CN1844122A - 苯并叶绿卟啉类光敏剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是一种新型二氢卟吩类光敏剂——苯并叶绿卟啉类化合物及其制备方法和用途。本发明化合物的结构如通式(I)所示，其中，R₁代表H、CH₃、CO₂CH₃、CH₂CO₂CH₃、CHCO₂CH₃；R₂代表COOCH₃、CO，当R₂为CO时与R₁为CHCOOCH₃形成5元环；R₃代表H、低级烷基、(CH₂) _mOH、(CH₂) _mNR₄R₅，R₄和R₅独立地表示低级烷基，m表示2－6之间的整数，低级烷基指含1－6个碳原子的直链或支链烷基。与现有临床应用的新一代光敏剂维替泊芬(verteporfin)相比，本发明苯并叶绿卟啉类化合物具有高效、低毒等优点，可用于制备新的光动力治癌药物和光动力治疗良性血管性疾病如老年性黄斑变性(一种视网膜微血管增生性疾病)及鲜红斑痣(一种先天性皮肤微血管畸形病变)的药物。

Description

苯并叶绿卟啉类光敏剂及其制备方法和用途

                           技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种新型二氢卟吩类光敏剂——苯并叶绿卟啉类化合物及其制备方法和用途。

                           背景技术

光动力治疗(photodynamic therapy，PDT)是80年代初发展起来的治疗恶性肿瘤新技术。其治疗基础为：用一定波长的光辐照选择性摄入了光敏剂的肿瘤组织，由光敏剂诱发光动力反应，对肿瘤细胞产生细胞毒灭活作用导致肿瘤组织坏死而发挥治疗作用。

第一代卟啉类光敏剂如血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative，HpD)、光敏素II(Photofrin II，商品名：卟吩姆钠，Porfimer Sodium)、癌光啉(Photocarcinorin，PSD-007)等存在如下缺点：(1)均为复杂的混合卟啉制剂，质量难以控制；(2)红光区(＞600nm)吸收系数(ε)小，导致对靶病灶光动力效应低，限制了疗效的提高；(3)对肿瘤无选择性定位作用的光敏化卟啉含量高及在体内清除慢，造成对正常组织的光毒性大。

新一代二氢卟吩类光敏剂如苯并卟啉衍生物(benzoporphyrin derivative，BPD)及叶绿素a降解衍生物等，由于它们具有红光区(＞600nm)最大吸收波长(λ_max)较卟啉类光敏剂红移且吸收系数(ε)高、光敏作用强及在体内清除快等优点而基本克服了已成为肿瘤PDT新药研究领域的热点。其中，苯并卟啉单酸环A(BPD-MA，商品名：Verteporfin，维替泊芬)已由加拿大QLT公司开发，于2001年在美国获准用于肿瘤和视网膜黄斑变性的临床PDT治疗，BPD-MA的合成路线如附图1(详见Pangka VS et al.J Org Chem，1986，51：1094.)。

由于制备BPD-MA的起始原料为原卟啉IX二甲酯(protoporphyrin IX dimethylester)，其环A上的3-位和环B上的8-位均为乙烯基，当与丁炔二酸二甲酯(dimethyl acetylenedicarboxylate，DMAD)进行Diels-Alder环加成反应时缺乏选择性，因此，生成的是环A和环B两种加成产物的等量混合物。而制备BPD-MA时所用的是环A加成产物，故必须将两种加成产物经柱色谱分离得到环A加成产物后，再将环A加成产物依次经三乙胺(TEA)和1，8-二氮杂双环[5，4，0]十一-5-烯(1，8-Diazabicyclo[5，4，0]undec-7-ene，DBU)重排及盐酸水解制得BPD-MA。

                           发明内容

本发明提供一种原料来源广、制备方法简单、毒性低的新型二氢卟吩类光敏剂——苯并叶绿卟啉类化合物(benzochloroporphyrin derivatives，BCPD)及其及其制备方法。

本发明所用原料为叶绿素a降解产物二氢卟吩e₆(chlorin e₆)、二氢卟吩e₄(chlorin e₄)、紫红素-18(purpurin-18)、二氢卟吩p₆(chlorin p₆)及二氢卟吩f(chlorin f)，其化学结构式如下：

       chlorin e₆                       chlorin e₄                   chlorin f

       purpurin-18                             chlorin p₆它们的结构中仅环A上有乙烯基，因此与DMAD可进行定向的Diels-Alder环加成反应，合成得到的是新结构类型的环A加成产物——苯并叶绿卟啉类化合物(BCPD)。

上述原料可用蚕沙中的叶绿素a经酸碱降解制备。我国是世界蚕丝生产大国，蚕沙(家蚕粪)是蚕业的主要副产物之一。我国每年蚕丝生产中约可产生100万吨蚕沙。蚕沙中叶绿素a含量约占0.75％，是极为丰富而廉价的叶绿素资源。利用蚕沙制备BCPD，可实现资源的综合利用，“变废为宝”，有利于环保。

本发明化合物BCPD结构如通式(I)所示：

其中，R₁代表H，CH₃，COOCH₃，CH₂COOCH₃，-CHCOOCH₃；

R₂代表COOCH₃，-CO，当R₂为CO时与R₁为CHCOOCH₃形成5元环；

R₃代表H、低级烷基、(CH₂)_mOH或(CH₂)_mNR₄R₅，R₄和R₅独立地表示低级烷基，m表示2-6之间的整数，低级烷基指含1-6个碳原子的直链或支链烷基。

本发明化合物以蚕沙叶绿素粗提物——市售糊状叶绿素为基始原料的制备方法如下：

1.以叶绿素a(chlorophyll a)为原料制备化合物VI，包括二氢卟吩f(chlorin f，VI₁)、二氢卟吩p6(chlorin p₆，VI₂)、二氢卟吩e₆(chlorin e₆，VI₃)及二氢卟吩e₄(chlorin e₄，VI₄)[详见专利CN99119879.4、中草药，1999，30(80)：568.、中国药学杂志，1999，34(12)：846.、中国医药工业杂志，2000，31(5)：215.]，反应流程见附图2。

2.用化合物VI制备目标化合物苯并叶绿卟啉类化合物I，反应流程见附图3。

图3中：

当R为H时，R′＝R₁＝H，R₂＝CO₂CH₃，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

当R为CO₂H时，R′＝R₁＝CO₂CH₃，R₂＝CO₂CH₃，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

当R为CH₂CO₂H时，R′＝CH₂CO₂CH₃，R₁＝CH₂CO₂CH₃、CHCO₂CH₃，R₂＝CO₂CH₃、-CO，当R₂为

                CO时与R₁为CHCOOCH₃形成5元环，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、

                (CH₂)_mNR₄R₅；

当R为CH₃时，R′＝R₁＝CH₃，R₂＝CO₂CH₃，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

R₄和R₅独立地表示低级烷基；

m表示2-6之间的整数；所述低级烷基是指含1-6个碳原子的直链或支链烷基。

部分中间化合物及目标化合物的相应基团如下：

中间化合物代号	VI1	VI2	VI3	VI4
					R取代基	H	CO2H	CH2CO2H	CH3

中间化合物代号	V1、IV1、III1、II1	V2、IV2、III2、II2	V3、IV3、III3、II3	V4、IV4、III4、II4
					R′取代基	H	CO2CH3	CH2CO2CH3	CH3

部分目标化合物代号	取代基
				R1	R2	R3
	I1I2I3I4I5I6I7I8I9I10I11	HCO2CH3CH2CO2CH3CH3CHCO2CH3HCO2CH3CH2CO2CH3CH3CHCO2CH3H	CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO，与R1形成5元环CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO，与R1形成5元环CO2CH3				CH3CH3CH3CH3CH3HHHHH(CH2)mOH，m＝2

I12I13I14I15I16I17I18I19I20

CO2CH3CH2CO2CH3CH3CHCO2CH3HCO2CH3CH2CO2CH3CH3CHCO2CH3

CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO，与R1形成5元环CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO2CH3CO，与R1形成5元环

(CH2)mOH，m＝2(CH2)mOH，m＝2(CH2)mOH，m＝2(CH2)mOH，m＝2(CH2)mN(CH3)2，m＝2(CH2)mN(CH3)2，m＝2(CH2)mN(CH3)2，m＝2(CH2)mN(CH3)2，m＝2(CH2)mN(CH3)2，m＝2

具体合成步骤为：

1.首先以叶绿素a(chlorophyll a)为原料制备脱镁叶绿酸a(pheophorbide a)，再分别脱镁叶绿酸a制备二氢卟吩f(VI₁)、二氢卟吩p₆(VI₂)、二氢卟吩e₆(VI₃)及二氢卟吩e₄(VI₄)：

(1)制备脱镁叶绿酸a(pheophorbide a)

市售糊状叶绿素的乙醚溶液，在小于10℃的低温条件下经浓盐酸搅拌反应2h生成脱镁叶绿酸a；

(2)制备二氢卟吩f(chlorin f，VI₁)

脱镁叶绿酸a与25％氢氧化钾乙醇液，在0℃条件下通O₂反应1h后，再通N₂迅速回流反应0.5h生成VI₁；

(3)制备二氢卟吩p₆(chlorin p₆，VI₂)

脱镁叶绿酸a乙醚液与25％氢氧化钾正丙醇液，在0℃条件下通O₂反应2h生成紫红素-18(purpurin-18)，紫红素-18在碱性水溶液中，其六元内酸酐环自行裂开而定量转变成VI₂；

(4)制备二氢卟吩e₆(chlorin e₆，VI₃)和二氢卟吩e₄(chlorin e₄，VI₄)

脱镁叶绿酸a与25％氢氧化钾乙醇液，在通N₂下回流反应1h生成VI₃；再将VI₃于吡啶中回流反应1h生成VI₄；

2.分别由化合物VI₁、VI₂、VI₃、VI₄制备苯并叶绿卟啉类目标化合物(I)：

(1)制备二氢卟吩f二甲酯(V₁)、二氢卟吩p₆三甲酯(V₂)、二氢卟吩e₆三甲酯(V₃)及二氢卟吩e₄二甲酯(V₄)：

分别将化合物VI₁、VI₂、VI₃及VI₄的四氢呋喃(THF)液与2.8％(w/v)的重氮甲烷(CH₂N₂)乙醚液反应10min，即得化合物V₁、V₂、V₃、V₄；

(2)制备叶绿卟啉f二甲酯(IV₁)、叶绿卟啉p₆三甲酯(IV₂)、叶绿卟啉e₆三甲酯(IV₃)及叶绿卟啉e₄二甲酯(IV₄)：

分别将化合物V₁、V₂、V₃及V₄的二氯甲烷液与2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)反应，即得化合物IV₁、IV₂、IV₃、IV₄；

(3)制备苯并叶绿卟啉f二甲酯(III₁)、苯并叶绿卟啉p₆三甲酯(III₂)、苯并叶绿卟啉e₆三甲酯(III₃)及苯并叶绿卟啉e₄二甲酯(III₄)：

分别将化合物IV₁、IV₂、IV₃及IV₄与丁炔二酸二甲酯(DMAD)于甲苯液中通N2回流7天，进行Diels-Alder环加成反应，即得化合物III₁、III₂、III₃、III₄；

(4)制备苯并叶绿卟啉f二甲酯TEA重排反式异构体(II₁)、苯并叶绿卟啉p₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₂)、苯并叶绿卟啉e₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₃)及苯并叶绿卟啉e₄二甲酯TEA重排反式异构体(II₄)：

分别将化合物III₁、III₂、III₃及III₄的二氯甲烷液与三乙胺(TEA)反应4h，即得化合物II₁、II₂、II₃、II₄；

(5)制备目标化合物苯并叶绿卟啉f二甲酯DBU重排顺式异构体(I₁)、苯并叶绿卟啉p₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₂)、苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₃)、苯并叶绿卟啉e₄二甲酯DBU重排顺式异构体(I₄)及苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₅)：

分别将化合物II₁、II₂及II₄的二氯甲烷液与DBU室温反应30min，即得目标化合物I₁、I₂、I₄；

化合物II₃的二氯甲烷液与DBU室温反应4h，即得目标化合物I₃、I₅；

(6)制备目标化合物苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体(I₆)、苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₇)、苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₈)、苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体(I₉)、及苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₁₀)：

分别将化合物I₁、I₂、I₃、I₄及I₅经25％盐酸定向水解反应，即得目标化合物I₆、I₇、I₈、I₉、I₁₀；

(7)制备苯并叶绿卟啉目标化合物I₁₁、I₁₂、I₁₃、I₁₄、I₁₅、I₁₆、I₁₇、I₁₈、I₁₉、I₂₀：

分别将化合物I₆，I₇，I₈，I₉及I₁₀的二氯甲烷液与相应的取代醇(R₃OH)，在二环己基脲(DCC)存在条件下反应，即得目标化合物I₁₁、I₁₂，I₁₃、I₁₄，I₁₅、I₁₆，I₁₇、I₁₈，I₁₉、I₂₀。

                           附图说明

图1为BPD-MA的合成路线图。图2为以叶绿素a为原料制备化合物VI的反应流程图。图3为用化合物VI制备化合物苯并叶绿卟啉类化合物I的反应流程图。

                         具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作详细描述，但下列实施例不应看作是对本发明范围的限制。

实施例1  二氢卟吩f二甲酯(V₁)的制备

取二氢卟吩f(VI₁)0.65g(1.21mmol)溶于50mL重蒸四氢呋喃(THF)，于0℃下加入新鲜制备的2.8％(w/v)重氮甲烷乙醚液10mL(6.67mmol)，反应10mim，然后加0.2mL冰乙酸分解过量的重氮甲烷，减压回收2/3量的THF，加50mL氯仿稀释，水洗至中性，无水硫酸钠干燥，回收溶剂，干燥后经硅胶H柱色谱分离得黑色粉末V₁ 0.45g，熔点211～212℃，收率66.2％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：666(7.1×10⁴)，610(7.3×10³)，529(6.2×10³)，499(1.7×10⁴)，401(1.9×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：9.82，9.77，9.63and 8.75(each s，each 1H，4×meso-H)，8.07(dd，1H，J＝17.9 and 11.5Hz，2a-H_x)，6.33(d，1H，J＝17.9Hz，2b-H_B)，6.15(d，1H，J＝11.5Hz，2b-H_A)，4.50(m，2H，7，8-H)，4.35，3.82，3.62，3.47and 3.31(each s，each 3H，5-，1-，3-Me and OMe×2)，3.77(q，2H，J＝7.7Hz，4a-CH₂)，2.74～2.37(m，4H，7a-and 7b-CH₂)，1.88(d，3H，J＝7.2Hz，8-Me)，1.72(t，3H，J＝7.7Hz，4b-Me)，-1.67(br s，2H，环内NH×2)。

实施例2  二氢卟吩p₆三甲酯(V₂)的制备

2.0g紫红素-18(3.55mmol)溶于50mL四氢呋喃，加入200mL甲醇及250mL 20％(w/v)氢氧化钠水溶液，室温搅拌反应至698nm处紫外吸收峰消失，约需1h。然后加水500mL稀释，用10％(w/v)硫酸中和至pH5～6，乙醚(200mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。乙醚液在冰盐浴冷却下加入2.8％(w/v)重氮甲烷乙醚液30mL(20mmol)，反应10mim，然后加0.5mL冰乙酸分解过量的重氮甲烷，回收溶剂，干燥后经硅胶H柱色谱分离得黑色粉末V₂ 1.8g，熔点232～233℃，收率81.3％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：669(6.3×10⁴)，615(8.2×10³)，530(9.8×10³)，499(1.7×10⁴)，401(2.1×10⁵)(soret)。¹H NMR(CDCl₃)δppm：9.96，9.38 and8.68(each s，each 1H，3×meso-H)，7.92(dd，1H，J＝17.9and 11.5Hz，2a-H_x)，6.28(d，1H，J＝17.9Hz，2b-H_B)，6.10(d，1H，J＝11.5Hz，2b-H_A)，4.46(m，2H，7，8-H)，4.24，4.20，3.88，3.59，3.38 and 3.18(each s，each 3H，5-，1-，3-Me and OMe×3)，3.55(q，2H，J＝7.5Hz，4a-CH₂)，2.51～2.10(m，4H，7a-and 7b-CH₂)，1.85(d，3H，J＝7.2Hz，8-Me)，1.62(t，3H，J＝7.5Hz，4b-Me)。

实施例3  二氢卟吩e₆三甲酯(V₃)的制备

按照实施例1的方法，3.6g(6.04mmol)二氢卟吩e₆(VI₃)与2.8％(w/v)重氮甲烷乙醚液40mL(26.67mmol)反应制得黑色固体V₃2.43g，熔点209～210℃，收率63.1％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：664(1.3×10⁵)，608(1.5×10⁴)，530(1.5×10⁴)，501(3.8×10⁴)，402(3.7×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：9.69，9.56and 8.75(each s，each 1H，3×meso-H)，8.05(dd，1H，J＝17.8and 11.5Hz，2a-H_x)，6.34(d，1H，J＝17.8Hz，2b-H_B)，6.13(d，1H，J＝11.5Hz，2b-H_A)，5.34(d，1H，J＝18.9Hz，10-H_A)，5.23(d，1H，J＝18.9Hz，10-H_B)，4.42(m，2H，7，8-H)，4.25，3.76，3.61，3.57，3.46 and 3.29(each s，each 3H，5-，1-，3-Me and OMe×3)，3.79(q，2H，J＝7.5Hz，4a-CH₂)，2.54(m，2H，7b-CH₂)，2.18(m，2H，7a-CH₂)，1.75(d，3H，J＝7.0Hz，8-Me)，1.70(t，3H，J＝7.5Hz，4b-Me)，-1.28 and-1.46(each br s，each 1H，环内NH×2)。

实施例4  二氢卟吩e₄二甲酯(V₄)的制备

按照实施例1的方法，二氢卟吩e₄(VI₄)3.6g(6.52mmol)与2.8％(w/v)重氮甲烷乙醚液40mL(26.67mmol)反应制得黑色固体V₄2.49g，熔点156～157.5℃，收率63.2％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：663(6.1×10⁴)，607(7.1×10³)，530(6.7×10³)，503(1.8×10⁴)，404(2.0×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：9.66，9.55and 8.73(each s，each 1H，3×meso-H)，8.07(dd，1H，J＝17.8and 11.6Hz，2a-H_x)，6.34(d，1H，J＝17.8Hz，2b-H_B)，6.13(d，1H，J＝11.5Hz，2b-H_A)，4.45(m，2H，7，8-H)，4.29，3.80，3.61，3.58，3.47and 3.29(each s，each 3H，5-，1-，3-Me，meso-γ-Me and OMe×2)，3.78(q，2H，J＝7.5Hz，4a-CH₂)，2.57～1.93(m，4H，7a-CH₂and 7b-CH₂)，1.75(d，3H，J＝7.2Hz，8-Me)，1.72(t，3H，J＝7.5Hz，4b-Me)，-1.48and-1.66(each br s，each 1H，环内NH×2)。

实施例5  叶绿卟啉f二甲酯(IV₁)的制备

取二氢卟吩f二甲酯(V₁)0.18g(0.32mmol)溶于80mL二氯甲烷，加入75mg(0.33mmol)DDQ的苯溶液10mL，搅拌反应10min。反应液依次用0.1mol.L^-1盐酸和水洗涤，无水硫酸钠干燥，回收溶剂，干燥后经硅胶H柱色谱分离得褐色粉末IV₁ 0.17g，收率95.0％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：576(9.2×10³)，552(1.6×10⁴)，512(8.9×10³)，406(1.7×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.93，10.01，9.96 and9.83(each s，each 1H，4×meso-H)，8.16(dd，1H，J＝17.9and 11.5Hz，3¹-H_x)，6.28(d，1H，J＝17.9Hz，3²-H_B)，6.13(d，1H，J＝11.5Hz，3²-H_A)，4.44，3.89，3.68，3.58，3.57and 3.56(each s，each 3H，2-，7-，12-，18-Me and13¹，17³-OMe)，4.39(t，2H，J＝7.8Hz，17¹-CH₂)，4.03(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，3.29(t，2H，J＝7.8Hz，¹⁷2-CH₂)，1.82(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-4.12(br s，2H，环内NH×2)。

实施例6  叶绿卟啉p₆三甲酯(IV₂)的制备

按照实施例5的方法，0.13g(0.21mmol)二氢卟吩p₆三甲酯(V₂)与0.07g(0.31mmol)DDQ反应制得褐色固体IV₂ 0.07g，熔点231～232℃，收率54.0％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：549(7.3×10³)，511(6.0×10³)，406(1.0×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.01，9.98 and 9.91(each s，each 1H，3×meso-H)，8.08(dd，1H，J＝17.9 and 11.4Hz，3¹-H_x)，6.24(d，1H，J＝17.9Hz，3²-H_B)，6.10(d，1H，J＝11.4Hz，3²-H_A)，4.45，4.32，3.80，3.67，3.60，3.54 and 3.52(each s，each 3H，2-，7-，12-，18-Me and 13¹-，15¹-，17³-OMe)，4.07(t，2H，J＝8.5Hz，17¹-CH₂)，3.99(q，2H，J＝7.7Hz，8¹-CH₂)，3.08(t，2H，J＝8.5Hz，17²-CH₂)，1.80(t，3H，J＝7.7Hz，8²-Me)，-3.78 and-3.82(each s，each 1H，环内NH×2)。

实施例7  叶绿卟啉e₆三甲酯(IV₃)的制备

按照实施例5的方法，0.45g(0.71mmol)二氢卟吩e₆三甲酯(V₃)与160mg(0.33mmol)DDQ反应制得褐色固体IV₃ 0.22g，熔点240～241℃，收率49.0％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：578(7.4×10³)，551(1.0×10⁴)，513(1.0×10⁴)，409(1.8×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.05，10.04 and 9.93(each s，each 1H，3×meso-H)，8.12(dd，1H，J＝17.8and 11.5Hz，3¹-H_x)，6.28(dd，1H，J＝17.8and 1.2Hz，3²-H_B)，6.10(dd，1H，J＝11.5and 1.2Hz，3²-H_A)，5.98(s，2H，15¹-CH₂)，4.31，3.79，3.71，3.65，3.63，3.59and 3.55(each s，each 3H，2-，7-，12-，18-Me and 13¹-，15²-，17³-OMe)，4.28(t，2H，J＝7.2Hz，17¹-CH₂)，4.05(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，3.08(t，2H，J＝7.2Hz，17²-CH₂)，1.83(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-3.06(br s，2H，环内NH×2)。

实施例8  叶绿卟啉e₄二甲酯(IV₄)的制备

按照实施例5的方法，1.16g(2.0mmol)二氢卟吩e₄二甲酯(V₄)与0.45g(2.0mmol)DDQ反应制得褐色固体IV₄ 0.69g，熔点＞300℃，收率59.7％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：670(7.5×10³)，583(8.5×10³)，552(1.2×10⁴)，514(1.3×10⁴)，410(2.1×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：9.97，9.90 and 9.86(each s，each 1H，3×meso-H)，8.12(dd，1H，J＝17.8 and 11.5Hz，3¹-H_x)，6.27(dd，1H，J＝17.8 and 1.3Hz，3²-H_B)，6.09(dd，1H，J＝11.5 and 1.3Hz，3²-H_A)，5.98(s，2H，15¹-CH₂)，4.41，4.31，3.80，3.64，3.61，3.57 and 3.54(each s，each 3H，2-，7-，12-，18-Me and 13¹-，15-，17³-OMe)，4.39(t，2H，J＝7.5Hz，17¹-CH₂)，4.04(q，2H，J＝7.7Hz，8¹-CH₂)，3.11(t，2H，J＝7.5Hz，¹⁷2-CH₂)，1.83(t，3H，J＝7.7Hz，8²-Me)，-3.09 and-3.15(each br s，each 1H，环内NH×2)。

实施例9  苯并叶绿卟啉f二甲酯(III₁)的制备

取叶绿卟啉f二甲酯(IV₁)0.17g(0.3mmol)，加甲苯60mL和丁炔二酸二甲酯(DMAD)1.5mL(12.2mmol)，通氮气搅拌回流反应7d，回收溶剂，经硅胶H柱色谱分离得褐色粉末III₁ 0.10g，熔点244～245℃，收率47.6％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：646(5.2×10⁴)，590(1.7×10⁴)，556(4.8×10⁴)，414(4.9×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.76，9.76，9.23and 9.01(each s，each 1H，4×meso-H)，7.41(m，1H，3¹-H)，4.35，4.02，3.91，3.75，3.71，3.47 and 3.41(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×4)，4.32(t，2H，J＝7.8Hz，17¹-CH₂)，3.92(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，3.62(m，2H，3²-CH₂)，3.27(t，2H，J＝7.8Hz，17²-CH₂)，2.08(s，3H，2-Me)，1.77(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-2.26and-2.30(each br s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：707(M+1)(100％)，1413(2M+1)(4％)。

实施例10  苯并叶绿卟啉p₆三甲酯(III₂)的制备

按照实施例9的方法，0.31g(0.50mmol)叶绿卟啉p₆三甲酯(IV₂)与3.0mL(24.2mmol)DMAD反应制得褐色粉末III₂ 0.165g，熔点245～246℃，收率43.4％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：655(2.0×10⁴)，600(4.6×10³)，550(1.1×10⁴)，519(9.0×10³)，413(1.5×10⁵)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.74，9.26and 9.16(eachs，each 1H，3×meso-H)，7.39(m，1H，3¹-H)，4.37，4.23，3.96，3.90，3.81，3.52，3.45and 3.42(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×5)，4.05(m，2H，17¹-CH₂)，3.94(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，3.60(m，2H，3²-CH₂)，3.02(m，2H，17²-CH₂)，2.13(s，3H，2-Me)，1.76(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-2.15and-2.60(each br s，each1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：765(M+1)(100％)，1529(2M+1)(5％)。

实施例11  苯并叶绿卟啉e₆三甲酯(III₃)的制备

按照实施例9的方法，0.25g(0.39mmol)叶绿卟啉e₆三甲酯(IV₃)与2.4mL(19.4mmol)DMAD反应制得褐色粉末III₃ 0.125g，熔点225～226℃，收率40.9％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：653(7.2×10³)，597(2.4×10³)，552(4.2×10³)，521(3.9×10³)，416(6.7×10⁴)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：9.67，9.13and 9.04(eachs，each 1H，3×meso-H)，7.36(m，1H，3¹-H)，5.76(s，2H，15¹-CH₂)，4.22，3.96，3.90，3.79，3.70，3.46，3.45 and3.39(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×5)，4.15(t，2H，J＝8.2Hz，17¹-CH₂)，3.93(q，2H，J＝7.7Hz，8¹-CH₂)，3.60(m，2H，3²-CH₂)，3.00(t，2H，J＝8.2Hz，17²-CH₂)，2.10(s，3H，2-Me)，1.76(t，3H，J＝7.7Hz，8²-Me)，-1.41and-2.13(each br s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：779(M+1)(100％)。

实施例12  苯并叶绿卟啉e₄二甲酯(III₄)的制备

按照实施例9的方法，0.29g(0.50mmol)叶绿卟啉e₄二甲酯(IV₄)与3.0mL(24.2mmol)DMAD反应制得褐色粉末III₄ 0.13g，熔点251～252℃，收率36.1％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：653(2.2×10⁴)，597(7.6×10³)，554(1.3×10⁴)，521(1.3×10⁴)，416(2.4×10⁵)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.58，9.05and 8.93(eachs，each 1H，3×meso-H)，7.34(m，1H，3¹-H)，4.24，4.20，3.96，3.90，3.81，3.47，3.43and 3.37(each s，each 3H，7-，12-，18-，15-Me and OMe×4)，4.23(m，2H，17¹-CH₂)，3.91(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，3.61(m，2H，3²-CH₂)，3.07(m，2H，17²-CH₂)，2.09(s，3H，2-Me)，1.75(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-1.33and-1.92(eachbr s，each1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：721(M+1)(100％)，1441(2M+1)(4％)。

实施例13  苯并叶绿卟啉f二甲酯TEA重排反式异构体(II₁)的制备

取苯并叶绿卟啉f二甲酯(III₁)0.12g(0.17mmol)，溶于80mL二氯甲烷，加入1.6mL三乙胺(TEA)，室温搅拌反应4h，回收溶剂，经硅胶H柱色谱分离得黑色粉末II₁ 0.10g，熔点241～242℃，收率83.3％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：663(1.0×10⁴)，583(1.8×10⁴)，430(7.1×10⁴)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.71，9.71，9.09and 9.08(each s，each 1H，4×meso-H)，7.66(dd，1H，J＝5.8and 2.8Hz，3²-H)，7.24(d，1H，J＝5.8Hz，3¹-H)，4.70(d，1H，J＝2.8Hz，2¹-H)，4.36，4.25，3.95，3.74，3.70，3.44and 3.36(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and 4×OMe)，4.30(t，2H，J＝7.8Hz，17¹-CH₂)，3.90(q，2H，J＝7.5Hz，8¹-CH₂)，3.62(m，2H，3²-CH₂)，3.25(t，2H，J＝7.8Hz，17²-CH₂)，1.75(t，3H，J＝7.5Hz，8²-Me)，1.56(s，3H，2-Me)，-2.47and-2.53(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：707(M+1)(100％)，1413(2M+1)(6％)。

实施例14  苯并叶绿卟啉p₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₂)的制备

按照实施例13的方法，50mg(0.065mmol)苯并叶绿卟啉p₆三甲酯(III₂)与1.0mL三乙胺反应制得黑色粉末II₂ 50mg，收率100％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：670(1.2×10⁴)，578(1.9×10⁴)，434(8.0×10⁴)(soret)。¹HNMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.73，9.29 and 9.09(each s，each 1H，3×meso-H)，7.68(dd，1H，J＝5.9and 2.8Hz，3²-H)，7.24(d，1H，J＝5.9Hz，3¹-H)，4.71(d，1H，J＝2.8Hz，2¹-H)，4.39，4.26，4.23，3.94，3.81，3.53，3.46and 3.30(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×5)，3.99～3.91(m，4H，17¹-CH₂and 8¹-CH₂)，3.04(t，2H，J＝8.4Hz，17²-CH₂)，1.75(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，1.56(s，3H，2-Me)，-2.27and-2.75(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：765(M+1)(100％)，1529(2M+1)(4％)。

实施例15  苯并叶绿卟啉e₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₃)的制备

按照实施例13的方法，50mg(0.06mmol)苯并叶绿卟啉e₆三甲酯(III₃)与0.8mL三乙胺反应制得黑色粉末II₃ 50mg，收率100％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：668(9.0×10³)，581(1.4×10⁴)，440(7.1×10⁴)(soret)。¹HNMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.66，9.20and 8.96(each s，each 1H，3×meso-H)，7.65(dd，1H，J＝5.9 and 2.8Hz，3²-H)，7.19(d，1H，J＝5.9Hz，3¹-H)，5.77(s，2H，15¹-CH₂)，4.74(d，1H，J＝2.8Hz，2¹-H)，4.24，4.22，3.97，3.80，3.72，3.47，3.46 and 3.30(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×5)，4.17(t，2H，J＝8.3Hz，17¹-CH₂)，3、90(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，3.04(t，2H，J＝8.3Hz，17²-CH₂)，1.74(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，1.55(s，3H，2-Me)，-1.50 and-2.24(each br s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：779(M+1)(100％)，1557(2M+1)(3％)。

实施例16  苯并叶绿卟啉e₄二甲酯TEA重排反式异构体(II₄)的制备

按照实施例13的方法，50mg(0.07mmol)苯并叶绿卟啉e₄二甲酯(III₄)与1.0mL三乙胺反应制得黑色粉末II₄50mg，收率100％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：670(4.5×10³)，583(7.9×10³)，440(3.7×10⁴)(soret)。¹HNMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.59，9.10 and 8.99(each s，each 1H，3×meso-H)，7.66(dd，1H，J＝5.9and 2.8Hz，3²-H)，7.24(d，1H，J＝5.9Hz，3¹-H)，4.74(d，1H，J＝2.8Hz，2¹-H)，4.32(m，2H，17¹-CH₂)，4.28，4.25，4.22，3.94，3.81，3.47，3.44 and 3.33(each s，each 3H，7-，12-，18-，15-Me and OMe×4)，3.89(q，2H，J＝7.6Hz，g¹-CH₂)，3.05(m，2H，17²-CH₂)，1.74(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，1.54(s，3H，2-Me)，-1.44and-1.98(eachs，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：721(M+1)(100％)，1441(2M+1)(6％)。

实施例17  苯并叶绿卟啉f二甲酯DBU重排顺式异构体(I₁)的制备

取苯并叶绿卟啉f二甲酯TEA重排反式异构体(II₁)0.1g(0.14mmol)，溶于20mL二氯甲烷，加入0.7mL DBU，搅拌反应30min，反应液依次用1mol.L^-1盐酸、水及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，回收溶剂，干燥，得黑色粉末I₁0.1g，熔点248～249℃，收率100％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：670(3.6×10⁴)，592(4.6×10⁴)，438(1.6×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.71，9.79，9.28and 8.88(each s，each 1H，4×meso-H)，7.81(d，1H，J＝5.7Hz，3²-H)，7.43(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，5.05(s，1H，2¹-H)，4.35，3.99，3.76，3.71，3.46，3.42and 3.01(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and 4×OMe)，4.30(t，2H，J＝7.8Hz，17¹-CH₂)，3.95(q，2H，J＝7.7Hz，8¹-CH₂)，3.26(t，2H，J＝7.8Hz，17²-CH₂)，1.80(s，3H，2-Me)，1.77(t，3H，J＝7.7Hz，8²-Me)，-2.03and-2.07(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：707(M+1)(100％)，1413(2M+1)(6％)。

实施例18  苯并叶绿卟啉p₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₂)的制备

按照实施例17的方法，95mg(0.124mmol)苯并叶绿卟啉p₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₂)与0.8mLDBU反应制得黑色粉末I₂90mg，收率94.7％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：677(2.3×10⁴)，586(3.1×10⁴)，439(1.1×10⁵)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.74，9.30and 9.02(each s，each 1H，3×meso-H)，7.82(d，1H，J＝5.7Hz，3²-H)，7.44(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，5.07(s，1H，2¹-H)，4.36，4.23，3.99，3.80，3.52，3.44，3.39and 3.00(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×5)，3.99～3.91(m，4H，17¹-CH₂and8¹-CH₂)，3.04(m，2H，17²-CH₂)，1.79(s，3H，2-Me)，1.75(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-1.92and-2.23(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESr⁺)m/z：765(M+1)(100％)。

实施例19  苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₃)及苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I_s)的制备

按照实施例17的方法，50mg(0.064mmol)苯并叶绿卟啉e₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₃)与0.7mLDBU反应4h后经硅胶H柱色谱分离制得黑色粉末I₃及I₅。

I₃(35mg，收率70％)：UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：675(1.1×10⁴)，596(2.2×10⁴)，443(7.7×10⁴)(soret)。¹HNMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.92，9.32and 9.04(each s，each 1H，3×meso-H)，7.82(d，1H，J＝5.7Hz，3²-H)，7.48(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，6.40(br d，2H，15¹-CH₂)，5.09(s，1H，2¹-H)，4.30(m，2H，17¹-CH₂)，4.00，3.98，3.93，3.87，3.70，3.48，3.42 and 3.03(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×5)，3.95(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，2.90(m，2H，17²-CH₂)，1.82(s，3H，2-Me)，1.78(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-1.26and-1.81(eachbr s，each1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：779(M+1)(51％)，801(M+Na)(100％)，817(M+K)(43％)。

I₅(10mg，收率20％)：UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：666(9.2×10³)，620(2.2×10⁴)，444(7.5×10⁴)(soret)。¹HNMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.68，9.20and 8.78(each s，each 1H，3×meso-H)，7.81(dd，1H，J＝5.7and 3.0Hz，3²-H)，7.48(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，6.74(s，1H，151-CH)，5.04(d，1H，J＝3.0Hz，2¹-H)，4.08(m，2H，17¹-CH₂)，4.00，3.81，3.75，3.71，3.40，3.36and 3.05(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×4)，3.88(m，2H，8¹-CH₂)，2.90(m，2H，17²-CH₂)，1.81(s，3H，2-Me)，1.75(t，3H，8²-Me)，-0.60and-1.50(each br s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：747(M+1)(100％)，785(M+K)(13％)。

实施例20  苯并叶绿卟啉e₄二甲酯DBU重排顺式异构体(I₄)的制备

按照实施例17的方法，80mg(0.11mmol)苯并叶绿卟啉e₄二甲酯TEA重排反式异构体(II₄)与0.8mL DBU反应制得黑色粉末I₄65mg，收率81.3％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：677(2.7×10⁴)，591(3.8×10⁴)，451(1.6×10⁵)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.60，9.10and 8.79(each s，each 1H，3×meso-H)，7.80(d，1H，J＝5.8Hz，3²-H)，7.39(d，1H，J＝5.8Hz，3¹-H)，5.02(s，1H，2¹-H)，4.28(t，2H，J＝8.2Hz，17¹-CH₂)，4.23，4.17，3.98，3.81，3.46，3.43，3.36and 2.99(each s，each 3H，7-，12-，18-，15-Me and OMe×4)，3.90(q，2H，J＝7.5Hz，g¹-CH₂)，3.06(t，2H，J＝8.2Hz，17²-CH₂)，1.75(s，3H，2-Me)，1.74(t，3H，J＝7.5Hz，8²-Me)，-1.20and-1.62(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：721(M+1)(100％)，1441(2M+1)(4％)。

实施例21  苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体(I₆)的制备

取苯并叶绿卟啉f二甲酯DBU重排顺式异构体(I₁)50mg(0.071mmol)，溶于15mL四氢呋喃，加入25％盐酸水液15mL，TLC监测下搅拌反应。反应完毕，加二氯甲烷60mL稀释，依次用水及饱和食盐水洗涤至中性，无水硫酸钠干燥，回收溶剂，干燥，硅胶H柱色谱分离得黑色粉末I₆35mg，熔点268～269℃，收率71.4％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：670(2.8×10⁴)，592(3.5×10⁴)，438(1.2×10⁵)(soret)。¹H NMR(500Hz，CDCl₃)δppm：10.72，9.78，9.30 and 8.91(each s，each 1H，4×meso-H)，7.84(d，1H，J＝5.7Hz，3²-H)，7.46(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，5.08(s，1H，2¹-H)，4.33，4.01，3.76，3.48，3.43and 3.03(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and3×OMe)，4.26(t，2H，J＝7.8Hz，17¹-CH₂)，3.92(q，2H，J＝7.7Hz，8¹-CH₂)，3.31(t，2H，J＝7.8Hz，17²-CH₂)，1.83(s，3H，2-Me)，1.77(t，3H，J＝7.7Hz，8²-Me)，-2.03and-2.08(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：693(M+1)(100％)。

实施例22  苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₇)的制备

按照实施例21的方法，50mg(0.065mmol)苯并叶绿卟啉p₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₂)与15mL25％盐酸反应制得黑色粉末I₇35mg，收率71.3％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：677(1.8×10⁴)，588(2.4×10⁴)，438(0.9×10⁵)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.71，9.28and 9.0(each s，each 1H，3×meso-H)，7.81(d，1H，J＝5.7Hz，3²-H)，7.41(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，5.05(s，1H，2¹-H)，4.34，4.21，3.78，3.50，3.41，3.36 and2.99(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×4)，3.97～3.88(m，4H，17¹-CH₂and 8¹-CH₂)，3.03(m，2H，17²-CH₂)，1.78(s，3H，2-Me)，1.74(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-1.92and-2.20(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：751(M+1)(100％)。

实施例23  苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I_s)的制备

按照实施例21的方法，35mg(0.045mmol)苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₃)与10mL25％盐酸反应制得黑色粉末I₈20mg，收率58.2％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：675(8.5×10³)，595(1.7×10⁴)，442(5.9×10⁴)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.89，9.31and 9.02(each s，each 1H，3×meso-H)，7.80(d，1H，J＝5.7Hz，3²-H)，7.46(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，6.39(br d，2H，15¹-CH₂)，5.08(s，1H，2¹-H)，4.28(m，2H，17¹-CH₂)，4.01，3.91，3.85，3.69，3.46，3.39and 3.01(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×4)，3.92(q，2H，J＝7.6Hz，8¹-CH₂)，2.91(m，2H，17²-CH₂)，1.81(s，3H，2-Me)，1.76(t，3H，J＝7.6Hz，8²-Me)，-1.26and-1.79(each br s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：765(M+1)(50％)，787(M+Na)(100％)，803(M+K)(40％)。

实施例24  苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体(I₉)的制备

按照实施例21的方法，50mg(0.069mmol)苯并叶绿卟啉e₄二甲酯DBU重排顺式异构体(I₄)与15mL25％盐酸反应制得黑色粉末I₉ 30mg，收率61.2％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：677(2.1×10⁴)，590(2.9×10⁴)，450(1.2×10⁵)(soret)。¹HNMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.58，9.09and 8.78(each s，each 1H，3×meso-H)，7.79(d，1H，J＝5.8Hz，3²-H)，7.38(d，1H，J＝5.8Hz，3¹-H)，5.01(s，1H，2¹-H)，4.25(t，2H，J＝8.2Hz，17¹-CH₂)，4.21，4.15，3.78，3.43，3.40，3.34and 2.97(each s，each 3H，7-，12-，18-，15-Me and OMe×3)，3.88(q，2H，J＝7.5Hz，8¹-CH₂)，3.04(t，2H，J＝8.2Hz，17²-CH₂)，1.76(s，3H，2-Me)，1.72(t，3H，J＝7.5Hz，8²-Me)，-1.20 and-1.60(each s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：707(M+1)(100％)。

实施例25  苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₁₀)的制备

按照实施例21的方法，30mg(0.04mmol)苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₅)与10mL25％盐酸反应制得黑色粉末I₁₀15mg，收率51.0％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：665(7.1×10³)，620(1.7×10⁴)，443(5.8×10⁴)(soret)。¹H NMR(300Hz，CDCl₃)δppm：9.66，9.18and 8.77(each s，each 1H，3×meso-H)，7.80(dd，1H，J＝5.7and 3.0Hz，3²-H)，7.47(d，1H，J＝5.7Hz，3¹-H)，6.71(s，1H，15¹-CH)，5.02(d，1H，J＝3.0Hz，2¹-H)，4.10(m，2H，17¹-CH₂)，3.98，3.73，3.69，3.38，3.34and 3.0(each s，each 3H，7-，12-，18-Me and OMe×3)，3.86(m，2H，8¹-CH₂)，2.89(m，2H，17²-CH₂)，1.80(s，3H，2-Me)，1.75(t，3H，8²-Me)，-0.60 and-1.45(each br s，each 1H，环内NH×2)。MS(ESI⁺)m/z：733(M+1)(100％)。

实施例26  苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体-17-乙二醇酯(I₁₁)的制备

取苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体(I₆)50mg(0.072mmol)，溶于20mL二氯甲烷，加入二环己基脲(DCC)50mg、4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)5mg及乙二醇0.5mL，TLC监测下室温搅拌反应。反应完毕，反应液加60mL稀释，然后用二氯甲烷提取(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，回收溶剂，干燥，硅胶H柱色谱分离得黑色粉末I₁₁30mg，收率56.4％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：670(3.1×10⁴)，592(3.8×10⁴)，438(1.3×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：737(M+1)(100％)。

实施例27  苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体-17-(2-N，N-二甲基氨基)乙醇酯(I₁₂)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.072mmol)苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体(I₆)的二氯甲烷液与0.5mL 2-(N，N-二甲基氨基)乙醇、50mg二环己基脲(DCC)、5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₂ 35mg，收率63.5％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：672(2.9×10⁴)，591(3.4×10⁴)，439(1.2×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：764(M+1)(100％)。

实施例28  苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体-17-乙二醇酯(I₁₃)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.067mmol)苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₇)的二氯甲烷液与0.5mL乙二醇、50mg二环己基脲(DCC)和5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₃30mg，收率56.7％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：677(2.1×10⁴)，588(2.6×10⁴)，438(1.0×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：795(M+1)(100％)。

实施例29  苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体-17-(2-N，N-二甲基氨基)乙醇酯(I₁₄)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.067mmol)苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₇)的二氯甲烷液与0.5mL 2-(N，N-二甲基氨基)乙醇、50mg二环己基脲(DCC)和5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₄ 35mg，收率63.9％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：678(1.9×10⁴)，587(2.3×10⁴)，439(0.9×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：822(M+1)(100％)。

实施例30  苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体-17-乙二醇酯(I₁₅)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.065mmol)苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₈)的二氯甲烷液与0.5mL乙二醇、50mg二环己基脲(DCC)和5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₅30mg，收率56.7％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：675(1.2×10⁴)，588(2.0×10⁴)，438(0.7×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：809(M+1)(55％)，831(M+Na)(100％)，847(M+K)(45％)。

实施例31  苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体-17-(2-N，N-二甲基氨基)乙醇酯(I₁₆)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.065mmol)苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₈)的二氯甲烷液与0.5mL 2-(N，N-二甲基氨基)乙醇、50mg二环己基脲(DCC)和5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₆35mg，收率64.0％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：676(1.0×10⁴)，587(1.6×10⁴)，439(0.6×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：836(M+1)(50％)，858(M+Na)(100％)，874(M+K)(40％)。

实施例32  苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体-17-乙二醇酯(I₁₇)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.071mmol)苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体(I₉)的二氯甲烷液与0.5mL乙二醇、50mg二环己基脲(DCC)和5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₇30mg，收率56.5％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：677(2.4×10⁴)，590(3.1×10⁴)，450(1.3×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：751(M+1)(100％)。

实施例33  苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体-17-(2-N，N-二甲基氨基)乙醇酯(I₁₈)的制备

按照实施例26的方法，50mg(0.071mmol)苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体(I₉)的二氯甲烷液与0.5mL 2-(N，N-二甲基氨基)乙醇、50mg二环己基脲(DCC)和5mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₈ 35mg，收率63.6％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：678(2.2×10⁴)，591(2.8×10⁴)，450(1.2×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：778(M+1)(100％)。

实施例34  苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体-17-乙二醇酯(I₁₉)的制备

按照实施例26的方法，30mg(0.041mmol)苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₁₀)的二氯甲烷液与0.3mL乙二醇、30mg二环己基脲(DCC)和3mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₁₉ 15mg，收率47.2％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：665(1.0×10⁴)，620(1.9×10⁴)，443(0.7×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：777(M+1)(100％)。

实施例35  苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体-17-(2-N，N-二甲基氨基)乙醇酯(I₂₀)的制备

按照实施例26的方法，25mg(0.034mmol)苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₁₀)的二氯甲烷液与0.3mL 2-(N，N-二甲基氨基)乙醇、30mg二环己基脲(DCC)和3mg 4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)反应制得黑色粉末I₂₀ 15mg，收率54.7％。UVλ_max(CH₂Cl₂)nm：666(0.8×10⁴)，619(1.6×10⁴)，444(0.6×10⁵)(soret)。MS(ESI⁺)m/z：804(M+1)(100％)。

本发明部分苯并叶绿卟啉类目标化合物的光敏抗肿瘤活性试验。

1.材料

细胞株选用BEL7402(人肝癌细胞)，由中国医学科学院血液病研究所提供。

激光光源采用南开大学现代光学研究所研制的670nm半导体激光治疗仪，最大输出功率为2W。

2.方法

人肝癌BEL7402细胞培养：从液氮中取出冻存细胞，立即置于42℃水浴中使细胞快速溶解后换含新鲜小牛血清的1640培养液，置于37℃CO₂培养箱中培养，隔天换一次培养液。

药液配制：取本发明待测化合物和阳性对照药物维替泊芬(BPDMA，verteporfin)溶于DMSO，配成0.5mg.L^-1的药物储存液，实验前用含DMSO的生理盐水稀释，最终浓度分别为：2.5μg.mL^-1，2μg.mL^-1，1.5μg.mL^-1，1.0μg.mL^-1，0.5μg.mL^-1，0.25.μg.mL^-1，0.125μg.mL^-1，0.0625μg.mL^-1，0.03125μg.mL^-1。

对人肝癌BEL7402细胞的暗毒性及光动力杀伤效应测定：取对数生长期的细胞，用0.25％胰酶消化，终止消化后，将细胞浓度调整为1×10⁴个/mL，接种于96孔培养板中，每组6个复孔，每孔100μL。细胞贴壁后，细胞内加入不同浓度的光敏剂的生理盐水稀释液，孵育4h或24h后用Hank’s液冲洗2次，换新鲜培养液。用670nm半导体激光照射，光剂量为10J.cm^-2，照毕，继续培养24h，用伊红染料排斥实验测定细胞活性{细胞致死率(％)＝[死细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)]×100％}。

3.结果

本发明部分目标化合物对体外人肝癌BEL7402细胞的暗毒性结果，见表1和表2。

本发明部分目标化合物对体外人肝癌BEL7402细胞的光动力杀伤效应结果，见表3和表4。

表1  单给药未照光孵育4h后，试药对体外人肝癌BEL7402细胞的致死率(单位：％)

化合物编号	浓度(μg.m L-1)
												0.03125	0.0625	0.125	0.25	0.5	1.0	1.5	2.0	2.5	cell	NS
	I1I2I3I5BPDMA	72534	22435	35582	45137	45425	33629	14128	33334	33126	32312												31322

注：cell---单纯BEL7402细胞组(未给药及生理盐水)，NS---含DMSO的生理盐水

表2  单给药未照光孵育24h后，试药对体外人肝癌BEL7402细胞的致死率(单位：％)

化合物编号	浓度(μg.mL-1)
												0.03125	0.0625	0.125	0.25	0.5	1.0	1.5	2.0	2.5	cell	NS
	I1I2I3I5BPDMA	23233	21245	11424	13537	223428	234535	144552	354875	353495	32413												31313

注：cell---单纯BEL7402细胞组(未给药及生理盐水)，NS---含DMSO的生理盐水

表3  给药孵育4h后照光(光剂量10J.cm^-2)，试药对体外人肝癌BEL7402细胞的致死率(单位：％)

化合物编号	浓度(μg.mL-1)
												0.03125	0.0625	0.125	0.25	0.5	1.0	1.5	2.0	2.5	cell	NS
	I1I2I3I5BPDMA	481247	531077	7138618	510103532	1530154880	6070206090	70753096100	80853096100	858520100100	34342												33332

注：cell---单纯BEL7402细胞组(未给药及生理盐水)，NS---含DMSO的生理盐水

表4  给药孵育24h后照光(光剂量10J.cm-2)时，试药对体外人肝癌BEL7402细胞的致死率(单位：％)

化合物编号	浓度(μg.mL-1)
												0.03125	0.0625	0.125	0.25	0.5	1.0	1.5	2.0	2.5	cell	NS
	I1I2I3I5BPDMA	11233	32325	15541830	375538696	9098410099	8810040100100	9510048100100	10010095100100	10010095100100	32423												32333

注：cell---单纯BEL7402细胞组(未给药及生理盐水)，NS---含DMSO的生理盐水

上述实验结果显示：

(1)受试苯并叶绿卟啉类目标化合物各浓度及不同的孵育时间对细胞的暗毒性均很小，说明受试苯并叶绿卟啉类目标化合物单独作用对肿瘤细胞的活性影响不大；而作为阳性对照药BPDMA(verteporfin，维替泊吩)随其与细胞孵育时间的延长而呈现极强的暗毒性(表1及表2)。

(2)受试苯并叶绿卟啉类目标化合物各浓度及不同的孵育时间后照光对肿瘤细胞的光动力杀伤效应有较大的差别。给药孵育24h后照光的细胞光动力杀伤效应强于给药孵育4h后照光的细胞光动力杀伤效应(表3及表4)。

(3)由表2和表4可见，在相同受试浓度(2.5μg.mL^-1)下，相同孵育时间(24h)后以相同光剂量(10J.cm^-2)照光，受试苯并叶绿卟啉类目标化合物对人肝癌BEL7402细胞的光动杀伤效力与BPDMA相当，但本发明化合物对细胞的暗毒性远远低于BPDMA，相差将近100倍，说明本发明化合物苯并叶绿卟啉类光敏剂具有高效、低毒的特点(表5)。

表5  给药孵育24h后受试目标化合物和BPDMA对人肝癌BEL7402细胞的暗毒性及光动力杀伤效应

受试化合物	I5	I3	I2	I1	BPDMA
						单给药后的细胞致死率(％)给药后照光的细胞致死率(％)	4100	395	5100	3100	95100

注：试药浓度均为2.5μg.mL^-1；照光剂量均为10J.cm^-2

本发明苯并叶绿卟啉类化合物对人肝癌BEL7402细胞具有良好的光动力杀伤效应，且具有高效、低毒的优点。因此，本发明化合物可用于制备光敏抗肿瘤药物和光动力治疗良性血管性疾病如老年性黄斑变性(一种视网膜微血管增生性疾病)及鲜红斑痣(一种先天性皮肤微血管畸形病变)的药物。

Claims (4)

1.一种苯并叶绿卟啉类化合物，化学结构通式如式(I)所示，

其中：

R₁代表H、CH₃、CO₂CH₃、CH₂CO₂CH₃、CHCO₂CH₃；

R₂代表COOCH₃、CO，当R₂为CO时与R₁为CHCOOCH₃形成5元环；

R₃代表H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

R₄和R₅独立地表示低级烷基；

m表示2-6之间的整数；

所述低级烷基是指含1-6个碳原子的直链或支链烷基。

2.权利要求1所述苯并叶绿卟啉类化合物，其特征在于所述化合物的R₁、R₂、R₃分别为：   化合物   R₁   R₂   R₃   I₁   H   CO₂CH₃   CH₃   I₂   CO₂CH₃   CO₂CH₃   CH₃   I₃   CH₂CO₂CH₃   CO₂CH₃   CH₃   I₄   CH₃   CO₂CH₃   CH₃   I₅   CHCO₂CH₃   CO，与R₁形成5元环   CH₃   I₆   H   CO₂CH₃   H   I₇   CO₂CH₃   CO₂CH₃   H   I₈   CH₂CO₂CH₃   CO₂CH₃   H   I₉   CH₃   CO₂CH₃   H   I₁₀   CHCO₂CH₃   CO，与R₁形成5元环   H   I₁₁   H   CO₂CH₃   (CH₂)₂OH   I₁₂   CO₂CH₃   CO₂CH₃   (CH₂)₂OH   I₁₃   CH₂CO₂CH₃   CO₂CH₃   (CH₂)₂OH   I₁₄   CH₃   CO₂CH₃   (CH₂)₂OH   I₁₅   CHCO₂CH₃   CO，与R₁形成5元环   (CH₂)₂OH   I₁₆   H   CO₂CH₃   (CH₂)₂N(CH₃)₂   I₁₇   CO₂CH₃   CO₂CH₃   (CH₂)₂N(CH₃)₂   I₁₈   CH₂CO₂CH₃   CO₂CH₃   (CH₂)₂N(CH₃)₂   I₁₉   CH₃   CO₂CH₃   (CH₂)₂N(CH₃)₂   I₂₀   CHCO₂CH₃   CO，与R₁形成5元环   (CH₂)₂N(CH₃)₂

                                                                    。

3.权利要求1或2所述苯并叶绿卟啉类化合物在制备光动力治癌药物或光动力治疗良性血管性疾病药物或鲜红斑痣药物中的应用。

4.权利要求1或2所述苯并叶绿卟啉类化合物的制备方法，合成路线如下：

(1)以叶绿素a(chlorophyll a)为原料制备化合物VI，包括二氢卟吩f(chlorin f，VI₁)、二氢卟吩p₆(chlorin p₆，VI₂)、二氢卟吩e₆(chlorin e₆，VI₃)及二氢卟吩e₄(chlorin e₄，VI₄)，反应流程为：

(2)用化合物VI制备目标化合物苯并叶绿卟啉类化合物I，反应流程为：

其中：

当R为H时，R′＝R₁＝H，R₂＝CO₂CH₃，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

当R为CO₂H时，R′＝R₁＝CO₂CH₃，R₂＝CO₂CH₃，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

当R为CH₂CO₂H时，R′＝CH₂CO₂CH₃，R₁＝CH₂CO₂CH₃、CHCO₂CH₃，R₂＝CO₂CH₃、-CO，当R₂为

                CO时与R₁为CHCOOCH₃形成5元环，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、

                (CH₂)_mNR₄R₅；

当R为CH₃时，R′＝R₁＝CH₃，R₂＝CO₂CH₃，R₃＝H、低级烷基、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNR₄R₅；

R₄和R₅独立地表示低级烷基；

m表示2-6之间的整数；所述低级烷基指含1-6个碳原子的直链或支链烷基；

具体合成步骤为：

首先以叶绿素a为原料制备脱镁叶绿酸a，再分别脱镁叶绿酸a制备二氢卟吩f(VI₁)、二氢卟吩p₆(VI₂)、二氢卟吩e₆(VI₃)及二氢卟吩e₄(VI₄)：

(1)制备脱镁叶绿酸a

市售糊状叶绿素的乙醚溶液，在小于10℃的低温条件下经浓盐酸搅拌反应2h生成脱镁叶绿酸a；

(2)制备二氢卟吩f(VI₁)

脱镁叶绿酸a与25％氢氧化钾乙醇液，在0℃条件下通O₂反应1h后，再通N₂迅速回流反应0.5h生成VI₁；

(3)制备二氢卟吩p₆(VI₂)

脱镁叶绿酸a乙醚液与25％氢氧化钾正丙醇液，在0℃条件下通O₂反应2h生成紫红素-18(purpurin-18)，紫红素-18在碱性水溶液中，其六元内酸酐环自行裂开而定量转变成VI₂；

(4)制备二氢卟吩e₆(VI₃)和二氢卟吩e₄(VI₄)

脱镁叶绿酸a与25％氢氧化钾乙醇液，在通N₂下回流反应1h生成VI₃；再将VI₃于吡啶中回流反应1h生成VI₄；

再分别由化合物VI₁、VI₂、VI₃、VI₄制备苯并叶绿卟啉类目标化合物(I)：

(1)制备二氢卟吩f二甲酯(V₁)、二氢卟吩p₆三甲酯(V₂)、二氢卟吩e₆三甲酯(V₃)及二氢卟吩e₄二甲酯(V₄)：

分别将化合物VI₁、VI₂、VI₃及VI₄的四氢呋喃(THF)液与2.8％(w/v)的重氮甲烷(CH₂N₂)乙醚液反应10min，即得化合物V₁、V₂、V₃、V₄；

(2)制备叶绿卟啉f二甲酯(IV₁)、叶绿卟啉p₆三甲酯(IV₂)、叶绿卟啉e₆三甲酯(IV₃)及叶绿卟啉e₄二甲酯(IV₄)：

分别将化合物V₁、V₂、V₃及V₄的二氯甲烷液与2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)反应，即得化合物IV₁、IV₂、IV₃、IV₄；

(3)制备苯并叶绿卟啉f二甲酯(III₁)、苯并叶绿卟啉p₆三甲酯(III₂)、苯并叶绿卟啉e₆三甲酯(III₃)及苯并叶绿卟啉e₄二甲酯(III₄)：

分别将化合物IV₁、IV₂、IV₃及IV₄与丁炔二酸二甲酯(DMAD)于甲苯液中通N₂回流7天，进行Diels-Alder环加成反应，即得化合物III₁、III₂、III₃、III₄；

(4)制备苯并叶绿卟啉f二甲酯TEA重排反式异构体(II₁)、苯并叶绿卟啉p₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₂)、苯并叶绿卟啉e₆三甲酯TEA重排反式异构体(II₃)及苯并叶绿卟啉e₄二甲酯TEA重排反式异构体(II₄)：

分别将化合物III₁、III₂、III₃及III₄的二氯甲烷液与三乙胺(TEA)反应4h，即得化合物II₁、II₂、II₃、II₄；

(5)制备目标化合物苯并叶绿卟啉f二甲酯DBU重排顺式异构体(I₁)、苯并叶绿卟啉p₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₂)、苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排顺式异构体(I₃)、苯并叶绿卟啉e₄二甲酯DBU重排顺式异构体(I₄)及苯并叶绿卟啉e₆三甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₅)：

分别将化合物II₁、II₂及II₄的二氯甲烷液与DBU室温反应30min，即得目标化合物I₁、I₂、I₄；化合物II₃的二氯甲烷液与DBU室温反应4h，即得目标化合物I₃、I₅；

(6)制备目标化合物苯并叶绿卟啉f单甲酯DBU重排顺式异构体(I₆)、苯并叶绿卟啉p₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₇)、苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排顺式异构体(I₈)、苯并叶绿卟啉e₄单甲酯DBU重排顺式异构体(I₉)、及苯并叶绿卟啉e₆二甲酯DBU重排且Dickman缩合顺式异构体(I₁₀)：

分别将化合物I₁、I₂、I₃、I₄及I₅经25％盐酸定向水解反应，即得目标化合物I₆、I₇、I₈、I₉、I₁₀；

(7)制备苯并叶绿卟啉目标化合物I₁₁、I₁₂、I₁₃、I₁₄、I₁₅、I₁₆、I₁₇、I₁₈、I₁₉、I₂₀：

分别将化合物I₆，I₇，I₈，I₉及I₁₀的二氯甲烷液与相应的取代醇(R₃OH)，在二环己基脲(DCC)存在条件下反应，即得目标化合物I₁₁、I₁₂，I₁₃、I₁₄，I₁₅、I₁₆，I₁₇、I₁₈，I₁₉、I₂₀。

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