CN1903017A - 百合组织培养球分球的方法 - Google Patents

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CN1903017A CN 200510046956 CN200510046956A CN1903017A CN 1903017 A CN1903017 A CN 1903017A CN 200510046956 CN200510046956 CN 200510046956 CN 200510046956 A CN200510046956 A CN 200510046956A CN 1903017 A CN1903017 A CN 1903017A
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Abstract

本发明涉及植物组织培养，具体地说是百合组织培养球分球的方法，其将百合丛生芽接种于组培培养基中培养，培养基中糖和/或蔗糖的浓度为60～120g/l，激素BA浓度为0.1～1.5mg/l，NAA浓度为0.01～1.0mg/l，将丛生芽培养成鳞球，以球分球的方式进行继代培养。本发明优点为：组培苗健壮，可提高移载的成活率，应用效果好，缩短形成商品球的时间。

Description

百合组织培养球分球的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养，具体地说是百合组织培养球分球的方法。
背景技术
植物组织培养是指在离体的条件下，将植物体的一部分，如一小段茎、一小块叶、甚至一个细胞，接种在培养基上，使它们重新形成一个完整植株的方法。组织培养的步骤有培养基的制作与接种材料的消毒、接种、植株诱导、生根和移栽。
其中常用的培养基为MS培养基，其配方为：
  成分   使用浓度(mg/L)
  大量元素   硝酸钾KNO3   1900
  硝酸铵NH4NO3   1650
  磷酸二氢钾KH2PO4   170
  硫酸镁MgSO4·7H2O   370
  氯化钙CaCl2·2H2O   440
  微量元素   碘化钾KI   0.83
  硼酸H3BO3   6.2
  硫酸锰MnSO4·4H2O   22.3
  硫酸锌ZnSO4·7H2O   8.6
  钼酸钠Na2MoO4·2H2O   0.25
  硫酸铜CuSO4·5H2O   0.025
  氯化钴CoCl2   0.025
铁盐   乙二胺四乙酸二钠Na2·EDTA   37.3
  硫酸亚铁FeSO2·7H2O   27.8
  有机成分   肌醇   100
  甘氨酸   2
  盐酸硫胺素VB1   0.1
  盐酸吡哆醇VB6   0.5
  烟酸VB5或VPP   0.5
  蔗糖sucrose   30g/L
  琼脂agar   7g/L
百合花卉靠无性繁殖法繁殖，病毒逐代传递积累，危害日趋严重。分离花卉植物0.1-0.5毫米大小的生长点，培养得到的基本上是无病毒苗；去病毒后，植株生长势强，花朵变大，色泽鲜艳，抗逆能力提高，产花数量上升。这一技术将被广泛应用。现在的百合组织培养中增殖扩繁都是以丛生芽或愈伤组织的切割分离转移到新的培养基上进行继代培养，增加数量；这种繁殖方式虽然可以迅速地增加数量，但是在扩繁过程中，苗的长势较弱，需要进行壮苗后方能进行生根培养、进而移载。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简单、周期短的百合组织培养球分球的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为
百合组织培养球分球的方法，将百合丛生芽接种于组培培养基(如：MS培养基)中培养，培养基中糖和/或蔗糖的浓度为60～120g/l，激素BA浓度为0.1～1.5mg/l，NAA浓度为0.01～1.0mg/l，将丛生芽培养成鳞球，以球分球的方式进行继代培养。
所述培养是在2000～3000LX每天12～14小时的光照，20～26℃的条件下培养；培养基中糖和/或蔗糖的浓度较佳为75～105g/l，最好为80～90g/l；激素BA浓度较佳为0.5～1.0mg/l，最好为0.8～1.0mg/l；生长素NAA浓度较佳为0.1～0.5mg/l，最好为0.1～0.3mg/l。
本发明具有如下优点：
1.组培苗健壮，可提高移载的成活率。现有的百合组织培养中都是一种芽分芽的继代培养方式进行，在扩繁过程中，苗的长势较弱，需要进行壮苗后方能进行生根培养、进而移载；本发明在增殖扩繁过程中将丛生芽培养成多个鳞球，以球分球的方式进行继代培养，在继代培养的过程中直接壮苗、省略了扩繁过程中壮苗的过程，继代培养后的苗体可直接进行生根培养，以成球后的组培苗进行移载，移载时成活率可达到95％以上。
2.应用效果好。本发明在增殖扩繁过程中将丛生芽培养成多个鳞球，以球分球的方式进行继代培养，其增殖系数≥4，可行性好，适于商业化的生产应用。
3.缩短形成商品球的时间。本发明采用改进的MS培养基，鳞球分化速度快，长势好，增加了鳞球分化数量。
具体实施方式
实施例1百合组织培养球分球：
1)当百合诱导出丛生芽后，芽长为1～2cm时，切割2～3个芽点接种于MS培养基中，附加入BA(6-苄基氨基嘌呤)1.0mg/l、NAA(萘乙酸)0.1mg/l和蔗糖90g/l进行诱导；在2000～3000LX(本实施例为2000LX)每天12～14小时(本实施例为14小时)的光照条件下，20～26℃的温度条件下，培养30～40天后(本实施例为40天)，组培苗开始分化出多个鳞球，将分化出的多个鳞球进行切割分离，再将分离后的鳞球转接于同样的培养基中，进行继代培养，达到增殖的目的，增殖系数≥3；
2)观察其不同激素浓度配比及不同蔗糖浓度对百合鳞球的诱导作用效果：
将继代培养中的百合鳞球进行切割分离，分离后的鳞球接种于以下实验改进的MS培养基中，培养基为：MS+BA+NAA+蔗糖或糖；经过40天的培养后，其长势情况如下表1-4。
a.当BA和NAA浓度一定时(BA 1.0mg/l+NAA 0.1mg/l)，不同浓度的糖含量对百合鳞茎的诱导。(以下的糖或蔗糖含量是指培养基中糖或蔗糖的总含量)
表1
  糖浓度(g/l)   60   75   90   105   120
  鳞球直径大小(mm)   1.5   2.1   3.3   2.6   2.0
从上表中可以看出，当BA和NAA浓度及其他条件不变时，随着糖的浓度增加，球直径也不断增大，在糖浓度90g/l时，球直径最大平均为3.3mm，高于90g/l后，球直径开始逐渐下降，所以最佳的诱导成球的糖浓度为90g/l，诱导直径最大，长势正常，移载成活率最高。
b.当BA和NAA浓度一定时(BA 1.0mg/l+NAA 0.1mg/l)，不同浓度的蔗糖含量对百合鳞茎的诱导。
表2
  蔗糖浓度(g/l)   60   75   90   105   120
  鳞球直径大小(mm) 1.5 2.1 3.3 2.6 2.0
从上表中可以看出：当BA和NAA浓度及其他条件不变时，随着糖的浓度增加，球直径也不断增大，在蔗糖浓度90g/l时，球直径最大平均为3.3mm，高于90g/l后，球直径开始逐渐下降。
c.在蔗糖浓度90g/l、BA为1.0mg/l时，不同浓度的NAA含量对分化百合鳞球的影响。
表3
  NAA浓度(mg/)   0.1   0.2   0.3   0.5   0.8
  分化鳞球的数量   最多   较多   一般   稍差   较少
从上表中可以看出：当BA和糖浓度及其他条件不变时，NAA浓度在0.1～0.5之间时鳞球的分化数量还可以，而最好的则属NAA 0.1mg/l；NAA浓度越大，分化球的数量越少，但鳞球的膨大随着NAA浓度的加大，而相对有所增大、但其变化不大。
d.在蔗糖浓度90g/l、NAA为0.1mg/l时，不同浓度的NAA含量对分化百合鳞球的影响。
表4
  BA浓度(mg/)   0.5   0.6   0.8   0.9   1.0
  分化鳞球的数量   稍差   一般   较多   多   最多
从上表中可以看出：当NAA和糖浓度及其他条件不变时，BA浓度在0.5～1.0之间时鳞球的分化数量还可以，而最好的则属BA 1.0mg/l；BA浓度越大，分化球的数量越多，但鳞球的膨大随着BA浓度的加大，而相对有所减小、但其变化不大。
从上表1-4可以看出，在百合组织培养球分球的过程中，主要是蔗糖或糖浓度及激素浓度配比的影响较大。其最佳的百合组织培养球分球培养基为：MS+BA 1.0mg/l+NAA 0.1mg/l+蔗糖或糖90g/1，鳞球分化速度快，长势好，鳞球分化数量多，其增殖系数≥4。
由于常规的MS培养基和WPM培养基均可在百合组织培养过程中应用，并且它们的组成成份中各组份的用量相差较大，而在本发明中起突出诱导作用的为糖、BA和NAA的浓度，而对于改进的MS培养基中各组份用量无需严格限定，本发明组织培养中可采用改进的MS组成如下表5所示，其中还应添加有硝酸钾(KNO3)1000～1900mg/L、磷酸二氢钾(KH2PO4)170-340mg/L、碘化钾(KI)0.75～0.83mg/L和氯化钴(CoCl2)0.025～0.5mg/L，或添加有Ca(NO3)2·4H2O 350-556mg/L和K2SO4990～1450mg/L。
表5
 成分   使用浓度(mg/L)
  大量元素  硝酸铵NH4NO3   400～1650
 硫酸镁MgSO4·7H2O   370
 氯化钙CaCl2·2H2O   96～440
  微量元素  硼酸H3BO3   6.2
 硫酸锰MnSO4·4H2O   22.3～22.5
 硫酸锌ZnSO4·7H2O   8.6
 钼酸钠Na2MoO4·2H2O   0.25
 硫酸铜CuSO4·5H2O   0.025～0.25
铁盐  乙二胺四乙酸二钠Na2·EDTA   37.3
 硫酸亚铁FeSO2·7H2O   37.3～37.5
  有机成分  肌醇   100
 甘氨酸   2
 盐酸硫胺素VB1   0.1～1.0
 盐酸吡哆醇VB6   0.5
 烟酸VB5或VPP   0.5
 蔗糖sucrose   30g/L
 琼脂agar   7g/L

Claims (4)

1.百合组织培养球分球的方法，其特征在于：将百合丛生芽接种于组培培养基中培养，培养基中糖和/或蔗糖的浓度为60～120g/l，激素BA浓度为0.1～1.5mg/l，NAA浓度为0.01～1.0mg/l，将丛生芽培养成鳞球，以球分球的方式进行继代培养。
2.按照权利要求1所述百合组织培养球分球的方法，其特征在于：所述培养是在2000～3000LX每天12～14小时的光照，20～26℃的条件下培养。
3.按照权利要求1所述百合组织培养球分球的方法，其特征在于：所述培养基中糖和/或蔗糖的浓度为75～105g/l，BA浓度为0.5～1.0mg/l，NAA浓度为0.1～0.5mg/l。
4.按照权利要求1所述百合组织培养球分球的方法，其特征在于：所述培养基中糖和/或蔗糖的浓度为80～90g/l，BA浓度为0.8～1.0mg/l，NAA浓度为0.1～0.3mg/l。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN102030575A (zh) * 2010-11-15 2011-04-27 青海大学 一种东方百合杂种系种球繁育及切花栽培营养肥
CN101233826B (zh) * 2008-03-03 2011-11-16 上海光兆植物速生技术有限公司 食用百合的脱毒快繁技术
CN110574684A (zh) * 2019-10-08 2019-12-17 井冈山大学 龙牙百合种球的快速繁育方法

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PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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