CN1893838A - 具有血管紧张素转化酶抑制效应的肽 - Google Patents

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Abstract

三肽XPP和/或其盐在制备包含所述三肽XPP的血管紧张素转化酶抑制剂和食品中的用途，其中X＝C、M、S、T或K。

Description

具有血管紧张素转化酶抑制效应的肽
发明领域
本发明涉及用于制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂的某些肽。本发明还涉及适于ACE抑制的食品以及制备所述食品的方法。
发明背景
高血压被认为是心血管疾病(CVD)的主要危险因子之一。其调节血压的机制之一是肾素-血管紧张素系统。这是导致形成血管紧张素II的一个级联反应，血管紧张素II具有强烈的血管收缩效应并因此具有升高血压的效应。对该级联中一个关键酶即血管紧张素I转化酶(ACE)的抑制，会降低血管紧张素II的形成，因而具有降低血压的效应。长期人为干预研究表明，定期摄入少量ACE抑制剂能降低CVD达25％(Gerstein等(2000)，The Lancet 355，253-259)。
食品中的ACE-抑制剂是众所周知的。这类食品已经通过例如乳或乳品发酵而制备。在一项安慰剂-对照研究中，在高血压病人中显示出酸奶中VPP和IPP有降低血压的效应(Hata，Y等(1996)，AmericanJournal of Clinical Nutrition 64，767-771)。
一种声称“适合轻度高血压人群”的市售发酵乳制品是Calpis酸奶，是用瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)发酵而成，由日本的Calpis Food Industry公司生产。另一种市售发酵乳制品是由芬兰的Valio公司生产的Evolus，其声称是“欧洲第一例能降血压的功能性食品”。这两种发酵乳制品都用瑞士乳杆菌菌株进行发酵。产品中含有能在体外抑制ACE的生物活性肽(VPP和IPP)，这些肽是由酪蛋白水解产生的。
现有技术已知的另一种可能性是通过酶促水解乳蛋白，制备抑制ACE的食品。WO 01/85984介绍了通过使用胰蛋白酶水解酪蛋白分离物，来制备抑制ACE的组合物。
发明概述
本发明的一个目的是提供一种适于抑制ACE的食品。另一个目的是提供具有降压效应的此类食品。还有一个目的是提供含有高浓度ACE-抑制剂的食品。按照本发明，通过将三肽XPP和/或其盐用于制备血管紧张素转化酶抑制剂，可以达到一个或多个所述目的，其中X＝C、M、S、T或K。
发明详述
在本文中采用的通用单字母代码通常用来描述氨基酸。除非另有说明，本文所用的重量百分比表示为相对于总重量的百分比。
本文中的酶应当理解为还包括不止一种酶的混合物。
根据本发明，我们已经发现，本发明的三肽XPP在人类消费后相当稳定，本发明的肽XPP还是有效的血管紧张素转化酶抑制剂。优选血管紧张素转化酶抑制剂是一种功能性食品。
在XPP中，X＝C、M、S、T或K。优选X＝C、M、S或T，更优选X＝M、S或T。
本发明提供一种适于血管紧张素转化酶抑制并且在人体内降压的食品，所述食品包含1mg/g或1mg/g以上的XPP(其中X＝C、M、S、T或K)，优选25mg/g或25mg/g以上的XPP，更优选食品包含50mg/g或50mg/g以上的XPP，甚至更优选100mg/g或100mg/g以上的XPP，其中X＝C、M、S、T或K，优选X＝C、M、S或T，更优选X＝M、S或T。
本发明的食品定义为适于人类消费的产品，其中本发明的XPP作为一种配料，其用量为获得明显ACE-抑制效应的有效量。
虽然不希望受到本文的理论束缚，但相信本发明的三肽是良好的ACE-抑制剂，因为它们是：
·在大小上相对小[长度介于2-10个氨基酸之间]
·中性或带正电荷
·不由负电荷残基组成
·由疏水性支链氨基酸组成
·具有C端脯氨酸残基。
而且据信，对于存在的两个连续Pro残基，就XPP而言，因为空间上的限制，明显抑制ACE释放最后两个残基。
而且还据信，其存在或C端PP(-Pro-Pro)序列，致使该肽对人体消化酶、结合在人肠上皮细胞刷状缘膜上的肽酶和人血流中的肽酶更稳定。因此，据信含有该肽的食品的消耗，将导致该肽在人体内被有效吸收，诱导对ACE的抑制并降低血压。
综合这些观察结果，可以归纳为：任何肽，只要不是太长且由疏水性氨基酸、中性或带正电荷氨基酸组成并带有C端Pro[或-Pro-Pro]序列，从本质上说都是良好的ACE抑制剂。
一般而言，该结果与观察现象相符，抑制ACE的最佳XPP肽由中性和疏水性氨基酸组成。大的疏水性残基(例如Trp、Tyr和Phe)不包括在内的原因，是基于这一事实：很可能这些残基与两个Pro残基一起，对于配合酶的活性位点来说太大了。
CPP包括在内的原因，是基于这一事实：ACE是含Zn酶，底物与其Zn原子间的相互作用，对于底物与酶的结合来说是必不可少的，Cys的游离巯基的存在促进了这一相互作用。
已经鉴定以下蛋白(及其前体)在其蛋白质组成及其来源的一级结构中含有例如所提到的XPP序列：
CPP：胶原蛋白[鸡]、肌钙蛋白[鸡]、甲状腺球蛋白[牛]
MPP：白蛋白[豌豆、绿豆]、肌球蛋白[牛、鸡、猪、酵母]、玉米醇溶蛋白[玉米]
SPP：胶原蛋白[鸡]、酪蛋白[牛]、豆球蛋白[豌豆、Pea Sativum]。
TPP：胶原蛋白[鸡]、麦谷蛋白[小麦]、cruceferin[油菜]、豆球蛋白[棉花]、肌球蛋白[酵母]、玉米醇溶蛋白[玉米]
TPP：胶原蛋白[鸡]、麦谷蛋白[小麦]、cruceferin[油菜]、豆球蛋白[棉花]、肌球蛋白[酵母]、玉米醇溶蛋白[玉米]
KPP：肌球蛋白[猪、鸡、酵母]、酪蛋白[猪]
这些蛋白质材料可用于例如作为底物，从这些底物可产生本发明的肽。技术人员将会知道使用已知发酵或已知酶处理(例如酶促水解)来达到这一目的。
通过发酵或水解条件的优化，可以最大量地产生本发明的生物活性分子XPP。要想最大量生产，技术人员将会知道怎样调整工艺参数，例如水解时间、水解温度、酶的种类和浓度等。
优选在生产XPP时，XPP的摩尔收率是高的。XPP的摩尔收率定义为XPP产量的摩尔数除以水解前原料中存在的蛋白总量的XPP片段的摩尔数。
酶促水解中使用的酶可以是能有效水解含有XPP的底物的任何酶，产生一种或多种XPP，其中X＝C、M、S、T或K。
可以按常规方法进行酶处理。其中包括将酶(或酶混合物)加入到底物中，在适于进行酶促水解的受控条件下维持所得反应混合物。要控制的条件包括温度、pH、反应时间和酶浓度。反应混合物的优选温度为40-60℃，更优选45-55℃，最优选约50℃。反应混合物的pH优选为5-9，更优选6-8，最优选约7。酶浓度为2-10％重量(基于反应混合物的总重量)，更优选3-10％重量，最优选4-6％重量。反应时间(水解时间)优选为2-50小时，更优选2-10小时，最优选4-8小时。
在另一个优选的实施方案中，水解步骤可以由能引起底物水解的微生物发酵步骤来替代。
发酵罐中的材料和底物可以按常规方式混合，以便得到均质发酵介质。
优选发酵可在25-50℃、优选35-45℃进行3-80小时、优选6-25小时。
有利的是，在酶处理和任选发酵后，可以进行几个额外的工艺步骤。
优选按照本发明，采用包含XPP(其中X＝C、M、S、T或K)的食品制备方法包括下述步骤：
a)酶促水解包含具有序列XPP的蛋白质的底物，产生水解蛋白产物；
b)从水解蛋白产物分离富含三肽的部分；
c)将得自步骤b)的部分干燥，得到富含三肽XPP的固形物；
d)将步骤c)中制备的固形物作为制备食品的配料。
在酶促水解步骤a)后，可以进行任选的分离步骤或浓缩步骤。可以按技术人员已知的任何方式，例如过滤、离心或色谱及其组合，进行该步骤。优选用超滤(UF)和/或纳米过滤(NF)技术来进行分离步骤。过滤步骤所用的滤膜孔径大小、以及滤膜的电荷可用于控制对三肽XPP的分离。使用带电荷的UF/NF膜进行蛋白水解产物的分级，描述于以下文献：Y.Poilot等，Journal of Membrane Science 158(1999)105-114。电渗析描述于例如WO00/42066。所述分离步骤的产物在本文中称为ACE-部分。
任选可将水解产物干燥，得到富含三肽XPP的固形物，其中X＝C、M、S、T或K。可以按常规方法，例如通过喷雾干燥或冷冻干燥，进行该步骤。
干燥的制备产物在下文中称为ACE-固体。ACE-部分和/或ACE-固体可有利地用作食品配料。
本发明的食品或源自它们的食品可以通过巴氏消毒或灭菌处理。
本发明的食品可以是任何食品类型。它们除食品之外，还可包含适量的常用食品配料，例如食用香料、糖、水果、矿物质、维生素、稳定剂、增稠剂等。
优选食品包含50-200mmol/kg K+和/或15-60mmol/kg Ca2+和/或6-25mmol/kg Mg2+，更优选100-150mmol/kg K+和/或30-50mmol/kgCa2+和/或10-25mmol/kg Mg2+，最优选110-135mmol/kg K+和/或35-45mmol/kg Ca2+和/或13-20mmol/kg Mg2+。
优选所述食品是果汁产品、乳制品或冷冻甜点食品或涂抹食品/人造奶油。这些优选的食品类型在下文和实施例中有详细描述。
·果汁产品
本发明果汁产品的实例是得自柑橘类水果(例如橙子和葡萄柚)、热带水果、香蕉、桃子、梨、草莓的汁，其中加入ACE-固体和/或ACE-部分。
·乳制品
本发明乳制品的实例为牛奶、含乳抹酱(dairy spread)、奶油乳酪、含乳饮品和酸奶，其中加入ACE-固体和/或ACE-部分，或者在食品制备过程中产生XPP。食品可用作例如含乳饮品。也可加入食用香料或其它添加剂。乳制品也可通过向水或乳制品中添加ACE-固体和/或ACE-部分而制得。
酸奶类制品的组成的实例是约50-80％重量水、0.1-15％重量ACE-固体、0-15％重量乳清粉、0-15％重量糖(例如蔗糖)、0.01-1％重量酸奶培养物、0-20％重量水果、0.05-5％重量维生素和矿物质、0-2％重量食用香料、0-5％重量稳定剂(增稠剂或胶凝剂)。
通常一份酸奶类制品可为50-250g，一般为80-200g。
·冷冻甜点食品
对于本发明的目的，术语冷冻甜点食品包括含乳的冷冻甜点例如冰淇淋、冻酸奶、含乳冰冻果汁(sherbet)、冰冻果汁(sorbet)、冻牛奶(ice milk)和软质乳冻(frozen custard)、冰棒(water-ice)、意式冰糕(granitas)和冻果泥(frozen fruit puree)。
优选冷冻甜点中固形物(例如糖、脂肪、食用香料等)含量大于3％重量，更优选为10-70％重量，例如40-70％重量。
冰淇淋通常包含0-20％重量脂肪、0.1-20％重量ACE-固体、甜味剂、0-10％重量脱脂乳成分和任选的成分，例如乳化剂、稳定剂、防腐剂、食用香料、维生素、矿物质等，余量为水。通常冰淇淋中可搅入空气例如至膨胀度为20-400％，更准确地讲为40-200％，并且冷冻至-2℃至-200℃的温度，更准确地讲为-10℃至-30℃。冰淇淋通常包含约0.1％重量的钙。
·其他食品
技术人员可以根据常识，使用适量水解酪蛋白作为食品基料或者用源自水解酪蛋白的产品(例如ACE固体)作为配料，来生产本发明的其它食品。所述食品的实例为烘焙食品、乳制品、快餐小吃等。
所述食品最好是含油和水的乳剂，例如抹酱(spread)。在本文中，油水乳剂定义为包含油和水的乳剂，并且包括水包油(O/W)乳剂和油包水乳剂(W/O)以及更复杂的乳剂，例如水包油包水(W/O/W/O/W)乳剂。在本文中，油定义为包括脂肪。优选所述食品是抹酱、冷冻甜点或酱汁。优选本发明的抹酱包含30-90％(重量)植物油。最好抹酱的pH为4.2-6.0。
实施例
实施例1
筛选了大量肽的ACE-抑制效果(测定IC50值)。此外，筛选了所有肽在暴露给如下所述的人血清、HUVEC、Caco-2细胞和胃肠酶期间的稳定性。
实施例1中使用的材料和方法描述如下。
细胞培养
Caco-2细胞得自美国典型培养物保藏中心(American TypeCulture Collection，ATCC)，第30-40代时用于实验。将细胞培养在75cm2培养瓶(Corning Costar，Badhoevedorp，荷兰)中。培养基由补充了20％(v/V)胎牛血清、1％(v/v)青霉素/链霉素溶液和1％(v/v)NEAA的DMEM(高葡萄糖，含L-谷氨酰胺)组成。将细胞维持在37℃/加湿气氛/5％CO2/空气中。对于稳定性实验，将细胞接种在12孔细胞培养板(Costar，Badhoevedorp，荷兰)上，培养至少21天。
HUVEC细胞
HUVEC细胞得自(Cambrex Bio Science，Verviers，比利时)，第1-5代时用于实验。将细胞培养在75cm2培养瓶(Corning Costar，Badhoevedorp，荷兰)中。培养基(Cambrex)由补充了2％(v/v)胎牛血清、0.04％(v/v)氢化可的松、0.4％(v/v)含肝素的人碱性成纤维细胞生长因子、0.1％(v/v)血管内皮生长因子、0.1％(v/v)人重组胰岛素样生长因子、0.1％(v/v)抗坏血酸、0.1％(v/v)人重组表皮生长因子、0.1％(v/v)庆大霉素、两性霉素B和0.1％(v/v)肝素的EBM-2组成。将细胞维持在37℃/加湿气氛/5％CO2/空气中。对于稳定性实验，将细胞以100.000细胞/孔的密度接种在12孔板(Corning Costar，Badhoevedorp，荷兰)上，培养至少2天。
试验产物
肽混合物1由VPP、IPP、IIAEK、ITP、VF、FY、KVLPVP和HLPLP组成。混合物2由VAP、GPR、CPP、MPP、SPP、TPP、PIP和PLP组成。合成肽可从Bachem(二肽KPP和GPR)或从University ofUtrecht(M.Egmond博士)订购。
将浓度为5mg的肽分别溶于50μl milliQ水或DMSO中。对于某些肽，浓度按纯度来校正(60％ITP，85％KVLPVP)。除了二肽之外，其余肽的纯度＞95％。将所有肽溶于milli Q水中。将FY溶于DMSO中。因为FY仍不溶解，所以加入一些HCl(终浓度0.3M)。将VF直接溶于0.3M HCl中。为了制备混合物1，将50μl的各种肽混合在一起，加入100μl milli Q水，得到含有每种肽各5mg的500μl溶液(溶于0.06M HCl和10％DMSO)。按照同样方法制备混合物2，除了加入额外的50μl milli Q水之外。混合物2的最终组成也为每种肽各10mg/ml。
肽的稳定性试验
用血清、HUVEC和Caco-2细胞的稳定性试验
将肽混合物加入到人血清(Cambrex Bio Science，Verviers，比利时)中，终浓度为0.1μg肽/L、1μg肽/L和10μg肽/L。将含有肽混合物的血清于37℃孵育0、1、2、5、10、20、60、120、240和360分钟。在每个时间点，将1.5ml样品收集到微量离心管中。立即向样品中加入30μl 10％(v/v)三氟乙酸(TFA)和5μl 10μg UC13-IPP/10。然后将样品于100℃孵育5分钟，再在IEC Micromax RF离心机(Boom BVMeppel)上以10,000rpm离心20分钟。上清液收集到微量离心管中，贮存于-20℃，用于进一步分析。实验重复进行三次。
将细胞培养在12孔板中。向不含胎牛血清、但含有20％(v/v)固相提取的胎牛血清的培养基中加入肽混合物。对于HUVEC，将400μl含有0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml肽的培养基加入到培养板小孔内。在孵育0分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟、90分钟和120分钟时，收集3×130μl培养基。对于Caco-2细胞，将330μl含有0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml肽的培养基加入到培养板小孔内。在孵育0分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、60分钟、90分钟、180分钟和360分钟时，收集3×110μl培养基。实验重复进行三次，所有样品直接放置在干冰上，贮藏于-20℃。对于肽的定量测定，将TFA和UC13-IPP加入到样品中(终浓度分别为0.2％(v/v)和60ng/ml)。用无细胞小孔作为对照。
ACE-抑制测定1：基于酶的测定(EBA)
ACE和一种合成底物(Abz-FRK-(Dnp)P-OH)用于ACE-抑制测定，该测定在白色optiplate-96微量培养板(Packard Bioscience)上进行。该底物由Adriana K.Carmona(Dept.of Biophysics，Escola Paulistade Medivina，Universidae Federal de Sao Paulo，Brazil)惠赠。Abz-FRK-(Dnp)P-OH的储液在DMSO中制备。浓度用分光光度法进行测定，使用摩尔消光系数ε365＝17300M-1cm-1。试验缓冲液的组成是含有100mM NaCl的100mM tris/HCl缓冲液(pH 7.0)。将40μl样品液/试验缓冲液加入到每孔中。就对照而言，仅加入缓冲液。样品用荧光光度计(Fluostar，BMG labtechnologies)测定3次。仪器首先装入150μl底物(3.75μM的测定缓冲液)，然后每孔加入20μl ACE(0.00625单位/ml)。通过在λex＝320nm和λem＝420nm下测定荧光，检测ACE活性，共测定10轮(约10分钟)。将原始数据换算成斜率/秒，并用以下方程式求出ACE抑制活性。
ACE抑制(％)＝[1-(S平均-B平均)/(C平均-B平均)]*100
式中
S平均＝样品(肽+底物+ACE)的平均结果
B平均＝背景(底物)的平均结果
C平均＝对照(ACE+底物)的平均结果。
ACE-抑制测定2：改进的Matsui测定
该ACE抑制活性测定按照以下文献的方法进行：Matsui，T.等(1992)Biosci.Biotech.Biochem.56：517-518，如下描述对其进行的改进。
表1：Matsui ACE抑制测定方法。将各组分加入到1.5ml试管中，终体积为120μl。
  组分   对照1(μl)   对照2(μl)   样品1(μl)   样品2(μl)
  HHL(3mM)H2O样品/抑制剂ACE(0.1U/ml)   7525-20   7545--   75-2520   752025-
对于每个样品，将75μl 3mM马尿酰组氨酸亮氨酸(Hip-His-Leu，Sigma chemicals Co.；所述化学品溶于含有200mM NaCl的250mM硼酸，pH 8.3)；20μl 0.1U/ml ACE(得自Sigma)或H2O和25μl样品或H2O混合在一起(见表1)。混合物于37℃孵育，加入125μl 0.5M HCl 30分钟后，加上塞子。然后加入225μl N-二(羟乙基)甘氨酸/NaOH溶液(1M NaOH：0.25M N-二(羟乙基)甘氨酸(4∶6))，接着加入25μl 0.1MTNBS(2，4，6-三硝基苯磺酸，Fluka，瑞士；溶于0.1M Na2HPO4)。于37℃孵育20分钟后，加入4ml 4mM Na2SO3/0.2M NaH2PO4，用UV/Vis分光光度计(Shimadzu UV-1601，带有CPS控制器，荷兰)在416nm处测定吸光度。
ACE抑制(ACEI)活性量的计算是在不含抑制剂的情况下与ACE转化率进行比较的抑制百分数：
ACEI(％)＝(((C1-C2)-(S1-S2))/(C1-C2))*100        (1)
式中
C1＝不含ACE抑制组分的吸光度(＝最大ACE活性)[AU]。
C2＝不含ACE抑制组分、也不含ACE的吸光度(背景)[AU]。
S1＝在ACE和ACE抑制组分存在下的吸光度[AU]。
S2＝在ACE抑制组分存在下、但不含ACE的吸光度[AU]。
用HPLC-MRM-MS定量测定肽
所有测定都在Waters Quattro-II或Quattro-Ultima三联四极质谱仪上进行。在Inertsil 5 ODS3柱(150×2.1mm，装入3μm颗粒(Chompack))上，于25℃进行LC分离，用0-50％乙腈/0.1％(v/v)TFA洗脱。为了进行分析，将5μl样品注射到柱内。过柱流速为0.2ml/min。柱后补偿总流速为0.05ml/min，含有7/3(v/v)丙酸和2-丙醇混合物。用MRM质谱、以正ESI模式分析梯度流出液。毛细管电压为4kV。电源和雾化器温度分别为100℃和250℃。干燥和雾化器气部分别为300L/h和17L/h。碰撞气体是氩气，压力为7.9e-4mbar。所分析肽的MS数据见表2。
表2：所选肽的MS参数的描述
  肽   先驱离子   锥体电压   产物离子质量结构   碰撞能量
  VPP   312.2   19   213.1PP   18
  IPP   326.2   19   213.1PP   18
  ITP   330.2   16   116.1P   11
  IIAEK   573.4   40   347.2AEK   26
  MPP   344.2   19   213.1PP   21
  SPP   300.2   18   185.1SP   14
  TPP   314.2   18   199.1TP   16
  GPR   329.2   23   175.1PR   25
  PIP   326.2   16   211.1IP   13
  PLP   326.2   16   211.1LP   13
  VF   265.1   18   72.0V   15
  FY   329.1   23   120.1F   18
  HLPLP   576.3   25   251.2HL   20
  KVLPVP   652.4   36   341.3KVL   24
  VAP   286.2   15   116.1P   13
体外胃肠消化
通过使发酵乳蛋白或水解乳蛋白经历典型的胃和小肠条件，研究肽在人胃肠道中的稳定性。通过将80ml发酵乳蛋白或水解乳蛋白溶于820ml含有2.0g NaCl、2.9g胃蛋白酶和0.45g来自米根霉(Rhizopusoryzae)的Amano脂肪酶F-AP15的水中，模拟胃条件。将该液体用HCl调至pH 3.5，用桨搅拌(50rpm)并保持在37℃达60分钟。然后，通过将9g胰酶制剂和125mg胆汁提取物加入到人工胃液中，用NaHCO3调整pH至6.8，模拟肠条件。人工肠液用桨搅拌(50rpm)并保持在37℃达120分钟。在体外胃肠消化期间的不同时间点，收集样品。收集后，将样品在95℃直接加热30分钟，然后贮藏于-20℃。
实施例1的结果见表3。
表3：经LC-MS测定，肽在暴露给人血清、HUVEC、Caco-2细胞和胃肠蛋白酶(GI条件)期间的稳定性
肽 血清 HUVEC Caco-2 GI条件   IC50Matsui(μM)   IC50EBA(μM)
  VPP   +/-   +   -   +   3   20
  IPP   +/-   +   -   +   2   12
  ITP   -   -   -   ND   10   30
  ILAEK   -   -   -   +/-   ＞20   20
  VF   +/-   -   +/-   ND   10   ＞100
  FY   +   -   +/-   ND   10   20
  HLPLP   +/-   +   +   +   17   15
  KVLPVP   -   -   -   ND   2   5
  VAP   -   -   -   ND   1   4
  GPR   -   +   -   ND   ND   ND
  KPP   ND   ND   ND   ND   50   ＞50
  CPP   ND   ND   ND   ND   4   5
  MPP   +/-   +   -   ND   7   10
  SPP   +/-   +   +   ND   ＞50   75
  TPP   +/-   +   +   ND   15   35
  PIP   -   +/-   -   ND   ND   ＞50
  PLP   -   +/-   -   ND   ND   ＞50
表3中所用符号的注解：
+＝稳定
-＝被细胞或血清快速降解
+/-＝被细胞或血清缓慢降解
ND＝未测定
表3中的结果表明，所有XPP(其中X＝C、M、S、T或K)都是中等至良好的ACE-抑制剂(低IC50值)。而且与其它被测肽相比，这些肽在经历人血清时表现出缓慢降解，而在经历HUVEC、Caco-2和胃肠酶时，它们相对稳定。

Claims (9)

1.三肽XPP和/或其盐在制备血管紧张素转化酶抑制剂中的用途，其中X＝C、M、S、T或K。
2.权利要求1的用途，其中所述三肽是XPP，其中X＝C、M、S或T。
3.权利要求2的用途，其中所述三肽是XPP，其中X＝M、S或T。
4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述血管紧张素转化酶抑制剂是功能性食品。
5.适于在人体内降低血压的食品，所述食品包含5mg/g或5mg/g以上的XPP，其中X＝C、M、S、T、K、P或A。
6.权利要求5的食品，其中XPP的量为10mg/g或10mg/g以上。
7.权利要求5或6的食品，其中所述XPP为XPP，其中X＝C、M、S或T。
8.权利要求7的食品，其中所述XPP是XPP，其中X＝M、S或T。
9.含XPP食品的制备方法，其中X＝C、M、S、T或K；所述方法包括下述步骤：
a)酶促水解包含具有序列XPP的蛋白质的底物，产生水解蛋白产物；
b)从所述水解蛋白产物中分离出富含三肽的部分；
c)将得自步骤b)的部分干燥，得到富含三肽XPP的固形物；
d)将步骤c)中制备的固形物作为制备食品的配料。
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