CN1868268A - 一种提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法 - Google Patents

一种提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法。本发明通过改善奶牛饲养方法来提高牛奶中CLA含量。与其他方法不同的是，本发明不仅优化了饲料配方，提高了奶牛对亚麻酸、亚油酸等的摄入量，并向奶牛灌注一定量的混合共轭亚油酸，以强化奶牛对共轭亚油酸的转化。采用本发明方法饲料的奶牛所生产的牛奶，不仅富含(9c，11t)－CLA，而且富含(10t，12c)－CLA，并且在其他营养成分不变的情况下乳脂含量明显下降，具有显著的应用价值。

Description

一种提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法
技术领域
本发明涉及一种提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法。
背景技术
共轭亚油酸(CLA)是十八碳共轭二烯酸的异构体的总称，是脂肪酸亚油酸的次生衍生物，其共同特征为2个碳碳双键直接通过1个碳-碳单键连接，其间没有被亚甲基隔开。在共轭亚油酸(CLA)中，两个双键在碳链上可有多种位置，主要有碳8-碳10，碳9-碳11，碳10-碳12和碳11-碳13(两个双键在碳链上的碳原子序号)等几种，碳碳双键上又存在cis(顺)-cis(顺)，cis(顺)-trans(反)、trans(反)-cis(顺)和trans(反)-trans(反)等4种构象异构体，因此CLA的种类十分丰富(16种)。在这些异构体中，对人体真正有实际功效的共轭亚油酸CLA异构体主要是(9c，11t)-CLA((9顺，11反)-十八碳二烯酸)和(10t，12c)-CLA((10反，12顺)-十八碳二烯酸)两种。研究表明，共轭亚油酸(CLA)具有多种生物学功能：类似β-兴奋剂的营养再分配作用，可以降低体脂而增加胴体肌肉含量；增加免疫因子IL-2的分泌量和促进T细胞活性，增强免疫力，同时并被证实可以抑制上皮细胞、乳腺、卵巢、肺部、皮肤、大肠、胃部、结肠及前列腺等组织癌细胞的增长，对乳腺癌的抑制效果特别明显；共轭亚油酸(CLA)对动物的生长发育具有促进作用和改善骨组织代谢的作用；共轭亚油酸(CLA)还具有调节血糖、防治糖尿病，调节血脂和血压、降低胆固醇，抗动脉粥样硬化，美容护肤，调节人体新陈代谢等作用。两种共轭亚油酸异构体的功效有所不同，其中(9c，11t)-CLA侧重于提高免疫力、抗癌功效，(10t，12c)-CLA侧重于降脂减肥、提高胴体肌肉含量功效。
目前，通过改善饲料配方可提高牛奶中CLA含量，但只是通过提高饲料中的亚麻酸、亚油酸含量来提乳中共轭亚油酸(CLA)含量，结果是只能提高(9c，11t)-CLA的含量，而对另一种生物功效更显著的异构体(10t，12c)-CLA却没有明显提高其含量，导致产品只具有CLA部分功效。
发明内容
本发明的目的是提供一种能直接提高所产牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法。
本发明所提供的提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法，其中，
1)在奶牛泌乳期，按精饲料：粗饲料重量比40∶60-60∶40喂养奶牛，并且，每头奶牛每天喂养如下组分：葵花油150-250g、鱼油150-250g、亚油酸50-250g、亚麻酸20-100g、活性酵母菌粉20-100g；
所述粗饲料的重量百分组成为：青绿牧草50-80％，苜蓿青贮5-20％，青干草10-30％，纤维长度≤15cm；
所述精饲料的重量百分组成为：玉米青贮30-50％，全脂大豆15-25％，麦麸15-25％，骨粉1-3％，血粉1-3％，维生素0.5-2％，矿物质0.5-2％，鱼粉2-5％、碳酸氢钠0.5-2％，碳酸氢钙0.5-2％，硫酸钠0.5-2％，双乙酸钠0.1-1％，磷酸脲0.1-1％；
2)在奶牛用食后，每头奶牛每天灌注混合共轭亚油酸100-250g，维生素E醋酸酯1-2g，维生素C 10-15g；所述混合共轭亚油酸中(9c，11t)-CLA与(10t，12c)-CLA的重量比为1∶0.5-2。
在奶牛饲养过程中，牛舍温度为10-18℃；采用白色荧光灯照明，使白昼和黑夜按16小时和8小时的比例循环以增加光照。
在本发明中，精饲料的重量百分组成优选为：玉米青贮43％，全脂大豆23％，麦麸22％，骨粉2％，血粉2％，维生素1％，矿物质1％，鱼粉2.5％、碳酸氢钠1.5％，碳酸氢钙1％，硫酸钠0.5％，双乙酸钠0.3％，磷酸脲0.2％
在饲养过程中，优选的：在奶牛泌乳期的开始阶段，精饲料∶粗饲料重量比为55∶45；泌乳早期的中后段，精饲料∶粗饲料重量比为60∶40；泌乳中期后，精饲料∶粗饲料重量比为40∶60；每头奶牛每天喂养量为：葵花油150-250g、鱼油150-250g、亚油酸150-250g、亚麻酸30-80g、活性酵母菌粉50g。
优选的，每头奶牛每天灌注混合共轭亚油酸150-250g，维生素E醋酸酯1.5g，维生素C 12g；所述混合共轭亚油酸中(9c，11t)-CLA与(10t，12c)-CLA的重量比为1∶1。
本发明通过改善奶牛饲养方法来提高牛奶中CLA含量。与其他方法不同的是，本发明不仅优化了饲料配方，提高了奶牛对亚麻酸、亚油酸等的摄入量，并向奶牛灌注一定量的混合共轭亚油酸，以强化奶牛对共轭亚油酸的转化。采用本发明方法饲料的奶牛所生产的牛奶，不仅富含(9c，11t)-CLA，而且富含(10t，12c)-CLA，并且在其他营养成分不变的情况下乳脂含量明显下降，具有显著的应用价值。
附图说明
图1为牛奶中CLA的气相色谱图。
具体实施方式
实施例1、奶牛饲养
1、生产用牛的筛选(来自蒙牛公司澳亚牧场)
品种：澳大利亚荷斯坦
泌乳阶段：泌乳早后期——泌乳中期，即分娩后60——210日龄
泌乳量：≥7500kg/年
体重：540±20kg
乳脂中CLA本底含量：≥5.5mg/g乳脂
牛龄：大于三岁，在三至六个泌乳期之间
2、饲养环境
1)饮水：在舍内外提供充足、清洁的饮水，水温控制在21-27℃；同时在运动场适当放粗料和矿物盐；
2)牛舍温度：10-18℃；
3)照明：采用白色荧光灯照明，使白昼和黑夜按16小时和8小时的比例循环以增加光照；
4)运动：适量加强运动，有足够运动空间。
3、饲养过程：
粗饲料(重量百分比)：优质青绿牧草(70％)，亚麻酸含量≥，苜蓿青贮(10％)、青干草(黑麦草、苜蓿、玉米秸，20％)、纤维长度≤15cm。
精饲料(重量百分比)：玉米青贮43％，全脂大豆23％，麦麸22％，骨粉2％，血粉2％，维生素1％，矿物质1％，鱼粉2.5％、碳酸氢钠1.5％，碳酸氢钙1％，硫酸钠0.5％，双乙酸钠0.3％，磷酸脲0.2％
1)精粗饲料比：泌乳期开始阶段，精粗饲料重量比为55∶45(精∶粗)，泌乳早期的中后段达到60∶40(精∶粗)，根据食欲精料逐渐增加。但每天精料增加不超过0.5公斤，到泌乳中期后逐渐下调至40∶60(精∶粗)；同时，每头奶牛每天喂养如下组分：葵花油150g、鱼油150g、亚油酸150g、亚麻酸50g、活性酵母菌粉50g；
2)日粮摄入量：饲料总量最高时不超过42公斤/头·天，泌乳早期干物质占奶牛体重的3.5％以上，泌乳中期日粮干物质占体重的3％～3.2％。
在上述饲养过程中，全脂大豆、葵花油、鱼油、亚油酸、亚麻酸等可提高牛对不饱和脂肪酸(PUFA)的摄入量，以提高牛体中合成CLA的前体含量；提高饲料中牧草含量能够提高牛乳中CLA含量；为了防止瘤胃酸中毒，饲料中添加有缓冲剂碳酸氢钠、碳酸氢钙调节pH值以防瘤胃酸中毒；全脂大豆膨化，有利于加快其中脂肪酸在瘤胃中的释放；在饲料中补充硫酸钠，硫酸钠的硫元素能积极参与蛋白质和脂肪代谢的氧化还原过程，能促使瘤胃内纤毛虫加速繁殖，还可参与有毒酚化合物形成轭合物(苯硫酸)而起到解毒作用，从而改善牛瘤胃中微生态环境，促进其中厌氧溶纤维丁酸弧菌活性，提高CLA转化效率；另外，饲料中加有硫酸钠、双乙酸钠、磷酸脲，能提高奶牛奶产量。
4、灌注共轭亚油酸
在奶牛用食后，每头奶牛每天灌注混合共轭亚油酸((9c，11t)-CLA与(10t，12c)-CLA的重量比为1∶1)200g，分两次灌注，维生素E醋酸酯1.5g，VC 12g(提供还原剂，降低体内不饱和脂肪酸尤其共轭亚油酸的氧化)。
将经过上述方法饲养的奶牛挤奶，挤奶时播放音乐，舒缓奶牛心情，所得原料奶按照常规方法处理，得到牛奶成品。
参照GB/T17377-1998动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析方法进行测定，将样品中脂肪提取后转化为脂肪酸甲酯，进行气相色谱测定，按峰面积归一化法计算其结果。气相色谱图如图1所示，结果如表1，表明在所产牛奶中(9c，11t)-CLA和(10t，12c)-CLA两种异构体的含量大致相当。
表1牛奶中CLA气相色谱含量
  峰号   峰名   保留时间   峰高   峰面积   含量(mg/g fat)
  57   (9c，11t)-CLA   64.79   1880.99   12944.5   14.00
  58   (10t，12c)-CLA   65.29   775.306   8200.852   9.00
作为对照：
对照组1：从奶户随机挑选健康奶牛20头，按传统方法饲养。
对照组2：从澳亚牧场生产用牛中随机抽取20头，按传统方法饲养。
发明组：从澳亚牧场生产用牛中随机抽取20头，以本发明的方法饲养。
测定所产牛奶中蛋白含量、乳脂率以及CLA的含量，结果如表2。
表2牛奶中蛋白含量、乳脂率以及CLA的含量表
  蛋白含量(％)   乳脂率(％)   (9c，11t)-CLAmg/g乳脂   (10t，12c)-CLAmg/g乳脂
  对照组1(平均值) 2.89 3.75 2.66 0.14
  对照组2(平均值) 3.65 4.62 3.91 0.91
  发明组(平均值) 3.68 3.40 14.00 9.00
结果表明，采用本发明方法饲养奶牛，能显著增加所产牛奶中具有良好生物学功能的共轭亚油酸(CLA)的含量，100g牛奶中CLA总量达到78.20(40-80)mg，是普通牛奶的7-8倍，远远高于市面上所有同类产品；而且，还提高了牛奶中各种有效成分的比例，功能更强。
实施例2、本发明含有共轭亚油酸的牛奶的功能性实验
一、降脂功效测试
以实施例1的CLA奶为样品
1.1试验动物
雄性二级昆明小白鼠(医动字第01-3001号)，日龄三周，体重为12.7±1.0克，50只。中国医学科学院医学试验动物研究所试验动物繁殖场提供。实验大鼠饲养于湿度为50-60％，温度为18-22℃舍饲笼养条件下，每笼4只，自由进食标准基础颗粒饲料，自由饮水。
1.2剂量设计
本样品人体推荐剂量为每日500克/60公斤，本次实验不设立低、中、高三个剂量组，仅采用相同的摄入剂量，空白对照组以普通灭菌牛乳灌胃。
1.3实验小鼠测试样品的给予以及样本采集：
设定两组：测试组和对照组，每组25只，每只小鼠每天灌注三次奶，每隔8小时一次，每次灌注量按1ml/10g(鼠体重)比例。对照组灌注普通牛奶，测试组灌注测试样品(CLA牛奶)。连续灌注三周后，禁食12小时，处理小鼠，测体重、脂肪含量、蛋白含量。
1.4仪器
精密分析天平：MD100-2
血脂自动分析仪：贝克曼CX7系列生化全自动分析仪
台式电子秤：100g/0.5g，杭州无线电二厂生产
双目多功能显微镜：AD150CNE-T661，美国进口
1.5实验数据处理：
用SPSS10.0统计软件进行数据的统计分析，各项测定指标均采用均数±标准差表示。采用单因素方差分析比较各组间统计学差异，用LSD(最小显著差异法)进行组间比较，选择P＜0.05作为检验统计显著性的临界值。结果如表2。
表2CLA奶组与对照组对小鼠脂肪的影响结果
 实验平均体重g   脂肪含量％   蛋白含量％
  对照组  32.4±1.1   10.13±0.57   17.76±0.30
  CLA奶  32.2±0.8   9.54±0.40   17.88±0.14
P＜0.05与普通灭菌乳对照组相比(经方差分析)
结果表明，本发明的产品具有降脂的作用。
二、骨密度增强效果测试
2.1实验动物：
本次实验选择清洁级雌性SD大鼠104只，体重为180-210克，由北京大学医学部实验动物中心提供。实验大鼠饲养于湿度为30-50％，温度20-25℃舍饲笼养条件下，每笼4只，自由进食标准基础颗粒饲料，自由饮水。
2.2剂量设计：
本样品人体推荐剂量为每日250克/60公斤，本次实验不设立低、中、高三个剂量组，仅采用相同的摄入剂量，空白对照组以普通灭菌牛乳灌胃。
2.3实验样品制备：
准确量取100毫升的液态奶，加蒸馏水配制成200毫升即为剂量组的供试液。
2.4实验大鼠测试样品的给予以及样本采集：
将已经配制的测试实验液体，按照20毫升/100克BW灌胃。每天一次，连续灌胃93天。灌胃93天以后，禁食12小时，处理大鼠，取大鼠双侧股骨和胫骨，剔净附着物，分别置于自封袋中，编号，等待测定骨密度。
2.5主要实验仪器与设备：
双能X线骨密度仪：EDXA美国Norland XR-36型。精密分析天平：MD100-2。
2.6实验观察指标与方法：
股骨密度和骨矿物质含量：采用双能X线骨密度仪。分别测定股骨远心端、股骨干中段和股骨近心端三个部位，计算股骨密度(g/cm2)和骨矿物质含量(g)。
2.7实验数据处理：
用SPSS10.0统计软件进行数据的统计分析。各项测定指标均采用均数±标准差表示。采用单因素方差分析比较各组间统计学差异，用LSD(最小显著差异法)进行组间比较，选择P＜0.05作为检验统计显著性的临界值。结果如表3。
表3对照组与测试液体对大鼠股骨密度测定结果(g/cm2)
P＜0.05与正常灭菌乳对照组相比(经方差分析)
结果表明，本发明的CLA奶具有增加骨骼密度的作用。
三、抗癌效果测试
3.1样品
以实施例1的富含CLA牛奶为样品
3.2样品
选择清洁级雌性SD大鼠100只，体重为180-210克。实验大鼠饲养于湿度为30-50％，温度20-25℃舍饲笼养条件下，每笼4只，自由进食标准基础颗粒饲料，自由饮水。
3.3剂量设计
本样品人体推荐剂量为每日250克/60公斤，本次实验不设立低、中、高三个剂量组，仅采用相同的摄入剂量，空白对照组以普通灭菌牛乳灌胃。
3.4实验大鼠测试样品的给予以及样本采集：
设定两组：测试组和对照组，每组50只，每只大鼠每天灌注三次奶，每隔8小时一次，每次灌注量按10ml/100g(鼠体重)比例。对照组灌注普通牛奶，测试组灌注测试样品(CLA牛奶)。以DMBA10mg/100g体重在其右侧臀部皮下一次性注射，建立大鼠乳腺癌模型。灌注实验25周(实验中因癌导致死亡的全部纳入实验结果统计)。
3.4主要试剂的配制
DMBA(瑞士Fluka公司产品)，取DMBA 1g加入5ml吐温280中，置于60℃恒温水浴箱使之溶解，加入注射用水至100ml，经超声震荡助溶，终浓度为10mg/ml。
3.5检测指标
1)乳腺肿瘤出现的时间及肿瘤诱发率：实验开始后每周2次检查每只大鼠每个乳腺肿瘤出现的情况，记录大鼠乳腺肿瘤诱发的潜伏期。每组荷瘤大鼠数与该组大鼠总数之比，即为该组乳腺肿瘤的诱发率。
2)组织学观察于实验的第25周，停药2周内，经阴道涂片检查证实为间情期，用8％硫化钠(Na2S)溶液脱毛，将每个乳腺连同周围皮肤、皮下组织解剖，自乳头部对半切开乳腺作大体观察，计数肿瘤数量；将所取乳腺组织行常规石蜡包埋、切片、HE染色。乳腺癌诊断参考实验性大鼠乳腺癌分类诊断标准。
3.6实验数据处理：
用SPSS10.0统计软件进行数据的统计分析。各项测定指标均采用均数±标准差表示。采用单因素方差分析比较各组间统计学差异，用LSD(最小显著差异法)进行组间比较，选择P＜0.05作为检验统计显著性的临界值。结果如表4。
表4对照组和测试组抗肿瘤的结果
  肿瘤发病率％   瘤数/鼠
  对照组   96   6.3±0.6
  测试组   90   5.2±0.4
P＜0.05与正常灭菌乳对照组相比(经方差分析)
结果表明，本发明的CLA奶具有抗癌的作用。

Claims (5)

1、一种提高牛奶中共轭亚油酸含量的奶牛饲养方法，其特征在于：
1)在奶牛泌乳期，按精饲料：粗饲料重量比40∶60-60∶40喂养奶牛，并且，每头奶牛每天喂养如下组分：葵花油150-250g、鱼油150-250g、亚油酸50-250g、亚麻酸20-100g、活性酵母菌粉20-100g；
所述粗饲料的重量百分组成为：青绿牧草50-80％，苜蓿青贮5-20％，青干草10-30％，纤维长度≤15cm；
所述精饲料的重量百分组成为：玉米青贮30-50％，全脂大豆15-25％，麦麸15-25％，骨粉1-3％，血粉1-3％，维生素0.5-2％，矿物质0.5-2％，鱼粉1-5％、碳酸氢钠0.5-2％，碳酸氢钙0.5-2％，硫酸钠0.5-2％，双乙酸钠0.1-1％，磷酸脲0.1-1％；
2)在奶牛用食后，每头奶牛每天灌注混合共轭亚油酸100-250g，维生素E醋酸酯1-2g，维生素C10-15g；所述混合共轭亚油酸中(9c，11t)-CLA与(10t，12c)-CLA的重量比为1∶0.5-2。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：奶牛饲养过程中，牛舍温度为10-18℃；采用白色荧光灯照明，使白昼和黑夜按16小时和8小时的比例循环以增加光照。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述精饲料的重量百分组成为：玉米青贮43％，全脂大豆23％，麦麸22％，骨粉2％，血粉2％，维生素1％，矿物质1％，鱼粉2.5％、碳酸氢钠1.5％，碳酸氢钙1％，硫酸钠0.5％，双乙酸钠0.3％，磷酸脲0.2％。
4、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：在奶牛泌乳期的开始阶段，精饲料：粗饲料重量比为55∶45；泌乳早期的中后段，精饲料：粗饲料重量比为60∶40；泌乳中期后，精饲料：粗饲料重量比为40∶60；每头奶牛每天喂养量为：葵花油150-250g、鱼油150-250g、亚油酸150-250g、亚麻酸30-80g、活性酵母菌粉50g。
5、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：每头奶牛每天灌注混合共轭亚油酸150-250g，维生素E醋酸酯1.5g，维生素C12g；所述混合共轭亚油酸中(9c，11t)-CLA与(10t，12c)-CLA的重量比为1∶1～2。
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