CN1843347A

CN1843347A - 表没食子儿茶素－3－o－没食子酸酯及ecg抗感冒流感病毒

Info

Publication number: CN1843347A
Application number: CN 200510018522
Authority: CN
Inventors: 谭文界; 谭静玲; 陈世凤
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-04-08
Filing date: 2005-04-08
Publication date: 2006-10-11

Abstract

本发明为一种制剂，系以EGCG和ECG为抗感冒病毒功效成分的单体或复方制剂，本发明制剂规定给药途径为鼻腔或口腔喷雾给药。病毒学试验证实了所涉功效成分的有效性，临床试验证实了制剂的疗效。

Description

表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯和ECG抗感冒流感病毒

发明领域：

本发明涉及以表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯和表儿茶素-3-0-没食子酸酯为有效成分的单方或复方制剂，用于预防、治疗感冒、流行性感冒。

发明背景：

感冒属常见病、多发病，是由感冒病毒所致。目前已知的感冒病毒多达百余种。感冒轻时则发热、头昏、鼻塞，重则引发病毒性肺炎、心肌炎等多种并发症，后果严重。长期以来，对感冒病毒有了较广泛、深入的研究，亦发现了不少治疗药物，如金刚烷胺(amantadline)、金刚乙胺(rimantadine)、扎纳米韦(zanamivir)、奥司他韦(oseltamivir)等，但上述药品分别存在有毒副作用大和服用不方便等问题，广谱抗病毒制剂病毒唑具有一定的抗流感病毒作用，可缩短感冒病程，但因病毒唑毒性较大，且有致畸的可能性，故一直未被FDA批准用于防治流感。其他制剂大多非直接针对病毒，而是改善临床症状，如抗过敏药，毛细血管收缩剂、抗菌药等。中药治疗感冒、流感有独到之外，不少中药发现有抗病毒作用，如银翘片、感冒清、感冒宁、复方Vc银翘片、板蓝根冲剂等，但临床表现仅为缓解感冒症状，缩短病程之作用。其中有一个很重要的原因可能是抗病毒功效成分不明，无法对中药制剂中抗病毒活性成分进行定量控制与给药，故时常出现疗效不稳定的现象(当然不排除病毒变异所致的因素)。基于以上原因，本发明的研究背景如下：1、鉴于感冒流感对社会、人类的巨大影响，社会急需高效低毒抗感冒流感病毒的药物；2、基于现代抗病毒实验研究与中药抗病毒活性成分的结构、构效学研究相结合，筛选抗感冒、流感病毒高效成分。在天然药物化学、细胞学、生物学以及病毒学等多学科配合之下，经八年的艰苦试验，自绿茶、大黄中提取、分离、筛选鉴定了其中主要抗感冒、流感病毒的活性物质。完成了专利申请所述高效抗病毒活性成分的研究。

发明概述：

本发明的目的就是以表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯和表儿茶素-3-0-没食子酸酯的单体或复方制剂预防、治疗感冒、流行性感冒。

表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯(epigallcatechin-3-0-gallate简称EGCG)的分子结构如下：

表儿茶素-3-0-没食子酸酯(epicatechin-3-0-gallate简称ECG)分子结构如下：

发明详述：

一、表没食子儿茶素-3-0-没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素-3-0-没食子酸酯(ECG)体外抗流感病毒的实验研究。

1、实验材料

1.1细胞狗肾传代细胞(MDCK)由武汉市疾病控制中心提供，开始实验时为第18代(实验结束细胞不超过35代)。细胞培养基是DMEM(GIBCOBRI公司产品)，细胞用含10％胎牛血清(三利生物制品厂产品)的DMEM培养基作为生长液，用含2ug/ml胰蛋白酶的DMEM培养基作为维持液；常规加入青霉素，链霉素。

1.2病毒株流感病毒H2N3型由北京中国疾病控制中心提供。将病毒按常规方法接种于9-11d龄鸡胚尿囊腔，35℃孵育72h，收集尿囊液，以3000r/min离心15min，取上清液进行血凝实验，将血凝滴度大于1∶320且细菌培养阴性的病毒液分装，置-80℃保存备用。

1.3药物 EGCG和ECG用PBS溶解，配成终浓度为30mg/ml的溶液，经0.22ul滤膜过滤除菌，密封，避光4℃冷藏保存。育72h，收集尿囊液，以3000r/min离心15min，取上清液进行血凝实验，将血凝滴度大于1∶320且细菌培养阴性的病毒液分装，置-80℃保存备用。

1.3药物 EGCG和ECG用PBS溶解，配成终浓度为30mg/ml的溶液，经0.22ul滤膜过滤除菌，密封，避光4℃冷藏保存。

2、实验方法及过程(略)

3、实验结果

3.1 EGCG对MDCK细胞的毒性作用EGCG对MDCK细胞的毒性作用主要表现在细胞折光性增强，细胞变圆，粘连，破碎，脱落。且药物对细胞的毒性作用在一定范围内随着药物浓度的增加，细胞存活率降低。用SPASS11.5软件处理实验数据，结果EGCG对MDCK细胞的TD₅₀是88.04ul/ml，实验选择的最大药物浓度是32ug/ml。见表1：

表1 EGCG的药毒结果

浓度ul/ml	2	4	8	16	32	64	128
浓度ul/ml	2	4	8	16	32	64	128	CPE存活率	-0.94	-0.86	-0.80	-0.78	+～++0.66	+++0.52	++++0.39

3.2 EGCG对H2N3繁殖的抑制作用实验结果表明，EGCG有明显抑制H2N3生物合成的作用，表现在：随着药物浓度的增加，细胞肿胀变圆，脱离并裂解等典型CPE逐渐减弱，病毒抑制率(细胞存活率)明显升高。在药物浓度为2～32ug/ml的范围内，随着药物浓度的增加，H2N3的抑制率增加，并表现出量效关系。MTT法检测的EGCG对H2N3的ED₅₀为1.47ug/ml，TI为60.1；血凝实验法检测EGCG对H2N3的ED₅₀为1.28ul/ml，TI为68.6。见表2：

表2 EGCG对H2N3生物合成的抑制作用

Tab 2 Inbibitory effects of EGCG on biosynthesis of H2N3

药物剂量(Drug dose)/ug/ml	细胞病变效应(cytopathic effect)/％	MTT法测病毒抑制的率血凝实验测病毒抑制率(viral inhibition rate)％(viral inhibition rate)％
药物剂量(Drug dose)/ug/ml	细胞病变效应(cytopathic effect)/％			2481632细胞对照(cell control)病毒对照(virus control)	+++----++++	4884921001001000	5087.593.751001001000

＊：++++75％以上细胞病变(cytopathic up to 75％)；+++75％～50％细胞病变(cytopathic in 75％～50％)；++50％～25％细胞病变(cytopathic in 50％～25％)；+25％一下细胞病变(cytopathic below 25％)；一无细胞病变(noncytopathic)

△：log[TCID₅₀/0.01ml]

本实验研究结果表明，药物EGCG具有很强的体外抗流感病毒的作用，TI＞60，而且随着药物浓度的增加，其抗病毒效率增加。实验证实药物抗H2N3的作用是在病毒进入细胞后的某个环节产生。该药毒性小，安全范围较宽，属目前少见的高效低毒抗感冒、流感病毒的化合物。

二、抗感冒病毒实用范例：120例临床观察。

制剂：EGCG、ECG喷雾鼻剂，暂定为：天奇露。药物浓度：1.0％。

排除标准：感冒多日，并发有肺炎、肺结核及其他肺、支气管疾患者。

疗效判断：给药后1小时观察

实验结果见表1.2

首批80例临床疗效统计(治疗要EGCG)

表2 EGCG和ECG复方制剂20例临床观察表(用药ECG)

小结：临床实验表明，EGCG和ECG混合物喷雾剂能快速消除感冒、流感的卡他症状，用药后均未出现发烧症状。其作用速度、疗效是目前极少见的高效低毒抗感冒、流感病毒制剂。

Claims

1、一种制剂，其特征在于以具有抗感冒病毒活性的表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(EGCG)及表儿茶素-3-O-没食子酸酯(ECG)为功效成分的单体或复方制剂。

2、根据权利要求1所述的制剂，通过鼻腔及口腔喷雾给药。