CN1875946A - 10－羟基喜树碱纳米粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种10－羟基喜树碱固体纳米粒及其制备方法，其特征在于包含10－羟基喜树碱、载体、稳定剂和水，其中载体选用了新辅料脂肪酸泊洛沙姆胆固醇酯(POGC)和脂肪酸PEG胆固醇酯(PEGC)，制备的纳米粒粒径≤1um，具有载药量高和稳定性好的优点。

Description

10-羟基喜树碱纳米粒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种10-羟基喜树碱纳米粒及其制备方法，其特征在于包含10-羟基喜树碱、载体、稳定剂和水，其中载体选用了新辅料脂肪酸泊洛沙姆胆固醇酯(PPGC)和脂肪酸PEG胆固醇酯(PEGP)，制备的纳米粒粒径≤1um，具有载药量高和稳定性好的优点。

背景技术

喜树碱(camptothecin)是从我国特有的珙桐科植物喜树的树干、树皮和果实中提取的一种具有抗肿瘤作用的生物碱，是拓扑异构酶I(TOPO I)抑制剂〔1～3〕。10 10-羟基喜树碱(10hydorxycamptothecin，HCPT)是喜树碱类衍生物，广泛应用于肝癌、胃癌、白血病等多种恶性肿瘤的治疗。但其特殊的理化性质：水不溶脂难溶、内酯环结构不稳定等因素，使得目前临床应用HCPT的情形并不乐观，如钠盐粉针解决了注射液的稳定性问题，但仍存在疗效降低、半衰期短、刺激性强的缺点。胶囊剂口服给药，适合于治疗胃肠道肿瘤，但给药剂量加大，毒副作用亦增加。因此要充分发挥其抗癌活性，有必要寻求一种更好的制剂。

目前有大量研究集中于新型给药系统的研制，如脂质体、脂肪乳等，但脂质体载药量小，包封率低，脂肪乳稳定性差，临床应用不便，并且适用于静脉给药的辅料种类较少，直接限制了这些新制剂的制备和应用。另外10-羟基喜树碱本身具有较强的刺激性和一定的毒副作用，在静脉内给药时，增加了不良反应的发生率，有时可引起注射疼痛等，导致病人的临床顺应性差。

以上问题的存在极大限制了10-羟基喜树碱的临床应用，这要求我们通过开发多种新剂型来增加10-羟基喜树碱的稳定性，实现对肿瘤组织的靶向性和缓释性，提高生物利用度，减少给药剂量，降低毒副作用。

聚乙二醇(PEG)为环氧乙烷和水缩聚而成的混合物，其分子量范围为1500-40000。

泊洛沙姆(Poluoshamu)商品名叫pluronic(普流罗尼)F-68。是白色或微黄色半透明蜡状固体，微有异臭。在水中和乙醇中易溶，在无水乙醇和乙酸乙酯中溶解。用途：用作表面活性剂、乳化剂、栓剂基质、赋形剂等。Poloxamer因有显著的防止溶血作用，可用于静脉注射制剂，对某些药可以起到助溶作用。

泊洛沙姆分子式：H(C2H4O)a(C3H6O)b(C2H4O)cOH，其中a和c为2～130，b为15～67，含聚氧乙烯为81.8％±1.9％。平均分子量为1000～7000的应为标示量的90.0％～110.0％。平均分子量为7000。

胆固醇又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，由留体部分和一条长的侧链组成。在纳米制剂中常作为稳定剂使用。

鉴于此，本发明组根据制剂的要求，采用了由泊洛沙姆(POL)或聚乙二醇(PEG)和胆固醇以脂肪二酸或脂肪酸酐结合的新型辅料(Poloxamer-G-Cholesterol，POGC)或(PEG-G-Cholesterol，PEGC)，并以之作为主要辅料制备了10-羟基喜树碱纳米粒(HCPT-SLN)，由于新敷料亲水端泊洛沙姆和PEG很好的乳化特性及疏水段胆固醇和10-羟基喜树碱以分子间力很好的结合，大大提高了纳米粒的载药能力，保证了药物在纳米粒中的稳定存在。

本发明采用高压乳化低温固化法，以POGC或PEGC为载体材料，制备10-羟基喜树碱纳米粒，并考察其物理稳定性，此项工作国内外目前未见报道。

发明内容

本发明10-羟基喜树碱纳米粒及其制备方法，其包含10-羟基喜树碱、载体、稳定剂和水，其重量份数为：

10-羟基喜树碱    0.01-2

载体             0.5-10

稳定剂           1.0-20

水               70-99

其中载体选择可生物降解的高分子材料修饰的胆固醇酯，其中可生物降解的高分子材料，具体指泊洛沙姆、聚乙二醇中的一种，形成的物质分别命名为脂肪酸泊洛沙姆胆固醇酯(POGC)和脂肪酸PEG胆固醇酯(PEGC)；其中脂肪酸碳原子数为2-10。

稳定剂选择卵磷脂、三脂肪酸甘油酯、单脂肪酸甘油酯、中的一种或两种以上；具体包括豆寇酸、棕榈酸、山榆酸、辛酸、癸酸、单硬脂酸甘油酯、单豆寇酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、单山榆酸甘油酯、单辛酸甘油酯、单癸酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二豆寇酸甘油酯、二棕榈酸甘油酯、二山榆酸甘油酯、二辛酸甘油酯、二癸酸甘油酯、硬脂酸三甘油酯、豆寇酸三甘油酯、棕榈酸三甘油酯、山榆酸三甘油酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯；卵磷脂包括大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、双肉豆寇磷脂酰胆碱、双肉豆寇磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油。

本发明10-羟基喜树碱纳米粒还可以含有冻干保护剂，选自葡萄糖、山梨醇、乳糖、麦芽糖、甘露醇、海藻糖及低分子右旋糖苷中的一种或一种以上。

本发明10-羟基喜树碱纳米粒，其中纳米粒的粒径≤1um。

本发明用新型辅料泊洛沙姆(POL)或聚乙二醇(PEG)和胆固醇以脂肪二酸或脂肪酸酐结合的新型辅料(Poloxamer-G-Cholesterol，POGC)或(PEG-G-Cholesterol，PEGC)其合成方法如下：

将3～10g胆固醇和0.1～1g 4-二甲胺基吡啶(DMAP)置于0.01～1ml二氯甲烷(或者DMF)中，搅拌，缓慢加入0.5～2.0g脂肪酸酐，氮气保护下反应2h，自然冷却后顺序加入20-50g聚乙二醇或100～150g泊洛沙姆和1.0～3.0g二环己基碳二亚胺(DCC)，缓慢搅拌24hr至1周，反应完成后旋转蒸发，产物以氯仿溶解，经乙醚沉淀得粗品；再经反复沉淀精制即得脂肪酸泊洛沙姆胆固醇酯或脂肪酸聚乙二醇胆固醇酯。

其中脂肪酸的碳原子数为2-10。

10-羟基喜树碱纳米粒的制备工艺：

将处方量的10-羟基喜树碱、POGC或PEGP及稳定剂加热溶融，加入适量灭菌注射用水中，搅拌使溶解；混合上述两种体系，加水至100ml，高速搅拌得初乳；通氮气条件下，将制备好的初乳用高压均质机至均质经过激光粒度仪检测符合粒度要求，调节PH值5.0～7.0，上述液体中加入处方量的冻干保护剂，搅拌溶解，除菌过滤，灌装，冷冻干燥即得。

10-羟基喜树碱纳米粒为白色疏松块状物，复溶后平均粒径控制在0.3μm以下，10-羟基喜树碱的包封率达到85％以上。

具体实施例

实施例一

组方：10-羟基喜树碱0.01～2.0g、POGC0.5～10.0g、单硬脂酸甘油酯1.0～6.0g、脂肪酸1.0～6.0g、卵磷脂2.0～6.0g、甘露醇2.0～10.0g，注射用水添至30ml。

制备方法一：

a)将单硬脂酸甘油酯1.0g、脂肪酸1.0g、卵磷脂1.0g、POGC2.0g及10-羟基喜树碱100mg加热熔融，加入处方量的注射用水(PH10-11)和甘露醇5.0g搅拌制成初乳，调节PH值4.5～8.0，再用高压均质机对初乳体系进行循环高压均质乳化至粒度符合规定。

b)上述乳剂过滤后，冷冻干燥，充氮气压盖既得。

制备方法二：

a)将单硬脂酸甘油酯3.0g、脂肪酸1.0g、卵磷脂1.0g、POGC 10.0g及10-羟基喜树碱2.0g加热熔融，加入处方量的注射用水(PH10-11)和甘露醇10.0g搅拌制成初乳，调节PH值4.5～8.0，再用高压均质机对初乳体系进行循环高压均质乳化至粒度符合规定。

b)上述乳剂过滤后，冷冻干燥，充氮气压盖既得。

实施例二

组方：10-羟基喜树碱0.01～2.0g、PEGC1.0～10.0g、单硬脂酸甘油酯1.0～6.0g、卵磷脂2.0～6.0g、甘露醇2.0～6.0g，注射用水添至30ml。

a)将单硬脂酸甘油酯1.0g、卵磷脂2.0g、PEGC6.0g及10-羟基喜树碱1.0g加热熔融，加入处方量的注射用水(PH10-11)和甘露醇5.0g搅拌制成初乳，调节PH值4.5～8.0，再用高压均质机对初乳体系进行循环高压均质乳化至粒度符合规定。

b)上述乳剂过滤后，冷冻干燥，充氮气压盖既得。

实施例三

组方：10-羟基喜树碱0.01～2.0g、POGC 1.0～8.0g、单月桂酸酸甘油酯1.0～6.0g，卵磷脂1.0～3.0g、甘露醇2.0～6.0g、低分子右旋糖苷2.0～6.0g，注射用水添至100ml。

10-羟基喜树碱0.01g、POGC0.5g、单月桂酸酸甘油酯2.0g和卵磷脂1.0g加热溶融，加入甘露醇3.0g的适量水溶液中，搅拌均匀，高速搅拌至乳滴平均粒径≤0.5微米，加入冻干保护剂低分子右旋糖苷，溶解过滤后，冷冻干燥，充氮气压盖既得。

实施例四

组方：10-羟基喜树碱0.01～2.0g、PEGC 1.0～8.0g、单癸酸甘油酯1.0～6.0g、甘露醇2.0～6.0g，海藻酸钠2.0～10.0g，注射用水添至30ml。

a)将处方量的10-羟基喜树碱1.0g、PEGC8.0g、单癸酸甘油酯2.0g加热熔融，加入处方量的注射用水和甘露醇6.0g搅拌制成初乳，调节PH值4.5～8.0，再用高压均质机对初乳体系进行循环高压均质乳化至粒度≤0.5微米；加入适量冻干保护剂海藻酸钠10.0g，过滤后，冷冻干燥，充氮气压盖既得。

实施例五(血管刺激性试验)

试验药物：按照实施例(一、二、四、五)提供方法制备，10-羟基喜树碱注射液，从市场购得，试验时用0.9％氯化钠注射液配制成5％溶液。

试验动物：健康家兔，体重2.0～2.2kg。

试验方法：取健康家兔12只，雌雄各半。按体重及性别分组，0.9％氯化钠注射液为对照组、10-羟基喜树碱注射液组和实施例(一、二、三、四)组，每组2只，于家兔左耳耳缘按临床给药浓度静脉滴注10ml/kg，滴注速度1ml/分，每日1次，连续7日。对照组同法静脉滴注0.9％氯化钠注射液。除每次给药时及给药后观察给药局部表现外，于末次静脉滴注后剪下药侧耳廓，常规固定后，在距静脉滴注入针近心端1cm处，每隔1cm切取0.5cm宽标本，共取3块标本。切片染色，进行镜下病理观察，结果见下表：

                        血管刺激性试验

项目	兔耳廓血管扩张	红肿	有无炎细胞浸润
				0.9％氯化钠注射液对照组	-	-	-
10-羟基喜树碱注射液	++	++	+
				实施例一	-	-	-
实施例二	-	-	-
				实施例三	-	-	-
实施例四	-	-	-

备注：“++”严重、“+”少许、“-”无

以上试验结果表明，本发明制备的制剂具有刺激性小的优点。

Claims (7)

1、一种10-羟基喜树碱纳米粒及其制备方法，其特征在于包含10-羟基喜树碱、载体、稳定剂和水，其重量份数为：

10-羟基喜树碱    0.01-2

载体             0.5-10

稳定剂           1.0-20

水               70-99。

2、根据权利要求1中的10-羟基喜树碱纳米粒中的载体，其特征在于选择可生物降解的高分子材料修饰的胆固醇酯；具体选择泊洛沙姆和聚乙二醇中的一种，形成的物质分别为脂肪酸泊洛沙姆胆固醇酯(POGC)和脂肪酸聚乙二醇胆固醇酯(PEGC)，其中脂肪酸碳原子数为2-10。

3、根据权利要求1中的10-羟基喜树碱纳米粒中的稳定剂，其特征在于选择卵磷脂、三脂肪酸甘油酯、单脂肪酸甘油酯和二脂肪酸甘油酯中的一种或一种以上。

4、根据权利要求1中的10-羟基喜树碱纳米粒，其特征在于还可以包含冻干保护剂：葡萄糖、山梨醇、乳糖、麦芽糖、甘露醇、海藻糖及低分子右旋糖苷中的一种或一种以上。

5、根据权利要求1中的10-羟基喜树碱纳米粒，其制备方法为：将处方量的10-羟基喜树碱、POGC或PEGC及稳定剂加热溶融，加入适量灭菌注射用水，搅拌使溶解；混合上述两种体系，加水至100ml，高速搅拌得初乳；通氮气条件下，将制备好的初乳用高压均质机至经过激光粒度仪检测符合粒度≤1um，除菌过滤，灌装，冷冻干燥即得。

6、根据权利要求3中的脂肪酸，其特征在于选择饱和脂肪酸，具体包括豆寇酸、棕榈酸、山榆酸、辛酸、癸酸、单硬脂酸甘油酯、单豆寇酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、单山榆酸甘油酯、单辛酸甘油酯、单癸酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、二豆寇酸甘油酯、二棕榈酸甘油酯、二山榆酸甘油酯、二辛酸甘油酯、二癸酸甘油酯、硬脂酸三甘油酯、豆寇酸三甘油酯、棕榈酸三甘油酯、山榆酸三甘油酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯。

7、根据权利要求3中的卵磷脂，其特征是所述的卵磷脂包括大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、双肉豆寇磷脂酰胆碱、双肉豆寇磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油。