JP2007525946A - Ｃｎｇｈ００１０特異的ポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、組成物、方法および使用 - Google Patents

Ｃｎｇｈ００１０特異的ポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、組成物、方法および使用 Download PDF

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Abstract

新規ポリペプチド（ＣＮＧＨ００１０）および抗体（少なくとも１つのそのようなＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、そのバリアントまたはフラグメントに特異的なその特定した部分またはバリアントを含む）、ならびにそのようなＣＮＧＨ００１０ポリペプチドおよび抗体をコードする核酸、相補的核酸、ベクター、宿主細胞およびそれらの作成および使用法は、治療用、診断用製剤、投与およびデバイスに有用である。前述のポリペプチドはヒト、霊長類、齧歯類、哺乳動物、キメラ、ヒト化および／またはＣＤＲ−移植化抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を生成するために使用することができる。ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドおよび抗体は、細胞、組織、臓器、動物または患者中の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０−関連疾患のモジュレートまたは処置に使用される。そのような疾患には限定するわけではないが、乾癬、慢性関節リウマチ、気腫、喘息、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、接触皮膚炎を含む種々の皮膚炎、紫外線角膜炎、損傷治癒、瘢痕形成、種々の腎臓疾患、種々の呼吸疾患、子宮内膜炎のような種々の生殖器疾患、黒色腫、偏平上皮癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓細胞癌、グレーヴズ病および他の炎症性および過剰増殖性疾患を含むことができる。

Description

Ａ．発明の分野
本発明は、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、そのバリアントおよびフラグメント、およびそれに特異的な抗体および抗−イディオタイプ抗体、ならびにそのようなＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードする核酸、バリアント、フラグメント、抗体、相補的核酸、ベクター、宿主細胞、ならびに診断および治療用製剤、投与およびデバイスを含むそれらの作成および使用法に関する。
Ｂ．背景および関連技術
乾癬は遺伝性、多因子性の慢性炎症皮膚疾患であり、米国では人口の２．６％が罹患している。この疾患はケラチン生成細胞の著しい過剰増殖（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を特徴とし、これは急速な表皮の代謝回転および肥厚化した鱗状の赤斑の臨床的所見をもたらす。この疾患の他の顕著な組織生理学的特徴は、真皮および表皮でのサイトカイン生産の改変、繊維芽細胞の活性化、血管拡張、および白血球の浸潤である。真皮における活性化細胞および免疫細胞の両方からのサイトカイン生産の調節障害（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）は、乾癬に関係する炎症反応（ｅｖｅｎｔ）の媒介に重要な役割を果たすようである。このため、遺伝子および／タンパク質発現における多数の変化が乾癬においてこれまでに記載され、そしてこれらの遺伝子および／またはタンパク質の幾つかは他の炎症疾患と関連することも見い出された。これらにはＩＬ−１およびＴＮＦαのような前炎症性サイトカイン、細胞内接着分子１（ＩＣＡＭ１）および血管接着分子１（ＶＣＡＭ１）のような接着分子、ケモカインおよびディフェンシンを含む。最近、遺伝子発現マイクロアレイ技術が正常 対 乾癬病変皮膚において遺伝子発現パターンをより包括的規模でプロファイルリングするために応用され、そして乾癬の病因について新たな洞察が提供された。
ｃＤＮＡマイクロアレイ技法は、１回のハイブリダイゼーションアッセイで数千の遺伝子の発現レベルを同時に測定するための形式を提供する。また自動化された高処理量の形式にも対応可能である。さらに重要なことは、マイクロアレイ技術は新たな遺伝子を発見し、遺伝子発現を定量そして分析し、そして機能が未知な遺伝子に機能性を割り当てるために使用することができる点である。ヒトゲノムの完全なシークエンシングにより、新たな遺伝子の同定およびクローニングを今では迅速に達成することができる。しかしこれらの遺伝子が新規タンパク質をコードするのかどうかを解明すること、およびこれらの新規タンパク質の機能のさらなる同定は迅速には進まなかった。この障害が、新規なタンパク質をコードする遺伝子、または後に種々のヒトの疾患に有望な治療的標的となり得る新規機能を持つ遺伝子を発見するために十分に計画された実験の設定において、高処理量のｃＤＮＡマイクロアレイ技術を使用する主な理由の１つとなった。
したがって疾患および状態に関連する新規ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体またはそれらのフラグメントおよびそれらの使用、ならびに既知のポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体またはそれらのフラグメントに対する改善を提供することが必要である。
発明の要約
本発明は、配列番号３、５、７、９および１１の１つに示される配列を有する単離されたＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、バリアント、例えば、以下の表２に記載するような示
差的エキソンスプライシング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｏｎ ｓｐｌｉｃｉｎｇ）に基づくもの、およびそれらのフラグメントに関する。本発明の別の観点は、配列番号２、４、６、８および１０の１つに示される配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、バリアント（例えば、以下の表２に記載するような示差的エキソンスプライシングに基づくもの）、およびそれらのフラグメントおよび相補的配列である。本発明の別の観点は、配列番号３、５、７、９および１１の１つに示されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含んでなる単離されたポリヌクレオチド、バリアント（例えば、以下の表２に記載するような示差的エキソンスプライシングに基づくもの）、およびそれらのフラグメントおよび相補的配列である。
また本発明は配列番号３、５、７、９および１１のアミノ酸配列のいずれかに対して少なくとも７０％、好ましくは７５％、８０％、９０％、９５％、９９％もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する単離されたポリペプチド、そのバリアントまたはフラグメント；配列番号２、４、６、８および１０のポリヌクレオチド配列のいずれかに対して少なくとも７０％、好ましくは７５％、８０％、９０％、９５％、９９％もしくは１００％の核酸配列同一性を有する単離されたポリヌクレオチド、そのバリアント、相補配列またはフラグメント；ならびに配列番号３、５、７、９および１１のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドのいずれかに対して少なくとも７０％、好ましくは７５％、８０％、９０％、９５％、９９％もしくは１００％の核酸配列同一性を有する単離されたポリヌクレオチド、そのバリアント、相補配列またはフラグメントに関する。
また本発明は、（ａ）配列番号３、５、７、９および１１の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸分子、そのバリアントおよびフラグメント、あるいは（ｂ）配列番号２、４、６、８および１０のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する核酸配列、そのバリアントおよびフラグメントおよび相補的核酸にハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらにポリペプチドをコードする核酸分子を含んでなる組換えベクター、そのような核酸および／または組換えベクターを含有する宿主細胞、ならびにそのような核酸、ベクターおよび／または宿主細胞の作成法を提供する。
別の観点では本発明は、（ａ）配列番号３、５、７、９および１１の１つのアミノ酸配列の全部もしくは一部に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、またはバリアント、あるいは（ｂ）配列番号２、４、６、８および１０のポリヌクレオチド配列のいずれかの全部もしくは一部に対して少なくとも７０％の核酸同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、またはバリアントに結合することができる抗体および抗体フラグメントに関する。加えて本発明は抗体組成物、製剤、デバイスおよびトランスジェニックマウスおよび植物を含んでなる。また本発明はヒト、霊長類、齧歯類、哺乳動物、キメラ、単鎖、ヒト化および／またはＣＤＲ移植化抗−ＣＮＧＨ００１０抗体、免疫グロブリン、分解産物および他の特定部分およびそのバリアントを生成し、そして特徴付ける方法を提供する。本発明はさらに本発明の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０抗体に対する少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０抗−イディオタイプ抗体を提供する。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードする核酸またはそのフラグメントは、異種アミノ酸配列をコードする核酸配列に連結されて、融合タンパク質を形成することができる。さらなる態様は、免疫グロブリン領域の少なくとも一部に融合されたＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの少なくとも１つのフラグメントを含んでなるミメティボディである。好適なミメティボディは、少なくとも１つのＣＨ２領域を含んでなり、これは少なくとも１つのＣＨ２領域に直接連結され、これは少なくとも１つのヒンジ領域またはそのフラグメントに直接連結され、これは場合により少なくとも１つの部分的Ｖ領域に直接連結され、これ
は任意のリンカー配列に直接連結され、これはＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの少なくともフラグメントに直接連結され、場合によりこれは少なくとも１つの可変抗体配列の少なくとも一部に直接連結されている。さらに好適な態様では、免疫グロブリンはＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。
本発明の別の観点は、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドを含んでなる組換え発現ベクターを提供する。別の態様では、本発明は単離された宿主細胞、例えば、そのようなベクターおよび／またはＣＮＧＨ００１０ポリヌクレオチドを含む哺乳動物および非哺乳動物細胞を提供する。また本発明はＣＮＧＨ００１０ポリペプチドが生産されるように、適当な培地中で、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードする組換え発現ベクターを含む本発明の宿主細胞を培養することによりＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの生産法も提供する。
また本発明は、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、抗−ＣＮＧＨ００１０抗体またはＣＮＧＨ００１０抗−イディオタイプ抗体の少なくとも１つが検出可能な量および／または回収可能な量で発現される条件下で、本明細書に記載する宿主細胞を培養することを含んでなる、そのようなＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、抗−ＣＮＧＨ００１０抗体またはＣＮＧＨ００１０抗−イディオタイプ抗体を宿主細胞中で発現させるための少なくとも１つの方法も提供する。
さらに別の観点では、本発明は異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）アミノ酸配列に融合した配列番号３、５、７、９および１１の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは７５％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含んでなる融合タンパク質を提供する。
また本発明は、（ａ）本明細書に記載する単離されたＣＮＧＨ００１０ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポリペプチドアゴニストもしくはアンタゴニスト、抗体および／または抗イディオタイプ抗体：ならびに（ｂ）適切な担体または希釈剤を含んでなる少なくとも１つの組成物を提供する。担体または希釈剤は、既知の担体または希釈剤に従い製薬学的に許容され得るものであることができる。組成物は場合によりさらに、少なくとも１つの化合物、タンパク質または組成物を含んでなることができる。
また本発明は、限定するわけではないが乾癬、慢性関節リウマチ、気腫、喘息、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、接触皮膚炎を含む種々の皮膚炎、紫外線角膜炎、損傷治癒、瘢痕形成、種々の腎臓疾患、種々の呼吸疾患、子宮内膜炎のような種々の生殖器疾患、黒色腫、偏平上皮癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓細胞癌、グレーヴズ病および他の炎症性および過剰増殖性疾患のようなＣＮＧＨ００１０関連疾患の処置および／または診断方法に関する。好適な態様では、ＣＮＧＨ００１０関連疾患は、疾患または状態が限定するわけではないが乾癬、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、種々の皮膚炎（アレルギー性皮膚炎、接触皮膚炎）、紫外線角膜炎、損傷治癒、瘢痕形成、種々の腎臓疾患、種々の呼吸疾患、子宮内膜炎のような種々の生殖器疾患、黒色腫、偏平上皮癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓細胞癌、気腫、グレーヴズ病、糖尿病、天疱瘡、水疱性天疱瘡、ヘルペス、線状ＩｇＡ疾患、薬剤発疹、表皮水疱症、胃炎、アフタ性潰瘍、消化性潰瘍、胃のポリープ、慢性閉塞性肺疾患、気管支拡張症、嚢胞性繊維症、腎嚢胞性疾患、膀胱炎および他の炎症性および過剰増殖性疾患を含む上皮細胞または関連する細胞に影響を及ぼすような上皮関連疾患または状態である。この方法は（１）配列番号３、５、７、９および１１から選択される少なくとも１つの配列を含んでなる単離されたポリペプチド、そのバリアント、誘導体およびフラグメント、（２）配列番号２、４、６、８および１０の少なくとも１つの配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、そのバリアント、誘導体およびフラグメント、および相補配列、（３）配列番号２、４、６、８
および１０の少なくとも１つの配列を含んでなるポリヌクレオチドによりコードされる単離されたポリペプチド、そのバリアントおよびフラグメント、ならびに（４）炎症性および過剰増殖性疾患および状態を診断および／または処置するためのそのようなポリペプチドおよびヌクレオチドのアゴニストおよびアンタゴニストを利用する。また本発明はＣＮＧＨ００１０アゴニストもしくはアンダゴニスト、抗−ＣＮＧＨ００１０抗体および／またはＣＮＧＨ００１０抗−イディオタイプ抗体を利用するＣＮＧＨ００１０関連疾患の処置および／または診断法も提供する。
本発明は、さらに本明細書に記載する本発明を提供する。
発明の記載
本明細書で使用する「ＣＮＧＨ００１０ポリペプチド（１もしくは複数）またはタンパク質（１もしくは複数）」または「本発明のポリペプチド（１もしくは複数）またはタンパク質（１もしくは複数）」は、配列番号３、５、７、９および１１から選択される少なくとも１つの配列を含んでなる単離されたポリペプチド、そのバリアント、誘導体およびフラグメントを包含する。「ＣＮＧＨ００１０核酸、ポリヌクレオチド（１もしくは複数）または遺伝子（１もしくは複数）」または「本発明の核酸、ポリヌクレオチド（１もしくは複数）または遺伝子（１もしくは複数）」は、配列番号２、４、６、８および１０の少なくとも１つの配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、そのバリアント、誘導体およびフラグメント、および相補的配列を指す。
ＣＮＧＨ００１０タンパク質のスプライスバリアントおよびこれらのバリアントをコードする核酸は、ＲＡＣＥ、ＲＴ−ＰＣＲおよびノーザンブロット技法の使用を介して上皮細胞型で同定されてきた。ゲノムのＣＮＧＨ００１０ ＤＮＡ配列（配列番号１）のエキソンおよび非翻訳領域が同定された（表１）。表２に示すように、ＣＮＧＨ００１０遺伝子は示差的翻訳開始および終止部位の結果として、多数のバイリアトの可能性がある（すなわち選択的スプライシング）。主要なバリアントはＣＮＧＨ００１０．１、ＣＮＧＨ００１０．２、ＣＮＧＨ００１０．３、ＣＮＧＨ００１０．４およびＣＮＧＨ００１０．５（それぞれ配列番号２、４、６、８および１０（核酸）、およびそれぞれ配列番号３、５、７、９および１１（アミノ酸））と表される。本発明のさらなるバリアントはゲノム配列およびＲＴ−ＰＣＲ産物の分析により見られるエキソンの種々の組み合わせにより包含される。これは表２に表すようにコード配列に加えられるか、または削除されてもよいエキソンにより示される。
Ａ４３１細胞に存在するＣＮＧＨ００１０転写産物のＲＴ−ＰＣＲ分析は、ＣＮＧＨ００１０．１転写産物が少なくともエキソン１１および２０の存在または不存在に関して異種成分からなり、一方、ＣＮＧＨ００１０．２転写産物はエキソン９に対して異種成分を有すことを示す。またＣＮＧＨ００１０．４転写産物はエキソン９、１０、１１および１２の存在または不存在に関して異種成分からなる。
細胞外マトリックス分子（コラーゲン）およびサイトカイン（アジポネクチン）に対するＣＮＧＨ００１０分子の類似性は、それらが細胞−細胞または細胞−マトリックス相互作用の調節に参加し得るか、またはサイトカインを受容体へ結合させるか、または結合に影響を及ぼす可能性を示唆する。両方の活性は最終的に細胞および組織の増殖、移動および分化状態に影響する。したがって本発明のタンパク質およびポリヌクレオチドは、モノクローナル抗体、合成ポリペプチド、低分子薬剤または他の天然もしくは合成薬剤を使用して、治療的介入の理想的な標的を表す。
したがって本発明は、ＣＮＧＨ００１０タンパク質および遺伝子として同定された新規アミノ酸および核酸配列を提供する。配列は、配列番号３、５、７、９および１１の１つに示される配列を有するポリペプチドを含んでなる単離されたポリペプチド、またはその
バリアント；配列番号２、４、６、８および１０の１つに示す配列を有するポリヌクレオチドを含んでなる単離されたポリヌクレオチド、または相補的配列；配列番号３、５、７、９および１１の１つに示すアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含んでなる単離されたポリヌクレオチド、または相補的配列；配列番号３、５、７、９および１１のいずれかのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列の同一性を有するポリペプチドを含んでなる単離されたポリペプチド、またはそのバリアント；配列番号２、４、６、８および１０のいずれかのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の核酸配列の同一性を有する単離されたポリヌクレオチド、その相補的配列またはバリアント；配列番号３、５、７、９および１１のいずれかのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の核酸配列の同一性を有する単離されたポリヌクレオチド、その相補的配列またはバリアント；ならびに配列番号３、５、７、９および１１の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列の同一性を有するポリペプチドをコードする核酸分子にハイブリダイズする単離された核酸分子、配列番号２、４、６、８および１０のいずれかのポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する核酸分子、または相補的核酸分子；およびこれらポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列のフラグメントを含んでなる。
本明細書で使用するように、当該技術分野で知られている「同一性」は配列を比較することにより決定される２以上のポリペプチド配列間または２以上のポリヌクレオチド配列間の関係である。また当該技術分野では、「同一性」はポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列のような連なり（ｓｔｒｉｎｇｓ）の間の対合により定められるポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」および「類似性」は、限定するわけではないが（コンピューターによる分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編集、オックスフォード大学出版（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９８８；バイオコンピューティング：インフォーマティックスおよびゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔ），Ｓｍｔｈ，Ｄ．Ｗ．編集、アカデミック出版（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、１９９３；および配列データのコンピューター分析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ）、第１部、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編集、ヒューマナ出版（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー、１９９４；分子生物学における配列分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、アカデミック出版、１９８７；および配列分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ）、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編集、Ｍ．ストックトン出版（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，Ｓｉａｍ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載されている既知の方法により容易に算出することができる。加えて、同一性パーセントの値は、ＶｅｃｔｏｒＮＴＩ Ｓｕｉｔｅ８．０（インフォマックス（Ｉｎｆｏｒｍａｘ）、フレデリック、メリーランド州）のＡｌｉｇｎＸ構成要素に関するデフォルト設定を使用して、アミノ酸配列およびヌクレオチド配列から得ることができる。
同一性を決定するための好適な方法は、試験する配列間に最大の対合を与えるように設計する。同一性および類似性を決定する方法は、公的に利用することができるコンピュータープログラムに体系化されている。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための好適なコンピュータープログラム法には、限定するわけではないがＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２（１）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＩＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１
５：４０３−４１０（１９９０）がある。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＮＣＢＩおよび他の供給元から公的に利用可能である（ＢＬＡＳＴＩマニュアル、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，ＮＣＢＩＮＬＭ ＮＩＨ ベセスダ、メリーランド州、２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）から公的に利用可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用できる。
ポリペプチド配列の比較に好適なパラメーターには以下を含む：
（１）アルゴリズム：Ｎｅｅｄｅｌｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）比較マトリックス：Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ ａｎｄ
Ｈｅｎｔｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）からのＢＬＯＳＳＵＭ６２
ギャップ ペナルティ：１２
ギャップ長 ペナルティ： ４
これらのパラメーターに有用なプログラムは、ウィスコンシン州、マジソンのジェネティックス コンピューター グループ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｏｒ Ｇｒｏｕｐ）からの「ギャップ」プログラムとして公的に利用可能である。前述のパラメーターは、（エンドギャップについてはペナルティ無しで一緒に）ポリペプチドを比較するためのデフォルトパラメーターである。
ポリヌクレオチド比較のための好適なパラメーターには以下を含む：
（１）アルゴリズム：Ｎｅｅｄｅｌｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）
比較マトリックス：マッチ＝＋１０、ミスマッチ＝０
ギャップ ペナルティ：５０
ギャップ長 ペナルティ： ３
入手先：ウィスコンシン州、マジソンのジェネティックス コンピューター グループ からの「ギャップ」プログラム。これらは、核酸比較のためのデフォルトパラメーターである。
例えば、本発明のポリヌクレオチド配列は、配列番号２の配列と同一であることができ、すなわち１００％同一であるか、または参照配列に比べて特定の整数値の数までのヌクレオチド改変を含んでもよい。そのような改変は、少なくとも１つのヌクレオチド欠失、トランジッションおよびトランスバージョンを含む置換、または挿入からなる群から選択され、そしてここで改変は、参照ヌクレオチド配列の５’もしくは３’末端位置に、またはこれら末端位置の間の任意の場所に、参照配列のヌクレオチド間で個々に、または参照配列内の１もしくは複数の連続する群で散在して起こることができる。ヌクレオチド改変の数は、配列番号２中の総ヌクレオチド数に各配列同一性のパーセントの数値を掛け、そして配列番号２の総ヌクレオチド数からその結果を引くか、あるいは：
ｎ．ｓｕｂ．ｎ．ｌｔｏｒｉｓｍ．ｘ．ｓｕｂ．ｎ−（ｘ．ｓｕｂ．ｎ．ｙ）
ここでｎ．ｓｕｂ．ｎはヌクレオチド改変の数であり、ｘ．ｓｕｂ．ｎは配列番号２中の総ヌクレオチド数であり、そしてｙは例えば、７０％については０．７０、８０％については０．８０、８５％については０．８５、９０％については０．９０、９５％については０．９５等であり、ここでｘ．ｓｕｂ．ｎおよびｙの任意の整数ではない結果は最も近い整数の概数とした後にｘ．ｓｕｂ．ｎから引く。
配列番号３のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の改変は、このコード配列中にナンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト変異を作成し、そしてこれによりそのような改変後のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを改変する。同様に本発明のポリペプチド配列は、配列番号３の参照配列と同一であることができ、すなわち
１００％同一であるか、または同一性のパーセントが１００％未満となるように参照配列に比べて特定の整数値の数までのアミノ酸改変を含んでもよい。そのような改変は、少なくとも１つのアミノ酸欠失、保存的および非保存的置換を含む置換、または挿入のからなる群から選択され、そしてここで改変は、参照ポリペプチド配列のアミノ−もしくはカルボキシ−末端位置に、またはこれら末端位置の間のいずれかの場所に、参照配列間のアミノ酸間で個々に、または参照配列内の１もしくは複数の連続する群で散在して起こることができる。与えられた％同一性に関するアミノ酸改変の数は、配列番号３のアミノ酸の総数に各配列の同一性パーセント数（１００で割った）を掛け、そして配列番号３の総アミノ酸数からその結果を引くか、あるいは
ｎ．ｓｕｂ．ａ．ｌｔｏｒｓｉｍ．ｘ．ｓｕｂ．ａ−（ｘ．ｓｕｂ．ａ．ｙ）
ここでｎ．ｓｕｂ．ａはアミノ酸改変の数であり、ｘ．ｓｕｂ．ａは配列番号３中の総アミノ酸数であり、そしてｙは例えば、７０％については０．７０、８０％については０．８０、８５％については０．８５等であり、ここでｘ．ｓｕｂ．ａおよびｙの任意の整数ではない結果は最も近い整数の概数とした後にｘ．ｓｕｂ．ａから引く。
本明細書で使用する「フラグメント」は、本発明の任意のポリペプチドのアミノ酸配列のすべてではないが一部と全く同じアミノ酸配列を有するバリアントポリペプチドであるか、あるいは本発明の任意のポリヌクレオチドの核酸配列のすべてではないが一部と全く同じ核酸配列を有するバリアントポリヌクレオチドである。フラグメントは、例えば、異種のアミノ−および／またはカルボキシ−末端アミノ酸配列を含む連続する残基のシリーズのような、配列番号３、５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列で示すような短縮化ポリペプチドまたはそのバリアントを含むことができる。宿主細胞により、またはその中で生産される本発明のポリペプチドの分解形も含まれる。他の例示的フラグメントは、アルファ−ヘリックスまたはアルファ−ヘリックス形成領域、ベーター−シートまたはベータシート形成領域、回転または回転形成領域、コイル−またはコイル−形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファ−両親媒性領域、ベータ−両親媒性領域、柔軟性領域、表面−形成領域、基質結合領域、細胞外領域および高抗原性指数領域のような構造的または機能的寄与を特徴とする。
さらなる例示フラグメントには、配列番号３、５、７、９もしくは１１に説明するアミノ酸配列に由来する少なくとも１５、２０、３０、４０、５０もしくは１００の連続するアミノ酸を有するアミノ酸配列含んでなる単離されたポリペプチドおよびそのバリアント、あるいは配列番号３、５、７、９もしくは１１に示すアミノ酸配列に説明するアミノ酸配列から短縮化または削除された少なくとも１５、２０、３０、４０、５０もしくは１００の連続するアミノ酸を有するアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドおよびそのバリアントを含む。またフラグメントは類似するサイズおよび特性を有する単離されたポリヌクレオチドを含む。
本発明のポリペプチドおよび誘導体は、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドのそのリガンドへの結合を阻害し、そして後のシグナル伝達を低下または遮断するために有用である。ポリペプチドおよびポリペプチド構築物は、ヒト、霊長類、齧歯類、哺乳動物、キメラ、単鎖、ヒト化および／またはＣＤＲ−移植化抗−ＣＮＧＨ００１０抗体、免疫グロブリン、分解産物および他の特定化部分およびそれらのバリアントに有用な免疫原または結合パートナーとして使用することができる。さらに抗体のアミノ酸配列、およびＣＮＧＨ００１０抗体もしくは抗−イディオタイプ抗体の少なくとも１つをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなるコード核酸分子は、当該技術分野で周知で、しかも本明細書に記載する方法により決定することができる。
本明細書に記載する少なくとも１つのヒトＣＮＧＨ００１０ポリペプチド配列は抗原性であり、そして抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の生成法を提供する。本明細書に記載するポリ
ペプチドは、診断および治療用のＣＮＧＨ００１０抗体について重要なエピトープを含む新たな種類のＣＮＧＨ００１０抗原を含んでなる。このポリペプチドは、本発明のヒトＣＮＧＨ００１０ポリペプチド配列のアミノ酸配列に基づき、本明細書に記載するように合成することができる。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、当該技術分野で既知かつ／または本明細書に記載するように、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０関連状態をモジュレートまたは処置するために治療もしくは予防に有効な量を、かつ／または関連状態の前、後もしくは最中に投与するための方法または組成物に包含することができる。ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、当該技術分野で既知かつ／または本明細書に記載するように、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０関連状態を診断するための方法または組成物に、関連状態の前、後もしくは最中に包含することができる。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、本発明の有効量の少なくとも１つの単離されたＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含んでなる組成物を、細胞、組織、臓器または動物と接触させるか、またはそれらに投与することを含んでなる、細胞、組織、臓器または動物のＣＮＧＨ００１０関連状態を診断または処置する方法に包含される。この方法は任意にさらに有効量の０．００１〜５０ｍｇ／キログラムのポリペプチドまたは抗体を使用することを含んでなる。この方法はさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮から選択される少なくとも１つの様式によりポリペプチドまたは抗体を投与することにより、ポリペプチドまたは抗体でＣＮＧＨ００１０−関連状態を処置することを含んでなる。
本発明は、抗−ＣＮＧＨ００１０抗体およびそのフラグメントを生成するために使用できるＣＮＧＨ００１０の受容体結合領域に由来する新規タンパク質およびポリペプチドを提供する。第１に新規ポリペプチドを同定し、単離し、そして作成する方法を以下に検討する。次いで抗体の生成、応用、製剤および治療的処置を提示する。
本明細書に引用するすべての刊行物は引用により全部、それらが本発明のこの時点の技術の状況を示し、かつ／または本発明の説明および可能性を提供するので参考により本明細書に編入する。刊行物とは任意の科学的もしくは特許公報、またはすべての記録された、電子的または印刷形式を含む任意の媒体形式で入手できる任意の他の情報を称する。以下の参考文献は引用により全部、本明細書に編入する：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．編集、分子生物学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ジョン ウィリー＆サンズ社（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８７−２００１）：Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．、モレキュラークローニング：ア ラボラトリーマニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、第２版、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、ア ラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク州（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ
ａｌ．編集、免疫学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ジョン ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク州（１９９４−２００２）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，タンパク質科学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ジ
ョン ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク、ニューヨーク州、（１９９７−２００１）。
本発明のヒトＣＮＧＨ００１０ポリペプチドは、配列番号３、５、７、９および１１のもの、ならびに限定するわけではないが選択的スプライシングバリアントを含むそれらのバリアントを含み、そして本明細書に特定するような天然の突然変異およびヒトの操作に由来する１もしくは複数のアミノ酸置換、欠失もしくは付加を含むことができる。そのような突然変異または置換は、ヒトＣＮＧＨ００１０のそのリガンドへの結合を阻害するために、突然変異がポリペプチドの生物学的活性を改変することなくポリペプチドの性質を改変するために有意に十分で有り得るムテインを含むことができる。本発明に含まれるのは、配列番号３、５、７、９および１１のもの、およびそれらのバリアントに加えてアミノ酸配列を有するＣＮＧＨ００１０ポリペプチドである。
もちろん当業者は上に記載したものを含め多くの因子に依存して多数のアミノ酸置換を作成するだろう。一般に、任意に与えたＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、フラグメントまたはバリアントのアミノ酸置換、挿入または欠失の数は、１〜５以下であり、あるいは本明細書に特定するその中の数である。
機能に必須である本発明のＣＮＧＨ００１０ポリペプチド中のアミノ酸は、位置指定突然変異誘発法またはアラニン−スキャンニング突然変異誘発法のような当該技術分野で知られている方法により同定することができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、第８章、１５；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））。後者の手順は１つのアラニン変異を分子の各残基に導入する。次いで生じる変異分子は、限定するわけではないが少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０中和活性のような生物学的活性について試験される。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの合成
説明し、そして上に記載したアミノ酸配列を有するポリペプチドは、標準的なＢｏｃまたはＦＭＯＣ化学を使用して合成することができる。生じたポリペプチドはそのまま注入され、架橋結合され、または担体分子に連結することができる。担体への結合を促進するために、Ｎ−末端Ｎ−アセチル−システインまたはＣ−末端アミドを形成し、そしてＣ−末端アミノ酸をアミド化することができる。種々の連結基はポリペプチドと担体分子の間に間を空けて、正しい立体的フォールディングおよび抗原性ポリペプチドの提示を可能にすることができる。
本発明のＣＮＧＨ００１０ポリペプチドは、細菌、酵母、昆虫または哺乳動物に由来する細胞株からも生産することができる。新規ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組換え発現カセットは、少なくとも１つの宿主細胞に導入することができる。ＣＮＧＨ００１０核酸配列および必要なプロモーター要素を含有するベクターは、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドを発現させるために使用することができる。シグナルペプチドに結合したＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードする核酸配列は、所望のポリペプチドの分泌および精製を容易にするために含めることができる。当業者は、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列の発現に利用可能な多くの発現系を知っている。無細胞翻訳系も本発明のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを使用してそのようなポリペプチドを生成するために使用できる。
核酸分子
本発明のヒトＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードする核酸配列は、例えば、ＲＮＡサンプルのＲＴ−ＰＣＲ増幅によるクローニングにより得ることができる。あるいはＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードするＤＮＡは、ＣＮＧＨ００１０ ｍＲＮＡを保有すると考えられる組織から、またはゲノムＤＮＡライブラリーから調製することができる。核酸配列はＰＣＲ増幅により、またはＤＮＡハイブリダイゼーションおよび発現クローニングの従来の方法によりクローン化することができる。
本明細書に記載する情報（本明細書に記載する方法または従来技術の方法）を使用して、配列番号３、５、７、９および１１の少なくとも１つの連続するアミノ酸配列の少なくとも７０〜１００％をコードするヌクレオチド配列、またはその特定のフラグメント、バリアントまたはコンセンサス配列、これらの配列の少なくとも１つを含んでなるベクター、少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗−ＣＮＧＨ００１０抗体をコードする本発明の核酸分子を得ることができる。
本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡもしくは他の任意の形態のようなＲＮＡの形態、あるいは限定するわけではないがクローニングにより得た、または合成的に生成されたｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含むＤＮＡの形態、またはそれらの任意の組み合わせであることができる。ＤＮＡは３本鎖、２本鎖もしくは１本鎖、またはそれらの組み合わせであることができる。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１つの鎖の部分はコード鎖（センス鎖としても知られている）であることができ、またはそれは非コード鎖（アンチ−センス鎖とも言われる）であることができる。
本明細書に示すように、ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗−ＣＮＧＨ００１０抗体をコードする核酸を含んで成る本発明の核酸分子は、限定するわけではないが自身によりポリペプチドまたは抗体フラグメントのアミノ酸配列をコードするもの；全ポリペプチドまたは抗体またはそれらの部分のコード配列；ポリペプチドまたは抗体、フラグメントまたは部分のコード配列、ならびにスプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含む（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）転写、ｍＲＮＡプロセッシングに役割を果たす、転写された、非翻訳配列のような限定するわけではない非コード５’および３’配列を含むさらなる非コード配列と一緒に、少なくとも１つのイントロンのような前記のさらなるコード配列を含むか、または含まない少なくとも１つのシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配列のようなさらなる配列；ならびにさらなる機能性を提供する配列のようなさらなるアミノ酸をコードするさらなるコード配列を含むことができる。すなわちポリペプチドまたは抗体をコードする配列は、抗体フラグメントまたはその部分を含んで成る融合抗体の精製を容易にするペプチドをコードする配列のようなマーカー配列と融合させることができる。
核酸の構築およびポリペプチドの発現および精製
本発明の単離された核酸は、当該技術分野で周知な（ａ）組換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、またはそれらの組み合わせを使用して作成することができる。
核酸は本発明のポリヌクレオチドに加えた配列を都合よく含んで成ることができる。例えば、ポリヌクレオチドの単離を補助するために、１以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んで成るマルチクローニング部位を核酸に挿入することができる。また翻訳可能な配列を、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を補助するために挿入することができる。例えば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための便利な手段を提供する。本発明の核酸（コード配列を除く）は場合により、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／または発現のためのベクター、アダプターまたはリンカーである。
クローニングおよび／または発現における機能を至適化するために、ポリヌクレオチドの単離を補助するために、またはポリヌクレオチドの細胞への導入を向上させるために、そのようなクローニングおよび／発現配列にさらなる配列を加えることができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は、当該技術分野では周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、同上；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい。
大変様々な発現系を使用して、本発明のポリペプチドを生成することができる。そのような系には、細菌プラスミド、バクテリオファージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入要素、酵母染色体要素、バキュロウイルス、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、トリポックスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、ピコルナウイルスおよびレトロウイルスのような染色体−、エピソーム−およびウイルスに由来するベクター、ならびにコスミドおよびファジェミドのようなそれらの組み合わせに由来するベクターを含む。発現系構築物は、発現を調節し、そして引き起こす制御領域を含むことができる。一般に宿主中でポリヌクレオチドを維持し、または増殖させ、かつ／またはポリペプチドを発現するために適する任意の系またはベクターを、発現に使用することができる。適切なＤＮＡ配列を、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、同上に記載されているように当業者に周知な様々な技術により発現系に挿入することができる。
真核発現系では、本発明のポリペプチドは、シグナルペプチドまたはリーダー配列のような適切な分泌シグナルを包含することにより、小胞のルーメンに、または細胞外の環境に分泌され得る。
本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、高性能液体クロマトグラフィー、アニオンもしくはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフェニティクロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む周知の方法により組換え細胞カルチャーから回収し、そして精製することができる。タンパク質が単離および／または精製中に変性する場合、タンパク質をリフォールディングするための周知技法を使用して、活性な立体配置を再生することができる。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドをコードする本発明の核酸を得るための別の方法では、ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーを、本明細書に開示するような本発明のポリヌクレオチド配列に基づくプローブを使用してスクリーニングすることができる。プローブは同じか、または異なる生物中のホモロガスな遺伝子を単離するために、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列とハイブリダイズさせるために使用することができる。当業者は種々の程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーションをこのアッセイに使用することができると考えるだろう；そしてハイブリダイゼーションまたは洗浄媒質のいずれかがストリンジェントであることができる。ハイブリダイゼーションの条件が、よりストリンジェントになれば、二本鎖の形成が起こるためのプローブと標的との間に、より程度が大きい相補性が存在するはずである。ストリンジェンシーの程度は温度、イオン強度、ｐＨおよびホルムアミドのような部分的な変性溶媒の存在の１もしくは複数により制御することができる。
例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば、０％〜５０％の範囲内でホルムアミドの濃度の操作を介して反応物溶液の極性を変えることにより都合よく変動させる。検出可能な結合に必要な相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒質および／または洗浄媒質のストリンジェンシーに従い変動する。相補性の程度は最適には１００％、または８０〜１００％、またはその中の任意の範囲である。しかしプローブおよびプライマー中のわずかな配列の変化は、ハイブリダイゼーションおよび／または洗浄媒質のストリンジェンシーを下げることにより補うことができると理解すべきである。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例には、５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘデンハーツ溶液、１０％硫酸デキストランおよび２０マイクログラム／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含んでなる溶液中で４２℃にて一晩のインキュベーション、続いてフィルターを約６５℃で０．１ｘＳＳＣ中にて洗浄することを含む。
ＲＮＡまたはＤＮＡの増幅は当該技術分野では周知であり、そして本明細書に記載する教示およびガイダンスに基づき、過度な実験無しに本発明に従い使用することができる。ＤＮＡまたはＲＮＡ増幅の既知の方法には限定するわけではないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連する増幅法を含む（例えば、Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌへの米国特許第４，６８３，１９５号，同第４，６８３，２０２号、同第４，８００，１５９号、同第４，９６５，１８８号明細書；Ｔａｂｏｒ，ｅｔ ａｌへの米国特許第４，７９５，６９９号および同４，９２１，７９４号明細書；Ｉｎｎｉｓへの米国特許第５，１４２，０３３号明細書；Ｗｉｌｓｏｎ，ｅｔ ａｌへの米国特許第５，１２２，４６４号明細書；Ｉｎｎｉｓへの米国特許第５，０９１，３１０号明細書；Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ，ｅｔ ａｌへの米国特許第５，０６６，５８４号明細書；Ｇｅｌｆａｎｄ，ｅｔ ａｌへの米国特許第４，８８９，８１８号明細書；Ｓｉｌｖｅｒへの米国特許第４，９９４，３７０号明細書；Ｂｉｓｗａｓへの米国特許第４，７６６，０６７号明細書；Ｒｉｎｇｏｌｄへの米国特許第４，６５６，１３４号明細書を参照にされたい）ならびに二重鎖ＤＮＡ合成のための鋳型として標的配列に対してアンチ−センスＲＮＡを使用するＲＮＡが媒介する増幅（Ｍａｌｅｋ ｅｔ ａｌへの米国特許第５，１３０，２３８号明細書、登録名ＮＡＳＢＡを参照にされたい：この技術文献の内容は引用により全部、本明細書に編入する）を含む（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、同上；およびＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい）。
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を使用して、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーから直接、本発明のポリヌクレオチドの配列および関連する遺伝子を増幅することができる。ＰＣＲおよび他のインビトロ増幅法も、例えば、発現するタンパク質をコードする核酸配列をクローン化するために、サンプル中に所望のｍＲＮＡの存在を検出するためのプローブとして使用する核酸を作成するために、核酸シークエンシングに、または他の目的に有用となり得る。インビトロ増幅法を通して当業者を指導するために十分な技術の例は、Ｂｅｒｇｅｒ、同上；Ｓａｍｂｒｏｏｋ、同上；Ａｕｓｕｂｅｌ、同上、ならびにＭｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，６８３，２０２号明細書（１９８７）；およびＩｎｎｉｓ，ｅｔ ａｌ、ＰＣＲプロトコール 方法および応用に対する指針（ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、編集、アカデミック出版社、サンディエゴ、カリフォルニア州（１９９０）に見いだされる。ゲノムＰＣＲ増幅に関して市販されているキットが当該技術分野では知られている。例えば、アドバンテイジ−ＧＣ ゲノムＰＣＲキット（クロンテック：Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照にされたい。さらに例えば、Ｔ４ 遺伝子３２タンパク質（ベーリンガーマンハイム：Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を使用して、長いＰＣＲ産物の収量を向上させることができる。
また本発明の単離された核酸は、既知の方法の使用により直接的な化学合成で調製することもできる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ、同上を参照にされたい）。化学合成は一般に１本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、これを相補的配列とのハイブリダイゼーションにより、または１本鎖を鋳型として使用したＤＮＡポリメラーゼによる重合化により２本鎖に転換することができる。当業者はＤＮＡの化学合成は約１００余りの塩基の配列に限定されるが、より長い配列は短い配列の連結により得ることができると認識するだろう。
記載するポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
上記のように、本発明は選択的なハイブリダイゼーション条件下で本明細書に開示するポリヌクレオチドにハイブリダイズする単離された核酸を提供する。すなわちこの態様のポリヌクレオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含んでなる核酸を単離、検出、および／または定量するために使用することができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、寄託されたライブラリー中の一部もしくは完全長クローンを同定し、単離し、または増幅するために使用することができる。幾つかの態様では、ポリヌクレオチドは単離されたゲノムまたはｃＤＮＡ配列であり、あるいはヒトまたは哺乳動物の核酸ライブラリーに由来するｃＤＮＡに相補的である。
好ましくはｃＤＮＡライブラリーは少なくとも８０％完全長の配列、好ましくは少なくとも８５または９０％完全長の配列、そしてより好ましくは少なくとも９５％完全長の配列を含んでなる。ｃＤＮＡライブラリーは稀な配列の提示を増すために標準化することができる。低または中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件が典型的であるが、排他的ではなく、相補的配列に対して配列同一性が低い配列で使用する。中程度および高ストリンジェンシー条件は、任意により大きな同一性の配列のために使用することができる。低いストリンジェンシー条件は、約７０％の配列同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能とし、そしてオルソロガスまたはパラロガス配列を同定するために使用することができる。
場合により本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載するポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質または抗体の少なくとも一部をコードする。本発明のポリヌクレオチドは、本明細書にタンパク質または抗体をコードするポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするために使用できる核酸配列を包含する。例えば、引用により本明細書に編入するＡｕｓｕｂｅｌ、同上；Ｃｏｌｌｉｇａｎ、同上を参照にされたい。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ＣＮＧＨ００１０アナログタンパク質のＣＮＧＨ００１０受容体のような細胞結合パートナーへの結合に影響を及ぼすことにより、ＣＮＧＨ００１０タンパク質機能をモジュレートする物質の存在について、媒質をアッセイするためにも有用である。モジュレーターの例は、ポリペプチドまたは低有機分子がある。
また本発明のポリペプチドは、薬剤開発のリード化合物を同定するために使用することもできる。本明細書に記載するポリペプチドの構造は、ＮＭＲおよびＸ−線結晶学のような多くの方法により容易に決定することができる。配列が類似するが、目的とする分子に誘導する生物学的活性が異なるポリヌクレオチドの構造の比較は、目的の構造−活性関係についての情報を提供することができる。構造−活性関係の調査から得た情報は、目的分子に関連して予測される特性を試験することができる修飾されたポリペプチドまたは他の低分子もしくはリード化合物のいずれかを設計するために使用することができる。リード化合物の活性は、本明細書に記載するものに類似するアッセイを使用して評価することができる。
また構造−活性関係についての情報は、共結晶化実験からも得ることができる。これらの実験では、所望する活性をもつポリペプチドを目的分子と一緒に結晶化し、そして複合体のＸ−線構造を決定する。次いで構造は天然状態の目的分子の構造と比較することができ、そしてそのような比較からの情報を使用して所望の活性を保有することが期待される化合物を設計することができる。
また本発明は、本発明のポリペプチドに結合し、これによりＣＮＧＨ００１０シグナル伝達に影響を及ぼす新規化合物を同定する方法も企図する。タンパク質−タンパク質相互作用は、共免疫沈降、架橋化および勾配もしくはクロマトグラフィーカラムを通す同時精製（ｃｏ−ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のような通例の方法を使用して同定することができる。また分子と相互作用するタンパク質をコードする遺伝子の同時同定をもたらす方法も使用することができる。これらの方法には標識した分子で発現ライブラリーをプロービングすること（ｐｒｏｂｉｎｇ）を含む。さらにｘ−線結晶学実験を、基質および分子との相互作用を評価する手段として使用することができる。
融合タンパク質および組換えタンパク質は、上記方法に使用することができると考えら
れる。ＣＮＧＨ００１０シグナル伝達経路に影響する、またはモジュレートする物質および化合物を評価するために、本発明の方法を応用するために適する試薬を、都合の良いキットに包装し、適当な容器に包装された必要な材料を提供することができる。このキットは、本発明の方法を行うために有用な適切な支持体を含むことができる。
成熟ＣＮＧＨ００１０またはそのアナログはモジュレート、すなわち増殖および活性化のような真核細胞の活性および／または数を上げたり、または下げたりするために使用することができる。さらに成熟ＣＮＧＨ００１０またはそのアナログは、細胞分化および移動を調節するために使用することができる。ＣＮＧＨ００１０は分泌され得るので、成熟ＣＮＧＨ００１０またはそのアナログは、限定するわけではないが乾癬、慢性関節リウマチ、気腫、喘息、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、接触皮膚炎を含む種々の皮膚炎、紫外線角膜炎、損傷治癒、瘢痕形成、種々の腎臓疾患、種々の呼吸疾患、子宮内膜炎のような種々の生殖器疾患、黒色腫、偏平上皮癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓細胞癌、グレーヴズ病および他の炎症性および過剰増殖性疾患のような細胞の増殖、分化および移動に依存する種々の免疫媒介型炎症疾患を処置するために使用することができる。加えて、成熟ＣＮＧＨ００１０またはそのアナログは、感染性疾患に応答する免疫を強化するために使用することができる。成熟ＣＮＧＨ００１０またはそのアナログは種々の感染性、過剰増殖性および炎症性疾患を処置するために、単独で、あるいはアジュバントとして抗原と組み合わせて使用することができる。
本発明の治療的使用のための投与様式は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮のような、宿主へ作用物質を速達する任意の適当な経路であることができる。
本発明のペプチドは、製薬学的に許容され得る担体中に有効成分として有効量の結合剤を含有する製薬学的組成物として調製することができる。好ましくは生理学的ｐＨで緩衝化された即注入状態の結合剤を含有する水性懸濁液または溶液が好ましい。非経口投与用の組成物は、共通して本発明の結合剤の溶液、または製薬学的に許容され得る担体、好ましくは水性担体に溶解されたそれらのカクテルを含んでなる。種々の水性担体、例えば、０．４％塩溶液、０．３％グリセリン等を使用することができる。これらの溶液は滅菌されており、そして一般に粒状物質を含まない。これらの溶液は通例の周知な滅菌法（例えば、濾過）により滅菌され得る。組成物は、ｐＨ調節および緩衝化剤のような適切な生理学的条件に必要な製薬学的に許容される補助物質を含むことができる。そのような製剤中の本発明のポリペプチドの濃度は広く変動することができ、すなわち重量で約０．５％未満から、通常は１％で、もしくは少なくとも約１％から最大１５もしくは２０％で変動し、そして選択した特定の投与様式に従い主に流体容積、粘稠度等に基づき選択される。
このように筋肉内注射用の本発明の製薬学的組成物は、１ｍＬの滅菌された緩衝化水、および約１ｎｇ〜約１００ｍｇ、例えば、約５０ｎｇ〜約３０ｍｇ以上、好ましくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇの間の本発明のポリペプチドを含有するように調製することができる。同様に、静脈内注入用の製薬学的組成物は、最高約２５０ｍｌの滅菌リンゲル溶液、および約１ｍｇ〜約３０ｍｇ、そして好ましくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明のポリペプチドを含有するように作成することができる。非経口的に投与可能な組成物を調製するための実際の方法は周知であり、または当業者には明白であり、そして例えば、レミングトンの製薬の科学および実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第１９版、マック出版社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ）、イーストン、ペンシルバニア州（１９９５）にさらに詳細に記載されている。
本発明のポリペプチドは製薬学的調製物中にある場合、単位剤形で存在することができる。適切な治療に有効な用量は、当業者により容易に決定することができる。定めた用量は必要ならば医師により処置中に適切に選択された適切な時間間隔で反復してよい。
本発明のポリペプチドは保存のために凍結乾燥し、そして使用前に適当な担体中で再構成することができる。この技法は通常のタンパク質調製で効果的であることが示され、そして当該技術分野で知られている凍結乾燥および再構成技術を使用することができる。
本発明のポリペプチドをスクリーニングアッセイで使用するために発現させる場合、一般にポリペプチドは細胞の表面に生産されることが好ましい。この出来事では、細胞はスクリーニングアッセイで使用する前に回収することができる。ポリペプチドが培地に分泌される場合、ポリペプチドを回収し、そして精製するために培地を回収することができる。細胞内で生産される場合、細胞は最初にポリペプチドを回収する前に溶解しなければならない。
また本発明は、診断薬として本発明のポリヌクレオチドの使用に関する。機能不全に関連する配列番号２のポリヌクレオチドを特徴とする遺伝子の変異した形態の検出は、遺伝子の過小発現、過剰発現または改変された発現をもたらす疾患の診断または疾患に対する素因に加えて、またはそれらを定める診断用の道具を提供する。遺伝子に変異を持つ個体は、種々の技術によりＤＮＡレベルで検出することができる。
診断用の核酸は、血液、尿、唾液、組織生検または剖検材料のような個体の細胞から得ることができる。ゲノムＤＮＡは検出用に直接使用することができ、または分析前にＰＣＲもしくは他の増幅技術を使用することにより酵素的に増幅することができる。ＲＮＡまたはＤＮＡも同様の様式で使用することができる。欠失および挿入は、標準的な遺伝子型に比べて増幅生成物のサイズの変化により検出することができる。点突然変異は、増幅したＤＮＡを標識したＣＮＧＨ００１０ヌクレオチド配列にハイブリダイズさせることにより同定することができる。好ましくは対合配列は、ＲＮａｓｅ消化により、または融解温度の差異により誤対合二本鎖から識別することができる。またＤＮＡ配列の差異も変性剤を含むか、もしくは含まないゲル中でのＤＮＡフラグメントの電気泳動的移動度における変化により、または直接的なＤＮＡシークエンシング（例えば、Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０：１２４２）により検出することができる。また特別な位置での配列の変化は、ＲＮａｓｅおよびＳ１保護または化学的分解法のようなヌクレアーゼ保護アッセイにより明らかにすることができる（Ｃｏｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８５）８５：４３９７−４４０１を参照にされたい）。別の態様では、ＣＮＧＨ００１０ヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなるオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築して、例えば、遺伝子変異の効率的なスクリーニングを行うことができる。アレイ技法は周知であり、そして一般的な応用性を有し、しかも遺伝子発現、遺伝子連鎖および遺伝子変異性を含む分子遺伝学における様々な問題に取り組むために使用することができる（例えば、Ｍ．Ｃｈｅｅ
ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ２７４，ｐｐ６１０−６１３（１９９６）を参照にされたい）。
診断アッセイは、記載する方法によりＣＮＧＨ００１０遺伝子中の変異の検出を通して、関連する疾患に対する感受性を診断または決定する方法を提供する。さらにそのような疾患は、ポリペプチドまたはｍＲＮＡのレベルが異常に低下または増加した個体に由来す
るサンプルの測定を含んでなる方法により診断することができる。低下または増加した発現は、例えば、核酸増幅、例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護、ノーザンブロッティングおよび他のハイブリダイゼーション法のようなポリヌクレオチドの定量に関して当該技術分野で周知な任意の方法を使用して、ＲＮＡレベルで測定することができる。宿主に由来するサンプル中の本発明のポリペプチドのようなタンパク質のレベルを測定するために使用できるアッセイ技術は、当業者に周知である。そのようなアッセイ法には、ラジオイムノアッセイ、競合的結合アッセイ、ウエスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡがある。
このように別の観点では、本発明は
（ａ）本発明のポリヌクレオチド、好ましくは配列番号２、４、６、８および１０のヌクレオチド配列およびバリアント、任意の配列番号２、４、６、８および１０のヌクレオチド配列またはバリアントと少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、またはそのフラグメントの１つ；
（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）本発明のポリペプチド、好ましくは配列番号３、５、７、９および１１のポリペプチドおよびバリアント、任意の配列番号３、５、７、９および１１のポリペプチドおよびバリアントと少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチド、またはそのフラグメントの１つ；あるいは
（ｄ）本発明のポリペプチド、そのバリアントおよびフラグメント、好ましくは配列番号３、５、７、９および１１およびバリアントの１つに対する抗体
を含んでなるキットに関する。
そのようなキットでは、上記の成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が実質的な成分を構成することができると考えられる。そのようなキットは、限定するわけではないが、乾癬、慢性関節リウマチ、気腫、喘息、糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、アレルギー性皮膚炎、接触皮膚炎を含む種々の皮膚炎、紫外線角膜炎、損傷治癒、瘢痕形成、種々の腎臓疾患、種々の呼吸疾患、子宮内膜炎のような種々の生殖器疾患、黒色腫、偏平上皮癌、卵巣癌、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、腎臓細胞癌、グレーヴズ病および他の炎症性および過剰増殖性疾患のような疾患または疾患に対する感受性の診断に使用される。
本発明のヌクレオチド配列は、染色体同定に関しても価値がある。各ゲノム配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置を特異的に標的とし、そしてハイブリダイズすることができる。本発明による染色体に対する関連配列のマッピングは、それらの配列と遺伝子関連疾患および状態とを相関させるために有用となり得る。いったん配列が正確な染色体位置にマップされれば、染色体上の配列の物理的位置は、遺伝子地図データと相関させることができる。そのようなデータは例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ、ヒトにおけるメンデルの遺伝（Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍｅｎ）（ジョンスホプキンス大学ウェルチメディカルライブラリーを通して、オンラインで利用することができる）に見いだされる。同じ染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との間の関係は、連鎖分析を通して同定することができる（すなわち物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ））。
影響を受けた、または受けていない個体間のｃＤＮＡまたはゲノム配列における差異も測定することができる。影響を受けた個体の幾らか、またはすべてに変異が観察されるが、正常個体には観察されない場合、変異は疾患の原因である可能性がある。本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体は、細胞中のｍＲＮＡおよびポリペプチドの生産について、加えた化合物の効果を検出するスクリーニング法を形成するためにも使用することができる。例えば、ＥＬＩＳＡアッセイは、当該技術分野で既知の標準法によりモノ
クローナルおよびポリクローナル抗体を使用して、ポリペプチドの分泌または細胞に結合したレベルを測定するために構築することができる。これは適当に操作された細胞または組織に由来するポリペプチドの生産を阻害または強化できる作用物質（それぞれアンタゴニストまたはアゴニストと呼ぶ）を発見するために使用することができる。
ポリペプチドは存在するならば膜結合型または溶解性受容体を、当該技術分野で知られている標準的な受容体結合技術を介して同定するためにも使用することができる。これらには限定するわけではないが、リガンド結合および架橋結合アッセイを含み、ここでポリペプチドは検出または精製するために、放射性同位体（例えば、１２５Ｉ）で標識され、化学的に修飾され（例えば、ビオチン化）、またはペプチド配列に融合され、そして推定上の受容体の供給源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液）とインキュベーションされる。他の方法には表面プラスモン共鳴および分光法のような生物物理学的技法がある。これらのスクリーニング法は、ポリペプチドのその受容体への結合と競合するポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストが存在するならば、それらを同定するためにも使用することができる。これらのアッセイを行うための標準法は、当該技術分野では周知である。
有力なポリペプチドアンタゴニストの例には、抗体または場合によりオリゴヌクレオチドまたはポリペプチドと緊密に関連したリガンド、基質、受容体、酵素等であるタンパク質を含む。例えば、リガンド、基質、受容体、酵素等のフラグメント；また本発明のポリペプチドには結合できるが、応答、すなわちポリペプチドの活性に対しては応答を誘導できない低分子。
このように別の観点では、本発明は本発明のポリペプチドに関するアゴニスト、アンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素等；あるいはそのようなポリペプチドの生産を低下または強化する化合物を同定するスクリーニングキットに関し、これは：
（ａ）本発明のポリヌクレオチド；
（ｂ）本発明のポリペプチドを発現する組換え細胞；
（ｃ）本発明のポリペプチドを発現する細胞膜；または
（ｄ）本発明のポリペプチドに対する抗体、このポリペプチドは好ましくは配列番号３、５、７、９、および１１またはスプライスバリアントの１つ
を含んでなる。
そのようなキットでは、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が実質的な成分を構成することができると考えられる。
当業者は、本発明のポリペプチドが；
（ａ）第１例ではポリペプチドの３次元的構造を決定することにより
（ｂ）アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの反応性または結合部位（１もしくは複数）の可能性について３次元的構造を推定し；
（ｃ）推定される結合または反応部位に結合または反応することが予測される候補化合物を合成し；そして
（ｄ）候補化合物が真にアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターであるかどうかについて試験する
ことにより、本発明のアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの構造に基づく設計法にも使用できると容易に考えるだろう。
さらにこれは通常、対話式（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ）のプロセスになるだろう。
処置に使用するポリペプチドも、個体中で内的に生成することができ、治療的なモダリ
ティーでは上記のように「遺伝子治療」と呼ばれることが多い。このように例えば、個体に由来する細胞は、生体外でポリペプチドをコードするためにＤＮＡまたはＲＮＡのようなポリヌクレオチドを用いて、例えば、レトロウイルスプラスミドベクターの使用により、
工作することができる。次いで細胞を個体に導入する。
抗−ＣＮＧ００１０抗体
本発明の抗体は、本発明のＣＮＧＨ００１０タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分に対して特異的な少なくとも１つの特定したエピトープまたはそれらの組み合わせに結合する。エピトープは配列番号３、５、７、９および１１のアミノ酸配列の少なくとも一部またはそのバリアント（例えば、以下に記載するスプライスバリアント）を含んでなる抗体結合領域を含んでなることができ、このエピトープは好ましくは配列の少なくとも１〜５個のアミノ酸を含んでなる。抗体は限定するわけではないがヒト、マウス、ウサギ、ラット、齧歯類、霊長類またはそれらの任意の組み合わせ等を含むか、またはそれらに由来することができる。
本明細書に記載する抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、限定するわけではないがＣＮＧＨ００１０依存的受容体のリン酸化、受容体のインターナリゼーション、細胞接着、移動および浸潤を中和すること、および細胞マーカーのシグナル分子または適合（ａｄａｐｔａｔｉｏｎ）の誘導といった少なくとも１つの活性を有する。このように抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、限定するわけではないがヒトＣＮＧＨ００１０の少なくとも１つの生物学的活性のような対応する活性に関して、既知の方法に従いスクリーニングすることができる。抗体は、細胞、組織、臓器または動物（哺乳動物およびヒトを含む）を測定または作用するために、限定するわけではないが少なくとも１つの免疫障害もしくは疾患、心血管障害もしくは疾患、感染性、悪性、および／または神経的障害もしくは疾患、あるいは他の既知の、または特定されたＣＮＧＨ００１０関連状態の少なくとも１つから選択される少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０関連疾患または状態で、症状を診断し、監視し、モジュレートし、処置し、緩和し、発症の防止を助けるために使用することができる。
抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の定義および特性決定
本明細書で使用するように、「抗−ＣＮＧＨ００１０抗体」、「抗−ＣＮＧＨ００１０抗体部分」または「抗−ＣＮＧＨ００１０抗体フラグメント」および／または「抗−ＣＮＧＨ００１０抗体バリアント」等は、限定するわけではないが重もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、骨格領域、または任意のそれらの部分のような免疫グロブリン分子の少なくとも１つの部分、あるいは本発明の抗体に挿入することができる本発明のＣＮＧＨ００１０タンパク質またはポリペプチドに由来するＣＮＧＨ００１０受容体または結合タンパク質の少なくとも１つの部分を含んでなる分子を含有するタンパク質またはポリペプチドを含む。そのような抗体は場合により、限定するわけではないがそのような抗体が少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０活性もしくは結合を、またはＣＮＧＨ００１０リガンド活性もしくは結合を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｓｉｔｕおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでモジュレートし、減少させ、増加させ、弱め（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）、強め（ａｎｇｏｎｉｚｅ）、和らげ、緩和し、遮断し、阻害し、排除し、かつ／または妨害する場合のように、さらに特異的リガンドに影響を及ぼす。非限定的な例として、本発明の適当な抗−ＣＮＧＨ００１０抗体、特定部分またはバリアントは、本発明のＣＮＧＨ００１０タンパク質またはポリペプチド、またはその特定部分、バリアントまたはドメインの少なくとも１つで結合することができる。また適当な抗−ＣＮＧＨ００１０抗体、特定部分またはバリアントは、限定するわけではないがＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、ＣＮＧＨ００１０放出、ＣＮＧＨ００１０受容体シグナル発信、ＣＮＧＨ００１０活性、ＣＮＧＨ００１０生産および／または合成のようなＣＮＧＨ００１０活性または機能の少なくとも１つに場合により影響を及ぼすこともできる。
用語「抗体」は、さらに単鎖抗体およびそのフラグメントを含め抗体またはその特定フラグメントまたは部分の構造および／または機能を模する抗体模造物または抗体の部分を含む抗体、その消化フラグメント、特定部分およびバリアントを包含することを意図する。機能的フラグメントには、哺乳動物のＣＮＧＨ００１０に結合する抗原結合フラグメントを含む。例えば、限定するわけではないがＦａｂ（例えば、パパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えば、ペプシン消化および部分的還元による）、およびＦ（ａｂ’）２（例えば、ペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えば、プラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えば、ペプシンまたはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えば、ペプシン消化、部分的還元および再凝集による）、ＦｖまたはｓｃＦｖ（例えば、分子生物学的技術による）フラグメントを含むＣＮＧＨ００１０またはその部分に結合することができる抗体フラグメントは、本発明により包含される（例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、同上）を参照にされたい。
そのようなフラグメントは、当該技術分野で知られ、かつ／または本明細書に記載するような酵素的分解、合成または組換え技法により生産することができる。抗体は１もしくは複数の終止コドンが天然の終止コドンの上流に導入された抗体遺伝子を使用して、種々の短縮化された形態で生産することもできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする遺伝子の組み合わせは、重鎖のＣＨ１ドメインおよび／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計することができる。抗体の種々の部分を通例の技法によりキメラ的に一緒に連結するか、または遺伝子工学的技法を使用して連続するタンパク質として調製することができる。
本明細書で使用する「ヒト抗体」という用語は、実質的にタンパク質の各部分（例えば、ＣＤＲ、骨格、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ（ＶＬ、ＶＨ））がヒトでは実質的に非免疫原性であり、わずかな配列の変化（ｃｈａｎｇｅ）または変更（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を含む抗体を指す。同様に、霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジー等）、齧歯類（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスター等）を指定する抗体、および他の哺乳動物はそのような種、亜属、属、亜科、科に特異的な抗体を指す。さらに本発明のキメラ抗体は、上記の任意の組み合わせを含むことができる。そのような変化または変更は、任意に、そして非修飾抗体に比べてヒトまたは他の種で免疫原性を保持し、または下げることが好ましい。このようにヒト抗体はキメラまたはヒト化抗体とは異なる。ヒト抗体は機能的に再配列されたヒトの免疫グロブリン（例えば、重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物または原核もしくは真核細胞により生産されることができると指摘される。さらにヒト抗体が単鎖抗体である時、これは天然のヒト抗体では見られないリンカーペプチドを含んでなることができる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを連結する２〜約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基のようなリンカーペプチドを含んでなることができる。そのようなリンカーペプチドはヒト起源であると考えられる。
本発明の単離された抗体は、本明細書に記載する単離された、または調製された抗体を含んでなる。好ましくはヒト抗体または抗原結合フラグメントはヒトＣＮＧＨ００１０に結合し、これにより部分的または実質的にタンパク質の少なくとも１つの生物学的活性を中和する。少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０タンパク質またはフラグメントの少なくとも１つの生物学的活性を部分的に、または好ましくは実質的に中和する抗体またはその特定部分またはバリアントは、タンパク質またはフラグメントに結合し、これによりＣＮＧＨ００１０のＣＮＧＨ００１０受容体への結合を介して、あるいは他のＣＮＧＨ００１０依存的もしくは媒介型メカニズムを介して媒介される活性を阻害することができる。本明細書で使用する「中和抗体」という用語は、ＣＮＧＨ００１０依存的活性をアッセイに依存して、約２０〜１２０％、好ましくは少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％以上まで阻害できる抗体を指す。ＣＮＧＨ００１０依存的活性を阻害する抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の能力は、本明細書に記載され、かつ／または当該技術分野で知られているように少なくとも１つの適切なＣＮＧＨ００１０タンパク質または受容体アッセイにより評価されることが好ましい。本発明のヒト抗体は任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等）またはアイソタイプであることができ、そしてカッパまたはラムダ軽鎖を含んでなることができる。１つの態様では、ヒト抗体はＩｇＧ重鎖または定めたフラグメント、例えば、少なくとも１つのアイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４を含んでなる。この型の抗体は、本明細書に記載され、かつ／または当該技術分野で知られているように少なくとも１つのヒト軽鎖（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＭ（例えば、γ１、γ２、γ３、γ４）導入遺伝子を含んでなるトランスジェニックマウスまたは他のトランスジェニック非ヒト哺乳動物を使用することにより調製することができる。別の態様では、抗−ヒトＣＮＧＨ００１０ヒト抗体は、ＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１軽鎖を含んでなる。
本発明の少なくとも１つの抗体は、本明細書に記載する少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分または任意のそれらの組み合わせに特異的な少なくとも１つの特定したエピトープに結合する。少なくとも１つのエピトープは、本明細書に記載するヒトＣＮＧＨ００１０の受容体結合領域に由来するペプチド配列に対応するタンパク質配列の少なくとも１つの部分を含んでなる少なくとも１つの抗体結合領域を含んでなることができ、このエピトープは好ましくはタンパク質の少なくとも１つの細胞外の、可溶性の、親水性の、外部の、また細胞質部分を含んでなる。
一般に本発明のヒト抗体または抗原結合フラグメントは、少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）または少なくとも１つの重鎖可変領域のバリアント、および少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）または少なくとも１つの軽鎖可変領域のバリアントを含んでなる抗原結合領域を含んでなる。
少なくとも２つの異なる抗原に関して結合特異性を有するモノクローナル、好ましくはヒトもしくはヒト化された抗体である二重特異性の、ヘテロ特異性ヘテロ結合体および類似の抗体も使用することができる。この場合では、結合特異性の１つが本発明の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０タンパク質に関し、そしてもう１つが任意の他の抗原に関する。二重特異的抗体の作成法は、当該技術分野で知られている。従来は二重特異性抗体の組換え生産は、２種の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づき、ここで２種の重鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな取り合わせにより、これらハイブリドーマ（クワドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生産し、その中の１つだけが正しい二重特異性構造を有する。通常はアフィニティクロマトグラフィー工程により行われる正しい分子の精製は幾分繁雑で、そして生成物の収量は低い。同様の手法が例えば、国際公開第９３／０８８２９号パンフレット、明細書米国特許第６２１０６６８号、同第６１９３９６７号、同第６１３２９９２号、同第６１０６８３３号、同第６０６０２８５号、同第６０３７４５３号、同第６０１０９０２号、同第５９８９５３０号、同第５９５９０８４号、同第５９５９０８３号、同第５９３２４４８号、同第５８３３９８５号、同第５８２１３３３号、同第５８０７７０６号、同第５６４３７５９号、同第５６０１８１９号、同第５５８２９９６号、同第５４９６５４９号および同第４６７６９８０号明細書、国際公開第９１／００３６０号、同第９２／００３７３号パンフレット、欧州特許第０３０８９号明細書、Ｔｒａｕｎｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）およびＳｕｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０（１９８６）に開示され、これらは引用により全部、本明細書に編入する。
本発明の方法および組成物に有用な抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、任意にＣＮＧＨ００１０に結合する高い親和性を特徴とし、そして場合により、そして好ましくは低い毒性を有する。特に本発明の抗体、特定したフラグメントまたはバリアントは、可変領域、定常領域および骨格のような個々の成分が個別に、かつ／または集合して場合により、そして好ましくは低い免疫原性を保有する場合に本発明に適している。本発明に使用することができる抗体は場合により、見通しのきく（ｍｅａｓｕｒａｂｌｅ）症状の緩和、および低い、および／または許容し得る低毒性で長期間、患者を処置するそれらの能力により特徴付けられる。低い、または許容し得る免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の適切な性質は、達成できる治療的結果に貢献することができる。本明細書では「低い免疫原性とは」、処置した患者の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満に有意なＨＡＭＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＨＡ応答を生じ、かつ／または処置した患者に低い力価を生じる（二重抗原酵素イムノアッセイで測定した時、約３００未満、好ましくは約１００未満）と定める（例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）、各々、引用により全部編入する）。
抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の応用は、少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含んでなる有効量の組成物または製薬学的組成物を、症状、効果もしくはメカニズムにおいてそのようなモジュレーション、処置、緩和、防止または低減が必要な細胞、組織、臓器、動物または患者に投与することを含んでなることができる。有効量は単回（例えば、ボーラス）、多回投与もしくは連続投与あたり約０．００１〜５００ｍｇ／ｋｇの量、または単回、多回もしくは連続投与あたり約０．０１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を達成する量、あるいは本明細書に記載する、または関連する技術分野で知られている既知の方法を使用してなされ、そして決定された任意の有効範囲またはその中の値の量を含んでなることができる。
当業者は、本発明が少なくとも１つの生物学的に活性な本発明の抗体を含むと考えるだろう。生物学的に活性な抗体は、天然（非合成）の、内因性の、または関連する、および既知の抗体の少なくとも２０％、３０％または４０％、そして好ましくは少なくとも５０％、６０％または７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％、９０％または９５％〜１００％の特異的活性を有する。酵素的活性および基質特異性を測定するアッセイおよび定量法は、当該技術分野で周知である。
別の観点では、本発明はヒト抗体および抗原−結合フラグメントに関し、これは本明細書に記載するように有機部分の共有結合により修飾される。そのような修飾は、改善された薬物動態学的特性（例えば、インビボ血清半減期の上昇）を持つ抗体または抗原結合フラグメントを生じることができる。この有機部分は直鎖または分岐した親水性のポリマー性基、脂肪酸基、または脂肪酸エステル基であることができる。単独または共有的に親水性ポリマーに結合しているジステロイルホスファチジルエタノールアミン部分のような脂質分子が有用である。特定の態様では親水性のポリマー性基は約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有することができ、そしてポリアルカングリコール（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーまたはポリビニルピロリドンであることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル基は約８〜約４０個の炭素原子を含んで成ることができる。
本発明の修飾された抗体および抗原結合フラグメントは、直接的または間接的に抗体に共有的に結合した１もしくは複数の有機部分を含んで成ることができる。本発明の抗体または抗原結合フラグメントに結合する各有機部分は、独立して親水性ポリマー性基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であることができる。本明細書で使用する用語「脂肪酸」は、モノ−カルボン酸およびジ−カルボン酸を包含する。本明細書で使用する用語「親水性のポリマー性基」とは、水中でオクタンよりも溶解性の有機ポリマーを指す。例えば、ポリリシンは水中でオクタンより可溶性である。すなわちポリリシンの共有結合により修飾された抗体は、本発明に包含される。本発明の抗体を修飾するために適する親水性ポリマーは直鎖または分岐であることができ、そして例えば、ポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧ等）、炭水化物（例えば、デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖等）、親水性アミノ酸のポリマー（例えば、ポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパルテート等）、ポリアルカンオキシド（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド等）、およびポリビニルピロリドンを含む。好ましくは本発明の抗体を修飾する親水性ポリマーは、別の分子量の物体として約８００〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えば、ＰＥＧ５０００およびＰＥＧ２０，０００（ここで下付文字は、ダルトンでのポリマーの平均分子量である）を使用することができる。親水性のポリマー性基は１〜約６個のアルキル、脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換することができ。脂肪酸または脂肪酸エステル基で置換される親水性ポリマーは、適当な方法を使用することにより調製することができる。例えば、アミン基を含んで成るポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシレートにカップリングすることができ、そして脂肪酸または脂肪酸エステル上で活性化されたカルボキシレート（例えば、Ｎ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールにより活性化される）を、ポリマー上のヒドロキシル基にカップリングすることができる。
本発明の抗体を修飾するために適切な脂肪酸および脂肪酸エステルは飽和であることができ、あるいは１以上の不飽和単位を含むことができる。本発明の抗体を修飾するために適切な脂肪酸には、例えば、ｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ４０）、シスΔ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレート）、オールシス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸等を含む。適当な脂肪酸エステルには、直鎖もしくは分枝低級アルキル基を含んで成るジカルボン酸のモノ−エステルを含む。低級アルキル基は、１から約１２、好ましくは１から約６個の炭素原子を含んで成ることができる。
修飾されたヒト抗体および抗原結合フラグメントは、１以上の修飾剤を用いた反応によるような適当な方法を使用して調製することができる。本明細書で使用する用語「修飾剤」は、活性化基を含んで成る適当な有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。「活性基」は、適当な条件下で第２の化学基と反応し、これにより修飾剤と第２の化学基との間に共有結合を形成することができる化学的部分または官能基である。例えば、アミン反応性の活性基には、トシラート、メシラート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）等のような求電子性基を含む。チオールと反応することができる活性基には、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）等を含む。アルデヒド官能基をアミンまたはヒドラジドを含有する分子にカップリングさせることができ、そしてアジド基を三価のリン基と反応させてホスホルアミデートまたはホスホルイミド結合を形成することができる。活性基を分子に導入する適当な方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．生物結合法（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、アカデミック出版；サンディエゴ、カリフォルニア州、１９９６を参照にされたい）。活性化基は有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接、またはリンカー部分、例えば、二価のＣ１−Ｃ１２基（ここで１以上の炭素原子が酸素、窒素または硫黄のようなヘテロ原子に置き換わることができる）を介して結合させることができる。適当なリンカー部分には、例えば、テトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−、−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−を含む。リンカー部分を含んで成る修飾剤は、例えば、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えば、モノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で脂肪酸と反応させて、遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間にアミド結合を形成することにより生成することができる。Ｂｏｃ保護基はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた処理により生成物から除去し、記載した別のカルボキシレートにカップリングすることができる１級アミンを露出することができるか、または無水マレイン酸と反応させ、そして生じた生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成することができる（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，国際公開第９２／１６２２１号パンフレットを参照にされたい（この教示は引用により本明細書に編入する））。
本発明の修飾した抗体は、ヒト抗体または抗原結合フラグメントを修飾剤と反応させることにより生成することができる。例えば、有機部分を、アミン−反応性修飾剤（例えば、ＰＥＧのＮＨＳエステル）を使用することにより非−部位特異的様式で抗体に結合することができる。修飾したヒト抗体または抗原結合フラグメントは、抗体または抗原結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば、鎖内ジスルフィド結合）を還元することにより調製することもできる。還元された抗体または抗原結合フラグメントは、次いでチオール−反応性の修飾剤と反応させて、本発明の修飾された抗体を生成することができる。本発明の抗体の特異的部位に結合する有機部分を含んで成る修飾されたヒト抗体および抗原結合フラグメントは、逆タンパク質溶解（Ｆｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３ １９９２；Ｗｅｒｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７ １９９４；Ｋｕｍａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１ １９９７；Ｉｔｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）；５９−６８ １９９６；Ｃａｐｅｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３ １９９７のような適当な方法、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，生物結合法（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、アカデミック出版；サンディエゴ、カリフォルニア州１９９６）のような適当な方法を使用して調製することができる。
モノクローナル抗体の生成
本発明のモノクローナル抗体は、従来の免疫感作およびハイブリドーマ技術により生成することができる。マウスを本発明のポリペプチドを含んでなるヒトＣＮＧＨ００１０抗原性組成物で免疫感作した後、脾臓細胞またはリンパ節組織に由来するリンパ球を免疫感作した動物から取り出し、そしてミエローマ細胞との融合により、またはエプスタインバー（ＥＢ）ウイルスの形質転換により不死化する。モノクローナル抗体は所望の抗体を発現するクローンについてスクリーニングすることにより得られる。マウスは試験モデルとしてよく使用されるが、ヒト個体または抗体生産細胞を含む任意の哺乳動物個体を本発明の方法に従い操作して、ヒトおよびバブリッド細胞株を含む哺乳動物の生産の基礎として役立てることができる。抗体発現Ｂ細胞から抗体分子の組換えＤＮＡを直接クローニングするための技術は、本発明の範囲内である。そのようなＢ細胞は蛍光活性化セルソーターにより単離することができる。
日常的にマウスモノクローナル抗体が生成されているが、本発明はそのように限定されない。治療的応用には、ヒトまたはヒト化抗体が望まれる。そのような抗体はヒトのハイブリドーマを使用することにより、またはヒト化抗体を作成することにより得ることができる。ヒト化抗体は非ヒト抗体の特異的セグメントを対応するヒト抗体遺伝子のセグメントに置き換えることにより開発することができる。この方法は元の抗体の軽および重鎖可
変領域のほとんどまたはすべてのＣＤＲ領域を保持し、そして骨格領域をほとんどヒト配列に置き換える［欧州特許第１８４１８７号；同第１７１４９６号；同第１７３４９４号明細書および国際公開第８６／０１５３３号パンフレット］。またヒトモノクローナル抗体は、ゲノム中にヒト抗体をコードする遺伝子または遺伝子セグメントを含むトランスジェニックマウスでも生成される［米国特許第６，１６２，９６３号明細書；国際公開第９３／１２２２７号明細書；米国特許第５，８７７，５３９７号；同第５，８７４，２９９号；同第５，８１４，３１８号；同第５，７８９，６５０号；同第５，７７０，４２９号；同第５，６６１，０１６号；同第５，６２５，１２６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，５４５，８０６号明細書；および国際公開第９１／１０７４１号パンフレット］。
ヒトモノクローナル抗体は、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、または関連するスクリーニングもしくは選択技術を使用して、インビトロまたはインビボで生成した組換え抗体ライブラリーからも得られる。主にヒト起源の抗体ライブラリーを生成するための手順の例は、Ａ．Ｋｎａｐｐｉｋおよびその他により開示されている［６５］［米国特許第６，２９１，１５８号；同第６，２９１，１５９号；同第６，２９１，１６０号および同第６，２９１，１６１号明細書］。そのようなライブラリーから特異的抗原標的に対するヒト抗体の選択法の例は、Ｂ，Ｋｒｅｂｓおよびその他に開示されている［６６］［米国特許第５，９５５，３４１号；同第５，７５９，８１７号；同第５，６５８，７２７号；同第６，２３５，４６９号；同第５，９６９，１０８号；同第５，８８６，７９３号明細書］。
抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を生成するための方法の詳細な説明
本発明の少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、当該技術分野で周知であるように場合により細胞株、混合細胞株、不死化細胞または不死化細胞のクローン群により生産することができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．編集、分子生物学の現在のプロトコール、ジョン ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，モレキュラークローニング：ア ラボラトリーマニュアル、第２版、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、抗体、ア ラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．編集、免疫学の現在のプロトコール、ジョン ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク（１９９４−２００１）：Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．編集、タンパク質科学の現在のプロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、ジョン ウィリー＆サンズ社、ニューヨーク、ニューヨーク州（１９９７−２００１）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
ヒトＣＮＧＨ００１０タンパク質（本明細書に記載するような）に特異的であるヒト抗体、そのバリアントまたはフラグメントは、本明細書に記載する単離および／またはＣＮＧＨ００１０タンパク質、そのバリアントまたは部分（合成ポリペプチドのような合成分子を含む）のような、本明細書に記載する適切な免疫原性抗原に対して生成することができる。他の特異的または一般的な哺乳動物抗体も同様に生成することができる。免疫原性抗原の調製およびモノクローナル抗体生産は、適当な技法を使用して行うことができる。
１つの取り組みでは、ハイブリドーマは適当な不死化細胞株（例えば、限定するわけではないがＳｐ２／０、Ｓｐ２／０−ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、＞２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２ ＳＡ３、Ｓｐ２ ＭＡＩ、Ｓｐ２ ＳＳＩ、Ｓｐ２ ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ １４４、ＡＣＴ ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ−１、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ−５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ １４４、ＮＡＭＡＩＷＡ、ＮＥＵＲＯ ２Ａ等のミエローマ細胞株、ヘテロミエローマ、それらの融合産物、またはそれらから派生する任意の細胞もしくは融合細胞、または当該技術分野で周知な他の適当な細胞系）（例えば、ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ．、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．等）を、限定するわけではないが、単離またはクローン化された脾臓、末梢血、リンパ節、扁桃または他の免疫もしくはＢ細胞を含む細胞のような抗体生産細胞、あるいは内因性もしくは異種の核酸のいずれかとして、組換えもしくは内因性のウイルス、細菌、藻類、原核生物、両生類、昆虫、爬虫類、魚類、哺乳類、齧歯類、ウマ、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、ヤギ、ヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、霊長類、真核生物、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮＡ、クロロプラストＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、１本鎖、２本鎖もしくは３本鎖、ハイブリダイズしたもの等、あるいはそれらの任意の組み合わせのような、重鎖または軽鎖定常または可変または骨格またはＣＤＲ配列を発現している任意の他の細胞と融合させることにより生産される。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，同上およびＣｏｌｌｉｇａｎ、免疫学、第２章を参照にされたい（引用により全部、本明細書に編入する）。
抗体生産細胞は、末梢血、または好ましくは目的の抗原で免疫感作されたヒトもしくは他の適切な動物の脾臓もしくはリンパ節からも得ることができる。任意の他の適当な宿主細胞も、本発明の抗体、その特定したフラグメントまたはバリアントをコードする異種の、または内因性の核酸を発現するために使用することができる。融合（ハイブリドーマ）または組換え細胞は、選択的な培養条件または他の適当な既知の方法を使用して単離し、そして限界希釈法、セルソーティングまたは他の既知の方法によりクローン化することができる。所望の特異性をもつ抗体を生産する細胞を、適当なアッセイにより選択することができる（例えば、ＥＬＩＳＡ）。
必要な特異性の抗体を生産または単離する他の適当な方法を使用することができ、これらには限定するわけではないが、当該技術分野で既知であり、かつ／または本明細書に記載するようにヒト抗体のレパートリーを生産することができるポリペプチドまたはタンパク質ディスプレイライブラリーから組換え抗体を選択する方法（例えば、限定するわけではないが、バクテリオファージ、リボゾーム、オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ等のディスプレイライブラリーを含み、例えば、ケンブリッジアンチボディテクノロジー（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ケンブリッジシャー、英国；モルホシス（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、マーチンスレイド／プラネグ、ドイツ；バイオバーション（Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ）、アベルデン、スコットランド、英国；バイオインベント（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ）、ランド、スウェーデン；ダイアックス社（Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．）、エンゾン（Ｅｎｚｏｎ）、アフィマックス／バイオサイト（Ａｆｆｙｍａｘ／Ｂｉｏｓｉｔｅ）；キソーマ（Ｘｏｍａ）、バークレー、カリフォルニア州；イクシス（Ｉｘｓｙｓ）から販売されている。例えば、欧州特許第３６８，６８４号明細書；ＰＣＴ／ＧＢ第９１／０１１３４号；同第９２／０１７７５号；同第９２／００２２４０号；同第９２／００８８３号；同第９３／００６０５号明細書；米国特許出願第０８／３５０２６０（５／１２／９４）号明細書；ＰＣＴ／ＧＢ第９４／０１４２２号；同第９４／０２６６２号；同第９７／０１８３５号；（ＣＡＴ／ＭＲＣ）明細書；国際公開第９０／１４４４３号；同第９０／１４４２４号；同第９０／１４４３０号パンフレット；ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２３４号パンフット；国際公開第９２／１８６１９号；同第９６／０７７５４号；（手書き）；同第９６／１３５８３号、同第９７／０８３２０号（モルホシス）；同第９５／１６０２７号（バイオインベント）；同第８８／０６６３０号；同第９０／３８０９号パンフレット（ダイアックス）；米国特許第４，７０４，６９２号明細書（エンゾン）；ＰＣＴ／ＵＳ９１／０２９８９号パンフレット（アフィマックス）；国際公開第８９／０６２８３号パンフレット；欧州特許第３７１９９８号；同第５５０４００号明細書；（キソーマ）；同第２２９０４６号明細書；ＰＣＴ／ＵＳ９１／０７１４９号パンフレット（イクシス）；または確立論的に生成されたペプチドもしくはタンパク質−米国特許第５７２３３２３号、同第５７６３１９２号；同第５８１４４７６号、同第５８１７４８３号、同第５８２４５１４号；同第５９７６８６２号明細書；国際公開第８６／０５８０３号パンフレット；欧州特許第５９０６８９号明細書（イクシス、現在はアプライドモレキュラーレボリューション（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（ＡＭＥ）、それぞれ引用により本明細書に編入する）、あるいはトランスジェニック動物の免疫感作に依存する方法（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：９０１−９０７（１９９７）；Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９５−１１８（１９９６）；Ｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：１５４−１６１（１９９８）（それぞれ引用により本明細書に編入する）、ならびに関連する特許および出願）を含むことができる。そのような技法には限定するわけではないが、リボゾームディスプレイ（Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４９３７−４９４２（１９９７年５月）；Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：１４１３０−１４１３５（１９９８年１１月）；単一細胞抗体生産技法（例えば、選択したリンパ球抗体法（”ＳＬＡＮ”）（米国特許第５，６２７，０５２号明細書、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７−８９２（１９８７）；Ｂａｂｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：７８４３−７８４８（１９９６））；ゲル微小滴およびフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：３３３−３３７（１９９０）；１細胞系、ケンブリッジ、マサチューセッツ州；Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．１８２：１５５−１６３（１９９５）；Ｋｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１３：７８７−７９０（１９９５））；Ｂ−細胞選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ １９：１２５−１３４（１９９４）；Ｊｏｎａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｖｏｌ．５，ハイブリドーマ技術におけるインビトロ免疫感作（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ），Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編集、エルセビアサイエス出版Ｂ．Ｖ．（Ｅｌｓｅｖｉｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、アムステルダム、オランダ（１９８８））を含む。
非−ヒトまたはヒト抗体を操作またはヒト化する方法も使用することができ、そして当該技術分野では周知である。一般にヒト化または操作した抗体は、限定するわけではないが非ヒトが起源、例えば、限定するわけではないがマウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物の１もしくは複数のアミノ酸残基を有する。これらのヒトアミノ酸残基はしばしば「輸入」残基と呼ばれるが、典型的には「輸入」可変、定常または既知のヒト配列の他のドメインから取られている。既知のヒトＩｇ配列開示は、例えば、
Figure 2007525946
Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，免疫学的に興味深いタンパク質の配列、米国衛生局（１９８３）（各々は引用により全部、本明細書に編入する）に開示されている。
そのような輸入された配列を使用して、免疫原性を下げ、または結合、親和性、オン−レイト（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフ−レイト（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、アビディティー、特異性、半減期または当該技術分野で知られている他の適当な特性を下げ、強化し、またはモディファイすることができる。一般に、非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部または全部が維持されると同時に、可変および定常領域の非ヒト配列はヒトまたは他のアミノ酸に置き換えられる。また抗体はヒト化され、抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持する。この目的を達成するために、ヒト化抗体は場合により元のおよびヒト化配列の３次元モデルを使用して、元の配列および種々の概念のヒト化産物の分析プロセスにより調製することもできる。３次元の免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、そして当業者にはよく知られている。選択された候補の免疫グロブリン配列の見込みがある３次元立体構造を具体的に説明し、そして表すコンピュータープログラムを利用することができる。これらのディスプレイの推測から、候補の免疫グロブリン配列の機能における残基の役割の見込みが分析できるようになり、すなわち候補の免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析が可能となる。このように、標的抗原（１もしくは複数）に対する親和性の上昇のような所望の抗体の特性を達成するように、コンセンサスおよび輸入配列からＦＲ残基を選択し、そして合わせることができる。一般にＣＤＲ残基は抗原結合の影響に直接的かつ最も実質的に関与している。本発明の抗体のヒト化または操作は、限定するわけではないが、Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８）、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）；米国特許第５７２３３２３号、同第５９７６８６２号、同第５８２４５１４号、同第５８１７４８３号、同第５８１４４７６号、同第５７６３１９２号、同第５７２３３２３号、同第５，７６６８８６号、同第５７１４３５２号、同第６２０４０２３号、同第６１８０３７０号、同第５６９３７６２号、同第５５３０１０１号、同第５５８５０８９号、同第５２２５５３９号および同第４８１６５６７号明細書、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０号、ＵＳ９６／１８９７８号、ＵＳ９１／０９６３０号、ＵＳ９１／０５９３９号、ＵＳ９４／０１２３４号、ＧＢ８９／０１３３４号、ＧＢ９１／０１１３４号、ＧＢ９２／０１７５５号明細書；国際公開第９０／１４４４３号、同第９０／１４４２４号、同第９０／１４４３０号パンフレット、および欧州特許第２２９２４６号明細書（各々は引用により全部、本明細書に編入する））に記載されているような既知の方法を使用して行うことができる。
本発明の抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、場合により本明細書に記載し、かつ／または当該技術分野で知られているように、場合によりヒト抗体のレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、非ヒト霊長類等）の免疫感作により生成することができる。ヒト抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を生産する細胞をそのような動物から単離し、そして本明細書に記載するような適切な方法を使用して不死化することができる。
ヒト抗原に結合するヒト抗体を生産できるトランスジェニック動物は、既知の方法により作出することができる（例えば、限定するわけではないが、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌに発効された米国特許第５，７７０，４２８号、同第５，５６９，８２５、５，５４５，８０６、同第５，６２５，８２５、同第５，６３３，４２５、同第５，６６１，０１６号および同第５，７８９，６５０号明細書；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９８／２４８９３号明細書、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９７／１３８５２４号パンフレット、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．，国際公開第９６／３４０９６号パンフレット、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０４６３ １５１号明細書、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｅ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０７１０ ７１９号明細書、Ｓｕｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．米国特許第５，５４５，８０７号明細書、Ｂｒｕｇｇｅｍｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．国際公開第９０／０４０３６号明細書、Ｂｒｕｇｇｅｍｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．国際公開第０４３８ ４７４号明細書、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．欧州特許出願公開第０８１４ ２５９号明細書、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．独国特許出願第２ ２７２ ４４０号明細書、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）５７９−５９１（１９９４）、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１（１９９４）、Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６（１９９７）、 Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０（２３）：６２８７−６２９５（１９９２）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（８）３７２０−３７２４（１９９３）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３（１）：６５−９３（１９９５）およびＦｉｓｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４（７
）：８４５−８５１（１９９６）、これらは引用により本明細書に編入する）。一般にこれらのマウスは機能的に再配列されたか、または機能的再配列を受けることができる少なくとも１つのヒト免疫グロブリン座に由来するＤＮＡを含んでなる少なくとも１つの導入遺伝子を含んでなる。そのようなマウスの内因性の免疫グロブリン座は破壊され、または削除されて、内因性遺伝子によりコードされる抗体を生産するための動物の能力を排除することができる。
類似のタンパク質またはフラグメントに対する特異的結合について抗体をスクリーニングすることは通常、ペプチドディスプレイライブラリーを使用して行うことができる。この方法には所望の機能または構造を有する個々のメンバーについて、ペプチドの大きなコレクションをスクリーニングすることが含まれる。ペプチドディスプレイライブラリーの抗体スクリーニングは、当該技術分野では周知である。このディスプレイペプチド配列は、３〜５０００以上のアミノ酸長、頻繁には５〜１００アミノ酸長であり、そしてしばしば約８〜２５アミノ酸長であることができる。ペプチドライブラリーを作成するための直鉄的な化学合成法に加えて、幾つかの組換えＤＮＡ法が記載された。１つの種類は、バクテリオファージまたは細胞の表面上にペプチド配列のディスプレイを含む。各バクテリオファージまたは細胞は、特定のディスプレイされたペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含む。そのような方法は、ＰＣＴ特許出願第９１／１７２７１号、同第９１／１８９８０号、同第９１／１９８１８号および９３／０８２７８号明細書に記載されている。ペプチドのライブラリーを作成するための他の系は、インビトロ化学合成および組換え法の両観点を有する。ＰＣＴ特許出願第９２／０５２５８号、同第９２／１４８４３号および同第９６／１９２５６号明細書を参照にされたい。また米国特許第５，６５８，７５４号および同５．６４３，７６８号明細書も参照にされたい。ペプチドディスプレイライブラリー、ベクターおよびスクリーニングキットは、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（カールスバット、カリフォルニア州）、およびケンブリッジアンチボディテクノロジーズ（ケンブリッジシャー、英国）のような供給元から市販されている。例えば、エンゾンに割り当てられた米国特許第４７０４６９２号、同第４９３９６６６号、同第４９４６７７８号、同第５２６０２０３号、同第５４５５０３０号、同第５５１８８８９号、同第５５３４６２１号、同第５６５６７３０号、同第５７６３７３３号、同第５７６７２６０号、同第５８５６４５６号明細書；ダイアックスに割り当てられた米国特許第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６９８号、同第５８３７５００号明細書；アフィマックスに割り当てられた米国特許第５４２７９０８号、同第５５８０７１７号明細書；ケンブリッジアンチボディテクノロジーズに割り当てられた米国特許第５８８５７９３号明細書；ジェネンティックに割り当てられた米国特許第５７５０３７３号明細書；キソーマに割り当てられた米国特許第５６１８９２０号、同第５５９５８９８号、同第５５７６１９５号、同第５６９８４３５号、同第５６９３４９３号および同第５６９８４１７号明細書、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、同上；Ａｕｓｂｅｌ、同上；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、同上を参照にされたい（これらの各々は引用により全部、本明細書に編入する）。
本発明の抗体は、その抗体を乳の中に生産するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジ等のようなトランスジェニック動物または哺乳動物に、少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０１抗体をコードする核酸を投与することにより乳の中に調製することもできる。そのような動物は既知の方法を使用して提供することができる。例えば、限定するわけではないが、米国特許第５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号；同第５，９９４，６１６号；同第５，５６５，３６２号；同第５，３０４，４８９号明細書等（これらの各々は引用により全部、本明細書に編入する）を参照にされたい。
さらに本発明の抗体は、そのような抗体、特定した部分またはバリアントを、植物の一部またはそれらから培養した細胞中に生産するトランスジェニック植物および培養植物細
胞（例えば、限定するわけではないが、タバコおよびトウモロコシ）を提供するために、少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体をコードする核酸を使用して調製することができる。非限定的な例として、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコの葉が、例えば、誘導性プロモーターを使用して大量の組換えタンパク質を成功裏に提供するために使用された。例えば、Ｃｒａｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。またトランスジェニックトウモロコシは、他の組換え系で生産されたものに、または天然の起源から精製されたものに等しい生物学的活性を持つ哺乳動物のタンパク質を、工業的生産レベルで発現するために使用された。例えば、Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。１本鎖抗体（ｓｃＦｖ’ｓ）のような抗体フラグメントを含め抗体は、タバコ種子およびジャガイモの塊茎を含むトランスジェニック植物の種子からも大量に生産された。例えば、Ｃｏｎｒａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９ １９９８およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい。すなわち本発明の抗体は、既知の方法に従いトランスジェニック植物を使用して生産することもできる。また例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．，１９９９）；Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびそこに引用されている技術文献を参照にされたい（これらの各々は引用により全部、本明細書に編入する）。
本発明の抗体は、広い範囲の親和性（ＫＤ）でヒトＣＮＧＨ００１０に結合することができる。好適な態様では、本発明の少なくとも１つのヒトｍＡｂが任意に高い親和性でヒトＣＮＧＨ００１０に結合することができる。例えば、ヒトｍＡｂはヒトＣＮＧＨ００１０に、限定するわけではないが０．１−９．９（またはこの中の任意の範囲）×１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３またはその中の範囲のような約１０−７Ｍ以下のＫＤで結合することができる。
抗原に関する抗体の親和性またはアビディティーは、適当な方法を使用して実験的に定めることができる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．，「抗体−抗原相互作用（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）」、基本免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）で、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編集、ラベン出版：ニューヨーク、ニューヨーク州（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ 免疫学（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、Ｗ．Ｈ．フリーマン アンド カンパニー（Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）：ニューヨーク、ニューヨーク州（１９９２）；およびそこに記載されている方法を参照にされたい）。測定された特定の抗体−抗原相互作用の親和性は、異なる条件下（例えば、塩濃度、ｐＨ）で測定すれば変動し得る。すなわち親和性および他の抗原−結合パラメーター（例えば、ＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくは抗体および抗原の標準化された溶液、および本明細書に記載するバッファーのような標準化バッファーを用いて作成される。
抗体の精製
抗−ＣＮＧＨ００１０１抗体は、限定するわけではないがプロテインＡ精製、硫酸アンモニウムもしくはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンもしくはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ハイドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む周知な方法により、組換え細胞培養物から回収し、そして精製することができる。高性能液体クロマトグラフィー（“ＨＰＬＣ”）も精製に使用
することができる。例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、免疫学における現在のプロトコール、またはタンパク質科学における現在のプロトコール、ジョン ウィリー ＆ サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）、ＮＹ、ＮＹ、（１９９７−２００１）、例えば、第１、４、６、８、９１０章を参照にされたい（各々が全部、引用により本明細書に編入される）。
本発明の抗体には、自然に精製された生成物、化学合成法の生成物、および例えば、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む真核細胞宿主から組換え技術により生産される産物を含む。組換え生産法で使用する宿主に依存して、本発明の抗体はグリコシル化されることができ、または非グリコシル化であることができるが、グリコシル化が好適である。そのような方法は多くの標準的な研究室マニュアルに記載されている：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、同上、第１７．３７〜１７．４２；Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．、同上、第１０、１２、１３、１６、１８および２０章、Ｃｏｌｌｉｇａｎ、タンパク質科学（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、同上、第１２〜１４（すべて引用により本明細書に編入する）。
哺乳動物細胞中での抗−ＣＮＧＨ００１０抗体のクローニングおよび発現
典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介する少なくとも１つのプロモーター要素、抗体コード配列および転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなる要素にはエンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列およびＲＮＡスプライシングのための供与および受容部位により挟まれた介在配列を含む。高度に効率的な転写はＳＶ４０に由来する初期および後期プロモーター、レトロウイルス、例えば、ＧＡＳ−６、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩに由来する長い末端反復配列（ＬＴＲＳ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターにより達成され得る。しかし細胞要素（例えば、ヒトアクチンプロモーター）も使用することができる。本発明の実施に使用するために適当な発現ベクターには、例えば、ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮまたはｐＬＮＣＸ（クロンテック ラボズ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ Ｌａｂｏｓ）、パロアルト、カリフォルニア州）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／−）（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ウプサラ、スウェーデン）、ｐＧＡＳ−６ｃａｔ（ＡＴＣＣ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ３７１４６）およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ６７１０９）を含む。使用できた哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ｑｕａｉｌＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
あるいは遺伝子は染色体に組み込まれた遺伝子を含む安定な細胞株で発現させることができる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシンまたはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーを用いたコートランスフェクションにより、トランスフェクトした細胞の同定および単離が可能となる。
トランスフェクトした遺伝子は、大量のコードされた抗体を発現させるために増幅することもできる。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、数百またはさらに数千の目的遺伝子のコピーを持つ細胞株を開発するために有用である。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９ １９９１；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５ １９９２）である。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地で成長させ、そして最高の耐性を持つ細胞を選択する。これらの細胞株は、染色体に組み込まれた増幅した遺伝子（１もしくは複数）を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、抗体の生産によく
使用される。
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモーター（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７ （１９８５））に加えてＣＭＶ−エンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０ （１９８５））を含む。多クローニング部位、例えば、制限酵素分解部位であるＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８は、目的遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターは３’イントロンに加えて、ラットのプレプロインスリン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナルを含む。
抗ＣＮＧＨ００１０抗体組成物に対する抗−イディオタイプ抗体
モノクローナルまたはキメラ抗−ＣＮＧＨ００１０抗体に加えて、本発明は本発明のそのような抗体に特異的な抗−イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体も対象とする。抗−Ｉｄ抗体は別の抗体の抗原結合領域と一般的に関連する独自の決定基を認識する抗体である。抗−ＩｄはＩｄ抗体の供給源として同じ種および遺伝型（例えば、マウス種）の動物をその抗体またはそのＣＤＲ含有領域で免疫感作することにより調製することができる。免疫感作した動物は免疫感作抗体のイディオタイプ決定基を認識し、そして応答し、そして抗−Ｉｄ抗体を生産する。抗−Ｉｄ抗体はさらに別の動物に免疫応答を誘導し、いわゆる抗−抗−Ｉｄ抗体を生産するために「免疫原」として使用することもできる。
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗体組成物
また本発明は、自然には存在しない組成物、混合物または形態で提供される本明細書に記載する少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたはＣＮＧＨ００１０抗体を含んでなるＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたはＣＮＧＨ００１０抗体組成物も提供する。そのような組成物は、配列番号３、５、７、９および１１の８０〜１００％連続するアミノ酸からなる群から選択されるＣＮＧＨ００１０ポリペプチドアミノ酸配列の少なくとも１もしくは２つの完全長、Ｃ−および／またはＮ−末端が各失したバリアント、ドメイン、フラグメントまたは特定したバリアント、あるいはＣＮＧＨ００１０抗体またはその特定したフラグメント、ドメインまたはバリアントを含んでなる自然には存在しない組成物を、場合により製薬学的に許容され得る担体または希釈剤と組み合わせて含んでなる。
本発明のＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗体化合物、組成物または組み合わせは、さらに限定するわけではないが希釈剤、結合剤、安定化剤、バッファー、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバント等のような少なくとも１つの任意の適切な補助剤を含んで成ることができる。製薬学的に許容され得る補助剤が好適である。そのような滅菌溶液の非限定的な例および調製法は限定するわけではないが、Ｇｅｎｎａｒｏ、編集、レミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第１８版、マック出版社、イーストン、ペンシルバニア州（１９９０）のように当該技術分野では周知である。製薬学的に許容され得る担体は、当該技術分野で周知であるか、または本明細書に記載するように抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の投与様式、溶解性および／または安定性に適するように日常的に選択され得る。
本組成物に有用な製薬学的賦形剤および添加剤は、限定するわけではないがタンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、脂質および炭水化物（例えば、単糖、二−、三−、四−およびオリゴ糖を含む糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖等のような誘導化等；および多糖または糖ポリマー）を含み、これは単独または組み合わせて存在することができ、単独または組み合わせて１〜９９．９９重量もしくは容量％で含んでなる。タンパク質賦形剤の例には、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼイン等を含む。緩衝能においても機能することもできる代表的なアミノ酸／抗体組成物には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム等を含む。１つの好適なアミノ酸はグリシン
である。
本発明の使用に適する炭水化物賦形剤には、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等のような単糖；ラクトース、シュクロース、トレハロース、セルビオース等の二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、澱粉等の多糖；マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトール等のアルジトールを含む。本発明に使用するための好適な炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロースおよびラフィノースである。
抗−ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたは抗体組成物は、バッファーまたはｐＨ調整剤を含むこともできる；典型的にはバッファーは有機酸または塩基から調製される塩である。代表的なバッファーには、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、カルボン酸、酒石酸、コハク酸、酢酸またはフタル酸の塩のような有機酸塩；Ｔｒｉｓ、トロメタミン塩酸塩またはリン酸バッファーを含む。本組成物の使用に好適なバッファーはクエン酸塩のような有機酸塩である。
さらに本発明の抗体−ＣＮＧＨ００１０抗体組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー性糖）、デキストレート（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン）、ポリエチレングリコールのようなポリマー性賦形剤／添加剤、風味剤、抗微生物剤、甘味剤、酸化防止剤、帯電防止剤、表面活性剤（例えば、“ＴＷＥＥＮ ２０”および“ＴＷＥＥＮ ８０”のようなポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）およびキレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）を含むことができる。
本発明による抗−ＣＮＧＨ００１０抗体、部分またはバリアント組成物で使用するために適するこれらのおよびさらに知られている製薬学的賦形剤および／または添加剤は当該技術分野では既知であり、例えば、「レミングトン：薬学の科学＆実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第１９版、ウィリアムス＆ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ）（１９９５）および「医師の卓上レファレンス（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」、第５２版、メディカル エコノミックス（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ）、モントバレー、ニュージャージー州（１９９８）に列挙され、この開示は引用により全部、本明細書に編入する。好適な担体または賦形剤材料は炭水化物（例えば、サッカリドおよびアルジトール）およびバッファー（例えば、クエン酸塩）またはポリマー性剤である。
本発明の抗−ＣＮＧＨ００１０抗体組成物は、少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含んで成る少なくとも１つの適切かつ有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、臓器、動物または患者に接触または投与することを含んで成ることができ、場合よりさらに少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、限定するわけではないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、それらの融合タンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬（例えば、メトトレキセート、オーラノフィン、オーロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スイファサラジン）、筋弛緩剤、麻薬、非−ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断剤、抗菌剤（例えば、アミノグルコシド、抗菌・カビ剤、駆虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン、フルオロルキノロン（ｆｌｕｒｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗微生物剤）、止痒剤、コルチコステロイド、同化性ステロイド、糖尿病関連薬、無機類、栄養、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止冩薬、鎮咳剤、制吐剤、抗潰瘍剤、緩下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン（例えば、エポエチン アルファ）、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交換神経作用薬、刺激物質、ドネゼピル、タクリン、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１つを含んでなる。そのようなサイトカインの非限定的例には、限定するわけではないがＩＬ−１からＩＬ−２９の任意のインターロイキンを含む。適切な投薬用量は、当該技術分野では周知である。例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．、編集、薬理療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、アペルトン アンド ランジ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州（２０００）：ＰＤＲ薬局方、タラスコンポケット薬局方（Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）２０００、豪華版、タラスコン出版社、ローマ リンダ、カリフォルニア州（２０００）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
そのような抗−ガンまたは抗−感染剤は、本発明の少なくとも１つの抗体に会合した、結合した、同時に配合（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）される、または一緒に投与される毒素分子を含むことができる。毒素は場合により病原性細胞または組織を選択的に殺すように作用することができる。病原性細胞はガン細胞または他の細胞であり得る。そのような毒素は限定するわけではないが、例えば、少なくとも１つリシン、ジフテリア毒素、蛇毒または細菌の毒素から選択される毒素の少なくとも１つの機能的な細胞傷害性ドメインを含んで成る精製された、または組換え毒素または毒素フラグメントであることができる。毒素という用語はまた、死を引き起こし得る毒素ショックを含む任意の病理的状態をヒトまたは他の哺乳動物に引き起こす可能性がある自然に存在する変異体または組換え細菌またはウイルスにより生産されるエンドトキシンおよびエキソトキシンの両方を含む。そのような毒素は限定するわけではないが、腸内毒素生産性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の熱不安定エンテロトキシン（ＬＴ）、熱安定性エンテロトキシン（ＳＴ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）のサイトトキシン、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）のエンテロトキシン、毒素性ショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌のエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）またはＣ（ＳＥＣ）、ブドウ球菌のエンテロトキシン等を含むことができる。そのような細菌には限定するわけではないが、エンテロトキシン生産性の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株（ＥＴＥＣ）、腸内出血性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば、血清型０１５７；Ｈ７）、ブトウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種（例えば、黄色ブトウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス ピロゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種（例えば、シゲラ ジセンテリア（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ フレキシネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ ボイディ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｂｏｙｄｉｉ）およびシゲラ ソンネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ））、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種（例えば、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ コレラ−スイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａ−ｓｕｉｓ）、腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種（例えば、クロストリジウム パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、カンピロバクター種（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ）種（例えば、カンピロバクター ジェジュニ（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター フェタス（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ））、ヘリオバクター（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）種（例えば、、ヘリオバクター ピロリ（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｏｒ ｐｙｌｏｒｉ）、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）種（例えば、アエロモナス ソブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、アエロモナス ヒドロフィーラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、アエロモナス カビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ）、プレイソモナス シゲロイデス（Ｐｌｅｉｓｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、エルシナ エンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ビブリオス（Ｖｉｂｒｉｏｓ）種（コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオス パラヘモリチカス（Ｖｉｂｒｉｏｓ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、クレブシエーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）およびストレプトコッカイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）を含む。例えば、Ｓｔｅｉｎ、編集、ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第３版、第１〜１３頁、リトル、ブラウン（Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ）社、ボストン（１９９０）：Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．、編集、ヒトの細菌感染：疫学および防御（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ）、第２版、第２３９〜２５４、プレナム（Ｐｌｅｎｕｍ）医学誌社、ニューヨーク（１９９０）；Ｍａｎｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ，感染性疾患の原理および実際（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）、第３版、チャーチルリビングストン（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ）、ニューヨーク（１９９０）；Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．、編集、メルクマニュアル（Ｔｈｅ Ｍｅｒｋ Ｍｉａｎｕａｌ）、第１６版、メルク社、ラースウェイ、ニュージャージー州、１９９２；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０）を参照にされたい（この内容は引用により全部、本明細書に編入する）。
応用
本発明は、当該技術分野で既知であるか、または本明細書に記載するような細胞、組織、臓器、動物または患者の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０関連疾患を、本発明の少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたはＣＮＧＨ００１０抗体を使用してモジュレートまたは処置するための方法も提供する。
ＣＮＧＨ００１０結合ポリペプチドまたはＣＮＧＨ００１０抗体またはポリペプチドアンタゴニストの組成物は、癌、または肺線維症、肝炎、骨粗鬆症、慢性関節リューマチおよび喘息を含む脱調節マトリックス生産およびリモデリングを伴う他のヒト疾患の使用に治療的用途を見いだすことができる。潜在的な疾患の兆候には、細胞機構（ｃｅｌｌ−ｍｅｃｈａｎｉｃｓ）、組織構造に欠失があるか、またはマトリックスの病変により引き起こされるメカノケミカル転換の脱調節がある疾患も含むことができる（Ｉｎｇｂｅｒ Ｄ．，Ｍｅｃｈａｎｏｌｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ），Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、印刷中）。
また本発明は、細胞、組織、臓器、動物または患者の、限定するわけではないが少なくとも１つの慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、若年性関節リウマチの全身的発症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、胃潰瘍、セロネガティブ関節症、変形性関節症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質症候群、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、特発性肺線維症、全身性脈管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症、類肉腫症、精巣炎／精管除去反転法、アレルギー／アトピー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹
、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎、移植、臓器移植拒絶、対宿主性移植片病、全身性炎症応答症候群、敗血症症候群、グラム陽性敗血症、グラム陰性敗血症、培養陰性敗血症、真菌性敗血症、好中球減少熱、尿路性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷／出血、火傷、電離照射線暴露、急性膵炎、成人呼吸促進症候群、ジストレス症候群、慢性関節リウマチ、アルコール誘導型肝炎、慢性炎症病、類肉腫症、クローン病、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、過敏症反応、アレルギー性鼻炎、枯草熱、通年性鼻炎、結膜炎、子宮内膜症、喘息、蕁麻疹、全身性アナフラキシー、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、任意の臓器または組織の移植片拒絶、腎臓移植拒絶、心臓移植拒絶、肝臓移植拒絶、膵臓移植拒絶、肺移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、皮膚同種移植拒絶、関節移植拒絶、骨移植拒絶、小腸移植拒絶、胎児胸腺移植拒絶、副甲状腺移植拒絶、任意の臓器または組織の異種移植拒絶、同種移植拒絶、抗−受容体過敏症反応、グレーブス病、レーノー病、Ｂ型インスリン耐性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介型細胞傷害、ＩＩＩ型過敏症反応、全身性エリテマトーデス、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大、内分泌障害、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、および皮膚変化症候群）、ポリニューロパシー、臓器巨大、内分泌障害、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、皮膚変化症候群、抗リン脂質症候群、天疱瘡、強皮症、混合結合組織病、特発性アディソン病、糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白斑、脈管炎、ＭＩ−後心臓切開症候群、ＩＶ型過敏症、接触皮膚炎、過敏性肺炎、同種移植拒絶、細胞内生物による肉芽腫、薬剤感受性、代謝性／特発性ウィルソン病、ヘマクロマトーシス、アルファ−１−アンチトリプシン欠損、糖尿病網膜炎、橋本甲状腺炎、骨粗鬆症、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性線維症、新生児慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、家族性血球貧食性リンパ組織球増多症、皮膚学的状態、乾癬、脱毛、ネフローゼ症候群、腎炎、糸状体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性、子かん前症、ｏｋｔ３療法、抗−ｃｄ３療法、サイトカイン療法、化学療法、放射線療法（例えば、限定するわけではないが、喘息、貧血、悪液質等）、慢性サリチル酸中毒等を含む少なくとも１つの免疫関連疾患を、モジュレートまたは処置するための方法も提供する。例えば、メルクマニュアル（Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ）、第１２〜１７版、メルク＆カンパニー、ラーウェイ、ニュージャージー州（１９７２、１９７７、１９８２、１９８７、１９９２、１９９９）；Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．編集、薬物療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ、スタムフォード、コネチカット州（１９９８、２０００）（各々引用により全部、本明細書に編入する）を参照にされたい。
本発明はまた、細胞、組織、臓器、動物または患者の少なくとも１つの悪性疾患をモジュレートまたは処置する方法を提供し、そのような悪性疾患には限定するわけではないが少なくとも１つの：白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ−細胞、Ｔ−細胞またはＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、骨髄異形性症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、鼻咽頭癌、悪性組織球症、悪性の新生物随伴症候群／高カルシウム血症、充実性腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移性疾患、癌に関連する骨の再吸収、癌に関連する骨痛（ｂｏｎｅ ｐａｉｎ）等を含む。
本発明の方法は、少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含んで成る有効量の組成物または製薬学的組成物を、そのようなモジュレーション、処置または治療が必要な細胞、組織、臓器、動物または患者に投与することを含んで成ることができる。そのような方法は場合よりさらにそのような免疫疾患を処置するための同時投与または併用療法を含んでなることができ、ここでＣＮＧＨ００１０ポリペプチドまたはＣＮＧＨ００１０抗体
、その特定した部分またはバリントはさらに少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、限定するわけではないが、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、それらの融合タンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リウマチ薬（例えば、メトトレキセート、オーラノフィン、オーロチオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）、スイファサラジン）、筋弛緩剤、麻薬、非−ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔薬、鎮静剤、局所麻酔薬、神経筋遮断剤、抗菌剤（例えば、アミノグルコシド、抗菌・カビ剤、駆虫剤、抗ウイルス剤、カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）、セファロスポリン、フルオロルキノロン（ｆｌｕｒｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、他の抗微生物剤）、止痒剤、コルチコステロイド、同化性ステロイド、糖尿病関連薬、無機類、栄養、甲状腺剤、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止冩薬、鎮咳剤、制吐剤、抗潰瘍剤、緩下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン（例えば、エポエチン アルファ）、フィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチン（ＧＭ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫感作、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えば、バシリキシマブ、シクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン代用薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキル化薬、代謝拮抗物質、有糸分裂インヒビター、放射性薬品、抗鬱薬、抗躁薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、交換神経作用薬、刺激物質、ドネゼピル、タクリン、喘息薬物療法、ベータアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似体、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１つを前に、同時に、かつ／または後に投与することを含んでなる。適切な投薬用量は当該技術分野で周知である。例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．、編集、薬理療法ハンドブック（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ）、第２版、アペルトン アンド ランジ（Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ）、スタムフォード、コネチカット州（２０００）：ＰＤＲ薬局方、タラスコンポケット薬局方（Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｐｏｃｋｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）２０００、豪華版、タラスコン出版社、ローマ リンダ、カリフォルニア州（２０００）を参照にされたい（それぞれ引用により全部、本明細書に編入する）。
典型的には病的状態の処置は少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体組成物の有効量または投薬用量（これは組成物中に含まれる特異的活性に依存して全部で、平均して、範囲で少なくとも約０．０１から５００ミリグラムの少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体（患者１キログラムの用量あたり）、そして好ましくは単回または多回投与あたり少なくとも約０．１〜１００ミリグラム抗体／患者体重である）を投与することにより行われる。あるいは有効な血清濃度は、単回または多回投与あたり０．１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を含んで成ることができる。適当な投薬用量は医師が知っており、そしてもちろん特定の疾患状態、投与する組成物の特異的活性、および処置を受ける特定の患者に依存する。場合により所望する治療的量を達成するために、繰り返し投与、すなわち特定の監視され、または計量された用量の反復個別投与を提供することが必要となり、ここで個別投与は所望の毎日の用量または効果が達成されるまで繰り返される。
好適な用量は任意に、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２
、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／または１００〜５００ｍｇ／ｋｇ／投与、あるいはそれらの任意の範囲、値または画分を含むことができ、あるいは単回または多回投与あたり０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．５、５．９、６．０、６．５，６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、２０、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４、１４．５、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００および／または５０００μｇ／ｍｌ血清濃度あるいはそれらの任意の範囲、値または画分の血清濃度を達するために含むことができる。
あるいは投薬用量は、特定の薬剤の薬物動態学的特性、およびその投与の様式および経路；受容者の年齢、健康および体重；症状の性質および程度、現行処置の種類、処置の頻度、および所望する効果のような既知の因子に大変依存して変動し得る。通常、有効成分の投薬用量は、体重１キログラムあたり約０．１〜１００ミリグラムとなり得る。多くは投与あたり１キログラムにつき０．１〜５０、そして好ましくは０．１〜１０ミリグラム、あるいは徐放性形態が所望の効果を得るために効果的である。
非限定的な例として、ヒトまたは動物の処置は、１日あたり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇのような０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの本発明の少なくとも１つの抗体を１回に、または周期的用量として、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９または４０日に少なくとも１回、あるいはまたは加えて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１または５２週に少なくとも１回、あるいはまたは加えて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０年に少なくとも１回、あるいはそれらの組み合わせで、単回、注入または反復投与を使用して提供することができる。
内部投与に適する剤形（組成物）は、一般に単位または容器あたり約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムの有効成分を含む。これらの製薬学的組成物では、有効成分は通常、組成物の総重量に基づき約０．５〜９９．９９９重量％の量で存在するだろう。
非経口投与には、抗体は溶液、懸濁液、乳液または凍結乾燥粉末として製剤することができ、一緒にまたは別に製薬学的に許容される非経口賦形剤が提供される。そのような賦形剤の例は、水、塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液および１〜１０％ヒト血清ア
ルブミンである。リポソームおよび固定油のような非水性賦形剤を使用することもできる。賦形剤または凍結乾燥粉末は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例えば、バッファーおよび保存剤）を維持するための添加剤を含むことができる。製剤は既知のまたは適当な技術で滅菌される。
適当な製薬学的担体は、この分野の標準的な参考書である最新版のレミングトンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。
製剤
上記のように本発明は安定な製剤を提供し、これは好ましくは食水または選択した塩を含むリン酸バッファー、ならびに保存剤を含有する任意選択の保存溶液および製剤、ならびに製薬学的または獣医学的用途に適する多用途保存製剤であり、少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体を製薬学的に許容される製剤中に含んで成る。保存製剤は少なくとも１つの既知の保存剤または任意に少なくとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マンガン（例えば、ヘキサヒドレート）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から成る群から選択される保存剤を水性希釈剤中に含む。適当な濃度または混合物は、０．００１〜５％のような、または限定するわけではないが０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９またはこの中の任意の範囲または値のような、当該技術分野で知られているように使用することができる。非限定的な例には、保存剤なし、０．１〜２％ ｍ−クレゾール（例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％ベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％チメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％フェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％アルキルパラベン（１もしくは複数）（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）等を含む。
上記のように、本発明は包装材料および場合により水性希釈剤中に処方されたバッファーおよび／または保存剤を含む少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の溶液を含んで成る少なくとも１つのバイアルを含んで成る製品を提供し、ここで該包装材料は、そのような溶液が１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間以上保持できることを示すラベルを含んで成る。本発明はさらに、包装材料、凍結乾燥した少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含んで成る第１バイアル、および処方されたバッファーまたは保存剤の水性希釈剤を含んで成る第２バイアルを含んで成る製品を含んで成り、ここで該包装材料は患者が少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を水性希釈剤中に再構成して、２４時間以上の期間にわたり保持できる溶液を形成することを指導するラベルを含んで成る。
本発明に従い使用する少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、哺乳動物細胞またはトランスジェニック調製物を含む組換え手段により生産できるか、または本明細書に
記載し、または当該技術分野で既知の他の生物起源から精製することができる。
本発明の生成物中の少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体の範囲は、湿潤／乾燥系である場合、構成時に約１．０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を生じる量を含むが、より低および高濃度も操作可能であり、そして意図する送達賦形剤に依存し、例えば、溶液組成は経皮用パッチ、肺、経粘膜または浸透圧もしくはミクロポンプ法とは異なるだろう。
好ましくは水性希釈剤は場合によりさらに製薬学的に許容できる保存剤を含んで成る。好適な保存剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合物から成る群から選択されるものを含む。製剤中に使用する保存剤の濃度は、抗−微生物効果を生じるために十分な濃度である。そのような濃度は選択した保存剤に依存し、そして当業者により容易に決定される。
他の賦形剤、例えば、張性調整剤、バッファー、酸化防止剤、保存強化剤を場合により、そして好ましくは希釈剤に加えることができる。グリセリンのような張性調整剤は既知の濃度で通常に使用される。生理学的に耐容されるバッファーは好ましくはｐＨ制御の改善を提供するために加える。製剤は約ｐＨ４〜約ｐＨ１０のような広いｐＨ範囲を網羅することができ、そして好ましい範囲は約ｐＨ５〜約ｐＨ９、そして最も好ましくは約６．０〜約８．０の範囲である。好ましくは本発明の製剤は約６．８から約７．８の間のｐＨを有する。好適なバッファーにはリン酸バッファー、最も好ましくはリン酸ナトリウム、特にリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。
Ｔｗｅｅｎ ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ポリオキシエチレン ポリオキシプロピレン ブロック コポリマー）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、あるいはポリソルベート２０もしくは８０、またはポリオキサマー１８４もしくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）ポリリス（ｐｏｌｙｌｓ）、他のブロック コポリマーのような非イオン性表面活性剤のような製薬学的に許容される可溶化剤、およびＥＤＴＡおよびＥＧＴＡのようなキレーターのような他の添加剤を、凝集を減らすために製剤または組成物に場合により加えることができる。これらの添加剤は製剤を投与するためにポンプまたはプラスチック容器が使用される場合に特に有用である。製薬学的に許容される表面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を緩和する。
本発明の製剤は、少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体およびフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンズエトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールまたはそれらの混合物から成る群から選択される保存剤を水性希釈剤中で混合することを含んで成る方法により調製することができる。少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体および保存剤を水性希釈剤中で混合することは、通例の溶解および混合手順を使用して行う。適切な製剤を調製するためには、例えば、所望の濃度のタンパク質および保存剤を提供するために十分な量で、バッファー溶液中の計測した量の少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体を、バッファー溶液中の所望の保存剤と合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば、加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するのかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与手段のために至適化されるすべての因子であり得る。
特許請求する製剤は、透明溶液として、または水、保存剤および／または賦形剤、好ましくはリン酸バッファーおよび／または食塩および選択した塩を水性希釈剤中に含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体のバイアルを含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれも複数回、再使用でき、そして患者処置の単回または多回サイクルを満たし、そしてこれにより現在利用できるものより都合よい処置法を提供することができる。
特許請求する製品は、すぐに、そして２４時間以上の期間にわたり投与するために有用である。したがってここで特許請求する製品は、患者に重要な利点を提供する。本発明の製剤は場合により約２〜約４０℃の温度で安全に保存され、そして長期間にわたりタンパク質の生物活性を保持することができ、すなわちその溶液が６、１２、１８、２４、３６、４８、７２または９６時間以上の期間にわたり保持でき、かつ／または使用できることを示す包装ラベルを付すことを可能とする。保存希釈剤を使用する場合、そのようなラベルは１〜１２カ月、半年、および１年半および／または２年までの少なくとも１つの使用を含むことができる。
本発明の少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体の溶液は、少なくとも１つの抗体を水性希釈剤中で混合することを含んで成る方法により調製することができる。混合は通例の溶解および混合手順を使用して行う。適当な希釈剤を調製するためには、例えば、所望の濃度のタンパク質および場合により保存剤またはバッファーを提供するために十分な量で、水またはバッファー中の計測した少なくとも１つの抗体量を合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば、加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与の手段のために至適化されるすべての因子である。
特許請求する製品は、透明溶液として、または水性希釈剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した（少なくとも１つの）抗ＣＮＧＨ００１０抗体のバイアルを含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのどちらも多数回再使用することができ、そして患者処置の単回または多回サイクルを満たし、そしてこれにより現在利用できるものより都合よい処置法を提供する。
特許請求する製品は、薬局、医院または他のそのような研究所および施設に、透明溶液または水性希釈剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体の第１バイアルを含んで成る２個のバイアルを提供することより、患者に間接的に提供することができる。この場合、透明溶液は１リットルまで、またはそれより大きなサイズであることができ、大きなリザーバーを提供して、そこからより小さいバイアルに移すために、より少量の少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体溶液は１または多数回引き出され、そして薬局または医院から使用者および／または患者に提供され得る。
これらの単一バイアル系を含んで成る認識されているデバイスには、例えば、ベクトンデッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ）（フランクリンレイク、ニュージャージー州、ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）、ディスエトロニック（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ）（バーグドルフ、スイス、ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；バイオジェクト（Ｂｉｏｊｅｃｔ）ポートランド、オレゴン州（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）；ナショナルメディカルプロダクツ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ウェストン メディカル（Ｗｅｓｔｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ）（ピーターバラ、英国、ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ）、メディ−ジェクト社（Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ Ｃｏｒｐ）（ミネアポリス、ミネソタ州、ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）により作成または開発されたＢＤ Ｐｅｎ、ＢＤ Ａｕｔｏｊｅｃｔｏｒ（商標）、Ｈｕｍａｊｅｃｔ（商標）、ＮｏｖｏＰｅｎ（商標）、Ｂ−Ｄ（商標）Ｐｅｎ、ＡｕｔｏＰｅｎ（商標）およびＯｐｔｉＰｅｎ（商標）、ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎ（商標）、Ｇｅｎｏｔｒｏｎｏｒｍ Ｐｅｎ（商標）、Ｈｕｍａｔｒｏ Ｐｅｎ（商標）、Ｒｅｃｏ−Ｐｅｎ（商標）、Ｒｏｆｅｒｏｎ Ｐｅｎ（商標）、Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ（商標）、Ｉｊｅｃｔ（商標）、Ｊ−ｔｉｐ Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ（商標）、Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ（商標）、Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ（商標）のような溶液送達用のペン型注入デバイスを含む。２個のバイアル系を含んで成る認識されているデバイスは、ＨｕｍａｔｒｏＰｅｎ（商標）のような再構成された溶液を送達するためのカートリッジ中で、凍結乾燥された薬剤を再構成するためのこれらペン−注入系がある。
ここで特許請求する製品には包装材料を含む。包装材料は管理会社が必要とする情報に加えて、製品を使用できる条件を提供する。本発明の包装材料は、２つのバイアルの湿潤／乾燥製品について、患者が水性希釈剤中で（少なくとも１つの）抗ＣＮＧＨ００１０抗体を再構成して溶液を形成し、そして２〜２４時間以上の期間にわたり溶液を使用するための使用説明を提供する。単一バイアルの溶液製品については、ラベルはそのような溶液が２〜２４時間以上にわたり使用できることを示す。ここで特許請求する製品は、ヒトの医薬品としての使用に有用である。
本発明の製剤は少なくとも１つの抗ＣＮＧＨ００１０抗体および選択されたバッファー、好ましくは食塩または選択した塩を含むリン酸バッファーを混合することを含んで成る方法により調製することができる。（少なくとも１つの）抗体ＣＮＧＨ００１０抗体およびバッファーを水性希釈剤中で混合することは、通例の溶解および混合法を使用して行う。適当な製剤を調製するためには、例えば、所望の濃度のタンパク質およびバッファーを提供するために十分な量で、水またはバッファー中の計測した量の少なくとも１つ抗体を、水中の所望の緩衝剤と合わせる。この方法の変法は当業者により認識されているだろう。例えば、加える成分の順序、さらなる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度およびｐＨは、濃度および使用する投与手段のために至適化され得るすべての因子である。
特許請求する安定な、または保存された製剤は、透明溶液として、または水性希釈剤中に保存剤またはバッファーおよび賦形剤を含む第２バイアルで再構成する凍結乾燥した（少なくとも１つの）抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含んで成る２個のバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液のバイアルまたは再構成が必要な２個のバイアルのいずれも多数回、再使用することができ、そして単回または複数のサイクルで患者を処置するために十分であり、すなわち現在利用できるものよりも都合良い処置法を提供することができる。
抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を安定化する他の製剤または方法は、抗体を含有する凍結乾燥粉末の透明溶液ではないものを生じるかもしれない。非透明溶液の中では、粒状懸濁液を含んでなる組成物があり、粒状物は変動する寸法の構造の、そして微小球、微粒子、ナノ粒子、ナノスフェア（ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅ）、またはリポソームとして様々に知られている抗−ＣＮＧＨ００１０抗体を含有する組成物である。活性剤を含有するそのような比較的均質な本質的に球状の粒子製剤は、米国特許第４，５８９，３３０号明細書に教示されているように、活性物質およびポリマーを含有する水性相および非水性相を接触させ、続いて非水性相を蒸発させて水性相から粒子の合体を生じることにより形成することができる。
多孔性の微粒子は、米国特許第４，８１８，５４２号明細書に教示されているように、連
続溶媒中に分散した活性物質およびポリマーを含有する第１相を使用し、そして凍結乾燥または希釈−抽出−沈殿により懸濁液から溶媒を除去することにより調製することができる。そのような調製物に好適なポリマーは、ゼラチン寒天、澱粉、アラビノガラクタン、アルブミン、コラーゲン、ポリグルコール酸、ポリ乳酸、グリコライド−Ｌ（−）ラクチドポリ（イプシロン−カプロラクトン、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−乳酸）、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−グリコール酸）、ポリ（β−ヒドロキシ酪酸）、ポリエチレンオキシド、ポリエチレン、ポリ（アルキル−２−シアノアクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアミド、ポリ（アミノ酸）、ポリ（２−ヒドロキシエチル ＤＬ−アスパルタミド）、ポリ（エステルウレア）、ポリ（Ｌ−フェニルアラニン／エチレングリコール／１，６−ジイソシアナトヘキサン）およびポリ（メチルメタクリレート）からなる群から選択される天然または合成のコポリマーまたはポリマーである。特に好適なポリマーは、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコライドＬ（−）ラクチドポリ（イプシロン−カプロラクトン、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−乳酸）およびポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−グリコール酸のようなポリエステルである。ポリマーおよび／または活性物質を溶解するために有用な溶媒には、水、ヘキサフルオロイソプロパノール、メチレンクロライド、テトラヒドロフラン、ヘキサン、ベンゼンまたはヘキサフルオロアセトンセスキヒドレートを含む。活性物質を含有する相を第２相で分散する方法には、液滴を形成するために第１相をノズルのオリフィスに通すことを含む。
乾燥粉末製剤は、噴霧乾燥または蒸発による溶媒抽出、または結晶組成物の沈殿により、続いて水性もしくは非水性溶媒を除去するための１もしくは複数の工程によるような凍結乾燥以外の方法から得ることができる。噴霧乾燥した抗体調製物の調製は、米国特許第６，０１９，９６８号明細書に教示されている。抗体に基づく乾燥粉末組成物は、抗体の溶液もしくはスラリーおよび場合により賦形剤を、吸引可能な乾燥粉末を提供するための条件下で溶媒中にて噴霧乾燥することにより生成する。溶媒は容易に乾燥できる水およびエタノールのような極性化合物を含むことができる。抗体の安定性は、窒素ブランケット下または乾燥ガスとして窒素を使用することによるような、酸素の不存在下で噴霧乾燥する手順を行うことにより強化することができる。別の比較的乾燥している製剤は、典型的には国際公開第９９／１６４１９号パンフレットに教示されているような、ヒドロフルオロアルカン推進剤を含んでなる懸濁媒質中に分散された複数の穴を空けたミクロ構造の分散物である。安定化された分散物は、定量吸入器を使用して肺へ投与することができる。噴霧乾燥した薬剤の工業的製造に有用な装置は、ブッチ社（Ｂｕｃｈｉ Ｌｔｄ．）またはニトロ社（Ｎｉｔｒｏ Ｃｏｒｐ．）により製造されている。
本明細書に記載した安定な、または保護された製剤または溶液中のいずれかの少なくとも１つの抗−ＣＮＧＨ００１０抗体は、ＳＣもしくはＩＭ注入；経皮、肺、経粘膜、移植、浸透圧ポンプ、薬包、マイクロポンプ、または当該技術分野で周知であるような当業者が考えられる他の手段を含む種々の送達法を介して、本発明に従い患者に投与することができる。
発明の実施例
本発明を一般的に記載してきたが、本発明は以下の実施例を参照にしてより容易に理解され、これらの実施例は具体的説明の目的で提供され、そして限定することを意図しない。
本発明は前述の説明および実施例で具体的に記載される以外を実施することができるのは明らかである。
本発明の多数の修飾および変更が上記の教示に照らして可能であり、したがって添付する特許請求の範囲の中にある。
実施例１
ＣＮＧＨ００１０配列データ
ＣＮＧＨ００１０のゲノムヌクレオチド配列（配列番号１）は、１６３５６ｂｐに広がる。ＧｅｎｅＳｃａｎ、Ｆｇｅｎｅｓｈ（ｈｔｔｐ：／／ｇｅｎｏｍｅ．ｕｃｓｃ．ｅｄｕ／）およびＡｃｅｍｂｌｙプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｃｅｄｂ．ｏｒｇ／Ｃｏｒｎｅｌｌ／ａｃｅｍｂｌｙ／）のような幾つかの遺伝子予測アルゴリズムに基づき、ＣＮＧＨ００１０は２５エキソン（図１、表１）を含んでなることが予想される。エキソン１、７および１８はそれぞれ開始コドンを含み、そしてプロモーター、エンハンサーおよび他の調節モチーフの下流である；これらのエキソンは開始エキソン（ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｅｘｏｎ）として利用することができる。エキソン１５および２３は、終結コドンを含み、そして終結エキソン（ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｅｘｏｎ）として利用できる。選択的スプライシング転写産物の５つの種類が同定され、そしてＣＮＧＨ００１０．１、ＣＮＧＨ００１０．２、ＣＮＧＨ００１０．３、ＣＮＧＨ００１０．４およびＣＮＧＨ００１０．５（それぞれ配列番号２、４、６、８および１０、表２）に例示される。
Figure 2007525946
表２は種々のＣＮＧＨ００１０転写産物および各転写産物中に含まれるエキソンを示す
。太字で示すエキソンは各転写産物で不変であるが、各転写産物に関して列挙した他のエキソンは選択的にスプライシングされ、そして場合により種々の転写産物の一部である。表２に示すように、各転写産物に関するヌクレオチドおよびアミノ酸配列は存在するエキソンのまさにその組み合わせに依存して変動する。
Figure 2007525946
ＣＮＧＨ００１０．１は、エキソン７、１５および１８を除き、エキソン１で始まり、そしてエキソン２５で終わる任意の転写産物である。これはわずか１５エキソン（すなわちエキソン１−５、８、１３、１４、１６、１７、１９、２１−２３および２５）しかないか、または２２ものエキソン（すなわちエキソン１−６、８−１４、１６、１７および１９−２５）を有することができる。エキソン６、９−１２、２０および２４は、個別に、または組合わさって示差的にスプライシングされ得る。したがってＣＮＧＨ００１０．１転写産物は１８０９−２１３２ｂｐの範囲である。それらはエキソン組成に依存して４５９−５５５アミノ酸の範囲にあるペプチドをコードする。
ＣＮＧＨ００１０．２は、エキソン６および７を除き、エキソン１で始まり、そしてエキソン１５で終わる任意の転写産物である。これはわずか９エキソン（すなわちエキソン１−５、８および１３−１５）しかないか、または１３ものエキソン（すなわちエキソン１−６および８−１５）を有することができる。エキソン９−１２は、個別に、または組合わさって示差的にスプライシングされ得る。したがってＣＮＧＨ００１０．２転写産物は１５３３−１７３４ｂｐの範囲であり、エキソン組成に依存して３７３−４４０アミノ酸の範囲にあるペプチドをコードする。
ＣＮＧＨ００１０．３は、エキソン１５および１８を除き、エキソン７で始まり、そしてエキソン２５で終わる任意の転写産物である。これはわずか１１エキソン（すなわちエキソン７、８、１３、１４、１６、１７、１９、２１−２３および２５）しかないか、または１７ものエキソン（すなわちエキソン７−１４、１６、１７および１９−２５）を有することができる。エキソン９−１２、２０および２４は、個別に、または組合わさって示差的にスプライシングされ得る。したがってＣＮＧＨ００１０．３転写産物は８８１−１１５９ｂｐの範囲であり、エキソン組成に依存して１７２−２５３アミノ酸の範囲にあるペプチドをコードする。
ＣＮＧＨ００１０．４は、エキソン７で始まり、そしてエキソン１５で終わる任意の転写産物である。これはわずか５エキソン（すなわちエキソン７、８および１３−１５）しかないか、または９ものエキソン（すなわちエキソン７−１５）を有する。エキソン９−１２は、個別に、または組合わさって示差的にスプライスシングされ得る。したがってＣＮＧＨ００１０．４転写産物は４４５−６４６ｂｐの範囲であり、エキソン組成に依存して８２−１４９アミノ酸の範囲にあるペプチドをコードする。
ＣＮＧＨ００１０．５は、エキソン２０および２４を除き、エキソン１８で始まり、そしてエキソン２５で終わる任意の転写産物である。これは６エキソン、すなわちエキソン１８、１９、２１−２３および２５を有する。ＣＮＧＨ００１０．５転写産物は、８８アミノ酸のペプチドをコードする６００ｂｐを含む。
これらの５種類に加えて、エキソン５ａ、５ｂ、７ａまたは８ａを含む転写産物は、これらのエキソンが対応する転写産物で始まる部位でフレーム外のスプライシング（ｏｕｔ−ｏｆ−ｆｒａｍｅ−ｓｐｌｉｃｉｎｇ）を有し；これはエキソンの部位で、またはエキソンの下流で短縮化されたタンパク質を生じ得る。しばしば、短縮化タンパク質はエキソン１３中のヌクレオチド７６１１位で選択的な開始ＡＴＧコドンを使用する。
配列番号３のＣＮＧＨ００１０．１アミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＹ３５８４１２（国際公開第２０００６１６２３号パンフレット）に対して４４９残基にわたり９４％の同一性を有する；配列番号５のＣＮＧＨ００１０．２アミノ酸配列は、Ｄｇｅｎ Ｎｏ．ＡＡＦ５４２３８（国際公開第２０００７８９６１号パンフレット）に対して４４０残基にわたり１００％の同一性を有する；配列番号７のＣＮＧＨ００１０．３アミノ酸配列は、Ｄｇｅｎ Ｎｏ．ＡＡＨ２３８１０（国際公開第２００１３２８８８号パンフレット）に対して１２７残基にわたり９９％の同一性を有する；配列番号９のＣＮＧＨ００１０．４アミノ酸配列は、Ｄｇｅｎ Ｎｏ．ＡＤＥ２８２７８（国際公開第２００３０４６１５２号パンフレット）に対して９３残基にわたり９８％の同一性を有する；そして配列番号１１のＣＮＧＨ００１０．５アミノ酸配列は、Ｄｇｅｎ Ｎｏ．ＡＡＦ９７８９４（国際公開第２００１２１６５８号パンフレット）に対して１０２残基にわたり８５％の同一性を有する。
実施例２
ＣＮＧＨ００１０転写産物
５’および３’−ＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ末端の迅速な分析）は、製造元のプロトコール（カタログ番号Ｌ１５０２−０１、インビトロジェン社、カールスバッド、カリフォルニア州）に従い、Ａ４３１細胞および正常なヒト成人の男性皮膚組織に由来する全ＲＮＡについて行った。簡単に説明すると、５μｇの全ＲＮＡをウシ腸アルカリホスファターゼで脱リン酸化して、非ｍＲＮＡまたは短縮化ｍＲＮＡからリン酸基を除去した。次いでＲＮＡはタバコの酸性ピロホスファターゼで処理して成熟ｍＲＮＡから５’キャップ構造を除去した。次いで既知の配列のＲＮＡオリゴヌクレオチドは、成熟ｍＲＮＡの５’末端に連結し、次いでＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＲＴ酵素で逆転写するための鋳型として使用し、独自な既知の配列も含むオリゴｄＴプライマーでプライムした（ｐｒｉｍｅｄ）。ＲＴは４２℃で１．５時間行った。生成したｃＤＮＡはそれらの５’末端および３’末端に共通の配列を含み、そしてＣＮＧＨ００１０遺伝子（配列番号１２−２１、表３）に特異的なネスティッドオリゴヌクレオチドを用いてＰＣＲを介してｃＤＮＡのすべてまたは一部を増幅するために使用することができた。
Figure 2007525946
エキソン１中の配列番号１２または１３とエキソン２５中の配列番号１８または１９（３’ＵＴＲ−２）は、ＣＮＧＨ００１０．１転写産物を増幅するために使用した。エキソン１５中の配列番号１２または１３と配列番号２０または２１は、ＣＮＧＨ００１０．２転写産物を増幅するために使用した。エキソン７中の配列番号１４または１５とエキソン２５中の配列番号１８または１９は、ＣＮＧＨ００１０．３転写産物を増幅するために使用した。エキソン７中の配列番号１４または１５とエキソン１５中の配列番号２０または２１は、ＣＮＧＨ００１０．４転写産物を増幅するために使用した。エキソン１８中の配列番号１６または１７とエキソン２５中の配列番号１８または１９は、ＣＮＧＨ００１０．５転写産物を増幅するために使用した。図２に示すＲＴ−ＰＣＲデータは、ＣＮＧＨ００１０．１（配列番号２）、１０．２（配列番号４）が最高レベルであり、次いで１０．５（配列番号１０）が低いレベルにあり、１０．４（配列番号８）が有意に低いレベルであり、そして１０．３（配列番号６）がすべての転写産物中で最低であることを示した。
図４に示すように、５組のフォーワード／リバースプライマーおよびプローブを設計して、リアルタイムＰＣＲを適用することにより５個のドミナントスプライスバリアントを同定した。各スプライスバリアントについて、フォーワードおよびリバースプライマーおよびＴａｑｍａｎプローブを示す。種々の濃度のＴＮＦα、ＬＳＰおよびＩＬ−２で処理したＡ４３１およびＨＣＴ１１６細胞から抽出した全ＲＮＡを、ｃＤＮＡ鋳型に逆転写し、これは次いでこれら５組のプライマー／プローブを使用してリアルタイムＰＣＲにより増幅した。ＣＮＧＨ００１０．２およびＣＮＧＨ００１０．５は種々の濃度のＴＮＦα、ＬＳＰおよびＩＬ−２によりアップレギュレートされた。
Figure 2007525946
実施例３
予想されるＣＮＧＨ００１０タンパク質ドメイン
ＣＮＧＨ００１０．１およびＣＮＧＨ００１０．２ポリペプチドは、それぞれ最高５５５および４４０アミノ酸を有することができる（それぞれ配列番号３および５）。最初の２１アミノ酸はシグナルペプチドを、続いて５個の主要ドメインをコードする（図３）。シグナルペプチドを含む第１ドメインはエキソン１によりコードされ、そして既知のいかなるタンパク質またはタンパク質ドメインにも有意な相同性がない。このドメインはＮＮＰｒｅｄｉｃｔプログラムに基づき、アルファ−ヘリックス２次構造の少なくとも６個のサブドメインを形成すると予想される。エキソン２にコードされる第２ドメインは、コラーゲン−およびコラーゲン様分子に見られるようなコイルド−コイルド（ｃｏｉｌｅｄ−ｃｏｉｌｅｄ）構造を形成することが知られている１９個のグリシン−Ｘ−Ｙ反復を有する。このドメインには次いでエキソン４−８によりコードされる示差的にスプライシングされたセリン−グリシンリッチドメインが続く（最高４２％のセリン、３７％のグリシン）。示差的スプライシングは、セリン−グリシン残基のサイズおよび量を改変すると思われる。
示差的にスプライシングされたスペーサードメインはエキソン９−１７によりコードされる。この領域をコードするエキソンは、大変小さく３６から６０ヌクレオチドのサイズの範囲である。この領域はＮＮＰｒｅｄｉｃｔプログラムを使用して、もしあるならば最小の２次構造を有することが予想される。この領域に生じる示差的スプライシングは、セリン−グリシンリッチドメインとＣ−末端ドメインとの間の距離を調節すると思われる。ＣＮＧＨ００１０．１（配列番号３）は、既知のタンパク質とは相同性がないエキソン１９−２３によりコードされる別のドメイン中で終結する。このドメインは予測されるアルファ−ヘリックスの少なくとも２つの領域を有することが予想される。ＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５）ポリペプチドは、エキソン１９−２３によりコードされるＣ−末端ドメインを除き、１０．１（配列番号３）ポリペプチド中に含まれるすべてのドメインを含む。ＣＮＧＨ００１０．３（配列番号７）ポリペプチドは最高２５３個のアミノ酸を含むことができ、そして示差的にスプライシングされたセリン−グリシンリッチドメインの一部および示差的にスプライシングされたスペーサードメインおよびＣ−末端ドメインを含む。ＣＮＧＨ００１０．４（配列番号９）ポリペプチドは最高約１４９個のアミノ酸を含み、そして示差的にスプライシングされたセリン−グリシンリッチドメインの一部および示差的にスプライシングされたスペーサードメインを含む。最後にＣＮＧＨ００１０．５（配列番号１１）ポリペプチドは８８アミノ酸を有し、そしてエキソン１８によりコードされるシグナルペプチドに先行するＣ−末端ドメインを本質的に含む。
ＣＮＧＨ００１０のドメインは、コラーゲン様のコイルド−コイル構造を介してコラーゲンまたはアジポネクチンのようなホモ（すべてＣＮＧＨ００１０．１（配列番号３））またはすべてＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５））またはヘテロ（ＣＮＧＨ００１０．１（配列番号３）およびＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５）の混合）−三量体の集成を可能とする。Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ反復の幾つかのＸ−Ｙ位でのプロリンの存在は、未知のメカニズムによりこれら三量体を安定化し、そして分子がコラーゲン様構造を形成するさらなる証拠を提供すると考えられる。組換え的に発現したＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５）ポリペプチドの予備的な生化学的特性決定では、この分子がまさにオリゴマーを形成することを示す。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（図４に示す）では、還元および非還元サンプルの両方に存在する一本鎖の２、３および４倍の分子量を持つ分子が示され、オリゴマーの幾つかが共有結合していることを示す。この結果はＳＥＬＤＩ質量分析およびゲル濾過ＨＰＬＣにより確認された。コラーゲン分子に見られるように、三量体鎖間の共有架橋結合は、ポリペプチド中に存在するリシン残基の翻訳後修飾により見ることができる。この修飾はポリペプチドの共有二量体、三量体および多量体（フィブリル）を生じる。ＣＮＧＨ００１０１０．５（配列番号１１）分子は本質的にＣ−末端ドメインであり、そして独自の機能的活性を有することができる。
実施例４
ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの分泌
ＣＮＧＨ００１０．１および１０．２ポリペプチドは、同じ予想されるシグナル配列を有する（配列番号３および５のアミノ酸１−２１）。予想されるＣＮＧＨ００１０．５ポリペプチド配列は、異なるシグナル配列を有する（配列番号１１のアミノ酸１−２４）。Ｈｉｓ標識ＣＮＧＨ００１０融合タンパク質のインビトロでの一過性発現、ならびにＣＮＧＨ００１０．５ミメティボディ（その詳細は実施例６に記載する）は、シグナル配列が細胞外分泌のためにこれらのペプチドを標的としていることが確認された。したがってＣＮＧＨ００１０．１（配列番号４）、１０．２（配列番号５）および１０．５（配列番号１１）ポリペプチドは、恐らく細胞外空間に分泌され、ここでそれらの効果を発揮するのかもしれない。ＣＮＧＨ００１０．３およびＣＮＧＨ００１０れ４（配列番号７および９）は、シグナル配列を含まない。
実施例５
選択した疾患組織中の相対的ＣＮＧＨ００１０転写産物レベル
ＣＮＧＨ００１０プライマーおよびプローブ、プライマー：ＣＮＧＨ００１０ｓｓ１−ＧＧＣ ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＡＴ ＧＧＡ ＣＡＴ ＡＡ（配列番号２３）、ＣＮＧＨ００１０ａｓ１−ＧＣＴ ＴＧＧ ＡＴＴ ＴＡＡ ＡＡＴ ＴＣＴ ＴＣＣ ＡＧＡ ＡＡ（配列番号２４）、ＴａｑＭａｎ ＭＧＢプローブ：ＣＮＧＨ００１０ｐ１−６ＦＡＭ−ＧＣＴ ＴＴＴ ＣＡＣ ＡＣＣ ＣＧＧ ＧＴ−ＭＧＢＮＦＱ（配列番号２２）は、Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアを使用して設計し、そしてアプライドバイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（フォスターシティ、カリフォルニア州）により合成した。全ＲＮＡを種々の組織から単離し、逆転写し、そしてこれらプライマー／プローブを使用してＰＣＲにより増幅した。ＣＮＧＨ００１０の相対的転写産物レベルを以下の表５に示す。
Figure 2007525946
カリブレーション組織である正常なヒト脳ＲＮＡと比較した時、上昇したＣＮＧＨ００１０ ｍＲＮＡレべルが気腫肺組織、グレーヴス病患者または炎症性甲状腺炎の甲状腺組織、炎症性扁桃、子宮内膜症患者の卵巣、糖尿病性膵臓および変形性関節症の関節で検出された。
実施例６
タンパク質発現
ＣＮＧＨ００１０．２（配列番号）タンパク質の発現は、ヘキサ−Ｈｉｓタグのインフレイムにエキソン１−５、８、９、１２および１３の一部を含有するＣＮＧＨ００１０．２の転写産物の大部分を、ＣＭＶプロモーターにより駆動される発現ベクター中にクローニングすることにより行った。この構築物をＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、そしてＨｉｓタグで精製した。発現し、そして精製した物質のＮ−末端配列は、精製されたタンパク質の同一性を確認し、そしてシグナルヘプチド分解を示した。発現し、そして精製されたタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、分子がオリゴマーを形成することを示し（図４）、これは非還元ＭＳ−ＳＥＬＤＩ（表面強化レーザー脱着／イオン化）およびゲル濾過ＨＰＬＣにより確認された。このデータは、ＣＮＧＨ００１０．２およびＣＮＧＨ００１０．１転写産物が、エキソン１によりコードされる同じシグナル配列を含むので、細胞外に分泌される能力を有することを示す。加えて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＬＤＩ−ＭＳおよびゲル濾過ＨＰＬＣは、この分子がオリゴマーを形成する能力を有することを示す。
ＣＮＧＨ００１０．５（配列番号１１）はＨＥＫ２９３細胞中で単独では発現できなか
ったが、ミメティボディとして工作された。アミノ酸１−８６を含有するＣＮＧＨ００１０．５コード領域のほとんどは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３に融合したヒトＩｇＨＪ２セグメントを含む発現プラスミド中に工作された。プラスミドは組換え遺伝子の転写のためにＣＭＶプロモーターを含み、そしてアミノ酸１−２４をコードするＣＮＧＨ００１０．５内因性シグナル配列を利用した。この構築物はＨＥＫ２９３細胞に一時的にトランスフェクトされ、そして生成した分泌された分子をプロテインＡアフィニティビーズにより精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析では、ＣＮＧＨ００１０．５成熟アミノ酸配列、続いてヒトＩｇＧ１のＪ２、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３を含有する予想された分子量のタンパク質が発現したにとを確認した。
ＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５）およびＣＮＧＨ００１０．５（配列番号１１）タンパク質のＡ４３１およびＨＣＴ１１６細胞中での発現レベルを、ＴＮＦ−αおよびＬＰＳによる刺激に応答して測定した。ＴＮＦ−αおよびＬＰＳによる刺激は、ＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５）およびＣＮＧＨ００１０．５（配列番号１１）の発現の増加を引き起こした。同様に、ＣＮＧＨ００１０．２（配列番号５）およびＣＮＧＨ００１０．５（配列番号１１）は、ＩＬ−２の存在下で増加した。加えて、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＧＭＣＳＦレベルは、Ａ４３１細胞においてＴＮＦ−α処理によっても増大し、そしてそれらはキメラ、抗−ＴＮＦ−α抗体の存在下で減少した。ＩＬ−６は重要な炎症性サイトカインであり、ＴＮＦ−α処理でのＣＮＧＨ００１０．２および１０．５の増加に伴うこのサイトカインの増加は、ＣＮＧＨ００１０のメカニズムおよび炎症性応答の可能性を示す。
ＩＬ−８は炎症に重要な役割を果たすケモカインである。これは炎症部位にリンパ球および白血球を集め、そして他のサイトカイン生産を刺激する。ＧＭＣＳＦはマクロファージ／単球ならびに他のリンパ球の刺激物質であり、これらも炎症応答に役割を果たす。この証拠は、ＣＮＧＨ００１０が炎症の調節に役割を有し、したがって治療的展開の良い標的となり得ることを示唆する。
本発明を特定の具体的態様を参照にして説明し、そして記載してきたが、本発明は詳細に示した態様に限定されることを意図していない。むしろ本発明は本明細書に開示するＣＮＧＨ００１０ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、装置およびキットならびにそれらの使用を対象とし、そして種々の修飾が特許請求の均等物の観点および範囲で、しかも本発明の精神から逸脱することなく詳細になされ得る。
垂直線により表すエキソンおよび曲がった矢印で表す転写開始部位を含むＣＮＧＨ００１０遺伝子のゲノム構造を表す。 Ａ４３１細胞からＲＮＡを使用してＲＴ−ＰＣＲにより定めた相対的転写産物レベルを示す。 ＣＮＧＨ００１０転写産物によりコードされるアミノ酸の発現データおよび分析に基づき予想されるタンパク質ドメインを示す。 ＨＥＫ２９３細胞中で発現したＣＮＧＨ００１０．２の還元型および非還元型サンプルのＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。

Claims (82)

  1. 配列番号２、４、６、８および１０からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  2. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
  3. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドの自然に存在する対立遺伝子バリアントをコードする単離された核酸分子。
  4. 配列番号２、４、６、８および１０のいずれかの１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  5. 配列番号２、４、６、８および１０のいずれかの１つに対して少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  6. 配列番号２、４、６、８および１０のいずれかの１つの部分に対して少なくとも９０％の同一性を有する少なくとも４５ヌクレオチド残基のヌクレオチド配列、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  7. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメントをコードする単離された核酸分子であって、フラグメントが配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基を含んでなるアミノ酸配列を有する、上記の単離された核酸分子。
  8. ヌクレオチド配列がさらに異種ポリペプチドをコードする部分を含んでなる、請求項１に記載の核酸分子。
  9. さらにベクター核酸残基を含んでなる、請求項１ないし８のいずれかに記載の核酸分子。
  10. 請求項９に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
  11. 請求項９に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
  12. 宿主細胞が哺乳動物、細菌、酵母または昆虫起源である、請求項１１に記載の宿主細胞。
  13. （ｉ）配列番号１、２、４、６、８および１０のいずれかに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸分子と、約４５℃で６×ＳＳＣ中でハイブリダイズし、続いて約６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で洗浄する化合物、ならびに（ｉｉ）使用説明書、を含んでなるキット。
  14. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
  15. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドの自然に存在する対立遺伝子バリアントを含んでなる単離されたポリペプチド。
  16. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
  17. 配列番号３、５、７、９および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１５個の連続するアミノ酸を含んでなる単離されたポリペプチド。
  18. 異種ポリペプチドに操作可能に連結された請求項１４に記載のポリペプチドを含んでなる融合ポリペプチド。
  19. 異種ポリペプチドが免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーまたは該メンバーのフラグメントである、請求項１８に記載の融合ポリペプチド。
  20. 上記ポリペプチドがＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する、請求項１４ないし１９のいずれかに記載のポリペプチド。
  21. 請求項１４ないし１９のいずれかに記載のポリペプチドに特異的に結合するモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、融合タンパク質またはそれらのフラグメントを含んでなる抗体。
  22. 請求項２１の抗体をコードする単離された核酸分子。
  23. ＣＮＧＨ００１０抗体が検出可能または回収可能な量で発現される、請求項２２に記載の核酸分子をｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕの条件下で翻訳することを含んでなる、少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０抗体の生産法。
  24. 請求項２３に記載の方法により生産される抗体。
  25. 請求項２２に記載の単離された核酸分子を含んでなるベクター。
  26. 宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項２２に記載の単離された核酸分子を含んでなる宿主細胞。
  27. 宿主細胞が、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、ＨｅｐＧ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、ミエローマ細胞およびリンパ腫細胞、またはそれらの任意の誘導体、不死化または形質転換した細胞から選択される１もしくは複数である請求項２６に記載の宿主細胞。
  28. ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドが検出可能または回収可能な量で発現される、請求項１に記載の核酸分子をイン ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）、イン ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）またはイン サイチュ（ｉｎ ｓｉｔｕ）の条件下で翻訳することを含んでなる、少なくとも１つのＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの生産法。
  29. 請求項２８に記載の方法により生産されるポリペプチド。
  30. 組換え抗体を請求項１４ないし１９のいずれか１項に記載のポリペプチドで免疫感作またはスクリーニングすることを含んでなる、ポリペプチドに対する抗体の生成法。
  31. 請求項１に記載の核酸分子、請求項１４に記載のポリペプチドまたはポリペプチドに対する抗体を含んでなる組成物。
  32. 請求項１に記載の核酸分子、請求項１４に記載のポリペプチド、およびポリペプチドに対する抗体の１もしくは複数のアゴニストまたはアンタゴニストを含んでなる組成物。
  33. 上記組成物がさらに製薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含んでなる、請求項３２に記載の組成物。
  34. 検出可能な標識またはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸（ＧＩ）管薬、ホルモン薬、流体または電解質バランスのための薬、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳または鼻薬、局所用薬、栄養補助剤、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される化合物、組成物またはポリペプチドの１もしくは複数を含んで成る組成物と組み合わせて投与される請求項３２に記載の組成物。
  35. 液体またはガス溶液、混合物、懸濁液、エマルジョンまたはコロイド、凍結乾燥調製物および粉末からなる群から選択される１もしくは複数の状態の請求項３２に記載の組成物。
  36. 細胞、組織、臓器または動物中の請求項１に記載の核酸分子、請求項１４に記載のポリペプチドおよびポリペプチドに対する抗体の１もしくは複数を検出する手段を含んでなる組成物を接触または投与することを含んでなる、該細胞、組織、臓器または動物のＣＮＧＨ００１０関連状態の診断法。
  37. 有効量の請求項３１に記載の組成物またはその組成物に対するアゴニストもしくはアンタゴニストの１もしくは複数を含んでなる組成物を、細胞、組織、臓器または動物に接触または投与することを含んでなる、該細胞、組織、臓器または動物のＣＮＧＨ００１０関連状態の処置法。
  38. 上記有効量が上記細胞、組織、臓器または動物１キログラムあたり約０．００１−５０ｍｇの抗体；約０．０００００１−５００ｍｇのポリペプチド；または約０．０００１−１００μｇの核酸分子である請求項３７に記載の方法。
  39. 上記接触または投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内および経皮からなる群から選択される１もしくは複数の様式による、請求項３７に記載の方法。
  40. 検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗感染薬、心血管（ＣＶ）系薬、中枢神経系（ＣＮＳ）薬、自律神経系（ＡＮＳ）薬、気道薬、胃腸管（ＧＩ）薬、ホルモン薬、流体もしくは電解質バランスのための薬剤、血液製剤、抗腫瘍薬、免疫調節薬、目、耳もしくは鼻の薬、局所用薬、栄養補助剤、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される有効量の化合物またはポリペプチドの１もしくは複数を含んで成る少なくとも１つの組成物を、上記接触または投与工程の前、それと同時または後に投与することをさらに含んでなる、請求項３９に記載の方法。
  41. 細胞、組織、臓器または動物中で、有効量のＣＮＧＨ００１０核酸分子またはＣＮＧＨ００１０ポリペプチドレベルまたはＣＮＧＨ００１０活性のモジュレーターの１もしくは複数を含んでなる組成物を患者に接触または投与することを含んでなる、該細胞、組織、臓器または動物のＣＮＧＨ００１０関連状態の処置法。
  42. 有効量の請求項３１に記載の組成物または組成物に対するアゴニストもしくはアンタゴニストを含んでなる組成物を、細胞、組織、臓器または動物に接触または投与することを含んでなる、該細胞、組織、臓器または動物の上皮関連状態の処置法。
  43. 細胞、組織、臓器または動物中で有効量のＣＮＧＨ００１０核酸分子またはＣＮＧＨ００１０ポリペプチドレベルまたはＣＮＧＨ００１０活性のモジュレーターの少なくとも１つを含んでなる組成物を患者に接触または投与することを含んでなる、該細胞、組織、臓器または動物の上皮関連状態の処置法。
  44. 請求項１に記載の核酸分子、請求項１４に記載のポリペプチド、およびポリペプチドに対する抗体のアゴニストもしくはアンタゴニストの１もしくは複数を含んでなるデバイスであって、該デバイスが該ポリペプチド、抗体、アゴニスト、アンタゴニストまたは核酸の１もしくは複数を、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内および経皮からなる群から選択される１もしくは複数の様式により接触または投与するために適する上記デバイス。
  45. 包装材料および請求項１に記載の核酸分子、請求項１４に記載のポリペプチド、およびポリペプチドに対する抗体、アゴニストもしくはアゴニストの１もしくは複数を含んでなる容器を含んでなる、ヒトの製薬学的または診断的使用のための製品。
  46. 上記容器が非経口、皮下、筋肉内、静脈内、網内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、膀胱内、病変内局所、ボーラス、膣、直腸、頬内、舌下、鼻内または経皮送達デバイスまたはシステムの構成要素である、請求項４５に記載の製品。
  47. 請求項１に記載の核酸、請求項１４に記載のポリペプチド、およびポリペプチドに対する抗体、アゴニストもしくはアゴニストの１もしくは複数を生産する方法であって、該核酸を転写し、かつ／または検出可能または回収可能な量の該ポリペプチドまたは抗体を発現することができるベクター、宿主細胞、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物または植物細胞の１もしくは複数を提供することを含んでなる上記方法。
  48. 請求項４７に記載の方法により生産されるポリペプチド、抗体、アゴニスト、アンタゴニストまたは核酸分子。
  49. 生物学的サンプル中の請求項１ないし８のいずれかに記載の核酸分子、または請求項１４ないし１９のいずれかに記載のポリペプチドの存在または不存在を検出する方法であって、被検体から生物学的サンプルを得、そして生物学的サンプルを該ポリペプチドを検出することができる化合物または作用物質と接触させることを含んでなり、生物学的サンプル中のポリペプチドまたは核酸分子の存在が検出される、上記方法。
  50. 配列番号１のヌクレオチド１０１−５２６（エキソン１）、７８６−９８６（エキソン
    ２）、１０９９−１１５５（エキソン３）、１７６３−１８１３（エキソン４）、１９８３−２１６５（エキソン５）、３３２４−３３９２（エキソン８）、７５９０−７６３７（エキソン１３）、７８１１−７８５８（エキソン１４）、１０６９０−１０７４６（エキソン１６）、１１３９３−１１４４０（エキソン１７）、１２９９６−１３０４３（エキソン１９）、１３５４７−１３６１８（エキソン２１）、１４６７９−１４７０２（エキソン２２）、１４８１３−１４８６０（エキソン２３）および１６０３８−１６３５６（エキソン２５）のヌクレオチド配列、および任意に配列番号１のヌクレオチド２９３６−２９８０（エキソン６）、３６１５−３６６５（エキソン９）、５３３６−５３７１（エキソン１０）、６０６５−６１１８（エキソン１１）、７３９１−７４５０（エキソン１２）、１３１５７−１３１９８（エキソン２０）および１５８９５−１５９２９（エキソン２４）からなる群からの１もしくは複数、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  51. 配列番号１のヌクレオチド１０１−５２６（エキソン１）、７８６−９８６（エキソン２）、１０９９−１１５５（エキソン３）、１７６３−１８１３（エキソン４）、１９８３−２１６５（エキソン５）、３３２４−３３９２（エキソン８）、７５９０−７６３７（エキソン１３）、７８１１−７８５８（エキソン１４）および１０１２９−１０１５５（エキソン１５）のヌクレオチド配列、および任意に配列番号１のヌクレオチド３６１５−３６６５（エキソン９）、５３３６−５３７１（エキソン１０）、６０６５−６１１８（エキソン１１）および７３９１−７４５０（エキソン１２）からなる群からの１もしくは複数、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  52. 配列番号１のヌクレオチド３１４９−３２０５（エキソン７）、３３２４−３３９２（エキソン８）、７５９０−７６３７（エキソン１３）、７８１１−７８５８（エキソン１４）、１０６９０−１０７４６（エキソン１６）、１１３９３−１１４４０（エキソン１７）、１２９９６−１３０４３（エキソン１９）、１３５４７−１３６１８（エキソン２１）、１４６７９−１４７０２（エキソン２２）、１４８１３−１４８６０（エキソン２３）および１６０３８−１６３５６（エキソン２５）のヌクレオチド配列、および任意に配列番号１のヌクレオチド３６１５−３６６５（エキソン９）、５３３６−５３７１（エキソン１０）、６０６５−６１１８（エキソン１１）、７３９１−７４５０（エキソン１２）、１３１５７−１３１９８（エキソン２０）および１５８９５−１５９２９（エキソン２４）からなる群からの１もしくは複数、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  53. 配列番号１のヌクレオチド３１４９−３２０５（エキソン７）、３３２４−３３９２（エキソン８）、７５９０−７６３７（エキソン１３）、７８１１−７８５８（エキソン１４）および１０１２９−１０１５５（エキソン１５）のヌクレオチド配列、および任意に配列番号１のヌクレオチド３６１５−３６６５（エキソン９）、５３３６−５３７１（エキソン１０）、６０６５−６１１８（エキソン１１）および７３９１−７４５０（エキソン１２）からなる群からの１もしくは複数、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  54. 請求項５０ないし５３に記載の任意のヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または該ヌクレオチド配列の正確な相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
  55. 請求項５０ないし５３に記載の任意のヌクレオチド配列にコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメントをコードする単離された核酸分子であって、フラグメントが請求項５０ないし５３に記載の任意のヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列の少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基を含んでなるアミノ酸配列を有する、
    上記の単離された核酸分子。
  56. ヌクレオチド配列がさらに異種ポリペプチドをコードする部分を含んでなる、請求項５０ないし５３のいずれかに記載の核酸分子。
  57. さらにベクター核酸残基を含んでなる、請求項５０ないし５３のいずれかに記載の核酸分子。
  58. 請求項５７に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
  59. 請求項５７に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
  60. 宿主細胞が哺乳動物、細菌、酵母または昆虫起源である、請求項５９に記載の宿主細胞。
  61. （ｉ）請求項５０ないし５３のいずれかに記載のヌクレオチド配列と少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸分子と、約４５℃で６×ＳＳＣ中でハイブリダイズし、続いて約６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で洗浄する化合物、ならびに（ｉｉ）使用説明書、を含んでなるキット。
  62. 請求項５０ないし５３に記載の任意のヌクレオチド配列によりコードされる単離されたポリペプチド。
  63. 請求項５０ないし５３に記載の任意のヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
  64. 請求項５０ないし５３に記載の任意のヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列の少なくとも１５個の連続するアミノ酸を含んでなる単離されたポリペプチド。
  65. 異種ポリペプチドに操作可能に連結された請求項６２に記載のポリペプチドを含んでなる融合ポリペプチド。
  66. 異種ポリペプチドが免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーまたは該メンバーのフラグメントである、請求項６５に記載の融合ポリペプチド。
  67. 上記ポリペプチドがＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの少なくとも１つの活性を有する、請求項６２に記載のポリペプチド。
  68. 請求項６２に記載のポリペプチドに特異的に結合するモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、融合タンパク質またはそれらのフラグメントを含んでなる抗体。
  69. 請求項６８の抗体をコードする単離された核酸分子。
  70. 抗体が検出可能または回収可能な量で発現される、請求項６９に記載の核酸分子をイン
    ビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）、イン ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）またはイン サイチュ（ｉｎ ｓｉｔｕ）の条件下で翻訳することを含んでなる抗体の生産法。
  71. 請求項７０に記載の方法により生産される抗体。
  72. 請求項６９に記載の単離された核酸分子を含んでなるベクター。
  73. 宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項６９に記載の単離された核酸分子を含んでなる宿主細胞。
  74. 宿主細胞が、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、ＨｅｐＧ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、ミエローマ細胞およびリンパ腫細胞、またはそれらの任意の誘導体、不死化または形質転換した細胞から選択される１もしくは複数である請求項７３に記載の宿主細胞。
  75. ＣＮＧＨ００１０ポリペプチドが検出可能または回収可能な量で発現される、請求項５０ないし５３のいずれかに記載の核酸分子をｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｓｉｔｕの条件下で翻訳することを含んでなるＣＮＧＨ００１０ポリペプチドの生産法。
  76. 請求項７５に記載の方法により生産されるポリペプチド。
  77. 組換え抗体を請求項６２に記載のポリペプチドで免疫感作またはスクリーニングすることを含んでなる、ポリペプチドの抗体の生成法。
  78. 請求項５０ないし５３のいずれかに記載の核酸分子、核酸分子にコードされるポリペプチド、およびポリペプチドに対する抗体の１もしくは複数を含んでなる組成物。
  79. 請求項５０ないし５３のいずれかに記載の核酸分子、核酸分子にコードされるポリペプチド、およびポリペプチドに対する抗体の１もしくは複数のアゴニストもしくはアンタゴニストを含んでなる組成物。
  80. 上記組成物がさらに少なくとも１つの製薬学的に許容され得る担体または希釈剤を含んでなる、請求項７９に記載の組成物。
  81. 配列番号１のヌクレオチド１９８３−２０７６（エキソン５ａ）、２１１７−２１６５（エキソン５ｂ）、３１６８−３１９７（エキソン７ａ）および３１８９−３３９３（エキソン８ａ）からなる群からの１もしくは複数を含有する短縮化ＣＮＧＨ００１０ヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
  82. 本明細書に記載する任意の発明。
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