CN1849329A - Cngh0010特异性的多核苷酸、多肽、抗体、组合物、方法和用途 - Google Patents

Cngh0010特异性的多核苷酸、多肽、抗体、组合物、方法和用途 Download PDF

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Abstract

新的多肽(CNGH0010)和抗体，包括对至少一种这样的CNGH0010多肽、其变体或片段特异性的特定部分或变体，以及能编码这种CNGH0010多肽和抗体的核酸，互补的核酸，载体，宿主细胞，和制备和使用它们的方法，可以用于治疗性和诊断性制剂、施用和装置中。前述的多肽可以用于生产人、灵长类动物、啮齿动物、哺乳动物、嵌合的、人源化的和/或CDR－移植的抗－CNGH0010抗体。CNGH0010多肽和抗体可以用于调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种CNGH0010－相关的疾病。这种疾病可以包括但不限于，牛皮癣、类风湿性关节炎、肺气肿、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、炎性肠疾病(包括Crohn氏病和溃疡性结肠炎)、不同类型的皮炎(包括过敏性皮炎、接触性皮炎)、光化性角化病、伤口愈合、瘢痕形成、各种肾病、各种呼吸疾病、各种生殖器病例如子宫内膜异位、黑素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和过度增殖病。

Description

CNGH0010特异性的多核苷酸、多肽、抗体、组合物、方法和用途
                    发明背景
A.发明领域
本发明涉及CNGH0010多肽、其变体和片段、和对它们特异性的抗体和抗独特型抗体，以及能编码这样的CNGH0010多肽、变体、片段、抗体的核酸，互补的核酸，载体，宿主细胞，和制备和使用它们的方法，包括诊断和治疗制剂、施用和装置。
B.背景和相关技术
牛皮癣是一种遗传性的、多因子的、慢性炎性皮肤病，在美国人口中的流行率为2.6％。该病的特征在于显著的角质细胞过度增殖(hyperproliferation)，这导致了临床上观察到的快速的表皮代谢和增厚的、鳞状的红斑。该病的其它突出的组织病理学特征是真皮和表皮中的细胞因子生产、成纤维细胞活化、血管扩张和白细胞浸润的改变。由活化的真皮中细胞和免疫细胞生产细胞因子的调节异常似乎在介导与牛皮癣有关的炎性事件中起重要作用。为此，以前已经在牛皮癣中描述了许多基因和/或蛋白表达的变化，且还已经发现一些这样的基因和/或蛋白与其它炎性疾病有关。它们包括促炎细胞因子例如IL-1和TNFα、粘附分子例如细胞间粘附分子1(ICAM1)和血管粘附分子1(VCAM1)、趋化因子和防卫素。近来，已经将基因表达微阵列技术用于以更综合的规模描绘正常相对于和牛皮癣病变的皮肤的基因表达模式特征，且已经提供了对牛皮癣的发病机理的新见解。
cDNA微阵列技术能提供在一个杂交测定中同时测量数千个基因的表达水平的形式。它也是自动化的、高通量的形式。更重要的是，微阵列技术可以用于发现新基因、定量和分析基因表达和确定未知功能的基因的功能性。完成了人基因组的测序后，现在迅速地实现了新基因的鉴别和克隆。但是，对这些基因是否编码新蛋白的理解和对这些新蛋白的功能的进一步鉴别，并未进展得如此迅速。该障碍已经成为将高通量cDNA微阵列技术用于设计周到的实验装置中、以发现新的蛋白编码基因或具有新功能的基因的一个主要原因，所述的基因可以随后成为多种人疾病的潜在治疗靶。
因此，需要提供新的多肽、多核苷酸、抗体或其片段和它们的与疾病和状况有关的应用，以及对已知多肽、多核苷酸、抗体或其片段的改进。
发明概述
本发明涉及分离的具有SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个所示序列的CNGH0010多肽，其变体(例如基于下表2所述的差别外显子剪接的那些)和片段。本发明的另一个方面是分离的包含SEQ IDNO：2、4、6、8和10中的一个所示的序列的多核苷酸，其变体(例如，基于下表2所述的差别外显子剪接的那些)和片段和互补序列。本发明的另一个方面是分离的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个所示的氨基酸序列的多核苷酸，其变体(例如，基于下表2所述的差别外显子剪接的那些)和片段和互补序列。
本发明也涉及分离的多肽、其变体或片段，所述多肽与SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一个具有至少70％、优选75％、80％、90％、95％、99％或100％的氨基酸序列同一性；分离的多核苷酸、其变体、互补序列或片段，所述多核苷酸与SEQ ID NO：2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一个具有至少70％、优选75％、80％、90％、95％、99％或100％的核酸序列同一性；和分离的多核苷酸和其变体、互补序列或片段，所述多核苷酸与能编码SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一个的多核苷酸具有至少70％、优选75％、80％、90％、95％、99％或100％的核酸序列同一性。
本发明也提供了分离的核酸分子，其能杂交(a)能编码多肽的核酸分子、其变体和片段，所述的多肽与SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个的氨基酸序列具有至少70％的氨基酸序列同一性，或(b)核酸分子、其变体和片段和互补核酸，所述核酸分子与SEQ ID NO：2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一个具有至少70％的序列同一性。本发明还提供了包含能编码多肽的核酸分子的重组载体，含有这样的核酸和/或重组载体的宿主细胞，以及制备和/或使用这样的核酸、载体和/或宿主细胞的方法。
在另一个方面，本发明涉及抗体和抗体片段，其能结合(a)多肽或变体，所述多肽与SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个的氨基酸序列的全部或部分具有至少70％的氨基酸序列同一性，或(b)由多核苷酸编码的多肽或变体，所述的多核苷酸与SEQ ID NO：2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一个的全部或部分具有至少70％的核酸同一性。另外，本发明包含抗体组合物、制剂、装置和转基因的小鼠和植物。本发明也提供了用于生产和表征人、灵长类动物、啮齿动物、哺乳动物、嵌合的、单链的、人源化的和/或CDR-移植的抗-CNGH0010抗体、免疫球蛋白、其切割产物和其它特定部分和变体的方法。本发明还提供了抗本发明的至少一种CNGH0010抗体的至少一种CNGH0010抗独特型抗体。
可以将能编码CNGH0010多肽或其片段的核酸序列可操作地连接到能编码异源氨基酸序列的核酸序列上，以形成融合蛋白。另一个实施方案是mimetibody，其包含至少一个融合到至少一部分免疫球蛋白区域上的CNGH0010多肽的片段。优选的mimetidoby包含至少一个CH3区域，后者直接连接至少一个CH2区域，后者直接连接至少一个铰链区或其片段，后者任选地直接连接至少一部分V区域，后者直接连接任选的连接序列，后者直接连接至少一个CNGH0010多肽片段，后者还任选地直接连接至少一个可变抗体序列的至少一部分。在其它优选的实施方案中，免疫球蛋白是IgG1或IgG4。
本发明的另一方面提供了包含CNGH0010多核苷酸的重组表达载体。在另一个实施方案中，本发明提供了分离的含有这样的载体和/或CNGH0010多核苷酸的宿主细胞，例如哺乳动物的和非哺乳动物细胞。本发明也提供了生产CNGH0010多肽的方法，它通过在合适的培养基中培养本发明的含有能编码CNGH0010多肽的重组表达载体的宿主细胞来实现，从而生产该多肽。
本发明也提供了至少一种在宿主细胞中表达CNGH0010多肽、抗-CNGH0010抗体或CNGH0010抗独特型抗体的方法，其包括，在能以可检测的和/或可回收的量表达至少一种这样的CNGH0010多肽、抗-CNGH0010抗体或CNGH0010抗独特型抗体的条件下，培养本文所述的宿主细胞。
在另一方面，本发明提供了包含与异源氨基酸序列融合的多肽的融合蛋白，所述多肽与SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个氨基酸序列具有至少70％、优选75％、80％、90％、95％、99％或100％的氨基酸序列同一性。
本发明也提供了至少一种组合物，其包含(a)如本文所述的分离的CNGH0010多核苷酸、多肽、多肽激动剂或拮抗剂、抗体和/或抗独特型抗体；和(b)合适的载体或稀释剂。根据已知的载体或稀释剂，载体或稀释剂可以任选地是药学上可接受的。该组合物还可以任选地包含至少一种其它的化合物、蛋白或组分。
本发明也涉及治疗和/或诊断CNGH0010相关疾病的方法，所述疾病例如但不限于，牛皮癣、类风湿性关节炎、肺气肿、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、炎性肠疾病(包括Crohn氏病和溃疡性结肠炎)、不同类型的皮炎(包括过敏性皮炎、接触性皮炎)、光化性角化病、伤口愈合、瘢痕形成、各种肾病、各种呼吸疾病、各种生殖器病例如子宫内膜异位、黑素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和过度增殖病。在优选的实施方案中，CNGH0010相关病是上皮相关病或状况，从而该疾病或状况会影响上皮细胞和有关细胞，所述疾病或状况包括但不限于，牛皮癣、炎性肠疾病(包括Crohn氏病和溃疡性结肠炎)、不同类型的皮炎(过敏性皮炎、接触性皮炎)、光化性角化病、伤口愈合、瘢痕形成、不同的肾病、不同的呼吸疾病、不同的生殖器病例如子宫内膜异位、黑素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、肺气肿、Grave氏病、糖尿病、天疱疮、大疱性类天疱疮，疱疹、线性IgA病、药疹、大疱性表皮松解、口炎、口疮性溃疡、消化性溃疡、胃息肉病、慢性阻塞性肺病、支气管扩张、囊性纤维化、肾囊性病、膀胱炎和其它炎性疾病和过度增殖病。该方法使用(1)分离的多肽、其变体、衍生物和片段，所述多肽包含：至少一个选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的序列，(2)分离的多核苷酸、其变体、衍生物和片段和互补序列，所述多核苷酸包含：至少一个SEQ ID NO：2、4、6、8和10的序列，(3)分离的由多核苷酸编码的多肽、其变体和片段，所述的多核苷酸包含：至少一个SEQ ID NO：2、4、6、8和10的序列，和(4)这种多肽和核苷酸的激动剂和拮抗剂，来诊断和/或治疗炎性和过度增殖病和状况。本发明也提供了使用CNGH0010激动剂或拮抗剂、抗-CNGH0010抗体和/或CNGH0010抗独特型抗体治疗和/或诊断CNGH0010相关疾病的方法。
本发明还提供了本文所述的任何发明。
附图简述
图1显示了CNGH0010基因的基因组结构，外显子由垂直线表示，且转录起始位点由弯曲箭标表示。
图2显示了使用来自A431细胞的RNA，通过RT-PCR确定的相对转录物水平。
图3显示了在由CNGH0010转录物编码的氨基酸的表达数据和分析的基础上预测的蛋白结构域。
图4显示了在还原的和非还原的样品中的HEK293细胞中表达的CNGH0010.2的SDS-PAGE分析。
发明描述
如本文所使用的，“CNGH0010多肽或蛋白”或“本发明的多肽或蛋白”包含分离的多肽、其变体、衍生物和片段，所述多肽包含：至少一个选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的序列。“CNGH0010核酸、多核苷酸或基因”或“本发明的核酸、多核苷酸或基因”指分离的多核苷酸、其变体、衍生物和片段和互补序列，所述多核苷酸包含：至少一个SEQ ID NO：2、4、6、8和10的序列。
通过使用RACE、RT-PCR和RNA印迹技术，已经在上皮细胞类型中鉴别出了能编码这些变体的CNGH0010蛋白和核酸的剪接变体。鉴别出了基因组CNGH0010 DNA序列(SEQ ID NO：1)的外显子和非翻译区(表1)。如表2所示，CNGH0010基因具有多个可能的变体，其原因是不同的转录起始和终止位点，即可变剪接。主要变体是标记的CNGH0010.1、CNGH0010.2、CNGH0010.3、CNGH0010.4和CNGH0010.5(分别由SEQ ID NO：2、4、6、8和10(核酸)和3、5、7、9和11(氨基酸)表示)。本发明的其它变体由外显子的不同组合所包括，如在基因组序列和RT-PCR产物的分析中所看到的。这在表2中得到了证实，如通过可以加入编码序列或从中删除的外显子所显示的。
存在于A431细胞中的CNGH0010转录物的RT-PCR分析表明，CNGH0010.1转录物关于有或没有至少外显子11和20存在是异质的，而CNGH0010.2转录物关于外显子9具有异质性。同样，CNGH0010.4转录物关于有或没有外显子9、10、11和12存在是异质的。
CNGH0010分子与细胞外基质分子(胶原)和细胞因子(脂联素(adiponectin))的相似性表明，它们可以参与调节细胞-细胞或细胞-基质相互作用，或者结合或影响细胞因子与受体的结合。二种类型的活性最终都会影响细胞和组织的增殖、迁移和分化状态。因此，本发明的蛋白和多核苷酸代表着使用单克隆抗体、合成多肽、小分子药物或其它天然的或合成的药物的治疗性干扰的理想靶。
因此，本发明提供了鉴别为CNGH0010蛋白和基因的新的氨基酸和核酸序列。该序列包含分离的多肽，其包含具有SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个所示的序列的多肽或其变体；分离的多核苷酸，其包含具有SEQ ID NO：2、4、6、8和10中的一个所示的序列的多核苷酸或互补序列；分离的多核苷酸，其包含能编码SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个所示的氨基酸序列的多核苷酸或互补序列；分离的多肽，其包含与SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一个具有至少70％的氨基酸序列同一性的多肽或其变体；分离的多核苷酸，其互补序列或变体，所述多核苷酸与SEQ ID NO：2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一个具有至少70％的核酸序列同一性；分离的多核苷酸、其互补序列或变体，所述多核苷酸与能编码SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一个的多核苷酸具有至少70％的核酸序列同一性；和分离的核酸分子或互补核酸，所述核酸分子能杂交能编码多肽的核酸分子，所述的多肽与SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的一个氨基酸序列具有至少70％的氨基酸序列同一性，能杂交与SEQ ID NO：2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一个具有至少70％的序列同一性的核酸分子；和这些多肽和多核苷酸序列的片段。
如本文所使用的，“同一性”如本领域已知的，是2个或更多个多肽序列或2个或更多个多核苷酸序列之间的关系，如通过对比序列所确定的。在本领域中，“同一性”也指多肽或多核苷酸序列之间的序列相关性程度，如通过这些序列链直接的匹配所确定的。通过已知的方法，可以容易地计算出“同一性”和“相似性”，所述方法包括但不限于描述于以下文献中的那些(Computational MolecularBiology，Lesk，A.M.，编，Oxford University Press，New York，1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.，编，Academic Press，New York，1993；Computer Analysisof Sequence Data，Part I，Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，编，Humana Press，New Jersey，1994；Sequence Analysis inMolecular Biology，von Heinje，G.，Academic Press，1987；和Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.和Devereux，J.，编，M Stockton Press，New York，1991；和Carillo，H.，和Lipman，D.，Siam J.Applied Math.，48：1073(1988)。另外，使用VectorNTI Suite 8.0(Informax，Frederick，MD)的AlignX组件的默认设置进行的氨基酸和核苷酸序列比对，可以得到百分比同一性的值。
优选的确定同一性的方法设计用于产生测试的序列之间的最大匹配。确定同一性和相似性的方法被编写成了公众可以得到的计算机程序。优选的确定2个序列之间的同一性和相似性的计算机程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.，等，Nucleic AcidsResearch 12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA(Atschul，S.F.等，J.Molec.Biol.215：403-410(1990)。BLAST X程序可以公开地从NCBI和其它来源得到(BLAST Manual，Altschul，S.，等，NCBINLM NIH Bethesda，Md.20894：Altschul，S.，等，J.Mol.Biol.215：403-410(1990)。也可以使用众所周知的Smith Waterman算法来确定同一性。
优选的多肽序列对比参数包括下面的：(1)算法：Needleman和Wunsch，J.Mol Biol.48：443-453(1970)；对比矩阵：来自Hentikoff和Hentikoff，Proc.Natl.Acad.Sci，USA.89：10915-10919(1992)的BLOSSUM62；
缺口罚分(Gap Penalty)：12
缺口长度罚分(Gap Length Penalty)：4
可以作为来自Genetics Computer Group，Madison Wis的“缺口(gap)”程序，公开地得到使用这些参数的有用程序。前述参数是进行多肽对比的默认参数(对末端缺口没有罚分)。
优选的进行多核苷酸对比的参数包括下面的：
(1)算法：Needleman和Wunsch，J.Mol Biol.48：443-453(1970)
对比矩阵：匹配＝+10，错配＝0
缺口罚分：50
缺口长度罚分：3
可获自：来自Genetics Computer Group，Madison Wis的“缺口”程序。这些是进行核酸对比的默认参数。
作为实例，本发明的多核苷酸序列可以等同于SEQ ID NO：2的序列，这是100％相同的，或者它可以与参照序列相比包含最多特定整数个核苷酸改变。这种改变选自至少一个核苷酸缺失、取代(包括转换和颠换)或插入，且其中所述改变可以发生在参照核苷酸序列的5′或3′末端位置、或那些末端位置之间的任意处，个别地散布在参照序列的核苷酸之中，或在参照序列内的一个或多个邻接组中。通过用SEQ ID NO：2中的核苷酸总数乘以各百分比同一性的数字百分数(除以100)，并从SEQ ID NO：2中的核苷酸总数减去所得的积，来确定核苷酸改变的数目，或：
n.sub.n.ltorsim.x.sub.n-(x.sub.n.y)，
其中n.sub.n是核苷酸改变的数目，x.sub.n是SEQ ID NO：2中的核苷酸总数，且y是例如，在70％时是0.70，在80％时是0.80，在85％时是0.85，在90％时是0.90，在95％时是0.95，等，且其中x.sub.n和y的任意非整数积都在从x.sub.n减去之前四舍五入到最近的整数。
改变能编码SEQ ID NO：3的多肽的多核苷酸序列，可以在该编码序列中生成无义的、错义的或移码突变，并由此在这种改变后改变由多核苷酸编码的多肽。类似地，本发明的多肽序列可以等同于SEQ IDNO：3的参照序列，这是100％相同的，或者它可以与参照序列相比包含最多特定整数个氨基酸改变，从而同一性百分比小于100％。这种改变选自至少一个氨基酸缺失、取代(包括保守的和非保守的取代)或插入，且其中改变可以发生在参照多肽序列的氨基或羧基末端位置、或那些末端位置之间的任意处，个别地散布在参照序列的氨基酸之中，或在参照序列内的一个或多个邻接组中。通过用SEQ ID NO：3中的氨基酸总数乘以各百分比同一性的数字百分数(除以100)，然后从SEQ ID NO：3中的氨基酸总数减去所得的积，来确定特定％同一性的氨基酸改变的数目，或：
n.sub.a.ltorsim.x.sub.a-(x.sub.a.y)，
其中n.sub.a是氨基酸改变的数目，x.sub.a是SEQ ID NO：3中的氨基酸总数，且y是例如，在70％时是0.70，在80％时是0.80，在85％时是0.85，等，且其中x.sub.a和y的任意非整数积都在从x.sub.a减去之前四舍五入到最近的整数。
如本文所使用的，“片段”是变体多肽，其氨基酸序列完全与本发明的任意多肽的任意氨基酸序列的部分(但不是全部)相同，或变体多核苷酸，其核酸序列完全与本发明的任意多核苷酸的任意核酸序列的部分(但不是全部)相同。片段可以包括，例如，截短多肽，其具有如SEQ ID NO：3、5、7、9或11氨基酸序列或其变体所示的氨基酸序列的一部分，例如包含异源氨基-和/或羧基-末端氨基酸序列的连续系列的残基。也包括由宿主细胞或在宿主细胞中生产的本发明的多肽的降解形式。其它示例性片段的特征在于结构或功能属性，例如该片段包含α-螺旋或能形成α-螺旋的区域，β-折叠或能形成β-折叠的区域，转角或能形成转角转的区域，卷曲或能形成卷曲的区域，亲水区域，疏水区域，α-两亲区域，β-两亲区域，柔性区域，表面形成区域，底物结合区域，细胞外区域和高抗原指数区域。
其它示例性的片段包括分离的多肽和变体，所述多肽包含的氨基酸序列具有至少15、20、30、40、50或100个来自SEQ ID NO：3、5、7、9或11所述的氨基酸序列的邻接氨基酸，或分离的多肽和变体，所述多肽包含的氨基酸序列具有至少15、20、30、40、50或100个从SEQ ID NO：3、5、7、9或11所述的氨基酸序列截短或删除的邻接氨基酸。片段也包括分离的具有类似大小和特征的多核苷酸。
本发明的多肽和衍生物可以用作试剂来抑制CNGH0010多肽与其配体的结合，和减少或阻断后续的信号转导。多肽和多肽构建体可以用作免疫原或用于生产、选择和表征人、灵长类动物、啮齿动物、哺乳动物、嵌合的、单链的、人源化的和/或CDR-移植的抗-CNGH0010抗体、免疫球蛋白、其切割产物和其它特定部分和变体的结合配偶体。另外，通过本领域众所周知的和本文所述的方法，可以确定抗体氨基酸序列和编码核酸分子，所述核酸分子包含至少一种能编码至少一种抗-CNGH0010抗体或抗独特型抗体的多核苷酸。
至少一种如本文所述的人CNGH0010多肽序列是抗原性的，且提供了生产抗-CNGH0010抗体的方法。本文所述的多肽包含一类新的CNGH0010抗原，其含有用于诊断和治疗CNGH0010抗体的关键表位。基于本发明的人CNGH0010多肽序列的氨基酸序列，可以如本文所述合成该多肽。
可以将CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗体整合进施用治疗上或预防上有效量的方法或组合物中，以调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种CNGH0010-相关状况，和/或，在有关状况之前、之后或过程中，如本领域已知的和/或本文所述的。可以将CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗体整合进用于诊断细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种CNGH0010-相关状况的方法或组合物中，和/或，在有关状况之前、之后或过程中，如本领域已知的和/或本文所述的。
可以将CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗体整合进用于诊断或治疗细胞、组织、器官或动物中的CNGH0010-相关状况的方法中，包括使细胞、组织、器官或动物接触或给其施用组合物，其包含有效量的至少一种本发明的分离的CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗体组合物。该方法还可以任选地包含使用有效量的0.001-50mg/kg的多肽或抗体。该方法还可以任选地包含，通过选自下述的至少一种模式施用多肽或抗体，用多肽或抗体治疗CNGH0010-相关状况：肠胃外的、皮下的、肌内的、静脉内的、关节内的、支气管内的、腹内的、囊内的、软骨内的、腔内的、体腔内的、小脑内的、脑室内的、结肠内的、颈内的、胃内的、肝内的、心肌内的、骨内的、骨盆内的、心包内的、腹膜内的、胸膜内的、前列腺内的、肺内的、直肠内的、肾内的、视网膜内的、脊柱内的、滑膜内的、胸内的、子宫内的、膀胱内的、快速灌注的、阴道的、直肠的、口腔的、舌下的、鼻内的和经皮的。
本发明提供了来自CNGH0010的受体结合区的新的蛋白和多肽，其可以用于生产抗-CNGH0010抗体和其片段。首先，下面讨论了鉴别、分离和生成新多肽的方法。然后，描述了抗体的生产、应用、制剂和治疗性治疗。
无论是否特别说明，本文引用的所有出版物都整体引作参考，因为它们说明了本发明时代的技术状况和/或提供了本发明的描述和实施。出版物是指任意的科学或专利出版物，或可以以任意介质形式得到的任意其它信息，包括所有记录的、电子的或打印的形式。下面的文献在本文整体引作参考：Ausubel，等，编，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，Inc.，NY，NY(1987-2001)；Sambrook，等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Harlow和Lane，Antibodies，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Colligan，等，编，Current Protocols in Immunology，John Wiley & Sons，Inc.，NY(1994-2001)；Colligan等，Current Protocols in ProteinScience，John Wiley & Sons，NY，NY，(1997-2001)。
本发明的人CNGH0010多肽包括SEQ ID NO：3、5、7、9和11的那些和它们的变体，包括但不限于可变剪接变体，且可以包含一个或多个由天然突变或人工操作造成的氨基酸取代、缺失或添加，如本文所指出的。这种突变或取代可以包括突变蛋白，它的突变足以显著地改变多肽的性质，而不改变多肽抑制人CNGH0010与其配体的结合的生物学活性。本发明包括具有除了SEQ ID NO：3、5、7、9和11的那些以外的氨基酸序列的CNGH0010多肽和它们的变体。
当然，技术人员要制备的氨基酸取代的数目取决于许多因素，包括上述的那些。一般而言，任何特定的CNGH0010多肽、片段或变体的氨基酸取代、插入或缺失的数目不会超过1-5，或其中的任意范围或值，如本文所指出的。
通过本领域已知的方法，例如定位诱变或丙氨酸-扫描诱变(例如，Ausubel，同上，第8，15章；Cunnngham和Wells，Science 244：1081-1085(1989))，可以鉴别出对于功能所必需的本发明的CNGH0010多肽的氨基酸。后一种方法会在分子的每个残基处导入单个丙氨酸突变。然后，测试得到的突变分子的生物学活性，例如，但不限于，至少一种CNGH0010中和活性。
CNGH0010多肽的合成
使用标准Boc或FMOC化学，可以合成具有上面阐明和描述的氨基酸序列的多肽。可以原样地、交联地或与载体分子缀合地注射得到的多肽。为了促进与载体的缀合，可以形成N-末端N-乙酰基-半胱氨酸或C-末端酰胺，且可以酰胺化C-末端氨基酸。可以将许多连接基团插入多肽和载体分子之间，以利于抗原多肽正确的构象折叠和呈递。
预期由源自细菌、酵母、昆虫或哺乳动物的细胞系也可以制备出本发明的CNGH0010多肽。可以将包含能编码新多肽的核酸的重组表达盒导入至少一种宿主细胞中。可以使用含有CNGH0010核酸序列和必需的启动子元件的载体来表达CNGH0010多肽。可以包含能编码与信号肽缀合的CNGH0010多肽的核酸序列，以促进所需多肽的分泌和纯化。本领域的普通技术人员熟知许多可得到的用于表达能编码本发明的多肽的核酸的表达系统。也可以使用无细胞的翻译系统，以使用源自本发明的DNA构建体的RNA生产这种多肽。
核酸分子
通过克隆，例如通过RT-PCR扩增RNA样品，可以得到能编码本发明的人CNGH0010多肽的核酸序列。因此，通过DNA合成，或从被认为具有CNGH0010mRNA的组织制备出的任意cDNA文库，或从基因组DNA文库，可以得到能编码CNGH0010多肽的DNA。通过PCR扩增或通过传统的DNA杂交和表达克隆的方法，可以克隆核酸序列。
使用本文提供的信息(本文所述的或本领域已知的方法)，例如能编码SEQ ID NO：3、5、7、9和11中的至少一种的至少70-100％邻接氨基酸的核苷酸序列或其特定片段、变体或共有序列、或包含这些序列中的至少一种的载体，可以得到本发明的能编码至少一种CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗体的核酸分子。
本发明的核酸分子可以是RNA形式，例如mRNA、hnRNA或任何其它形式，或是DNA形式，包括但不限于，通过克隆得到的或合成地生产的cDNA和基因组DNA，或其任意组合。DNA可以是三链的、双链的或单链的，或其任意组合。至少一条DNA或RNA链的任意部分可以是编码链，也称作有义链，或它可以是非编码链，也称作反义链。
如本文所指出的，本发明的包含能编码CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗体的核酸的核酸分子可以包括但不限于，自身能编码多肽或抗体片段的氨基酸序列的那些；完整多肽或抗体或其一部分的编码序列；多肽或抗体的编码序列，片段或部分，以及其它序列，例如至少一种信号前导序列或融合肽的编码序列，有或没有前述的其它编码序列，例如至少一种内含子，以及其它非编码序列，包括但不限于，非编码的5′和3′序列，例如在转录、mRNA加工中起作用的转录的、非翻译的序列，包括剪接和多腺苷酸化信号(例如，mRNA的核糖体结合和稳定)；和能编码其它氨基酸的其它编码序列，例如能提供其它功能性的那些。因而，可以使能编码多肽或抗体的序列与标记序列融合，例如能编码有利于融合抗体的纯化的肽的序列，所述的融合抗体包含抗体片段或其部分。
核酸的构建和多肽的表达和纯化
如本领域众所周知的，使用(a)重组方法、(b)合成技术、(c)纯化技术或其组合，可以制备出本发明的分离的核酸。
核酸可以方便地包含除了本发明的多核苷酸以外的序列。例如，可以将包含一个或多个内切核酸酶限制位点的多克隆位点插入核酸中，以辅助多核苷酸的分离。同样，可以插入可翻译的序列，以辅助分离本发明的翻译的多核苷酸。例如，六组氨酸标记序列能提供纯化本发明的蛋白的方便方法。本发明的核酸(不包括编码序列)任选地是用于克隆和/或表达本发明的多核苷酸的载体、连接物或接头。
可以将其它序列添加到这种克隆和/或表达序列中，以最优化它们在克隆和/或表达中的功能，以辅助分离多核苷酸，或改善多核苷酸向细胞中的导入。本领域熟知克隆载体、表达载体、连接物和接头的用途(见，例如，Ausubel，同上；或Sambrook，同上)。
可以使用众多的表达系统来生产本发明的多肽。这种系统包括染色体-、附加型-和病毒-衍生的载体，例如源自下述的载体：细菌质粒、噬菌体、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件、杆状病毒、乳多空病毒(例如SV40)、痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒、假狂犬病病毒、细小核糖核酸病毒和逆转录病毒和源自它们的组合的载体(例如粘粒和噬菌粒)。表达系统构建体可以含有能调节或造成表达的控制区。通常，适用于维持或繁殖多核苷酸和/或在宿主中表达多肽的系统或载体可以用于表达。通过本领域的技术人员熟知的众多技术中的任一种，例如，Sambrook等在上面所述的那些，可以将合适的DNA序列插入表达系统中。
在真核表达系统中，通过包含适当的分泌信号，例如信号肽或前导序列，可以将本发明的多肽分泌到内质网的腔内或细胞外环境中。
通过众所周知的方法，包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、高效液相色谱、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水相互作用色谱、亲和色谱、羟磷灰石色谱和凝集素色谱，可以从重组细胞培养物中回收和纯化本发明的多肽。当蛋白在分离和/或纯化过程中变性时，可以采用众所周知的重新折叠蛋白的技术，来再生活性构象。
在一个得到本发明的编码CNGH0010多肽的核酸的其他方法中，使用基于本发明的多核苷酸序列的探针，例如本文所述的那些，可以筛选cDNA或基因组文库。探针可以用于与基因组DNA或cDNA序列杂交，以分离相同或不同生物中的同源基因。本领域的技术人员能够明白，可以在测定中采用各种杂交严格性程度；且杂交或洗涤介质可以是严格的。由于杂交条件变得更严格，所以在要形成双链体的探针和靶之间必须存在更大程度的互补性。通过温度、离子强度、pH和部分地变性的溶剂(例如甲酰胺)的存在中的一种或多种，可以控制严格性的程度。
例如，通过例如控制甲酰胺的浓度在0％-50％的范围内，改变反应溶液的极性，可以方便地改变杂交的严格性。可检测的结合所需的互补性程度(序列同一性)随杂交介质和/或洗涤介质的严格性而变。互补性程度最佳地为100％或80-100％或其中的任何范围或值。但是，应当明白，通过降低杂交和/或洗涤介质的严格性，可以补偿探针和引物中的微小序列变化。严格杂交条件的一个实例包括在溶液中在42℃温育过夜，所述的溶液包含：50％甲酰胺，5XSSC(150mM NaCl，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH 7.6)，5XDenhardt氏溶液，10％硫酸葡聚糖和20μf/ml变性的、剪切的鲑精DNA；随后在约65℃、在0.1XSSC中洗涤滤器。
扩增RNA或DNA的方法是本领域众所周知的，且可以在本文所述的教导和引导的基础上，根据本发明使用，无需过度的实验。已知的DNA或RNA扩增的方法包括但不限于，聚合酶链反应(PCR)和有关的扩增方法(见，例如，Mullis等的美国专利号4,683,195、4,683,202、4,800,159、4,965,188；Tabor等的4,795,699和4,921,794；Innis的5,142,033；Wilson等的5,122,464；Innis的5,091,310；Gyllensten等的5,066,584；Gelfand等的4,889,818；Silver等的4,994,370；Biswas的4,766,067；Ringold的4,656,134)和RNA介导的扩增，其使用靶序列的反义RNA作为双链DNA合成的模板(Malek等的美国专利号5,130,238，其商品名NASBA)，它们的完整内容在这里引作参考(见，例如，Ausubel，同上；或Sambrook，同上)。
例如，聚合酶链反应(PCR)技术可以用于扩增本发明的多核苷酸序列和直接来自基因组DNA或cDNA文库的有关基因。也可以使用PCR和其它体外扩增方法，例如，来克隆能编码要表达的蛋白的核酸序列，制备用作检测在样品中存在目标mRNA、核酸测序或其它目的的探针的核酸。足以指导技术人员进行体外扩增方法的技术的实例，见Berger，同上，Sambrook，同上，和Ausubel，同上，以及Mullis等，美国专利号4,683,202(1987)；和Innis等，PCR Protocols A Guideto Methods and Applications，Eds.，Academic Press Inc.，SanDiego，CA(1990)。商业上可得到的基因组PCR扩增试剂盒是本领域已知的。见，例如，Advantage-GC基因组PCR试剂盒(Clontech)。另外，例如，T4基因32蛋白(Boehringer Mannheim)可以用于提高长PCR产物的得率。
通过已知方法(见，例如，Ausubel，等，同上)直接化学合成，也可以制备出本发明的分离的核酸。化学合成通常会生成单链寡核苷酸，其可以通过与互补序列杂交、或通过使用该单链作为模板的DNA聚合酶的聚合，而转变成双链DNA。本领域的技术人员能够认识到，尽管DNA的化学合成可以限于约100或更多个碱基的序列，但通过连接较短序列，也可以得到较长序列。
多核苷酸选择性地杂交所述的多核苷酸
如上所述，本发明提供了分离的核酸，其能在选择性的杂交条件下杂交本文所述的多核苷酸。因而，该实施方案的多核苷酸可以用于分离、检测和/或定量包含这种多核苷酸的核酸。例如，本发明的多核苷酸可以用于鉴别、分离或扩增保藏的文库中的部分或全长克隆。在一些实施方案中，多核苷酸是基因组序列或从人或哺乳动物的核酸文库的cDNA分离出的或与其互补的cDNA序列。
优选地，cDNA文库包含至少80％全长序列，优选地，至少85％或90％全长序列，和更优选地，至少95％全长序列。可以标准化cDNA文库，以提高稀有序列的表现度(representation)。对于与互补序列相比具有较低的序列同一性的序列，可以一般地、但非排它地采用较低或中等严格性的杂交条件。对于更高同一性的序列，可以任选地采用中等和较高严格性的条件。较低严格性的条件允许具有约70％序列同一性的序列的选择性杂交，且可以用于鉴别直向同源的或共生同源的序列。
任选地，本发明的多核苷酸会编码至少由本文所述的多核苷酸编码的蛋白或抗体的至少一部分。本发明的多核苷酸包括可以用于选择性地杂交能编码本发明的蛋白或抗体的多核苷酸的核酸序列。见，例如，Ausubel，同上；Colligan，同上，每篇都在这里完整地引作参考。
CNGH0010多肽和多核苷酸的用途
本发明的多核苷酸和多肽也用于测定介质中能通过影响CNGH0010类似物蛋白与细胞结合配偶体(例如CNGH0010受体)的结合来调节CNGH0010蛋白功能的物质的存在。调节剂的实例包括多肽或小有机分子。
本发明的多肽也用于鉴别药物开发的前导化合物。通过许多方法，例如NMR和X-射线晶体学，可以容易地确定本文所述多肽的结构。对比在序列上相似、但是它们在靶分子中引起的生物学活性不同的多肽的结构，可以提供关于靶的结构-活性关系的信息。检查结构-活性关系得到的信息，可以用于设计修饰的多肽或其它小分子或前导化合物，可以测试它们的与靶分子有关的预测的性质。使用与本文所述类似的测定，可以评价前导化合物的活性。
也可以从共结晶研究得到关于结构-活性关系的信息。在这些研究中，具有所需活性的多肽与靶分子一起结晶，并确定了复合物的X-射线结构。然后，可以对比该结构与天然状态的靶分子的结构，且由这种对比得到的信息可以用于设计预期具有所需活性的化合物。
本发明也预期鉴别能结合本发明的多肽、由此影响CNGH0010-信号传导途径的新化合物的方法。使用常规方法，例如共免疫沉淀、交联和通过梯度或色谱柱的共纯化，可以鉴别出蛋白-蛋白相互作用。也可以采用能同时鉴别出编码与分子相互作用的蛋白的基因的方法。这些方法包括用标记的分子来探测表达文库。另外，x-射线晶体学研究可以用作评价与物质和分子的相互作用的方式。
能够明白，在上述的方法中可以使用融合蛋白和重组蛋白。可以将适用于本发明的评价能影响或调节CNGH0010信号传导途径的物质和化合物的方法的试剂包装进方便的试剂盒中，从而将必需的材料包装进合适的容器中。该试剂盒也可以包含用于实现本发明的方法的合适支持体。
成熟的CNGH0010或它的类似物可以用于调节(即，提高或降低)真核细胞活性和/或数目，例如增殖和活化。而且，成熟的CNGH0010或它的类似物可以用于调节细胞分化和迁移。由于可以分泌出CNGH0010，所以成熟的CNGH0010或它的类似物也可以用于治疗多种免疫-介导的依赖于细胞增殖、分化和迁移的炎性疾病，所述疾病例如但不限于，牛皮癣、类风湿性关节炎、肺气肿、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、炎性肠疾病(包括Crohn氏病和溃疡性结肠炎)、不同类型的皮炎(包括过敏性皮炎、接触性皮炎)、光化性角化病、伤口愈合、瘢痕形成、各种肾病、各种呼吸疾病、各种生殖器病例如子宫内膜异位、黑素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和过度增殖病。另外，成熟的CNGH0010或它的类似物可以用于增强对传染病的免疫反应。可以单独地或与作为佐剂的抗原组合地使用成熟的CNGH0010或它的类似物，以治疗或预防多种传染病、过度增殖病和炎性疾病。
治疗性使用本发明的多肽的施用方式可以是能将试剂送递给宿主的任何合适的途径，例如肠胃外的、皮下的、肌内的、静脉内的、关节内的、支气管内的、腹内的、囊内的、软骨内的、腔内的、体腔内的、小脑内的、脑室内的、结肠内的、颈内的、胃内的、肝内的、心肌内的、骨内的、骨盆内的、心包内的、腹膜内的、胸膜内的、前列腺内的、肺内的、直肠内的、肾内的、视网膜内的、脊柱内的、滑膜内的、胸内的、子宫内的、膀胱内的、病灶内的(intralesional)、快速灌注的、阴道的、直肠的、口腔的、舌下的、鼻内的或经皮的。
可以将本发明的多肽制备成药物组合物，其在药学上可接受的载体中含有有效量的作为活性成分的结合剂。含有结合剂的水性悬浮液或溶液、优选地在生理pH缓冲的、备于注射的形式，是优选的。用于肠胃外施用的组合物一般包含本发明的结合剂的溶液或其溶解在药学上可接受的载体(优选水性载体)中的混合物。可以采用多种水性载体，例如，0.4％盐水，0.3％甘氨酸等。这些溶液是无菌的，且通常没有颗粒物。通过常规的、众所周知的灭菌技术(例如，过滤)，可以对这些溶液进行灭菌。如近似的生理条件所需的，组合物可以含有药学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂等。本发明的多肽在这种药物制剂中的浓度可以有很大的变化，即从低于约0.5重量％、通常在或至少为约1重量％至高达15或20重量％，且主要根据选择的特定施用方式，基于流体体积、粘度等进行选择。
因而，可以将用于肌内注射的本发明的药物组合物制成含有1mL无菌缓冲水和约1ng至约100mg、例如约50ng至约30mg或更多、或优选地约5mg至约25mg本发明的多肽。类似地，可以将用于静脉内输注的本发明的药物组合物制成含有约250ml无菌的林格溶液和约1mg至约30mg、优选5mg至约25mg本发明的多肽。用于制备可肠胃外地施用的组合物的实际方法是众所周知的，或对本领域的技术人员而言显而易见的，且更详细地描述在例如，Remington，theScience and Practice of Pharmacy，第19版，Mack PublishingCompany，Easton，Pa(1995)。
当在药物制剂中时，本发明的多肽可以以单位剂量形式存在。本领域的技术人员可以容易地确定适当的治疗上有效的剂量。如果需要，可以在适当的时间间隔(医生在治疗过程中选择为是适当的)重复确定的剂量。
可以冻干本发明的多肽来进行储存，并在使用前在合适的载体中重配。已经显示该技术对于常规的蛋白制剂是有效的，且可以使用本领域已知的冻干和重配技术。
如果要表达本发明的多肽以用于筛选测定中，则通常优选地在细胞表面生产多肽。在这种情况下，可以在用于筛选测定前收获细胞。如果多肽分泌到培养基中，则可以回收培养基，以回收和纯化多肽。如果细胞内地生产，则必须在回收多肽之前首先裂解细胞。
本发明还涉及本发明的多核苷酸作为诊断剂的用途。检测特征在于与功能障碍有关的SEQ ID NO：2多核苷酸的基因的突变形式，会提供一种诊断工具，其可以增加或定义疾病或对疾病的易感性的诊断，所述疾病源自该基因的表达不足、超表达或改变的表达。可以通过多种技术，在DNA水平检测携带基因突变的个体。
可以从受试者的细胞得到用于诊断的核酸，例如从血液、尿、唾液、组织活组织检查或尸体解剖材料。基因组DNA可以直接用于检测，或可以在分析之前使用PCR或其它扩增技术进行酶促扩增。也可以以类似的方式使用RNA或cDNA。通过扩增产物与正常基因型相比的大小变化，可以检测缺失和插入。通过使扩增的DNA与标记的CNGH0010核苷酸序列的杂交，可以鉴别出点突变。通过RNA酶消化或通过解链温度的差异，可以将正确匹配的序列与错配的双链体区别开。通过DNA片段在凝胶中的电泳迁移率的变化(有或没有变性剂)，或通过直接的DNA测序(例如，Myers等，Science(1985)230：1242)，也可以检测出DNA序列差异。通过核酸酶保护实验，例如RNA酶和S1保护或化学切割方法(见Cotton等，Proc Natl Acad SciUSA(1985)85：4397-4401)，也可以揭示在特定位置的序列变化。在另一个实施方案中，可以构建包含CNGH0010核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探针阵列，以有效地筛选例如基因突变。阵列技术方法是众所周知的，且具有一般的实用性，并可以用于解决分子遗传学中的许多问题，包括基因表达、遗传连锁和遗传变异性(见例如：M.Chee等，Science，Vol 274，pp 610-613(1996))。
通过用所述方法检测CNGH0010基因中的突变，诊断测定会提供诊断或确定对相关疾病的易感性的方法。另外，通过包含确定来自受试者的样品的异常降低或提高的多肽或mRNA水平的方法，可以诊断这样的疾病。使用任意的本领域众所周知的多核苷酸定量方法，例如，核酸扩增(例如，PCR、RT-PCR)、RNA酶保护、RNA印迹和其它杂交方法，可以在RNA水平测量降低或提高的表达。可以用于确定源自宿主的样品中的蛋白(例如本发明的多肽)水平的测定技术，是本领域的技术人员众所周知的。这种测定方法包括放射免疫测定、竞争性结合实验、蛋白印迹分析和ELISA测定。
因而，在另一个方面，本发明涉及诊断试剂盒，其包含：
(a)本发明的多核苷酸，优选地，核苷酸SEQ ID NO：2、4、6、8和10的序列之一，和变体，与SEQ ID NO：2、4、6、8和10具有至少70％同一性的多核苷酸，或其变体或片段；
(b)与(a)互补的核苷酸序列；
(c)本发明的多肽，优选地，SEQ ID NO：3、5、7、9和11的多肽之一，和变体，与SEQ ID NO：3、5、7、9和11具有至少70％同一性的多肽，和其变体或片段；或
(d)抗本发明的多肽、其变体和片段的抗体，优选地，抗SEQ ID NO：3、5、7、9和11多肽之一和变体的抗体。
能够明白，在任一种这样的试剂盒中，来自上面的组分(a)、(b)、(c)或(d)可以包含实质组分。这种试剂盒可以用于诊断疾病或对疾病的易感性，所述疾病例如但不限于，牛皮癣、类风湿性关节炎、肺气肿、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲状腺炎、炎性肠疾病(包括Crohn氏病和溃疡性结肠炎)、各种类型的皮炎(包括过敏性皮炎、接触性皮炎)、光化性角化病、伤口愈合、瘢痕形成、各种肾病、各种呼吸疾病、各种生殖器病例如子宫内膜异位、黑素瘤、鳞状细胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、肾细胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和过度增殖病。
本发明的核苷酸序列对于染色体鉴定也是有价值的。每个基因组序列特异性地靶向或可以杂交单独的人染色体上的特定位置。根据本发明对染色体的相关序列的作图可以用于将那些序列和基因相关疾病和状况相关联。一旦已经将序列作图到精确的染色体位置，就可以将该序列在染色体上的物理位置与遗传学图数据相关联。这种数据见，例如，V.McKusick，Mendelian Inheritance in Man(可以从JohnsHopkins University Welch Medical Library在线得到)。然后，可以通过连锁分析(即，物理上临近基因的共同遗传(coinheritance))，鉴定出已经被作图到相同染色体区域的基因和疾病之间的关系。
也可以确定受影响的和未受影响的个体之间的cDNA或基因组序列的差异。如果在一些或全部受影响的个体中观察到突变，但是在任何正常的个体中没有观察到，则该突变可能是该疾病的病原体。本发明的多核苷酸、多肽和多肽的抗体也可以用于构建筛选方法，以检测添加的化合物对mRNA和多肽在细胞中的生产的影响。例如，可以通过本领域已知的标准方法，使用单克隆抗体和多克隆抗体构建ELISA测定，以测量分泌的或细胞结合的多肽水平。这可以用于发现来自合适操作的细胞或组织的能抑制或增强多肽生产的试剂(也分别称作拮抗剂或激动剂)。
通过本领域已知的标准受体结合技术，可以将多肽用于鉴别膜结合的或可溶的受体，如果有的话。这包括但不限于配体结合和交联测定，其中多肽是用放射性同位素(例如，125I)标记的、化学修饰的(例如，生物素化的)或与适用于检测或纯化的肽序列融合的，并与推定受体的来源(细胞、细胞膜、细胞上清液、组织提取物、体液)一起温育。其它方法包括生物物理技术，例如表面等离子体共振和光谱学。这些筛选方法也可以用于鉴别多肽的激动剂和拮抗剂，其能与多肽与其受体的结合相竞争，如果有的话。本领域熟知进行这些测定的标准方法。
潜在多肽拮抗剂的实例包括抗体，或者在有些情况下，包括寡核苷酸或蛋白，它们与该多肽的配体、底物、受体、酶等密切相关。例如，配体、底物、受体、酶等的片段；或小分子可以结合本发明的多肽，但是可能不引起反应，即针对多肽的活性。
因而，在另一个方面，本发明涉及筛选试剂盒，其用于鉴别本发明多肽的激动剂、拮抗剂、配体、受体、底物、酶等；或能降低或提高这种多肽的生产的化合物，其包含：
(a)本发明的多肽；
(b)能表达本发明的多肽的重组细胞；
(c)能表达本发明的多肽的细胞膜；或
(d)抗本发明的多肽的抗体，该多肽优选地是SEQ ID NO：3、5、7、9和11之一或剪接变体。
能够明白，在任一种这样的试剂盒中，组分(a)、(b)、(c)或(d)可以包含实质组分。
技术人员能够容易地明白，本发明的多肽也可以用于基于结构设计该多肽的激动剂、拮抗剂或抑制剂的方法中，所述方法通过下述步骤实现：
(a)首先确定该多肽的三维结构；
(b)推论可能的激动剂、拮抗剂或抑制剂反应或结合位点的三维结构；
(c)合成预测会与推测的结合或反应位点发生结合或反应的候选化合物；和
(d)测试候选化合物是否确实是激动剂、拮抗剂或抑制剂。
还能够明白，这一般是相互作用的过程。
在经常称作如上所述的“基因疗法”的治疗模态中，也可以在受试者中内源地生产治疗用的多肽。因而，例如，可以用多核苷酸(例如DNA或RNA)工程化来自受试者的细胞，以离体(ex vivo)编码多肽，和例如，通过使用逆转录病毒质粒载体。然后，将细胞导入受试者中。
抗-CNGH0010抗体
本发明的抗体能结合至少一种特定的表位，所述表位对本发明的CNGH0010蛋白、亚基、片段、部分或其任意组合是特异性的。表位可以包含抗体结合区域，所述区域包含SEQ ID NO：3、5、7、9和11氨基酸序列的至少一部分或它的变体(例如，下面所述的剪接变体)，该表位优选地包含该序列的至少1-5个氨基酸。抗体可以包含或源自任何哺乳动物，例如，但不限于，人、小鼠、兔子、大鼠、啮齿动物、灵长类动物或其任意组合等。
如本文所述的，抗-CNGH0010抗体具有至少一种活性，例如，但不限于中和CNGH0010-依赖性的受体磷酸化、受体内在化、细胞粘附、迁移和侵入，和信号传导分子的诱导或细胞标记的适应。因而，可以根据已知的方法，筛选抗-CNGH0010抗体的对应活性，例如但不限于人CNGH0010的至少一种生物学活性。抗体可以用于测量或影响细胞、组织、器官或动物(包括哺乳动物和人)，以诊断、监控、调节、治疗、缓解、帮助预防至少一种CNGH0010-相关疾病或状况的发病率或减轻其症状，所述疾病或状况选自但不限于，至少一种免疫障碍或疾病，心血管障碍或疾病，传染性的、恶性的和/或神经学的障碍或疾病，或其它已知的或特定的CNGH0010-相关状况。
抗-CNGH0010抗体的定义和表征
如本文所使用的，“抗-CNGH0010抗体”、“抗-CNGH0010抗体部分”或“抗-CNGH0010抗体片段”和/或“抗-CNGH0010抗体变体”等包括含有分子的任何蛋白或多肽，所述的分子包含免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不限于，重链或轻链的至少一个互补性决定区(CDR)或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、构架区或其任意部分，或源自本发明的CNGH0010蛋白或多肽的CNGH0010受体或结合蛋白的至少一部分，其可以整合进本发明的抗体中。这种抗体还任选地影响特定的配体，例如但不限于，其中这种抗体能体外地、原位地和/或体内地调节、降低、提高、拮抗、激动、减轻、缓解、阻断、抑制、消除和/或干扰至少一种CNGH0010活性或结合，或CNGH0010配体活性或结合。作为一个非限制性的实例，本发明的合适的抗-CNGH0010抗体、特定的部分或变体可以结合至少一种本发明的CNGH0010蛋白或多肽、或其特定部分、变体或结构域。合适的抗-CNGH0010抗体、特定部分或变体也可以任选地影响至少一种CNGH0010活性或功能，例如但不限于，RNA、DNA或蛋白合成，CNGH0010释放，CNGH0010受体信号传导，CNGH0010活性，CNGH0010生产和/或合成。
术语“抗体”还意在包括抗体、其消化片段、特定部分和变体，包括抗体模拟物或能模仿抗体或其特定片段或部分的结构和/或功能的抗体部分，包括单链抗体和其片段。功能片段包括能结合哺乳动物CNGH0010的抗原-结合片段。例如，本发明包括能结合CNGH0010或其部分的抗体片段，包括但不限于，Fab(例如，通过木瓜蛋白酶消化)、Fab′(例如，通过胃蛋白酶消化和部分还原)和F(ab′)2(例如，通过胃蛋白酶消化)、facb(例如，通过纤溶酶消化)、pFc′(例如，通过胃蛋白酶或纤溶酶消化)、Fd(例如，通过胃蛋白酶消化，部分还原和再聚集)、Fv或scFv(例如，通过分子生物学技术)片段(见，例如，Colligan，Immunology，同上)。
如本领域已知的和/或如本文所述的，可以通过酶促切割、合成或重组技术，来生产这样的片段。使用已经将一个或多个终止密码子导入自然终止位点上游的抗体基因，可以生产多种截短形式的抗体。例如，可以将能编码F(ab′)2重链部分的组合基因设计成包含能编码重链的CH1结构域和/或铰链区的DNA序列。可以通过常规技术，将抗体的各部分化学地连接到一起，或可以使用基因工程技术，来制备成邻接的蛋白。
如本文所使用的，术语“人抗体”指抗体，其中基本上蛋白的每部分(例如，CDR、构架、CL、CH结构域(例如，CH1、CH2、CH3)、铰链、(VL、VH))基本上在人中都是非免疫原性的，仅仅具有最小的序列变化或变异。类似地，指定为灵长类动物(猴、狒狒、黑猩猩等)、啮齿动物(小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、仓鼠等)和其它哺乳动物的抗体指出了这样的种、亚属、属、亚科、科特异性的抗体。而且，本发明的嵌合抗体可以包括上述的任意组合。与未修饰的抗体相比，这种变化或变异能任选地和优选地保留或减少在人或其它物种中的免疫原性。因而，人抗体不同于嵌合的或人源化的抗体。应当指出，能表达功能上重排的人免疫球蛋白(例如，重链和/或轻链)基因的非人的动物或原核的或真核的细胞，可以生产人抗体。而且，当人抗体是单链抗体时，它可以包含在天然人抗体中不存在的接头肽。例如，Fv可以包含接头肽，例如2至约8个甘氨酸或其它氨基酸残基，其连接重链可变区和轻链可变区。认为这种接头肽是人源的。
本发明的分离的抗体包含任何如本文所述分离的或制备的抗体。优选地，人抗体或抗原-结合片段能结合人CNGH0010，并由此部分地或基本上中和该蛋白的至少一种生物活性。能部分地或优选地基本上中和至少一种CNGH0010蛋白或片段的至少一种生物活性的抗体或其特定部分或变体可以结合该蛋白或片段，并由此抑制通过CNGH0010与CNGH0010受体的结合或通过其它CNGH0010-依赖性的或介导的机理介导的的活性。如本文所使用的，术语“中和抗体”指该抗体根据测定可以抑制CNGH0010-依赖性的活性约20-120％，优选至少约10、20、30、40、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100％或更多。如本文所述的和/或如本领域已知的，优选地通过至少一种合适的CNGH0010蛋白或受体测定，来评价抗-CNGH0010抗体抑制CNGH0010-依赖性的活性的能力。本发明的人抗体可以是任意种类(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或同种型，且可以包含κ或λ轻链。在一个实施方案中，人抗体包含IgG重链或特定片段，例如，至少一种同种型，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。通过使用包含至少一种如本文所述的和/或如本领域已知的人轻链(例如，IgG、IgA和IgM(例如，γ1、γ2、γ3、γ4))转基因的转基因小鼠或其它转基因的非人哺乳动物，可以制备出这种类型的抗体。在另一个实施方案中，抗-人CNGH0010人抗体包含IgG1重链和IgG1轻链。
至少一种本发明的抗体能结合对如本文所述的至少一种CNGH0010蛋白、亚基、片段、部分或其任意组合特异性的至少一个特定表位。该至少一个表位可以包含至少一个抗体结合区，所述抗体结合区包含至少一部分与来自如本文所述的人CNGH0010的受体结合区的肽序列相对应的蛋白序列，该表位优选地由蛋白的至少一个胞外的、可溶的、亲水的、外部的或胞质的部分组成。
通常，本发明的人抗体或抗原-结合片段会包含抗原-结合区，所述抗原结合区包含至少一个人互补性决定区(CDR1、CDR2和CDR3)或至少一个重链可变区的变体和至少一个人互补性决定区(CDR1、CDR2和CDR3)或至少一个轻链可变区的变体。
也可以使用双特异性的、异种异性的、异种缀合的或类似的抗体，它们是单克隆的、优选地人或人源化的抗体，其具有对至少2种不同抗原的结合特异性。在这种情况下，一种结合特异性是针对至少一种本发明的CNGH0010蛋白的，另一种是针对任意的其它抗原的。制备双特异性的抗体的方法是本领域已知的。传统地，双特异性的抗体的重组生产是基于2个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达的，其中2个重链具有不同的特异性(Milstein和Cuello，Nature 305：537(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，所以这些杂交瘤(四体瘤(quadromas))会生产10种不同的抗体分子的潜在混合物，其中仅仅一种具有正确的双特异性结构。正确分子的纯化一般是通过亲和色谱步骤完成的，这相当繁琐，且产物得率较低。类似的方法公开在，例如，WO 93/08829，美国专利号6210668、6193967、6132992、6106833、6060285、6037453、6010902、5989530、5959084、5959083、5932448、5833985、5821333、5807706、5643759、5601819、5582996、5496549和4676980，WO 91/00360，WO 92/00373，EP 03089，Traunecker等，EMBO J.10：3655(1991)，和Suresh等，Methodsin Enzymology 121：210(1986)，每篇都在这里完整地引作参考。
在本发明的方法和组合物中使用的抗-CNGH0010抗体可以任选地由与CNGH0010的高亲和力的结合来表征，和任选地且优选地具有低毒性。具体地，本发明的抗体、特定的片段或变体可以用于本发明中，其中单独的组分，例如可变区、恒定区和构架，个别地和/或共同地、任选地和优选地具有低免疫原性。可以用于本发明的抗体任选地特征在于它们以可测量的症状减轻和低的和/或可接受的毒性较长时间治疗患者的能力。低的或可接受的免疫原性和/或高亲和力、以及其它合适的性质，可以有助于实现的治疗结果。“低免疫原性”在本文中定义为，使治疗的患者的明显HAHA、HACA或HAMA反应升高小于约75％或优选地小于约50％，和/或使治疗的患者的低滴度升高(小于约300，优选地，小于约100，用双抗原酶免疫测定进行测量)(Elliott等，Lancet 344：1125-1127(1994)，其在这里完整地引作参考)。
抗-CNGH0010抗体的应用可以包含，将有效量的包含至少一种抗-CNGH0010抗体的组合物或药物组合物施用给需要这种调节、治疗、缓解、预防或减轻症状、影响或机理的细胞、组织、器官、动物或患者。有效量可以包含每单次(例如，快速灌注)、多次或连续施用约0.001-500mg/kg的量，或每单次、多次或连续施用达到0.01-5000μg/ml的血清浓度，或其中的任意有效范围或值，如使用如本文所述的或相关领域已知的方法实现和确定的。
如技术人员能明白的，本发明包括至少一种本发明的生物活性的抗体。生物活性的抗体具有天然的(非合成的)、内源性的或有关的和已知的抗体的至少20％、30％或40％、和优选地至少50％、60％或70％、和最优选地至少80％、90％或95％-100％的特异性活性。测定和定量测量酶活性和底物特异性的方法是本领域的技术人员众所周知的。
在另一个方面，本发明涉及如本文所述的人抗体和抗原-结合片段，其通过有机部分的共价附着而修饰。这种修饰可以生成具有提高的药物代谢动力学性质(例如，提高的体内血清半衰期)的抗体或抗原-结合片段。有机部分可以是线性的或分支的亲水聚合物基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基团。可以使用脂类分子，例如单独的或共价结合到亲水聚合物的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺部分。在具体的实施方案中，亲水的聚合物基团可以具有约800至约120,000道尔顿的分子量，且可以是聚链烷二醇(例如，聚乙二醇(PEG)，聚丙二醇(PPG))、糖聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯基吡咯烷酮，且脂肪酸或脂肪酸酯基团可以包含约8至约40个碳原子。
本发明的修饰的抗体和抗原-结合片段可以包含一个或多个有机部分，它们直接或间接地共价结合抗体。结合到本发明的抗体或抗原-结合片段上的每个有机部分可以独立地是亲水聚合物基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基团。如本文所使用的，术语“脂肪酸”包括单羧酸和二羧酸。作为本文使用的术语，“亲水聚合物基团”指比辛烷更易溶于水的有机聚合物。例如，聚赖氨酸比辛烷更易溶于水。因而，本发明包括通过聚赖氨酸的共价附着而修饰的抗体。适用于修饰本发明的抗体的亲水聚合物可以是线性的或分支的，且包括，例如，聚链烷二醇(例如，PEG、单甲氧基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等)、糖(例如，葡聚糖、纤维素、寡糖、多糖等)、亲水氨基酸的聚合物(例如，聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸等)、聚环氧链烷(polyalkane oxide)(例如，聚环氧乙烷、聚环氧丙烷等)和聚乙烯基吡咯烷酮。优选地，能修饰本发明的抗体的亲水聚合物作为单独的分子实体具有约800至约150,000道尔顿的分子量。例如，可以使用PEG5000和PEG20,000，其中下标是以道尔顿计的聚合物的平均分子量。亲水聚合物基团可以被1至约6个烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基团取代。可以使用合适的方法，制备出被脂肪酸或脂肪酸酯基团取代的亲水聚合物。例如，可以使包含胺基的聚合物偶联到脂肪酸或脂肪酸酯的羧基上，且可以使脂肪酸或脂肪酸酯的活化的羧基(例如，用N，N-羰基二咪唑活化的)偶联到聚合物的羟基上。
适于修饰本发明抗体的脂肪酸和脂肪酸酯可以是饱和的或者可以含有一个或多个不饱和单位。适于修饰本发明抗体的脂肪酸包括，例如，正十二烷酸(C12，月桂酸)、正十四烷酸(C14，肉豆蔻酸)、正十八烷酸(C18，硬脂酸)、正二十烷酸(C20，花生酸)、正二十二烷酸(C22，山嵛酸)、正三十烷酸(C30)、正四十烷酸(C40)、顺式-Δ9-十八烷酸(C18，油酸)、全顺式-Δ5，8，11，14-二十烷四烯酸(eicosatetraenoate)(C20，花生四烯酸)、辛二酸、十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸等等。适宜的脂肪酸酯包括含有线性或分支低级烷基的二羧酸的单酯。低级烷基可以含有1到约12、优选1到约6个碳原子。
使用适宜的方法，如通过与一种或多种修饰试剂反应可以制备经修饰的人抗体和抗原结合片段。文中所用“修饰试剂”指含有活化基团的适宜的有机基团(例如，亲水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。“活化基团”是化学部分或者官能团，其在适宜的条件下可以与第二种化学基团反应，从而在修饰试剂和该第二种化学基团之间形成共价键。例如，胺反应性活化基团包括亲电基团，如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、卤(氯、溴、氟、碘)、N-羟基琥珀酰亚胺基酯(NHS)，等等。与硫醇反应的活化基团包括，例如，马来酰亚胺、碘代乙酰基、丙烯酰(acrylolyl)、吡啶基二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB-硫醇)、等等。醛官能团可以偶联至含有胺-或者酰肼-的分子，且叠氮基可以与三价磷基团反应形成氨基磷酸酯或者phosphorimide连接。向分子中导入活化基团的适宜方法是本领域公知的(见，例如，Hermanson，G.T.，BioconjugateTechiniques，Academic Press：San Diego，CA(1996))。活化基团可以直接结合有机基团(例如，亲水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)或者通过接头部分，例如，二价C1-C12基团结合有机基团，在所述二价C1-C12基团中，一个或多个碳原子可以被杂原子，如氧、氮或者硫代替。适宜的接头部分包括，例如，四甘醇、-(CH2)3-、-NH-(CH2)6-NH-、-(CH2)2-NH-和-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-。含有接头部分的修饰试剂可以通过如下方法制备，例如，在1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)存在下将单-Boc-烷基二胺(例如，单-Boc-乙二胺，单-Boc-二氨基己烷)与脂肪酸反应，从而在游离胺和脂肪酸羧基之间形成酰胺键。Boc保护基可以从产物除去，这可以通过用三氟乙酸(TFA)处理实现，以暴露可以偶联如所述的另一羧基的伯胺，或者可以与马来酐反应并环化所得产物以产生脂肪酸的活化的马来酰亚胺基(maleimido)衍生物(见，例如，Thompson，等人，WO92/16221，将其完整教导并入本文作为参考)。
通过将人抗体或者抗原结合片段与修饰试剂反应可以产生本发明的修饰抗体。例如，通过使用胺-反应性修饰试剂，例如PEG的NHS酯，可以以非位点特异的方式将有机部分结合到抗体。经修饰的人抗体或者抗原结合片段还可以通过还原抗体或者抗原结合片段的二硫键(例如，链内二硫键)来制备。然后所还原的抗体或者抗原结合片段可以与硫醇反应性修饰试剂反应以产生本发明的修饰抗体。使用适宜的方法，如反向蛋白水解(Fisch等人，Bioconjugate Chem.，3：147-153(1992)；Werlen等人，Bioconjugate Chem.，5：411-417(1994)；Kumaran等人，ProteinSci.6(10)：2233-2241(1997)；Itoh等人，Bioorg.Chem.，24(1)：59-68(1996)；Capellas等人，Biotechnol.Bioeng.，56(4)：456-463(1997))，和Hermanson，G.T.，Bioconjugate Techniques，AcademicPress：San Diego，CA(1996)中描述的方法可以制备含有结合本发明抗体的特定位点的有机部分的经修饰的人抗体和抗原结合片段。
单克隆抗体的生成
通过传统的免疫法和杂交瘤技术，可以生产出本发明的单克隆抗体。用包含本发明的多肽的人CNGH0010抗原性组合物免疫小鼠后，从免疫的动物回收脾细胞或来自淋巴结组织的淋巴细胞，并通过与骨髓瘤细胞融合或通过Epstein-Barr(EB)-病毒转化，使其无限增殖化。通过筛选能表达需要的抗体的克隆，得到了单克隆抗体。尽管经常使用小鼠作为实验模型，但预期可以根据本发明的方法操作任意的哺乳动物受试者，包括人受试者或能生产抗体的细胞，以用作生产哺乳动物(包括人)和杂交细胞系的基础。从能表达抗体的B细胞直接克隆抗体分子的重组DNA的技术，也在本发明的范围内。通过荧光激活细胞分选仪，可以分离出这种B细胞。
尽管常规地生产小鼠单克隆抗体，但是本发明不限于此。对于治疗性应用，人或人源化的抗体是所需的。通过使用人杂交瘤或通过生成人源化的抗体，可以得到这种抗体。通过将非人抗体的特定片段替代为人抗体基因的对应片段，可以开发出人源化的抗体。该方法能保留亲本抗体的轻链和重链可变区的大部分或全部CDR区域，并在很大程度上将构架区替代为人序列[EP专利号184187；EP专利号171496；EP专利号173494和WO专利号86/01533]。在它们的基因组中含有能编码人抗体的基因或基因片段的转基因小鼠中，也可以生成人单克隆抗体[美国专利号6,162,963；WO专利号93/12227；美国专利号5,877,5397；美国专利号5,874,299；美国专利号5,814,318；美国专利号5,789,650；美国专利号5,770,429；美国专利号5,661,016；美国专利号5,625,126；美国专利号5,569,825；美国专利号5,545,806；和WO专利号91/10741]。
使用噬菌体展示、核糖体展示或有关的筛选或选择技术，也可以从体外或体内地生成的重组抗体文库得到人单克隆抗体。A.Knappik和其它人[65]公开了生成抗体文库(主要是人源的)的方法的实例[美国专利号6,291,158；美国专利号6,291,159；美国专利号6,291,160和美国专利号6,291,161]。B.Krebs和其它人[66]公开了从这样的文库选择特定抗原靶的人抗体的方法的实例[美国专利号5,955,341；美国专利号5,759,817；美国专利号5,658,727；美国专利号6,235,469；美国专利号5,969,108；美国专利号5,886,793]。
关于生成抗-CNGH0010抗体的方法的详细描述
如本领域中众所周知的，通过细胞系、混合细胞系、无限增殖化细胞或者无限增殖化细胞的克隆群体可以任选产生至少一种本发明的抗-CNGH0010抗体。见，例如，Ausubel，等人编著，CurrentProtocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，Inc.，NY，NY(1987-2001)；Sambrook，等人，Molecular Cloning：A LaboratoryManual，第二版，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Harlow和Lane，antibodies，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Colligan，等人编著，Current Protocols in Immunology，John Wiley& Sons，Inc.，NY(1994-2001)；Colligan等人，Current Protocolsin Protein Science，John Wiley & Sons，NY，NY，(1997-2001)，将它们各自完整并入本文作为参考。
针对如本文所述的适宜的免疫原性抗原，例如如本文所述的分离的和/或CNGH0010蛋白、其变体或部分(包括合成分子，例如合成多肽)，可以产生对人CNGH0010蛋白(如本文所述的)、其变体或片段特异性的人抗体。可以类似地产生其他特异或者通常的哺乳动物抗体。使用任意适宜的技术可以进行免疫原性抗原的制备和单克隆抗体的产生。
在一种方法中，通过将适宜的无限增殖化细胞系，例如，骨髓瘤细胞系，如，但不限于，Sp2/0、Sp2/0-AG14、NS0、NS1、NS2、AE-1、L.5、＞243、P3X63Ag8.653、Sp2 SA3、Sp2 MAI、Sp2 SS1、Sp2 SA5、U937、MLA 144、ACT IV、MOLT4、DA-1、JURKAT、WEHI、K-562、COS、RAJI、NIH3T3、HL-60、MLA144、NAMAIWA、NEURO2A等等，或者异种骨髓瘤(heteromylomas)、其融合产物，或者从中衍生的任意细胞或者融合细胞，或者本领域中公知的任意其他适宜的细胞系(例如，www.atcc.org、www.lifetech.com等)与抗体产生性细胞融合来产生杂交瘤，所述抗体产生性细胞例如，但不限于，分离或克隆的脾脏、外周血、淋巴、扁桃体、或者其他免疫细胞或者含有B细胞的细胞，或者任意其他细胞，它们将重链或轻链恒定或可变或构架或者CDR序列表达为内源或异源的核酸、重组或内源的、病毒、细菌、藻类、原核生物、两栖动物、昆虫、爬行动物、鱼、哺乳动物、啮齿类、马、绵羊、山羊、羊、灵长类、真核生物、基因组DNA、cDNA、rDNA、线粒体DNA或者RNA、叶绿体DNA或者RNA、hnRNA、mRNA、tRNA、单链、双链或者三链、杂交的等等或者它们的任意组合。见，例如，Ausubel，如前，和Colligan，Immunology，如前，第二章，将它们完整并入本文作为参考。
还可以从用目的抗原免疫的人或者其他适宜动物的外周血或者优选地，脾脏或者淋巴结得到产生抗体的细胞。任意其他适宜的宿主细胞也可用于表达编码本发明的抗体、其特异片段或者变体的异源或者内源核酸。融合细胞(杂交瘤)或者重组细胞可以用选择培养条件或者其他适宜的公知方法分离，并且通过有限稀释或者细胞分选，或者其他公知的方法克隆。通过适宜的测定法(例如，ELISA)可以选择产生具有所希望的特异性的抗体的细胞。
可以使用用于产生或分离具有所需特异性的抗体的其他适宜方法，其包括但不限于，从多肽或者蛋白展示文库选择重组抗体的方法(例如，但不限于，噬菌体、核糖体、寡核苷酸、RNA、cDNA等展示文库；例如，可以从Cambridge antibody Technologies，Cambridgeshire，英国；MorphoSys，Martinsreid/Planegg，DE；Biovation，Aberdeen，Scotland，英国；BioInvent，Lund，瑞典；Dyax Corp.，Enzon，Affymax/Biosite；Xoma，Berkeley，CA；Ixsys得到。见例如，EP 368,684，PCT/GB91/01134；PCT/GB92/01755；PCT/GB92/002240；PCT/GB92/00883；PCT/GB93/00605；US 08/350260(5/12/94)；PCT/GB94/01422；PCT/GB94/02662；PCT/GB97/01835；(CAT/MRC)；WO90/14443；WO90/14424；WO90/14430；PCT/US94/1234；WO92/18619；WO96/07754；(Scripps)；WO96/13583，WO97/08320(MorphoSys)；WO95/16027(BioInvent)；WO88/06630；WO90/3809(Dyax)；US 4,704,692(Enzon)；PCT/US91/02989(Affymax)；WO89/06283；EP371998；EP 550 400；(Xoma)；EP229 046；PCT/US91/07149(Ixsys)；或者随机产生的肽或者蛋白-US5723323，5763192，5814476，5817483，5824514，5976862，WO 86/05803，EP 590 689(Ixsys，现在为Applied MolecularEvolution(AME)，每一篇都完整并入本文作为参考)或者那些依赖于转基因动物的免疫的(例如，SCID小鼠，Nguyen等人，Microbiol.Immunol.41：901-907(1997)；Sandhu等人，Crit.Rev.Biotechnol.16：95-118(1996)；Eren等人，Immunol.93：154-161(1998)，每一篇及相关专利和申请都完整并入作为参考)，所述方法能够产生人抗体谱，如本领域中公知和/或本文所描述的。这些技术包括，但不限于，核糖体展示(Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94：4937-4942(May 1997)；Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：14130-14135(Nov.1998))；单细胞抗体产生技术(例如，所选的淋巴细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等人，J.Immunol.17：887-892(1987)；Babcook等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843-7848(1996))；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等人，Biotechnol.8：333-337(1990)；单细胞系统，Cambridge，MA；Gray等人，J.Imm.Meth.182：155-163(1995)；Kenny等人，Bio/Technol.13：787-790(1995))；B细胞选择(Steenbakkers等人，Molec.Biol.Reports 19：125-134(1994)；Jonak等人，ProgressBiotech，卷5，In Vitro Immunization in Hybridoma Technology，Borrebaeck，编著，Elsevier Science Publishers B.V.，Amsterdam，荷兰(1988))。
用于工程化或人源化非人或者人抗体的方法也可以使用并且是本领域众所周知的。通常，人源化或者工程化抗体具有来自非人来源的一个或多个氨基酸残基，所述非人来源为例如，但不限于小鼠、大鼠、兔子、非人灵长类动物或者其他哺乳动物。这些人氨基酸残基通常称作“输入”残基，其通常来自已知人序列的“输入”可变、恒定或者其他结构域。公开了已知的人Ig序列，例如，在
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Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，U.S.Dept.Health(1983)，将它们完整并入本文作为参考。
这些输入的序列可以用于减小免疫原性或者减小、增强或者修饰结合、亲和性、结合速率(on-rate)、解离速率(off-rate)、亲合力、特异性、半衰期，或者本领域中公知的任何其他适宜的特征。通常保持部分或所有非人或者人CDR序列，而可变和恒定区的非人序列用人或者其他氨基酸替代。还可以任选地将抗体人源化且保持对抗原的高亲和性和其他有利的生物学性质。为了实现该目标，任选通过使用亲本和人源化序列的三维模型通过亲本序列和多种概念上的人源化产物的分析方法制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型是通常可得的并且是本领域技术人员熟悉的。阐明和展示所选的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可以获得的。检查这些展示可以允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能作用中的可能角色，即，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从共有和输入序列选择并组合FR残基，从而实现所希望的抗体特征，如对靶抗原的增加的亲和性。通常，CDR残基直接和最充分地参与影响抗原结合。本发明抗体的人源化或者工程化可以使用任意公知方法进行，所述方法为诸如但不限于下述的方法：Winter(Jones等人，Nature 321：522(1986)；Riechmann等人，Nature 332：323(1988)；Verhoeyen等人，Science 239：1534(1988))，Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901(1987)，Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.151：2623(1993)，美国专利号5723323、5976862、5824514、5817483、5814476、5763192、5723323、5766886、5714352、6204023、6180370、5693762、5530101、5585089、5225539；和4816567、PCT/：US98/16280、US96/18978、US91/09630、US91/05939、US94/01234、GB89/01334、GB91/01134、GB92/01755；WO90/14443、WO90/14424、WO90/14430，和EP 229246，将所述文献每一篇，包括其中引用的参考文献都完整并入本文作为参考。
如文中描述和/或本领域中公知的，还可以任选地通过免疫能够产生人抗体谱的转基因动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、非人灵长类动物，等等)产生抗-CNGH0010抗体。使用适宜的方法，如文中描述的方法，可以从这些动物分离产生人抗-CNGH0010抗体的细胞并将其无限增殖化。
产生结合人抗原的人抗体谱的转基因小鼠可以通过公知方法产生(例如，但不限于，授予Lonberg等人的美国专利号5,770,428、5,569,825、5,545,806、5,625,126、5,625,825、5,633,425、5,661,016和5,789,650；Jakobovits等人，WO98/50433，Jakobovits等人，WO98/24893，Lonberg等人，WO98/24884，Lonberg等人，WO97/13852，Lonberg等人，WO 94/25585，Kucherlapate等人，WO 96/34096，Kucherlapate等人，EP 0463 151 B1，Kucherlapate等人，EP 0710 719A1，Surani等人，美国专利号5,545,807，Bruggemann等人，WO90/04036，Bruggemann等人，EP 0438 474 B1，Lonberg等人，EP 0814259 A2，Lonberg等人，GB 2 272 440 A，Lonberg等人，Nature 368：856-859(1994)，Taylor等人，Int.Immunol.6(4)579-591(1994)，Green等人，Nature Genetics 7：13-21(1994)，Mendez等人，Nature Genetics15：146-156(1997)，Taylor等人，Nucleic Acids Research 20(23)：6287-6295(1992)，Tuaillon等人，Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724(1993)，Lonberg等人，Int Rev Immunol 13(1)：65-93(1995)和Fishwald等人，Nat Biotechnol 14(7)：845-851(1996)，将它们每一篇都完整并入本文作为参考)。通常，这些小鼠含有至少一种转基因，其含有来自功能上重排或者可以经历功能重排的至少一种人免疫球蛋白基因座的DNA。可以破坏或者缺失此类小鼠中内源免疫球蛋白基因座以消除该动物产生内源基因编码的抗体的能力。
使用肽展示文库可以方便地实现筛选特异结合类似蛋白或者片段的抗体。该方法包括对大量肽筛选具有所需的功能或者结构的个体成员。肽展示文库的抗体筛选是本领域中众所周知的。所展示的肽序列可以长为3到5000个或更多个氨基酸，通常为5-100个氨基酸长，且通常为约8到25个氨基酸长。除了直接的化学合成方法以产生肽文库外，已经描述的几种重组DNA方法。一种类型包括在噬菌体或者细胞表面上展示肽序列。每个噬菌体或者细胞都含有编码具体展示的肽序列的核苷酸序列。此类方法在PCT专利公开号91/17271、91/18980、91/19818和93/08278中公开。产生肽文库的其他系统具有体外化学合成和重组方法两者的方面。见PCT专利公开号92/05258、92/14843和96/19256。也见美国专利号5,658,754；和5,643,768。肽展示文库、载体和筛选试剂盒可以通过商业途径从诸如Invitrogen(Carlsbad，CA)，和Cambridgeantibody Technologies(Cambridgeshire，英国)得到。见，例如转让给Enzon的美国专利号4704692、4939666、4946778、5260203、5455030、5518889、5534621、5656730、5763733、5767260、5856456；转让给Dyax的5223409、5403484、5571698、5837500；转让给Affymax的5427908，5580717；转让给Cambridge antibody Technologies的5885793；转让给Genentech的5750373；转让给Xoma的5618920、5595898、5576195、5698435、5693493、5698417；Colligan，如上文；Ausubel，如上文；或Sambrook，如上文，上面的专利和出版物每一篇都完整并入本文作为参考。
通过将至少一种抗-CNGH0010抗体的编码核酸施用给转基因动物或者哺乳动物，如山羊、母牛、马、绵羊等，也可以制备本发明的抗体，所述转基因动物或者哺乳动物能够在它们的奶中产生所述抗体。用公知的方法可以提供此类动物。见，例如，但不限于，美国专利号5,827,690、5,849,992、4,873,316、5,849,992、5,994,616、5,565,362、5,304,489等，将它们每个都完整并入本文作为参考。
使用至少一种抗-CNGH0010抗体的编码核酸提供转基因植物和培养的植物细胞(例如但不限于烟草和玉米)也可以制备本发明的抗体，所述转基因植物和培养的植物细胞在其植物部分或者培养的细胞中产生所述抗体、其特定部分或者变体。作为非限制性实例，例如，使用诱导型启动子，表达重组蛋白的转基因烟草叶子已经成功地用于提供大量重组蛋白。见，例如，Cramer等人，Curr.Top.Microbol.Immunol.240：95-118(1999)和其中引用的参考文献。转基因玉米也可用于在商业生产水平上表达哺乳动物蛋白，其生物学活性等同于在其他重组系统中产生或者从天然来源纯化的那些蛋白的生物学活性。见，例如，Hood等人，Adv.Exp.Med.Biol.464：127-147(1999)和其中引用的参考文献。已经从转基因植物种子(包括烟草种子和马铃薯块茎)中大量产生了抗体，包括抗体片段，如单链抗体(scFv)。见，例如，Conrad等人，Plant Mol.Biol.38：101-109(1998)和其中引用的参考文献。从而，根据公知的方法使用转基因植物也可以产生本发明的抗体。也见，例如，Fischer等人，Biotechnol.Appl.Biochem.30：99-108(Oct.，1999)，Ma等人，Trends Biotechnol.13：522-7(1995)；Ma等人，PlantPhysiol.109：341-6(1995)；Whitelam等人，Biochem.Soc.Trans.22：940-944(1994)；和其中引用的参考文献。对于抗体的植物表达，通常也见但不限于，将上面的参考文献的每一个都完整并入本文作为参考。
本发明的抗体可以以宽范围的亲和力(KD)结合人CNGH0010。在优选实施方案中，至少一种本发明的人mAb可以任选以高亲和力结合人CNGH0010。例如，人mAb可以以等于或者小于约10-7M，如但不限于，0.1-9.9(或者其中的任意范围或者值)×10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13或者其中的任意范围或者值的KD结合人CNGH0010。
使用任意适宜的方法可以通过实验测定抗体对抗原的亲和力或者亲合力。(见，例如，Berzofsky，等人，“Antibody-AntigenInteractions，”In Fundamental Immunology，Paul，W.E.，编著，Raven Press：New York，NY(1984)；Kuby，Janis Immunology，W.H.Freeman and Company：New York，NY(1992)；和其中描述的方法)。如果在不同条件下(例如，盐浓度、pH)测量，那么所测量的具体抗体-抗原相互作用的亲和力可以不同。从而，优选用抗体和抗原的标准溶液，和标准缓冲液，如文中描述的缓冲液进行亲和力和其他抗原-结合参数(例如，KD、Ka、Kd)的测量。
抗体的纯化
通过众所周知的方法可以从重组细胞培养物回收和纯化抗-CNGH0010抗体，所述方法包括，但不限于，A蛋白纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水相互作用色谱、亲和色谱、羟磷灰石色谱和凝集素色谱。高效液相色谱(“HPLC”)也可用于纯化。见，例如，Colligan，Current Protocols inImmunology，或Current Protocols in Protein Science，John Wiley&Sons，NY，NY，(1997-2001)，例如，1、4、6、8、9、10章，将它们每个都完整并入本文作为参考。
本发明的抗体包括天然纯化的产物、化学合成方法的产物，和通过重组技术从真核宿主产生的产物，所述真核宿主包括，例如，酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞。取决于重组产生方法中所用的宿主，本发明的抗体可以为糖基化的或者非糖基化的，优选糖基化的。这些方法在许多标准实验室手册，如Sambrook，如前，17.37-17.42节；Ausubel，如前，10、12、13、16、18和20章，Colligan，Protein Science，如前，12-14章中描述的，将它们都完整并入本文作为参考。
在哺乳动物细胞中克隆和表达抗-CNGH0010抗体
一般的哺乳动物表达载体含有至少一种启动子元件(其介导mRNA的转录起始)、抗体编码序列和转录物的转录终止和多腺苷酸化所需的信号。额外的元件包括增强子、Kozak序列和干扰序列，其侧翼为RNA剪接的供体和受体位点。高效转录可以用来自SV40的早期和晚期启动子、来自逆转录病毒，例如，GAS-6、HTLVI、HIVI的长末端重复序列(LTRS)和巨细胞病毒(CMV)的早期启动子实现。然而，也可以使用细胞元件(例如，人肌动蛋白启动子)。用于实施本发明的适宜的表达载体包括，例如，诸如pIRESlneo、pRetro-Off、pRetro-On、PLXSN或pLNCX(ClonetechLabs、Palo Alto、CA)、pcDNA3.1(+/-)、pcDNA/Zeo(+/-)或pcDNA3.1/Hygro(+/-)(Invitrogen)、PSVL和PMSG(Pharmacia、Uppsala、瑞典)、pGAS-6cat(ATCC 37152)、pSV2dhfr(ATCC 37146)和pBC12MI(ATCC 67109)的载体。可以使用的哺乳动物宿主细胞包括人Hela 293、H9和Jurkat细胞、小鼠NIH3T3和C127细胞、Cos1、Cos7和CV 1、鹌鹑QC1-3细胞、小鼠L细胞和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
备选地，基因可以在含有整合到染色体中的该基因的稳定细胞系中表达。用选择标记如dhfr、gpt、新霉素或者潮霉素的共转染使得可以鉴定和分离所转染的细胞。
还可以扩增所转染的基因以大量表达所编码的抗体。DHFR(二氢叶酸还原酶)标记可用于开发携带目标基因的数百或甚至数千拷贝的细胞系。另一种有用的选择标记是谷氨酰胺合酶(GS)(Murphy，等人，Biochem.J.227：277-279(1991)；Bebbington，等人，Bio/Technology 10：169-175(1992))。使用这些标记，使哺乳动物在选择性培养基上生长并选择具有最高抗性的细胞。这些细胞系含有整合到染色体的扩增基因。中国仓鼠卵巢(CHO)和NSO细胞通常用于产生抗体。
表达载体pC1和pC4含有劳斯肉瘤病毒(Cullen，等人，Molec.Cell.Biol.5：438-447(1985))的强启动子(LTR)和CMV-增强子的片段(Boshart，等人，Cell 41：521-530(1985))。多克隆位点，例如，具有限制酶切割位点BamHI、XbaI和Asp718的多克隆位点促进克隆目的基因。所述载体还含有大鼠前胰岛素原基因的3’内含子、多腺苷酸化和终止信号。
对抗-CNGH0010抗体组合物的抗独特型抗体
除了单克隆或嵌合抗-CNGH0010抗体之外，本发明还涉及对本发明的这些抗体特异的抗独特型(抗Id)抗体。抗-Id抗体是识别通常与另一抗体的抗原结合区相关的独特决定簇的抗体。通过将作为Id抗体来源的相同物种和遗传型(例如，小鼠系)的动物用抗体或者其含有CDR的区域免疫来制备抗Id抗体。免疫的动物将识别并应答免疫抗体的独特型决定簇并产生抗-Id抗体。抗-Id抗体也可用作“免疫原”以在另一个动物中诱导免疫应答，从而产生所称作的抗-抗-Id抗体。
CNGH0010多肽或抗体组合物
本发明也提供了CNGH0010多肽或CNGH0010抗体组合物，其包含至少一种本文所述的CNGH0010多肽或CNGH0010抗体，其以非天然存在的组合物、混合物或形式提供。这种组合物包含非天然存在的组合物，其包含至少1种或2种选自下述的CNGH0010多肽氨基酸序列的全长、C-和/或N-末端缺失的变体、结构域、片段或特定变体：80-100％的SEQ ID NO：3、5、7、9和11邻接氨基酸，或CNGH0010抗体或其特定片段、结构域或变体，任选地，与药学上可接受的载体或稀释剂组合。
本发明的CNGH0010多肽或抗体化合物、组合物或者组合可以还含有至少一种适宜的辅助剂，如但不限于，稀释剂、粘合剂、稳定剂、缓冲剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等等。优选药学上可接受的辅助剂。制备这些无菌溶液的非限制性实例和方法是本领域众所周知的，如，但不限于，Gennaro，编者，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Co，(Easton，PA)1990。可以常规地选择药学上可接受的载体，它们适用于抗-CNGH0010抗体、片段或变体组合物的施用方式、溶解性和/或稳定性，如本领域众所周知的或如本文所述的。
可用于本发明组合物的药物赋形剂和添加剂可以包括，但不限于蛋白、多肽、氨基酸、脂质和糖(例如，糖，包括单糖、二糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖，如糖醇、醛糖酸、酯化糖等等；和多糖或者糖聚合物)，它们可以单独或者联合存在，单独或者联合按重量计或者体积计构成1-99.99％。示例性蛋白赋形剂包括血清清蛋白，如人血清清蛋白(HSA)、重组人清蛋白(rHA)、明胶、酪蛋白，等等。也可以在缓冲能力中起作用的代表性氨基酸/抗体成分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜等等。一种优选的氨基酸是甘氨酸。
适宜用于本发明的糖赋形剂包括，例如，单糖，如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等等；二糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖等等；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、淀粉等等；和糖醇，诸如甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇(maltitol)、乳糖醇(lactitol)、木糖醇山梨糖醇(葡糖醇(glucitol))、肌醇等等。用于本发明的优选的糖赋形剂为甘露醇、海藻糖和棉子糖。
抗-CNGH0010多肽或抗体组合物还可以包括缓冲剂或者pH调节剂；通常，缓冲剂为从有机酸或者碱制备的盐。代表性缓冲剂包括有机酸盐，如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或邻苯二甲酸的盐；Tris、盐酸三羟甲基氨基甲烷，或磷酸盐缓冲剂。用于本组合物的优选缓冲剂为有机酸盐，如柠檬酸盐。
此外，本发明的抗-CNGH0010抗体组合物可以包括聚合赋形剂/添加剂，如聚乙烯吡咯烷酮、ficolls(聚合糖)、葡聚糖结合剂(例如，环糊精，如2-羟基丙基-β-环糊精)、聚乙二醇、调味剂、抗微生物剂、增甜剂、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性剂(例如，聚山梨醇酯，如“TWEEN20”和“TWEEN 80”)、脂质(例如，磷脂、脂肪酸)、类固醇(例如，胆固醇)和螯合剂(例如，EDTA)。
适合用于根据本发明的抗-CNGH0010抗体、部分或者变体组合物的这些和其他额外的公知药物赋形剂和/或添加剂是本领域公知的，例如，如“Remington：The Science & Practice of Pharmacy”，第19版，Williams& Williams，(1995)，和“Physician’s Desk Reference”，第52版，Medical Economics，Montvale，NJ(1998)所列举的那些，它们的公开内容并入本文作为参考。优选的载体或者赋形剂材料是糖(例如，糖类和糖醇)和缓冲剂(例如，柠檬酸盐)或者聚合剂。
本发明的抗-CNGH0010抗体组合物还可以包含至少一种任意合适的和有效量的组合物或药物组合物，其包含至少一种抗-CNGH0010抗体，所述抗体接触或施用给需要这种调节、治疗或疗法的细胞、组织、器官、动物或患者，任选地，还包含选自下述的至少一种：至少一种TNF拮抗剂(例如，但不限于，TNF抗体或者片段、可溶性的TNF受体或者其片段、融合蛋白、或者小分子TNF拮抗剂)、抗风湿药(例如，氨甲蝶呤、醋硫葡金、葡糖硫金、硫唑嘌呤、etanercept、硫代苹果酸金钠、硫酸羟氯喹、来氟洛米、柳氮磺吡啶)、肌肉松弛药、麻醉药、非类固醇消炎药(NSAID)、镇痛药、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂(例如，氨基糖苷类、抗真菌剂、抗寄生物剂、抗病毒剂、碳青霉烯、头孢菌素、氟喹诺酮、大环内酯、青霉素、磺胺药物、四环素、另一种抗微生物剂)、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、糖尿病相关剂、矿物质、营养物、甲状腺剂、维生素、钙相关激素、止泻剂、止咳药、止吐剂、抗溃疡药、缓泻药、抗凝剂、促红细胞生成素(例如，重组人类红细胞生成素α)、非格司亭(例如，G-CSF、重组人粒细胞集落刺激因子)、沙格司亭(GM-CSF、白细胞素)、免疫剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如，basiliximab、环孢菌素、daclizumab)、生长激素、激素替代药物、雌激素受体调节剂、散瞳剂、睫状肌麻痹药、烷化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、防辐射药物、抗抑郁药、抗躁狂剂、抗精神病药、抗焦虑药、催眠药、拟交感神经药、兴奋剂、多奈哌齐、单满吖啶氨、哮喘药、β激动剂、吸入类固醇、白细胞三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、肾上腺素或类似物、阿法脱氧核糖核酸酶(Pulmozyme)、细胞因子或细胞因子拮抗剂。这种细胞因子的非限制性实例包括但不限于从IL-1至IL-29的任一种白细胞介素。合适的剂量是本领域众所周知的。见，例如，Wells等，编，PharmacotherapyHandbook，第2版，Appleton and Lange，Stamford，CT(2000)；PDR Pharmacopoeia，Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000，DeluxeEdition，Tarascon Publishing，Loma Linda，CA(2000)，它们中的每篇都在这里完整地引作参考。
此类抗癌药或者抗感染药物还可以包括络合、结合本发明的至少一种抗体、与其共同配制或者与其共同施用的毒素分子。所述毒素可以任选作用以选择性杀死病理性细胞或者组织。病理性细胞可以是癌或者其他细胞。这些毒素可以是，但不限于，纯化的或者重组毒素或者含有毒素的至少一个功能细胞毒性结构域的毒素片段，例如，选自至少一种蓖麻毒蛋白、白喉毒素、蛇毒毒素或者细菌毒素。术语毒素还可以包括任意天然存在的、突变的或者重组细菌或者病毒产生的内毒素和外毒素，所述细菌和病毒可以在人和其他哺乳动物中产生导致死亡的任意病理状况，包括毒素休克。这些毒素可以包括，但不限于，产肠毒素的大肠杆菌(E.coli)不稳定内毒素(LT)、热稳定肠毒素(ST)、志贺氏菌属(Shigella)细胞毒素、气单胞菌属(Aeromonas)肠毒素、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)、葡萄球菌(Staphylococcal)肠毒素A(SEA)、B(SEB)或C(SEC)、链球菌(Streptococcal)肠毒素，等等。此类细菌包括，但不限于，产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、肠出血性大肠杆菌(例如，血清型0157:H7菌株)、葡萄球菌属物种(例如，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、Staphylococcus pyogenes)、志贺氏菌属物种(例如，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，和宋内氏志贺氏菌(Shigella sonnei))，沙门氏菌属(Salmonella)物种(例如，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholera-suis)，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis))，梭菌属(Clostridium)物种(例如，产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，艰难梭菌(Clostridium dificile)，肉毒梭菌(Clostridium botulinum))，Camphlobacter物种(例如，Camphlobacterjejuni，Camphlobacter fetus)，Heliobacter物种(例如，Heliobacterpylori)，气单胞菌属物种(例如，温和气单胞菌(Aeromonas sobria)，嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)，豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae))，Pleisomonas shigelloides，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinaenterocolitica)，弧菌属(Vibrios)物种(例如，霍乱弧菌(Vibrioscholera)，副溶血弧菌(Vibrios parahemolyticus))，克雷伯氏菌属(Klebsiella)物种、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，和链球菌(Streptococci)的物种的菌株。见，例如，Stein，编著，INTERNALMEDICINE，第三版，1-13页，Little，Brown and Co.，Boston，(1990)；Evans等人，编著，Bacterial Infections of Humans：Epidemiology andControl，第二版，239-254页，Plenum Medical Book Co.，New York(1991)；Mandell等人，Principles and Practice of InfectiousDiseases，第三版，Churchill Livingstone，New York(1990)；Berkow等人，编著，The Merck Manual，第16版，Merck and Co.，Rahway，N.J.，1992；Wood等人，FEMS Microbiology Immunology，76：121-134(1991)；Marrack等人，Science，248：705-711(1990)，将它们的内容完整并入本文作为参考。
应用
如本领域已知的或如本文所述的，本发明提供了使用至少一种本发明的CNGH0010多肽或CNGH0010抗体，调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种CNGH0010相关病的方法。
CNGH0010结合多肽或CNGH0010抗体或多肽拮抗剂的组合物可以在疾病状况的治疗中得到治疗性应用，所述的疾病状况例如癌症或其它具有失调的基质生产和重构(remodeling)的人疾病，包括肺纤维化、肝硬化、骨质疏松症、类风湿性关节炎和哮喘。潜在的疾病适应症也可以包括具有细胞机构、组织结构缺陷或由基质的病理学改变造成的机械化学转变的失调的疾病(Ingber D.，Mechanolbiology anddiseases of mechanotransduction，Annals of Medicine，inpress)。
本发明还提供了调节或者治疗细胞、组织、器官、动物或者患者中至少一种免疫相关疾病的方法，所述疾病包括但不限于下述的至少一种：类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、全身性发作的青少年类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、强直性脊柱炎、胃溃疡、血清阴性关节病、骨关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、抗磷脂综合征、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、特发性肺纤维化、系统性脉管炎/韦格纳肉芽肿病、结节病、睾丸炎/输精管切除术逆转过程、变应性/特应性疾病、哮喘、变应性鼻炎、湿疹、变应性接触性皮炎、变应性结膜炎、过敏性肺炎、移植、器官移植排斥、移植物抗宿主病、全身性炎性反应综合征、脓毒病综合征、革兰氏阳性脓毒病、革兰氏阴性脓毒病、培养物阴性脓毒病、真菌性脓毒病、嗜中性白细胞减少性发热、尿脓毒病、脑膜炎球菌血症、外伤/出血、灼伤、电离辐射暴露、急性胰腺炎、成人呼吸窘迫综合征、类风湿性关节炎、酒精-诱导的肝炎、慢性的炎性的病、结节病、Crohn氏病、镰状细胞贫血、糖尿病、肾病、特应性疾病、超敏反应、变应性鼻炎、枯草热、常年性鼻炎、结膜炎、子宫内膜异位、哮喘、荨麻疹、systemic anaphalaxis、皮炎、恶性贫血、溶血病、血小板减少症、任何器官或者组织的移植排斥、肾移植排斥、心脏移植排斥、肝移植排斥、胰腺移植排斥、肺移植排斥、骨髓移植(BMT)排斥、皮肤同种异体移植排斥、软骨移植排斥、骨移植排斥、小肠移植排斥、胎儿胸腺植入物排斥、甲状旁腺移植排斥、任何器官或组织的异种移植排斥、同种异体移植排斥、抗受体过敏性反应、Graves病、Raynoud氏疾病、B型胰岛素抗性糖尿病、哮喘、重症肌无力、抗体-介导的细胞毒性、III型超敏反应、系统性红斑狼疮、POEMS综合征(多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病，和皮肤变化综合征)、多发性神经病、器官巨大症、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、皮肤变化综合征、抗磷脂综合征、天疱疮、硬皮病、混合型结缔组织病、自发性Addison氏病、糖尿病、慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、白癜风、脉管炎、MI后心切开术综合征、IV型超敏感性、接触性皮炎、过敏性肺炎、同种异体移植排斥、胞内生物导致的肉芽瘤、药物敏感性、新陈代谢/自发性、Wilson氏病、血色素沉着、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、糖尿病性视网膜病、淋巴瘤性甲状腺肿、骨质疏松症、下丘脑-垂体-肾上腺轴评估、原发性胆汁性肝硬化、甲状腺炎、脑脊髓炎、恶病质、囊性纤维变性、新生儿慢性肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)、familialhematophagocytic lymphohistiocytosis、皮肤病状况、牛皮癣、秃头、肾病综合征、肾炎、肾小球性肾炎、急性肾功能衰竭、血液透析、尿毒症、毒性、先兆子痫、okt3治疗、抗cd3治疗、细胞因子治疗、化学疗法、放射疗法(例如，包括但不限于无力、贫血、恶病质，等等)、慢性水杨酸中毒、等等。见，例如，the Merck Manual，第12-17版，Merck& Company，Rahway，NJ(1972，1977，1982，1987，1992，1999)，Pharmacotherapy Handbook，Wells等人编著，第二版，Appleton andLange，Stamford，Conn.(1998，2000)，将它们每个都完整并入本文作为参考。
本发明还提供了调节或治疗细胞、组织、器官、动物或者患者中至少一种恶性疾病的方法，所述疾病包括但不限于下述至少一种：白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞、T细胞或FAB ALL、急性髓细胞样性白血病(AML)、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞性白血病、骨髓异常增生综合征(MDS)、淋巴瘤、何杰金病、恶性淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、Burkitt氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、恶性组织细胞增多病、恶性肿瘤的肿瘤相关综合征/高血钙综合征、实体瘤、腺癌、肉瘤、恶性黑素瘤、血管瘤、转移性疾病、癌相关骨吸收、癌相关骨痛等等。
本发明的任一种方法可以包括对需要这种调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或者患者施用有效量的含有至少一种抗-CNGH0010抗体的组合物或药物组合物。这种方法可以任选还包括共同施用或者联合疗法以治疗此类免疫疾病，其中所述CNGH0010多肽或CNGH0010抗体、其特定部分或变体的施用还包括在其施用之前、同时和/或之后施用选自如下的至少一种：至少一种TNF拮抗剂(例如，但不限于，TNF抗体或者片段、可溶性的TNF受体或者其片段、融合蛋白、或者小分子TNF拮抗剂)、抗风湿药(例如，氨甲蝶呤、醋硫葡金、葡糖硫金、硫唑嘌呤、etanercept、硫代苹果酸金钠、硫酸羟氯喹、来氟洛米、柳氮磺吡啶)、肌肉松弛药、麻醉药、非类固醇消炎药(NSAID)、镇痛药、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂(例如，氨基糖苷类、抗真菌剂、抗寄生物剂、抗病毒剂、碳青霉烯、头孢菌素、氟喹诺酮、大环内酯、青霉素、磺胺药物、四环素、另一种抗微生物剂)、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、糖尿病相关剂、矿物质、营养物、甲状腺剂、维生素、钙相关激素、止泻剂、止咳药、止吐剂、抗溃疡药、缓泻药、抗凝剂、促红细胞生成素(例如，重组人类红细胞生成素α)、非格司亭(例如，G-CSF、重组人粒细胞集落刺激因子)、沙格司亭(GM-CSF、白细胞素)、免疫剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如，basiliximab、环孢菌素、daclizumab)、生长激素、激素替代药物、雌激素受体调节剂、散瞳剂、睫状肌麻痹药、烷化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、防辐射药物、抗抑郁药、抗躁狂剂、抗精神病药、抗焦虑药、催眠药、拟交感神经药、兴奋剂、多奈哌齐、单满吖啶氨、哮喘药、β激动剂、吸入类固醇、白细胞三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、肾上腺素或类似物、阿法脱氧核糖核酸酶(Pulmozyme)、细胞因子或细胞因子拮抗剂。适宜的剂量是本领域众所周知的。见，例如，Wells等人，编著，Pharmacotherapy Handbook，第二版，Appleton and Lange，Stamford，CT(2000)；PDR Pharmacopoeia，Tarascon PocketPharmacopoeia 2000，Deluxe Edition，Tarascon Publishing，LomaLinda，CA(2000)；将它们每个都完整并入本文作为参考。
通常，通过施用至少一种抗-CNGH0010抗体组合物的有效量或剂量实现病理状况的治疗，所述组合物总共平均范围为至少约0.01到500毫克的至少一种抗-CNGH0010抗体/千克患者/剂，且优选至少约0.1到100毫克抗体/千克患者/单次或多次施用，这取决于组合物中所含的比活。备选地，有效血清浓度可以包括0.1-5000μg/ml血清浓度/单次或多次施用。适宜的剂量是医学从业人员公知的，并且将当然取决于具体疾病状态、所施用的组合物的比活，和经历治疗的具体患者。在一些情况中，为了实现所需的治疗量，必须提供重复施用，即重复单次施用具体监控或者计量的剂量，其中重复单次施用直到实现所需的日剂量或者效果。
优选剂量可以任选包括0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和/或100-500mg/kg/施用，或者其任意范围、值或者分数，或者用于实现0.1、0.5、0.9、1.0、1.1、1.2、1.5、1.9、2.0、2.5、2.9、3.0、3.5、3.9、4.0、4.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、20、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14.0、14.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、12、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14、14.5、15、15.5、15.9、16、16.5、16.9、17、17.5、17.9、18、18.5、18.9、19、19.5、19.9、20、20.5、20.9、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500和/或5000μg/ml血清浓度/单次或多次施用，或者其任意范围、值或者分数。
备选地，所施用的剂量可以取决于公知的因素而变，所述因素为诸如具体试剂的药物动力学特征，和其施用方式和途径；受体的年龄、健康和体重；症状的性质和程度、当前治疗的种类、治疗频率，和所需的效果。通常，活性成分的剂量可以为约0.1到100毫克/千克体重。通常，0.1到50，且优选0.1到10毫克/千克体重/施用或者缓释形式可以有效得到所需的结果。
作为非限制性实例，人或动物的治疗可以提供为本发明的至少一种抗体的一次性或者定期剂量，所述剂量为0.1到100mg/kg，如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/kg/天，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天的至少一天，或者备选地或额外地，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51或52周的至少一周，或者备选地或额外地，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20年的至少一年施用，或者它们的任意组合，使用单次、输注或者重复剂次。
适于内部施用的剂型(组合物)通常含有约0.1毫克到约500毫克活性成分/单位或容器。在这些药物组合物中，活性成分将通常以按组合物的总重量计约0.5-99.999％的量存在。
对于肠胃外施用，可以将抗体制备成溶液、悬浮液、乳剂、颗粒、粉末或者冻干粉末，它们结合药学上可接受的肠胃外载体或者与所述载体分别提供。此类载体的实例为水、盐水、林格溶液、葡萄糖溶液，和1-10％人血清清蛋白。也可以使用脂质体和非水性载体，如固定化油。载体或者冻干粉末可以含有添加剂，其保持等渗性(例如，氯化钠、甘露醇)和化学稳定性(例如，缓冲剂和防腐剂)。通过公知的或适宜的技术将制剂灭菌。
适宜的药物载体在本领域的标准参考书Remington’sPharmaceutical Sciences，A.Osol中的最近版本中描述。
制剂
如上面指出，本发明提供了适于药物或者兽医用途的稳定制剂，其优选为具有盐水或所选择盐的磷酸缓冲液，以及含有防腐剂的防腐溶液和制剂，以及多用途防腐制剂，所述制剂含有药学上可接受的制剂中的至少一种抗-CNGH0010抗体。防腐制剂含有至少一种公知的防腐剂或者其任选选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、亚硝酸苯汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯代丁醇、氯化镁(例如，六水合物)、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞的防腐剂，或者它们在水性稀释剂中的混合物。任意适宜的浓度或者混合物都可以使用，如本领域所公知的，如，0.001-5％，或者其中任意范围或者值，如，但不限于，0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9，或者其中任意范围或者值。非限制性实例包括，但不限于，0.1-2％间甲酚(例如，0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0％)、0.1-3％苯甲醇(例如，0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5％)、0.001-0.5％硫柳汞(例如，0.005、0.01)、0.001-2.0％苯酚(例如，0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0％)、0.0005-1.0％对羟基苯甲酸烷基酯(例如，0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0％)、等等。
如上面指出的，本发明提供了制品，其含有包装材料和至少一个瓶子，其含有任选在水性稀释剂中的至少一种抗-CNGH0010抗体与规定的缓冲剂和/或防腐剂的溶液，其中所述包装材料包含标签，其指出这种溶液可以保存1、2、3、4、5、6、9、12、18、20、24、30、36、40、48、54、60、66、72小时或更长时间。本发明还包括制品，其包含包装材料、含有冻干的至少一种抗-CNGH0010抗体的第一个瓶子，和含有规定的缓冲剂或防腐剂的水性稀释剂的第二个瓶子，其中所述包装材料包含标签，其指导患者将所述至少一种抗-CNGH0010抗体用水性稀释剂重构以形成可以保存24小时或更长时间的溶液。
根据本发明使用的至少一种抗-CNGH0010抗体可以通过重组方法产生，包括从哺乳动物细胞或者转基因制剂产生，或者可以从如本文中描述或者本领域公知的其他生物来源纯化。
本发明产品中至少一种抗-CNGH0010抗体的范围包括重构后(如果为湿润/干燥体系)产生约1.0μg/ml到约1000mg/ml浓度的量，然而更低和更高的浓度是可行的并且取决于计划的递送载体，例如，溶液制剂将与经皮贴剂、肺、跨粘膜或者渗透或微量泵方法不同。
优选地，水性稀释剂任选还含有药学上可接受的防腐剂。优选的防腐剂包括选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞，或它们的混合物的防腐剂。用于制剂中的防腐剂的浓度为足够产生抗微生物效果的浓度。该浓度取决于所选的防腐剂并且可以由技术人员容易地确定。
其他赋形剂，例如，等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂增强剂可以任选和优选地加入到稀释剂中。等渗剂，如甘油，通常以已知浓度使用。优选将生理耐受的缓冲剂加入以提供改善的pH控制。所述制剂可以覆盖宽范围的pH，如从约pH 4到约pH 10，优选的范围为约pH 5到约pH 9，最优选的范围为约6.0到约8.0。优选地，本发明的制剂具有约6.8到约7.8的pH。优选的缓冲剂包括磷酸缓冲液，最优选磷酸钠，尤其磷酸缓冲盐溶液(PBS)。
其他添加剂，如药学上可接受的增溶剂，如Tween 20(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯)、Tween 40(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸酯)、Tween 80(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)、Pluronic F68(聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)，和PEG(聚乙二醇)或者非离子表面活性剂，如聚山梨醇酯20或80或泊洛沙姆184或188、Pluronicpolyls，其他嵌段共聚物，和螯合剂，如EDTA和EGTA可任选加入所述制剂或组合物以减小聚集。如果使用泵或者塑料容器施用所述制剂，那么这些添加剂尤其有用。药学上可接受的表面活性剂的存在可以减轻蛋白聚集的倾向。
通过如下方法可以制备本发明的制剂，该方法包括将至少一种抗-CNGH0010抗体与防腐剂在水性稀释剂中混合，该防腐剂选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞，或它们的混合物。用常规溶解和混合方法将所述至少一种抗-CNGH0010抗体与防腐剂在水性稀释剂中混合。为了制备适宜的制剂，例如，将缓冲液中的至少一种测量的量的抗-CNGH0010抗体与所希望的防腐剂在缓冲液中以一定量组合，所述量足够提供所需浓度的蛋白和防腐剂。本领域技术人员将认识该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于浓度和所用施用方式进行最优化的所有因素。
所要求保护的制剂可以以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一瓶冻干的至少一种抗-CNGH0010抗体，其用含有水、防腐剂和/或赋形剂，优选溶于水性稀释剂的磷酸缓冲液和/或盐水和所选盐的第二个瓶子中重构。单个溶液瓶或者需要重构的两只瓶子可以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。
要求保护的制品可以用于在立即到24小时或更长时间时间段内施用。因此，本要求保护的制品为患者提供显著的优点。本发明的制剂可以任选在约2℃到约40℃的温度下安全保存并且长时间保持所述蛋白的生物活性，从而允许包装标签指出该溶液可以在6、12、18、24、36、48、72或96小时或更长的时间段内保存和/或使用。如果使用防腐的稀释剂，此类标签可以包括使用最长达1-12月、半年、一年半和/或两年。
通过包括将至少一种抗体在水性稀释剂中混合的方法可以制备本发明的至少一种抗-CNGH0010抗体的溶液。用常规溶解和混合方法实施混合。为了制备稳定的稀释剂，例如，将水或者缓冲液中的至少一种经测量的量的抗体以一定量组合，所述量足够提供所需浓度的蛋白和任选地防腐剂或者缓冲剂。本领域技术人员将认识到该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于浓度和所用施用方式进行最优化的所有因素。
所要求保护的产品可以以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一瓶冻干的(至少一种)抗-CNGH0010抗体，其用含有水性稀释剂的第二个瓶子重构。单个溶液瓶或者需要重构的两只瓶子可以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。
所要求保护的产品可以间接提供给患者，这可以通过为药房、门诊部或者其他此类机构和设施提供澄清溶液或者两只瓶子，其含有一瓶冻干的(至少一种)抗-CNGH0010抗体，其用含有水性稀释剂的第二个瓶子重构。在该情况中澄清溶液的大小可以最多达1升或更大，从而提供较大的储库(reservoir)，可以一次或多次从该储库取回更小部分的至少一种抗体溶液以转移到更小的瓶子中和由药房或者门诊部提供给它们的顾客和/或患者。
包含这些单一瓶子系统的公知的装置包括用于递送溶液的那些笔形注射器装置，如BD Pens、BD Autojector、Humaject、NovoPen、B-Dpen，Autopen和OptiPen、GenotropinPen、Genotronorm Pen、Humatro Pen、Reco-Pen、Roferon Pen、Biojector、Iject、J-tip Needle-Free Injector、Intraject、Medi-Ject，例如，由Becton Dickensen(Franklin Lakes，NJ，www.bectondickenson.com)、Disetronic(Burgdorf，瑞士，www.disetronic.com；Bioject，波兰，Oregon(www.bioject.com)；National Medical Products，Weston Medical(Peterborough，英国，www.weston-medical.com)、Medi-Ject Corp(Minneapolis，MN，www.mediject.com)生产或开发的那些。含有双瓶系统的公知装置包括用于在递送重构溶液的药筒中重构冻干药物的那些笔形注射器系统，如Humatropen。
当前要求保护的产品包括包装材料。包装材料除了提供管理机构要求的信息外，还提供了该产品可以使用的条件。本发明的包装材料提供了患者使用说明，其指导患者将所述(至少一种)抗-CNGH0010抗体在水性稀释剂中重构，以形成溶液和在2-24小时或更长的时间段内使用该双瓶、湿润/干燥产品的溶液。对于单瓶溶液产品，标签指出此类溶液可以在2-24小时或更长时间段内使用。当前要求保护的产品可用于人药品用途。
通过如下方法可以制备本发明的制剂，所述方法包括将至少一种抗-CNGH0010抗体和所选缓冲剂，优选含有盐水或者所选盐的磷酸缓冲液混合。用常规溶解和混合方法实施(至少一种)抗-CNGH0010抗体和缓冲剂在水性稀释剂中的混合。为了制备稳定的制剂，例如，将水或者缓冲液中的至少一种经测量的量的抗体以一定量与所需缓冲剂在水中混合，所述量足够提供所需浓度的所述蛋白和缓冲剂。本领域技术人员将认识到该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于浓度和所用施用方式进行最优化的所有因素。
可以将要求保护的稳定或者防腐制剂以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一瓶冻干的(至少一种)抗-CNGH0010抗体，其用含有溶于水性稀释剂中的防腐剂或缓冲剂和赋形剂的第二个瓶子重构。单个溶液瓶或者需要重构的两只瓶子可以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。
稳定抗-CNGH0010抗体的其他制剂或方法可以导致不同于含有所述抗体的冻干粉末的澄清溶液。在非澄清溶液中，有含有颗粒悬浮液的制剂，所述颗粒为含有不同尺寸结构的抗-CNGH0010抗体，并且已知为微球、微粒、纳米粒(nanoparticle)、纳米球(nanosphere)或者脂质体。如U.S.4,589,330中教导的，通过将含有活性成分和聚合物的水相和非水相接触，然后蒸发非水相以导致颗粒从水相凝聚，可以形成含有活性剂的此类相对均匀的基本上球形的颗粒制剂。可以如U.S.4,818,542中教导的，使用含有分散于连续溶剂中的活性剂和聚合物的第一相并通过冻干或者稀释-提取-沉淀从悬浮液除去所述溶剂来制备多孔微粒。用于此类制剂的优选聚合物是天然的或者合成的共聚物或者聚合物，它们选自gleatin琼脂、淀粉、阿拉伯半乳聚糖、清蛋白、胶原、聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)丙交酯聚(ε-己内酯、ε-己内酯-乳酸共聚物、ε-己内酯-乙醇酸共聚物、聚(β-羟基丁酸)、聚环氧乙烷、聚乙烯、聚(烷基2-氰基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、聚酰胺、聚(氨基酸)、聚(2-羟乙基DL-aspartamide)、聚(酯脲)、聚(L-苯丙氨酸/乙二醇/1，6-二异氰酸己烷)和聚(甲基丙烯酸甲酯)。尤其优选的聚合物为聚酯，如聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)丙交酯聚(ε-己内酯、ε-己内酯-乳酸共聚物和ε-己内酯-乙醇酸共聚物。用于溶解聚合物和/或活性剂的溶剂包括：水、六氟异丙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、己烷、苯或者六氟丙酮倍半水合物。分散含有活性剂的相与第二个相的方法可以包括加压使所述第一相穿过喷嘴中的孔口以影响小滴形成。
通过不同于冻干的方法可以得到干粉制剂，所述方法诸如通过喷雾干燥或者通过蒸发除去溶剂或者通过沉淀结晶组合物，然后为除去水性或非水性溶剂的一个或多个步骤。喷雾干燥抗体制剂的制备在美国专利号6,019,968中教导。基于抗体的干粉组合物可以通过在提供可呼吸的干粉的条件下喷雾干燥溶剂中的抗体的溶液或者浆液和任选的赋形剂来生产。溶剂可以包括容易干燥的极性化合物，如水和乙醇。通过在无氧条件下，如在氮气层下或者通过使用氮气作为干燥气体进行喷雾干燥可以增强抗体稳定性。另一种相对干燥制剂是分散于悬浮介质中的具有许多有孔的显微结构的分散剂，所述悬浮介质通常含有如WO 99/16419中教导的氢氟烷推进剂。可以使用计量的剂量吸入器将稳定化的分散剂施用于患者的肺中。用于喷雾干燥药物的商业生产的设备由Buchi Ltd.或者Niro Corp生产。
文中描述的稳定或者防腐制剂或溶液中的至少一种抗-CNGH0010抗体可以根据本发明通过多种递送方法施用于患者，所述递送方法包括皮下(SC)或者肌内(IM)注射；经皮、肺、跨粘膜、植入、渗透泵、药筒、微型泵或者技术人员理解的其他方法，如本领域公知的。
发明实施例
已经一般地描述了本发明，参考下面的实施例，会更容易地理解本发明，提供它们是用于解释而不是限制。
应当明白，除了根据前面的描述和实施例特别说明的以外，也可以实现本发明。
参考上面的教导，本发明的许多改进和变化都是可行的，因而也在所附权利要求书的范围内。
实施例1
CNGH0010序列数据
CNGH0010基因组核苷酸序列(SEQ ID NO：1)包含16356bp。在用几个基因预测算法建模的基础上，例如GeneScan、Fgenesh(http：//genome.ucsc.edu/)和Acembly程序(http：//www.acedb.org/Cornell/acembly/)，预测CNGH0010包含25个外显子(图1，表1)。外显子1、7和18都含有起始密码子，且位于启动子、增强子和其它调节基序的下游；这些外显子可以用作起始外显子。外显子15和23含有终止密码子，且可以用作终止外显子。已经鉴定出了5类可变剪接的转录物，且示例在CNGH0010.1、CNGH0010.2、CNGH0010.3、CNGH0010.4和CNGH0010.5中(分别是SEQID NO：2、4、6、8和10，表2)。
表1.CNGH0010外显子组成和描述
  外显子#   起始位置   终止位置   bp数   读框   备注
  1   101   526   426   框内   第1起始外显子；对10.1和10.2恒定
  2   786   986   201   框内   对10.1和10.2恒定
  3   1099   1155   57   框内   对10.1和10.2恒定
  4   1763   1813   51   框内   对10.1和10.2恒定
  5   1983   2165   183   框内   对10.1和10.2恒定
  5a   1983   2076   85   框外   左外显子
  5b   2117   2165   91   框外   右外显子
  6   2936   2980   45   框内   稀有外显子
  7   3149   3205   57   框内   第2起始外显子；对10.3和10.4恒定
  7a   3168   3197   30   框外
  8   3324   3392   69   框内   对10.3和10.4恒定
  8a   3189   3392   204   框外   与外显子8重叠但较长
  9   3615   3665   51   框内   可变剪接的
  10   5336   5371   36   框内   可变剪接的
  11   6065   6118   54   框内   可变剪接的
  12   7391   7450   60   框内   可变剪接的
  13   7590   7637   48   框内   对10.1、10.2、10.3和10.4恒定
  14   7811   7858   48   框内   对10.1、10.2、10.3和10.4恒定
  15   10129   10155   27   框内   第1终止外显子
  16   10690   10746   57   框内   对10.1、10.2、10.3和10.4恒定
  17   11393   11440   48   框内   对10.1、10.2、10.3和10.4恒定
  18   11679   11753   75   框内   第3起始外显子；对10.5恒定
  19   12996   13043   48   框内   对10.1、10.3和10.5恒定
  20   13157   13198   42   框内   可变剪接的
  21   13547   13618   72   框内   对10.1、10.3和10.5恒定
  22   14679   14702   24   框内   对10.1、10.3和10.5恒定
  23   14813   14860   48   框内   对10.1、10.3和10.5恒定
  24   15895   15929   35   NA   3’UTR-1
  25   16038   16356   319   NA   3’UTR-2
表2显示了各种CNGH0010转录物和包含在每种转录物中的外显子。以粗体显示的外显子在每种转录物中是恒定的，而在每种转录物中列出的其它外显子是可变剪接的，和任选地，各种转录物的部分。如表2所示，每种转录物的核苷酸和氨基酸序列随存在的外显子的准确组合而异。
表2.CNGH0010转录物描述
  转录物   外显子   核苷酸 长度(bp)   肽长度 (aa)
  CNGH0010.1   1，2，3，4，5， 6，8， 9.10，11，12，13，14，16，17，19， 20，21，22，23， 24，25   1809/2132   459/555
  CNGH0010.2   1，2，3，4，5，8， 9，10，11，12，13，14，15   1533/1734   373/440
  CNGH0010.3   7，8， 9，10，11，12，13，14，16，17，19， 20，21，22，23，24，25   881/1159   172/253
  CNGH0010.4   7，8， 9，10，11，12，13，14，15   445/646   82/149
  CNGH0010.5   18，19，21，22，23，25   600   88
CNGH0010.1是从外显子1开始至在外显子25结束的任意转录物，不包含外显子7、15和18。它可以具有少至15个外显子(即，外显子1-5、8、13、14、16、17、19、21-23和25)，或多至22个外显子(即，外显子1-6、8-14、16、17和19-25)。外显子6、9-12、20和24可以是有差别地剪接的，个别地或以任意的组合。因此，CNGH0010.1转录物范围为从1809至2132bp。根据外显子组成，它们能编码从459至555个氨基酸的肽。
CNGH0010.2是从外显子1开始至在外显子15结束的任意转录物，不包含外显子6和7。它可以具有少至9个外显子(即，外显子1-5、8和13-15)，或多至13个外显子(即，外显子1-5和8-15)。外显子9-12可以是有差别地剪接的，个别地或以任意的组合。因此，CNGH0010.2转录物范围为从1533至1734bp。根据外显子组成，它们能编码从373至440个氨基酸的肽。
CNGH0010.3是从外显子7开始至在外显子25结束的任意转录物，不包含外显子15和18。它可以具有少至11个外显子(即，外显子7、8、13、14、16、17、19、21-23和25)，或多至17个外显子(即，外显子7-14、16、17和19-25)。外显子9-12、20和24可以是有差别地剪接的，个别地或以任意的组合。因此，CNGH0010.3转录物范围为从881至1159bp。根据外显子组成，它们能编码从172至253个氨基酸的肽。
CNGH0010.4是从外显子7开始至在外显子15结束的任意转录物。它可以具有少至5个外显子(即，外显子7、8和13-15)，或多至9个外显子(即，外显子7-15)。外显子9-12可以是有差别地剪接的，个别地或以任意的组合。因此，CNGH0010.4转录物范围为从445至646bp。根据外显子组成，它们能编码从82至149个氨基酸的肽。
CNGH0010.5是从外显子18开始至在外显子25结束的任意转录物，不包含外显子20和24。它可以具有6个外显子，即外显子18、19、21-23和25。CNGH0010.5转录物含有600bp，它们能编码88个氨基酸的肽。
除了这5类外，含有外显子5a、5b、7a或8a的转录物会在这些外显子在对应的转录物中的起始位点具有框外(out-of-frame)剪接；这会在外显子的位点或外显子的下游产生截短的蛋白。经常，截短的蛋白使用在核苷酸位置7611处的外显子13中的可变起始ATG密码子。
SEQ ID NO：3的CNGH0010.1氨基酸序列与GenBank登记号AY358412在449个残基上具有94％的同一性(专利公开号WO/200061623)；SEQ ID NO：5的CNGH0010.2氨基酸序列与Dgen No.AAF54238在440个残基上具有100％的同一性(专利公开号WO/200078961)；SEQ ID NO：7的CNGH0010.3氨基酸序列与Dgen No.AAH23810在127个残基上具有99％的同一性(专利公开号WO/200132888)；SEQ ID NO：9的CNGH0010.4氨基酸序列与Dgen No.ADE28278在93个残基上具有98％的同一性(专利公开号WO/2003046152)；SEQ ID NO：11的CNGH0010.5氨基酸序列与Dgen No.AAF97894在102个残基上具有85％的同一性(专利公开号WO/200121658)。
实施例2
CNGH0010转录物
根据生产商的方法(目录号L1502-01，Invitrogen，Corp.，Carlsbad，CA)，对来自A431细胞和正常成年人男性皮肤组织的总RNA，进行5′和3′-RACE(cDNA末端的快速分析)。简而言之，用小牛肠碱性磷酸酶对5μg总RNA进行去磷酸化，以从非-mRNA或截短的mRNA去除磷酸-基团。然后用烟草酸性焦磷酸酶处理RNA，以从成熟mRNA去除5′帽结构。然后，将已知序列的RNA寡核苷酸连接到成熟mRNA的5′末端，再用作逆转录的模板，所述的逆转录使用Superscript RT酶，由也含有独特的已知序列的寡dT引物引发。在42℃进行RT 1.5小时。得到的cDNA在它们的5′末端和3′末端含有共有序列，且可以与对CNGH0010基因特异性的嵌套寡核苷酸(SEQ ID NO：12-21，表3)一起使用，以通过PCR扩增全部或部分cDNA。
表3.RACE引物
  SEO ID NO：   寡核苷酸名称   序列和外显子
  12   CNGH0010EX1F   GGC TGG GCA GAG ATG AAG TTC CAG   外显子1
  13   CNGH0010EX1FNEST   TCT GCC TGG GCA GTG GGG AG        外显子1
  14   CNGH0010EX7F   ATG CTC GGA ATA ACT TCC TGC AGC G 外显子7
  15   CNGH0010EX7FNFST   GCA GCG ACC AAC AGG CTA AAG       外显子7
  16   CNGH0010EX18F   ATG AAG CCG GCC ACT GCC TCTG      外显子18
  17   CNGH0010EX18FNEST   CTC TGC TCC TGC TCC TGC TG        外显子18
  18   CNGH0010UTR2R   GGG CCA GGG CTG GCA CAG GC        UTR2
  19   CNGH0010UTR2NEST   CGG GGC CTC GGT GGT GGT TGC       UTR2
  20   CNGH0010EX15R   TCT GGT GGC TCC TTG TCT GGA GGTC  外显子15
  21   CNGH0010EX15RNEST   GTC ACG GGA TGC GAG AGC TTC TCT GGTC外显子15
使用外显子1中的SEQ ID NO：12或13和外显子25(3′UTR-2)的SEQ ID NO：18或19来扩增CNGH0010.1转录物。使用SEQ ID NO：12或13和外显子15的SEQ ID NO：20或21来扩增CNGH0010.2转录物。使用外显子7中的SEQ ID NO：14或15和外显子25的SEQ IDNO：18或19来扩增CNGH0010.3转录物。使用外显子7中的SEQ ID NO：14或15和外显子15的SEQ ID NO：20或21来扩增CNGH0010.4转录物。使用外显子18中的SEQ ID NO：16或17和外显子25的SEQ IDNO：18或19来扩增CNGH0010.5转录物。如图2所示的RT-PCR数据证实了，CNGH0010.1(SEQ ID NO：2)、10.2(SEQ ID NO：4)的转录物处于最高水平，其次是10.5(SEQ ID NO：10)处于较低水平，10.4(SEQ IDNO：8)处于明显更低的水平，且10.3(SEQ ID NO：6)处于所有转录物的最低水平。
如表4所示，设计了5组正向/反向引物和探针，以通过实时PCR应用来鉴别5个显性的剪接变体。对于每个剪接变体，显示了正向和反向引物和Taqman探针。将用各种浓度的TNFα、LPS和IL-12处理的从A431和HCT116细胞提取的总RNA逆转录成cDNA模板，然后使用这5组引物/探针，通过实时PCR对其进行扩增。CNGH0010.2和CNGH0010.5受到各种浓度的TNFα、LPS和IL-12的上调。
表4.剪接变体的实时PCR的正向/反向引物和探针
  剪接变体  正向引物   反向引物  Taqman探针
  CNGH0010.1  SEQ ID NO：25：GAGGTGACAGCGGCAGTGAGT   SEQ ID NO：26：TTAAAATTCTTCCAGAAAGTGTCAAAGTTA  SEQ ID NO：27：ATTCAGAACTCTGAGACGTC
  CNGH0010.2  SEQ ID NO：28：TGTTGGTGGAGTCAATACTGTGAACT   SEQ ID NO：29：CGGGATGCGAGAGCTTCTC  SEQ ID NO：30：CACTTTCTGGAAGAATTTTAAATC
  CNGH0010.3  SEQ ID NO：31：GGAGCGGCGGAGGAAAT   SEQ ID NO：32：TGATGAAACCCAGCTTGGATT  SEQ ID NO：33：AAACCCGGGAACTCTGAGAC
  CNGH0010.4  SEQ ID NO：34：GGCGGAGGAAATGGACATAAA   SEQ ID NO：35：GAGCTTCTCTGGTCCTTGTTTATGG  SEQ ID NO：36：AATCTGGGATTCAGAACTC
  CNGH0010.5  SEQ ID NO：37：GGGTGCGGACGCGTCAT   SEQ ID NO：38：GTCTTGACTGAGTACTTCCCACCATAG  SEQ ID NO：39：ACGATCAGAACTACAATTACAAC
实施例3
预测的CNGH0010蛋白结构域
CNGH0010.1和CNGH0010.2多肽可以分别含有至多555和440个氨基酸(分别是SEQ ID NO：3和5)。前21个氨基酸编码信号肽，随后是5个主要结构域(图3)。包含信号肽的第一个结构域由外显子1编码，且与任意已知蛋白或蛋白结构域没有明显的同源性。基于NNPredict程序，预测该结构域会形成至少6个α-螺旋二级结构的亚结构域。由外显子2编码的第二个结构域具有19个甘氨酸-X-Y重复，已知其会形成卷曲螺旋结构，如在胶原和胶原样分子中所见到的。该结构域再后面是有差别地剪接的富含丝氨酸-甘氨酸的结构域(最高达42％丝氨酸，37％甘氨酸)，后者由外显子4-8编码。有差别的剪接似乎会改变丝氨酸-甘氨酸残基的大小和量。
有差别地剪接的间隔区结构域是由外显子9-17编码的。能编码该区域的外显子是非常小的，其大小为36-60个核苷酸。使用NNPredict程序，预测该区域具有最小的二级结构，如果有的话。发生在该区域的有差别的剪接似乎会调节富含丝氨酸-甘氨酸的结构域和C-末端结构域之间的距离。CNGH0010.1(SEQ ID NO：3)在由与任何已知蛋白没有同源性的外显子19-23编码的另一个结构域终止。预测该结构域具有至少2个预测的α-螺旋区域。CNGH0010.2(SEQ ID NO：5)多肽具有包含在10.1(SEQ ID NO：3)多肽中的所有结构域，除了由外显子19-23编码的C-末端结构域外。CNGH0010.3(SEQ ID NO：7)多肽可以含有最高达253个氨基酸，且含有有差别地剪接的富含丝氨酸-甘氨酸的结构域、有差别地剪接的间隔区结构和C-末端结构域的部分。CNGH0010.4(SEQ ID NO：9)多肽可以含有最高达149个，且包含有差别地剪接的富含丝氨酸-甘氨酸的结构域和有差别地剪接的间隔区结构域的部分。最后，CNGH0010.5(SEQ ID NO：11)多肽具有88个氨基酸，且基本上含有C-末端结构域，其前面是由外显子18编码的信号肽。
CNGH0010的结构域允许通过胶原样卷曲螺旋区域装配同源(都是CNGH0010.1(SEQ ID NO：3))或都是CNGH0010.2(SEQ ID NO：5))或异源(CNGH0010.1(SEQ ID NO：3)和CNGH0010.2(SEQ ID N0：5)的混合物)-三聚物，例如胶原或脂联素。认为在Gly-X-Y重复的一些X-Y位置脯氨酸残基的存在会通过未知的机理稳定这些三聚物，并从而进一步证实该分子可以形成胶原样结构。重组表达的CNGH0010.2(SEQ IDNO：5)多肽的初步生物化学表征表明，该分子确实会形成寡聚物。SDS-PAGE分析(如图4所示)表明，该分子的分子量是存在于非还原的和还原的样品中的单链的2、3和4倍，从而表明一些寡聚物是共价结合的。通过SELDI质谱分析法和凝胶过滤HPLC，已经证实了该结果。如在胶原分子中所见到的，通过存在于该多肽中的赖氨酸残基的翻译后修饰，可以看到三聚物链之间的共价交联。该修饰会产生该多肽的共价二聚物、三聚物和多聚物(原纤维)。CNGH0010.5(SEQ IDNO：11)分子基本上是C-末端结构域，且可以具有独特的功能活性。
实施例4
CNGH0010多肽的分泌
CNGH0010.1和10.2多肽含有相同的预测的信号序列(SEQ ID NO：3和5中的氨基酸1-21)。预测的CNGH0010.5多肽序列具有不同的信号序列(SEQ ID NO：11中的氨基酸1-24)。His标记的CNGH0010.2融合蛋白以及CNGH0010.5 mimetibody的体外瞬时表达(其细节描述在实施例6中)，证实了信号序列确实将这些细多肽导向胞外分泌。因此，CNGH0010.1(SEQ ID NO：3)、10.2(SEQ ID NO：5)和10.5(SEQ IDNO：11)多肽可能会被分泌到细胞外间隙中，它们可以在那里发挥它们的作用。CNGH0010.3和CNGH0010.4(SEQ ID NO：7和9)不含有信号序列。
实施例5
在选择的疾病组织中的相对CNGH0010转录物水平
使用Primer Express软件设计了并使用AppliedBiosystem(Foster City，CA)合成了CNGH0010引物和探针，引物：CNGH00010ssl-GGC GGA GGA AAT GGA CAT AA(SEQ ID NO：23)，CNGH00010asl-GCT TGG ATT TAA AAT TCT TCC AGA AA(SEQ ID NO：24)，TaqMan MGB探针：CNGH00010p1-6FAM-GCT TTT CAC ACC CGG GT-MGBNFQ(SEQ ID NO：22)。从不同的组织分离了总RNA，使用这些引物/探针，通过PCR进行了逆转录和扩增。CNGH0010的相对转录物水平如下面的表5所示。
表5.CNGH0010在不同的人疾病组织中的分布
  组织   疾病  变化倍数*
  脑   正常  1.00
  肺   肺气肿  4.58
  肺   呼吸感染  0.19
  扁桃体   扁桃体炎  1.63
  甲状腺   Grave氏病  8.35
  甲状腺   淋巴细胞性甲状腺炎  3.90
  胰腺   糖尿病  9.45
  胰腺   胰腺炎  0.86
  肝   肝硬化  0.45
  结肠   结肠炎  0.24
  结肠   UC  0.22
  滑膜   骨关节炎/DJD  0.14
  软骨   骨关节炎/DJD  1.32
  卵巢   子宫内膜异位  2.18
  膀胱   膀胱炎  0.19
  淋巴瘤   何杰金  0.06
  肉瘤  0.21
*每种组织中的CNGH0010水平与作为对照的正常脑组织中的水平相比(1.00倍变化)。
当对比校准组织、正常人脑RNA时，在肺气肿性的肺组织，来自Grave氏病患者或炎性甲状腺炎、扁桃体发炎患者的甲状腺组织，来自子宫内膜异位患者的卵巢，糖尿病患者的胰腺和骨关节炎患者的软骨中，检测到了提高的CNGH0010 mRNA水平。
实施例6
蛋白表达
通过克隆大部分CNGH0010.2转录物，其含有在由CMV启动子驱动的表达载体中的六-His标记框内(inframe)的外显子1-5、8、9、12和部分13，进行了CNGH0010.2(SEQ ID NO：5)蛋白的表达。将该构建体转染进HEK293细胞中，并用His标记进行纯化。表达的和纯化的材料的N-末端序列确认了纯化的蛋白的特征，并证实了信号肽切割。表达的和纯化的蛋白的SDS-PAGE分析表明，该分子会形成寡聚物(图4)，这得到了非还原MS-SELDI(表面增强的激光解吸/电离)和凝胶过滤HPLC的确认。该数据表明，由于它们含有相同的由外显子1编码的信号序列，所以CNGH0010.2和CNGH0010.1转录物具有分泌到胞外的能力。另外，SDS-PAGE、SELDI-MS和凝胶过滤HPLC表明，该分子具有形成寡聚物的能力。
CNGH0010.5(SEQ ID NO：11)不能单独地在HEK293细胞中表达；但是，把它工程化为mimetibody。将大部分含有氨基酸1-86的CNGH0010.5编码区域工程化构建到表达质粒中，后者含有与人IgG1铰链、CH2和CH3融合的人IgH J2片段。该质粒含有用于转录重组基因的CMV启动子，并利用能编码氨基酸1-24的CNGH0010.5内源信号序列。将该构建体瞬时转染进HEK293细胞中，并通过A蛋白亲和珠纯化得到的分泌的分子。SDS-PAGE分析证实，已经表达了预测分子量的蛋白，其含有CNGH0010.5成熟氨基酸序列，随后是人IgG1的J2、铰链、CH2和CH3。
测量了由TNF-α和LPS刺激引起的CNGH0010.2(SEQ ID NO：5)和CNGH0010.5(SEQ ID NO：11)蛋白在A431和HCT116细胞中的表达水平。TNF-α和LPS的刺激，造成了提高的CNGH0010.2(SEQ ID NO：5)和CNGH0010.5(SEQ ID NO：11)表达。类似地，在IL-12存在的情况下，提高了CNGH0010.2(SEQ ID NO：5)和CNGH0010.5(SEQ ID NO：11)的表达。另外，在A431细胞中通过TNF-α处理，提高了IL-6、IL-8和GMCSF水平，且它们在有嵌合的抗-TNF-α抗体存在的情况下降低。IL-6是一种重要的炎性细胞因子，在TNF-α处理后该细胞因子伴随着CNGH0010.2和10.5的提高而提高表明了CNGH0010和炎性反应的可能的机理。IL-8是一种在炎症中起关键作用的趋化因子。它将淋巴细胞和白细胞募集到炎性位点，并刺激其它细胞因子的生成。GMCSF是巨噬细胞/单核细胞以及其它淋巴细胞的刺激物，它也在炎性反应中起作用。该证据表明，CNGH0010可能在炎性调节中起作用，因此它是治疗性开发的较佳靶。
尽管上面参照某些具体实施方案进行了解释和说明，然而本发明不限于所述的细节。相反地，本发明涉及本文所述的CNGH0010多肽、多核苷酸、抗体、装置和试剂盒及其用途，且可以对在权利要求书的等同方案的范围和界限内的细节进行各种改进，而不脱离本发明的精神。
                       序列表
                       序列表
<110>Centocor，Inc.
<120>CNGH0010特异性的多核苷酸、多肽、抗体、组合物、方法和用途
<130>CEN5023
<140>PCT/US04/13211
<141>2004-04-30
<150>US 60/466,573
<151>2003-04-30
<160>39
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>16356
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>外显子
<222>(101)..(526)
<223>外显子1
<220>
<221>外显子
<222>(786)..(986)
<223>外显子2
<220>
<221>外显子
<222>(1099)..(1155)
<223>外显子3
<220>
<221>外显子
<222>(1763)..(1813)
<223>外显子4
<220>
<221>外显子
<222>(1983)..(2165)
<223>外显子5
<220>
<221>外显子
<222>(2936)..(2980)
<223>外显子6
<220>
<221>外显子
<222>(3149)..(3205)
<223>外显子7
<220>
<221>外显子
<222>(3324)..(3392)
<223>外显子8
<220>
<221>外显子
<222>(3615)..(3665)
<223>外显子9
<220>
<221>外显子
<222>(5336)..(5371)
<223>外显子10
<220>
<221>外显子
<222>(6065)..(6118)
<223>外显子11
<220>
<221>外显子
<222>(7391)..(7450)
<223>外显子12
<220>
<221>外显子
<222>(7590)..(7637)
<223>外显子13
<220>
<221>外显子
<222>(7811)..(7858)
<223>外显子14
<220>
<221>外显子
<222>(10129)..(10155)
<223>外显子15
<220>
<221>外显子
<222>(10690)..(10746)
<223>外显子16
<220>
<221>外显子
<222>(11393)..(11440)
<223>外显子17
<220>
<221>外显子
<222>(11679)..(11753)
<223>外显子18
<220>
<221>外显子
<222>(12996)..(13043)
<223>外显子19
<220>
<221>外显子
<222>(13157)..(13198)
<223>外显子20
<220>
<221>外显子
<222>(13547)..(13618)
<223>外显子21
<220>
<221>外显子
<222>(14679)..(14702)
<223>外显子22
<220>
<221>外显子
<222>(14813)..(14860)
<223>外显子23
<220>
<221>3’UTR
<222>(15895)..(15929)
<223>外显子24
<220>
<221>3’UTR
<222>(16038)..(16356)
<223>外显子25
<400>1
gaggaggaca gaggagggca cagagacgca gagcaagggc ggcaaggagg agaccctggt   60
gggaggaaga cactctggag agagaggggg ctgggcagag atg aag ttc cag ggg    115
                                            Met Lys Phe Gln Gly
                                            1               5
ccc ctg gcc tgc ctc ctg ctg gcc ctc tgc ctg ggc agt ggg gag gct    163
Pro Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Leu Cys Leu Gly Ser Gly Glu Ala
                10                  15                  20
ggc ccc ctg cag agc gga gag gaa agc act ggg aca aat att ggg gag    211
Gly Pro Leu Gln Ser Gly Glu Glu Ser Thr Gly Thr Asn Ile Gly Glu
            25                  30                  35
gcc ctt gga cat ggc ctg gga gac gcc ctg agc gaa ggg gtg gga aag    259
Ala Leu Gly His Gly Leu Gly Asp Ala Leu Ser Glu Gly Val Gly Lys
        40                  45                  50
gcc att ggc aaa gag gcc gga ggg gca gct ggc tct aaa gtc agt gag    307
Ala Ile Gly Lys Glu Ala Gly Gly Ala Ala Gly Ser Lys Val Ser Glu
    55                  60                  65
gcc ctt ggc caa ggg acc aga gaa gca gtt ggc act gga gtc agg cag    355
Ala Leu Gly Gln Gly Thr Arg Glu Ala Val Gly Thr Gly Val Arg Gln
70                  75                  80                  85
gtt cca ggc ttt ggc gta gca gat gct ttg ggc aac agg gtc ggg gaa      403
Val Pro Gly Phe Gly Val Ala Asp Ala Leu Gly Asn Arg Val Gly Glu
                90                  95                  100
gca gcc cat gct ctg gga aac act ggg cac gag att ggc aga cag gca      451
Ala Ala His Ala Leu Gly Asn Thr Gly His Glu Ile Gly Arg Gln Ala
            105                 110                 115
gaa gat gtc att cga cac gga gca gat gct gtc cgc ggc tcc tgg cag      499
Glu Asp Val Ile Arg His Gly Ala Asp Ala Val Arg Gly Ser Trp Gln
        120                 125                 130
ggg gtg cct ggc cac aat ggt gct tgg gtgagtggct gtggggctgc            546
Gly Val Pro Gly His Asn Gly Ala Trp
    135                 140
atgtggaaat gggaggctgt gggctgctgg gctgagattc ttgggaaacg gttgaaagga    606
tggatggatc tcttacttgc aggcttctgg ggcagcttcc ttctatgttc tgcccccctc    666
ctatgccacc ctggagtccc tctgcctgtc tctctcctgg tctctttatg atttgccctg    726
gctcttctct accagggtca gagatggtcc cactaagtgc aggtatgttg ttcttgcag     785
gaa act tct gga ggc cat ggc atc ttt ggc tct caa ggt ggc ctt gga      833
Glu Thr Ser Gly Gly His Gly Ile Phe Gly Ser Gln Gly Gly Leu Gly
        145                 150                 155
ggc cag ggc cag ggc aat cct gga ggt ctg ggg act ccg tgg gtc cac      881
Gly Gln Gly Gln Gly Asn Pro Gly Gly Leu Gly Thr Pro Trp Val His
    160                 165                 170
gga tac ccc gga aac tca gca ggc agc ttt gga atg aat cct cag gga      929
Gly Tyr Pro Gly Asn Ser Ala Gly Ser Phe Gly Met Asn Pro Gln Gly
175                 180                 185                 190
gct ccc tgg ggt caa gga ggc aat gga ggg cca cca aac ttt ggg acc      977
Ala Pro Trp Gly Gln Gly Gly Asn Gly Gly Pro Pro Asn Phe Gly Thr
                195                 200                 205
aac act cag gtaaagtcac ccccagacct gctacctgcc acctccctcc             1026
Asn Thr Gln
ctccaagccc acatgctccg cgtgcctccc tggtccctct ggatcctact ctcagtctca    1086
ccctctctgc ag gga gct gtg gcc cag cct ggc tat ggt tca gtg aga gcc    1137
              Gly Ala Val Ala Gln Pro Gly Tyr Gly Ser Val Arg Ala
              210                 215                 220
agc aac cag aat gaa ggg gtaagaggaa ggggctggga acaaatgaag             1185
Ser Asn Gln Asn Glu Gly
        225
aagccactgg gtgcaggcta cagagagctg gggaaagaca aagaggaaag caagatgggg    1245
gagtggaggg attggggtga gaggaagaga tggggctggg cgaggtggct cacacctgta    1305
atcccagcac tttgggaggc caaggcacgt ggatcacctg aggtcaggag ttcaagacca    1365
gcctggtcaa catggtgaaa ccctgtcttc actaaaaata caaaaatcag ccggtcatag    1425
tggcatgcgc ctgtaattgc agccacttgg gaggcggagg caggagaatc acttgaacct    1485
gggagatgga ggttgcagtg agccgagatc gcatcactgc actccagcct gagcaacaga    1545
gtgagaccct gtctcaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaagga ggaagagacg ggcctgggcc    1605
tggggaggag gcagatggga aggggaggtg ggagaaacac attaggagaa aggaagccaa    1665
gccccaaaga atgggagagg cctggcctgt gtccatggcc gaggccaacg tctccaaact    1725
caccgtcccc aaactcacca tccctttccc tcgacag tgc acg aat ccc cca cca     1780
                                         Cys Thr Asn Pro Pro Pro
                                             230
tct ggc tca ggt gga ggc tcc agc aac tct ggg gtgagtggag aggggcaacc    1833
Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Asn Ser Gly
235                 240                 245
caggagttgt gcaccaggag gaaatggaga agttctgctc cccttagact gggcatcatg    1893
gaatatggcc tgggtggaga gggagggagg aggggcccgt cttggtgctc tgtctttaat    1953
cccagccctg ctcccttcct gcccctcag gga ggc agc ggc tca cag tcg ggc      2006
                                Gly Gly Ser Gly Ser Gln Ser Gly
                                                250
agc agt ggc agt ggc agc aat ggt gac aac aac aat ggc agc agc agt      2054
Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Gly Asp Asn Asn Asn Gly Ser Ser Ser
    255                 260                 265
ggt ggc agc agc agt ggc agc agc agt ggc ggc agc agt ggc ggc agc      2102
Gly Gly Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser
270                 275                 280                 285
agt ggt ggc agc agt ggc aac agt ggt ggc agc aga ggt gac agc ggc      2150
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asn Ser Gly Gly Ser Arg Gly Asp Ser Gly
                290                 295                 300
agt gag tcc tcc tgg gtgagtttgg cacctctgtg gaaggctgag atggggtgag      2205
Ser Glu Ser Ser Trp
            305
gccctagtgg tccctgccgg gagagggctc caagtttctc tgaaagctgc cgctgcccga    2265
ggatgggcgg cctcgctgat agtcgtcacc ctgaggctcc ctcagcctcc tgttccccac    2325
ccatgctgtg cccctgatgc gcgcactatc gtttctgcca gagccacccc actgcttctg    2385
actctgtatc cctattttcc actctgtgat ggtggggacg ttatcccgcc tgtctaagct    2445
cttgcagtca agtccacttg gcaagtctca ggagaccgtg gggtggcgga gaaagagggg    2505
gacatgggag aatatgacac ttgtctggga agctcccagg agaatggggg caggactgtg    2565
atccgggaga cctacggacg ctgacagagc gacggtgcag acgacattca cacatggggc    2625
ccctgcacga tgggtgtgag ggcaggaagg ggcgctgtga ccccgcagct gccaccccag    2685
ggccccgggc ctcactgact ccagagccgg cagtctctcc agcctcctgg tcaatggcct    2745
gtccaacccc ttggctgacg gcctctccca tcccgtgtct tggagtcgag ctggagaggg    2805
agccacatct ggcttcctcg ggggtcggga aaagtgtcag acaggaggag gtgcgtggac    2865
acaataagcc gaataacctg agctgctctc atgcgccgct ccccgtatga tcctcctctc    2925
ccccatctag ggc agt tct ggg aat ggt gac caa ggc agc tac ggc cgc       2974
           Gly Ser Ser Gly Asn Gly Asp Gln Gly Ser Tyr Gly Arg
                       310                 315
tcc cag gtgagggctc tagggtccct tccacttgct gccccctggt ggcaggatcg       3030
Ser Gln
320
cggctactgc gcggccgggc tccaggggtt cccacccccg gcctgcggtg ggcagcagct    3090
caggttctcc aaatcattgc gtagttccga ataccctcgg ccacacctgg ccttctcc      3148
atg ctc gga ata act tcc tgc agc gac caa cag gct aaa gag ggg gaa      3196
Met Leu Gly Ile Thr Ser Cys Ser Asp Gln Gln Ala Lys Glu Gly Glu
            325                 330                 335
ggt ctg gag gttggaaaga ggactggaat ctgattgggg ttccaacaaa              3245
Gly Leu Glu
340
tctgtaacac cgctgggaac gactgggtcc cctttaggtc ctttaggaca gcgtttgaaa    3305
tcttgctttc ccctgcag gga tcc agc acc ggc tcc tcc tcc ggc aac cac      3356
                    Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn His
                                    345                 350
ggt ggg agc ggc gga gga aat gga cat aaa ccc ggg gtgagtggct           3402
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly
                355                 360
ggcgtgaatc tcccaccaac cgcgggaagg aaaaggagag cagctggttt cactcgcagg    3462
atcggggagc caaggctccg cggagatggg gctggatggc cgcggaggtg gagcggaagc    3522
ggctcgcccc agggttaaaa tgctgccatt ttggggctgg gactggtctg ggaggggact    3582
gagggaaagt ctcccctttc tctccccggc ag tgt gaa aag cca ggg aat gaa      3635
                                    Cys Glu Lys Pro Gly Asn Glu
                                        365                 370
gcc cgc ggg agc ggg gaa tct ggg att cag gtgagagcca aagtctctta        3685
Ala Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln
                375                 380
agtctcctgg ggactgcagt tcctgcccag gactgtgccc actcctccta actcaactct    3745
gctcaacccc ctcctgcctt gtctgcaggg aactgactat ttcggcagaa gaaaccaaat    3805
gcactcctaa aaatgctaac gatttccaaa gtactaatta attgcaaatc ttgctgtgat    3865
atacctcacc ttataccaca gatggggctg ggagaaattc catgtaaacc ggtcctttta    3925
gaagcacaat tgtcttaaat gtcctctatc cagccgggga acagactgtg gtgaactctg    3985
ggggattcag agtgctttgg aaaaacattc cccccagtta tgctggaaat gtgggcttta    4045
tgtcagcacc tgtggtgctg agagttagtg tcacggagat cttgtgaaag tgcaggttgc    4105
tctaacaggg ctgggtgggg ctgagcctgt tagccgcgtt gctaacaagc tcctgggtga    4165
ggcgttggtg ggaaaggacc cacgtggcca ggggcaaggc cagaccggag gtgctggggc    4225
tgagtagaga catctctttt tagataatct atgagggata ctaacctttt atgggaacaa    4285
actggttttt ttaaaaaaaa atttcttccc atttgtaacc ctctttctag tttgtgtttt    4345
tttccttttt gagatggagt cccgctctgt tacccaggct ggagggcagt ggtgcgatct    4405
gagctcactg gaaactccac ctcctgggtt caagcgattc tcttacctca gcctcccgag    4465
tagctgggat tacagacgcc agccaccacc tctggctaat ttttttttgt atttttagta    4525
gagatggggt ttcaccatgt tggccaggct ggtctcaaac tcctgatctc aggtgatctg    4585
tccgcctctg cctctcaaag tgctgggatt acaggcatga gctactgcac tcggactttt    4645
ctagtttttt aatatacctc agttttaagt atataagtag tcaaaaagca gccatc tttt   4705
cctctatggt ttttgctctt ggtgtaccgc tttaaggtaa ttttcttcta gcactatgca    4765
tactcctgca atttcacttt ttcagtttaa ctgggatgca tctggacttt gttttcctat    4825
atgctgtcta gtcccacccc tccatctaac cagacttacc ctacgctttg tatccgagct    4885
gtgtcctcct ttatgagggg aaaactggtt aaaaacagag aggaggaaat tgatgagcta    4945
gaactaaaat tttcccccaa aatacttcac tgatattccc attcccatgt attcaatcac    5005
ttcaaccact gatttaaaat gcctcttgta aataccttag tattttgggg agtttctggg    5065
aattctgtcg gacaggactg ctttatttat ggtagcttta gagtatgtta ctatctacct    5125
cttatcttca cttaccattt atcttttcca gtgttttctt acctattctt aaactttcat    5185
tctcctaaaa aaatgtcagt gtttggacca gttccaaaag agagtgccat taggattctt    5245
agaggaatca tattaaatca atacattaat tttcgggggt ggcctcagga tcttcagcag    5305
gggtctgtgt ttctttgtct caccctgcag ggc ttc aga gga cag gga gtt tcc     5359
                                 Gly Phe Arg Gly Gln Gly Val Ser
                                                 385
agc aac atg agg gtaagaggat ggtagatgtg gggtcagaga ctgtgccggt          5411
Ser Asn Met Arg
    390
agtaagtggg gtagaggtct gttctccagg agcaatactg gcagacaggt ggtcccacat    5471
ccctgccagg tctacctgag agctctggga acgaggaagt actgatgggt ctggccatgt    5531
ttcacagcag ataaagcagg actccagagg agcccacctc tcccttaaga ggggaccagc    5591
cagtctactc tatgccgcct cagcccccac tggctctcca gctagcatct ccttttttta    5651
ctaatgccaa tcagcccaga cagggtcctt cagtttgaat caatttagtg taacagcctg    5711
gcccactcca gctccaaagc caggggagaa ttcggatgct ttgctggcaa agccctccct    5771
gatggatttt gggcggcttg cagaaatgaa cataaacaga gatggcgatg ttatctatgg    5831
acatcgtaag tgagcagcca cccgacccac aggagcttga aacgagatct cagggcagat    5891
ggaacttccc cgagagaagg acctctttct caggcctctg ggaagtcctc tgtcatgctc    5951
atgtctcagt cccccgattc aggaatccct cgccgacacc ctgcttcctt gccctctcgt    6011
ccccctgccc gcctgcctcc ccatcaactc ctctccgttt tctgtctccc tag gaa       6067
                                                           Glu
ata agc aaa gag ggc aat cgc ctc ctt gga ggc tct gga gac aat tat      6115
Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn Tyr
    395                 400                 405
agg gtgagcctag gggcaggcag ggttggcttt aggagaaggg atggtgaagc           6168
Arg
410
atgctaagat cctgggaaaa gaaacaaaaa tatcagtttc ttcttgcaag ctgctctgaa    6228
tctgcgtcca gtgaccatca agagaccaaa acagggttct gggatcccca tctccatctt    6288
tggttcattc attccttcct tccttttgat ttggatcgga gccatgttac ttttgtaagg    6348
ggagaaaaca gataaaagta acagaagaat ggtcaagggg atttccatac ttagggaggc    6408
agtgttgaga aggagaaagt cactgagctt tgaggtagaa gatgaggttt cgaaagccag    6468
ctctggccag gcaccagcat aactgtaatc ccagcacttt gggaggctga ggtgtgggga    6528
tcatttgagc ccagaagttt gagaccagcc tgagcaacgt aggaagaccc tgtctctact    6588
ttttaaaaag aaaataatag gccatgtgca gtggctcaca cctgtaatcc caggtagcta    6648
ggattacatg cctcagcctc ccaagtagct gggattacag gcatgtgcca ccatgcctga    6708
ctaattttgt atttttagta gagatggggt ttcactatgt tggccaggct gttttcaaac    6768
tcctgacctc aggtgatcca cccacctcgg cctctcaaag tgctgggatt acaggcgtga    6828
cccacgatgc ccagcctcaa aaaaatttaa gatatatatt aaaatcacca ccagctctat    6888
catgtcatct gtatatcttc aggcaagtca gctaacctct ccgagcctga gcttcctcca    6948
gtaaaatgag gacagtgaaa cctgactcac gcagccttca gttactgtac agctttccat    7008
gtcaccacca gaccaaggtg ttgtggagtc cagactctgg agacagatgc tgcataaggc    7068
atggtgcttg gcgtgccgtg ggactacacg ttagctaatc tcatttgctt gaggtgtttt    7128
ggggacagac caggatggag gcaagagtct gaatattgag attcagggga ctgggtgggg    7188
ttccatggga gcaatccatt ctaagaaagc tttcccaagt gaactttttg gtgctgtgta    7248
aggaagagaa ggcagcttta tagagaggag gacaggaagc ctggaccgag gtggggatga    7308
agcaatccgg ggcaggttga caggtggcag gcatgatagg aagcataagc cttggacatc    7368
ggtccccctt ttccccaccc ag ggg caa ggg tcg agc tgg ggc agt gga gga     7420
                         Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly Ser Gly Gly
                                         415                 420
ggt gac gct gtt ggt gga gtc aat act gtg gtgagtggag gcaacactcc        7470
Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Thr Val
                425                 430
accttgggct gggaccatgg tgtcacacaa tcctcgcctc ccctcctgcc actcagatct    7530
cccgactctg gctcacaaag tgggttcttc tctcatccca tatctccttg gttccatag     7589
aac tct gag acg tct cct ggg atg ttt aac ttt gac act ttc tgg aag      7637
Asn Ser Glu Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys
                435                 440                 445
gtgagttctg cgagatggct ctgttcactc gcatttggaa aaccaacccc tgcccttggc    7697
cccacagtct ggggtcctct ttctaaacca acagtcagca gtggcccttg acctctctcg    7757
gccaattacc ttatgactca atttggccat tcttcttttt gtttcctcca tag aat       7813
                                                           Asn
ttt aaa tcc aag ctg ggt ttc atc aac tgg gat gcc ata aac aag          7858
Phe Lys Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys
        450                 455                 460
gtaagggctg gacatcttcg tcggagaggg ctatagggaa gaaagctaaa cctccgctct    7918
gtgagctggg gaaacagtga tgctggccac tgaggaagca tttaggccag tgctaaaaac    7978
aaaaactaaa cacactgggg gtggaggagg gaggacagag gagacctgaa aagaggggga    8038
gaatctggag cagctgagat tgaggttgag cagaggggac gggcttcttt gctgtttcag    8098
catatagacc cgagcaggtc ctgaacctca ctttcccctt tgagatgggg aaggttaagg    8158
ggagagtaga ttgactccta gagggcacat ggaatgagga gtgaggtgga gctaagaggc    8218
cccaagagga agggcaccca gagaaaggaa ccagcactgg ccgagagcct caggggtgac    8278
aggcattagt ctctcccgca caaacaaaaa cacagctggg gcgcagaacc cctccctcct    8338
tcctccctgc ctacccttcc gtcttgcagg ggaacccctg gccaggctgc tttgatacct    8398
gagtagcaca ggcacctcta gagtagaggg ggctggagtg gaagggaggg gaggaaggac    8458
aggtggacaa cccatgcaga cacacccccg gcagaagctg cgattcgtga ttggaggatg    8518
ggtttttgag acactctatt tttttttttt tttaagaata tgaattaatt gtcaaagttt    8578
aaacatggag agacttcaca taatgatttg gatttctggt ttctttcaaa aactttggta    8638
acactgggtt ccatttccat ggggtggggt taggctagag ctgagaaaca gctgctgctt    8698
ggcccaggtg gggggtgttg ggaatgggtg ggggggtcac tccctagtgg ccagactgtc    8758
cctacctgtc acagtcattt tagccacctg actggcccct gtgagcagtg gagtttctgg    8818
cctttaatgt aaaagagaga agactgggct caggaaaatc taagtctgac cttttaggaa    8878
ggagattgag gagacaggag agtacagatg ttcccaccca gctacagtgg attcatgttc    8938
tctgtttctt ttcttttttc tttttctttc tttctttctt ttgttttttt tttttttggt    8998
gagacggagt ctcgctctgt cacccaggtt ggagtgtagt ggttcgatct cagctcaatg    9058
cagcctctgc ctcctgggtt caaaatgatt ctcctgcctc agccgctcca gtagctgagt    9118
ttacaggtgc ccgccaccac acccgggtaa tgtttgtatt tttagtagag atgggctttc    9178
actatgttgg ccaggctggt ctcgaactcc tgacctccag tgatctgccc accttggctt    9238
cccaaaatgt tgggattaca ggcatgagtc actgcatctg gcctctctgt ttcacagaga    9298
acggtttctg gtaggagcaa gactctttcc tgggtcacag ggaacttagg gtctgatggg    9358
agagccgggg cacatacaga cacttcccag agagccagga tagacaccct gccagttttg    9418
cccatctagg gcggcagtcg agggagtgat cgcagtgagg caggatccat ctgggccagc    9478
tcctcaaggg gcagatctcc tagaaagcag ggcagggcag aggtgggcag gggagagaat    9538
ggagccccat tcttcacagt ggggtgaggg agctgaggac ttcagccaga gtgaggaggg    9598
agcagagggg aacgcagtgt aatgttcctg acgatgcagg gggttcttaa gcccaagcca    9658
ggatatctgg gtttgtttgg atagcagtgg tgggcaaaaa ggtccctgta ggtttctgga    9718
gcaggggtct cttataccct tgtgctggct cacaatgccc tggaattcct atttctcaag    9778
ctctctctta gaacctattt ctggccaggc gcggtggctc atgcctgtaa tcctagcact    9838
ttgggaggcc gaggctggca gatcacttga ggtcaggagt ctgaaaccag cctggccaat    9898
gtggtgaaac cccatctcta ctaaaaatac aaaaattagc caggcgtggt ggtgtgcgcc    9958
tgtagtccca gctacttggg aggctgaggc aggagaatcg cttgaacctg ggaagcggag   10018
gttgcggtga gctgatatcg tgccactgca ctccagcctg ggcgacagag cgagactcca   10078
tctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaacaaaaaa aaacctgttt ctttgcccag gac cag      10134
                                                       Asp Gln
aga agc tct cgc atc ccg tga cctccagaca aggagccacc agattggatg        10185
Arg Ser Ser Arg Ile Pro
465                 470
ggagccccca cactccctcc ttaaaacacc accctctcat cactaatctc agcccttgcc   10245
cttgaaataa accttagctg ccccacactc ctggcctctg ctcctttctt acgtctccgc   10305
tgttatccag ggtggtgtgg aaggggtggc tgcagcccca cagcttcggg aaacgggctg   10365
gaggaggccc ggcaggtgga aaggggacac tctgaggcag gtcctagtct tgaggttttg   10425
ctagaattag gttctgctgg aggctgggga acttgggata gaaaacattg tatgctctgg   10485
gacagggaga gttggttagt gcctctctct ctccctgtgt ttcccaaaat ggtttcctgg   10545
tgtccctaaa gactctcagc tcctcccatc cccaacctta gtcacaatga cattctgaag   10605
gttgagatag ggcagtagca ggaggagggg tgggtgagtg ggcccaggct ctctgctaac   10665
ctgctccccg cctttcatcc acag aac cag gtc ccg ccc ccc agc acc cga      10716
                           Asn Gln Val Pro Pro Pro Ser Thr Arg
                                           475
gcc ctc ctc tac ttc agc cga ctc tgg gag gtaggagaat tcttgctgtt       10766
Ala Leu Leu Tyr Phe Ser Arg Leu Trp Glu
480                 485
tgaagaactg ggggcctggc cctcctgact ctccccaagc ctccctcaag gcagccaccc    10826
tctgctccaa ccacctgttt caaaactccc cccctttttt tttttgagac agagtctcgc    10886
tctatcaccc aggctgaagt acagtggcac tatctcggct cactgcaaac tcctgcctcc    10946
tgggttcacg ccattctcct gcctcagcct cccgagtagc tgggactaca ggcgcctgcc    11006
accgtgcccg gctaattttt tttttgtatt tttagtagag acagggttta taccatgtta    11066
gccaggatag tctcaatctc ctgacctcgt gatccacctg cctcggcctc ccaaaatgct    11126
gggattacag gcgtgagcca ccgcgcccag ccaactcccc ctcttcattt ttgagacagc    11186
tcatccaaat cttatcacca aatcttatca ccaataccat ctcaagtgct gacaccctca    11246
atctcccacg tgcttacctt cctccaaccc caagccacac ccaaaagctc cttcctaccc    11306
gagatctgga atccccccaa tttgctgcat agaccacccc gtgggttctg cctccccggc    11366
ccactctgcc ctccttctcc ctgcag gat ttc aaa cag aac act cct ttc ctc     11419
                             Asp Phe Lys Gln Asn Thr Pro Phe Leu
                             490                 495
aac tgg aaa gca att att gag gtaagggggg caggacttct cagctctggg         11470
Asn Trp Lys Ala Ile Ile Glu
    500                 505
acacagggtt cggggccctg ggcgagccgc tgacccaggt gtctgtccca gtttcttccc    11530
ctcccttccc actttcccag gctttgtgca atcccgagtg ggggcggggt gagagggaga    11590
agccgtgagt cactgaggag cagggtggga ggacctccct agcataaaag ccgaggccga    11650
gggctggggc ctccacaagc acatgaac atg aag ccg gcc act gcc tct gct       11702
                               Met Lys Pro Ala Thr Ala Ser Ala
                                               510
ctg ctc ctg ctc ctg ctg ggc ctg gcc tgg acc cag ggg agc cac ggc      11750
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu Ala Trp Thr Gln Gly Ser His Gly
    515                 520                 525
tgg gtgggtaccg cagggtgcac aggtgcgggg agatcgtatt gaggggaaga           11803
Trp
530
aggggcctag gctgcggcat ggggaggaca gctgaggtgg aacgggaggg cggtgtgcag    11863
gggtcaggtc cctgtctagt ggaggcagct gctgagggtc tgaagacctg ggtcagggag    11923
gatggggaga acctctgggc ggtgccaaag accacactcc aattctgcat ggccagtagc    11983
ctttgagaaa caggacccgt gggcactgag acaaaggctg cctgctcccg tgtctacgtg    12043
tgccaagtat atgaggctgg acaggtgggg ccctgcaaag ggggaggtcg aggcgctcca    12103
gctaagtgca gtcatgcatg catgtgtgaa cagggtggcg tgttgtctga tgtttcacga    12163
agaaccagga tgctgatctc taactgtaac taatttaatt tttaagtaga ccaagcaaaa    12223
aatatctgga ggcccatggt caaccagttt gtgacctcag ggttagggct tgcagtgggg    12283
tttaggttca aggtcaggta tggataaggc agaattaatg ctggagtcag gacttcactg    12343
tcactctgtg tgtgtgtgtg gcagggcgga cggtccaagt ggagaagccg tgatggcagg    12403
aactgaactt cttttcaacg cttagagttt ctcctcttgc gctggggctg gggggggtgt    12463
ccggtgcatc tgcagtgtct taagttgctt tatctgtttt cttgtatttc tcttcttttg    12523
cttcctgtgg tccagagcta acctaagcac gcagcttctg cagataacaa cccctccttc    12583
aagcaccctg tggggcatgg cgtcggtgtg cagggactaa gggcctacgg gcatagcagc    12643
aggacttggt gcaggcagaa ggtgggctgg gctgcagtgc ctgcgtctgc cccagaggag    12703
cctgcatggc tgcagctcac ttgttctagc tcagtcttag gctggggctg ccaactctcc    12763
cacggcatgg gtggggaagg tgttgccaaa cctggttctc tccctggctc ccaatgctga    12823
gtgtggatat ctgtcttcta tctatctggg ccatcagctc ctccaggctc actgccttct    12883
ctataggtag cacgtggaaa ggggtggggt gagggagaaa ctggggctct gaaagcccgg    12943
caatgcccgc acgactgcgg aggcacgaac tgtggcccct tcttcctttc ag ggt gcg    13001
                                                          Gly Ala
gac gcg tca tca ctg cag aaa cgt gca ggc aga gac gat cag              13043
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Lys Arg Ala Gly Arg Asp Asp Gln
        535                 540                 545
gtgagtctct gtcctcaagt taccctgcag ggcccttggt cccccttggc cttgctcccg    13103
ggtctgggca atctgaaatt ctctttcact cctccattca atggctttct cag ccg       13159
                                                           Pro
ggt gca gga tgg cag gag gtg gca gct gta act tcc aag gtgagacatc       13208
Gly Ala Gly Trp Gln Glu Val Ala Ala Val Thr Ser Lys
        550                 555                 560
taccatggac ccgctgggtt acgtcctggc acttcttttc ttggtctcct accctcacct    13268
cccaagtaac acttgaagag ttggcagagg tcttgagggc aggaggagga gtaggaggag    13328
gaggcggcgg ccatttgggc taggacagta aaggcaggtg agggtggggg ccctggctgg    13388
ctggaggaga ttgtataaaa gaaaacacgt gacacaagga ggggagcagg caggtgtttt    13448
aggaaaggtc tggtccaggc aggaaggtgg gatgtttatt ccagagcaaa atggccttcg    13508
tccgtctgtt ctaaccgcca tgcccacttc ttccacag aac tac aat tac aac cag    13564
                                          Asn Tyr Asn Tyr Asn Gln
                                                          565
cat gcg tat ccc act gcc tat ggt ggg aag tac tca gtc aag acc cct      13612
His Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser Val Lys Thr Pro
            570                 575                 580
gca aag gtgagaccgg caaccaccct gtcttcccgc tgggggctct gcatgaggga       13668
Ala Lys
tggggagaga ggctttcact gccggggtcc tctcggttgg ttgccggagg ccggatcccg    13728
ctctctttga gtccaggcct ccccacccct ttgcaaggga gactcgggtt ccctgagaca    13788
gtttggaagt ggagggcagg agggttcaat gcgcctcaca cccacccagt cagaaaaggt    13848
taaaaaggag cagcagcagc aacagagaaa actgagaacc aacaccctct ccaagaagaa    13908
tataggcttt aaaaaatcat gacacctgca aaacacgcaa gcagctcttc ctcacaggtt    13968
ccctctctgt ggaccttttt ttgcggggga agatggaatg gagggcgagg aaagcagact    14028
agcacttagg ggaggccggc ctgtggatgc ctggttggcg gtgaaatgaa tgctttattc    14088
cacaaaggaa atgaaaagaa aaaatacgtg agaatttggt tttattccgt tgcaaagaag    14148
gcaatctcat aacatcagta aatgaatatg ctaagtacaa atttggctga caaagcaaca    14208
gcaggctgtg tatttccatc tctcatgaca ataaagtccc cgcccttggg gagaggacct    14268
tccactgagg gacgagaaac tacaggctgg tgagaggagg gacatgcagc ttctactgcc    14328
tgtggcttcc actctgctga gttatctgtg gcttccactc tgccgggtta tctgtggtca    14388
gtgtctccct acctggcagg ccaaagcgag gcctatgctc ttttgacccc cttggtcagt    14448
acgtgcccag gaaccatgtt caatatcatc ttggatcaag tgcactcagg atgataaacg    14508
tgctgtgaaa ccaactccac agcctgaatg tccacagtca gactggaaaa ccttggtgat    14568
agccctggtg tgagcctgcc cttgctgctg ggcccttcat gagcgtggag gccatggcag    14628
agtacaggga ggccatgacc ccacatcact ttcctttgat ctttttgcag ggg gga       14684
                                                       Gly Gly
                                                       585
gtc tca cct tct tcc tcg gtgagtatgg gggcctgatc ttcatctggc             14732
Val Ser Pro Ser Ser Ser
            590
tggagagaga aggggcctga ggccagaggg tatggaaggg accctgtggt ggccactcag    14792
actttctctt tttctggcag gct tcc cgg gtg caa cct ggc ctg ctg cag tgg    14845
                      Ala Ser Arg Val Gln Pro Gly Leu Leu Gln Trp
                              595                 600
gtg aag ttt tgg tag gtgagtgtca gagtgagccg acccaggcca catcctggca      14900
Val Lys Phe Trp
    605
gtggaggcac agtcacccgg ggcagggcca ggatcttggt atatcctcag atctcagtgg    14960
gcagcgacat gaagtcaggt atgctctggg tgcgtgctct aaaggtgata aggaagaggg    15020
gacctcatgg tggggtgtgg agaaagaccc ataataaagt gatctagggc tgggtgcagt    15080
ggctcatgcc tgtaatctct gtgctttggg aggctggggt gggaggatca cttgagtctg    15140
ggagtttgag accagactgg gcaatatagc aagaccccat ctctaaaaga acaaaacaaa    15200
acaaaccaaa acaaaacaaa ccattccagc ctgggaaaca tggcaaaacc ccgtctacta    15260
aaaatacaaa aaattagcca ggtgaggtgg tgcatgattg taatcccagc tactctggag    15320
gctgaggtgg gagaatcacc tgagcttggg aggttgaggc tgctgcgaac tgcgattgca    15380
ccgctgcact ccagcctggg caatcacagt gagaccttgt ctcaaaacaa acaaacaaac    15440
aaatgaaaaa ccttagccag gcatggtgac acatgcctgt agttctagct acttggaagg    15500
cagaggcagg aagatcgctt gagcccagga gttcaaaact gcagtgagct atgatcacac    15560
cattgcactc caagtctggg caacagaggg agaccctgtc tggaaagaaa gagagaaaga    15620
gagagagaga gaaagaggga aagaaagcaa gcaagagaga aagaagaaag aaaatgacct    15680
aggaccctcg gaaagcacct tagggtggga ccacataggc acagctctga gaagatggtg    15740
ttctagatgg agcacaggga ccgggataga gatgttacag gggaactgtg gagaaaagag    15800
cctcctggtg gaagggttca gaggtgggac gcagcgaggc tgcatgggcg agaggtgata    15860
gcttggctcg gcagaaccac aaactctgtt ttaggcggag caaaagtgag gggcaccaca    15920
ggcgaacagg taggacagca aaagaatggt gggtgcccag acgctgggtg aaaagatgcc    15980
ccgtttccgc aggcttagga gtggccacgt gctaccattt gattttcttt cttctaggca    16040
atttcttgca accaccaccg aggccccgaa aagcactggt cgtcagggag ctcctcccct    16100
tggcccccag cctgtgccag ccctggcccg gctgccacac ctctgtttcc taggctgggg    16160
acccagcttg tctctccttg tttcttccca ctgcactgtg gtgcttcagt ggccaccagc    16220
ctcgtcacat acaccagcat ctttctgtac ctcctccctt tggtgacctg aagtcactgt    16280
gacagttctc caggaaggag gagcttccta cttttgagtt tctctgtgga aataaaacat    16340
gaatcttgtt tcccta                                                    16356
<210>2
<211>2097
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(101)..(1768)
<400>2
gaggaggaca gaggagggca cagagacgca gagcaagggc ggcaaggagg agaccctggt       60
gggaggaaga cactctggag agagaggggg ctgggcagag atg aag ttc cag ggg        115
                                            Met Lys Phe Gln Gly
                                            1               5
ccc ctg gcc tgc ctc ctg ctg gcc ctc tgc ctg ggc agt ggg gag gct        163
Pro Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Leu Cys Leu Gly Ser Gly Glu Ala
                10                  15                  20
ggc ccc ctg cag agc gga gag gaa agc act ggg aca aat att ggg gag        211
Gly Pro Leu Gln Ser Gly Glu Glu Ser Thr Gly Thr Asn Ile Gly Glu
            25                  30                  35
gcc ctt gga cat ggc ctg gga gac gcc ctg agc gaa ggg gtg gga aag        259
Ala Leu Gly His Gly Leu Gly Asp Ala Leu Ser Glu Gly Val Gly Lys
        40                  45                  50
gcc att ggc aaa gag gcc gga ggg gca gct ggc tct aaa gtc agt gag        307
Ala Ile Gly Lys Glu Ala Gly Gly Ala Ala Gly Ser Lys Val Ser Glu
    55                  60                  65
gcc ctt ggc caa ggg acc aga gaa gca gtt ggc act gga gtc agg cag        355
Ala Leu Gly Gln Gly Thr Arg Glu Ala Val Gly Thr Gly Val Arg Gln
70                  75                  80                  85
gtt cca ggc ttt ggc gca gca gat gct ttg ggc aac agg gtc ggg gaa        403
Val Pro Gly Phe Gly Ala Ala Asp Ala Leu Gly Asn Arg Val Gly Glu
                90                  95                  100
gca gcc cat gct ctg gga aac act ggg cac gag att ggc aga cag gca    451
Ala Ala His Ala Leu Gly Asn Thr Gly His Glu Ile Gly Arg Gln Ala
            105                 110                 115
gaa gat gtc att cga cac gga gca gat gct gtc cgc ggc tcc tgg cag    499
Glu Asp Val Ile Arg His Gly Ala Asp Ala Val Arg Gly Ser Trp Gln
        120                 125                 130
ggg gtg cct ggc cac aat ggt gct tgg gaa act tct gga ggc cat ggc    547
Gly Val Pro Gly His Asn Gly Ala Trp Glu Thr Ser Gly Gly His Gly
    135                 140                 145
atc ttt ggc tct caa ggt ggc ctt gga ggc cag ggc cag ggc aat cct    595
Ile Phe Gly Ser Gln Gly Gly Leu Gly Gly Gln Gly Gln Gly Asn Pro
150                 155                 160                 165
gga ggt ctg ggg act ccg tgg gtc cac gga tac ccc gga aac tca gca    643
Gly Gly Leu Gly Thr Pro Trp Val His Gly Tyr Pro Gly Asn Ser Ala
                170                 175                 180
ggc agc ttt gga atg aat cct cag gga gct ccc tgg ggt caa gga ggc    691
Gly Ser Phe Gly Met Asn Pro Gln Gly Ala Pro Trp Gly Gln Gly Gly
            185                 190                 195
aat gga ggg cca cca aac ttt ggg acc aac act cag gga gct gtg gcc    739
Asn Gly Gly Pro Pro Asn Phe Gly Thr Asn Thr Gln Gly Ala Val Ala
        200                 205                 210
cag cct ggc tat ggt tca gtg aga gcc agc aac cag aat gaa ggg tgc    787
Gln Pro Gly Tyr Gly Ser Val Arg Ala Ser Asn Gln Asn Glu Gly Cys
    215                 220                 225
acg aat ccc cca cca tct ggc tca ggt gga ggc tcc agc aac tct ggg    835
Thr Asn Pro Pro Pro Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Asn Ser Gly
230                 235                 240                 245
gga ggc agc ggc tca cag tcg ggc agc agt ggc agt ggc agc aat ggt    883
Gly Gly Ser Gly Ser Gln Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asn Gly
                250                 255                 260
gac aac aac aat ggc agc agc agt ggt ggc agc agc agt ggc agc agc    931
Asp Asn Asn Asn Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Ser Gly Ser Ser
            265                 270                 275
agt ggc ggc agc agt ggc ggc agc agt ggt ggc agc agt ggc aac agt    979
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asn Ser
        280                 285                 290
ggt ggc agc aga ggt gac agc ggc agt gag tcc tcc tgg ggc agt tct   1027
Gly Gly Ser Arg Gly Asp Ser Gly Ser Glu Ser Ser Trp Gly Ser Ser
    295                 300                 305
ggg aat ggt gac caa ggc agc tac ggc cgc tcc cag gga tcc agc acc   1075
Gly Asn Gly Asp Gln Gly Ser Tyr Gly Arg Ser Gln Gly Ser Ser Thr
310                 315                 320                 325
ggc tcc tcc tcc ggc aac cac ggt ggg agc ggc gga gga aat gga cat   1123
Gly Ser Ser Ser Gly Asn His Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asn Gly His
                330                 335                 340
aaa ccc ggg tgt gaa aag cca ggg aat gaa gcc cgc ggg agc ggg gaa   1171
Lys Pro Gly Cys Glu Lys Pro Gly Asn Glu Ala Arg Gly Ser Gly Glu
            345                 350                 355
tct ggg att cag ggc ttc aga gga cag gga gtt tcc agc aac atg agg   1219
Ser Gly Ile Gln Gly Phe Arg Gly Gln Gly Val Ser Ser Asn Met Arg
        360                 365                 370
gaa ata agc aaa gag ggc aat cgc ctc ctt gga ggc tct gga gac aat   1267
Glu Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn
    375                 380                 385
tat cgg ggg caa ggg tcg agc tgg ggc agt gga gga ggt gac gct gtt   1315
Tyr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ala Val
390                 395                 400                 405
ggt gga gtc aat att cag aac tct gag acg tct cct ggg atg ttt aac   1363
Gly Gly Val Asn Ile Gln Asn Ser Glu Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn
                410                 415                 420
ttt gac act ttc tgg aag aat ttt aaa tcc aag ctg ggt ttc atc aac   1411
Phe Asp Thr Phe Trp Lys Asn Phe Lys Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn
            425                 430                 435
tgg gat gcc ata aac aag aac cag gtc ccg ccc ccc agc acc cga gcc   1459
Trp Asp Ala Ile Asn Lys Asn Gln Val Pro Pro Pro Ser Thr Arg Ala
        440                 445                 450
ctc ctc tac ttc agc cga ctc tgg gag gat ttc aaa cag aac act cct      1507
Leu Leu Tyr Phe Ser Arg Leu Trp Glu Asp Phe Lys Gln Asn Thr Pro
    455                 460                 465
ttc ctc aac tgg aaa gca att att gag ggt gcg gac gcg tca tca ctg      1555
Phe Leu Asn Trp Lys Ala Ile Ile Glu Gly Ala Asp Ala Ser Ser Leu
470                 475                 480                 485
cag aaa cgt gca ggc aga gcc gat cag ccg ggt gca gga tgg cag gag      1603
Gln Lys Arg Ala Gly Arg Ala Asp Gln Pro Gly Ala Gly Trp Gln Glu
                490                 495                 500
gtg gca gct gta act tcc aag aac tac aat tac aac cag cat gcg tat      1651
Val Ala Ala Val Thr Ser Lys Asn Tyr Asn Tyr Asn Gln His Ala Tyr
            505                 510                 515
ccc act gcc tat ggt ggg aag tac tca gtc aag acc cct gca aag ggg      1699
Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser Val Lys Thr Pro Ala Lys Gly
        520                 525                 530
gga gtc tca cct tct tcc tcg gct tcc cgg gtg caa cct ggc ctg ctg      1747
Gly Val Ser Pro Ser Ser Ser Ala Ser Arg Val Gln Pro Gly Leu Leu
    535                 540                 545
cag tgg gtg aag ttt tgg tag gcaatttctt gcaaccacca ccgaggcccc         1798
Gln Trp Val Lys Phe Trp
550                 555
gaaaagcact ggtcgtcagg gagctcctcc ccttggcccc cagcctgtgc cagccctggc    1858
ccggctgcca cacctctgtt tcctaggctg gggacccagc ttgtctctcc ttgtttcttc    1918
ccactgcact gtggtgcttc agtggccacc agcctcgtca catacaccag catctttctg    1978
tacctcctcc ctttggtgac ctgaagtcac tgtgacagtt ctccaggaag gaggagcttc    2038
ctacttttga gtttctctgt ggaaataaaa catgaatctt gtttccctaa aaaaaaaaa     2097
<210>3
<211>555
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>3
Met Lys Phe Gln Gly Pro Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Leu Cys Leu
1               5                   10                  15
Gly Ser Gly Glu Ala Gly Pro Leu Gln Ser Gly Glu Glu Ser Thr Gly
            20                  25                  30
Thr Asn Ile Gly Glu Ala Leu Gly His Gly Leu Gly Asp Ala Leu Ser
        35                  40                  45
Glu Gly Val Gly Lys Ala Ile Gly Lys Glu Ala Gly Gly Ala Ala Gly
    50                  55                  60
Ser Lys Val Ser Glu Ala Leu Gly Gln Gly Thr Arg Glu Ala Val Gly
65                  70                  75                  80
Thr Gly Val Arg Gln Val Pro Gly Phe Gly Ala Ala Asp Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asn Arg Val Gly Glu Ala Ala His Ala Leu Gly Asn Thr Gly His Glu
            100                 105                 110
Ile Gly Arg Gln Ala Glu Asp Val Ile Arg His Gly Ala Asp Ala Val
        115                 120                 125
Arg Gly Ser Trp Gln Gly Val Pro Gly His Asn Gly Ala Trp Glu Thr
    130                 135                 140
Ser Gly Gly His Gly Ile Phe Gly Ser Gln Gly Gly Leu Gly Gly Gln
145                 150                 155                 160
Gly Gln Gly Asn Pro Gly Gly Leu Gly Thr Pro Trp Val His Gly Tyr
                165                 170                 175
Pro Gly Asn Ser Ala Gly Ser Phe Gly Met Asn Pro Gln Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Trp Gly Gln Gly Gly Asn Gly Gly Pro Pro Asn Phe Gly Thr Asn Thr
        195                 200                 205
Gln Gly Ala Val Ala Gln Pro Gly Tyr Gly Ser Val Arg Ala Ser Asn
    210                 215                 220
Gln Asn Glu Gly Cys Thr Asn Pro Pro Pro Ser Gly Ser Gly Gly Gly
225                 230                 235                 240
Ser Ser Asn Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gln Ser Gly Ser Ser Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Ser Asn Gly Asp Asn Asn Asn Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser
            260                 265                 270
Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly
        275                 280                 285
Ser Ser Gly Asn Ser Gly Gly Ser Arg Gly Asp Ser Gly Ser Glu Ser
    290                 295                 300
Ser Trp Gly Ser Ser Gly Asn Gly Asp Gln Gly Ser Tyr Gly Arg Ser
305                 310                 315                 320
Gln Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn His Gly Gly Ser Gly
                325                 330                 335
Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu Lys Pro Gly Asn Glu Ala
            340                 345                 350
Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly Phe Arg Gly Gln Gly Val
        355                 360                 365
Ser Ser Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu Leu Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly Ser Gly
385                 390                 395                 400
Gly Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Ile Gln Asn Ser Glu Thr Ser
                405                 410                 415
Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys Asn Phe Lys Ser Lys
            420                 425                 430
Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys Asn Gln Val Pro Pro
        435                 440                 445
Pro Ser Thr Arg Ala Leu Leu Tyr Phe Ser Arg Leu Trp Glu Asp Phe
    450                 455                 460
Lys Gln Asn Thr Pro Phe Leu Asn Trp Lys Ala Ile Ile Glu Gly Ala
465                 470                 475                 480
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Lys Arg Ala Gly Arg Ala Asp Gln Pro Gly
                485                 490                 495
Ala Gly Trp Gln Glu Val Ala Ala Val Thr Ser Lys Asn Tyr Asn Tyr
            500                 505                 510
Asn Gln His Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser Val Lys
        515                 520                 525
Thr Pro Ala Lys Gly Gly Val Ser Pro Ser Ser Ser Ala Ser Arg Val
    530                 535                 540
Gln Pro Gly Leu Leu Gln Trp Val Lys Phe Trp
545                 550                 555
<210>4
<211>1734
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(184)..(1506)
<400>4
gtggactctg agaagcccag gcagttgagg acaggagaga gaaggctgca gacccagagg    60
gagggaggac agggagtcgg aaggaggagg acagaggagg gcacagagac gcagagcaag   120
ggcggcaagg aggagaccct ggtgggagga agacactctg gagagagagg gggctgggca   180
gag atg aag ttc cag ggg ccc ctg gcc tgc ctc ctg ctg gcc ctc tgc     228
    Met Lys Phe Gln Gly Pro Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Leu Cys
    1               5                   10                  15
ctg ggc agt ggg gag gct ggc ccc ctg cag agc gga gag gaa agc act     276
Leu Gly Ser Gly Glu Ala Gly Pro Leu Gln Ser Gly Glu Glu Ser Thr
                20                  25                  30
ggg aca aat att ggg gag gcc ctt gga cat ggc ctg gga gac gcc ctg     324
Gly Thr Asn Ile Gly Glu Ala Leu Gly His Gly Leu Gly Asp Ala Leu
            35                  40                  45
agc gaa ggg gtg gga aag gcc att ggc aaa gag gcc gga ggg gca gct     372
Ser Glu Gly Val Gly Lys Ala Ile Gly Lys Glu Ala Gly Gly Ala Ala
        50                  55                  60
ggc tct aaa gtc agt gag gcc ctt ggc caa ggg acc aga gaa gca gtt    420
Gly Ser Lys Val Ser Glu Ala Leu Gly Gln Gly Thr Arg Glu Ala Val
    65                  70                  75
ggc act gga gtc agg cag gtt cca ggc ttt ggc gca gca gat gct ttg    468
Gly Thr Gly Val Arg Gln Val Pro Gly Phe Gly Ala Ala Asp Ala Leu
80                  85                  90                  95
ggc aac agg gtc ggg gaa gca gcc cat gct ctg gga aac act ggg cac    516
Gly Asn Arg Val Gly Glu Ala Ala His Ala Leu Gly Asn Thr Gly His
                100                 105                 110
gag att ggc aga cag gca gaa gat gtc att cga cac gga gca gat gct    564
Glu Ile Gly Arg Gln Ala Glu Asp Val Ile Arg His Gly Ala Asp Ala
            115                 120                 125
gtc cgc ggc tcc tgg cag ggg gtg cct ggc cac agt ggt gct tgg gaa    612
Val Arg Gly Ser Trp Gln Gly Val Pro Gly His Ser Gly Ala Trp Glu
        130                 135                 140
act tct gga ggc cat ggc atc ttt ggc tct caa ggt ggc ctt gga ggc    660
Thr Ser Gly Gly His Gly Ile Phe Gly Ser Gln Gly Gly Leu Gly Gly
    145                 150                 155
cag ggc cag ggc aat cct gga ggt ctg ggg act ccg tgg gtc cac gga    708
Gln Gly Gln Gly Asn Pro Gly Gly Leu Gly Thr Pro Trp Val His Gly
160                 165                 170                 175
tac ccc gga aac tca gca ggc agc ttt gga atg aat cct cag gga gct    756
Tyr Pro Gly Asn Ser Ala Gly Ser Phe Gly Met Asn Pro Gln Gly Ala
                180                 185                 190
ccc tgg ggt caa gga ggc aat gga ggg cca cca aac ttt ggg acc aac    804
Pro Trp Gly Gln Gly Gly Asn Gly Gly Pro Pro Asn Phe Gly Thr Asn
            195                 200                 205
act cag gga gct gtg gcc cag cct ggc tat ggt tca gtg aga gcc agc    852
Thr Gln Gly Ala Val Ala Gln Pro Gly Tyr Gly Ser Val Arg Ala Ser
        210                 215                 220
aac cag aat gaa ggg tgc acg aat ccc cca cca tct ggc tca ggt gga    900
Asn Gln Asn Glu Gly Cys Thr Asn Pro Pro Pro Ser Gly Ser Gly Gly
    225                 230                 235
ggc tcc agc aac tct ggg gga ggc agc ggc tca cag tcg ggc agc agt    948
Gly Ser Ser Asn Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gln Ser Gly Ser Ser
240                 245                 250                 255
ggc agt ggc agc aat ggt gac aac aac aat ggc agc agc agt ggt ggc    996
Gly Ser Gly Ser Asn Gly Asp Asn Asn Asn Gly Ser Ser Ser Gly Gly
                260                 265                 270
agc agc agt ggc agc agc agt ggc agc agc agt ggc ggc agc agt ggc   1044
Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly
            275                 280                 285
ggc agc agt ggt ggc agc agt ggc aac agt ggt ggc agc aga ggt gac   1092
Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asn Ser Gly Gly Ser Arg Gly Asp
        290                 295                 300
agc ggc agt gag tcc tcc tgg gga tcc agc acc ggc tcc tcc tcc ggc   1140
Ser Gly Ser Glu Ser Ser Trp Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly
    305                 310                 315
aac cac ggt ggg agc ggc gga gga aat gga cat aaa ccc ggg tgt gaa   1188
Asn His Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu
320                 325                 330                 335
aag cca ggg aat gaa gcc cgc ggg agc ggg gaa tct ggg att cag ggc   1236
Lys Pro Gly Asn Glu Ala Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly
                340                 345                 350
ttc aga gga cag gga gtt tcc agc aac atg agg gaa ata agc aaa gag   1284
Phe Arg Gly Gln Gly Val Ser Ser Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu
            355                 360                 365
ggc aat cgc ctc ctt gga ggc tct gga gac aat tat cgg ggg caa ggg   1332
Gly Asn Arg Leu Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly
        370                 375                 380
tcg agc tgg ggc agt gga gga ggt gac gct gtt ggt gga gtc aat act   1380
Ser Ser Trp Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Thr
    385                 390                 395
gtg aac tct gag acg tct cct ggg atg ttt aac ttt gac act ttc tgg   1428
Val Asn Ser Glu Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp
400                 405                 410                 415
aag aat ttt aaa tcc aag ctg ggt ttc atc aac tgg gat gcc ata aac    1476
Lys Asn Phe Lys Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn
                420                 425                 430
aag gac cag aga agc tct cgc atc ccg tga cctccagaca aggagccacc      1526
Lys Asp Gln Arg Ser Ser Arg Ile Pro
            435                 440
agattggatg ggagccccca cactccctcc ttaaaacacc accctctcat cactaatctc  1586
agcccttgcc cttgaaataa accttagctg ccccacaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  1646
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  1706
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa                                     1734
<210>5
<211>440
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>5
Met Lys Phe Gln Gly Pro Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Leu Cys Leu
1               5                   10                  15
Gly Ser Gly Glu Ala Gly Pro Leu Gln Ser Gly Glu Glu Ser Thr Gly
            20                  25                  30
Thr Asn Ile Gly Glu Ala Leu Gly His Gly Leu Gly Asp Ala Leu Ser
        35                  40                  45
Glu Gly Val Gly Lys Ala Ile Gly Lys Glu Ala Gly Gly Ala Ala Gly
    50                  55                  60
Ser Lys Val Ser Glu Ala Leu Gly Gln Gly Thr Arg Glu Ala Val Gly
65                  70                  75                  80
Thr Gly Val Arg Gln Val Pro Gly Phe Gly Ala Ala Asp Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asn Arg Val Gly Glu Ala Ala His Ala Leu Gly Asn Thr Gly His Glu
            100                 105                 110
Ile Gly Arg Gln Ala Glu Asp Val Ile Arg His Gly Ala Asp Ala Val
        115                 120                 125
Arg Gly Ser Trp Gln Gly Val Pro Gly His Ser Gly Ala Trp Glu Thr
    130                 135                 140
Ser Gly Gly His Gly Ile Phe Gly Ser Gln Gly Gly Leu Gly Gly Gln
145                 150                 155                 160
Gly Gln Gly Asn Pro Gly Gly Leu Gly Thr Pro Trp Val His Gly Tyr
                165                 170                 175
Pro Gly Asn Ser Ala Gly Ser Phe Gly Met Asn Pro Gln Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Trp Gly Gln Gly Gly Asn Gly Gly Pro Pro Asn Phe Gly Thr Asn Thr
        195                 200                 205
Gln Gly Ala Val Ala Gln Pro Gly Tyr Gly Ser Val Arg Ala Ser Asn
    210                 215                 220
Gln Asn Glu Gly Cys Thr Asn Pro Pro Pro Ser Gly Ser Gly Gly Gly
225                 230                 235                 240
Ser Ser Asn Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gln Ser Gly Ser Ser Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Ser Asn Gly Asp Asn Asn Asn Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser
            260                 265                 270
Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly
        275                 280                 285
Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asn Ser Gly Gly Ser Arg Gly Asp Ser
    290                 295                 300
Gly Ser Glu Ser Ser Trp Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn
305                 310                 315                 320
His Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu Lys
                325                 330                 335
Pro Gly Asn Glu Ala Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly Phe
            340                 345                 350
Arg Gly Gln Gly Val Ser Ser Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu Gly
        355                 360                 365
Asn Arg Leu Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly Ser
    370                 375                 380
Ser Trp Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Thr Val
385                 390                 395                 400
Asn Ser Glu Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys
                405                 410                 415
Asn Phe Lys Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys
            420                 425                 430
Asp Gln Arg Ser Ser Arg Ile Pro
        435                 440
<210>6
<211>1124
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(44)..(805)
<400>6
attgcgtagt tccgaatacc ctcggccaca cctggccttc tcc atg ctc gga ata    55
                                                Met Leu Gly Ile
                                                1
act tcc tgc agc gac caa cag gct aaa gag ggg gaa ggt ctg gag gga   103
Thr Ser Cys Ser Asp Gln Gln Ala Lys Glu Gly Glu Gly Leu Glu Gly
5                   10                  15                  20
tcc age acc ggc tcc tcc tcc ggc aac cac ggt ggg agc ggc gga gga   151
Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn His Gly Gly Ser Gly Gly Gly
                25                  30                  35
aat gga cat aaa ccc ggg tgt gaa aag cca ggg aat gaa gcc cgc ggg   199
Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu Lys Pro Gly Asn Glu Ala Arg Gly
            40                  45                  50
agc ggg gaa tct ggg att cag ggc ttc aga gga cag gga gtt tcc agc   247
Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly Phe Arg Gly Gln Gly Val Ser Ser
        55                  60                  65
aac atg agg gaa ata agc aaa gag ggc aat cgc ctc ctt gga ggc tct   295
Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu Leu Gly Gly Ser
    70                  75                  80
gga gac aat tat cgg ggg caa ggg tcg agc tgg ggc agt gga gga ggt   343
Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly Ser Gly Gly Gly
85                  90                  95                  100
gac gct gtt ggt gga gtc aat att cag aac tct gag acg tct cct ggg    391
Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Ile Gln Asn Ser Glu Thr Ser Pro Gly
                105                 110                 115
atg ttt aac ttt gac act ttc tgg aag aat ttt aaa tcc aag ctg ggt    439
Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys Asn Phe Lys Ser Lys Leu Gly
            120                 125                 130
ttc atc aac tgg gat gcc ata aac aag aac cag gtc ccg ccc ccc agc    487
Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys Asn Gln Val Pro Pro Pro Ser
        135                 140                 145
acc cga gcc ctc ctc tac ttc agc cga ctc tgg gag gat ttc aaa cag    535
Thr Arg Ala Leu Leu Tyr Phe Ser Arg Leu Trp Glu Asp Phe Lys Gln
    150                 155                 160
aac act cct ttc ctc aac tgg aaa gca att att gag ggt gcg gac gcg    583
Asn Thr Pro Phe Leu Asn Trp Lys Ala Ile Ile Glu Gly Ala Asp Ala
165                 170                 175                 180
tca tca ctg cag aaa cgt gca ggc aga gac gat cag ccg ggt gca gga    631
Ser Ser Leu Gln Lys Arg Ala Gly Arg Asp Asp Gln Pro Gly Ala Gly
                185                 190                 195
tgg cag gag gtg gca gct gta act tcc aag aac tac aat tac aac cag    679
Trp Gln Glu Val Ala Ala Val Thr Ser Lys Asn Tyr Asn Tyr Asn Gln
            200                 205                 210
cat gcg tat ccc act gcc tat ggt ggg aag tac tca gtc aag acc cct    727
His Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser Val Lys Thr Pro
        215                 220                 225
gca aag ggg gga gtc tca cct tct tcc tcg gct tcc cgg gtg caa cct    775
Ala Lys Gly Gly Val Ser Pro Ser Ser Ser Ala Ser Arg Val Gln Pro
    230                 235                 240
ggc ctg ctg cag tgg gtg aag ttt tgg tag gcaatttctt gcaaccacca      825
Gly Leu Leu Gln Trp Val Lys Phe Trp
245                 250
ccgaggcccc gaaaagcact ggtcgtcagg gagctcctcc ccttggcccc cagcctgtgc  885
cagccctggc ccggctgcca cacctctgtt tcctaggctg gggacccagc ttgtctctcc  945
ttgtttcttc ccactgcact gtggtgcttc agtggccacc agcctcgtca catacaccag    1005
catctttctg tacctcctcc ctttggtgac ctgaagtcac tgtgacagtt ctccaggaag    1065
gaggagcttc ctacttttga gtttctctgt ggaaataaaa catgaatctt gtttcccta     1124
<210>7
<211>253
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>7
Met Leu Gly Ile Thr Ser Cys Ser Asp Gln Gln Ala Lys Glu Gly Glu
1               5                   10                  15
Gly Leu Glu Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn His Gly Gly
            20                  25                  30
Ser Gly Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu Lys Pro Gly Asn
        35                  40                  45
Glu Ala Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly Phe Arg Gly Gln
    50                  55                  60
Gly Val Ser Ser Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu
65                  70                  75                  80
Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly
                85                  90                  95
Ser Gly Gly Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Ash Ile Gln Asn Ser Glu
            100                 105                 110
Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys Asn Phe Lys
        115                 120                 125
Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys Asn Gln Val
    130                 135                 140
Pro Pro Pro Ser Thr Arg Ala Leu Leu Tyr Phe Ser Arg Leu Trp Glu
145                 150                 155                 160
Asp Phe Lys Gln Asn Thr Pro Phe Leu Asn Trp Lys Ala Ile Ile Glu
                165                 170                 175
Gly Ala Asp Ala Ser Ser Leu Gln Lys Arg Ala Gly Arg Asp Asp Gln
            180                 185                 190
Pro Gly Ala Gly Trp Gln Glu Val Ala Ala Val Thr Ser Lys Asn Tyr
        195                 200                 205
Asn Tyr Asn Gln His Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser
    210                 215                 220
Val Lys Thr Pro Ala Lys Gly Gly Val Ser Pro Ser Ser Ser Ala Ser
225                 230                 235                 240
Arg Val Gln Pro Gly Leu Leu Gln Trp Val Lys Phe Trp
                245                 250
<210>8
<211>646
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(61)..(510)
<400>8
accgacgaag atagaaattg cgtatgctcc gaataccctc ggccacacct ggccttctcc    60
atg ctc gga ata act tcc tgc agc gac caa cag gct aaa gag ggg gaa     108
Met Leu Gly Ile Thr Ser Cys Ser Asp Gln Gln Ala Lys Glu Gly Glu
1               5                   10                  15
ggt ctg gag gga tcc agc acc ggc tcc tcc tcc ggc aac cac ggt ggg     156
Gly Leu Glu Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn His Gly Gly
            20                  25                  30
agc ggc gga gga aat gga cat aaa ccc ggg tgt gaa aag cca ggg aat     204
Ser Gly Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu Lys Pro Gly Asn
        35                  40                  45
gaa gcc cgc ggg agc ggg gaa tct ggg att cag ggc ttc aga gga cag     252
Glu Ala Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly Phe Arg Gly Gln
    50                  55                  60
gga gtt tcc agc aac atg agg gaa ata agc aaa gag ggc aat cgc ctc     300
Gly Val Ser Ser Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu
65                  70                  75                  80
ctt gga ggc tct gga gac aat tat cgg ggg caa ggg tcg agc tgg ggc     348
Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly
                85                  90                  95
agt gga gga ggt gac gct gtt ggt gga gtc aat att cag aac tct gag     396
Ser Gly Gly Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Ile Gln Asn Ser Glu
            100                 105                 110
acg tct cct ggg atg ttt aac ttt gac act ttc tgg aag aat ttt aaa     444
Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys Asn Phe Lys
        115                 120                 125
tcc aag ctg ggt ttc atc aac tgg gat gcc ata aac aag gac cag aga     492
Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys Asp Gln Arg
    130                 135                 140
agc tct cgc atc ccg tga cctccagaca aggagccacc agattggatg            540
Ser Ser Arg Ile Pro
145
ggagccccca cactccctcc ttaaaacacc accctctcat cactaatctc agcccttgcc   600
cttgaaataa accttagctg ccccaaaaaa aaaaaaaaaa aaaccc                 646
<210>9
<211>149
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>9
Met Leu Gly Ile Thr Ser Cys Ser Asp Gln Gln Ala Lys Glu Gly Glu
1               5                   10                  15
Gly Leu Glu Gly Ser Ser Thr Gly Ser Ser Ser Gly Asn His Gly Gly
            20                  25                  30
Ser Gly Gly Gly Asn Gly His Lys Pro Gly Cys Glu Lys Pro Gly Asn
        35                  40                  45
Glu Ala Arg Gly Ser Gly Glu Ser Gly Ile Gln Gly Phe Arg Gly Gln
    50                  55                  60
Gly Val Ser Ser Asn Met Arg Glu Ile Ser Lys Glu Gly Asn Arg Leu
65                  70                  75                  80
Leu Gly Gly Ser Gly Asp Asn Tyr Arg Gly Gln Gly Ser Ser Trp Gly
                85                  90                  95
Ser Gly Gly Gly Asp Ala Val Gly Gly Val Asn Ile Gln Asn Ser Glu
            100                 105                 110
Thr Ser Pro Gly Met Phe Asn Phe Asp Thr Phe Trp Lys Asn Phe Lys
        115                 120                 125
Ser Lys Leu Gly Phe Ile Asn Trp Asp Ala Ile Asn Lys Asp Gln Arg
    130                 135                 140
Ser Ser Arg Ile Pro
145
<210>10
<211>600
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(6)..(272)
<400>10
tgaac atg aag ccg gcc act gcc tct gct ctg ctc ctg ctc ctg ctg ggc    50
      Met Lys Pro Ala Thr Ala Ser Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly
      1               5                   10                  15
ctg gcc tgg acc cag ggg agc cac ggc tgg ggt gcg gac gcg tca tca      98
Leu Ala Trp Thr Gln Gly Ser His Gly Trp Gly Ala Asp Ala Ser Ser
                20                  25                  30
ctg cag aaa cgt gca ggc aga gac gat cag aac tac aat tac aac cag     146
Leu Gln Lys Arg Ala Gly Arg Asp Asp Gln Asn Tyr Asn Tyr Asn Gln
            35                  40                  45
cat gcg tat ccc act gcc tat ggt ggg aag tac tca gtc aag acc cct     194
His Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser Val Lys Thr Pro
        50                  55                  60
gca aag ggg gga gtc tca cct tct tcc tcg gct tcc cgg gtg caa cct     242
Ala Lys Gly Gly Val Ser Pro Ser Ser Ser Ala Ser Arg Val Gln Pro
    65                  70                  75
ggc ctg ctg cag tgg gtg aag ttt tgg tag gcaatttctt gcaaccacca       292
Gly Leu Leu Gln Trp Val Lys Phe Trp
80                  85
ccgaggcccc gaaaagcact ggtcgtcagg gagctcctcc ccttggcccc cagcctgtgc   352
cagccctggc ccggctgcca cacctctgtt tcctaggctg gggacccagc ttgtctctcc   412
ttgtttcttc ccactgcact gtggtgcttc agtggccacc agcctcgtca catacaccag   472
catctttctg tacctcctcc ctttggtgac ctgaagtcac tgtgacagtt ctccaggaag   532
gaggagcttc ctacttttga gtttctctgt ggaaataaaa catgaatctt gtttccctaa   592
aaaaaaaa                                                            600
<210>11
<211>88
<212>PRT
<213>智人(Homo sapiens)
<400>11
Met Lys Pro Ala Thr Ala Ser Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu
1               5                   10                  15
Ala Trp Thr Gln Gly Ser His Gly Trp Gly Ala Asp Ala Ser Ser Leu
            20                  25                  30
Gln Lys Arg Ala Gly Arg Asp Asp Gln Asn Tyr Asn Tyr Asn Gln His
        35                  40                  45
Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Gly Gly Lys Tyr Ser Val Lys Thr Pro Ala
    50                  55                  60
Lys Gly Gly Val Ser Pro Ser Ser Ser Ala Ser Arg Val Gln Pro Gly
65                  70                  75                  80
Leu Leu Gln Trp Val Lys Phe Trp
                85
<210>12
<211>24
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>12
ggctgggcag agatgaagtt ccag                                        24
<210>13
<211>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>13
tctgcctggg cagtggggag                                             20
<210>14
<211>25
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>14
atgctcggaa taacttcctg cagcg                                       25
<210>15
<211>21
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>15
gcagcgacca acaggctaaa g                                           21
<210>16
<211>22
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>16
atgaagccgg ccactgcctc tg                                          22
<210>17
<211>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>17
ctctgctcct gctcctgctg                                             20
<210>18
<211>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>18
gggccagggc tggcacaggc                                             20
<210>19
<211>21
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>19
cggggcctcg gtggtggttg c                                           21
<210>20
<211>25
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>20
tctggtggct ccttgtetgg aggtc                                       25
<210>21
<211>28
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>21
gtcacgggat gcgagagctt ctctggtc                                    28
<210>22
<211>17
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>22
gcttttcaca cccgggt                                                17
<210>23
<211>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>23
ggcggaggaa atggacataa                                             20
<210>24
<211>26
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>24
gcttggattt aaaattcttc cagaaa                                      26
<210>25
<211>21
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>25
gaggtgacag cggcagtgag t                                           21
<210>26
<211>30
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>26
ttaaaattct tccagaaagt gtcaaagtta                                  30
<210>27
<211>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>27
attcagaact ctgagacgtc                                             20
<210>28
<211>26
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>28
tgttggtgga gtcaatactg tgaact                                      26
<210>29
<211>19
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>29
cgggatgcga gagcttctc                                              19
<210>30
<211>24
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>30
cactttctgg aagaatttta aatc                                        24
<210>31
<211>17
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>31
ggagcggc ggaggaaat                                                17
<210>32
<211>21
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>32
tgatgaaacc cagcttggat t                                           21
<210>33
<211>20
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>33
aaacccggga actctgagac                                             20
<210>34
<211>21
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>34
ggcggaggaa atggacataa a                                           21
<210>35
<211>25
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>35
gagcttctct ggtccttgtt tatgg                                       25
<210>36
<211>19
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>36
aatctgggat tcagaactc                                              19
<210>37
<211>17
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>37
gggtgcggac gcgtcat                                                17
<210>38
<211>27
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>38
gtcttgactg agtacttccc accatag                                     27
<210>39
<211>23
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>39
acgatcagaa ctacaattac aac                                         23

Claims (82)

1.分离的核酸分子，其包含选自SEQ ID NO：2、4、6、8和10的核苷酸序列或所述核苷酸序列的精确互补体。
2.分离的核酸分子，其包含能编码多肽的核苷酸序列，所述的多肽具有选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列。
3.分离的核酸分子，其能编码天然存在的具有选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列的多肽的等位基因变体。
4.分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO：2、4、6、8和10中的任一个具有至少90％同一性的核苷酸序列，或所述核苷酸序列的精确互补体。
5.分离的核酸分子，其包含与SEQ ID NO：2、4、6、8和10中的任一个具有至少70％同一性的核苷酸序列，或所述核苷酸序列的精确互补体。
6.分离的核酸分子，其包含至少45个核苷酸残基的核苷酸序列，其与SEQ ID NO：2、4、6、8和10中的任一个的一部分具有至少90％同一性，或所述核苷酸序列的精确互补体。
7.分离的核酸分子，其能编码具有选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列的多肽的片段，其中所述的片段具有包含选自SEQID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列的至少15个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
8.权利要求1的核酸分子，其中所述的核苷酸序列还包含能编码异源多肽的部分。
9.根据权利要求1-8中的任一项的核酸分子，还包含载体核酸残基。
10.包含权利要求9的核酸分子的载体。
11.包含权利要求9的核酸分子的宿主细胞。
12.权利要求11的宿主细胞，其中所述的宿主细胞是哺乳动物、细菌、酵母或昆虫来源的。
13.试剂盒，其包含(i)可以在约45℃在6xSSC中与核酸分子杂交，随后在约65℃、在0.2xSSC，0.1％SDS中洗涤的化合物，所述的核酸分子的核苷酸序列与SEQ ID NO：1、2、4、6、8和10中的任一个的核苷酸序列具有至少95％的同一性，和(ii)使用说明书。
14.分离的多肽，其包含选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列。
15.分离的多肽，其包含天然存在的具有选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11氨基酸序列的多肽的等位基因变体。
16.分离的多肽，其包含与选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
17.分离的多肽，其包含至少15个选自SEQ ID NO：3、5、7、9和11的氨基酸序列的邻接氨基酸。
18.融合多肽，其包含可操作地连接到异源多肽上的权利要求14的多肽。
19.权利要求18的融合多肽，其中所述的异源多肽是免疫球蛋白蛋白家族的成员，或所述成员的片段。
20.根据权利要求14-19中的任一项的多肽，其中所述的多肽具有至少一种CNGH0010多肽活性。
21.抗体，其包含单克隆或多克隆抗体、其融合蛋白或片段，其特异性地结合到根据权利要求14-19中的任一项的多肽上。
22.分离的核酸分子，其能编码权利要求21的抗体。
23.生产至少一种CNGH0010抗体的方法，包括在体外、体内或原位条件下翻译权利要求22的核酸分子，其中所述的CNGH0010抗体是以可检测的或可回收的量表达的。
24.由权利要求23的方法生产的抗体。
25.载体，其包含权利要求22的分离的核酸分子。
26.宿主细胞，其包含权利要求22的分离的核酸分子，其中所述的宿主细胞是原核的或真核的。
27.权利要求26的宿主细胞，其中所述的宿主细胞是选自下述的一种或多种：COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、骨髓瘤和淋巴瘤细胞、或其任意衍生的、无限增殖化的或转化的细胞。
28.生产至少一种CNGH0010多肽的方法，包括在体外、体内或原位条件下翻译权利要求1的核酸分子，其中所述的CNGH0010多肽是以可检测的或可回收的量表达的。
29.由权利要求28的方法生产的多肽。
30.生产多肽的抗体的方法，包括用根据权利要求14-19中的任一项的多肽免疫或筛选重组抗体。
31.组合物，其包含权利要求1的核酸分子、权利要求14的多肽、或该多肽的抗体。
32.组合物，其包含权利要求1的核酸分子、权利要求14的多肽和该多肽的抗体中的一种或多种的激动剂或拮抗剂。
33.权利要求32的组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体或稀释剂。
34.权利要求32的组合物，其与包含一种或多种选自下述的化合物、组合物或多肽的组合物组合施用：可检测的标记或者报道分子、TNF拮抗剂、抗感染药物、心血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药物、自主神经系统(ANS)药物、呼吸道药物、胃肠(GI)道药物、激素药物、用于流体或者电解质平衡的药物、血液药物、抗癌药、免疫调制药物、眼、耳或鼻药物、局部药物、营养补充物、细胞因子和细胞因子拮抗剂。
35.权利要求32的组合物，其形式是选自下述的一种或多种：液体或气体溶液、混合物、悬浮液、乳剂或胶体、冻干制剂和粉末。
36.诊断细胞、组织、器官或动物中的CNGH0010-相关状况的方法，包含接触或施用组合物，所述组合物包含在所述细胞、组织、器官或动物中检测权利要求1的核酸分子、权利要求14的多肽和该多肽的抗体中的一种或多种的手段。
37.治疗细胞、组织、器官或动物中的CNGH0010-相关状况的方法，包括使所述细胞、组织、器官或动物接触或给所述患者施用组合物，所述组合物包含有效量的一种或多种权利要求31的组合物或所述组合物的激动剂或拮抗剂。
38.根据权利要求37的方法，其中所述有效量是约0.001-50mg抗体；约0.000001-500mg多肽；或约0.0001-100μg核酸分子/kg所述的细胞、组织、器官或动物。
39.根据权利要求37的方法，其中所述接触或施用是通过一种或多种选自下述的方式完成的：肠胃外的、皮下的、肌内的、静脉内的、关节内的、支气管内的、腹内的、囊内的、软骨内的、腔内的、体腔内的、小脑内的、脑室内的、结肠内的、颈内的、胃内的、肝内的、心肌内的、骨内的、骨盆内的、心包内的、腹膜内的、胸膜内的、前列腺内的、肺内的、直肠内的、肾内的、视网膜内的、脊柱内的、滑膜内的、胸内的、子宫内的、膀胱内的、病灶内的、快速灌注的、阴道的、直肠的、口腔的、舌下的、鼻内的和经皮的。
40.根据权利要求39的方法，还包含在所述接触或施用步骤之前、同时或之后，施用至少一种组合物，其包含有效量的一种或多种选自下述的化合物或多肽：可检测的标记或者报道分子、TNF拮抗剂、抗感染药物、心血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药物、自主神经系统(ANS)药物、呼吸道药物、胃肠(GI)道药物、激素药物、用于流体或者电解质平衡的药物、血液药物、抗癌药、免疫调制药物、眼、耳或鼻药物、局部药物、营养补充物、细胞因子和细胞因子拮抗剂。
41.治疗细胞、组织、器官或动物中的CNGH0010-相关状况的方法，包括使患者接触或给其施用组合物，所述组合物包含有效量的一种或多种所述细胞、组织、器官或动物中CNGH0010核酸分子或CNGH0010多肽水平的调节剂或CNGH0010活性的调节剂。
42.治疗细胞、组织、器官或动物的上皮-相关状况的方法，包括使所述细胞、组织、器官或动物接触或给所述患者施用组合物，所述组合物包含有效量的权利要求31的组合物或所述组合物的激动剂或拮抗剂。
43.治疗细胞、组织、器官或动物的上皮-相关状况的方法，包括使患者接触或给其施用组合物，所述组合物包含有效量的至少一种所述细胞、组织、器官或动物中CNGH0010核酸分子或CNGH0010多肽水平的调节剂或CNGH0010活性的调节剂。
44.装置，其包含权利要求1的核酸分子、权利要求14的多肽和该多肽的抗体、激动剂或拮抗剂中的一种或多种，其中所述装置适用于通过一种或多种选自下述的方式，接触或施用一种或多种所述的多肽、抗体、激动剂、拮抗剂或核酸：肠胃外的、皮下的、肌内的、静脉内的、关节内的、支气管内的、腹内的、囊内的、软骨内的、腔内的、体腔内的、小脑内的、脑室内的、结肠内的、颈内的、胃内的、肝内的、心肌内的、骨内的、骨盆内的、心包内的、腹膜内的、胸膜内的、前列腺内的、肺内的、直肠内的、肾内的、视网膜内的、脊柱内的、滑膜内的、胸内的、子宫内的、膀胱内的、病灶内的、快速灌注的、阴道的、直肠的、口腔的、舌下的、鼻内的和经皮的。
45.用于人药物或诊断用途的制品，其包含包装材料和容器，所述容器包含权利要求1的核酸分子、权利要求14的多肽和该多肽的抗体、激动剂或拮抗剂中的一种或多种。
46.权利要求45的制品，其中所述容器是肠胃外的、皮下的、肌内的、静脉内的、关节内的、支气管内的、腹内的、囊内的、软骨内的、腔内的、体腔内的、小脑内的、脑室内的、结肠内的、颈内的、胃内的、肝内的、心肌内的、骨内的、骨盆内的、心包内的、腹膜内的、胸膜内的、前列腺内的、肺内的、直肠内的、肾内的、视网膜内的、脊柱内的、滑膜内的、胸内的、子宫内的、膀胱内的、病灶内的、快速灌注的、阴道的、直肠的、口腔的、舌下的、鼻内的或经皮的送递装置或系统的组分。
47.生产权利要求1的核酸分子、权利要求14的多肽和该多肽的抗体、激动剂或拮抗剂中的一种或多种的方法，其包含提供一种或多种能转录所述的核酸和/或以可检测的或可回收的量表达所述多肽或抗体的载体、宿主细胞、转基因动物、转基因植物或植物细胞。
48.由权利要求47的方法生产的多肽、抗体、激动剂、拮抗剂或核酸分子。
49.检测生物样品中是否存在根据权利要求1-8中的任一项的核酸分子或根据权利要求14-19中的任一项的多肽的方法，包括从实验受试者得到生物样品，使生物样品接触能检测所述多肽的化合物或试剂，其中所述的多肽或核酸分子的存在是在生物样品中检测的。
50.分离的核酸分子，其包含下述的核苷酸序列：SEQ ID NO：1的核苷酸101-526(外显子1)、786-986(外显子2)、1099-1155(外显子3)、1763-1813(外显子4)、1983-2165(外显子5)、3324-3392(外显子8)、7590-7637(外显子13)、7811-7858(外显子14)、10690-10746(外显子16)、11393-11440(外显子17)、12996-13043(外显子19)、13547-13618(外显子21)、14679-14702(外显子22)、14813-14860(外显子23)和16038-16356(外显子25)，和任选的下述的一种或多种：SEQ ID NO：1的核苷酸2936-2980(外显子6)、3615-3665(外显子9)、5336-5371(外显子10)、6065-6118(外显子11)、7391-7450(外显子12)、13157-13198(外显子20)和15895-15929(外显子24)，或所述核苷酸序列的精确互补体。
51.分离的核酸分子，其包含下述的核苷酸序列：SEQ ID NO：1的核苷酸101-526(外显子1)、786-986(外显子2)、1099-1155(外显子3)、1763-1813(外显子4)、1983-2165(外显子5)、3324-3392(外显子8)、7590-7637(外显子13)、7811-7858(外显子14)和10129-10155(外显子15)，和任选的下述的一种或多种：SEQ ID NO：1的核苷酸3615-3665(外显子9)、5336-5371(外显子10)、6065-6118(外显子11)和7391-7450(外显子12)，或所述核苷酸序列的精确互补体。
52.分离的核酸分子，其包含下述的核苷酸序列：SEQ ID NO：1的核苷酸3149-3205(外显子7)、3324-3392(外显子8)、7590-7637(外显子13)、7811-7858(外显子14)、10690-10746(外显子16)、11393-11440(外显子17)、12996-13043(外显子19)、13547-13618(外显子21)、14679-14702(外显子22)、14813-14860(外显子23)和16038-16356(外显子25)，和任选的下述的一种或多种：SEQ ID NO：1的核苷酸3615-3665(外显子9)、5336-5371(外显子10)、6065-6118(外显子11)、7391-7450(外显子12)、13157-13198(外显子20)和15895-15929(外显子24)，或所述核苷酸序列的精确互补体。
53.分离的核酸分子，其包含下述的核苷酸序列：SEQ ID NO：1的核苷酸3149-3205(外显子7)、3324-3392(外显子8)、7590-7637(外显子13)、7811-7858(外显子14)和10129-10155(外显子15)，和任选的下述的一种或多种：SEQ ID NO：1的核苷酸3615-3665(外显子9)、5336-5371(外显子10)、6065-6118(外显子11)和7391-7450(外显子12)，或所述核苷酸序列的精确互补体。
54.分离的核酸分子，其包含与权利要求50-53所述的核苷酸序列中的任一种具有至少90％同一性的核苷酸序列，或所述核苷酸序列的精确互补体。
55.分离的核酸分子，其能编码具有由权利要求50-53所述的核苷酸序列中的任一种编码的氨基酸序列的多肽的片段，其中所述的片段具有包含至少15个由权利要求50-53所述的核苷酸序列中的任一种编码的氨基酸序列的连续氨基酸残基的氨基酸序列。
56.根据权利要求50-53中的任一项的核酸分子，其中所述的核苷酸序列还包含能编码异源多肽的部分。
57.根据权利要求50-53中的任一项的核酸分子，还包含载体核酸残基。
58.包含权利要求57的核酸分子的载体。
59.包含权利要求57的核酸分子的宿主细胞。
60.权利要求59的宿主细胞，其中所述的宿主细胞是哺乳动物、细菌、酵母或昆虫来源的。
61.试剂盒，其包含(i)可以在约45℃在6xSSC中与核酸分子杂交，随后在约65℃、在0.2xSSC，0.1％SDS中洗涤的化合物，所述的核酸分子的核苷酸序列与根据权利要求50-53中的任一项的核苷酸序列具有至少95％的同一性，和(ii)使用说明书。
62.分离的多肽，其由根据权利要求50-53的核苷酸序列中的任一种编码。
63.分离的多肽，其包含与由根据权利要求50-53的核苷酸序列中的任一种编码的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
64.分离的多肽，其包含至少15个由根据权利要求50-53的核苷酸序列中的任一种编码的氨基酸序列的邻接氨基酸。
65.融合多肽，其包含可操作地连接到异源多肽上的权利要求62的多肽。
66.权利要求65的融合多肽，其中所述的异源多肽是免疫球蛋白蛋白家族的成员，或所述成员的片段。
67.根据权利要求62的多肽，其中所述的多肽具有至少一种CNGH0010多肽活性。
68.抗体，其包含单克隆或多克隆抗体、其融合蛋白或片段，其特异性地结合到根据权利要求62的多肽上。
69.分离的核酸分子，其能编码权利要求68的抗体。
70.生产抗体的方法，包括在体外、体内或原位条件下翻译权利要求69的核酸分子，其中所述的抗体是以可检测的或可回收的量表达的。
71.由权利要求70的方法生产的抗体。
72.载体，其包含权利要求69的分离的核酸分子。
73.宿主细胞，其包含权利要求69的分离的核酸分子，其中所述的宿主细胞是原核的或真核的。的宿主细胞是原核的或真核的。
74.权利要求73的宿主细胞，其中所述的宿主细胞是选自下述的一种或多种：COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、骨髓瘤和淋巴瘤细胞，或其任意衍生的、无限增殖化的或转化的细胞。
75.生产CNGH0010多肽的方法，包括在体外、体内或原位条件下翻译根据权利要求50-53中的任一项的核酸分子，其中所述的CNGH0010多肽是以可检测的或可回收的量表达的。
76.由权利要求75的方法生产的多肽。
77.生产多肽的抗体的方法，包括用根据权利要求62的多肽免疫或筛选重组抗体。
78.组合物，其包含根据权利要求50-53中的任一项的核酸分子、由该核酸分子编码的多肽和该多肽的抗体中的一种或多种。
79.组合物，其包含根据权利要求50-53中的任一项的核酸分子、由该核酸分子编码的多肽和该多肽的抗体中的一种或多种的激动剂或拮抗剂。
80.权利要求79的组合物，其中所述组合物还包含至少一种药学上可接受的载体或稀释剂。
81.分离的核酸分子，其包含含有SEQ ID NO：1的核苷酸1983-2076(外显子5a)、2117-2165(外显子5b)、3168-3197(外显子7a)和3189-3393(外显子8a)中的一种或多种的截短的CNGH0010核苷酸序列。
82.本文所述的所有发明。
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