MXPA05011725A - Polinucleotidos cngh0010, polipeptidos, anticuerpos especificos, composiciones, metodos y usos. - Google Patents

Abstract

Los polipeptidos novedosos (CNGH0010) y anticuerpos, que incluyen porciones especificas o variantes, especificos para por lo menos uno de dichos polipeptidos CNGH0010, variante o fragmento del mismo, asi como acidos nucleicos que codifican dichos polipeptidos CNGH0010 y anticuerpos, acidos nucleicos complementarios, vectores, celulas hospederas, y metodos para hacer y utilizar los mismos, son utiles para formulaciones terapeuticas y de diagnostico, administracion y dispositivos; los polipeptidos antes mencionados se pueden utilizar para generar anticuerpos CNGH0010 humanos, de primate, de roedor, de mamifero, quimericos, humanizados y/o injertados en CDR; los polipeptidos CNGH0010 y anticuerpos se utilizan para modular o para tratar por lo menos una enfermedad relacionada con CNGH0010 en una celula, tejido, organo, animal o paciente; dichas enfermedades pueden incluir, pero no estan limitadas a, psoriasis, artritis reumatoide, enfisema, asma, diabetes, tiroiditis autoinmune, enfermedades del intestino inflamatorio, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, diferentes tipos de dermatitis alergica, dermatitis por contacto, queratosis actinica, cicatrizacion de heridas, formacion de cicatrices, varias enfermedades renales, varias enfermedades respiratorias, varias enfermedades de los organos reproductores, tales como endometriosis, melanoma, carcinoma de celula escamosa, cancer ovarico, cancer de mama, cancer de pulmon, cancer de colon, cancer de prostata, carcinoma de celula renal, enfermedades de Grave y otras enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas.

Description

POUNUCLEOTIDOS CNGHQ010. POLIPEPTIDOS, ANTICUERPOS ESPECÍFICOS. COMPOSICIONES, METODOS Y USOS ANTECEDENTES DE LA INVENCION A. CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a polipéptidos CNGH0010, variantes y fragmentos de los mismos, y anticuerpos y anticuerpos anti-idiotipo específicos de los mismos, así como ácidos nucleicos que codifican polipéptidos CNGH0010, variantes, fragmentos, anticuerpos, ácidos nucleicos complementarios, vectores, células hospederas y métodos para hacer y usar los mismos, incluyendo formulaciones de diagnóstico y terapéuticas, administración y dispositivos.

B. ANTECEDENTE Y TECNICA RELACIONADA La psoriasis es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel, multifactorial, genética, con predominancia de 2.6% en la población de los E.U.A. La enfermedad se caracteriza por hiperproliferación pronunciada de queratinocitos, que da por resultado recambio epidérmico y placas rojas, escamosas, gruesas observadas clínicamente. Otras características histopatológicas prominentes de la enfermedad son alteraciones de la producción de la citosina, activación de fibroblastos, expansión vascular e infiltración de leucocitos en la dermis y epidermis. La desregulación en la producción de citosina a partir de las células activadas en la dermis y las células inmunes parece jugar un papel importante en la mediación de los eventos inflamatorios asociados con la psoriasis. Para este fin, anteriormente se ha descrito un número de cambios en la expresión de genes y/o proteína en psoriasis y en algunos de estos genes y/o proteínas y se ha encontrado que están asociados con otras enfermedades inflamatorias. Estas incluyen citosinas proinflamatorias tales como IL-1 y FNTa, moléculas de adhesión, tales como molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM1) y molécula de adhesión vascular 1 (VCAM1), quimocinas y defensinas. Recientemente, la tecnología de microordenamiento de expresión de genes se ha aplicado a perfiles de patrones de expresión de genes en piel normal versus piel con lesión psoriática en una escala más inclusiva y ha provisto nuevas perspectivas en la patogénesis de la psoriasis. La tecnología de microordenamiento de ADNc provee un formato para la medición simultánea del nivel de expresión de miles de genes en una sola prueba de hibridación. También está sujeta a un formato automatizado de alto rendimiento. Lo que es más importante, la tecnología de microordenamiento se puede usar para descubrir varios genes, cuantificar y analizar expresión de genes y asignar funcionalidad a genes con función desconocida. Con la secuenciación completa del genoma humano, la identificación y clonación de nuevos genes ahora se logran rápidamente. Sin embargo, el entendimiento de si estos genes codifican nuevas proteínas y la identificación posterior de la función de estas nuevas proteínas no ha avanzado tan rápidamente. El impedimento se ha convertido en una de las principales razones para el uso de tecnología de microordenamiento de ADNc de alto rendimiento en un marco experimental bien diseñado para descubrir genes codificadores de proteína novedosos o genes con funciones novedosas que subsecuentemente pueden convertirse en objetivos terapéuticos potenciales para una variedad de enfermedades humanas. Por consiguiente, existe la necesidad de proveer nuevos polipéptidos, polinucleótidos, anticuerpos, o fragmentos de los mismos y el uso de los mismos pertinente a enfermedades y condiciones, así como mejoras sobre polipéptidos, polinucleótidos, anticuerpos o fragmentos de los mismos conocidos.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se refiere a un polipéptido CNGH0010 que tiene la secuencia mostrada en una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 1 1 , variantes, por ejemplo, aquellas basadas en empalme de exón diferencial como se describe en el cuadro 2 más adelante, y fragmentos de los mismos. Otro aspecto de la invención es un polinucleótido aislado que comprende la secuencia mostrada en una de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, variantes (v.gr., aquellas basadas en basada en empalme de exón como se describe en el cuadro 2 más adelante) y fragmentos de las mismas, y secuencias complementarias. Otro aspecto de la invención es un polinucleotido aislado que comprende un polinucleotido que codifica la secuencia de aminoácidos mostrada en una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 , variantes (v.gr., aquellas basadas en el empalme de exón diferencial como se describe en el cuadro 2 más adelante) y fragmentos de los mismos, y secuencias complementarias. La invención también se refiere a polipéptidos aislados que tienen por lo menos 70%, preferiblemente, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos a cualquiera de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 , variantes, o fragmentos de los mismos; polinucleótidos aislados que tienen por lo menos 70%, preferiblemente, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, o 100% de identidad de secuencia de ácidos nucleicos a cualquiera de las secuencias de polinucleótidos de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, variantes, secuencias complementarias o fragmentos de las mismas y polinucleótidos aislados que tienen por lo menos 70%, preferiblemente, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, o 100% de identidad de secuencia de ácidos nucleicos a los polinucleótidos que codifican cualquiera de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 y variantes, secuencias complementarias, o fragmentos de las mismas. La presente invención también provee moléculas de ácido nucleico aisladas que hibridan a (a) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos de una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11, variantes y fragmentos de las mismas, o (b) una molécula de ácido nucleico que tiene por lo menos 70% de identidad secuencia a cualquiera de las secuencias de polinucleótidos de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, variantes, y fragmentos de las mismas, y ácidos nucleicos complementarios. La presente invención además provee vectores recombinantes que comprenden las moléculas de ácido nucleico que codifican el polipéptido, células hospederas que contienen dichos ácidos nucleicos y/o vectores recombinantes, así como métodos para hacer y/o usar dichos ácidos nucleicos, vectores y/o células hospederas. En otro aspecto, la presente invención se refiere a anticuerpos y fragmentos de anticuerpos capaces de unirse a (a) un polipéptido que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con toda o parte de una secuencia de aminoácidos una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 1 1 o variantes, o (b) un polipéptido codificado por un polinucleótido que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia o toda o parte de cualquiera de las secuencias de polinucleótidos de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10 o variantes. Además, la invención comprende composiciones de anticuerpo, formulaciones, dispositivos, y ratones y plantas transgénicas. La presente invención también provee métodos para generar y caracterizar anticuerpos anti-CNGH0010 humanos, de primates, roedores, mamíferos, quiméricos, o de una sola cadena, humanizados y/o CDR-infectados, inmunoglobulinas, productos de digestión y otras porciones especificadas y variantes de las mismas. La presente invención provee además por lo menos un anticuerpo anti-idiotipo de CNGH0010 a por lo menos un anticuerpo de CNGH0010 de la presente invención. Las secuencias de ácido nucleico codifican polipéptidos CNGH0010 o fragmentos de las mismas, pueden ser operablemente enlazadas a una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos heterólogos para formar una proteína de fusión. Una modalidad adicional es un mimeticuerpo que comprende por lo menos un fragmento de un polipéptido CNGH0010 fusionado a por lo menos parte de una región de inmunoglobulina. Un mimeticuerpo preferido que comprende por lo menos una región de CH3 directamente enlazada con por lo menos una región de CH2 directamente enlazada con por lo menos una región de gozne o fragmento de la misma opcionalmente directamente enlazada con por lo menos una porción V parcial, directamente enlazada con una secuencia de enlazador opcional, directamente enlazada a por lo menos un fragmento de un polipéptido CNGH0010, opcionalmente, además directamente enlazada con por lo menos un polipéptido de anticuerpo variable, opcionalmente además directamente enlazado de por lo menos una porción de por lo menos una secuencia de anticuerpo variable. En una modalidad preferida adicional, la inmunoglobulina es lgG1 o lgG4. Otro aspecto de la invención provee vectores de expresión recombinantes, que comprenden un polinucleótido CNGH0010. En otra modalidad, la invención provee células hospederas aisladas, v.gr., células de mamífero y que no son de mamífero, que contienen un vector y/o un polinucleótido CNGH0010. La invención también provee métodos para producir un polipéptido CNGH0010 al cultivar, en un medio de cultivo, una célula hospedera de la invención que contiene un vector de expresión recombinante que codifica un polipéptido CNGH0010 de tal manera que se produce el polipéptido. La presente invención también provee por lo menos un método para expresar un polipéptido CNGH0010, un anticuerpo anti-CNGH0010, o un anticuerpo antí-idiotipo de CNGH0010, en una célula hospedera, que comprende cultivar una célula hospedera como se describe aquí bajo condiciones de por lo menos uno del polipéptido CNGH0010, anticuerpo anti-CNGH0010 o anticuerpo anti-idiotipo de CNGH0010 se expresa en cantidades detectables y/o recuperables. En otro aspecto más, la presente invención provee una proteína de fusión que comprende un polipéptido que tiene por lo menos 70%, preferiblemente, 75%, 80%, 90%, 95%, 99%, o 100% de identidad de secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos de una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 , fusionada a una secuencia de aminoácidos heteróloga. La presente invención también provee por lo menos una composición que comprende (a) un polinucleótido CNGH0010 aislado, polipéptido, agonista o antagonista de polipéptido, anticuerpo, y/o anticuerpo anti-idiotipo como se describe aquí; y (b) un vehículo o diluyente adecuado. El vehículo o diluyente puede ser opcionalmente farmacéuticamente aceptable, de acuerdo con vehículos o diluyentes conocidos. La composición opcionalmente puede comprender además por lo menos un compuesto, proteína o composición adicional. La presente invención también se refiere a métodos de tratamiento y/o diagnóstico de enfermedades relacionadas con CNGH0010, tales como pero sin limitarse a psoriasis, artritis reumatoide, enfisema, asma, diabetes, tiroiditis autoinmune, enfermedades intestinales inflamatorias, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, diferentes tipos de dermatitis incluyendo dermatitis alérgica, dermatitis por contacto, queratosis actínica, cicatrización de heridas, formación de cicatriz, varias enfermedades renales, varias enfermedades respiratorias, varias enfermedades de órganos reproductores, tales como endometriosis, melanoma, carcinoma de células escamosas, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, enfermedad de Grave y otras enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas. En una modalidad preferida, la enfermedad relacionada con CNGH0010 es una enfermedad relacionada o condición relacionada con tejido epitelial de tal manera que la enfermedad o condición impacta las condiciones epiteliales y células relacionadas, incluyendo, sin limitación, psoriasis, enfermedades intestinales inflamatorias incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, diferentes tipos de dermatitis (dermatitis alérgica, dermatitis por contacto), queratosis actínica, cicatrización de heridas, formación de cicatriz, diferentes enfermedades renales, diferentes enfermedades respiratorias, diferentes enfermedades de órganos reproductores tales como endometriosis, melanoma, carcinoma de células escamosas, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, enfisema, enfermedad de Grave, diabetes, pénfigo, pénfigo hulloso, herpes, enfermedad de IGA lineal, erupción por fármacos, epidermólisis bullosa, estomatitis, úlcera añosa, úlceras pépticas, poliposis gástrica, enfermedades pulmonares obstructivas crónicas, bronquiectasis, fibrosis quística, enfermedad quística renal, cistitis y otras enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas. Los métodos utilizan (1) un polipéptido aislado que comprende por lo menos una de las secuencias seleccionadas de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 , variantes, derivados y fragmentos de las mismas, (2) un polinucleótido aislado que comprende por lo menos una de las secuencias de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, variantes, derivados y fragmentos de las mismas y secuencias complementarias, (3) un polipéptido aislado codificado por un polinucleótido que comprende por lo menos una de las secuencias de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, variantes y fragmentos de las mismas, y secuencias complementarias, (4) agonistas y antagonistas para dichos polipéptidos y nucleótidos para diagnosticar y/o tratar enfermedades y condiciones inflamatorias e hiperproliferativas. La presente invención también provee métodos de tratamiento y/o diagnóstico de enfermedades relacionadas con CNGH0010 que utilizan un agonista o antagonista de CNGH0010, anticuerpo anti-CNGH0010 y/o anticuerpo anti-idiotipo de CNGH0010. La presente invención provee además cualquier invención aquí descrita.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la estructura genómica del gen CNGH0010 con exones que están representados por líneas verticales y los sitios de inicio de transcripción representados por flechas curvas. La figura 2 muestra niveles de transcripción relativas como se determina por RT-PCR usando ARN a partir de células A431. La figura 3 muestra dominios de proteína predichos basados en datos de expresión y análisis de los aminoácidos codificados por transcripciones de CNGH0010. La figura 4 muestra análisis de SDS-PAGE de CNGH0010.2 expresado en células HEK293 en muestras reducidas y no reducidas.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Como se usa aquí, "polipéptido(s) o proteína(s) CNGH0010", o polipéptido(s) o proteína(s) de la invención" abarca polipéptidos aislados que comprenden por lo menos una de las secuencias seleccionadas de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 , variantes, derivados y fragmentos de las mismas. "ácidos nucleicos, polinucleótido(s), o gen(es) CNGH0010" o ácidos nucleicos, polinucleótido(s) o gen(es) de la invención" se refieren a polinucleótidos aislados que comprenden por lo menos una de las secuencias de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, variantes, derivados y fragmentos de las mismas y secuencias complementarias. Variantes de empalme de la proteína CNGH0010 y ácidos nucleicos que codifican estas variantes han sido identificadas en tipos de células epiteliales a través del uso de técnicas de RACE, RT-PCR, y Northen blot. Los exones y regiones no traducidas de la secuencia de ADN CNGH0010 genómico (SEQ ID NO:1) se identificaron (cuadro 1). Como se muestra en el cuadro 2, el gen CNGH001 10 tiene múltiples variantes posibles como resultado de sitios de iniciación y terminación de transcripción diferencial, es decir, empalme alternativo. Las variantes primarias son marcadas CNGH0010.1 , CNGH0010.2, CNGH0010.3, CNGH0010.4, y CNGH0010.5 (representadas por SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10 (ácidos nucleicos) y 3, 5, 7, 9, y 1 1 (aminoácidos), respectivamente). Variantes adicionales de la invención son abarcadas por diferentes combinaciones de exones como se ve en el análisis de la secuencia genómica y productos de RT-PCR. Esto se demuestra en el cuadro 2 como se muestran los exones que se pueden añadir o deletar a las secuencias codificadoras. El análisis de RT-PCR de transcripciones de CNGH0010 en células A431 indican que las transcripciones de CNGH0010.1 son heterogéneas con respecto a la presencia o ausencia de por lo menos exones 11 y 20, mientras que las transcripciones de CNGH0010.2 tienen heterogeneidad con respecto al exón 9. También, las transcripciones de CNGH0010.4 son heterogéneas con respecto a la presencia o ausencia de los exones 9, 10, 11 , y 12. Las similitudes de las moléculas de CNGH0010 con moléculas de matriz extracelular (colágenos) y citosinas (adiponectina) sugieren que pueden participar en la regulación de interacciones célula-célula o célula-matriz, o unirse a o influir en la unión de una citosina a un receptor. Ambos tipos de actividades influirían finalmente en la proliferación, migración y estado de diferenciación de células y tejidos. Por lo tanto, las proteínas y polinucleótidos de la invención representan objetivos ideales para intervención terapéutica usando anticuerpos monoclonales, polipéptidos sintéticos, fármacos de molécula pequeña, u otros fármacos naturales o sintéticos. Por consiguiente, la presente invención provee secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos identificadas como la proteína y gen CNGH0010. Las secuencias comprenden un polipéptido aislado que comprende un polipéptido que tiene la secuencia mostrada en una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9 y 1 1 o variantes de las mismas; un polinucleótido aislado que comprende un polinucleótido que tiene la secuencia mostrada en una de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10 o una secuencia complementaria; un polinucleótido aislado que comprende un polinucleótido que codifica la secuencia de aminoácidos mostrada en una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 o una secuencia complementaria; polipéptidos aislados que comprenden un polipéptido que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia de aminoácidos a cualquiera de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 o variantes de las mismas; poiinucleóíidos aislados que tienen por lo menos 70% de identidad de secuencia de ácidos nucleicos a cualquiera de las secuencias de polinucleótidos de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, secuencias complementarias, o variantes de las mismas; polinucleótidos aislados que tienen por lo menos 70% de identidad de ácidos nucleicos con los polinucleótidos que codifican cualquiera de las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11, secuencias complementarias, o variantes de las mismas; y moléculas de ácidos nucleicos aisladas que hibridan a una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene por lo menos 70% de secuencia de identidad de aminoácidos con una secuencia de aminoácido de una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 , una molécula de ácido nucleico que tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia con cualquiera de las secuencias de polinucleótidos de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10 o ácidos nucleicos complementarios; y fragmentos de estas secuencias de polipéptido y polinucleótido. Como se usa aquí, "identidad", como se conoce en la técnica, es una relación entre dos o más secuencias de polipéptido o dos o más secuencias de polinucleótido, como se determina al comparar las secuencias. En la técnica, "identidad" también significa el grado de relación de secuencia entre secuencias de polipéptidos o polinucleótidos, como se determina por la igualación entre cadenas de dichas secuencias. "Identidad" y "similitud" se pueden calcular fácilmente por métodos conocidos, incluyendo pero sin limitarse a aquellos descritos en (Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Parte I, Griffin, A. M., y Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991 ; y Carillo, H., y Lipman, D., Siam J. Applied Math., 48: 1073 (1988). Además, los valores para porcentaje de identidad se pueden obtener a partir de alineaciones de secuencia de aminoácidos y nucleótido generadas durante las fijaciones por omisión para el componente AlignX de Vector NTI Suite 8.0 (Informax, Frederick, MD). Los métodos preferidos para determinar identidad están diseñados para dar la igualación más grande entre las secuencias probadas. Los métodos para determinar identidad y similitud son codificados en programas de computadora públicamente programadas. Los métodos de programa de computadora preferidos para determinar identidad y similitud entre dos secuencias incluyen pero no se limitan al paquete de programa GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, y FASTA (Atschul, S. F. et al., J. Molec. Biol. 215:403-410 (1990). El programa BLAST X está públicamente disponible de NCB1 y de otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBINLM NIH Bethesda, Md. 20894: Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). El algoritmo de Smith Waterman bien conocido también se puede usar para determinar identidad. Los parámetros preferidos para comparación de secuencia de polipéptido incluyen los siguientes: (1) Algoritmo: Needleman y Wunsch, J. Mol Biol. 48:443-453 (1970) comparación de matriz: BLOSSUM62 de Hentikoff y Hentikoff, Proc. Nati. Acad. Sci, USA. 89:10915-10919 (1992) Sanción de espacio: 12 Sanción de longitud de espacio: 4 Un programa útil con estos parámetros está públicamente disponible como el "espacio" de Genetics Computer Group, Madison Wis. Los parámetros antes mencionados son los parámetros por omisión para comparaciones de polipéptidos (junto con sin sanción para los pasos de extremo). Parámetros preferidos para comparación de polinucleótidos incluyen los siguientes: (1) Algoritmo: Needleman y Wunsch, J. Mol Biol. 48:443-453 (1970) Comparación de matriz: igualaciones =+10, desigualación =0 Sanción de espacio: 50 Sanción de longitud de espacio: 3 Disponible como: El programa de "espacio" de Genetics Computer Group, Madison Wis. Estos son los parámetros por omisión para comparaciones de ácidos nucleicos. A manera de ejemplo, una secuencia de polinucleótido de la presente invención puede ser idéntica a la secuencia de SEQ ID NO: 2, que es 100% idéntica, o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones de nucleótidos en comparación con la secuencia de referencia. Dichas alteraciones se seleccionan del grupo que consiste de por lo menos una deleción, sustitución, incluyendo transición y transversión o inserción de nucleótido, y en donde las alteraciones pueden ocurrir en las posiciones 5' o 3' terminales de la secuencia de nucleótido de referencia o en cualquier otra parte entre esas posiciones terminales, intercaladas ya sea individualmente entre los nucleótidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. El número de alteraciones de nucleótido se determina multiplicando el número total de nucleótidos de SEQ ID NO:2 por el por ciento numérico del por ciento de identidad respectivo (dividido entre 100) y sustrayendo ese producto del número total de nucleótidos en SEQ ID NO:2, o: n.sub.n.ltorsim.x.sub.n -(x-sub.n.y), en donde n.sub.n es el número de alteraciones de nucleótido, x.sub.n es el número de nucleótidos en SEQ ID NO:2, y y es, por ejemplo, 0.70 para 70%, 0.80 para 80%, 0.85 para 85%, 0.90 para 80%, 0.95 para 95%, etc., y en donde cualquier producto que no es entero de s.sub.n e y es redondeado al entero más cercano antes de sustraer de x.sub.n.

Las alteraciones de la secuencia de polinucleótido que codifica el polipéptido de SEQ ID NO: 3 puede crear mutaciones sin sentido, con sentido erróneo con desplazamiento de marco en esta secuencia codificadora y por lo tanto puede alterar el polipéptido codificado por el polinucleótido después de dichas alteraciones. De manera similar, una secuencia de polipéptido de la presente invención puede ser idéntica a la secuencia de referencia de SEQ ID NO: 3, es decir 100% idéntica, o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones de aminoácidos en comparación con la secuencia de referencia de tal manera que el por ciento de identidad es menor que 100%. Dichas alteraciones se seleccionan del grupo que consiste de por lo menos una deleción, sustitución, incluyendo sustituciones conservativas y no conservativas, o inserciones de aminoácidos y en donde las alteraciones pueden ocurrir en las posiciones amino- o carboxi-terminales de la secuencia de polipéptido de referencia o en alguna otra parte entre las posiciones terminales, entremezcladas ya sea individualmente entre los aminoácidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. El número de alteraciones de aminoácidos para un % de identidad dado se determina multiplicando el número total de aminoácidos en SEQ ID NO: 3 por el por ciento numérico del por ciento de identidad respectivo (dividido entre 100) y después sustrayendo ese producto del número total de aminoácidos en SEQ ID NO: 3, o: n.sub.a.ltorsim.x.sub.a -(x.sub.a.y), en donde n.sub.a es el número de alteraciones de aminoácidos, x.sub.a es el número total de aminoácidos en SEQ ID NO: 3, e y es por ejemplo, 0.70 para 70%, 0.80 para 80%, 0.85 para 85% etc., y en donde cualquier producto no entero de x.sub.a e y es redondeado al entero más cercano al sustraerlo de x.sub.a. Como se usa aquí, un "fragmento" es un polipéptido variante que tiene una secuencia de aminoácidos que es completamente la misma que parte pero no toda de cualquiera secuencia de aminoácidos de cualquier polipéptido de la invención o un polinucleótido variante que tiene una secuencia de ácido nucleico que es completamente la misma que o parte pero no toda de cualquier secuencia de ácido nucleico de cualquier polinucleótido de la invención. Los fragmentos pueden incluir, v.gr., polipéptidos de truncación que tienen una porción de una secuencia de aminoácidos como se muestra en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, o 11 o de variantes de las mismas, tal como una secuencia continua de residuos que incluyen una secuencia de aminoácidos amino- y/o carboxi-terminales heterólogos. Las formas de degradación de los polipéptidos de la invención producidos por o en una célula hospedera también se incluyen. Otros fragmentos ilustrativos son caracterizados por atributos estructurales o funcionales, tales como fragmentos que comprenden regiones alfa-hélice o formadoras de alfa-hélice, regiones beta-lámina o formadoras de beta-lámina, regi ones de giro o formadoras de giro, regiones de espiral o formadoras de espiral, regiones hidrofílicas, regiones hidrofóbicas, regiones a If a-a nfif áticas, regiones beta-anfifáticas, regiones flexibles, regiones formadoras de superficie, regiones de unión a substrato, regiones extracelulares y regiones de índice antigénico alto. Fragmentos ilustrativos adicionales incluyen un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 15, 20, 30, 40, 50 o 100 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, o 11 y variantes, o un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 15, 20, 30, 40, 50 o 100 aminoácidos contiguos truncados o deletados de la secuencia de aminoácidos expuesta en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, o 11 y variantes. Los fragmentos también incluyen polinucleótidos aislados que tienen tamaños y características similares. Los polipéptidos y derivados de la invención son útiles como agentes para inhibir la unión del polipéptido CNGH0010 a su ligando y reducir o bloquear la transducción de señal subsecuente. Los polipéptidos y construcción de polipéptido se pueden usar como inmunógenos o como parejas de unión útiles para generar, seleccionar y caracterizar anticuerpos anti-CNGH0010, inmunoglobulinas, productos de digestión y otras porciones especificadas y variantes de las mismas de humano, primates, roedores, mamíferos, quiméricos, de una sola cadena, humanizados y/o CDR-injertados. Además, las secuencias de aminoácidos de anticuerpo y moléculas de ácido nucleico codificadoras que comprenden por lo menos un polinucleótido que codifica por lo menos un anticuerpo CNGH0010 o un anticuerpo anti-idiotipo se pueden determinar por métodos bien conocidos por los expertos en la técnica y como se describe aquí. Por lo menos la secuencia de polipéptido CNGH0010 humano como se describe aquí es antigénica y ofrece un método para la generación de anticuerpos anti-CNGH0010. Los polipéptidos que aquí se describen comprenden una nueva clase de antígenos de CNGH0010 que contienen epítopes críticos para anticuerpos de CNGH0010 de diagnóstico y terapéuticos. Los polipéptidos se pueden sintetizar como se describe aquí con base en la secuencia de aminoácido de las secuencias de polipéptido CNGH0010 humano de la invención. El polipéptido CNGH0010 o anticuerpo anti-CNGH0010 se puede incorporar en un método o composición para administrar una cantidad terapéuticamente o profilácticamente efectiva para modular o tratar por lo menos un condición relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano, animal o paciente y/o antes de, subsecuente a, o durante una condición relacionada, como se conoce en la técnica y/o como se describe aquí. El polipéptido CNGH0010 o un anticuerpo ant¡-CNGH0010 se puede incorporar en un método o composición para el diagnóstico de por lo menos una condición relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano, animal o paciente y/o, antes de, subsecuente a, o durante una condición relacionada, como se conoce en la técnica y/o como se describe aquí. El polipéptido CNGH0010 o anticuerpo anti-CNGH0010 se puede incorporar en un método para diagnosticar o tratar una condición relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano o animal, que comprende poner en contacto o administrar una composición que comprende una cantidad efectiva de por lo menos una composición de polipéptido CNGH00 0 o anticuerpo anti-CNGH0010 aislada de la invención con o para la célula, tejido, órgano o animal. El método puede comprender opcionalmente además el uso de una cantidad efectiva de 0.001-50 mg/kilogramo del polipéptido o anticuerpo. El método puede comprender además opcionalmente tratar la condición relacionada con CNGH0010 con el polipéptido o anticuerpo al administrar el polipéptido o anticuerpo por lo menos por un modo seleccionado de administración parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarticular, intrabronquial, ¡ntraabdominal, intracapsular, intracartilaginosa, intracavital, intracelial, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólica, intracervical, intragástrica, intrahepática, intramiocárdica, intraosteal, intrapélvica, intrapericardiaca, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, ¡ntratorácica, intrauterina, intravesical, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal y transdérmica. La presente invención provee las proteínas y polipéptidos novedosos para región de unión de receptor de CNGH0010 que se pueden usar para generar anticuerpos anti-CNGH0010 y fragmentos de los mismos. Primero, los métodos de identificación, aislamiento y creación de los polipéptidos novedosos se describen más adelante. Después, la generación de anticuerpos, aplicaciones, formulaciones y tratamientos terapéuticos se presentan. Todas las publicaciones aquí citadas son incorporadas en su totalidad aquí por referencia, ya sea o no específicamente diseñadas como consecuencia, ya que muestran el estado de la técnica en el tiempo de la presente invención y/o para proveer descripción y habilitación de la presente invención: Las publicaciones se refieren a cualesquiera publicaciones científicas o de patentes o cualesquiera otra información disponible en cualquier formato de medio, incluyendo todos los formatos grabados, electrónicos o impresos. Las siguientes referencias se incorporan en su totalidad aquí por referencia: Ausubel, et al., ed., Current Protocols ¡n Molecular Biology, John Wíley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a. Edición, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow y Lañe, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols ¡n Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, ( 997-2001). Un polipéptido CNGH0010 de la presente invención incluye aquellos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 y sus variantes, incluyendo sin limitación, variantes de empalme alternativas, y pueden incluir una o más sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos a partir de mutación natural o manipulación humana, como se especifica aquí. Dichas mutaciones o sustituciones pueden incluir muteínas, cuyas mutaciones pueden ser suficientemente significativas al alterar las propiedades del polipéptido sin alterar la actividad biológica del polipéptido para inhibir la unión de CNGH0010 humano a su ligando. Incluidos dentro de la invención están los polipéptidos CNGH0010 que tienen secuencias de aminoácidos además de las de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 y sus variantes. Desde luego, el número de sustituciones de aminoácidos que haría un experto en la técnica dependería de muchos factores, incluyendo aquellos descritos anteriormente. Hablando en términos generales, el número de sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos para cualquier polipéptido CNGH0010 dado, fragmento o variante será de más de 1-5, o cualquier intervalo o valor entre los mismos, como se especifica aquí. Los aminoácidos en un polipéptido CNGH0010 de la presente invención que son esenciales para la función pueden ser identificados por métodos conocidos en la técnica, tales como mutagénesis dirigida al sitio o mutagénesls de escudriñamiento de alanina (v.gr., Ausubel, supra, Chapters 8, 15; Cunningham and Wells, Science 244:1081-1085 (1989)). El último procedimiento introduce mutaciones de alanina individuales en cualquier residuo en la molécula. Las moléculas mutantes resultantes son entonces probadas para actividad biológica, tal como, pero sin limitarse a por lo menos actividad neutralizante de CNGH0010.

Síntesis de polipéptidos CNGH0010 Los polipéptidos que tienen las secuencias de aminoácidos expuestas y descritas anteriormente, se pueden sintetizar usando química de Boc o FMOC estándar. Los polipéptidos resultantes se pueden inyectar como tales, entrelazados o conjugados a una molécula de vehículo. Para facilitar la conjugación a vehículos, una N-acetil-cisteína terminal o amidas C-terminales se pueden formar y el aminoácido C-terminal se puede amidar. Una variedad de grupos de enlace pueden ser intercalados entre el polipéptido y la molécula de vehículo para permitir el pliegue conformacional apropiado y presentación de polipéptido antigénico. Se contempla que los polipéptidos CNGH0010 de esta invención también pueden ser producidos por líneas celulares derivadas de bacterias, levaduras, insectos o mamíferos. Los cassettes de expresión recombinantes que comprenden los ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos novedosos pueden ser introducidos en por lo menos una célula hospedera. Los vectores que contienen la secuencia de ácido nucleico de CNGH0010 y elementos promotores necesarios se pueden usar para expresar polipéptidos CNGH0010. Las secuencias de ácido nucleico codifican un polipéptido CNGH0010 junto con un péptido de señal pueden ser incluidos para facilitar secreción y purificación de polipéptidos deseados. Los expertos en la técnica conocen numerosos sistemas de expresión disponibles para la expresión de un ácido nucleico que codifica un polipéptido de la presente invención. Los sistemas de traducción libre de célula también se pueden utilizar para producir dichos polipéptidos usando ARN derivados a partir de las construcciones de ADN de la invención.

Moléculas de ácido nucleico Las secuencias de ácido nucleico que codifican polipéptidos CNGH0010 humanos de la presente invención se pueden obtener clonando, por ejemplo, por amplificación de RT-PCR, muestras de ARN. Alternativamente, el ADN que codifica polipéptidos CNGH0010 se puede obtener por síntesis de ADN o a partir de cualquier genoteca de ADNc preparada a partir de tejidos que se cree que poseen el ARNm de CNGH0010 o a partir de una genoteca de ADN genómico. Las secuencias de ácido nucleico pueden ser clonadas por amplificación de PCR o por métodos tradicionales de hibridación de ADN y clonación de expresión. Usando la información que aquí se provee (métodos que aquí se describen o como se conoce en la técnica), tales como las secuencias de nucleótido que codifican por lo menos 70-100% de los aminoácidos contiguos de por lo menos una de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 o fragmentos, variantes o secuencias de consenso especificados de las mismas, o un vector que comprende por lo menos una de esas, se puede obtener una molécula de ácido nucleico de la presente invención que codifica por lo menos un polipéptido CNGH0010 o anticuerpo anti-CNGH00 0. Las moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden estar en forma de ARN, tal como ARNm, ARNhn, o cualquier otra forma, o en forma de ADN, incluyendo pero sin limitarse a ADNc y ADN genómico obtenido al clonar o producido sintéticamente, o cualquier combinación de los mismos. El ADN puede ser de triple cadena, de doble cadena ó de una sola cadena, o combinación de los mismos. Cualquier porción de por lo menos una cadena del ADN o ARN puede ser la cadena codificadora, también conocida como la cadena de sentido, o puede ser la cadena no codificadora, también referida como la cadena de antisentido. Como se indica aquí, las moléculas de ácido nucleico de la presente invención que comprenden un ácido nucleico que codifica un polipéptido CNGH0010 o un anticuerpo anti-CNGH0010 pueden incluir pero no se limitan a aquellas que codifican la secuencia de aminoácido de un fragmento de polipéptido o anticuerpo, como tal; la secuencia codificadora para el polipéptido o anticuerpo completo o una porción del mismo; la secuencia codificadora para un polipéptido o anticuerpo, fragmento o porción, así como secuencias adicionales, tales como las secuencias codificadoras de por lo menos una señal líder o un péptido de fusión, con o sin las secuencias codificadoras adicionales antes mencionadas, tales como por lo menos un intron, junto con secuencias no codificadoras, incluyendo pero sin limitarse a secuencias 5' y 3' no codificadoras, tales como las secuencias no traducidas, transcritas, que juegan un papel en la transcripción de procesamiento de ARNm incluyendo empalme y señales de poliadenilación (por ejemplo, unión de ribosomas y estabilidad de ARNm); y una secuencia codificadora adicional que codifica para aminoácidos adicionales, tales como aquellos que proveen funcionalidades adicionales. Por lo tanto, la secuencia que codifica un polipéptido o anticuerpo se puede fusionar una secuencia marcadora tal como una secuencia que codifica un péptido que facilita la purificación del anticuerpo fusionado que comprende un fragmento de anticuerpo o porción del mismo.

Construcción de ácidos nucleicos y expresión y purificación de polipéptidos Los ácidos nucleicos aislados de la presente invención se pueden hacer usando (a) métodos recombinantes, (b) técnicas sintéticas, (c) técnicas de purificación o combinaciones de los mismos, como es bien conocido en la técnica. Los ácidos nucleicos pueden comprender convenientemente secuencias además de un polinucleótido de la presente invención. Por ejemplo, un sitio de multiclonaclón que comprende uno o más sitios de restricción de endonucleasa se puede insertar en el ácido nucleico para ayudar al aislamiento del polinucleótido. También, las secuencias traducibles pueden ser insertadas para ayudar en el aislamiento del polinucleótido traducido de la presente invención. Por ejemplo, una secuencia marcadora de hexa-histidina provee un medio conveniente para purificar las proteínas de la presente invención. El ácido nucleico de la presente invención - excluyendo la secuencia codificadora - es opcionalmente un vector, adaptador o enlazador para la clonación y/o expresión de un polinucleótido de la presente invención. Secuencias adicionales se pueden añadir a dichas secuencias de clonación y/o expresión para optimizar su función en la clonación y/o expresión, para ayudar en el aislamiento del polinucleótido, o para mejorar la introducción del polinucleótido en una célula. El uso de vectores de clonación, vectores de expresión, adaptadores y enlazadores es bien conocido en la técnica, (véase, v.gr., Ausubel, supra; o Sambrook, supra). Una gran variedad de sistemas de expresión se pueden usar para producir los polipéptidos de la invención. Dichos sistemas incluyen vectores derivados de cromosomas, episomas y virus, tales como vectores derivados de plásmidos bacterianos, bacteriófagos, transposones, episomas de levaduras, elementos de inserción, elementos cromosómicos de levadura, baculovirus, virus de papova, tales como SV40, virus de vaccinia, adenovirus, virus de viruela aviar, virus de pseudorabia, picronavirus y retrovirus y vectores derivados de combinaciones de los mismos, tales como cósmidos y fagémidos. Las construcciones de sistema de expresión pueden contener regiones de control que regulan o causan expresión. Generalmente, cualquier sistema o vector adecuado para mantener o propagar polinucleótidos y/o para expresar polipéptidos en un hospedero se pueden usar para expresión. Una secuencia de ADN apropiada puede ser insertada en el sistema de expresión por cualquiera de una variedad de técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica, tales como, v.gr., aquellas expuestas en Sambrook et al., supra. En sistemas de expresión eucarióticos, los polipéptidos de la invención se pueden seleccionar en el número del retículo endoplásmico o también extracelular por inclusión de señales de secreción apropiadas, tales como un péptido de señal o secuencia del líder. Los polipéptidos de la invención se pueden recuperar y purificar a partir de cultivos de células recombinantes por métodos bien conocidos, incluyendo sulfato de amonio o precipitación con etanol, extracción con ácido, cromatografía de alto rendimiento, cromatografía de intercambio de aniones o cationes, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxiapatita y cromatografía de lectita. Las técnicas bien conocidas para el redoblamiento de proteína se puede utilizar para regenerar la conformación activa cuando la proteína es desnaturalizada durante el aislamiento y/o purificación. En un método alternativo para obtener el ácido nucleico de la invención, que codifica los polipéptidos CNGH0010, una genoteca de ADNc o genómica puede ser determinada selectivamente usando una sonda basada en la secuencia de un polinucleótido de la presente invención, tal como aquellos que aquí se describen. Las sondas se pueden usar para hibridar con ADN genómico o ADNc para aislar genes homólogos en el mismo organismo u organismos diferentes. Aquellos expertos en la técnica apreciarán que varios grados de astringencia de hibridación se pueden utilizar en la prueba; y ya sea la hibridación o el medio de lavado puede ser astringente. A medida que las condiciones para hibridación se vuelven más astringentes, deba haber un mayor grado de complementariedad entre la sonda y el objetivo para que ocurra la formación dúplex. El grado de astringencia puede ser controlado por uno o más de la temperatura, resistencia iónica, pH y la presencia de un solvente parcialmente desnaturalizador, tal como formamida. Por ejemplo, la astringencia de hibridación es convenientemente variada al cambiar la polaridad de la solución de reactivos, a través, por ejemplo, manipulación de la concentración de formamida dentro del intervalo de 0% a 50%. El grado de complementariedad (identidad de secuencia) requerido para unión detectable variará de acuerdo con la astringencia del medio de hibridación y/o medio de lavado. El grado de complementariedad será de manera óptima de 100% y 80-100%, o cualquier intervalo o valor en los mismos. Sin embargo, cabe entender que variación de secuencia menores en las sondas e iniciadores se pueden compensar reduciendo la astringencia de la hibridación y/o medio de lavado. Un ejemplo de condiciones de hibridación astringentes incluyen incubación durante la noche a 42°C en una solución que comprende: 50% de formamida, 5XSSC (150 mM NaCI, 15 mM citrato trisódico), 50 mM de fosfato de sodio (pH 7.6), solución de 5XDenhardt, 10% de sulfato de dextrano, y 20 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado, desnaturalizado; seguido por lavado con filtros en 0.1XSSC a aproximadamente 65°C. Métodos de amplificación de ARN o ADN son bien conocidos en la técnica y se pueden usar de acuerdo con la presente invención sin experimentación extraordinaria, con base en las enseñanzas y guía que aquí se presentan. Los métodos conocidos de amplificación de ADN o ARN incluyen, pero no se limitan a, reacción de cadena de polimerasa (PCR) y procedimientos de amplificación relacionados (véase, v.gr., patentes de E.U.A. Nos. 4,683,195, 4,683,202, 4,800,159, 4,965,188, de Mullís, et al.; 4,795, 699 y 4,921 ,794 de Tabor, et al; 5,142,033 de Innis; 5, 122,464 de Wilson, et al.; 5,091,310 de Innis; 5,066, 584 de Gyllensten, et al; 4,889,818 de Gelfand, et al; 4,994,370 de Silver, et al; 4,766,067 de Biswas; 4,656,134 de Rlngold) y amplificación mediada por ARN que usa ARN de antisentido a la secuencia objetivo como una plantilla para síntesis de ADN de doble cadena (patente de E.U.A. No. 5,130,238 a Malek, et al, con el nombre comercial NASBA, cuyo contenido completo se incorpora aquí por referencia. (Véase, v.gr., Ausubel, supra; o Sambrook, supra). Por ejemplo, la tecnología de reacción de cadena de polimerasa (PCR) se puede usar para amplificar las secuencias de polinucleótidos de la presente invención y genes relacionados directamente a partir de ADN genómico o genotecas de ADNc. PCR y otros métodos de amplificación in vitro también pueden ser útiles, por ejemplo, para clonar secuencias de ácido nucleico que codifican proteínas que han de ser expresadas, para hacer ácidos nucleicos para usarlos como sondas para detectar la presencia del ARNm deseado en muestras, para secuenciación de ácido nucleico, o para otros propósitos. Ejemplos de técnicas suficientes para guiar a los expertos en la técnica a través de métodos de amplificación ¡n vitro se encuentran en Berger, supra, Sambrook, supra, y Ausubel, supra, así como en Mullís, et al., patente de E.U.A. No. 4,683,202 (1987); e Innis, et al., PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Equipos comercialmente disponibles para amplificación de PCR genómico se conocen en la técnica. Véase, v.gr., Advantage-GC Genomic PCR Kit (Clontech). Además, v.gr., la proteína 32 del gen T4 (Boehringer Mannheim) se puede usar para mejorar el rendimiento de productos de PCR largos. Los ácidos nucleicos aislados de la presente invención también se pueden preparar mediante síntesis química directa por métodos conocidos (véase, v.gr., Ausubel, et al., supra). La síntesis química generalmente produce oligonucleótido de una sola cadena, que puede ser convertido a ADN de doble cadena por hibridación con una secuencia complementaria, o por polimerización con ADN polimerasa usando la cadena individual como una plantilla. Un experto en la técnica reconocerá que aunque la síntesis química de ADN se puede limitar a secuencias de aproximadamente 100 o más bases, se pueden obtener secuencias más largas mediante ligación de secuencias más cortas.

Polinucleótidos que hibridan selectivamente a un polinucleótido como se describe Como se describió anteriormente, la presente invención provee ácidos nucleicos aislados que hibridan bajo condiciones de hibridación selectivas a un polinucleótido que aquí se describe. Por lo tanto, los polinucleótidos de esta modalidad se pueden usar para aislar, detectar, y/o cuantificar ácidos nucleicos que comprenden dichos polinucleótidos. Por ejemplo, los polinucleótidos de la presente invención se pueden usar para identificar, aislar, o amplificar clones de longitud parcial o completa en una genoteca depositada. En algunas modalidades, los polinucleótidos son secuencias genómicas o de ADNc aisladas, o de otra manera complementarias a, un ADNc a partir de una genoteca de ácido nucleico humana o de mamífero. Preferiblemente, la genoteca de ADNc comprende por lo menos 80% de secuencias de longitud completa, preferiblemente, por lo menos 85% o 90% de secuencias de longitud completa, y, muy preferiblemente, por lo menos 95% de secuencias de longitud completa. Las genotecas de ADNc pueden ser normalizadas para incrementar la representación de secuencias raras. Las condiciones de hibridación de astringencia baja a moderada son típicamente, pero no exclusivamente utilizadas con secuencias que tienen una identidad de secuencia reducida en relación con secuencias complementarias. Las condiciones de astringencia moderadas y altas opcionalmente se pueden utilizar con secuencias de identidad mayor. Condiciones de astringencia bajas permiten hibridación selectiva de secuencias que tienen aproximadamente 70% de identidad de secuencia y se pueden utilizar para identificar secuencias ortólogas o parálogas. Opcionalmente, los polinucleótídos de esta invención codificarán por lo menos una porción de una proteína o un anticuerpo codificado por los polinucleótídos que aquí se describen. Los polinucleótídos de esta invención abarcan secuencias de ácido nucleico que se pueden utilizar para hibridación selectiva para un polinucleótido que codifica una proteína o un anticuerpo de la presente invención. Véase, v.gr., Ausubel, supra; Colligan, supra, cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad.

Uso de polipéptidos y polinucleótidos CNGH001Q Los polinucleótidos y polipéptidos de la invención también son útiles para probar un medio para la presencia de una sustancia que modula la función de la proteína CNGH0010 al afectar la unión de una proteína análoga de CNGH0010 a parejas de unión, tales como el receptor de CNGH0010.

Ejemplos de moduladores incluyen polipéptidos o moléculas orgánicas pequeñas. Los polipéptidos de la invención también se pueden usar para identificar compuestos líderes para el desarrollo de fármacos. La estructura de los polipéptidos que aquí se describen se puede determinar fácilmente por un número de métodos tales como RMN y cristalografía de rayos X. Una comparación de las estructuras de polipéptidos similares en secuencia, pero que difieren en las actividades biológicas que inducen en moléculas objetivo pueden proveer información acerca de la relación de estructura-actividad del objetivo. La información obtenida a partir de la examinación de relaciones de estructura-actividad se pueden usar para diseñar ya sea polipéptidos modificados u otras moléculas pequeñas o compuestos líderes que se pueden usar para probarse para propiedades predichas en lo que se refiere a la molécula objetivo. La actividad de los compuestos líderes se puede evaluar usando pruebas similares a aquellas que aquí se describen. La información acerca de las relaciones de estructura-actividad también se puede obtener a partir de estudios de co-cristalización. En estos estudios, un poüpéptido con una actividad diseñada es cristalizado en asociación con una molécula objetivo, y la estructura de rayos X del complejo se determina. La estructura se puede comparar con la estructura de la molécula objetivo en su estado nativo, e información a partir de dicha comparación se puede usar para diseñar compuestos que se espera que posean actividades deseadas. La invención también contempla métodos para identificar compuestos novedosos que se unen a los polipéptidos de la invención afectando así una vía de señalización de CNGH0010. Las interacciones proteína-proteína se pueden identificar usando métodos convencionales tales como co-inmunoprecipitación, entrelazamiento y co-purificación a través de gradientes o columnas cromatograficas. También se pueden utilizar métodos que den por resultado la identificación simultánea de genes que codifican proteínas que ¡nteractúan con una molécula. Estos métodos incluyen el sondeo de genotecas de expresión con moléculas marcadas. Además, estudios de cristalografía de rayos X se pueden usar como un medio para evaluar interacciones con sustancias y moléculas. Se apreciará que las proteínas de fusión y proteínas recombinantes se pueden usar en los métodos anteriormente descritos. Los reactivos adecuados para aplicar los métodos de la invención para evaluar sustancias y compuestos que afectan o modulan una vía de señalización CNGH0010 se pueden empacar en equipos convenientes proveyendo los materiales necesarios empacados en contenedores adecuados. Los equipos también puede incluir soportes adecuados útiles para llevar a cabo los métodos de la invención. CNGH0010 maduro o sus análogos se pueden usar para modular, es decir, incrementar o reducir, la actividad de células eucarióticas y/o el número de las mismas, tal como proliferación y activación. Más aun, CNGH0010 maduro o sus análogos se pueden usar para regular diferenciación y migración regular. Puesto que CNGH0010 puede ser segregado, CNGH0010 maduro o sus análogos se pueden usar para tratar varios tipos de enfermedades inflamatorias inmuno-mediadas que son dependientes de la proliferación, diferenciación y migración celular, tales como pero sin limitarse a psoriasis, artritis reumatoide, enfisema, asma, diabetes, tiroiditis autoinmune, enfermedades intestinales inflamatorias, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, diferentes tipos de dermatitis incluyendo dermatitis alérgica, dermatitis por contacto, queratosis actínica, cicatrización de heridas, formación de cicatriz, varias enfermedades renales, varias enfermedades respiratorias, enfermedades de órganos reproductores, tales como endometriosis, melanoma, carcinoma de células escamosas, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, enfermedad de Grave y otras enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas. Además, CNGH0010 maduro o sus análogos se pueden usar para incrementar respuestas inmunes a una enfermedad infecciosa. CNGH0010 maduro o sus análogos se pueden usar solos o en combinación con un antígeno como un adyuvante para tratar o prevenir varias enfermedades infecciosas, h i pe rp rol if e rativas e inflamatorias. El modo de administración para uso terapéutico de los polipéptidos de la invención puede ser cualquier vía adecuada que suministre el agente al hospedero, tal como administración parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarticular, intrabronqueal, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginosa,, intracavitaria, intracelial, intracerebelar, intracerebroventricular, ¡ntracólica, ¡ntracervical, intragástrica, intrahepática, intramiocárdica, intraosteal, intrapélvica, intrapericárdica, intraperitoneal, ¡ntrapleural, intraprostática, intrapulmonar, intrarectal, intrarenal, intraretinal, intrapinal, intrasínovíal, intratorácica, intrauterina, intravesical, intralesionaí, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal o transdérmica. Los polipéptidos de la invención se pueden preparar como composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad efectiva del agente de unión como un ingrediente activo en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Una suspensión o solución acuosa que contiene el agente de unión, preferiblemente regulado en su pH a pH fisiológico en una forma lista para inyección es preferida. Las composiciones para administración parenteral comúnmente comprenderán una solución del agente de unión de la invención o una combinación de los mismos disuelta en un vehículo farmacéuticamente aceptable, preferiblemente, un vehículo acuoso. Una variedad de vehículos acuosos se pueden utilizar, v..gr., solución salina al 0.4%, glicina al 0.3% y similar. Estas soluciones son estériles y generalmente libres de material en partículas. Estas partículas se pueden esterilizar por técnicas de esterilización convencionales, bien conocidas (v.gr., filtración). Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables como se requiere para aproximar condiciones fisiológicas, tales como ajuste de pH y agentes reguladores de pH, etc. La concentración de los polipéptidos de la invención en dichas formulaciones farmacéuticas se puede variar ampliamente, es decir, de menos de aproximadamente 0.5%, generalmente en por lo menos aproximadamente 1% a tanto como 15 o 20% en peso, y se seleccionará principalmente con base en volúmenes de fluido, viscosidades, etc., de conformidad con el modo particular de administración seleccionada. Por lo tanto, una composición farmacéutica de la invención para inyección intramuscular se podría preparar para contener 1 mi de agua regulada en su pH estéril, y entre aproximadamente 1 ng a aproximadamente 100 mg, v.gr., aproximadamente 50 ng a aproximadamente 50 ng a aproximadamente 30 mg o más, preferiblemente, aproximadamente 5 mg a aproximadamente 25 mg, de un polipéptido de la invención. De manera similar, una composición farmacéutica de la invención para infusión intravenosa se podría hacer para contener aproximadamente 250 mi de solución de Ringer estéril, y aproximadamente 1 mg a aproximadamente 30 mg y preferiblemente 5 mg a aproximadamente 25 mg de un polipéptido de la invención. Los métodos reales para preparar composiciones parenteralmente administrables son conocidos o serán evidentes para los expertos en la técnica y se describirán con más detalle, por ejemplo, en Remington, the Science and Practice of Pharmacy, 19a. Ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa (1995). Los polipéptidos de la invención, cuando están en preparación farmacéutica, se pueden presentar en forma de dosis unitaria. La dosis terapéuticamente efectiva apropiada puede ser fácilmente determinada por los expertos en la técnica. Una dosis determinada, si es necesario, puede repetirse en intervalos de tiempo apropiados que se seleccionan como apropiados por un médico durante el período de tratamiento. Los polipéptidos de la invención se pueden liofilizar para almacenamiento y ser reconstituidos en un vehículo adecuado ante de usarse. Esta técnica se ha mostrado que es efectiva con preparaciones de proteína convencionales y se pueden utilizar en técnicas de liofilización y reconstitución conocidas en la técnica. Si un poiipéptido de la presente invención ha de ser expresado para usarse en pruebas de detección selectiva, generalmente se prefiere que el poiipéptido se produzca en la superficie de la célula. En este caso, las células pueden ser cosechadas antes de usarse en la prueba de detección selectiva. Si el poiipéptido es secretado en el medio, el medio puede ser recuperado a fin de recuperar y purificar el poiipéptido. Si es producido ¡ntracelularmente, la célula primero debe ser lisada antes de que se recupere el poiipéptido. Esta invención también se refiere al uso de polinucleótidos de la presente invención como reactivos de diagnóstico. La detección de una forma mutada del gen caracterizado por el polinucleótido de SEQ ID NO:2 que está asociado con una disfunción proveerá una herramienta de diagnóstico que se puede añadir a, o definir, un diagnóstico de una enfermedad, o susceptibilidad a una enfermedad, que resulta de subexpresión, sobre expresión, o expresión alterada del gen. Los individuos que portan mutaciones en el gen pueden ser detectados al nivel de ADN por una variedad de técnicas. Los ácidos nucleicos para diagnóstico se pueden obtener a partir de las células de un sujeto, tales como de la sangre, orina, saliva, biopsia de tejido o material de autopsia. El ADN genómico se puede usar directamente para detección o se puede amplificar enzimáticamente usando PCR u otras técnicas de amplificación antes del análisis. También se puede usar ARN o ADNc de manera similar. Pueden detectarse deleciones e inserciones por un cambio en el tamaño del producto amplificado en comparación con el genotipo normal. Mutaciones puntuales pueden ser identificadas hibridando ADN amplificado para marcar secuencias de nucleótido CNGH0010. Secuencias perfectamente igualadas se pueden distinguir de dúplex no igualados por digestión con ARNasa o por diferencias en temperaturas de fusión. Las diferencias de secuencias de ADN también se pueden detectar por alteraciones de la movilidad electroforética de fragmentos de ADN en geles, con o sin agentes desnaturalizadores o por secuenciación de ADN directa (v.gr., Myers et al., Science (1985) 230:1242). Cambios en secuencia en lugares específicos también pueden ser revelados por pruebas de protección con nucleasa, tales como protección con ARNasa y S1 o el método de digestión química (véase Cotton et ai., Proc Nati Acad Sci USA (1985) 85:4397-4401). En otra modalidad, una disposición de sondas de oligonucleótidos que comprende secuencias de nucleotido CNGH0010 o fragmentos de las mismas se pueden construir para conducir la detección selectiva eficiente de v.gr., mutaciones genéticas. Los métodos de tecnología de ordenamiento son bien conocidos y tienen aplicabilidad general y se pueden usar para dirigir una variedad de cuestionamientos en genética molecular, incluyendo expresión de genes, enlace genético, y variabilidad genética (véase por ejemplo: M. Chee et al., Science, Vol 274, pp 610-613 (1996)). Las pruebas de diagnóstico ofrecen un procedimiento para diagnosticar o determinar una susceptibilidad a las enfermedades relevantes a través de detección de mutación en el gen CNGH0010 por los métodos descritos. Además, dichas enfermedades pueden ser diagnosticadas por métodos que comprenden la determinación a partir de una muestra derivada de un sujeto a un nivel anormalmente a un nivel disminuido o incrementado de polipéptido o ARNm. La expresión disminuida o incrementada se puede disminuir al nivel de ARN usando cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica para la cuantificación de polinucleótidos, tales como, por ejemplo, amplificación de ácido nucleico, por ejemplo, PCR, RT-PCR, protección con ARNasa, Northern blotting y otros métodos de hibridación. Las técnicas de prueba que se pueden usar para determinar los niveles de una proteína, tal como un polipéptido de la presente invención, en una muestra derivada de un hospedero son bien conocidas por los expertos en la técnica. Dichos métodos de prueba incluyen radioinmunoensayos, pruebas de unión competitiva, análisis de Western Blot y pruebas de ELISA. Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere a un equipo de diagnóstico que comprende: (a) un polinucleótido de la presente invención, preferiblemente, una de las secuencias de nucleótido de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10 y variantes, polinucleótidos con por lo menos 70% de identidad con cualquiera de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10 o variantes, o un fragmento de las mismas; (b) una secuencia de polinucleótido complementaria a la de (a); (c) un polipéptido de la presente invención, preferiblemente, uno de los polipéptidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 y variantes, polipéptidos con por lo menos 70% de identidad a cualquiera de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 7, y 1 1 y variantes, o un fragmento de las mismas; o (d) un anticuerpo para un polipéptido de la presente invención, variantes, y fragmentos del mismo, preferiblemente, para uno de los polipéptidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 y variantes. Se apreciará que en dicho equipo, los componentes (a), (b), (c), o (d) de lo anterior puede comprender un componente sustancial. Dicho equipo se usará en el diagnóstico de una enfermedad o susceptibilidad a una enfermedad, tal como pero sin limitarse a psoriasis, artritis reumatoide, enfisema, asma, diabetes, tiroiditis autoinmune, enfermedades intestinales inflamatorias incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, varios tipos de dermatitis incluyendo dermatitis alérgica, dermatitis por contacto, queratosis actínica, cicatrización de heridas, formación de cicatriz, varias enfermedades renales, varias enfermedades respiratorias, varias enfermedades de órganos reproductores, tales como endometrosis, melanoma, carcinoma de células escamosas, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, enfermedad de Grave y otras enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas. Las secuencias de nucleótido de la presente invención también son valiosas para identificación de cromosomas. Cada secuencia genómica es específicamente dirigida a, y puede hibridar con, un lugar particular en un cromosoma humano individual. El mapeo de secuencias relevantes a cromosomas de conformidad con la presente invención puede ser útil para correlacionar esas secuencias con enfermedades y condiciones asociadas con genes. Una vez que una secuencia ha sido mapeada a un lugar cromosómico preciso, la posición física de secuencia sobre el cromosoma se puede correlacionar con datos de mapa genético. Dichos datos se encuentran en, por ejemplo, V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (disponible en línea a través de Johns Hopkins University Welch Medical Library). La relación entre genes y entre genes que han sido mapeados a la misma región cromosómica pueden ser identificados a través de análisis de enlace (es decir, co-herencia de genes físicamente adyacentes). Las diferencias en la secuencia de ADNc o genómica entre individuos afectados y no afectados también se puede determinar. Si se observa una mutación en algunos o todos de los individuos afectados pero no en cualquiera individuos normales, entonces la mutación probablemente es del agente causal de la enfermedad. Los polinucleótidos, polipéptidos y anticuerpos para los polipéptidos de la presente invención también se pueden usar para configurar métodos de detección selectiva para detectar el efecto de compuestos añadidos sobre la producción de ARNm y polipéptido en las células. Por ejemplo, una prueba de ELISA se puede construir para medir niveles secretados o asociados con células de polipéptido usando anticuerpos monoclonales y policlonales por métodos estándares conocidos en la técnica. Esto se puede usar para descubrir agentes que pueden inhibir o incrementar la producción de polipéptido (también llamado antagonismo o agonismo, respectivamente) a partir de células o tejidos adecuadamente manipulados. El polipéptido se puede usar para identificar receptores de unión de membrana o solubles, si acaso, a través de técnicas de unión a receptor estándares conocidos en la técnica. Esas incluyen, pero no se limitan a pruebas de unión de ligando y entrelazamiento en las cuales el polipéptido es marcado con un isótopo radioactivo (por ejemplo 125l), químicamente modificado (por ejemplo, biotinilado), o fusionado a una secuencia de péptido adecuada para la detección o purificación, e incubada con una fuente del receptor putativo (células, membranas celulares, sobrenadantes celulares, extractos de tejido, fluidos corporales). Otros métodos incluyen técnicas biofísicas, tales como resonancia de plasmón de superficie y espectroscopia. Estos métodos de detección selectiva también se pueden usar para identificar agonistas y antagonistas del polipéptido que compiten con la unión del polipéptido a sus receptores, si acaso los hay. Los métodos estándares para conducir estas pruebas son bien conocidos en la técnica. Ejemplos de antagonistas de polipéptidos potenciales incluyen anticuerpos o, en algunos casos, oligonucleótidos o proteínas que están estrechamente relacionados con los ligandos, substratos, receptores, enzimas, etc., del polipéptido. Por ejemplo, un fragmento de los ligandos, substratos, receptores, enzimas, etc.; o moléculas pequeñas se pueden unir al polipéptido de la presente invención pero no inducir una respuesta, es decir, a la actividad del polipéptido. Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere a un equipo de detección selectiva para identificar agonistas, antagonistas, ligandos, receptores, substratos, enzimas, etc., para polipéptidos de la presente invención; o compuestos que reducen o incrementan la producción de dichos polipéptidos, que comprende: (a) un polipéptido de la presente invención; (b) una célula recombinante que expresa polipéptido de la presente invención; (c) una membrana celular que expresa un polipéptido de la presente invención; o (d) anticuerpo para un polipéptido de la presente invención, dicho polipéptido es preferiblemente uno de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 o variantes de empalme. Se apreciará que en cualquiera de dichos equipos, los componentes (a), (b), (c), o (d) pueden comprender un componente sustancial. Los expertos en la técnica apreciarán fácilmente que un polipéptido de la presente invención también se puede usar en un método para el diseño basado en estructura de un agonista, antagonista o inhibidor del polipéptido, mediante: (a) determinación en el primer caso de la estructura tridimensional del polipéptido; (b) deducción de la estructura tridimensional para probable reactivo o sitio de unión de un agonista, antagonista o inhibidor; (c) síntesis de compuestos candidatos que se predice que se unen o reaccionan con la unión o sitio reactivo deducido; y (d) prueba de si los compuestos candidatos son de hecho agonistas, antagonistas o inhibidores. Se apreciará que éste normalmente es un proceso activo. Los polipéptidos usados en el tratamiento se pueden generar endógenamente en el sujeto, en modalidades de tratamiento a menudo referidas como "terapia génica" como se describió anteriormente. Por lo tanto, por ejemplo, las células de un sujeto pueden ser manipuladas genéticamente con un polinucleótido, tal como ADN o ARN, para codificar un polipéptido ex vivo, y por ejemplo, mediante el uso de vector de plásmido retroviral. Las células después son introducidas en el sujeto.

Anticuerpos anti-CNGH0010 Un anticuerpo de la invención se une a por lo menos un epítope especificado específico para una proteína CNGH0010, subunidad, fragmento, porción de la invención o combinación de las mismas. El epítope puede comprender una región de unión a anticuerpo que comprende por lo menos una porción de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11 o sus variantes (v.gr., variantes de empalme anteriormente descritas), dicho epítope está compuesto preferiblemente de por lo menos 1-5 aminoácidos de la secuencia. El anticuerpo puede incluir o derivarse de cualquier mamífero, tal como pero sin limitarse a un humano, un ratón, un conejo, una rata, un roedor, un primate o cualquier combinación de los mismos y similares. Un anticuerpo anti-CNGH0010, como se describe aquí, tiene por lo menos una actividad, tal como, pero sin limitarse a neutralizar la fosforilación de receptor dependiente CNGH0010, internalización de receptor, adhesión, migración e invasión celular, e inducción de moléculas de señalización o adaptación de marcadores celulares. Un anticuerpo anti-CNGH0010 por lo tanto puede ser detectado selectivamente para una actividad correspondiente de acuerdo con métodos conocidos, tales como, pero sin limitarse a por lo menos una actividad biológica de CNGH0010 humano.. El anticuerpo se puede usar para medir o afectar una célula, tejido, órgano o animal (incluyendo mamíferos y humanos), para diagnosticar, monitores, modular, tratar, aliviar, ayudar a prevenir la incidencia de, o reducir los síntomas de por lo menos una enfermedad o condición relacionada con CNGH0010, seleccionada de, pero sin limitarse a, por lo menos uno de un trastorno o enfermedad inmune, un trastorno o enfermedad cardiovascular, un trastorno o enfermedad infeccioso, maligno y/o neurológico, u otra condición relacionada con CNGH0010 conocida o especificada.

Definición v caracterización de un anticuerpo ant¡-CNGH0010 Como se usa aquí, un "anticuerpo anti-CNGH0010", "porción de anticuerpo anti-CNGH0010", o "fragmento de anticuerpo anti-CNGH0010" y/o "variante de anticuerpo anti-CNGH0010" y similares incluyen cualquier proteína o polipéptido que contiene una molécula que comprende por lo menos una porción de una molécula de inmunoglobulina, tal como pero sin limitarse a, por lo menos una región de determinación complementaria (CDR) de una cadena pesada o ligera o una porción de unión a ligando de la misma, una región variable de cadena pesada o de cadena ligera, una región constante de cadena pesada o cadena ligera, una región de marco, o cualquier porción de las mismas, o por lo menos una porción de un receptor de CNGH0010 o proteína de unión derivada de una proteína o polipéptido de la invención, que se puede incorporar en un anticuerpo de la presente invención. Dicho anticuerpo opcionalmente afecta además a un ligando específico, tal como pero sin limitarse a, en donde dicho anticuerpo modula, reduce, incrementa, antagoniza, agoniza, mitiga, alivia, bloquea, inhibe, anula y/o interfiere con por lo menos una actividad o unión de CNGH0010 o con una actividad o unión de ligando de CNGH0010, in vitro, in situ y/o in vivo. Un ejemplo no limitante, un anticuerpo anti-CNGH0010 adecuado, porción especificado o variante de la presente invención se puede unir a en por lo menos una proteína o polipéptido CNGH0010 de la invención, o porciones especificadas, variantes o dominios de la misma. Un anticuerpo anti-CNGH0010 adecuado, porción especificada, o variante también puede afectar opcionalmente por lo menos una de actividad o función de CNGH0010, tal como pero sin limitarse a, ARN, ADN o síntesis de proteína, liberación de CNGH0010, señalización de receptor de CNGH0010, actividad de CNGH0010, producción y/o síntesis de CNGH0010. El término "anticuerpo" se pretende que abarque anticuerpos, fragmentos de digestión, porciones especificadas y variantes del mismo, incluyendo míméticos de anticuerpo o porciones de anticuerpos que simulan la estructura y/o función de un anticuerpo o fragmento especificado o porción del mismo, incluyendo anticuerpos de una sola cadena y fragmentos de los mismos. Los fragmentos funcionales incluyen fragmentos de unión antígeno que se une a CNGH0010 de mamífero. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpo capaces de unirse a CNGH0010 o porciones del mismo, incluyendo pero sin limitarse a, fragmentos Fab (v.gr., por digestión de papaína), Fab' (v.gr., por digestión de pepsina y reducción parcial) y F(ab')2 (v.gr., por digestión de pepsina), facb (v.gr., por digestión de plásmino), pFc' (v.gr., por digestión, reducción parcial y reagregación de pepsina), Fv o scFv (v.gr., por técnicas de biología molecular), fragmentos, son abarcadas por la invención (véase, v.gr., Colligan, Immunology, supra). Dichos fragmentos se pueden producir por técnicas de digestión enzimática, sintéticas o recombinantes, como se conoce en la técnica y/o como se describe aquí. Los anticuerpos también se pueden producir en una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpo en los cuales uno o más codones de interrupción sean introducidos hacia el extremo 5' del sitio de interrupción natural. Por ejemplo, un gen de combinación que codifica una porción de cadena pesada F(ab')2 puede ser diseñado para incluir secuencias de ADN que codifican el dominio de CH-i y/o región de gozne de la cadena pesada. Las diversas porciones de anticuerpos se pueden unir químicamente entre si o por técnicas convencionales, o se pueden preparar como una proteína contigua usando técnicas de ingeniería genética. Como se usa aquí, el término "anticuerpo humano" se refiere a un anticuerpo en el cual cada parte de la proteína (v.gr., CDR, marco de trabajo, dominios de CL, CH (v.gr., CHT , CH2, CH3), gozne, (VL, VH)) es sustancialmente no monogénico en humanos, sólo con cambios o variaciones de secuencia menores. De manera similar, los anticuerpos designados como de primate (monos, babuinos, chimpancés, etc.), roedores ( ratón, rata, conejo, cobayo, hámster, y similares) y otros mamíferos designan dichos anticuerpos específicos de especie, subgénero, genero, subfamilia, familia. Además, los anticuerpos quiméricos de la invención pueden incluir cualquier combinación de los anteriores. Dichos cambios o variaciones opcionalmente y preferiblemente retienen o reducen la inmunogenlcidad en humanos u otras especies en relación con anticuerpos no modificados. Por lo tanto, un anticuerpo humano es distinto de un anticuerpo quimérico o humanizado. Cabe señalar que un anticuerpo humano puede ser producido por un animal no humano o célula procariótica o eucariótica que es capaz de expresar genes de inmunoglobulina humana funcionalmente reordenados (v.gr., cadena pesada y/o cadena ligera) Además, cuando un anticuerpo humano es un anticuerpo de una sola cadena, comprende un péptido enlazador que no se encuentra en anticuerpos humanos nativos. Por ejemplo, un Fv puede comprender un péptido enlazador, tal como 2 a aproximadamente 8 residuos de glicina u otro aminoácido, que conecta la región variable de la cadena pesada y la región variable de la cadena ligera. Dichos péptidos enlazadores se consideran de origen humano. Los anticuerpos aislados de la presente invención comprenden cualquier anticuerpo aislado o preparado que se prepara como se describe aquí. Preferiblemente el cuerpo humano o fragmentos de unión a antígeno se unen a CNGH0010 humano y, por lo tanto neutralizan parcialmente o sustancialmente por lo menos una actividad biológica de la proteína. Un anticuerpo, o porción especificada o variante del mismo, que parcialmente o de preferencia sustancialmente neutraliza por lo menos una actividad biológica de por lo menos una proteína CNGH0010 o fragmento puede unirse a la proteína o fragmento y de esta manera inhibir las actividades mediadas a través de la unión de CNGH0010 al receptor de CNGH0010 o a través de otros mecanismos dependientes de CNGH0010 o mediados por CNGH0010. Como se usa aquí, el término "anticuerpo neutralizante" se refiere a un anticuerpo que puede inhibir una actividad dependiente de CNGH0010 por aproximadamente 20-120%, preferiblemente por lo menos aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% o más dependiendo de la prueba. La capacidad de un anticuerpo anti-CNGH0010 para inhibir una actividad dependiente de CNGH0010 es preferiblemente evaluada por una prueba de proteína CNGH0010 o receptor de CNGH0010 adecuado, como se describe aquí y/o como se conoce en la técnica. Un anticuerpo humano de la invención puede ser de cualquier clase (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD, etc.) o isotipo y puede comprender una cadena ligera kappa o lambda. En una modalidad, el anticuerpo humano comprende una cadena pesada de IgG o fragmento definido, por ejemplo, por lo menos uno de los isotipos, lgG1 , lgG2, lgG3 o lgG4. Los anticuerpos de este tipo se pueden preparar utilizando un ratón transgénico u otro mamífero no humano transgénico que comprende por lo menos un transgen de cadena ligera humana (v.gr., IgG, IgA y IgM (v.gr., ?1 , ?2, ?3, ?4) como se describe aquí y/o como se conoce en la técnica. En otra modalidad, el anticuerpo humano CNGH0010 anti-humano comprende una cadena pesada de lgG1 y una cadena ligera de lgG1. Por lo menos un anticuerpo de la invención une por lo menos un epítope especificado específico a por lo menos una proteína CNGH0010, subunidad, fragmento, porción o cualquier combinación de las mismas, como se describe aquí. Por lo menos un epítope puede comprender por lo menos una región de anticuerpo que comprende por lo menos una porción de la secuencias de proteína correspondientes a las secuencias de péptido de la región de unión a receptor de CNGH0010 humano como se describe aquí, dicho epítope está compuesto preferiblemente de por lo menos una porción extracelular, soluble, hidrofílica, externa o citoplásmica de la proteína. En general, el anticuerpo humano o fragmento de unión a antígeno de la presente invención comprenderá una región de unión a antígeno que comprende por lo menos una región determinante de complementariedad humana (CDR1 , CDR2 y CDR3) o variante de por lo menos una región variable de cadena pesada y por lo menos una región determinante de complementariedad humana (CDR1 , CDR2 y CDR3) o variante de por lo menos una región variable de cadena ligera. Anticuerpos biespecíficos, heteroespecíficos, heteroconjugados o similares también se pueden usar ios cuales son anticuerpos monoclonales, preferiblemente humanos o humanizados, que tienen especificidades de unión para por lo menos dos antígenos diferentes. En el presente caso, una de las especificidades de unión es para por lo menos una proteína CNGH0010 de la invención, la otra es para cualquier otro antígeno. Los métodos para hacer anticuerpos biespecíficos son conocidos en la técnica. Tradicionalmente, la producción recombinante de anticuerpos biespecíficos se basa en la coexpresión de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina, en donde las dos cadenas pesadas tienen diferentes especificidades (Mllstein y Cuello, Nature 305:537 (1983)). Debido a la distribución aleatoria de las cadenas pesada y ligera de inmunoglobulina, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de 10 moléculas de anticuerpos diferentes, de las cuales solo una tiene la estructura biespecífica correspondiente. La purificación de la molécula correcta, que generalmente se hace por pasos de cromatografía de afinidad, es más bien tediosa y los rendimientos de producto son bajos. Se describen procedimientos similares, v.gr., en WO 93/08829, patentes de E.U.A. Nos. 6210668, 6193967, 6132992, 6106833, 6060285, 6037453, 6010902, 5989530, 5959084, 5959083, 5932448, 5833985, 5821333, 5807706, 5643759, 5601819, 5582996, 5496549, y 4676980, WO 91/00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), y Suresh et al., Methods ¡n Enzymology 121 :210 (1986), cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad. Los anticuerpos anti-CNGH00 0 útiles en los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser opcionalmente caracterizados por unión de alta afinidad a CNGH0010 y opcionalmente y preferiblemente teniendo baja toxicidad. En particular, un anticuerpo, fragmento especificado o variante de la invención, en donde los componentes individuales, tales como la región variable, región constante y marco de trabajo, individualmente y/o colectivamente, opcionalmente y preferiblemente en baja inmunogenicidad, es útil en la presente invención. Los anticuerpos que se pueden usar en la invención se caracterizan opcionalmente por su capacidad para tratar pacientes durante períodos prolongados con alivio medible de síntomas y toxicidad baja y/o aceptable. La inmunogenicidad baja y/o alta afinidad, así como otras propiedades adecuadas, pueden contribuir a los resultados terapéuticos logrados, "baja inmunogenicidad" se define aquí como producir respuestas HAHA, HACA o HAMA significativas en menos que aproximadamente 75% o preferiblemente menos que aproximadamente 50% de los pacientes tratados y/o producir bajos títulos en los pacientes tratados (menos que aproximadamente 300, preferiblemente menos que aproximadamente 100 medidos con un inmunoensayo de enzima de antígeno doble) (Elliott et al., Lancet 344:1125-1127 (1994), incorporada aquí por referencia en su totalidad). La aplicación de anticuerpo anti-CNGH0010 puede comprender la administración de una cantidad efectiva de una composición o una composición farmacéutica que comprende por lo menos anticuerpo anti-CNGH0010 a una célula, tejido, órgano, animal, o paciente que necesita dicha modulación, tratamiento, alivio, prevención, o reducción en síntomas, efectos o mecanismos. La cantidad efectiva puede comprender una cantidad de aproximadamente 0.001 a 500 mg/kg por administración simple (v.gr., bolos), múltiple o continua o para lograr una concentración de suero de 0.01-5000 µ9 ??? por administración simple, múltiple o continua, o cualquier intervalo o valor efectivo en la misma como se y se determina usando métodos conocidos, como se describe aquí o como se conoce en técnicas pertinentes.

Como lo apreciarán los expertos en la técnica, la presente invención incluye por lo menos un anticuerpo biológicamente activo de la presente invención. Los anticuerpos biológicamente activos tienen una actividad específica por lo menos 20%, 30%, o 40%, y, preferiblemente, por lo menos 50%, 60%, o 70%, y, muy preferiblemente, por lo menos 80%, 90%, o 95%-100% de la del anticuerpo nativo (no sintético), endógeno o relacionado y conocido. Los métodos de prueba y mediciones de cuantificación de actividad enzimática y especificidad de substrato son conocidos por los expertos en la técnica. En otro aspecto, la invención se refiere a anticuerpos humanos y fragmentos de unión a antígeno, como se describe aquí, que son modificados por la unión covalente de una porción orgánica. Dicha modificación puede producir un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno con propiedades farmacocinéticas mejoradas (v.gr., vida media en el suero in vivo incrementada). La porción orgánica puede ser un grupo polimérico hidrofílico lineal o ramificado, grupo ácido graso o grupo éster de ácido graso. Las moléculas de lípido tales como una porción de diesteroilfosfatil etanolamina, ya sea sola o covalentemente unida a un polímero hidrofílico, son útiles. En modalidades particulares, el grupo polimérico hidrofílico puede tener un peso molecular de aproximadamente 800 a aproximadamente 120,000 Daltons y puede ser un polialcan glicol (v.gr..polietilenglicol) (PEG), polietilenglicol (PPG)), polímero de carbohidrato, polímero de aminoácido o polivinilpirrolidona y en grupo de ácido graso o éster de ácido graso puede comprender de aproximadamente 8 a aproximadamente 40 átomos de carbono. Los anticuerpos modificados y fragmentos de unión a antígeno de la invención pueden comprender una o más porciones orgánicas que son covalentemente unidas, directamente o indirectamente al anticuerpo. Cada porción orgánica que se une a un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de la invención puede ser independientemente un grupo polimérico hidrofílico, un grupo ácido graso o un grupo éster de ácido graso. Como se usa aquí, el término "ácido graso" abarca ácidos monocarboxílicos y ácidos dicarboxílicos. Un grupo "grupo polimérico hidrofílico" como se usa aquí, se refiere a un polímero orgánico que es más soluble en agua que en octano. Por ejemplo, la polilisina es más soluble en agua que en octano. Por lo tanto, un anticuerpo modificado por la unión covalente de polilisina es abarcado por la invención. Los polímeros hidrofílicos adecuados para modificar anticuerpos de la invención pueden ser lineales o ramificados e incluyen, por ejemplo, polialcanglicoles (v.gr., PEG, monometoxi-polietilenglicol (mPEG), PPG y similares), carbohidratos (v.gr., destrano, celulosa, oligosacáridos, polisacáridos y similares), polímeros de aminoácidos hidrofílicos (v.gr., polilisina, poliarginina, poliaspartato y similares), óxidos de polialcano (v.gr., óxido de propileno, óxido de polipropileno y similares) y polivinilpirrolidona. Preferiblemente, el polímero hidrofílico que modifica el anticuerpo de la invención tiene un peso molecular de aproximadamente 800 a aproximadamente 150,000 Daltons como una entidad molecular separada.

Por ejemplo, se pueden usar PEG50oo y PEG2o,ooo, en donde el subíndice es el peso molecular promedio del polímero en Daltons. El grupo polimérico hidrofílico puede ser sustituido con uno a aproximadamente seis grupos alquilo, ácido graso o éster de ácido graso. Los polímeros hidrofílicos que son sustituidos con un grupo ácido graso o éster de ácido graso se pueden preparar utilizando métodos adecuados. Por ejemplo, un polímero que comprende un grupo amina puede ser acoplado a un carboxilato del ácido graso o éster de ácido graso, y un carboxilato activado (v.gr., activado con ?,?-carbonil diimidazol) en un ácido graso o éster de ácido graso puede ser acoplado a un grupo hidroxilo en un polímero. Los ácidos grasos o ésteres de ácidos grasos adecuados para modificar anticuerpos de la invención pueden ser saturados o pueden contener una o más unidades de insaturación. Los ácidos grasos que son adecuados para modificar anticuerpos de la invención incluyen, por ejemplo, n-dodecanoato (C12, laurato), n-tetradecanoato (C14, miristato), n-octadecanoato (C18, estearato), n-eicosanoato (C20, araquidato), n-docosanoato (C22, behenato), n-triacontanoato (C30), n-tetracontanoato (C40), cis-A9-octadecanoato (C18, oleato), todos los cis-A5,8,1 1 ,14-eicosatetraenoato (C20, araquidonato), ácido octanodioico, ácido tetradecanodioico, ácido octadecanodioico, ácido docosanodioico y similares. Los ésteres de ácido graso incluyen monoésteres de ácidos dicarboxílicos que comprenden un grupo alquilo inferior lineal o ramificado. El grupo alquilo inferior puede comprender de uno a aproximadamente once, preferiblemente uno a aproximadamente seis átomos de carbono. Los anticuerpos humanos modificados y fragmentos de unión a antígeno se pueden preparar usando métodos adecuados, tales como mediante reacción con uno o más agentes modificadores. Un "agente modificador" como se usa aquí, se refiere a un grupo orgánico adecuado (v.gr., polímero hidrofílico, ácido graso, éster de ácido graso) que comprende un grupo activador. Un "grupo activador" es una porción química o un grupo funcional que, bajo condiciones apropiadas puede reaccionar con un segundo grupo químico formando así un enlace covalente entre el agente modificador y el segundo grupo químico. Por ejemplo, los grupos activadores amina-reactivos incluyen grupos electrofílicos tales como tosilato, mesilato, halógeno (cloro, bromo, flúor, yodo), ésteres N-hidroxisuccinimídicos (NHS) y similares. Los grupos activadores que pueden reaccionar con tioles Incluyen, por ejemplo, maleimida, yodoacetilo, acrilolilo, y disulfuros de piridilo, tiol de ácido 5-tiol-2-nitrobenzoico (TNB-tiol), y similares. Un grupo funcional de aldehido se puede acoplar a moléculas que contienen amina o hidrazida, y un grupo azida puede reaccionar con un grupo de fósforo trivalente para formar enlaces de fosforamidato o fosforimida. Los métodos adecuados para introducir grupos activadores en moléculas se conocen en la técnica (véase por ejemplo, Hermanson, G. T, Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). Un grupo activador se puede unir directamente al grupo orgánico (v.gr., polímero hidrofílico, ácido graso, éster de ácido graso), o a través de una porción enlazadora, por ejemplo un grupo de C1-C12 divalente en donde uno o más átomos de carbono pueden ser reemplazados por un heteroátomo tal como oxígeno, nitrógeno o azufre. Porciones enlazadoras adecuadas Incluyen, por ejemplo, tetraetilenglicol, -(CH2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- y -CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH-NH-. Agentes modificadores que comprenden una porción enlazadora se pueden producir, por ejemplo, haciendo reaccionar una Boc-alquildiamina (v.gr., mono-Boc-etilendiamina, mono-Boc-dlaminohexano) con un ácido graso en presencia de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) para formar un enlace de amida entre la amida libre y el carboxllato de ácido graso. El grupo protector de Boc puede ser removido del producto mediante tratamiento con ácido trifluoroacético (TFA) para exponer una amina primaria que puede ser acoplada a otro carboxilato como se describe, o se puede hacer reaccionar con anhídrido maleico y el producto resultante se puede ciclizar para producir un derivado de maleimido activado del ácido graso. (Véase, por ejemplo, Thompson, et al., WO 92/16221 , cuyas enseñanzas se incorporan aquí por referencia en su totalidad). Los anticuerpos modificados de la invención se pueden producir haciendo reaccionar un anticuerpo humano o fragmento de unión a antígeno con un agente modificador. Por ejemplo, las porciones orgánicas se pueden unir al anticuerpo de una manera no específica de sitio utilizando un agente modificador reactivo a amina, por ejemplo, un éster de NHS de PEG. Los anticuerpos humanos modificados o fragmentos de unión a antígeno también se pueden preparar reduciendo enlaces de disulfuro (v.gr., enlaces de disulfuro de intracadena) de un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno. El anticuerpo o fragmento de unión a antígeno reducido se puede hacer reaccionar con un agente modificador tiol-reactivo para producir el modificado de la invención. Los anticuerpos humanos modificados y fragmentos de unión a antígeno que comprenden una porción orgánica que se une a sitios específicos de un anticuerpo de la presente invención se pueden preparar usando métodos adecuados tales como proteólisis reversible (Fisch et al., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen et al., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran et al., Protein Sci. 6 (10):2233-2241 (1997); Itoh et al., Bioorg. Chem., 24 (1):59-68 (1996); Cápelas et al., Biotechnol. Bioeng., 56(4):456-463 (1997)), y los métodos descritos en Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).

Generación de anticuerpos monoclonales Los anticuerpos monoclonales de esta Invención se pueden producir por inmunización tradicional y tecnología de hibridoma. Después de la inmunización de ratones con composiciones antigénicas de CNGH0010 humanas que comprenden el polipéptido de la invención, células del bazo o linfocitos de tejido del nodo linfático de animales inmunizados se recuperan y se inmortalizan mediante fusión con células de mieloma o por transformación con virus de Epstein-Barr (EB). Se obtienen anticuerpos monoclonales detectando selectivamente clones que expresan el anticuerpo deseado. Aunque frecuentemente se utilizan ratones como modelo de prueba, se contempla que cualquier sujeto mamífero incluyendo sujetos humanos o células productoras de anticuerpo, se pueden manipular de conformidad con el procedimiento de esta invención para servir como la base para la producción de líneas celulares de mamífero, incluyendo humanos e híbridas. Las técnicas para clonar ADN recombinante de molécula de anticuerpo directamente a partir de células B que expresan anticuerpo están dentro del alcance de esta invención. Dichas células B pueden aislarse mediante el distribuidor de células activado por fluorescencia. Aunque rutinariamente se generan anticuerpos monoclonales de ratón, la invención no se limita a esto. Para aplicaciones terapéuticas, se desean anticuerpos humanos o humanizados. Dichos anticuerpos se pueden obtener usando hibridomas humanos o generando anticuerpos humanizados. Los anticuerpos humanizados se pueden desarrollar reemplazando segmentos específicos de un anticuerpo no humano con segmentos correspondientes de un gen de anticuerpo humano. Este proceso retiene la mayoría o todas las regiones CDR de las regiones variables de cadena ligera y pesada de anticuerpo progenitor y reemplaza en gran medida las regiones de marco de trabajo con secuencias humanas [patente EP No. 184187; patente EP No. 171496; patente EP No. 173494 y patente WO No. 86/01533]. Anticuerpos monoclonales humanos también se generan en ratones transgénicos que contienen genes o segmentos de genes que codifican anticuerpos humanos en su genoma [patente de E.U.A. No. 6,162,963; patente WO No. 93/12227; patente de E.U.A. No. 5,877,5397; patente de E.U.A. No. 5,874,299; patente de E.U.A. No. 5,814,318; patente de E.U.A. No. 5,789,650; patente de E.U.A. No. 5,770,429; patente de E.U.A. No. 5,661 ,016; patente de E.U.A. No. 5,625,126; patente de E.U.A. No. 5,569,825; patente de E.U.A. No. 5,545,806; y patente WO No. 91/10741]. Anticuerpos monoclonales humanos también se obtienen a partir de genotecas de anticuerpos recombinantes, generadas in vitro o in vivo, usando despliegue de fagos, despliegue de ribosomas, o técnicas de detección selectiva o selección relacionadas. Ejemplos de procedimientos para generar genotecas de anticuerpo, principalmente de origen humano, se describen en A. Knappik y otros [65] [patente de E.U.A. No. 6,291 ,158; patente de E.U.A. No. 6,291 ,159; patente de E.U.A. No. 6,291 ,160 y patente de E.U.A. No. 6,291 ,161]. Ejemplos de métodos para selecciones de anticuerpos humanos a objetivo de antígeno específicos de dichas genotecas se describen en B. Krebs y otros [66] [patente de E.U.A. No. 5,955, 341 ; patente de E.U.A. No. 5,759,817; patente de E.U.A. No. 5,658,727; patente de E.U.A. No. 6,235,469; patente de E.U.A. No. 5,969,108; patente de E.U.A. No. 5,886,793].

Descripción detallada de métodos para generar anticuerpos anti- CNGH0010 Por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 de la presente invención puede ser opcionalmente producido por una línea celular, una línea celular mixta, una célula inmortalizada o población clonal de células inmortalizadas, como se conoce en la técnica. Véase, v.gr., Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a. Edición, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow y Lañe, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad. Los anticuerpos humanos que son específicos para proteínas CNGH0010 (como se describe aquí), variantes, o fragmentos de las mismas se pueden producir contra un antígeno inmunogénico apropiado como se describe aquí, tal como las proteínas aisladas y/o CNGH0010, variantes, de las mismas (incluyendo molécula sintéticas, tales como polipéptidos sintéticos) como se describe aquí. Otros anticuerpos de mamífero específicos o generales pueden producirse de manera similar. La preparación de antígenos de mamíferos y la producción de anticuerpos monoclonales se puede realizar usando cualquier técnica adecuada. En un enfoque, un hibridoma se produce fusionando una línea de células inmortales adecuada, v.gr., una línea de células de mieloma tal como, pero sin limitarse a Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1 , NS2, AE-1 , L.5, >243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1 , Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1 , JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMAIWA, NEURO 2A, o similares, heteromielomas, productos de fusión de los mismos, cualquier célula o célula de fusión derivada de la misma, o cualquier otra línea adecuada como se conoce en la técnica (véase, v.gr., www.atcc.org, www.lifetech.com., y similares), con células productoras de anticuerpo, tal como, pero sin limitarse a, bazo aislado o clonado, sangre periférica, linfa, amígdalas u otras células que contienen células inmunes o células B, o cualesquiera otras células que expresen secuencias constantes o variables o marco de trabajo o CDR de cadena pesada o ligera, ya sea como ácido nucleico endógeno o heterólogo, como recombinante o endógeno, viral, bacteriano, algal, procariótico, de anfibio, de insecto, de reptil, de pez, de mamífero, de roedor, de equino, de ovino, de cabra, de oveja, de primate, eucariótico, ADN genómico, ADNc, ADNr, ADN o ARN mitocondrial, ADN o ARN de cloroplasto, ARNhn, ARNm, ARNt, de una sola cadena, de doble cadena o triple cadena, hibridado, y similar o cualquier combinación de los mismos. Véase, v.gr., Ausubel, supra, y Colligan, Immunology, supra, capítulo 2, incorporado aquí por referencia en su totalidad. Las células productoras de anticuerpo también se pueden obtener a partir de la sangre periférica o, preferiblemente el bazo o nodos linfáticos, de humanos u otros animales adecuados que han sido inmunizados con un antígeno de interés. Cualesquiera otras células hospedero adecuadas también se pueden usar para expresar ácidos nucleicos heterólogos o endógenos que codifican un anticuerpo, fragmento específico o variante del mismo, de la presente invención. Las células fusionadas (hibridomas) o células recomblnantes se pueden aislar usando condiciones de cultivo selectivas u otros métodos conocidos adecuados, y se pueden clonar por dilución limitada o distribución de células, u otros métodos conocidos. Las células que producen anticuerpos con la especificidad deseada se pueden seleccionar mediante una prueba adecuada (v.gr., ELISA). Se pueden usar otros métodos adecuados de producción o aislamiento de anticuerpos de la especificidad requerida, incluyendo pero sin limitarse a métodos que seleccionan anticuerpos recombinantes a partir de una genoteca de despliegue de polipéptido o proteína (v.gr., pero sin limitarse a una genoteca de despliegue de bacteriófago, ribosoma, oligonucleótido, ARN, ADNc o similares; v.gr., como está disponible de Cambridge antibody Technologies, Cambridgeshire, RU; MorphoSys, Martinsreid/Planegg, DE; Biovation, Aberdeen, Escocia, RU; Biolnvent, Lund, Suecia; Dyax Corp., Enzon, Affymax/Biosite; Xoma, Berkeley, CA; Ixsys. Véase v.gr., EP 368,684, PCT/GB91/01134; PCT/GB92/01755; PCT/GB92/002240; PCT/GB92/00883; PCT/GB93/00605; U.S. 08/350260(5/12/94); PCT/GB94/01422; PCT/GB94/02662; PCT/GB97/01835; (CAT/MRC); WO90/14443; WO90/14424 ; WO90/14430; PCT/US94/ 234; W092/186 9; WO96/07754; (Scripps); W096/ 3583, WO97/08320 (MorphoSys); WO95/16027 (Biolnvent); WO88/06630; WO90/3809 (Dyax); U.S. 4,704,692 (Enzon); PCT/US91/02989 (Affymax); WO89/06283; EP 371 998; EP 550 400; (Xoma); EP 229 046; PCT/US91/07149 (Ixsys); o péptidos o proteínas generadas estocásticamente - U.S. 5723323, 5763192, 5814476, 5817483, 5824514, 5976862, WO 86/05803, EP 590 689 (Ixsys, ahora Applied Molecular Evolution (AME), cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad) o que se basan en inmunización de animales transgénicos (v.gr., ratones SCID, Nguyen et al., Microbiol. Immunol. 41 :901-907 (1997); Sandhu et al., Crit. Rev. Biotechnol. 16:95-118 (1996); Eren et al., Immunol. 93:154-161 (1998), cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad así como patentes y solicitudes relacionadas) que son capaces de reproducir un repertorio de anticuerpos humanos, como se conocen en la técnica y/o como se describe aquí. Dichas técnicas incluyen pero no se limitan a despliegue de ribosoma (Hanes et al., Proa Nati. Acad. Sci. USA, 94:4937-4942 (Mayo 1997); Hanes et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 95:14130-14135 (Nov. 1998)); tecnologías de producción de anticuerpos unicelulares (v.gr., método de anticuerpo de linfocitos seleccionado ("SLAM") (patente de E.U.A. No. 5,627,052, Wen et al., J. Immunol. 17:887-892 (1987); Babcook et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:7843-7848 (1996)); microgota de gel y citometría de flujo (Powell et al., Biotechnol. 8:333-337 (1990); One Cell Systems, Cambridge, MA; Gray et al., J. Imm. Meth. 182: 155-163 (1995); Kenny et al., Bio/Technol. 13:787-790 (1995)); selección de células B (Steenbakkers et al., Molec. Biol. Reports 19:125-134 (1994); Jonak et al., Progress Biotech, Vol. 5, In Vitro Immunization in Hybridoma Technology, Borrebaeck, ed., Elsevier Science Publishers B. V., Amsterdam, Holanda (1988)). Los métodos para manipulación genética o humanización de anticuerpos no humanos o anticuerpos humanos también se pueden usar y son bien conocidos en la técnica. En general, un anticuerpo humanizado o genéticamente manipulado tiene uno o más residuos de aminoácidos de una fuente que es no humana, v.gr., pero sin limitarse a ratón, rata, conejo, primate no humano u otro mamífero. Estos residuos de aminoácidos humanos a menudo se refieren como residuos de "importación", que típicamente se toman de un dominio variable constante u otro dominio de "importación" de una secuencia humana. Las secuencias de Ig humanas se describen, v.gr., en www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; www. atcc . o rq/p haqe/hdb.html; www.sciquest.com/; www.abcam.com/; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html; www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm; www.library.thinkquest.org/12429/lmmune/Antibody.html; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html; www.antibodyresource.com/; mcb.harvard.edu/BioLinks/lmmunology.html.www.immunologylink.com/; pathbox.wustl.edu/~hcenter/index.html; www.biotech.ufl.edu/~hcl/; www.pebio.com/pa/340913/340913.html; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/; www.m.ehime-u. ac.jp/~yasuhito/Elisa. html; www.biodesign.com/table.asp; www.icnet.uk/axp/facs/davies/links.html; www.biotech.ufl.edu/~fccl/protocol.html; www.isac-net.org/sites_geo.html; aximt1.imt.uni-marburg.de/~rek/AEPStart. html; baserv.uci.kun.nl/~jraats/links1.html; www.recab.uni- hd.de/immuno.bme.nwu.edu/; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt- doc/public/INTRO.html; www.ibt.unam.mx/vir V_mice.html; imgt.cn usc.fr: 8104/; www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/index.html; antibody.bath.ac.uk/; abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html; www.unizh.ch/~honegger/AHOseminar/Slide01.html; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s/; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html; www.ibt.unam.mx vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.cryst.bioc.cam.ac.uk/~fmolina Web-pages/Pept/spottech.html; www.jerini.de/fr_products.htm; www.patents.ibm.com/ibm.html. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Dept. Health (1983), cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad. Dichas secuencias importadas se pueden usar para reducir la ¡nmunogenicidad o reducir, incrementar o modificar la unión, afinidad, tasa de asociación, tasa de disociación, avidez, especificidad, vida media, o cualquier otra característica adecuada, como se conocen en la técnica. Generalmente parte o todas las secuencias de CDR no humanas o humanas se mantienen mientras que las secuencias no humanas de las regiones variable y constante son reemplazadas con aminoácidos humanos u otros aminoácidos. Los anticuerpos también pueden ser opcionalmente humanizados con retención de alta afinidad para el antígeno y otras propiedades biológicas favorables. Para lograr esta meta, los anticuerpos humanizados opcionalmente se pueden preparar mediante un procedimiento de análisis de las secuencias progenitoras y varios productos humanizados conceptuales usando modelos tridimensionales de las secuencias progenitoras y humanizadas. Los modelos de inmunoglobulina tridimensionales están comúnmente disponibles y son conocidos por los expertos en la técnica. Los programas de computadora están disponibles los cuales ilustran y despliegan estructuras conformacionales tridimensionales probables de secuencias de inmunoglobulina candidatas seleccionadas. La inspección de estos despliegues permite el análisis del probable papel de los residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, es decir, el análisis de residuos que influye en la capacidad de la inmunoglobulina candidata a unir su antígeno. De esta manera, los residuos de FR se pueden seleccionar y combinar a partir de las secuencias de consenso e importadas de modo que se logra la característica de anticuerpo deseada, tal como afinidad incrementada para el antígeno(s) objetivo(s). En general, los residuos de CDR están directamente y muy sustancialmente involucrados en influenciar la unión de antígeno. La humanización o manipulación genética de anticuerpos de la presente invención se puede realizar usando cualquier método conocido tal como pero sin limitarse a aquellos descritos en Winter (Jones et al, Nature 321 :522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 ( 988); Verhoeyen et al., Science 239: 534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151:2296 (1993); Chothía y Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Cárter et al., Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A. 89: 4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151 :2623 (1993), patentes de E.U.A. Nos: 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323, 5,766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101 , 5585089, 5225539; y 4816567, PCT/: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, y EP 229246, cada una incorporada aquí por referencia en su totalidad, incluidas las referencias que aquí se citan. El anticuerpo anti-CNGH0010 también puede ser opcionalmente generado por inmunización de un animal transgénico (v.gr., ratón, rata, hámster, primate no humano y similar) capaz de producir un repertorio de anticuerpos humanos, como se describe aquí y/o como se conoce en la técnica. Las células que producen un anticuerpo anti-CNGH0010 humano se pueden aislar de dichos animales e inmortalizar usando métodos adecuados tales como los métodos que aquí se describen. Los ratones transgénicos que pueden producir un repertorio de anticuerpos humanos que se unen a antígenos humanos se puede producir por métodos conocidos (v.gr., pero sin limitarse a las patentes de E.U.A. Nos. 5,770,428, 5,569,825, 5,545,806, 5,625,126, 5,625,825, 5,633,425, 5,661 ,016 y 5,789,650 expedidas a Lonberg et al.; Jakobovits et al. WO 98/50433, Jakobovits et al. WO 98/24893, Lonberg et al. WO 98/24884, Lonberg et al. WO 97/13852, Lonberg et al. WO 94/25585, Kucherlapate et al. WO 96/34096, Kucherlapate et al. EP 0463 51 B1 , Kucherlapate et al. EP 0710 719 A1 , Surani et al. patente de E.U.A. No. 5,545, 807, Bruggemann et al. WO 90/04036, Bruggemann et al. EP 0438 474 B1 , Lonberg et al. EP 0814 259 A2, Lonberg et al. GB 2 272 440 A, Lonberg et al. Nature 368:856-859 (1994), Taylor et al., Int. Immunol. 6(4)579-591 (1994), Green et al, Nature Genetics 7:13-21 (1994), Méndez et al., Nature Genetics 15:146-156 (1997), Taylor et al., Nucleic Acids Research 20(23):6287-6295 (1992), Tuaillon et al., Proc Nati Acad Sc¡ USA 90(8)3720-3724 (1993), Lonberg et al., Int Rev Immunol 13(1):65-93 (1995) y Fishwald et al., Nat Biotechnol 14(7):845-851 (1996), que se incorporan cada una aquí en su totalidad por referencia). En general, estos ratones comprenden por lo menos un transgen de ADN de por lo menos un locus de ínmunoglobulina humana que está funcionalmente reordenado, o que puede surgir ordenamiento funcional. Los loci de ínmunoglobulina endógenos en dichos ratones pueden ser perturbados o deletados para eliminar la capacidad del animal para producir anticuerpos codificados por genes endógenos. La detección selectiva de anticuerpos para unión específica a proteínas similares o fragmentos se puede lograr convenientemente usando genotecas de despliegue de péptidos. Este método implica la detección selectiva de grandes recolecciones de péptidos para miembros individuales que tienen la función o estructura deseada. La detección selectiva de anticuerpos de genotecas de despliegue de péptidos es bien conocida en la técnica. Las secuencias de péptido desplegadas pueden ser de 3 a 5,000 o más aminoácidos de longitud, frecuentemente de 5-100 aminoácidos de longitud, y a menudo de aproximadamente 8 a 25 aminoácidos de longitud. Además de dirigir métodos de síntesis química para generar genotecas de péptidos, se han descrito varios métodos de ADN recombinante. Un tipo implica el despliegue de una secuencia de péptidos sobre la superficie de un bacteriófago o célula. Cada bacteriófago o célula contiene la secuencia de nucleótido que codifica la secuencia de péptido desplegada particular. Dichos métodos se describen en las publicaciones de patente del PCT Nos. 91/17271 , 91/18980, 91/19818, y 93/08278. Otros sistemas para generar genotecas de péptidos tienen aspectos tanto de síntesis química in vitro como métodos recombinantes. Véase publicaciones de patente del PCT Nos. 92/05258, 92/14843, y 96/19256. Véase también patente de E.U.A. Nos. 5,658,754 y 5,643,768. Las genotecas de despliegue de péptidos, vectores y equipos de detección selectiva están comercialmente disponibles de probadores tales como Invitrogen (Carlsbad, CA), y Cambridge antibody Technologies (Cambridgeshire, UK). Véase v.gr., patentes de E.U.A. Nos. 4704692, 4939666, 4946778, 5260203, 5455030, 5518889, 5534621 , 5656730, 5763733, 5767260, 5856456, asignadas a Enzon; 5223409, 5403484, 5571698, 5837500, asignadas a Dyax, 5427908, 5580717, asignadas a Affymax; 5885793, asignadas a Cambridge antibody Technologies; 5750373, asignadas a Genentech, 5618920, 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, y 5698417, asignadas a Xoma, Colligan, supra; Ausubel, supra; o Sambrook, supra, cada una de las patentes y publicaciones anteriores se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Los anticuerpos de la presente invención también se pueden preparar en leche administrando por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 que codifica ácido nucleico a animales o mamíferos transgénicos, tales como cabras, vacas, caballos, ovejas y similares, que producen anticuerpos en su leche. Dichos animales se pueden proveer usando métodos conocidos. Véase, v.gr., pero sin limitarse a patentes de E.U.A. Nos. 5,827,690; 5,849,992; 4,873,316; 5,849,992; 5,994,616; 5,565,362; 5,304,489, y similares, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Los anticuerpos de la presente invención se pueden preparar de manera adicional usando por lo menos un ácido nucleico que codifica anticuerpo anti-CNGH0010 para proveer plantas transgénicas y células de plantas cultivadas (v.gr., pero sin limitarse a tabaco y maíz) que producen dichos anticuerpos, porciones especificadas o variantes en las partes de plantas o en células cultivadas a partir de las mismas. Como un ejemplo no limitante, las hojas de tabaco transgénico que expresan proteínas recombinantes se han usado exitosamente para proveer grandes cantidades de proteínas recombinantes, v.gr., usando un promotor inducible. Véase, v.gr., Cramer et al, Curr. Top. Microbol, Immunol. 240:95-118 (1999) y referencias citadas en la misma. También, se ha usado maíz transgénico para expresar proteínas de mamífero a niveles de producción comerciales, con actividades biológicas equivalentes a aquellas producidas en otros sistemas recombinantes o purificados a partir de fuentes naturales. Véase, v.gr., Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) y referencias citadas en el mismo. Los anticuerpos también se han producido en grandes cantidades a partir de semillas de plantas transgénicas que incluyen fragmentos de anticuerpo, tales como anticuerpos de una sola cadena (scFv's), incluyendo semillas de tabaco y tubérculos de papa. Véase, v.gr., Conrad et al., Plant Mol. Biol.38:101-109 (1998) y referencias citadas en la misma. Por lo tanto, los anticuerpos de la presente invención también se pueden producir usando plantas transgénicas, de conformidad con métodos conocidos. Véase también, v.gr., Fischer et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Oct, 1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al., Plant Physio. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soc. Trans. 22:940-944 (1994); y referencias citadas en las mismas. Cada una de las referencias anteriores se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Los anticuerpos de la invención pueden unir CNGH0010 humano con una amplia gama de afinidades (KD). En una modalidad preferida, por lo menos un mAb humano de la presente invención puede unir opcionalmente CNGH0010 humano con alta afinidad. Por ejemplo, un mAb humano puede unir CNGH0010 humano con un KD igual a o menor que aproximadamente 10'7 M, tal como pero sin limitarse a 0.1-9.9 (o cualquier intervalo o valor en el mismo) X 10"7, 10"8, 10"9, 10"10, 10"11, 10"12, 10"13 o cualquier intervalo o valor en el mismo. La afinidad o avidez de un anticuerpo para un antígeno se puede determinar experimentalmente usando cualquier método adecuado. (Véase, por ejemplo, Berzofsky, et al., "Antibody-Antigen Interactions", En Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, NY (1992); y métodos descritos en las mismas). La afinidad medida de una interacción de anticuerpo-antígeno particular puede variar si se mide bajo diferentes condiciones (v.gr., concentración de sal, pH). Por lo tanto, las mediciones de afinidad y otros parámetros de unión a antígeno (v.gr., KD, KA, KD) se hacen preferiblemente con soluciones estandarizadas de anticuerpo y antígeno, y un regulador de pH estandarizado tal como un regulador de pH que aquí se describe.

Purificación de un anticuerpo Un anticuerpo anti-CNGH0010 puede ser recuperado y purificado a partir de cultivos de células recombinantes por métodos bien conocidos incluyendo pero sin limitarse a, purificación de proteína A, precipitación de sulfato de amonio o etanol, extracción con ácido, cromatografía de intercambio de aniones o cationes, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxiapatita y cromatografía de lectina. La cromatografía líquida de alto rendimiento ("CLAR") también se puede usar para purificación. Véase, v.gr., Colligan, Current Protocols in Immunology or Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997- 2001), v.gr., capítulos 1 , 4, 6, 8, 9, 10, cada uno incorporado aquí por referencia en su totalidad. Los anticuerpos de la presente invención incluyen productos purificados, productos de procedimiento desíntesis química, y productos producidos por técnicas recombinantes a partir de un hospedero eucariótico, incluyendo, por ejemplo, levadura, planta superior, insecto y células de mamífero. Dependiendo del hospedero utilizado en el procedimiento de producción recombinante, el anticuerpo de la presente invención puede ser glicosilado o puede ser no glicosilado, siendo preferido el glicosilado. Dichos métodos se describen en muchos manuales de laboratorio estándares, tales como Sambrook, supra, Sections 17.37-17.42; Ausubel, supra, capítulos 10, 12, 13, 16, 18 y 20, Colligan, Protein Science, supra, capítulos 12-14, todos incorporados aquí por referencia en su totalidad.

Clonación y expresión de anticuerpo anti-CNGH0010 en células de mamífero Un vector de expresión de mamífero típico contiene por lo menos un elemento promotor, que es mediador de la iniciador de la transcripción de ARNm, la secuencia codificadora de anticuerpo y señales requeridas para la terminación de transcripción y poliadenilación de la transcripción. Elementos adicionales incluyen incrementadores, secuencias de Kozak y secuencias de intervención flanqueadas por sitios donadores y aceptores para empalme de ARN. La transcripción altamente eficiente se puede lograr con los promotores tempranos y tardíos a partir de SV40, las repeticiones terminales largas (LTRS) de retrovirus, v.gr., GAS-6, HTLVI, HIVI y el promotor temprano del citomegalovirus (CMV). Sin embargo, también se pueden usar elementos celulares (v.gr., el promotor de actina humana). Los vectores de expresión adecuados para usarse en la práctica de la presente invención incluyen, por ejemplo, vectores tales como pIRESI neo, pRetro-Off, pRetro-On, PLXSN, o pLNCX (Clonetech Labs, Palo Alto, CA), pcDNA3.1 (+/-), pcDNA/Zeo (+/-) o pcDNA3.1/Hygro (+/-) (Invitrogen), PSVL y PMSG (Pharmacia, Uppsala, Suecia), pGAS-6cat (ATCC 37152), pSV2dhfr (ATCC 37146) y pBC12MI (ATCC 67109). Las células hospedero de mamífero que se podrían usar incluyen células Hela 293, H9 y Jurkat humanas, células NIH3T3 y C127 de ratón, Cos 1 , Cos 7 y CV 1 , células QC1-3 de codorniz, células L de ratón y células de ovario de hámster chino (CHO). Alternativamente, el gen se puede expresar en líneas de células estables que contienen el gen integrado en un cromosoma. La co-transfección con un marcador seleccionable tal como dhfr, gpt, neomicina o higromicina permite la identificación y aislamiento de las células trasfectadas. El gen transfectado también se puede amplificar para expresar grandes cantidades del anticuerpo codificado. El marcador DHFR (dihidrofolato reductasa) es útil para desarrollar líneas de células que portan varios cientos o incluso varios miles de copias del gen de interés. Otro marcador de selección útil es la enzima glutamina sintasa (GS) (Murphy, et al., Biochem. J. 227:277-279 (1991); Bebbington, et al., Bio/Technology 10:169-175 (1992)). Usando estos marcadores, las células de mamífero se hacen crecer en medio selectivo y las células con la resistencia más alta se seleccionan. Estas líneas de célula contienen el gen(es) amplificado integrado en un cromosoma. Las células de ovario de hámster chino (CHO) y NSO con frecuencia se usan para la producción de anticuerpos. Los vectores de expresión pC1 y pC4 contienen el promotor fuerte (LTR) del virus de sarcoma Rous (Cullen, et al., Molec. Cell. Biol. 5:438-447 (1985)) mas un fragmento del incrementador de CMV (Boshart, et al.., Cell 41:521-530 (1985)). Los sitios de clonación múltiples, v.gr., sitios de digestión con enzima de restricción BamHI, Xbal y Asp718, facilitan la clonación del gen de interés.. Los vectores contienen además del intrón 3', la señal de poliadenilación y terminación del gen de preproinsulina de rata.

Las composiciones de anticuerpo anti-idiotipo a anticuerpo anti- CNGH0010 Además de los anticuerpos anti-CNGH0010 monoclonales o quiméricos, la presente invención también está dirigida a un anticuerpo anti-idiotípico (anti-ld) específico para dichos anticuerpos de la invención. Un anticuerpo anti-ld es un anticuerpo que reconoce determinantes únicos generalmente asociados con la región de unión a antígeno de otro anticuerpo. El anti-ld se puede preparar inmunizando a un animal de la misma especie y tipo genético (v.gr., cepa de ratón) como la fuente del anticuerpo Id con el anticuerpo o una región que contiene CDR del mismo. El animal inmunizado reconocerá y responderá a los determinantes idiotípicos del anticuerpo inmunizante y producirá un anticuerpo anti-ld. El anticuerpo anti-ld también se puede usar como un "inmunógeno" para inducir una respuesta inmune en otro animal produciendo un denominado anticuerpo anti-anti-ld.

Composiciones de polipéptido o anticuerpo CNGH0010 La presente invención también provee composiciones de polipéptido CNGH0010 o anticuerpo CNGH0010 que comprenden por lo menos un polipéptido CNGH0010 o anticuerpos de CNGH0010 como se describe aquí que se proveen en una composición que no ocurren naturalmente, mezcla o forma. Dichas composiciones comprenden composiciones que no ocuren naturalmente que contienen por lo menos una o dos variantes, dominios, fragmentos o variantes especificadas C- y/o N-terminalmente deletadas de longitud completa de la secuencia de aminoácidos del polipéptido CNGH0010 seleccionada del grupo que consiste de 80-100% de los aminoácidos contiguos de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11, o anticuerpo CNGH0010 o fragmentos especificados, dominios o variantes del mismo, opcionalmente en combinación con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los compuestos, composiciones o combinaciones de polipéptidos CNGH0010 o anticuerpos de la presente invención puede comprender por lo menos uno de cualquier auxiliar adecuado, tal como pero sin limitarse a diluyente, enlazador, estabilizador, regulador de pH, sales, solventes lipofíllcos, conservadores, adyuvantes o similares. Se prefieren auxiliares farmacéuticamente aceptables. Ejemplos no limitantes y métodos para preparar dichas soluciones estériles son bien conocidos en la técnica tales como, pero sin limitarse a Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 8a. Edición, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Los vehículos farmacéuticamente aceptable se pueden seleccionar rutinariamente de manera que sean adecuados para el modo de administración, solubilidad y/o estabilidad del anticuerpo anti-CNGH00 0, fragmento o composición variante como se conoce en la técnica como se describe aquí. Los excipientes farmacéuticos y aditivos útiles en la presente composición incluyen, pero no se limitan a proteínas, polipéptidos, aminoácidos, lípidos y carbohidratos (v.gr., azúcares, incluyendo monosacáridos, di-, tri-, tetra-, y oligosacáridos; azúcares derivados tales como alditoles, ácidos aldónicos, azúcares esterificados y similares; y polisacáridos o po iimeros de azúcar), que pueden estar presentes de manera individual o en combinación, que comprenden solo o en combinación 1-99.99% en peso o volumen. Excipientes de proteína ilustrativos incluyen albúmina de suero tal como albúmina de suero humano (HSA), albúmina humana recombinante (rHA), gelatina, caseína y similares. Componentes de aminoácido/anticuerpo representativos, que también funcionan en una capacidad reguladora de pH, incluyenalanina, glicina, arginina, betaína, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartame y similares. Un aminoácido preferido es glicina. Excipientes de carbohidratos adecuados para usarse en la invención incluyen, por ejemplo, monosacáridos, tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa y similares; disacáridos, tales como lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa y similares; polisacáridos tales como rafinosa, melecitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones y similares; y alditoles tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol-sorbitol (glucitol), mioinositol y similares. Excipientes de carbohidrato preferidos para usarse en la presente invención son manitol, trehalosa y rafinosa. Composiciones de polipéptido o anticuerpo anti-CNGH0010 también pueden incluir un regulador de pH o agente ajustador de pH; típicamente, el regulador de pH es una sal preparada a partir de un ácido o una base orgánica. Reguladores de pH representativos incluyen sales de ácido orgánico, tales como sales de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucónico, ácido carbónico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético, o ácido itálico; Tris, clorhidrato de trometamina o regulador de pH de fosfato. Los reguladores de pH preferidos para usarse en la presente invención son sales de ácido orgánico tales como citrato. Además, las composiciones de anticuerpo anti-CNGH0010 de la invención pueden incluir excipientes/aditivos poliméricos tales como polivinilpirrolidonas, ficoles (un azúcar polimérico), dextratos (v.gr., ciclodextrinas, tales como 2-hidroxipropil- -ciclodextrina), polietilenglicoles, agentes savorizantes, agentes antimicrobianos, edulcorantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, agentes tensioactivos (v.gr., polisorbatos tales como "TWEEN 20" y "TWEEN 80"), lípidos (v.gr., fosfolípidos, ácidos grasos), esteroides (v.gr., colesterol), y agentes quelatadores (v.gr., EDTA). Estos y excipientes y/o aditivos farmacéuticos conocidos adicionales adecuados para usarse en composiciones de anticuerpo anti- CNGH0010, porción o variante de conformidad con la invención se conocen en la técnica, v.gr., como se lista en "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19a. Ed., Williams & Williams, (1995), y en the "Physician's Desk Reference", 52a. Ed., Medical Economice, Montvale, NJ (1998), cuya descripción se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Materiales de vehículo o excipiente preferidos son carbohidratos (v.gr., sacáridos y alditoles) y reguladores de pH (v.gr., citrato) o agentes poliméricos. Las composiciones de anticuerpo anti-CNGH0010 de la presente invención pueden comprender además por lo menos una de cualquier cantidad adecuada y efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprende por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 que hace contacto con o se administra a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita dicha modulación, tratamiento o terapia, opcionalmente, que comprende además por lo menos uno seleccionado de por lo menos un antagonista de FNT (v.gr., pero no se limita a un anticuerpo o fragmento de FNT, un receptor o fragmento de FNT soluble, proteínas de fusión del mismo, o un un antagonista de molécula de FNT pequeña), un antireumático (v.gr., metotrexato, auranofinaurotioglucosa, azatioprina, etanercept, tiomalato de sodio-oro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, suifasalcina), un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esteroldeo (NSAID), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local,, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano (v.gr., aminoglicósido, un antinicótico, un antiparasitario, un antiviral, un carbapenem, cefalosporina, una fluoroquinolona, un macrólido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otros antimicrobianos), un antipsoriático, un corticosteroide, un esteroide anabólico, un agente relacionado con diabetes, un mineral, un nutricional, un agente tiroideo, una vitamina, una hormona relacionada con calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemético, una antiúlcera, un laxtante, un anticoagulaníe, una eriíropoyetina (v.gr., epoyeíina alfa), un filgrastim (v.gr., G-CSF, Neupogen), un un sargramostim (GM-CSF, Leukine), una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (v.gr., basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un fármaco de reemplazo de hormona, un modulador de receptor de estrógeno, un midriático, un cicloplégico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitótico, un radiofarmacéutico, un antidepresivo, un agente antimaníaco, un antipsicótico, un ansiolítico, un hipnótico, un simpáticometico, un estimulante, donepezil, tacrina, un medicamento para asma, un beta-agonista, un esteroide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, un metilxantina, una cromolina, una epinefrina o análogo, domase alfa (Pulmozyme), una citocina o un antagonista de citocina. Ejemplos no limitantes de dichas citocinas incluyen pero no se limitan a cualquiera de las iníerleucinas de IL-1 a IL-29. Las dosis adecuadas son bien conocidas en la técnica. Véase, v.gr., Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a. Edición, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascón Pocket Pharmacopoeia 2000, edición de lujo, Tarascón Publishing, Loma Linda, CA (2000), cada una de dichas referencias se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Dichos anticancerosos o antiinfecciosos también pueden incluir moléculas de toxina que están asociadas, unidas, co-formuladas o coadministradas con por lo menos un anticuerpo de la presente invención. La toxina puede actuar opcionalmente para matar selectivamente la célula o tejido patológico. La célula patológica puede ser una célula cancerosa u otra célula. Dichas toxinas pueden ser, pero no se limitan a toxina o fragmento de toxina purificado o recombinante que comprende por lo menos un dominio citotóxico de toxina, v.gr., seleccionado de por lo menos de ricina, toxina de difteria, una toxina de veneno o una toxina bacteriana. El término toxina también incluye endotoxinas y exotoxinas producidas por bacterias o virus que ocurren naturalmente, mutantes o recombinantes que pueden causar alguna condición patológica en humanos y otros mamíferos, incluyendo choque por toxina, que puede dar por resultado la muerte. Dichas toxinas pueden incluir, pero no se limitan a endotoxina lábil al calor de E. coli enterotoxigénica (LT), enterotoxina estable al calor (ST). Citotoxina de Shigella, enterotoxina de Aeromonas, toxina-1de síndrome de choque tóxico (TSST-1), enterotoxina stafilocósica A (SEA), B (SEB), o C (SEC), enterotoxinas streptocósicas y similares. Dichas bacterias incluyen pero no se limitan a cepas de una especie de E. coli (ETEC), enterotoxigénica, E. coli (enterohemorrágica (v.gr., cepas de esterotipo 0157:H7), especies de estafilococus (v.gr., Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), especies de Shigella (v.gr., Shigella dysenteríae, Shigella flexneri, Shigella boydii, y Shigella sonnei), especies de Salmonella (v.gr., Salmonella typhi, Salmonella cholera-suis, CNGH0010), especies de Clostridium (v.gr., Clostridium perfringens, Clostridium dificile, Clostrídium botulinum), especies de Camphlobacter (v.gr., Camphlobacter jejuni, Camphlobacter fetus) especies de Heliobacter, (v.gr., Heliobacter pylori), especies de Aeromonas, (v.gr., Aeromonas sobria, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, Pleisomonas shigelloides, Yersina enterocolitlca, especies de Vibrios (v.gr., Vibrios cholerae, Vibrios parahemolyticus), especies de Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa, y Streptococci. Véase, v.gr., Stein, ed., INTERNAL MEDICINE, 3a. ed., pp 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al., eds., Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control, 2a. Ed., pp 239-254, Plenum Medical Book Co., New York (1991); Mandell et al, Principies and Practice of Infectious Diseases, 3a. Ed., Churchill Livingstone, New York (1990); Berkow et al, eds., The Merck Manual, 16a. edición, Merck and Co., Rahway, N. J., 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology, 76:121-134 (1991); Marrack et al, Science, 248:705-711 (1990), los contenidos de dichas referencias se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

Aplicaciones La presente invención provee un método para modular o tratar por lo menos una enfermedad relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano, animal, o paciente como se conoce en la técnica o como se describe aquí, usando por lo menos un polipéptido CNGH0010 o un anticuerpo CNGH0010 de la presente invención. Composiciones de polipéptidos de unión CNGH0010 o anticuerpo CNGH0010 o antagonistas de polipéptido pueden encontrar uso terapéutico en el tratamiento de condiciones de enfermedad tales como cáncer u otras enfermedades humanas con producción de matriz desregulada y remodelado, incluyendo fibrosis pulmonar, cirrosis hepática, osteoporosis, artritis reumatoide y asma. Indicaciones de enfermedad potenciales también pueden incluir enfermedades con defectos en mecánicas celulares, estructura de tejido o desregulación de conversión mecanoquímica causada por alteración patológica de matriz (Ingber D., Mechanolbiology y enfermedades de mecanotransducción, Annals of Medicine, en prensa). La presente invención también provee un método para modular o tratar por lo menos una enfermedad inmuno-relacionada, en una célula, tejido, órgano, animal o paciente incluyendo pero sin limitarse a por lo menos una de artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis reumatoide juvenil de inicio sistémico, artritis psoriática, espondilitis anquilosante, úlcera gástrica, artropatías seronegativas, osteoartritis, enfermedad intestinal inflamatoria, colitis ulcerativa, lupus eritematoso sistémico, síndrome de antifosfolípido, iridociclitis/uveitis/neuritis óptica, fibrosis pulmonar idiopática, vasculitis sistémica/granulomatosis de wegener, sarcoidosis, ortitis/procedimientos reversibles de vasectomía, enfermedades alérgicas/atópicas, asma, rinitis alérgica, eczema, dermatitis por contacto alérgico, conjuntivitis alérgica, neumonitis por hipersensibilidad, trasplantes, rechazo de trasplante de órgano, enfermedad de injerto-versus-hospedero, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, síndrome de sepsia, sepsia por gram positivos, sepsia por gram negativos, sepsia de cultivo negativo, sepsia por hongos, fiebre neutropénica, urosepsia, meningococcemia, trauma/hemorragia, quemaduras, exposición a radiación ionizante, pancreatitis aguda, síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos, artritis reumatoide, hepatitis inducida por alcohol, patologías inflamatorias crónicas, sarcoidosis, patología de Crohn, anemia de células falsiformes, diabetes, nefrosis, enfermedades atópicas, reacciones de hipersensibilidad, rinitis alérgica, fiebre del heno, rinitis perene, conjuntivitis, endometriosis, asma, urticaria, anafalaxis sistémica, dermatitis, anemia perniciosa, enfermedad hemolítica, trombocitopenia, rechazo de injerto de cualquier órgano o tejido, rechazo de trasplante de riñon, rechazo de trasplante de corazón, rechazo de trasplante de hígado, rechazo de trasplante de páncreas, rechazo de trasplante de pulmón, rechazo de trasplante de médula ósea (BMT, rechazo de aloinjerto de la piel, rechazo de trasplante de cartílago, rechazo de injerto de hueso, rechazo de trasplante de intestino delgado, rechazo de implante de timo fetal, rechazo de trasplante de paratiroides, rechazo de xenoinjerto de cualquier órgano o tejido, rechazo de aloinjerto, reacciones de hipersensibilidad anti-receptor, enfermedad de Graves, enfermedad de Raynoud, diabetes resistente a insulina de tipo B, asma, miastenia grave, citotoxicidad mediada por anticuerpo, reacciones de hipersensibilidad de tipo III, lupus eritomatoso sistémico, síndrome de POEMS (polineuropatía, organomegaiia, endocrinopatía, gamopatía monoclonal y síndrome de cambios en la piel), polineuropatía, organomegaiia, endocrinopatía, gamopatía monoclonal, síndromes de cambios de la piel, síndrome de antifosfolípidos, pemfigo, escleroderma, enfermedad de tejido conectivo mixta, enfermedad de Addison idiopática, diabetes melitus, hepatitis activa crónica, cirrosis biliar primaria, vitíligo, vasculitis, síndrome de cardiotomía post- I, hipersensibilidad de tipo IV, dermatitis por contacto, neumonitis por hipersensibilidad, rechazo de aloinjerto, granulomas debido a organismos intracelulares, sensibilidad a fármacos, metabólica/idiopática, enfermedad de Wilson, hemacromatosis, deficiencia de alfa-1 -antitripsina, retinopatía diabética, tiroiditis de Hashimoto, osteoporosis, evaluación de eje hipotalámico-pituitaria-subadrenal, cirrosis biliar primaria, tiroiditis, encefalomielitis, caquexia, fibrosis quística, enfermedad pulmonar crónica neonatal, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), linfohistiocitosis hematofagocítica familiar, condiciones dermatológicas, psoriasis, alopecia, síndrome nefrótico, nefritis, nefritis glomerular, insuficiencia renal aguda, hemodiálisis, uremia, toxicidad, preclamsia, terapia de okt3, terapia anti-cd3, terapia de citocina, quimioterapia, terapia de radiación (v.gr., incluyendo pero sin limitarse a toastenia, anemia, caquexia y similares), intoxicación por salicilato crónica y similar. Véase, v.gr., the Merck Manual, 12a-17a ediciones, Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., segunda edición, Appleton and Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000), cada una incorpora por referencia en su totalidad. La presente invención también provee un método para modular o tratar por lo menos una enfermedad maligna en una célula, tejido, órgano, animal o paciente, incluyendo pero sin limitarse a por lo menos uno de: leucemia, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), células B, células T o FAB ALL, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mielocítica crónica (CML), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia de células pilosas, síndrome mielodipláico (MDS), un linfoma, enfermedad de Hodgkin, un linfoma maligno, un linfoma no Hodgkin, linfoma de Burkitt, mieloma múltiple, sarcoma de Kaposi, carcinoma colorectal, carcinoma pancriático, carcinoma nasofaríngeo, histiocitosis maligna, síndrome paraneoplásico/hipercalcemia de malignidad, tumores sólidos, adenocarcinomas, sarcomas, melanoma maligno, hemangioma, enfermedad metastásico, reabsorción de hueso relacionada con cáncer, dolor relacionado con huesos relacionado con cáncer y similares. Cualquier método de la presente invención puede comprender administrar una cantidad efectiva de una composición o composición farmacéutica que comprende por lo menos un anticuerpo anti-CNGH00 0 a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita de dicha modulación, tratamiento o terapia. Dicho método puede comprender además opcionalmente la co-administración o terapia de combinación para tratar dichas enfermedades inmunes, en donde la administración del polipéptido CNGH0010 o anticuerpo CNGH0010, porción especificada o variante del mismo, comprende además administrar, antes, concurentemente, y/o después, por lo menos uno seleccionado de por lo menos un antagonista de FNT (v.gr., pero sin limitarse a un anticuerpo o fragmento de FNT), un antirreumático (v.gr., metotrexato, aurotioglucosa, azatioprina, etanercept, tiomalato de sodio-oro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local,, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano (v.gr., aminoglicósido, un antinicótico, un antiparasitario, un antiviral, un carbapenem, cefalosporina, una fluoroquinolona, un macrólido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otros antimicrobianos), un antipsoriático, un corticosteroide, un esteroide anabólico, un agente relacionado con diabetes, un mineral, un nutricional, un agente tiroideo, una vitamina, una hormona relacionada con calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemético, una antiúlcera, un laxtante, un anticoagulante, una eritropoyetina (v.gr., epoyetina alfa), un filgrastim (v.gr., G-CSF, Neupogen), un un sargramostim (GM-CSF, Leukine), una inmunización, una ¡nmunoglobulina, un inmunosupresor (v.gr., basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona de crecimiento, un fármaco de reemplazo de hormona, un modulador de receptor de estrógeno, un midriático, un cicloplégico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitótico, un radiofarmacéutico, un antidepresivo, un agente antimaníaco, un antipsicótico, un ansiolítico, un hipnótico, un simpáticometico, un estimulante, donepezil, tacrina, un medicamento para asma, un beta-agonista, un esferoide inhalado, un inhibidor de leucotrieno, un metilxantina, una cromolina, una epinefrina o análogo, domase alfa (Pulmozyme), una citocina o un antagonista de citocina. Ejemplos no limitantes de dichas citocinas incluyen pero no se limitan a cualquiera de las interleucinas de IL-1 a IL-29. Las dosis adecuadas son bien conocidas en la técnica. Véase, v.gr., Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a. edición, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascón Pocket Pharmacopoeia 2000, edición de lujo, Tarascón Publishing, Loma Linda, CA (2000), cada una de dichas referencias se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Típicamente, el tratamiento de condiciones patológicas se efectúa mediante la administración de una cantidad efectiva o dosis de por lo menos una composición de anticuerpo anti-CNGH0010 que tiene, en promedio, un intervalo de por lo menos aproximadamente 0.01 a 500 miligramos de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 por kilogramo de paciente por dosis, y preferiblemente de por lo menos aproximadamente 0.1 a 100 miligramos de anticuerpo/kilogramo de paciente por administración individual o múltiple, dependiendo de la actividad específica contenida en la composición. Alternativamente, la concentración en el suero efectiva puede comprender 0.1-5000 µg/ \ de concentración en el suero por administración individual o múltiple. Las dosis adecuadas son conocidas para quienes ejercen medicina y desde luego dependerá del estado de enfermedad particular, actividad específica de la composición que es administrada y el paciente particular al que se aplica el tratamiento. En algunos casos, para lograr la cantidad terapéutica deseada, puede ser necesario proveer administración repetida, es decir, administración individual repetida de una dosis monitoreada o dosificada particular, en donde las administraciones individuales se repiten hasta que se logra la dosis diaria deseada o efecto deseado. Las dosis preferidas opcionalmente pueden incluir 0.1 , 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 , 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 y/o 100-500 mg/kg/administración, o cualquier intervalo, valor o fracción de la misma, o para lograr una concentración en el suero de 0.1 , 0.5, 0.9, 1.0, 1.1 , 1.2, 1 .5, 1.9, 2.0, 2.5, 2.9, 3.0, 3.5, 3.9, 4.0, 4.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11 , 1 1.5, 1 1.9, 20, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14.0, 14.5, 4.9, 5.0, 5.5, 5.9, 6.0, 6.5, 6.9, 7.0, 7.5, 7.9, 8.0, 8.5, 8.9, 9.0, 9.5, 9.9, 10, 10.5, 10.9, 11 , 1 1.5, 1 1 .9, 12, 12.5, 12.9, 13.0, 13.5, 13.9, 14, 14.5, 15, 15.5, 15.9, 16, 16.5, 16.9, 17, 17.5, 17.9, 18, 18.5, 18.9, 19, 19.5, 19.9, 20, 20.5, 20.9, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, y/o 5000 µ9??? de concentración en el suero por administración individual o múltiple, o cualquier intervalo, valor o fracción de la misma. Alternativamente, la dosis administrada puede variar dependiendo de factores conocidos, tales como las características farmacodinámicas del agente particular y su modo y vía de administración; edad, salud y peso del receptor; naturaleza y grado de síntomas, tipo de tratamiento concurrente, frecuencia del tratamiento y efecto deseado. En general, una dosis de ingrediente activo puede ser de aproximadamente 0.1 a 100 miligramos por kilogramo de peso corporal. Ordinariamente 0.1 a 50, y preferiblemente 0.1 a 10 miligramos por kilogramo por administración o en forma de liberación sostenida es efectivo para obtener resultados deseados. Como un ejemplo no limitante, el tratamiento de humanos o animales se puede proveer como una dosis de una vez o periódica de por lo menos un anticuerpo de la presente invención 0.1 a 00 mg/kg, tal como 0.5, 0.9, 1.0, 1.1 , 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 ó 100 mg/kg, por día, en por lo menos una vez al día 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, ó 40, o alternativamente o adicionalmente, por lo menos una de la semana 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 , ó 52, o alternativamente o adicionalmente, por lo menos uno de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 años, o cualquier combinación de los mismos, usando dosis individual, de infusión o repetidas. Las formas de dosis (composición) adecuadas para administración interna generalmente contienen de aproximadamente 0.1 miligramo a aproximadamente 500 miligramos de ingrediente activo por unidad o contenedor. En estas composiciones farmacéuticas, el ingrediente activo ordinariamente estará presente en una cantidad de aproximadamente 0.5-99.999% en peso con base en el peso total de la composición. Para administración parenteral, el anticuerpo se puede formular como una solución, suspensión, emulsión, partícula, polvo o polvo liofilizado en asociación, o se puede proveer por separado, con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de dichos vehículos son agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa, y 1-10% de albúmina de suero humano. Liposomas y vehículos no acuosos, tales como aceites fijados, se pueden usar. El vehículo o polvo liofilizado pueden contener aditivos que mantengan la isotonicidad (v.gr., cloruro de sodio, manitol) y estabilidad química (v.gr., reguladores de pH y conservadores). La formulación se esteriliza mediante técnicas conocidas o adecuadas. Vehículos farmacéuticos adecuados se describen en la edición más reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, un texto de referencia estándar en este campo.

Formulaciones Como se indicó anteriormente, la invención provee formulaciones estables, que preferiblemente contienen un regulador de pH de fosfato con solución salina o una sal escogida, así como soluciones y formulaciones conservadas que contienen un conservador así como formulaciones conservadas de multiuso adecuadas para uso farmacéutico o veterinario, que comprende por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 en una formulación farmacéuticamente aceptable. Las formulaciones conservadas contienen por lo menos un conservador conocido o se pueden seleccionar opcionalmente del grupo que consiste de por lo menos un fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorcresol, alcohol bencílico, nitrito fenilmercúrico, fenoxietanol, formaldehído, clorobutanol, cloruro de magnesio (v.gr., hexahidrato), alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benziconio, cloruro de benzetonio, deshidracetato sódico y timerosal, o mezclas de los mismos en un diluyente acuoso. Cualquier concentración o mezcla se pueden usar como se conoce en la técnica, tal como 0.001-5% o cualquier intervalo o valor en el mismo, tal como pero sin limitarse a 0.001 , 0.003, 0.005, 0.009, 0.01 , 0.02, 0.03, 0.05, 0.09, 0.1 , 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1 , 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1 , 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1 , 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.3, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, o cualquier intervalo o valor en el mismo. Ejemplos no limitantes incluyen, sin conservador, 0.1-2% de m-cresol (v.gr., 0.2, 0..3. 0.4, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.1-3% alcohol bencílico (v.gr., 0.5, 0.9, 1.1., 1.5, 1.9, 2.0, 2.5%), 0.001-0.5% de timerosal (v.gr., 0.005, 0.01), 0.001-2% de fenol (v.gr., 0.05, 0.25, 0.28, 0.5, 0.9, 1.0%), 0.0005-1.0% de alquilparaben(os) (v.gr., 0.00075, 0.0009, 0.001, 0.002, 0.005, 0.0075, 0.009, 0.01 , 0.02, 0.05, 0.075, 0.09, 0.1 , 0.2, 0.3, 0.5, 0.75, 0.9, 1.0%) y similares. Como se indicó anteriormente, la invención provee un artículo de fabricación, que provee un material de empaque y por lo menos un frasco que comprende una solución de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 con los reguladores de pH prescritos yo conservadores, opcionalmente; en un diluyente acuoso, en donde el material de empaque comprende una etiqueta que indica que dicha solución puede ser mantenida durante un período de 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 horas o mayor. La invención además comprende un artículo de fabricación, que comprende material de empaque, un primer frasco que comprende liofilizado por lo menos un anticuerpo anti-CNGH00 0 y un segundo frasco que comprende un diluyente acuoso de de regulador de pH prescrito o conservador, en donde el material de empaque comprende una etiqueta que instruye a un paciente para reconstituir por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 en el diluyente acuoso para formar una solución que puede ser mantenida durante un período de veinticuatro horas o mayor. Por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 usado de conformidad con la presente invención se puede producir por medios recombinantes, incluyendo a partir de preparaciones de células de mamífero o transgénicas, o se puede purificar a partir de otras fuentes biológicas, como se describe aquí o como se conoce en la técnica. El intervalo de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 en el producto de la presente invención incluye cantidades que producen bajo reconstitución, si están en un sistema húmedo/seco, concentraciones de aproximadamente 1.0 g/ml a aproximadamente 1000 mg/ml, aunque concentraciones mayores o menores son operables y dependen del vehículo de suministro pretendido, v.gr., las formulaciones en solución diferirán de los métodos de parche transdérmico, pulmonar, transmucosa u osmótico o de microbomba. Preferiblemente, el diluyente acuoso opcionalmente comprende además un conservador farmacéuticamente aceptable. Los conservadores preferidos incluyen aquellos seleccionados del grupo que consiste de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, deshidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos. La concentración de conservador usado en la formulación es una concentración suficiente para producir un efecto antimicrobiano. Dichas concentraciones dependen del conservador seleccionado y son fácilmente determinadas por el experto en la técnica. Otros excipientes, v.gr., agentes de isotonicidad, reguladores de H, antioxidantes, incrementadores de conservador, pueden añadirse opcionalmente y preferiblemente al diluyente. Un agente de isotonicidad, tal como glicerina, comúnmente se usa a concentraciones conocidas. Un regulador de pH fisiológicamente tolerado preferiblemente se añade para proveer control de pH mejorado. Las formulaciones pueden cubrir una amplia gama de pHs, tales como de aproximadamente pH 4 a aproximadamente pH 10, e intervalos preferidos de aproximadamente pH 5 a aproximadamente pH 9, y un intervalo más preferido de aproximadamente 6.0 a aproximadamente 8.0. Preferiblemente, las formulaciones de la presente invención tienen pH entre aproximadamente 6.8 y aproximadamente 7.8. Los reguladores de pH preferidos incluyen reguladores de pH de fosfato, muy preferiblemente fosfato de sodio, particularmente solución salina regulada en su pH con fosfato (PBS). Otros aditivos, tales como solubilizadores farmacéuticamente aceptables como Tween 20 (monolaurato de polioxietilen (20) sorbitan), Tween 40 (monopalmitato de polioxietilen (20) sorbitan), Tween 80 (monooleato de polioxietilen (20) sorbitan), Pluronic F68 (copolímero de bloque de polioxietilen-polioxipropileno), y PEG (polietilenglicol) o agentes tensioactivos no iónicos, tales como polioles de polysorbate 20 ó 80 o poloxamer 184 o 188, Pluronic®, otros copolímeros de bloque y quelatadores tales como EDTA y EGTA se pueden añadir opcionalmente a las formulaciones o composiciones para reducir agregación. Estos aditivos son particularmente útiles si una bomba o contenedor plástico se usa para administrar la formulación. La presencia de agente tensioactivo farmacéuticamente aceptable mitiga el grado de propensión para la proteína o agregado. Las formulaciones de la presente invención se pueden preparar por un procedimiento que comprende mezclar por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 y un conservador seleccionado del grupo que consiste de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de benzetonio, deshidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos en un diluyente acuoso. El mezclado de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH00 0 y conservador en un diluyente acuoso se lleva a cabo usando procedimientos de disolución y mezclado convencionales. Para preparar una formulación adecuada, por ejemplo, una cantidad medida de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 en una solución regulada en su pH se combina con el conservador deseado en una solución regulada en su pH en cantidades suficientes para proveer la proteína y conservador a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento serán reconocidas por un experto en la técnica. Por ejemplo, el orden de los componentes se añade, ya sea que se usen aditivos adicionales, a temperatura de pH a la cual la formulación se prepara, son todos factores que se pueden optimizar para la concentración y medios de administración usados. Las formulaciones reclamadas se pueden proveer a pacientes como soluciones claras o como frascos dobles que comprenden un frasco de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 liofilizado que es reconstituido con un segundo frasco que contiene agua, un conservador y/o excipientes, preferiblemente, un regulador de pH y/o solución salina y una sal escogida, en un diluyente acuoso. Ya sea un frasco de solución individual o frasco doble que requiere reconstitución se puede reutilizar múltiples veces y puede ser suficiente para un solo ciclo o ciclos múltiples de tratamiento del paciente y por lo tanto puede proveer un régimen de tratamiento más conveniente que el actualmente disponible. Los presentes artículos reclamados de fabricación son útiles para la administración durante un periodo de inmediatamente hasta 24 horas o más. Por consiguiente, los artículos actualmente reclamados de fabricación ofrecen ventajas significativas al paciente. Las formulaciones de la invención puede ser opcionalmente almacenadas en forma segura a temperaturas de aproximadamente 2 a aproximadamente 40°C y retener la actividad biológica de la proteína durante periodos prolongados, por lo tanto, permitiendo que una etiqueta del empaque que indica que la solución puede estar contenida y/o usada durante un periodo de 6, 2, 18, 24, 36, 48, 72 ó 96 horas o mayor. Si el diluyente conservado se usa, dicha etiqueta puede incluir el uso de hasta 1-12 meses, medio año, un año y medio y/o dos años. Las soluciones de por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 en la invención se pueden preparar mediante un procedimiento que comprende mezclar por lo menos un anticuerpo en un diluyente acuoso. El mezclado se lleva a cabo usando procedimientos de disolución y mezclado convencionales. Para preparar un diluyente adecuado, por ejemplo, una cantidad medida de por lo menos un anticuerpo en agua o regulador de pH se combina en cantidades suficientes para proveer la proteína y opcionalmente un conservador o regulador de pH a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento serán reconocidas por un experto en la técnica. Por ejemplo, el orden en que los componentes se añaden, ya sea que se usen aditivos adicionales, la temperatura y pH a la cual se prepara la formulación, son todos factores que pueden ser optimizados para la concentración y medios de administración usados. Los productos reclamados se pueden proveer a pacientes como soluciones claras o como frascos dobles que comprenden un frasco de anticuerpo anti-CNGH0010 liofilizado (por lo menos uno) que es reconstituido con un segundo frasco que contiene el diluyente acuoso. Ya sea un frasco con solución individual o un frasco doble que requiere reconstitución puede ser reutilizado múltiples veces y puede ser suficiente para un solo ciclo o ciclos múltiples de tratamiento de paciente y por lo tanto proveer un régimen de tratamiento más conveniente que el que está actualmente disponible. Los productos reclamados se pueden proveer indirectamente a pacientes para proveer a farmacias, clínicas y otras instituciones e instalaciones, soluciones claras o frascos dobles que comprenden un frasco de anticuerpo anti-CNGH0010 liofilizado (por lo menos uno) que es reconstituido con un segundo frasco que contiene el diluyente acuoso. La solución clara en este caso puede ser hasta de un litro o incluso de mayor tamaño, proveyendo un depósito grande del cual pueden recuperarse porciones pequeñas de por lo menos una solución de anticuerpo una o múltiples veces para transferirse a frascos más pequeños y ser provistos por la farmacia o clínica a sus clientes y/o pacientes. Dispositivos reconocidos que comprenden estos sistemas de un solo frasco incluyen aquellos dispositivos de inyector de pluma para suministrar una solución tales como BD Pens, BD Autojector®, Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen®, y OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, Humatro Pen®, Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, Iject®, J-tip Needle-Free Injector®, Intraject®, Medi-Ject®, v.gr., hechas o desarrolladas por Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Suiza, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oregon (www.bioject.com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, UK, www.weston-medical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www.mediiect.com). Dispositivos reconocidos que comprenden un sistema de frasco doble incluyen aquellos sistemas de inyector de pluma para reconstituir un fármaco liofilizado en un cartucho para suministrar la solución reconstituida tales como HumatroPen®. Los productos actualmente reclamados incluyen materiales de empaque. El material de empaque provee, además de la información requerida por las agencias reguladoras, las condiciones bajo las cuales se puede usar el producto. El material de empaque de la presente invención provee instrucciones al paciente para reconstituir el anticuerpo anti- CNGH0010 (por lo menos uno) en el diluyente acuoso para formar una solución y para usar la solución durante un periodo de 2-24 horas o mayor para un producto de dos frascos húmedo/seco. Para el producto de solución de un solo frasco, la etiqueta indica que dicha solución se puede usar durante un periodo de 2-24 horas o más. Los productos actualmente reclamados son útiles para uso del producto farmacéutico humano. Las formulaciones de la presente invención se pueden preparar mediante un procedimiento que comprende mezclar por lo menos un anticuerpo anti-CNGH0010 y un regulador de pH seleccionado, preferiblemente un regulador de pH de fosfato que contiene solución salina o una sal escogida. El mezclado del anticuerpo anti-CNGH0010 (por lo menos uno) y regulador de pH en un diluyente acuoso se lleva a cabo usando procedimiento de disolución y mezclado convencionales. Para preparar una formulación adecuada, por ejemplo, una cantidad medida de por lo menos un anticuerpo en agua o regulador de pH se combina con el agente regulador de pH deseado en agua en cantidades suficientes para proveer la proteína y regulador de pH a las concentraciones deseadas. Variaciones de este procedimiento serán reconocidas por un experto en la técnica. Por ejemplo, el orden en que los componentes se añaden, ya sea que se usen aditivos adicionales, la temperatura y pH a la cual se prepara la formulación, son todos factores que pueden ser optimizados para la concentración y medios de administración usados.

Las formulaciones estables o conservadas reclamadas pueden proveerse a pacientes como soluciones claras o como frascos dobles que comprenden un frasco de anticuerpo anti-CNGH0010 liofilizado (por lo menos uno) que es reconstituido con un segundo frasco que contiene un conservador o regulador de pH o excipientes en un diluyente acuoso. Ya sea un frasco con solución individual o un frasco doble que requiere reconstitución puede ser reutilizado múltiples veces y puede ser suficiente para un solo ciclo o ciclos múltiples de tratamiento de paciente y por lo tanto proveer un régimen de tratamiento más conveniente que el que está actualmente disponible. Otras formulaciones o métodos de estabilización del anticuerpo anti-CNGH0010 pueden dar por resultado otra solución que no sea clara de polvo liofilizado que comprende el anticuerpo. Entre soluciones no claras están formulaciones que comprenden suspensiones en partículas,, las partículas siendo una composición que contiene el anticuerpo anti-CNGH0010 en una estructura de dimensión variable y conocida variablemente como una microesfera, micropartícula, nanopartícula, nanoesfera o liposoma. Dichas formulaciones en partículas esencialmente esféricas, relativamente homogéneas que contienen un agente activo se pueden formar por contacto de una fase acuosa que contiene el activo y un polímero y una fase no acuosa seguida por evaporación de la fase no acuosa para causar la coalescencia de partículas de la fase acuosa como se enseña den la patente de E.U.A. 4,589,330. Las micropartículas porosas se pueden preparar usando una primera fase que contiene activo y un polímero disperso en un solvente continuo y remover el solvente de la suspensión mediante congelamiento- secado o dilución-extracción-precipitación como se enseña en la patente de E.U.A. 4,818,542. Los polímeros preferidos para dichas preparaciones son copolímeros naturales o sintéticos o polímero seleccionado de los grupos que cosnisten de gelatina, agar, almidón, arabinogalactano, albúmina, colágeno, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicólido-L(-)láctido poli(épsilon-caprolactona, poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido láctico), poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido glicólico), poli( -hidroxi ácido butírico), óxido de polietileno, polietileno, poli(2-cianoacrilato de alquilo), poli(metacrilato de hidroxietilo), poliamidas, poli(aminoácidos), poli(2-hidroxietil DL-aspartam¡da), polí(éster-urea), poli(L-fenilalanina/etilenglicol/1 ,6-diisocianatohexano) y poli(metacrilato de metilo). Los polímeros particularmente preferidos son poliésteres, tales como ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicóIido-L-(-)láctido poli(épsilon-caprolactona, poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido láctico) y poli (épsilon-caprolactona-CO-ácido glicólico). Los solventes útiles para disolver el polímero y/o activo incluyen: agua, hexafluoroisopropanol, cloruro de metileno, tetrahidrofurano, hexano, benceno, o sesquihidrato de hexafluoroacetona. El procedimiento de dispersar la fase que contiene activo con una segunda fase puede incluir presión que fuerza la primera fase a través de un orificio en una boquilla para efectuar formación de gotas. Las formulaciones de polvo seco pueden resultar de procedimientos distintos a la liofilización, tales como secado por aspersión o extracción con solvente mediante evaporación o por precipitación de una composición cristalina seguida por uno o más pasos para remover solvente acuoso o no acuoso. La preparación de una preparación de anticuerpo secada por aspersión se enseña en la patente de E.U.A. No. 6,019,968. Las composiciones de polvo seco basadas en anticuerpo se pueden producir mediante secado por aspersión de soluciones o suspensiones del anticuerpo y opcionalmente excipientes en un solvente bao condiciones para proveer un polvo seco respirable. Los solventes pueden incluir compuestos polares tales como agua y etanol, que pueden ser fácilmente secados. La estabilidad del anticuerpo se puede incrementar realizando los procedimientos de secado por aspersión en ausencia de oxígeno, tal como bajo un manto de nitrógeno o usando nitrógeno como el gas de secado. Otra formulación relativamente seca es una dispersión de una pluralidad de microestructuras perforadas dispersas en un medio de suspensión que típicamente comprende un propelente de hidrofluoroalcano como se enseña en el documento WO 99/16419. Las dispersiones estabilizadas se pueden administrar al pulmón de un paciente usando un inhalador de dosis medida. El equipo útil en la fabricación comercial de medicamentos secados por aspersión son fabricados por Buchi Ltd. o Niro Corp. Por lo menos un anticuerpo anti-CNGH00 0 ya sea en formulaciones o soluciones estables o conservadas que aquí se describe, se puede administrar a un paciente de conformidad con la presente invención a través de una variedad de métodos de suministro incluyendo inyección SC o IM; administración transdérmica, pulmonar, transmucosa, implante, bomba osmótica, cartucho, microbomba u otros medios apreciados por los expertos en la técnica, como se conoce bien en la técnica.

EJEMPLOS DE LA INVENCION Habiéndose descrito en general la invención, la misma será fácilmente entendida con referencia a los siguientes ejemplos, que se proveen a manera de ilustración y no pretenden ser limitantes. Estará claro que la invención se puede poner en práctica de otra manera a como se describe particularmente en la descripción anterior y los ejemplos. Numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención son posibles a la luz de las enseñanzas anteriores y por lo tanto están dentro del alcance de las reivindicaciones anexas.

EJEMPLO 1 Datos de secuencia de CNGH0010 La secuencia de nucleótido genómico CNGH0010 (SEQ ID NO:1) comprende 6356 pb. Con base en el modelado con varios algoritmos de predicción de genes tales como GeneScan, Fgenesh (http://genome.ucsc.edu/) y el programa Acembly (http://www.acedb.org/Cornell/acemblv/), se predice que CNGH0010 comprende 25 exones (figura 1 , cuadro 1). Los exones 1 , 7 y 18 contienen cada uno un codón de inicio y son hacia el extremo 3' del promotor, incrementador y otros motivos reguladores; estos exones se pueden utilizar como exones de inicio. Los exones 15 y 23 contienen un codón de interrupción y se pueden utilizar como exones de terminación. Cinco categorías de transcripciones alternativamente empalmadas han sido identificadas y se ilustran en CNGH0010.1 , CNGH0010.2, CNGH0010.3, CNGH0010.4, y CNGH0010.5 (SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, respectivamente, cuadro 2).

CUADRO 1 Composición y descripción del exón de CNGH0010 No. de posición posición de No. de Cuadro Nota Exón de inicio interrupción pb 1 101 526 426 Dentro 1er exón de inicio; constante para 10.1 y 10.2 2 786 986 201 Dentro Constante para 10.1 y 10.2 3 1099 1155 57 Dentro Constante para 10.1 y 10.2 4 1763 1813 51 Dentro Constante para 10.1 y 10.2 5 1983 2165 183 Dentro Constante para 10.1 y 10.2 5a 1983 2076 85 Fuera Exon izquierdo 5b 2117 2165 91 Fuera Exon derecho 6 2936 2980 45 Dentro Exon raro 7 3149 3205 57 Dentro 2o. exón de inicio; constante para 10.3 y 10.4 El cuadro 2 muestra las diversas transcripciones y exones de CNGH0010 contenidos dentro de cada transcripción. Los exones mostrados en negritas son constantes en cada transcripción, mientras que los otros exones listados para cada transcripción son alternativamente empalmados y opcionalmente parte de varias transcripciones. Como se muestra en el cuadro 2, las secuencias de nucleótido y aminoácidos para cada transcripción varían dependiendo de la combinación exacta de los exones presentes.

CUADRO 2 Descripción de transcripciones de CNGH0010 CNGH0010.1 es cualquier transcripción que inicia con el exón 1 y termina en el exón 25, excluyendo los exones 7, 15 y 18. Puede tener tan pocos como 15 exones (es decir, exones 1-5, 8, 13, 14, 16, 17, 19, 21-23, y 25) o tantos como 22 exones (es decir, exones 1-6, 8-14, 16, 17, y 19-25). Los exones 6, 9-12, 20, y 24 pueden ser diferencialmente empalmados, ya sea individualmente o en cualquier combinación. Por lo tanto, la transcripciones CNGH0010.1 varían de 1809 a 2132 pb. Codifican péptidos que varían de 459 a 555 aminoácidos, dependiendo de la composición del exón.

CNGH0010.2 es cualquier transcripción que inicia con el exón 1 y termina en el exón 15, excluyendo los exones 6 y 7. Puede tener tan pocos como 9 exones (es decir, los exones 1-5, 8, e 3-15) o tantos como 3 exones (es decir, exones 1-5 y 8-15). Los exones 9-12 pueden ser diferencialmente empalmados, ya sea individualmente o en cualquier combinación. Por lo tanto, las transcripciones CNGH0010.2 varían de 1533 a 1734 pb, que codifican péptidos que varían de 373 a 440 aminoácidos, dependiendo de la composición del exón. CNGH0010.3 es cualquier transcripción que inicia con el exón 7 y termina en el exón 25, excluyendo los exones 15 y 18. Puede tener tan pocos como 1 exones (es decir, los exones 7, 8, 13, 14, 16, 17, 19, 21-23 y 25) o tantos como 17 exones (es decir, los exones 7-14, 16, 17, y 19-25). Los exones 9-12, 20 y 24 pueden ser diferencialmente empalmados, ya sea individualmente o en cualquier combinación. Por lo tanto, las transcripciones CNGH0010.3 varían de 881 a 1159 pb, que codifican péptidos que varían de 172 a 253 aminoácidos, dependiendo de la composición del exón. CNGH0010.4 es cualquier transcripción que inicia con el exón 7 y termina en el exón 15. Puede tener tan pocos como 5 exones (es decir, los exones 7, 8, y 13-15) o tantos como 9 exones (es decir, los exones 7-15). Los exones 9-12 pueden ser diferencialmente empalmados, ya sea individualmente o en cualquier combinación. Por lo tanto, las transcripciones CNGH00 0.4 varían de 445 a 646 pb, que codifican péptidos que varían de 82 a 149 aminoácidos, dependiendo de la composición del exón.

CNGH0010.5 es cualquier transcripción que inicia con el exón 18 y termina en el exón 25, excluyendo los exones 20 y 24. Tiene 6 exones, es decir, los exones 18, 19, 21-23, y 25. La transcripción CNGH0010.5 contiene 600 pb que codifican un péptido de 88 aminoácidos. Además de estas 5 categorías, una transcripción que contiene los exones 5a, 5b, 7a, ó 8a tendrá empalme fuera del marco en el sitio en donde estos exones están en las transcripciones correspondientes; esto puede dar por resultado proteínas truncadas en el sitio del exón o hacia el extremo 3' del exón. Con frecuencia, las proteínas truncadas usan un codón de ATG de iniciación alternativo en el exón 13, en la posición de nucleótido 7611. La secuencia de aminoácidos de CNGH0010.1 de SEQ ID NO: 3 tiene 94% de identidad sobre 449 residuos para acceso a GenBank No. AY358412 (Publicación de patente No. WO/200061623); la secuencia de aminoácidos de CNGH0010.2 de SEQ ID NO:5 tiene 100% de identidad sobre 440 residuos para Dgen No. AAF54238 (Publicación de patente No. WO/200078961); la secuencia de aminoácidos de CNGH0010.3 de SEQ ID NO:7 tiene 99% de identidad sobre 127 residuos para Dgen No. AAH23810 (Publicación de patente. No. WO/200 32888); la secuencia de aminoácidos de CNGH0010.4 de SEQ ID NO:9 tiene 98% de identidad sobre 93 residuos para Dgen No. ADE28278 (Publicación de patente. No. WO/2003046152); y la secuencia de aminoácidos de CNGH0010.5 de SEQ ID NO:11 tiene 85% de identidad sobre 102 residuos para Dgen No. AAF97894 (Publicación de patente. No WO/200121658).

EJEMPLO 2 Transcripciones de CNGH0010 5' y 3'-RACE (Análisis rápido de extremos de ADNc) se realizó sobre ARN total de células A431 y tejido de piel masculina humana de adulto normal de conformidad con el protocolo del fabricante (número de catálogo L1502-01 , Invitrogen, Corp., Carlsbad, CA). En breve, 5 µg de ARN total se desfosforiló con fosfatasa alcalina de intestino de ternera para remover grupos fosfo de ARNm no truncado o ARNm truncado. El ARN se trató después con pirofosfatasa ácida de tabaco para remover la estructura de bloque 5' de ARNm maduro. Un oligonucleótido de ARN de secuencia conocida se ligó después a los extremos 5' de ARNm maduro, y después se usó como una plantilla para transcripción inversa con enzima de Superíndice RT, iniciada con un iniciador oligo dT que también contenía una secuencia conocida única. RT se llevó a cabo a 42°C durante 1.5 horas. Los ADNc resultantes contenían secuencias comunes en sus extremos 5' y extremos 3', y se pudieron usar con oligonucleótidos alojados específicos para el gen CNGH0010 (SEQ ID NOS: 12-21 , cuadro 3) para amplificar todo o parte del ADNc a través de PCR.

CUADRO 3 Iniciadores de RACE SEQ ID NOS: 12 ó 13 en exón 1 con SEQ ID NOS: 18 ó 19 en exón 25 (3'UTR-2) se usaron para amplificar transcripciones de CNGH0010.1. SEQ ID NOS: 12 ó 13 con SEQ ID NOS: 20 ó 21 en exón 15 se usaron para amplificar transcripciones de CNGH0010.2. SEQ ID NOS: 14 ó 15 en exón 7 con SEQ ID NOS: 18 ó 19 en exón 25 se usaron para amplificar transcripciones de CNGH0010.3. SEQ ID NOS: 14 ó 15 en exón 7 con SEQ ID NOS: 20 ó 21 en exón 15 se usaron para amplificar transcripciones de CNGH0010.4. SEQ ID NOS: 16 ó 17 en exón 18 con SEQ ID NOS: 18 ó 19 en exón 25 se usaron para amplificar transcripciones de CNGH0010.5. Los datos de RT-PCR, como se muestra en la figura 2, demostraron que las transcripciones de CNGH0010.1 (SEQ ID NO:2), 10.2 (SEQ ID NO:4) están al nivel más alto, seguido por 10.5 (SEQ ID NO:10) al nivel más bajo, 10.4 (SEQ ID NO:8) a un nivel significativamente menor, y 10.3 (SEQ ID NO:6) al nivel más bajo de todas las trancripciones. Como se muestra en el cuadro 4 más adelante, cinco conjuntos de iniciadores y sonda hacia adelante/reversa se diseñaron para identificar las cinco variantes de empalme dominantes por aplicación de PCR de tiempo real. Para cada variante de empalme, los iniciadores hacia adelante y de reversa y la sonda Taqman se muestran. El ARN total extraído de células A431 y HCT116 tratadas con varias concentraciones de FNT , LPS, y IL-12 se transcribieron en reversa en una plantilla de ADNc, que después se amplificó por PCR de tiempo real usando esos cinco conjuntos de iniciadores/sondas. CNGH0010.2 y CNGH0010.5 se regularon ascendentemente por varias concentraciones de FNTa, LPS, y IL- 2.

CUADRO 4 iniciadores y sondas hacia adelante/reversa de PCR en tiempo real para variantes de empalme EJEMPLO 3 Dominios de proteína CNGH0010 predichos Los polipéptidos CNGH0010.1 y CNGH0010.2 pueden contener hasta 555 y 440 aminoácidos, respectivamente (SEQ ID NOS:3 y 5, respectivamente). Los primeros 21 aminoácidos codifican un péptido de señal, seguido por cinco dominios mayores (fig. 3). El primer dominio, que incluye el péptido de señal, es codificado por el exón 1, y no tiene homología significativa a cualesquiera proteínas o dominios de proteína conocidos. Este dominio se predice que forma por lo menos 6 subdominios de estructura secundaria alfa-helicoidal basada en el programa NNPredict. El segundo dominio, codificado por el exón 2, posee 19 repeticiones de glicina-X-Y que se sabe que forman estructuras enrollada-enrollada, como se ve en moléculas de colágena y similares a la colágena. Este dominio es seguido después por un dominio rico en serina-glicina diferencialmente empalmado (hasta 42% de serina, 37% de glicina), codificado por los exones 4-8. El empalme diferencial parece alterar el tamaño y cantidad de residuos de serina-glicina. Un dominio de separador diferencialmente empalmado es codificado por los exones 9-17. Los exones que codifican la región son muy pequeños, que varían en tamaño de 36 a 60 nucleótidos. Se predice que esta región tiene estructura mínima, si acaso secundaria usando el programa NNpredict. El empalme diferencial que ocurre en esta región parece regular la distancia entre el dominio rico en serina-glicina y el dominio C-terminal. CNGH0010.1 (SEQ ID NO: 3) termina en otro dominio codificado por los exones 19-23 que no tienen homología a ninguna proteína conocida. Este dominio se predice que tiene por lo menos 2 regiones de alfa-hélice predicha. El polipéptido CNGH0010.2 (SEQ ID NO:5) posee todos los dominios incluidos en el polipéptido 10.1 (SEQ ID NO: 3), excepto por el dominio C-terminal codificado por los exones 19-23. El polipéptido CNGH0010.3 (SEQ ID NO:7) puede contener hasta 253 aminoácidos y contiene parte del dominio rico en serina-glicina diferencialmente empalmado, el dominio de separador diferencialmente empalmado, y el dominio C-terminal. El polipéptido CNGH0010.4 (SEQ ID NO:9) puede contener hasta 149 e incluye parte del dominio rico en serina-glicina diferencialmente empalmado y el dominio de separador diferencialmente empalmado. Finalmente, el polipéptido CNGH0010.5 (SEQ ID NO:11) tiene 88 aminoácidos y contiene esencialmente el dominio C-terminal, precedido por un péptido de señal codificado por el exón 18. Los dominios de CNGH0010 permiten el ensamble de un homo (todo CNGH0010.1 (SEQ ID NO: 3)) o todo CNGH0010.2 (SEQ ID NO:5)) o hetero (mezcla de CNGH0010.1 (SEQ ID NO: 3) y CNGH0010.2 (SEQ ID NO:5))-trímeros, tales como colágenos o adiponectina, a través de la región enrollada-enrollada similar al colágeno. La presencia de residuos de prolina en alguna de las posiciones X-Y de la repetición Gly-X-Y se piensa que estabiliza estos trímeros, por mecanismos desconocidos y por lo tanto provee evidencia adicional de que la molécula podría formar estructuras similares al colágeno. La caracterización bioquímica preliminar del polipéptido CNGH00 0.2 (SEQ ID NO:5) expresado recombinantemente indica que esta molécula de hecho forma oligómeros. El análisis de SDS-PAGE (como se muestra en la fi 4) indica que las moléculas con pesos moleculares de 2, 3 y 4 veces la de la cadena individual existen tanto en muestras no reducidas como en muestras reducidas, indicando que algunos de los oligómeros están covalentemente unidos. Este resultado ha sido confirmado por espectometría de masa de SELDI y CLAR de filtración de gel. Como se ve en moléculas de colágeno, el entrelazamiento covalente entre cadenas de trímero se pueden ver por modificación de post-traducción de residuos de lisina presentes en el polípéptido. Esta modificación da por resultado dímero, trímero y multímeros covalentes (fibrillas) del polípéptido. Las moléculas de CNGH0010.5 (SEQ ID NO:11) son esencialmente el dominio C-term¡nal y pueden tener actividad funcional única.

EJEMPLO 4 Secreción de polipéptidos CNGH0010 Los polipéptidos CNGH0010.1 y 10.2 contienen la misma secuencia de señal predicha (aminoácidos 1-21 en SEQ ID NOS: 3 y 5). La se del polipéptido CNGH00 0.5 predicha tiene una secuencia de señal diferente (aminoácidos 1-24 en SEQ ID NO: 1). La expresión transitoria in vitro de una proteína de fusión CNGH0010.2 etiquetada con His, así como un mimeticuerpo de CNGH0010.5 (cuyos detalles se describen en el ejemplo 6), confirmaron que las secuencias de señal de hecho dirigen estos polipéptidos para secreción extracelular. Por lo tanto, los polipéptidos CNGH0010.1 (SEQ ID NO: 3), 10.2 (SEQ ID NO:5), y 10.5 (SEQ ID NO:11) probablemente son secretados en el espacio extracelular en donde pueden ejercer sus efectos. CNGH0010.3 y CNGH0010.4 (SEQ ID NOS: 7 y 9) no contienen una secuencia de señal.

EJEMPLO 5 Niveles de transcripción de CNGHQ010 relativos en tejidos de enfermedad seleccionados Iniciadores y sondas de CNGH0010, iniciadores: CNGH0010ss1 - GGC GGA GGA AAT GGA CAT AA (SEQ ID NO:23), CNGH00010as1 -GCT TGG ATT TAA AAT TCT TCC AGA AA (SEQ ID NO:24), sonda de TaqMan MGB: CNGH00010p1 -6FAM - GCT TTT CAC ACC CGG GT -MGBNFQ (SEQ ID NO:22) se diseñaron usando software Primer Express y se sintetizaron mediante el Applied Biosystem (Foster City, CA). Los ARN totales se aislaron de diferentes tejidos, se transcribieron en forma inversa y se amplificaron por PCR usando estos iniciadores/sondas. Los niveles de transcripción relativos de CNGH00 0 se muestran en el cuadro 5.

CUADRO 5 Distribución de CNGH0010 en diferentes tejidos de enfermedad humanos Tejidos Enfermedad Nivel de transcripción relativo* Cerebro Normal 1.00 Pulmón Enfisema 4.58 Pulmón Infección respiratoria 0.19 Amígdalas Amigdalitis 1.63 Tiroides Enfermedad de Grave 8.35 Tiroides Tiroiditis linfocítica 3.90 Páncreas Diabetes 9.45 Páncreas Pancreatitis 0.86 Hígado Cirrosis 0.45 Colon Colitis 24 Colon UC 0.22 Sinovio osteoartritis/DJD 0.14 Cartílago osteoartritis/DJD 1.32 Ovario Endometriosis 2.18 Vejiga Cistitis 0.19 Linfoma Enfermedad de Hodgkin 0.06 Sarcoma 0.21 * El nivel de CNGH0010 en cada tejido se compara con el nivel en tejido de cerebro normal que actúa como el control (nivel de transcripción de 1.00). Cuando se compara con tejido de calibración, ARN de cerebro humano normal, un incremento en el nivel de ARNm de CNGH0010 se detectó en tejido de pulmón enfisematoso, tejido de tiroides de paciente con enfermedad de Grave o tiroiditis inflamatoria, amígdalas inflamadas de pacientes con endometriosis, páncreas diabético y cartílago osteoartrítico.

EJEMPLO 6 Expresión de proteína La expresión de proteína CNGH0010.2 (SEQ ID NO:5) se realizó clonando la mayor parte de transcripción de CNGH0010.2 que contenía los exones 1-5, 8, 9,12 y parte del marco interno 13 de una etiqueta hexa-His en un vector de expresión impulsado por un promotor de CMV. Esta construcción fue transfectada en células HEK293 y purificada con etiqueta de His. La secuencia N-terminal del material expresado y purificado confirmó la identidad de la proteína purificada y demostró digestión con péptido de señal. El análisis de SDS-PAGE de la proteína expresada y purificada indicó que la molécula forma oligómeros (figura 4), lo que se confirmó por MS-SELDI no reductor (desabsorción/ionización con láser incrementada en la superficie) y CLAR de filtración de gel. Estos datos indican que las transcripciones de CNGH00 0.2 y CNGH00 0.1, puesto que contienen la misma secuencia de señal codificada por el exón 1 , tienen la capacidad de ser secretados extracelularmente. Además, SDS-PAGE, SELDI-MS, y CLAR de filtración de gel indican que la molécula tiene la capacidad para formar oligómeros. CNGH0010.5 (SEQ ID NO:11) se podría expresar sólo en células HEK293; sin embargo, fue manipulado genéticamente como un mimeticuerpo. La mayor parte de la región codificadora de CNGH0010.5 que contenía los aminoácidos 1 a 86 se manipuló genéticamente en un plásmido de expresión que contenía el segmento de IgH J2 humano fusionado al gozne de lgG1 humano, CH2 y CH3. El plásmido contenía un promotor de CMV para la transcripción de genes recombinantes y utilizó secuencia de señal endógena de CNGH0010.5 que codifica los aminoácidos 1-24. Esta construcción fue transitoriamente transfectada con células HEK293, y las moléculas secretadas resultantes fueron purificadas por esferas de afinidad de proteína A. El análisis de SDS-PAGE confirmó que una proteína de peso molecular predicho que contenía la secuencia de aminoácidos madura de CNGH0010.5, seguido por el gozne J2, CH2 y CH3 de la lgG1 humana se había expresado. Los niveles de expresión de las proteínas CNGH0010.2 (SEQ ID N0:5) y CNGH0010.5 (SEQ ID N0:1 1) en células A431 y HCT116 se midieron en respuesta a estimulación por FNT-a y LPS. La estimulación por FNT-a y LPS causó un incremento en la expresión de CNGH0010.2 (SEQ ID NO:5) y CNGH0010.5 (SEQ ID NO: 11). De manera similar, la expresión de CNGH0010.2 (SEQ ID NO:5) y CNGH0010.5 (SEQ ID NO:1 1) se incrementó en presencia de IL-12. Además, los niveles de IL-6, IL-8, y GMCSF se incrementaron por tratamiento con FNT-a en células A431 y se redujeron en presencia de un anticuerpo anti-FNT-a quimérico. IL-6 es una citosina inflamatoria importante, el incremento de esta citosina acompañado por el incremento de CNGH0010.2 y 10.5 con tratamiento con FNT-a indica un posible mecanismo de respuestas de CNGH0010 e inflamatorias. IL-8 es una citosina que juega un papel crítico en la inflamación. Recluta linfocitos y leucocitos para el sitio inflamatorio y estimula la producción de otras citosinas. GMCSF es un estimulador para macrófagos/monocitos así como otros linfocitos, que también juegan papeles en las respuestas inflamatorias. Esta evidencia sugiere que CNGH0010 puede jugar un papel en la regulación inflamatoria, por lo tanto podría ser un buen objetivo para el desarrollo terapéutico. Aunque se ilustró y se describió anteriormente con referencia a ciertas modalidades específicas, la presente invención sin embargo no pretende limitarse a los detalles mostrados. Más bien, la presente invención está dirigida a los polipéptidos, polinucleótidos, anticuerpos, aparatos y equipos de CNGH0010 aquí descritos y usos de los mismos, y se pueden hacer varias modificaciones en los detalles dentro del alcance y gama de equivalentes de las reivindicaciones y sin apartarse del espíritu de ia invención.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 2. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 1 1. 3. - Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica una variante alélica que ocurre en forma natural de un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11. 4. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 90% de identidad a cualquiera de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 5. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 70% de identidad a cualquiera de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, o un complemento exacto de dicha secuencia de nucieótidos. 6. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucieótidos de por lo menos 45 residuos de nucieótidos que tiene por lo menos 90% de identidad a una porción de cualquiera de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, y 10, o un complemento exacto de dicha secuencia de nucieótidos. 7. - Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un fragmento de un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11, en donde el fragmento tiene una secuencia de aminoácidos que comprende por lo menos 15 residuos de aminoácidos consecutivos de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 1 1. 8. - La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la secuencia de nucieótidos comprende adicionalmente una porción que codifica un polipéptido heterólogo. 9. - La molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizada además porque comprende adicionalmente residuos de ácido nucleico de vector. 10. - Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 9. 11. - Una célula hospedera que contiene la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 9. 12. - La célula hospedera de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizada además porque la célula hospedera es de origen de mamífero, bacteriano, de levadura o de insecto. 13. - Un equipo que comprende (i) un compuesto que híbrida con una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos con por lo menos 95% de identidad a cualquiera de SEQ ID NOS: 1 , 2, 4, 6, 8, y 10 en 6xSSC a aproximadamente 45°C seguido por lavado en 0.2xSSC, 0.1 % de SDS a aproximadamente 65°C, y (ii) instrucciones para uso. 14. - Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 1 1. 15. - Un polipéptido aislado que comprende una variante alélica que ocurre en forma natural de un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11. 16. - Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 90% de identidad a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 11. 17. - Un polipéptido aislado que comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, y 1 1. 18. - Un polipéptido de fusión que comprende el polipéptido de la reivindicación 14 operablemente enlazado a un polipéptido heterologo. 19. - El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el polipéptido heterologo es un miembro de la familia de proteína de inmunoglobulina o un fragmento de dicho miembro. 20. - El polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14-19, caracterizado además porque dicho polipéptido tiene por lo menos una actividad de un polipéptido CNGH0010. 21. - Un anticuerpo que comprende un anticuerpo monoclonal o policlonal, proteína de fusión o fragmento del mismo, que se une específicamente a un polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14-19. 22. - Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el anticuerpo de la reivindicación 21. 23. - Un método para producir por lo menos un anticuerpo de CNGH0010, que comprende traducir la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 22, bajo condiciones ¡n vitro, in vivo o in situ, en donde el anticuerpo de CNGH0010 se expresa en cantidades detectables o recuperables. 24. - Un anticuerpo producido por el método de la reivindicación 23. 25. - Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 22. 26. - Una célula hospedera que comprende la molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 22, en donde la célula hospedera es procariótica o eucariótica. 27. - La célula hospedera de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque la célula hospedera es una o más seleccionadas de células COS- , COS-7, HEK293, BHK21 , CHO, BSC-1 , Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, mieloma y linfoma, o cualquier célula derivada, inmortalizada o transformada de las mismas. 28. - Un método para producir por lo menos un polipéptido CNGH0010, que comprende traducir la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 , bajo condiciones in vitro, in vivo o in situ, en donde el polipéptido CNGH0010 se expresa en cantidades detectables o recuperables. 29. - Un polipéptido producido por el método de la reivindicación 28. 30. - Un método para generar anticuerpos para un polipéptido, que comprende inmunizar o detectar selectivamente anticuerpos recombinantes con un polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14-19. 31. - Una composición que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 , el polipéptido de la reivindicación 14, o un anticuerpo para el polipéptido. 32. - Una composición que comprende un agonista o antagonista de uno o más de la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 , el polipéptido de la reivindicación 14, y un anticuerpo para el polipéptido. 33 - La composición de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada además porque dicha composición comprende adicionalmente un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 34 - La composición de conformidad con la reivindicación 32, administrada en combinación con una composición que comprende uno o más compuestos, composiciones o polipéptidos seleccionados del grupo que consiste de un marcador detectable o reportero, un antagonista de FNT, un fármaco anti-infeccioso, un fármaco del sistema cardiovascular (CV), un fármaco del sistema nervioso central (SNC), un fármaco del sistema nervioso autónomo (SNA), un fármaco del tracto respiratorio, un fármaco del tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un complemento nutricional, una citocina y un antagonista de citocina. 35. - La composición de conformidad con la reivindicación 32, en forma de uno o más seleccionados del grupo que consiste de una solución líquida o gaseosa, mezcla, suspensión, emulsión o coloide, una preparación liofilizada, y un polvo. 36. - Un método para el diagnóstico de una condición relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano, que comprende poner en contacto una composición que comprende medios para la detección de una o más de la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 , el polipéptido de la reivindicación 14, y un anticuerpo para el polipéptido, en dicha célula, tejido, órgano. 37. - El uso de una o más de la composición de la reivindicación 31, o un agonista o antagonista para la composición, para preparar un medicamento para el tratamiento de una condición relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano o animal. 38. - El uso que se reclama en la reivindicación 37, en donde dicha cantidad efectiva es de aproximadamente 0.001-50 mg del anticuerpo; aproximadamente 0.000001-500 mg del polipéptido; o aproximadamente 0.0001-100 µg de la molécula de ácido nucleico por kilogramo de dichas células, tejido, órgano o animal. 39. - El uso que se reclama en la reivindicación 37, en donde dicho medicamento es administrable por uno o más modos seleccionados del grupo que consiste de parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginosa, intracavital, intracelial, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólica, intracervical, intragástrica, intrahepática, ¡ntramiocárdica, ¡ntraosteal, ¡ntrapélvica, intrapericardiaca, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, ¡ntratorácica, intrauterina, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal y transdérmica. 40. - El uso que se reclama en la reivindicación 39, en donde por lo menos una composición que comprende una cantidad efectiva de uno o más compuestos o polipéptidos seleccionados de! grupo que consiste de un marcador detectable o reportero, un antagonista de FNT, un fármaco antiinfeccioso, un fármaco del sistema cardiovascular (CV), un fármaco del sistema nervioso central (SNC), un fármaco del sistema nervioso autónomo (SNA), un fármaco del tracto respiratorio, un fármaco del tracto gastrointestinal (Gl), un fármaco hormonal, un fármaco para equilibrio de fluidos o electrólitos, un fármaco hematológico, un antineoplásico, un fármaco de inmunomodulación, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un complemento nutricional, una citocina y un antagonista de citocina es administrable antes, concurrentemente o después del medicamento. 41. - El uso de uno o más moduladores de los niveles de molécula de ácido nucleico de CNGH0010 o polipéptido CNGH0010 o un modulador de actividad de CNGH0010, para preparar un medicamento para el tratamiento de una condición relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano o animal. 42. - El uso de la composición de la reivindicación 31 o un agonista o antagonista para la composición, para preparar un medicamento para el tratamiento de una condición relacionada con el epitelio en una célula, tejido, órgano o animal. 43.- El uso de por lo menos un modulador de los niveles de molécula de ácido nucleico de CNGH0010 o polipéptido CNGH0010 o un modulador de actividad de CNGH0010, para preparar un medicamento para el tratamiento de una condición relacionada con el epitelio en una célula, tejido, órgano o animal. 44. - Un dispositivo que comprende una o más de la molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1, el polipéptido de la reivindicación 14, y un anticuerpo, agonista o antagonista para el polipéptido, en donde dicho dispositivo es adecuado para poner en contacto o administrar uno o más de dicho polipéptido, anticuerpo, agonista, antagonista o ácido nucleico, por uno o más modos seleccionados del grupo que consiste de parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavital, intracelial, ¡ntracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, intrahepático, intramiocárdico, intraosteal, intrapélvico, intrapericardiaco, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal y transdérmico. 45. - Un artículo de fabricación para uso farmacéutico o de diagnóstico humano, que comprende empacar el material y un contenedor que comprende uno o más de la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 , el polipéptido de la reivindicación 14, y un anticuerpo, agonista o antagonista para el polipéptido. 46. - El artículo de fabricación de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho contenedor es un componente de un dispositivo o sistema de suministro parenteral, subcutáneo, intramuscular, intravenoso, intraarticular, intrabronquial, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavital, intracelial, ¡ntracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, ¡ntrahepático, intramiocárdico, intraosteal, intrapélvico, intrapericardiaco, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarrectal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinal, intrasinovial, intratorácico, intrauterino, ¡ntravesical, intralesional, bolo, vaginal, rectal, bucal, sublingual, intranasal y transdérmico. 47. - Un método para producir una o más de la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 , el polipéptido de la reivindicación 14, y un anticuerpo, agonista o antagonista para el polipéptido, que comprende proveer uno o más de un vector, célula hospedera, animal transgénico, planta transgénica o célula vegetal capaz de transcribir dicho ácido nucleico y/o expresar en cantidades detectables o recuperables dicho polipéptido o anticuerpo. 48. - Un polipéptido, anticuerpo, agonista, antagonista o molécula de ácido nucleico, producido por el método de la reivindicación 47. 49. - Un método para detectar la presencia o ausencia de la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8 o el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14-19 en una muestra biológica, que comprende obtener una muestra biológica de un sujeto de prueba y poner en contacto la muestra biológica con un compuesto o un agente capaz de detectar el polipéptido, en donde la presencia del polipéptido o molécula de ácido nucleico es detectada en la muestra biológica. 50 - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos de los nucleótidos 101-526 (Exón 1), 786-986 (Exón 2), 1099-1155 (Exón 3), 1763-18 3 (Exón 4), 1983-2 65 (Exón 5), 3324-3392 (Exón 8), 7590-7637 (Exón 13), 7811-7858 (Exón 14), 10690-10746 (Exón 16), 1 1393-1 1440 (Exón 17), 12996-13043 (Exón 19), 13547-13618 (Exón 21), 14679-14702 (Exón 22), 14813-14860 (Exón 23) y 16038-16356 (Exón 25) de SEQ ID NO:1 y, opcionalmente, uno o más del grupo que consiste de los nucleótidos 2936-2980 (Exón 6), 3615-3665 (Exón 9), 5336-5371 (Exón 10), 6065-6118 (Exón 11), 7391-7450 (Exón 12), 13157-13198 (Exón 20), y 15895-15929 (Exón 24) de SEQ ID NO:1 , o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 51. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos de los nucleótidos 101-526 (Exón 1), 786-986 (Exón 2), 1099-1 55 (Exón 3), 1763-1813 (Exón 4), 1983-2165 (Exón 5), 3324-3392 (Exón 8), 7590-7637 (Exón 13), 7811-7858 (Exón 14) y 10129-10155 (Exón 15) de SEQ ID NO:1 y, opcionalmente, uno o más del grupo que consiste de los nucleótidos 3615-3665 (Exón 9), 5336-5371 (Exón 10), 6065-61 18 (Exón 11), y 7391-7450 (Exón 12) de SEQ ID NO:1 , o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 52. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos de los nucleótidos 3149-3205 (Exón 7), 3324-3392 (???? 8), 7590-7637 (???? 13), 7811-7858 (???? 14), 10690-10746 (???? 16), 11393-11440 (???? 17), 12996-13043 (???? 19), 13547-13618 (???? 21), 14679-14702 (???? 22), 14813-14860 (???? 23) y 16038-16356 (???? 25) de SEQ ID ??. y, opcionalmente, uno o más del grupo que consiste de los nucleótidos 3615-3665 (Exón 9), 5336-5371 (Exón 10), 6065-6118 (Exón 11), 7391-7450 (Exón 12), 13157-13198 (Exón 20), y 15895-15929 (Exón 24) de SEQ ID NO:1 , o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 53. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos de los nucleótidos 3149-3205 (Exón 7), 3324-3392 (Exón 8), 7590-7637 (Exón 13), 7811-7858 (Exón 14), y 10129-10155 (Exón 15) de SEQ ID NO:1 y, opcionalmente, uno o más del grupo que consiste de los nucleótidos 3615-3665 (Exón 9), 5336-5371 (Exón 10), 6065-6118 (Exón 11), y 7391-7450 (Exón 12) de SEQ ID NO:1 , o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 54. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 90% de identidad a cualquiera de las secuencias de nucleótidos mencionadas en las reivindicaciones 50-53, o un complemento exacto de dicha secuencia de nucleótidos. 55. - Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un fragmento de un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las secuencias de nucleótidos mencionadas en las reivindicaciones 50-53 en donde el fragmento tiene una secuencia de aminoácidos que comprende por lo menos 15 residuos de aminoácidos consecutivos de una secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las secuencias de nucleótidos mencionadas en las reivindicaciones 50-53. 56- La molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-53, caracterizada además porque la secuencia de nucleótidos comprende adicionalmente una porción que codifica un polipéptido heterólogo. 57. - La molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-53, caracterizada además porque comprende residuos de ácido nucleico de vector. 58. - Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 57. 59. - Una célula hospedera que contiene la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 57. 60. - La célula hospedera de conformidad con la reivindicación 59, caracterizada además porque la célula hospedera es de origen de mamífero, bacteriano, levadura o de insecto. 61. - Un equipo que comprende (i) un compuesto que híbrida con una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos con por lo menos 95% de identidad a las secuencias de nucleótidos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-53 en 6xSSC a aproximadamente 45°C seguido por lavado en 0.2xSSC, 0.1% de SDS a aproximadamente 65°C, y (ii) instrucciones para uso. 62. - Un polipéptido aislado codificado por cualquiera de las secuencias de nucleótidos de conformidad con las reivindicaciones 50-53. 63. - Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 90% de identidad a la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las secuencias de nucleótidos de conformidad con las reivindicaciones 50-53. 64. - Un polipéptido aislado que comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las secuencias de nucleótidos de conformidad con las reivindicaciones 50-53. 65. - Un polipéptido de fusión que comprende el polipéptido de la reivindicación 62 operablemente enlazado a un polipéptido heterólogo. 66. - El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 65, caracterizado además porque el polipéptido heterólogo es un miembro de la familia de proteína de inmunoglobulina o un fragmento de dicho miembro. 67. - El polipéptido de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado además porque dicho polipéptido tiene por lo menos una actividad de un polipéptido CNGH0010. 68. - Un anticuerpo que comprende un anticuerpo monoclonal o policlona!, proteína de fusión o fragmento del mismo, que se une específicamente al polipéptido de la reivindicación 62. 69. - Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el anticuerpo de la reivindicación 68. 70. - Un método para producir un anticuerpo, que comprende traducir la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 69, bajo condiciones in vitro, in vivo o in situ, en donde el anticuerpo se expresa en cantidades detectables o recuperables. 71. - Un anticuerpo producido por el método de la reivindicación 70. 72. - Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 69. 73.- Una célula hospedera que comprende la molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 69, en donde la célula hospedera es procariótica o eucariótica. 74. - La célula hospedera de conformidad con la reivindicación 73, caracterizada además porque la célula hospedera es una o más seleccionadas de células COS-1 , COS-7, HEK293, BHK21 , CHO, BSC-1 , Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, mieloma y linfoma, o cualquier célula derivada, inmortalizada o transformada de las mismas. 75. - Un método para producir un polipéptido CNGH0010, que comprende traducir la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-53, bajo condiciones in vitro, in vivo o in situ, en donde el polipéptido CNGH0010 se expresa en cantidades detectables o recuperables. 76. - Un polipéptido producido por el método de la reivindicación 75. 77 - Un método para generar anticuerpos para un polipéptido, que comprende inmunizar o detectar selectivamente anticuerpos recombinantes con un polipéptido de conformidad con la reivindicación 62. 78.- Una composición que comprende una o más de la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-53, un polipéptido codificado por la molécula de ácido nucleico, y un anticuerpo para el polipéptido. 79. - Una composición que comprende un agonista o antagonista de uno o más de la molécula de ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-53, un polipéptido codificado por la molécula de ácido nucleico y un anticuerpo para el polipéptido. 80. - La composición de conformidad con la reivindicación 79, caracterizada además porque dicha composición comprende adicionalmente por lo menos un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 81. - Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos de CNGH0010 truncada que contiene uno o más del grupo que consiste de los nucleótidos 1983-2076 (Exón 5a), 2117-2165 (Exón 5b), 3168-3197 (Exón 7a), y 3189-3393 (Exón 8a) de SEQ ID NO. . RESUMEN DE LA INVENCION Polipéptidos (CNGH0010) y anticuerpos novedosos, incluyendo porciones especificadas o variantes, específicas para por lo menos un polipéptido CNGH0010, variante o fragmento del mismo, así como ácidos nucleicos que codifican dichos polipéptidos CNGH0010 y anticuerpos, ácidos nucleicos complementarios, vectores, células hospederas y métodos para hacer y usar los mismos, son útiles para formulaciones terapéuticas y de diagnóstico, administración y dispositivos; los polipéptidos antes mencionados se pueden usar para generar anticuerpos anti-CNGH00 0 humanos, de primate, de roedor, de mamífero, quiméricos, humanizados y/o CDR-injertados; los polipéptidos CNGH0010 y anticuerpos se usan en la modulación o tratamiento de por lo menos una enfermedad relacionada con CNGH0010 en una célula, tejido, órgano, animal o paciente; dichas enfrmedades pueden incluir, pero no se limitan a, psoriasis, artritis reumatoide, enfisema, asma, diabetes, tiroiditis autoinmune, enfermedades intestinales inflamatorias, incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, diferentes tipos de dermatitis incluyendo dermatitis alérgica, dermatitis por contacto, queratosis actínica, cicatrización de heridas, formación de cicatriz, varias enfermedades renales, varias enfermedades respiratorias, varias enfermedades de órganos reproductores, tales como endometriosis, melanoma, carcinoma de células escamosas, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, enfermedad de Grave y otras enfermedades inflamatorias hiperproliferativas. 9B/cgt* P05/1802F