式

(一)发酵虫草菌粉水溶性活性组分的制备

方法一、水提取制备：将发酵虫草菌粉1kg装入提取罐内，按1∶2-1∶10加入水，煮沸并维持1-3hr，过滤，滤渣以上述同样条件再次提取1-3hr，过滤并合并滤液。经减压浓缩或水蒸气加热浓缩，得到水溶性活性组分(浸膏)。或滤液经喷雾干燥获得水溶性活性组分(粉末)。

方法二、渗漉制备：将发酵虫草菌粉1kg装入提取罐内，按1∶5-1∶15加入水，保持温度20-80℃，静置12-24hr，收集渗漉液；以同样条件再次加水渗漉过夜，合并渗漉液。经水蒸气加热浓缩或真空减压浓缩，得到水溶性活性组分制备物(浸膏)。或渗漉液经喷雾干燥获得水溶性活性组分(粉末)。

方法三、采用脂溶性溶剂提取后的药渣制备：发酵虫草菌粉1kg，按1∶2-1∶5加入石油醚，回流2hr，过滤后的药渣同方法一的步骤，经水提取、干燥制备获得水溶性活性组分。

方法四、采用CO₂超临界萃取后的药渣制备：将发酵虫草菌粉装入萃取缸内，装入超临界萃取釜中，萃取温度为45-60℃，萃取压力为15-45Mpa，经循环萃取，并保持恒温恒压1-3hr，获得超临界萃取物后的药渣。再将该药渣采用方法一的步骤制备获得水溶性活性组分。

(二)发酵虫草菌粉水溶性活性组分的药物制剂的制备：

片剂处方(1000片)：

虫草菌粉水溶性组分干燥粉末        300g

淀粉                              90g

乙醇(70％)                        Q.S.

硬脂酸镁                          Q.S.

滑石粉                            Q.S.

制备工艺与通常的片剂药物工艺相同。

胶囊处方(1000粒)：

虫草菌粉水溶性组分干燥粉末        300g

硬脂酸镁                          Q.S.

乳糖                              50g

制备工艺与通常的胶囊制剂工艺相同。

咀嚼片处方(1000片)：

虫草菌粉水溶性活性组分干燥粉末    600g

甘露醇                            200g

硬脂酸镁                          4g

5％PEG6000(溶于50％醇)            Q.S.

滑石粉                            50

制备工艺与通常的咀嚼片工艺相同。

口服液处方(1000ml)：

虫草菌粉水溶液                    600g

蔗糖                              300-500g

蒸馏水  加至                      1000ml

制备工艺与通常的口服液工艺相同

附：虫草菌粉水溶液的制备：水溶性活性组分干燥粉术或者浸膏600g用40-70％乙醇(首选50％)溶解，静置，滤过，制备获得。

糖浆剂处方(1000ml)：

虫草菌粉水溶性活性组分浸膏        600g

蔗糖                              400-600g

苯甲酸钠                          1-5g

蒸馏水  加至                      1000ml

制备工艺与通常的糖浆剂工艺相同。

颗粒剂处方(1000包)

虫草菌粉水溶性组分干燥粉末        600g

蔗糖粉                            1000-3000g

糊精                              500-1200g

乙醇                              Q.S.

制备工艺与通常的颗粒制剂工艺相同。

Claims (6)

1、一种发酵虫草菌粉的水溶性活性组分，由极性溶媒优选水提取，经水蒸气加热浓缩或减压浓缩或喷雾干燥制备获得。

2、一种如权利要求1所述的发酵虫草菌粉的水溶性活性组分在制备壮阳和抗疲劳药物、保健品或复方制剂，或者将该活性组分直接作为食品添加剂的应用。

3、根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述药物、保健品或复方制剂中，所述水溶性活性组分的质量含量为1-100％，其作为食品添加剂的添加量为0.01-20％。

4、根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的发酵虫草菌粉是指与天然虫草有着相似的化学成分，被用作天然虫草的人工替代品。

5、根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的发酵虫草粉为由新鲜冬虫夏草分离所得拟青霉菌株Cs-4发酵生产的虫草菌粉、由中华头孢霉发酵生产的虫草头孢菌粉、由蝙蝠蛾被孢霉发酵生产的虫草被孢菌粉、由蝙蝠蛾被毛孢生产的虫草被毛孢菌粉或蛹虫草菌粉。

6、根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述药物、保健品的剂型有片剂、咀嚼剂、颗粒剂、口服液、胶囊、软胶囊、冲剂、糖浆、滴丸、丸剂、注射剂或冻干粉针剂。