CN1798770A - 用于治疗癌症的多聚肽体 - Google Patents
用于治疗癌症的多聚肽体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1798770A CN1798770A CNA2004800152672A CN200480015267A CN1798770A CN 1798770 A CN1798770 A CN 1798770A CN A2004800152672 A CNA2004800152672 A CN A2004800152672A CN 200480015267 A CN200480015267 A CN 200480015267A CN 1798770 A CN1798770 A CN 1798770A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cancer
- reorganization
- cell
- separation
- polypeptide body
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 125
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 109
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 60
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 108
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 57
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 385
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 358
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 356
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 205
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 114
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 claims description 103
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 56
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 43
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 42
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 35
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 23
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 21
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 20
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 claims description 19
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 19
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 19
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 18
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 17
- 102000055007 Cartilage Oligomeric Matrix Human genes 0.000 claims description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 16
- 108700005376 Cartilage Oligomeric Matrix Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 14
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 12
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 11
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 claims description 10
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 claims description 10
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 10
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 9
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 9
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 9
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 claims description 8
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 7
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 claims description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 7
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 7
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 6
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 6
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 claims description 5
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 claims description 5
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 claims description 5
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 claims description 5
- 206010039667 schwannoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 claims description 4
- 101710184216 Cardioactive peptide Proteins 0.000 claims description 4
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010052399 Neuroendocrine tumour Diseases 0.000 claims description 4
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 4
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033781 Thyroid carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005619 esophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 claims description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 claims description 4
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000002628 peritoneum cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 4
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000013077 thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 4
- 208000012991 uterine carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 101710162242 Growth-blocking peptide Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 3
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 2
- 230000010005 growth-factor like effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 2
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000008470 skin growth Effects 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims 4
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims 4
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims 2
- 102100038778 Amphiregulin Human genes 0.000 claims 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 abstract description 13
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 abstract description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 68
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 68
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 49
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 23
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 23
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 17
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 13
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 102000007299 Amphiregulin Human genes 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 8
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 8
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 7
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 7
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 7
- -1 phosphoric acid salt Chemical class 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 7
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 7
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 7
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101800000155 Epiregulin Proteins 0.000 description 6
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100025498 Proepiregulin Human genes 0.000 description 6
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 6
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000725508 Homo sapiens Cartilage oligomeric matrix protein Proteins 0.000 description 5
- 241001062009 Indigofera Species 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 5
- 241001521235 Spodoptera eridania Species 0.000 description 5
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 102000050578 human COMP Human genes 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 5
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 5
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 4
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N Pro-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 4
- 241000702208 Shigella phage SfX Species 0.000 description 4
- 230000031709 bromination Effects 0.000 description 4
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 4
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 4
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 4
- NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N (4S)-4-[[(4R,7S,10S,16S,19S,25S,28S,31R)-31-[[(2S)-2-[[(1R,6R,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S,36S,39S,42R,47R,53S,56S,59S,62S,65S,68S,71S,76S,79S,85S)-47-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-18-(4-aminobutyl)-27,68-bis(3-amino-3-oxopropyl)-36,71,76-tribenzyl-39-(3-carbamimidamidopropyl)-24-(2-carboxyethyl)-21,56-bis(carboxymethyl)-65,85-bis[(1R)-1-hydroxyethyl]-59-(hydroxymethyl)-62,79-bis(1H-imidazol-4-ylmethyl)-9-methyl-33-(2-methylpropyl)-8,11,17,20,23,26,29,32,35,38,41,48,54,57,60,63,66,69,72,74,77,80,83,86-tetracosaoxo-30-propan-2-yl-3,4,44,45-tetrathia-7,10,16,19,22,25,28,31,34,37,40,49,55,58,61,64,67,70,73,75,78,81,84,87-tetracosazatetracyclo[40.31.14.012,16.049,53]heptaoctacontane-6-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-25-(hydroxymethyl)-19-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-28-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo-16-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29-nonazacyclodotriacontane-4-carbonyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc3ccccc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@H](Cc2c[nH]cn2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc2c[nH]cn2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N 0.000 description 3
- YJGVMLPVUAXIQN-LGWHJFRWSA-N (5s,5ar,8ar,9r)-5-hydroxy-9-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-5a,6,8a,9-tetrahydro-5h-[2]benzofuro[5,6-f][1,3]benzodioxol-8-one Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-LGWHJFRWSA-N 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 3
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400001369 Heparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 3
- 102400000057 Neuregulin-2 Human genes 0.000 description 3
- 101800000675 Neuregulin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102400000054 Neuregulin-3 Human genes 0.000 description 3
- 101800000673 Neuregulin-3 Proteins 0.000 description 3
- 102400000055 Neuregulin-4 Human genes 0.000 description 3
- 101800002641 Neuregulin-4 Proteins 0.000 description 3
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710100968 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 3
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 3
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 3
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 3
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 101710187074 Serine proteinase inhibitor Proteins 0.000 description 3
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 3
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N epipodophyllotoxin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N gefitinib Chemical compound C=12C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=C(F)C(Cl)=C1 XGALLCVXEZPNRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 229960002247 lomustine Drugs 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 108010028584 nucleotidase Proteins 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 3
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 3
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IGXNPQWXIRIGBF-KEOOTSPTSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IGXNPQWXIRIGBF-KEOOTSPTSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N 3-[2,4-dimethyl-5-[(z)-(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrol-3-yl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC=CC=C3NC\2=O)=C1C NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N 0.000 description 2
- ZOXZWYWOECCBSH-UHFFFAOYSA-N 4 Methyl N-ethylcathinone Chemical compound CCNC(C)C(=O)C1=CC=C(C)C=C1 ZOXZWYWOECCBSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 241001124076 Aphididae Species 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- BCADFFUQHIMQAA-KKHAAJSZSA-N Asn-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BCADFFUQHIMQAA-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 2
- GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N Asp-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AYFVRYXNDHBECD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 2
- 101710137926 Chymotrypsin inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 229940122644 Chymotrypsin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150039808 Egfr gene Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 2
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- IFHJOBKVXBESRE-YUMQZZPRSA-N Gly-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN IFHJOBKVXBESRE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000256244 Heliothis virescens Species 0.000 description 2
- 101100118545 Holotrichia diomphalia EGF-like gene Proteins 0.000 description 2
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 2
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N Leu-Gln-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 241000255908 Manduca sexta Species 0.000 description 2
- UKUMISIRZAVYOG-CIUDSAMLSA-N Met-Glu-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O UKUMISIRZAVYOG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- PNHRPOWKRRJATF-IHRRRGAJSA-N Met-Tyr-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PNHRPOWKRRJATF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical class OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100369076 Mus musculus Tdgf1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000409991 Mythimna separata Species 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MPFGIYLYWUCSJG-AVGNSLFASA-N Phe-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MPFGIYLYWUCSJG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- LRBSWBVUCLLRLU-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O LRBSWBVUCLLRLU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 241001435085 Phytometra Species 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- DRIJZWBRGMJCDD-DCAQKATOSA-N Pro-Gln-Met Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O DRIJZWBRGMJCDD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N Pro-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 2
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 2
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000985245 Spodoptera litura Species 0.000 description 2
- 241000270666 Testudines Species 0.000 description 2
- SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N Thr-Asn-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 2
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- VUXIQSUQQYNLJP-XAVMHZPKSA-N Thr-Ser-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O VUXIQSUQQYNLJP-XAVMHZPKSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N Tranexamic acid Chemical compound NCC1CCC(C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 2
- 108050007852 Tumour necrosis factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018594 Tumour necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 2
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 2
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000003541 chymotrypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001433 erlotinib Drugs 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl benzene Natural products OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N leuprolide acetate Chemical compound CC(O)=O.CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 RGLRXNKKBLIBQS-XNHQSDQCSA-N 0.000 description 2
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N nitrosourea Chemical compound NC(=O)N=NO OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000002161 passivation Methods 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 2
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 2
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 2
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- GFNNBHLJANVSQV-UHFFFAOYSA-N tyrphostin AG 1478 Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(Cl)=C1 GFNNBHLJANVSQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- FBTUMDXHSRTGRV-ALTNURHMSA-N zorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(\C)=N\NC(=O)C=1C=CC=CC=1)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 FBTUMDXHSRTGRV-ALTNURHMSA-N 0.000 description 2
- 229960000641 zorubicin Drugs 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- HDCUSMZVZWLDRZ-UHFFFAOYSA-N 1-benzyl-2-methylhydrazine Chemical compound CNNCC1=CC=CC=C1 HDCUSMZVZWLDRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAWIOCMUARENDQ-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)sulfanyl-n-(4-pyridin-2-yl-1,3-thiazol-2-yl)acetamide Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1SCC(=O)NC1=NC(C=2N=CC=CC=2)=CS1 KAWIOCMUARENDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SYYMNUFXRFAELA-BTQNPOSSSA-N 4-[4-[[(1r)-1-phenylethyl]amino]-7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-6-yl]phenol;hydrobromide Chemical compound Br.N([C@H](C)C=1C=CC=CC=1)C(C=1C=2)=NC=NC=1NC=2C1=CC=C(O)C=C1 SYYMNUFXRFAELA-BTQNPOSSSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 1
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 241000256021 Antheraea polyphemus Species 0.000 description 1
- 241000256019 Antheraea yamamai Species 0.000 description 1
- SVHRPCMZTWZROG-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N SVHRPCMZTWZROG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AMIQZQAAYGYKOP-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AMIQZQAAYGYKOP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N Arg-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- YXVAESUIQFDBHN-SRVKXCTJSA-N Asn-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXVAESUIQFDBHN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001382 Betacellulin Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 101100348617 Candida albicans (strain SC5314 / ATCC MYA-2876) NIK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710176668 Cartilage oligomeric matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241001367803 Chrysodeixis includens Species 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- JIVJXVJMOBVCJF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N JIVJXVJMOBVCJF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 208000001154 Dermoid Cyst Diseases 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 102000056372 ErbB-3 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 229910052691 Erbium Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001411320 Eriogonum inflatum Species 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- IYAUFWMUCGBFMQ-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)CN=C(N)N IYAUFWMUCGBFMQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OWVURWCRZZMAOZ-XHNCKOQMSA-N Glu-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O OWVURWCRZZMAOZ-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDOGEHIWMJMAHT-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Cys Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IDOGEHIWMJMAHT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)O WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- DKJWUIYLMLUBDX-XPUUQOCRSA-N Gly-Val-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O DKJWUIYLMLUBDX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000018710 Heparin-binding EGF-like Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 229910052689 Holmium Inorganic materials 0.000 description 1
- 101000757236 Homo sapiens Angiogenin Proteins 0.000 description 1
- 101000612657 Homo sapiens Paraspeckle component 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000794104 Homo sapiens Probetacellulin Proteins 0.000 description 1
- 101000871708 Homo sapiens Proheparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 101710176220 Kallikrein-2 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ADJWHHZETYAAAX-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N ADJWHHZETYAAAX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N Lys-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000555303 Mamestra brassicae Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- NKDSBBBPGIVWEI-RCWTZXSCSA-N Met-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NKDSBBBPGIVWEI-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- LIIXIZKVWNYQHB-STECZYCISA-N Met-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LIIXIZKVWNYQHB-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000699729 Muridae Species 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 1
- 102000004459 Nitroreductase Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 102100040974 Paraspeckle component 1 Human genes 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 108050008598 Phosphoesterases Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- SGCZFWSQERRKBD-BQBZGAKWSA-N Pro-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SGCZFWSQERRKBD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JDJMFMVVJHLWDP-UNQGMJICSA-N Pro-Thr-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JDJMFMVVJHLWDP-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102100033762 Proheparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037211 Psychomotor hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101100007329 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010084592 Saporins Proteins 0.000 description 1
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 1
- MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010079105 Shope fibroma virus growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 1
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 108010021119 Trichosanthin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- GGXUDPQWAWRINY-XEGUGMAKSA-N Tyr-Ile-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GGXUDPQWAWRINY-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N Val-Ala-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O ASQFIHTXXMFENG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N Val-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC([O-])=O AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 1
- AQAAJRFDDMWLCE-UHFFFAOYSA-M [Na][Ca]Cl Chemical compound [Na][Ca]Cl AQAAJRFDDMWLCE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- LCJHLOJKAAQLQW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethane Chemical compound CC.CC(O)=O LCJHLOJKAAQLQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003474 anti-emetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003388 anti-hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002111 antiemetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940045719 antineoplastic alkylating agent nitrosoureas Drugs 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N auramine O free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000003443 bladder cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 125000006487 butyl benzyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 description 1
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 150000003983 crown ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000000222 eosinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- UYAHIZSMUZPPFV-UHFFFAOYSA-N erbium Chemical compound [Er] UYAHIZSMUZPPFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940011399 escin Drugs 0.000 description 1
- 229930186222 escin Natural products 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- SQMPFRFYKISAHD-YFKPBYRVSA-N ethyl (2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O SQMPFRFYKISAHD-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 206010016629 fibroma Diseases 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010084264 glycyl-glycyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002650 habitual effect Effects 0.000 description 1
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- SYECJBOWSGTPLU-UHFFFAOYSA-N hexane-1,1-diamine Chemical compound CCCCCC(N)N SYECJBOWSGTPLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJZYNXUDTRRSPN-UHFFFAOYSA-N holmium atom Chemical compound [Ho] KJZYNXUDTRRSPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043497 human BTC Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010092181 insect paralytic peptide Proteins 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 229910052746 lanthanum Inorganic materials 0.000 description 1
- FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N lanthanum atom Chemical compound [La] FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N lapatinib Chemical compound O1C(CNCCS(=O)(=O)C)=CC=C1C1=CC=C(N=CN=C2NC=3C=C(Cl)C(OCC=4C=C(F)C=CC=4)=CC=3)C2=C1 BCFGMOOMADDAQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 1
- YDTFRJLNMPSCFM-YDALLXLXSA-M levothyroxine sodium anhydrous Chemical compound [Na+].IC1=CC(C[C@H](N)C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 YDTFRJLNMPSCFM-YDALLXLXSA-M 0.000 description 1
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000009091 myxoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000003360 nephrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 108020001162 nitroreductase Proteins 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 231100000630 paralytic peptide Toxicity 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 108700028325 pokeweed antiviral Proteins 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N rhenium atom Chemical compound [Re] WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- KKNIUBFRGPFELP-UHFFFAOYSA-N secretolin Chemical compound N=1C=CNC=1CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(C(=O)NC(C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(C)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(O)=O)C(C)O)CC1=CC=CC=C1 KKNIUBFRGPFELP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical class [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003351 stiffener Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010079202 tyrosyl-alanyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 108020005087 unfolded proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 1
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 229940070524 zinc protein complex Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF], i.e. urogastrone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/73—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing coiled-coiled motif (leucine zippers)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
Abstract
本发明是关于一种分离并重组的融合多聚肽体,该多聚肽体结合表皮生长因子受体成员,有助于抑制特定肿瘤细胞生长。本发明还公开了编码所述分离并重组的融合多聚肽体的核苷酸、含有所述分离并重组的融合多聚肽体作为活性物质的试剂盒和药物组合物。最后,本发明还提供了所述分离并重组的融合多聚肽体的制备方法,以及所述分离并重组的融合多聚肽体用于制备治疗或预防癌症的制剂的用途。
Description
技术领域
本发明是关于结合表皮生长因子受体的多聚体分子。更具体地,本发明是关于一种结合表皮生长因子受体成员的分离并重组的融合多聚肽体(peptabody),所述多聚肽体可应用于治疗受体表达与致病表型有关的疾病。所述疾病的实例如:前列腺癌、膀胱癌、乳癌、头颈癌、黑素瘤。本发明还公开了编码所述分离并重组的融合多聚肽体的核苷酸、含有所述分离并重组的融合多聚肽体作为活性物质的试剂盒和药物组合物。最后,本发明提供了所述分离并重组的融合多聚肽体的制备方法,及其用于制备治疗或预防癌症的制剂的用途。
背景技术
现有研究已经揭示了生长因子受体酪氨酸激酶在病因学和人类恶性肿瘤扩张方面所起的重要作用。这些生物受体通过跨膜结构域被锚定在表达它们的细胞的细胞膜中。细胞外结构域结合生长因子。生长因子与细胞外结构域的结合导致信号传递到细胞内激酶结构域。信号传导是造成细胞增殖和分化的原因。
所述表皮生长因子(EGF)受体家族的成员是重要的生长因子受体酪氨酸激酶。第一个被发现的EGF受体家族成员是表观分子量约165千道尔顿的糖蛋白。在Mendelsohn等的专利US 4943533中描述的糖蛋白是公知的EGF受体。EGF或转化生长因子α(TGF-α)结合EGF受体导致细胞生长。
生长因子受体EGF受体家族的另一成员叫做erbB-2,也是公知的HER2,或p185(Coussens等人,Science 230(1985),1132-1139;Yamamoto等人,Nature319(1986),230-234)。由c-erbB-2基因表达的受体ErbB-2与由人neu癌基因表达的蛋白相同。虽然ErbB-2与EGF受体的氨基酸序列不相同,但它们具有高度的同源性。ErbB-2已被认为是癌症治疗的高效靶标。培养的抗ErbB-2单克隆抗体赫赛汀(Herceptin)目前正临床应用于对ErbB-2过量表达的转移性乳癌的治疗,并已获得有利结果。
EGF受体家族的其它成员包括erbB-3/HER-3(Kraus等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989),9193-9197;Plowman等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87(1990),4905-4909)和erbB-4/HER-4(Plowman等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993),1746-1750)。
在人体肿瘤上发现许多受体酪氨酸激酶数目异常高。例如许多表皮起源的肿瘤在它们的细胞膜上表达EGF受体水平增高。表皮生长因子受体(EGFR)在细胞生命中起了重要的作用如控制生长、增殖等。配体结合时发生受体激活,随后受体二聚化(2个受体结合)。虽然EGFR在维持正常细胞的功能和生存方面很重要,但是EGFR的表达显然表现出利于肿瘤细胞的生长和生存。包括基因扩增和ErbB变异在内的多种机制都能引发ErbB信号调节异常,增加受体转录、翻译或蛋白稳定性。表达EGF受体的肿瘤实例包括恶性胶质瘤、肺癌、乳癌、头颈癌和膀胱癌。肿瘤细胞膜上的EGF受体扩增和/或过量表达,伴随预后不良。
已经开发出多种以ErbB家族受体为靶标的方法,包括特异抗细胞外区域的特异单克隆抗体(MAbs)、酪氨酸激酶(TK)结构域(受体激活所需)抑制剂和反义疗法。
已将抗肿瘤抗原的培养抗体,特别是单克隆抗体作为潜在抗肿瘤剂进行研究。所述抗体可以通过许多机制抑制肿瘤生长。例如抗体可以通过抗体依赖性细胞毒细胞作用(ADCC)或补体依赖性细胞毒作用(CDC)免疫抑制肿瘤生长。
抗体选择性地和生长因子竞争与生长因子受体的结合,因此抑制表达所述受体的肿瘤生长。另一种方法中,毒素与产生的抗肿瘤抗原结合。抗体部分直接与肿瘤结合,肿瘤被毒素部分杀死。
虽然抗体和作为抗肿瘤剂的抗体片段的应用已经表现出前景,但仍然有很多缺点需要克服。例如,单克隆抗体是在杂交瘤中制备的。然而杂交瘤在商业生产上的应用效率低于其它表达系统诸如细菌。而且所述单克隆抗体通常产生于动物体内,而不是人体内。这样的单克隆抗体在人体内有免疫原性。这种免疫原性限制了所述单克隆抗体在人体治疗中的效力。
应用试剂阻断EGFR TK的激活是抑制EGFR代谢途径的第二种方法。抑制剂与用于结合TK结构域的三磷酸腺苷(ATP)竞争,激发自身磷酸化的减少。抑制剂的部分实例为Astra Zeneca(瑞典)的ZD1839、Novartis(瑞士)的PKI-166、Glaxo Smith Kline(英国)的GSK572016。
虽然MAbs和TK抑制剂在药理学和机理方面存在不同,但临床前研究表明二者都抑制细胞增殖,并且用标准治疗都具有附加的或协同的细胞毒作用。
反义技术作为振奋人心且前景广阔的癌症治疗策略已经出现,但是要达到临床应用的水平仍需进一步的研究开发。
几年前,一种颇具前景的名为“多聚肽体(peptabody)”的新型亲合力分子(avidity molecule)(Terskikh等人,1997″Peptabody:a new type of highavidity binding protein″Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94(5):1663-8)被研制出来。
所述多聚肽体分子还作为包括多于2个单元的低聚物在WO 9818943(Kajava等人)中公开,其中每个单元包括能寡聚化的肽结构域和能结合受体(配体)的结构域;其中所述寡聚的结构域不是抗体或恒定区的功能抗体片段。还描述了所述低聚物的用途和合成。所述多聚化结构域由部分人软骨低聚基质多肽(cartilage oligomeric matrix polypetide,COMP)组成。所述COMP与铰链区或间隔区(spacer)(人IgA的19个氨基酸)融合。所述多聚肽体的结合结构域是短肽配体,位于铰链的羧基末端(C-terminal)部分。相对于单克隆抗体而言,所述五聚体分子在有效受体靶向方面有2个主要优点:
-通过协同结合,使其对靶受体的亲合力大大增强;
-受体的交联可以在靶细胞上引发强的生物学效应。
多聚肽体分子的概念允许其与高水平表达靶标的细胞紧密结合,而靶分子的密度低不利于所述多聚肽体结合。
由于单体多肽链长度短,因此低聚物可化学合成。肽配体的氨基末端(N-terminal)位置允许首先合成核心分子(如五聚化结构域和连接体),然后分开样品,继续在氨基末端合成不同的肽序列。这样,短肽的低聚化就绕过了折叠问题,并且克服了先前相关络合蛋白(如单链Fv片段)低聚化过程中遇到的表达困难。
合成与ErbB-2受体特异性反应的五聚体多聚肽体分子的尝试最近已有报道(Houimel等人,(1997)″Selection of peptides and synthesis of pentamericPeptabody molecules reacting specifically with ErbB-2 receptor″Int.J.Cancer2001;92:748-755)。已从噬菌体展示库中筛选出结合ErbB-2细胞外结构域蛋白(ECD)的六肽,并已将其用于构建上述五聚多聚肽体分子。然而尚未发现表明所述多聚肽体诱导细胞凋亡的证据。观测到的抑制增殖作用可能归因于部分拮抗效应,或与上述抗ErbB-2单克隆抗体(anti-ErbB-2 MAb)的情况相同,归因于受体二聚化的抑制作用(Harwerth等人,″Monoclonalantibodies against the extracellular domain of E rbB-2 receptor function as partialligand agonist″J.Biol.Chem.1992;267:15160-7)。由于筛选出的所述六肽与其配体的亲合力相对较弱,因此建议生成更长的肽分子。但是由于制备的复杂性,至今未见报道此种类型的重组融合多聚肽体分子。
近期的研究表明,过量表达表皮生长因子受体(EGF-R、erbB-1)的肿瘤与临床效果不佳相关(Mendelsohn J(2002)″Targeting the epidermal growthfactor receptor for cancer therapy″J.Clin.Oncol.20:1S-13S)。因此持续存在改进抗肿瘤剂(anti-tumor agent)如“多聚肽体”的需求。所述多聚肽体可被高效廉价制备,在人体中没有或几乎没有免疫原性,能以增强的亲合力与所述表皮生长因子受体成员特别是ErbB-1结合。所述ErbB-1在肿瘤细胞中表达数目很高。本发明的目的是提供一种兼具上述技术优点的新的抗肿瘤剂。
发明内容
上述目的和能从前述内容显然得出的其它目的已经通过制备新的重组融合多肽达到。所述多肽很有潜力作为抗肿瘤剂。一方面,本发明的目的是提供一种分离并重组的融合多聚肽体,该多聚肽体结合表皮生长因子受体成员,有助于抑制特定肿瘤细胞生长。本发明还公开了编码所述分离并重组的融合多聚肽体的核苷酸、含有所述分离并重组的融合多聚肽体作为活性物质的试剂盒和药物组合物。最后,本发明提供了所述分离并重组的融合多聚肽体的制备方法及其用于制备用于治疗或预防癌症的制剂的用途。
本领域技术人员通过阅读随后的具体实施方式和权利要求将更了解本发明的其它目的和优点。所述具体实施方式参照下述解释性附图进行描述。
附图说明
图1显示所述多聚肽体的概念图解和因而发生的亲合力作用;左边部分对应低受体表达水平的细胞:多聚肽体结合其中一个单体,没有激活EGFR途径;右边部分对应高受体表达水平的肿瘤细胞:EGFR的募集导致细胞死亡;
图2显示抗-EGFR(anti-EGFR)多聚肽体的构建和制备;图示多聚肽体单体包括不同的部分:增强子(细菌系统中增加产品的序列)、组氨酸尾(6×His)、hCOMP(49个氨基酸的人软骨低聚基质多肽)、铰链(19个氨基酸的人IgA)和hEGF(全长人表皮生长因子);未关联的多聚肽体氨基酸序列和EGF的petabody氨基酸序列也被列出;
图3对应多聚肽体单体(mp-IRR、mp-EGF)和多聚肽体五聚体(P-IRR和P-EGF)的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝染色;
图4表示peptaboday和Mab-425与人A431癌症细胞系结合的酶联免疫吸附测定(ELISA)分析;
图5显示peptaboday EGF和Mab-425在人A431癌症细胞系上的竞争分析;在多聚肽体EGF浓度增加的情况下加入浓度固定的Mab-425(2.5纳摩尔/升);
图6显示表皮样癌细胞A431在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图7为用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗两天后,无血清DMEM培养基体外培养的表皮样癌细胞A431的照片;
图8显示人前列腺癌细胞DU145在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图9为用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗两天后,无血清DMEM培养基体外培养的前列腺癌细胞DU145的照片;
图10显示人前列腺癌细胞LNCaP在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图11为用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗两天后,无血清DMEM培养基体外培养的前列腺癌细胞LNCaP的照片;
图12显示人前列腺癌细胞PC-3在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图13为用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗两天后,无血清DMEM培养基体外培养的前列腺癌细胞PC-3的照片;
图14显示人乳癌细胞MCF-7在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图15为用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗两天后,无血清DMEM培养基体外培养的乳癌细胞MCF-7的照片;
图16显示人正常肌细胞在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图17为用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗两天后,无血清DMEM培养基体外培养的肌细胞的照片;
图18显示不同的人癌细胞系(A431:人表皮样癌,MCF-7:人乳癌,DU-145:人前列腺癌,UM-UC-3和T24:人膀胱癌,Na8:人黑素瘤)在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算抑制百分率(%);
图19对应荧光激活细胞分类术(FACS)通过磷脂结合蛋白V(AnnexinV)染色方法测定的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)对人体A-431表皮样癌细胞凋亡作用;表皮样A-431癌细胞分别用10纳摩尔/升的p-EGF和10纳摩尔/升p-IRR治疗0分钟(T0)、30分钟(T30)、60分钟(T60)、180分钟(T180)或360分钟(T360);用FACS分析磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)结合的变化其中图19A为p-EGF(粗线)和p-IRR(细线)诱导细胞凋亡的对比;图19B为多聚肽体诱导细胞凋亡的时间曲线;
图20对应在非还原或还原条件下多聚肽体的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,MDP01:多聚肽体EGF,MDP03:多聚肽体GBP,MDP00:未关联的多聚肽体;
图21对应用3-(4,5)-双甲基-乙-噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝(MTT)法对癌细胞的细胞毒性定量分析;癌细胞与浓度为2微克/毫升的多聚肽体或特异EGFR单克隆抗体孵育;
图22显示未关联的多聚肽体的氨基酸序列和蛋白质序列:MDP00;起始密码子ATG(甲硫氨酸)和终止密码子TAA(*)用斜体表示,增强子肽用粗体表示,His尾加下划线表示,人软骨低聚基质多肽(COMP)用正常字体表示,铰链区(人)用斜体加粗体表示;
图23显示多聚肽体EGF的氨基酸序列和蛋白质序列:MDP01;起始密码子ATG(甲硫氨酸)和终止密码子TAA(*)用斜体表示,增强子肽用粗体表示,His尾加下划线表示,人软骨低聚基质多肽(COMP)用正常字体表示,铰链区(人)用斜体加粗体表示,表皮生长因子(EGF)用斜体加下划线表示;
图24显示多聚肽体GBP的氨基酸序列和蛋白质序列;MDP03;起始密码子ATG(甲硫氨酸)和终止密码子TAA(*)用斜体表示,增强子肽用粗体表示,His尾加下划线表示,人软骨低聚基质多肽(COMP)用正常字体表示,铰链区(人)用斜体加粗体表示,生长结合肽(GBP)用斜体加下划线表示;
图25是关于融合不同增强子的decabody(十聚体)的产量;显示了用细菌系统生产的decabody产量,所述decabody十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后用考马斯亮蓝染色;A)对应不溶性片段,B)对应可溶性片段;
图26是关于融合不同增强子的多聚肽体的产量;显示了用细菌系统生产的多聚肽体的蛋白质印迹分析;用抗尿素细菌提取物的抗-His抗体进行检测;
图27显示pQE-09质粒图谱。
具体实施方式
为便于理解本发明,这里提供以下详细说明。
正如WO 9818943(Kajava等人)所公开的,“多聚肽体”是一种使用多聚化概念诱导异常细胞信号的高亲合力分子。上述文献在此一并引入参考。所述多聚化结构域由部分人软骨低聚基质多肽(COMP)和能结合受体(配体)的结构域(结合结构域)组成。所述COMP融合在铰链区或间隔区(spacer)(优选含有来自人IgA的19个氨基酸)。相对于单克隆抗体而言,所述多聚肽体在靶向有效受体方面有2个主要优点:1)通过协同结合,使其对靶受体的亲合力大大增强;2)紧密交联受体可以引发对靶细胞的强的生物学效应,诱导对细胞生长和/或凋亡的抑制(见图1)。多聚肽体分子的概念允许其与高水平表达靶标的细胞紧密结合,而低密度的靶分子不利于所述多聚肽体结合。“Decabody”在同样的原理上构建,不同之处是Decabody具有10个臂和10个结合结构域。因此,本发明的保护范围还包括Decabody分子,即使所述分子不常被明确提及。
“ErbB受体”成员为属于ErbB受体家族的受体蛋白酪氨酸激酶,包括EGFR、ErbB3和ErbB4受体以及将来鉴定出的该受体家族的其它成员。ErbB2受体不包括在此定义之内,因此根据本发明,ErbB2受体不是分离并重组的融合多聚肽体的靶标。ErbB受体一般包括:可以结合ErbB配体的细胞外结构域;亲脂性跨膜结构域;保守的细胞内酪氨酸激酶结构域和具有几个可以被磷酸化的酪氨酸残基的羧基末端信号结构域。ErbB受体可以是“天然序列”的ErbB受体或其“氨基酸序列变体”。优选ErbB受体是天然序列的人ErbB受体。
术语“ErbB1”、“表皮生长因子受体”和“EGFR”可以互换使用,均指例如Carpenter等人在Ann.Rev.Biochem.56:881-914(1987)中公开的EGFR,包括天然产生的同种型或其变异型(如缺失变异体EGFR,Humphrey等人,PNAS(USA)87:4207-4211(1990))。术语erbB1指编码所述EGFR蛋白产物的基因。
符号“ErbB2”和“HER2”可以互换使用,均指所述人HER2蛋白(例如Semba等人,PNAS(USA)82:6497-6501(1985)和Yamamoto等人Nature 319:230-234(1986)(Genebank accession number X03363))。术语“erbB2”指编码人ErbB2的基因,“neu”指编码鼠p185的基因。如上面所定义的,ErbB2受体不是本发明的分离并重组的融合多聚肽体的靶标,因此不在本发明的范围内。
“ErbB3”和“HER3”指公开的受体多肽(例如US 5183884和US 5480968及Kraus等人,PNAS(USA)86:9193-9197(1989))。
术语“ErbB4”和“HER4”指公开的受体多肽(例如EP 599274、Plowman等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:1746-1750(1993)和Plowman等人,Nature,366:473-475(1993)),包括同种型及其变异型(如WO99/19488公开的)。
“ErbB配体”意指结合和/或激活ErbB受体的多肽。基于结合和激活不同ErbB受体同源或异源二聚体的能力,EGF配体的家族可以分为三组(Lopez-Torrejon等人,2002”Human betacellulin structure modelled fromother members of EGF family″J.Mol.Model.8:131-44)。第一组包括EGF、双调蛋白(amphiregulin)和转化生长因子αTGFα,该组可以直接与EGFR结合。第二组包括神经调节素-1(heregulin),需要结合ErbB-3或ErbB-4形成的异源二聚体。第三组是双特异性配体,因为它们结合EGFR或ErbB-4,该组包括β动物纤维素、结合肝素的表皮生长因子(heparin-binding epidermalgrowth factor)和表皮调节素(Epiregulin)。
本文特别关注的所述ErbB配体是天然序列人ErbB配体,如表皮生长因子(EGF)(Savage等人,J.Biol.Chem.247:7612-7621(1972));转化生长因子α(TGF-α)(Marquardt等人,Science 223:1079-1082(1984));公知为神经鞘瘤(schwanoma)或角质细胞自分泌生长因子的双调蛋白(amphiregulin)(Shoyab等人,Science 243:1074-1076(1989);Kimura等人,Nature 348:257-260(1990);和Cook等人.Mol.Cell.Biol.11:2547-2557(1991));β动物纤维素(Shing等人,Science 259:1604-1607(1993);和Sasada等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.190:1173(1993));肝素结合-表皮生长因子(HB-EGF)(Higashiyama等人,Science 251:936-939(1991));表皮调节素(Epiregulin)(Toyoda等人,J.Biol.Chiem.270:7495-7500(1995);和Komurasaki等人,Oncogene 15:2841-2848(1997));神经调节素-1(heregulin)(见下文);神经调节素-2(neuregulin-2)(NRG-2)(Carraway等人,Nature 387:512-516(1997));神经调节素-3(neuregulin-3)(NRG-3)(Zhang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.94:9562-9567(1997));神经调节素-4(neuregulin-4)(NRG-4)(Harari等人.Oncogene 18:2681-89(1999)))或cripto(CR-1)(Kannan等人,J.Biol.Chem.272(6):3330-3335(1997))。结合EGFR的ErbB配体包括EGF、TGF-α、双调蛋白(amphiregulin)、β动物纤维素、HB-EGF和表皮调节素(epiregulin)。结合ErbB3的ErbB配体包括神经调节素-1(heregulin)。能结合ErbB4的ErbB配体包括β动物纤维素、HB-EGF、NRG-2、NRG-3、NRG-4和神经调节素-1。病毒EGF-样配体(EGF-like ligands)如牛痘生长因子(VGF)、兔纤维瘤生长因子(SFGF)或粘液瘤生长因子(MGF)也包括在本发明范围内。
“天然序列”多肽是指含有与天然来源的多肽(如ErbB受体或ErbB配体)相同氨基酸序列的多肽。所述天然序列多肽可以从自然界分离得到,或者可以用重组或合成的方式制备。因此所述天然序列多肽可以具有天然产生的人体多肽、鼠科多肽或者任何其它哺乳动物种的多肽的氨基酸序列。
所述“片段”指一类序列,该类序列与能与表皮生长因子受体(EGFR)结合的多肽相应序列在长度上至少共有50%的氨基酸。所述序列只要显示出与其来源的天然序列相同的性质就可以使用。优选与能与EGFR结合的单独多肽序列在长度上共有氨基酸大于70%的序列;更优选共有氨基酸大于80%的序列;尤其优选共有氨基酸大于90%的序列。
本发明还包括上述能与表皮生长因子受体(EGFR)结合的序列的变体。所述术语“氨基酸序列的变体”或“变体”是指一种具有氨基酸序列的多肽,该多肽在一定程度上不同于天然序列多肽;该多肽是天然序列经过保守氨基酸取代变化而来的氨基酸序列;因此一个或多个氨基酸可被其它特性与之相同的氨基酸取代。氨基酸序列变体通常与下列两种结合结构域具有至少约70%的同源性。所述结合结构域是指天然ErbB配体的至少一个受体结合结构域,或天然ErbB受体的至少一个配体的结合结构域。优选与所述受体或配体结合结构域同源性至少约为80%的氨基酸序列变体,更优选同源性至少约为90%的氨基酸序列变体。氨基酸序列变体包括天然氨基酸序列中氨基酸序列特定位点中的取代、缺失、和/或插入。保守的氨基酸取代在这里定义为例如下列5组中任意一组范围内的互换:
I.小分子脂肪族的非极性或弱极性残基:丙氨酸(Ala)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)
II.带正电的极性残基:组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)
III.带负电的极性残基及其酰胺残基:天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)
IV.大分子芳香族残基:苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)
V大分子脂肪族非极性残基:甲硫氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)、半胱氨酸(Cys)。
所述同源性定义为,在为获得最大同源百分比而进行必要的排列序列和引入间隙后氨基酸序列变体中不变的残基的百分率。排列的方法和计算机程序为本领域公知。所述计算机程序之一为授权给Genentech,Inc的“Align 2”,其用户说明文件已于1991年12月10日上交华盛顿D.C.20559的美国版权局(United States Copyright Office)。
所述多聚肽体的“增强子”序列是位于所述分离并重组的融合多聚肽体或decabody氨基末端部分的肽序列,有效增加多聚肽体或decabody在原核或真核系统中的产量。
这里用到的“启动子”是指调节基因表达的核苷酸序列。“启动子序列”是指能在细胞内结合RNA聚合酶并起始下游(3’方向)编码序列转录的DNA调控区。在启动子序列中可以找到转录起始位点(用核酸酶S1作图方便定义)和负责结合RNA聚合酶的蛋白结合结构域(共有序列)。真核细胞启动子经常但不总是包括“TATA”框和“CAT”框。原核启动子除包括-10和-35共有序列之外,还包括SD序列(Shine Dalgarno sequence)。
当将一段核苷酸序列置于和其它核苷酸序列的功能关系中时,则该核苷酸序列为“可行连接”(operably linked)。例如,如果前序列或分泌前导的DNA表达为参与多肽分泌的前蛋白,则该DNA与多肽DNA是可行连接;启动子如果影响序列的转录,则该启动子与编码序列是可行连接;或者核糖体结合位点如果能定位利于翻译,则该核糖体结合位点与编码序列是可行连接。如果所述位点不存在,可以按照常规惯例应用合成的寡聚核苷酸接合体或连接子。
术语“分离”和“纯化”指本发明重组融合多聚肽体的状态;或编码本发明重组融合多聚肽体的核苷酸,按照本发明会达到的状态。多聚肽体分子和核苷酸不含或基本不含它们天然联合的材料。所述材料如可从自然环境中发现,或从通过重组DNA技术在体内或体外制备它们的制备环境(如细胞培养)中发现的其它多肽或核苷酸。
术语“将纯化DNA引入到真核和原核宿主细胞中”或“转染”指任何过程,其中带有或不带有伴随物质的细胞外DNA进入宿主细胞。术语“细胞转染”或“转染细胞”指已经引入了细胞外DNA的细胞,因此细胞具有细胞外DNA。所述DNA可以被引入到细胞中,因此该核苷酸可作为染色体的组成部分或额外的染色体元件被复制。
术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”这里可以互换应用,指引入有一个或多个本发明的DNA或载体的真核或原核细胞。很容易理解所述术语不仅指特定主细胞,还指该细胞的后代或潜在后代。由于变异或环境影响,后代可能发生特定变化,因此事实上所述后代可能与亲代细胞不同,但是仍然包括在这里所用术语的范围之内。
“真核细胞”是指来自于真核有机体的任何哺乳动物或非哺乳动物细胞。为了不受实施例限定,能在细胞培养条件下维持并随后被转染的任何真核细胞都包括在本发明范围之内。特别优选的细胞类型包括干细胞、胚胎干细胞、中华仓鼠卵巢细胞(CHO)、非洲绿猴肾细胞(COS)、仓鼠肾细胞(BHK21)、鼠成纤维细胞(NIH3T3)、宫颈癌细胞(HeLa)、小鼠成肌细胞(C2C12)、癌细胞和初生分化或未分化细胞。其它合适的宿主细胞为本领域技术人员公知。
诱导“凋亡”或“坏死”的多聚肽体诱导细胞程序性死亡,所述细胞程序性死亡通过磷脂结合蛋白V(annexin V)的结合、DNA的碎裂、细胞的皱缩、内质网的膨胀、细胞的碎裂、和/或膜状小泡(凋亡小体)的形成进行检测。所述细胞通常过量表达ErbB受体。所述细胞优选为肿瘤细胞,如乳腺、前列腺、卵巢、胃、子宫内膜、唾腺、肺、肾、结肠、甲状腺、胰腺或膀胱细胞。所述细胞可以是体外的SK-BR-3、BT474、Calu 3细胞、MDA-MB-453、MDA-MB-361或SKOV3细胞。可以用多种方法来评价与细胞凋亡有关的细胞事件。例如,磷脂酰丝氨酸(PS)翻转可通过磷脂结合蛋白结合检测;DNA片段可以通过DNA电泳衡量;细胞核/染色体浓缩连同DNA碎裂均可通过亚二倍体细胞增加测得。
“治疗”是指治疗性治疗和防范或预防性措施。所述需要治疗对象包括已经发生失调和需要防止失调发生的对象。因此这里所述接受治疗的哺乳动物可以是已诊断为有失调,或者倾向于失调或容易失调。
用于治疗目的的“哺乳动物”指任何分类为哺乳动物的动物,包括人类、驯化动物、畜牧动物、动物园的动物、运动场的动物或宠物动物,如狗、马、猫、牛、猴等等。哺乳动物优选为人。
术语“治疗有效量”指药物治疗哺乳动物体内疾病或紊乱的有效量。在治疗癌症的情况下,治疗有效量的药物可以减少癌细胞的数量、减小肿瘤体积、抑制(即减慢到某种程度,优选停止)癌细胞渗透到周围器官、抑制(即减慢到某种程度,优选停止)肿瘤转移、一定程度上抑制肿瘤生长、和/或将一种或几种癌症的相关症状减轻到一定程度。所述药物在某种程度上抑制肿瘤细胞的生长和/或杀死存在的肿瘤细胞,它可以是抑制细胞生长的物质和/或细胞毒素。短语“治疗有效量”用在这里表示足够的预防量,优选减少率至少约30%,优选至少50%,优选至少70%,优选至少80%,优选至少90%,靶细胞块、癌细胞团或肿瘤在生长、或发展、或有丝分裂能力、或其它病理特征方面,出现临床上有意义的变化。
术语“癌症”和“癌症的”指或描述哺乳动物的生理状况,其典型特征在于失控的细胞生长。癌症的实例包括但不仅限于:癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤(包括脂肪肉瘤)、神经内分泌瘤、间皮瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。更具体的癌症实例包括鳞状细胞癌(如鳞状上皮细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部腺癌和肺部鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌(hepatocellular cancer)、胃(gastric)或胃部(stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤(hepatoma)、乳癌、结肠癌(colon cancer)、直肠癌(rectal cancer)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、子宫内膜或子宫癌、唾腺癌、肾(kidney)或肾脏(renal)癌、前列腺癌、阴门癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道癌以及头颈癌。
“ErbB表达癌”指包括在细胞表面出现ErbB蛋白的细胞的癌症。
“特征在于过度激活”ErbB受体的癌是指癌细胞中ErbB受体的激活程度大大超过同组织类型非癌细胞的受体激活水平的癌症。所述过度激活可能由癌细胞内的ErbB受体过度表达,和/或高出正常水平的可用ErbB配体激活ErbB受体引起的。所述过度激活作用可以引起癌细胞的恶性状态,和/或由癌细胞的恶性状态引起。在某些具体实施方式中,癌症可以通过诊断或预后化验来检测是否扩大,和/或是否发生ErbB受体的过度表达,所述过度表达导致所述ErbB受体的过度激活作用。选择性地或补充地,癌症可以通过诊断或预后化验来检测是否扩大,和/或是否发生归因于受体过度激活的ErbB配体的过度表达。
“过度表达”ErbB受体的癌指,相对于同组织类型的非癌细胞而言,细胞表面的ErbB受体如ErbB1水平明显更高。所述过度表达可能归因于基因扩增、或转录或翻译的增强。ErbB受体的过度表达可以通过评测细胞表面ErbB蛋白的增加水平(如通过免疫组织化学法分析,IHC),进行诊断或预后化验。
术语“包括”通常用于表示包括在内的意思,即允许有一种或几种特征或成分存在。
短语“药理上可接受”是指分子本体或组合物生理上可以耐受,在对人给药后,不产生典型的过敏或类似不良反应如胃不适、眩晕等。
术语多聚肽体的非人类(如啮齿动物)部分的“人源化”形式指其中含有源自非人类免疫球蛋白的最短序列的嵌合部分。所述多聚肽体特别是指人源化的软骨低聚基质多肽和免疫球蛋白多肽铰链区部分。
术语“嵌合”部分意指包括序列的功能部分的氨基酸序列,可用本领域技术人员公知的分子生物学方法得到。
“嵌合蛋白”指包括两段或两段以上多肽的蛋白质,所述多肽来源不同,即它们在自然条件下不会共存。
根据本发明,所述多肽是由单链DNA序列编码的分离并重组的融合多聚肽体。所述分离并重组的融合多聚肽体能结合表皮生长因子受体成员ErbB1、ErbB3或ErbB4,更优选结合ErbB1。本发明所述分离并重组的融合多聚肽体至少包括:
(a)人源化或人的软骨低聚基质多肽部分;
(b)铰链部分和
(c)表皮生长因子受体配体,该配体至少包括具有三维结构的模体。所述分离并重组的融合多聚肽体能诱导表达表皮生长因子受体的细胞的细胞死亡(调亡和/或坏死)。所述表达表皮生长因子受体的细胞优选癌细胞,更优选ErbB-表达癌细胞。所述ErbB-表达癌细胞更优选为其特征在于ErbB受体过度活化的细胞,或“过度表达”ErbB受体细胞。
“三维结构”或三级结构是蛋白质的总体3D结构,或者换句话说是蛋白质或多肽折叠的构象。蛋白质分子由一条长链氨基酸序列折叠成复杂的三维结构形成。通常由几何形状决定蛋白质的功能。
本发明表皮生长因子受体的配体包括长氨基酸序列,优选包括为复杂的多肽EGFR配体,更优选包括蛋白质。可以理解表皮生长因子受体的配体优选以其全长序列形式存在。表1显示以强亲和力和活性结合所述EGFR所需的最短氨基酸序列。所述序列包括至少10个氨基酸,优选20个氨基酸,更优选20个以上氨基酸。在EGF多肽配体的情况下,已经显示出高效EGFR活化作用要求的最小EGF区是结构模体,该模体包括了由蛋白质折叠产生的三个位点环。
EGF和所有所述生长因子家族的其它成员都具有特征性的6个保守半胱氨酸残基间隔,排列了3个二硫键。与两个保守甘氨酸残基的结合提供了适合的ErbB受体结合所必需的三维结构支架(Campbell等人,1990.Biochem.Pharmacol.40,35-40)。除了线性氨基末端(N-terminal)区、线性羧基末端(C-terminal)区和第四和第五半胱氨酸之间的单氨基酸铰链区之外,这些分子在它们的半胱氨酸间隔基础上还可以被分为三个成环区,称为A-环(A-loop)(Cys6-Cys20)、B-环(B-loop)(Cys14-Cys31)和C-环(C-loop)(Cys33-Cys42)(Stortelers等人,2002.Biochemistry,41(13),4292-4301)。高亲合力结合要求适合的配体三维结构与EGF受体结合结构域的特定残基相结合。
所述分离并重组的融合多聚肽体识别细胞表面的EGFR分子,所述细胞优选真核细胞,更优选脊椎动物细胞,更优选哺乳动物细胞,如人体细胞。所述结合是对细胞表面确定结构的特异性结合。结合还以高亲合力发生,优选结合常数为5-10纳摩尔/升,更优选为9纳摩尔/升。
更优选地,本发明所述分离并重组的融合多聚肽体为全部来源于人或是人源化的多聚肽体。特别的是所述人软骨低聚基质多肽和铰链区部分是人源化的或全部来源于人。例如,能够低聚的所述肽结构域(COMP,即人源化的或人的软骨低聚基质多肽部分)和能结合表皮生长因子受体成员的结构域通过间隔区(铰链区)相连,例如以使结合结构域具有更大的灵活性。例如,认为富含脯氨酸的间隔序列可以避免形成二级结构元件,结果稳定了三维结构。此外,因其脯氨酸残基在构象上的限制,通常认为此类间隔区刚性很强,有利于协同多价结合。因此本发明的优选实施方式中,能够低聚的人源化的或人的软骨低聚基质多肽和能结合表皮生长因子受体成员的表皮生长因子受体的配体,通过免疫球蛋白多肽的铰链区(间隔区)部分相连,该铰链区优选包括富含脯氨酸区域。铰链部分更优选是免疫球蛋白多肽的区域。
所述人源化的或人的软骨低聚基质多肽部分(COMP)是能低聚并且能自组装的肽结构域,由此它能自发五聚化。本发明优选实施方式中的低聚物是能在体内或体外低聚化的自组装分子。
本发明优选实施方式中,所述分离并重组的融合多聚肽体是多聚化的,即多聚肽体分子的二聚体或三聚体。
本发明所述分离并重组的融合多聚肽体的构建与现有技术不同:铰链区部分优选免疫球蛋白多肽区域,位于所述人源化软骨低聚基质多肽部分的羧基末端,表皮生长因子受体的配体位于所述铰链区的羧基末端,并且增强子序列位于所述人源化软骨低聚基质多肽部分的氨基末端。此区别点能改进功效和提高产率。
优选地,本发明所述分离并重组的融合多聚肽体还包括增强子序列。所述增强子序列选自由YSFE、YSFED、YSFEDL、YSFEDLY、YSFEDLYR和YSFEDLYRR以及它们的片段、分子嵌合体和变体所组成的组中。已表明氨基末端增强子序列的存在,优选上述备选增强子能使产率提高20-100倍(见图25和26)。然而,本领域技术人员在不背离本发明范围的情况下也能选择其它合适的增强子序列。
表皮生长因子受体的配体选自下列组中:
(a)表皮生长因子多肽或其片段或其变体,
(b)生长阻断肽(growth blocking peptide)或其片段或其变体,
(c)转化生长因子α(TGF-α)多肽或其片段或其变体,
(d)浆细胞扩散肽或其片段或其变体,
(e)麻痹肽(paralytic peptide)或其片段或其变体,
(f)作用于心脏的肽(cardioactive peptide)或其片段或其变体,
(g)双调蛋白多肽(amphiregulin polypeptide)或其片段或其变体,
(h)结合肝磷脂的表皮生长因子样多肽(heparin-binding epidermalgrowth factor-like polypeptide)或其片段或其变体,
(i)β动物纤维素多肽(betacellulin polypeptide)或其片段或其变体,或
(j)病毒EGF样多肽(viral EGF-like polypeptide)或其片段或其变体。
很容易理解它们的嵌合部分也应该予以正视。表皮生长因子受体的配体片段也可用,只要它们表现出与其起源的天然序列相同的性质。
表1 显示融合有本发明所述分离并重组融合多聚肽体的各种EGF受体的配体
名称 | 序列 | 来源 | ||
浆细胞扩散肽1 | PsiPSP1 | ENFNGGCLAGYMRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 大豆夜蛾(Pseudoplusiaincludens) |
Spl生长阻断肽 | SplGBP | ENFSGGCVAGYMRTPDGRCKPTFYQ | 25个氨基酸残基 | 斜纹夜蛾(Spodopteralitura) |
Mab生长阻断肽 | MabGBP | ENFAAGCATGYQRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 甘蓝夜蛾(Mamestrabrassicae) |
Spe麻痹肽1 | SpePP1 | ENFAGGCATGYLRTAKGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 南部灰翅夜蛾(Spodopteraeridania) |
Mas麻痹肽1 | MasPP1 | ENFAGGCAAGYLRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 烟草天蛾(Manducasexta) |
Mas麻痹肽2 | MasPP2 | ENFAGGCATGFLRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 烟草天蛾(Manducasexta) |
Hev麻痹肽1 | HevPP1 | ENFSGGCIPGYMRTADGRCKPTY | 23个氨基酸残基 | 烟蚜夜蛾(Heliothisvirescens |
Hev麻痹肽2 | HevPP2 | ENFAGGCIPGYMRTAKGRCKPTY | 23个氨基酸残基 | 烟蚜夜蛾(Heliothisvirescens) |
Tm麻痹肽1 | TrnPP1 | ENFSGGCLAGYMRTADGRCKPTFG | 24个氨基酸残基 | 银纹夜蛾(Trichoplusiani) |
Tm麻痹肽2 | TrnPP2 | ENFSGGCLAGYMRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 银纹夜蛾(Trichoplusiani) |
Any麻痹肽 | AnyPP | ENFAGGCATGFMRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 大透目天蚕蛾(Antheraeayamamai) |
Spe作用于心脏的肽 | SpeCAP | ENFAVGCTPGYQRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 南部灰翅夜蛾(Spodopteraeridania) |
Spe麻痹肽1 | SpePP1 | ENFAGGCTPGYQRTADGRCKATF | 23个氨基酸残基 | 南部灰翅夜蛾(Spodopteraeridania) |
Spe麻痹肽2 | SpePP2 | ENFAGGCTPGYQRTADGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 南部灰翅夜蛾(Spodopteraeridania) |
Spe麻痹肽3 | SpePP3 | ENFVGGCTPGYQRTAKGRCKPTF | 23个氨基酸残基 | 南部灰翅夜蛾(Spodopteraeridania) |
转化生长因子α | TGFα | VVSHFNDCPDSHTQFCFHGTCRFLVQEDKPACVCHSGYVGARCEHADLLA | 50个氨基酸残基 | 人 |
双调蛋白多肽 | AR | SVRVEQVVKPPQNKTESENTSDKPKRKKKGGKNGKNRRNRKKKNPCNAEFQNFCIHGECKYIEHLEAVTCKCQQEYFGERCGEK | 84个氨基酸残基 | 人 |
肝磷脂-结合表皮生长因子-样多肽 | HB-EGF | DLQEADLDLLRVTLSSKP QALATPNKEEHGKRKKKGKGLGKKRDPCLRKYKDFCIHGECKYVKELRAPSCICHPGYHGERCHGLSL | 86个氨基酸残基 | 人 |
β动物纤维素多肽 | HBTC | DGNSTRSPETNGLLCGDFEENC AATTTQSKRKGHFSRCPKQYKHYCIKGRCRFVVAEQTPSCVCDEGYIGARCRRVDLFY | 80个氨基酸残基 | 人 |
β动物纤维素多肽(羧基末端部分) | HBTC | RKGHFSRCPKQYKHYCIKGRCRFV VAEQTPSCVCDEGYIGARCERVDLFY | 50个氨基酸残基 | 人 |
为了更好的分离,本发明所述分离并重组的融合多聚肽体还包括聚组氨酸尾序列。所述分离可以通过亲和层析或其它任何本领技术人员公知的适合的技术完成。为了亲和层析纯化,可以使用任何特异结合所述分离并重组的融合多聚肽体或聚组氨酸尾序列的抗体。其它亲和分子如Ni2+-次氮基三乙酸交联琼脂糖珠,和特异结合聚组氨酸尾序列的亲和分子也包括在本发明范围内。
此外,所述分离并重组的融合多聚肽体氨基末端优选被至少一个添加功能结构域或效应区(effector region)附加物修饰,如标记、酶或细胞毒区域、或增加额外结合性质的区域,所述结合性质包括例如与金属原子或其它能用于亲和层析中的结构化合物的结合。所述效应区域可以通过本领域公知的常规化学技术连接到本发明所述分离并重组的融合多聚肽体上。
所述效应区域的例子包括诊断目的的可探测的分子或检测部分(detection moiety),例如酶或具有特定结合性质的肽,如链霉抗生物素或辣根过氧化物酶。检测部分还包括化学部分(chemical moiety),如可通过结合特定同类可探测部分(moiety)检测到的生物素,如标记的抗生物素蛋白(avidin)。
检测部分还包括荧光标记和核磁共振显像计算机断层显像领域惯用的标记。已知的许多荧光材料可用作标记。例如,所述标记包括荧光素、若丹明、金胺、德克萨斯红(Texas Red)、AMCA蓝(AMCA blue)和萤光黄(LuciferYellow)。
所述分离并重组的融合多聚肽体可以带有放射性标记作为检测部分,例如同位素3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、90Y、121I、124I、125I、131I、111ln、211At、198Au、67Cu、225Ac、213bu、99Tc和186Re。当使用放射性标记的时候,目前公知的可用计算方法也可以应用于特异性结合成分的定性和定量。例如所述标记在酶上时,可以通过本领域公知的目前常用的任何检测技术完成检测,所述技术包括比色技术、分光光度技术、荧光分光光度技术、电流计技术或气体定量分析技术。
所述放射性同位素标记的分离并重组的融合多聚肽体,在体外诊断技术和体内放射显像技术中很有用处。具体地说,所述放射性同位素标记的分离并重组的融合多聚肽体在放射性免疫治疗,特别是癌症治疗方面用处很大。在此方面更进一步讲,所述放射性同位素标记的分离并重组的融合多聚肽体可用于放射免疫导向外科技术,其中它们可以在外科去除上述细胞前、去除时和去除后,识别并指示出癌细胞、癌症前期的细胞、肿瘤细胞和过度增殖细胞的存在和/或位置。
在体内显像的实例中,本发明所述分离并重组的融合多聚肽体可以结合显像剂(imaging agent)胜于结合放射性同位素。所述显像剂包括但不仅限于磁共振成像加强剂,其中例如所述分离并重组的融合多聚肽体分子通过鳌合基团(chelating group)而负载上大量顺磁性离子。所述鳌合基团的实例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、卟啉、聚胺冠醚和聚肟(polyoximes)。
顺磁性离子的实例包括钆、铁、锰、铼、铕、镧、钬和铒。
所述效应区域优选包括细胞毒素,即能抑制细胞生长或造成细胞破坏的多肽。所述细胞毒素可以是细菌细胞毒素,如从白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)得到的白喉毒素、从绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)得到的外毒素A、从炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)得到的炭疽毒素、从志贺菌属(Shigella)得到的志贺氏毒素(Shigatoxin)、从大肠埃希氏菌(Escherichia coli)得到的志贺样毒素(Shiga-like toxin)、从百日咳杆菌(Bordetella pertussis)得到的百日咳毒素(pertussis toxin)、或它们的有毒区域。优选的细菌细胞毒素为从绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)(ATCC 25313-25363)得到的外毒素A或其毒素区域,如结构域II、结构域Ib和/或结构域III。
另一方面,细胞毒素也可以来自植物。植物细胞毒素的实例是蓖麻毒蛋白(ricin)(Lamb等人,Eur.J.Biochem.148,265-270(1985))、相思豆毒蛋白(abrin)(Wood等人,Eur.J.Biochem.198,723-732(1991))、核酶钝化蛋白如皂角素(saporin)(Benatti等人,Eur.J.Biochem.183,465-470(1989))、美洲商陆抗病毒蛋白(Kataoka等人,Plant Mol.Biol.20,879-886(1992))、白树素(gelonin)(Nolan等人,Gene 134,223-227(1993))或天花粉蛋白(Shaw等人,Gene 97,267-272(1991))。
更优选的实施方式中的效应区域包括核糖核苷酸酶,特别是从哺乳动物中得到的核糖核苷酸酶,如牛胰腺核糖核酸酶A(Carsana等人,Nucleic AcidsRes.16,5491-5502(1988))、人血管生成素(Kurachi等人,Biochemistry 24,5494-5499(1985))、或人嗜曙红细胞来源的神经毒素(Rosenberg等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86,4460-4464(1989))。最优选所述核糖核苷酸酶来自人。
其它细胞毒素药物也可以使用如5-氟尿嘧啶、或蓖麻毒蛋白,以及酶如细菌羧肽酶或硝基还原酶,所述酶能够将药物前体在肿瘤的位点转化成活性药物。
可将本发明所述分离并重组的融合多聚肽体通过任何合适的途径为需要治疗的病人给药,通常通过注射到血流或脑脊液中,或直接注射到肿瘤所在位点或靠近肿瘤的位点。准确的给药剂量取决于许多因素,包括多聚肽体是用于诊断还是用于治疗、肿瘤的大小和位置、多聚肽体的准确属性和连接在所述分离并重组的融合多聚肽体上的可探测或功能标记的属性。当使用放射性核素(radionuclia)疗法时,合适的最大单剂量为约45毫居里/平方米(mCi/m2)至约250毫居里/平方米。优选剂量在15-40毫居里范围内,更优选的剂量范围是20-30毫居里或10-30毫居里。
本发明的另一个主题是编码上文定义的所述分离并重组的融合多聚肽体的分离和纯化的DNA分子,及包括至少一个拷贝的所述分离纯化的DNA分子的载体。
这里能用的DNA是任何多脱氧核苷酸,例如包括双链DNA、单链DNA、其中一条或者两条单链都由两个或两个以上片段组成的双链DNA、其中一条或者两条单链都含有连续的磷酸三酯主链的双链DNA、包含一个或多个单链部分和一个或多个双链部分的DNA、两条DNA链完全互补的双链DNA、两条DNA链只有部分互补的双链DNA、环状DNA、共价闭合DNA、线性DNA、共价交联DNA、cDNA、化学合成DNA、半合成DNA、生物合成DNA、天然分离出的DNA、酶解后的DNA、剪切后的DNA、标记过的DNA例如放射性标记的DNA和荧光染料标记的DNA、包含一个或多个非自然发生种的核酸的DNA。编码所述分离并重组的融合peptaboby或其一部分的DNA序列,可以通过例如磷酸三酯法或通过自动合成法的标准化学技术和PCR法合成。根据本发明,编码所述分离并重组的融合peptaboby分离和纯化的DNA序列也可以用酶技术合成。因此,在预先确定的识别序列处断裂核酸分子的限制酶,可以用于从含有所述核酸序列的较大核酸分子中分离该核酸序列。所述核酸序列例如编码所述分离并重组的融合peptaboby或其一部分的DNA(或RNA)。
本发明还包括了上述序列的变体,所述变体是通过保守核苷酸取代而不同于所提及序列的核苷酸序列,其中的一个或多个核苷被具有相同特征的其它核苷所取代。
所述载体能在真核细胞、原核细胞复制或在真核细胞和原核细胞中复制。它可以是能整合到宿主细胞基因组中的载体(例如λ噬菌体)或存在于染色体外的载体(例如质粒)。优选载体是质粒。
此外,所述载体可以是表达载体,即其分离和纯化的DNA序列可操作地与启动子连接的载体。这意味着,连接后的编码本发明的所述分离并重组的融合多聚肽体的分离和纯化的DNA序列在适合的调控序列控制下允许表达,即插入的所述分离和纯化的DNA序列得到复制和翻译。适合原核宿主细胞的表达载体描述于Sambrook等人,Molecular Cloning;a LaboratoryManual,2nd Edition(1989),Cold Spring Harbor Laboratory Press中,特别是在第1-4章和第17章中。适合表达哺乳动物细胞中克隆基因的载体在Sambrook等人第16章有描述。适合的载体可以选择或构建,包括适当的调控序列,包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸序列、标记序列和其它合适的序列。
多种宿主/表达载体组合都可以应用于表达本发明所述的DNA序列。例如有用的表达载体可以由染色体片段、非染色体片段和合成的DNA序列组成。合适的载体包括SV40的衍生物和公知的细菌质粒如大肠杆菌质粒colE1、pCR1、pBR322和pMB9以及它们的衍生物;质粒如RP4;噬菌体DNA,如噬菌体X(phage X)众多的衍生物(如NM989)和其它噬菌体(如M13和单链丝状噬菌体DNA);酵母质粒如2u质粒或其衍生物;用于真核细胞的载体如可用于昆虫和哺乳动物细胞中的载体;源于质粒和噬菌体DNA组合的载体如经修饰应用于噬菌体DNA的质粒或其它表达控制序列,等等。
多种表达控制序列(即控制可操作地连接于其上的DNA序列表达的序列)中的任意一种或几种均可应用于这些载体中以表达本发明所述的DNA序列。所述有用的表达控制序列例如包括猿猴病毒40(SV40)、细胞巨化病毒(CMV)、牛痘、多瘤病毒或腺病毒的早期或晚期启动子,lac系统、trp系统、TAC系统、TRC系统、LTR系统,噬菌体X(phage X)的主要调控子和启动子区域,fd外壳蛋白控制区域,3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶启动子(如Pho5),酵母杂交因子启动子和其它已知的控制原核或真核细胞或它们的病毒的基因表达的序列,以及它们的各种组合。
本发明表达载体的具体实例为大肠杆菌载体pMS238-5-TGF、pMS238-5-225、pMS238-225-5、pMS240-5-225、pMS242-5-5 KDEL、pMS238-5-5和pMS246-5-5 KDEL。表达载体优选为pQE-09(图27)。编码本发明多肽的质粒片段的核苷酸序列及其对应的氨基酸序列如图2、图23、图24和图7所示,同时附上的SEQ ID N°1和SEQ ID N°2为多聚肽体EGF(p-EGF);SEQ ID N°3和SEQ ID N°4为p-GBP。
本发明的另一个主题是能表达如上所述分离和纯化的DNA分子的宿主细胞,尤其是被稳定转化的具有含有所述DNA分子的表达载体的宿主细胞。
多种单细胞的宿主细胞有利于表达本发明的DNA序列。所述宿主可以包括公知的真核和原核宿主,如大肠杆菌(E.coli)、假单胞菌(Pseudomonas)、枯草杆菌(Bacillus)、链霉菌(Streptomyces)的菌株,真菌如酵母,和动物细胞如CHO、YB/20、NSO、SP2/0、RI.I、B-W和L-M细胞、非洲绿猴肾细胞(如COS1、COS 7、BSC1、BSC40和BMT10)、昆虫细胞(如Sf9)以及组织培养的人类细胞和植物细胞。所述宿主细胞优选为细菌细胞,更优选为大肠杆菌细胞。
可以理解的是,并不是所有的载体、表达控制序列和宿主表达本发明DNA序列的功能都一样好。相同表达系统的所有宿主功能也不会等同。然而,在不背离本发明范围的情况下,本领域技术人员无需大量的试验,就能够选择合适的载体、表达控制序列和宿主,完成想得到的表达。例如选择表达载体,必须考虑宿主,因为载体需要在宿主中行使功能。载体的拷贝数、控制该拷贝数的能力、任何所述载体编码的其它蛋白如抗生素标记的表达,也要予以考虑。
选择表达控制序列时,通常要考虑许多因素,例如包括表达系统的相对强度、控制能力、以及与要表达的特定DNA序列的相容性,特别是有关潜在二级结构。通过考虑与所选载体的相容性、分泌特性、正确折叠蛋白质的能力、发酵条件以及对由要表达的DNA序列编码的产物宿主的毒性和纯化表达产物的容易程度可以选择合适的单细胞宿主。
考虑上述因素和其它因素后,本领域技术人员能构建多种载体/表达控制序列/宿主的组合,所述组合将在发酵时或在大规模的动物培养过程中表达本发明所述DNA序列。
宿主细胞被转化以制备上述多聚肽体的表达或克隆载体,并在经过适当改良以诱导启动子、筛选转化株、或扩增多聚肽体产品的常规营养基中培养。用于制备本发明所述分离并重组的融合peptaboby的宿主细胞可以在多种培养基中培养。市售可得的培养基如汉氏F10(Ham′s F10)(Sigma)、最低基本培养基(Minimal Essential Medium,MEM)(Sigma)、RPMI-1640(Sigma)以及达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)(Sigma)均适宜培养宿主细胞。此外,任何描述于Ham等人,Meth.Enz.58:44(1979)、Barnes等人,Anal.Biochem.102:255(1980)、US 4767704、US 4657866、US 4927762、US 4560655、或US 5122469、WO 90/03430或WO 87/00195的培养基都可以用作宿主细胞的培养基。任何所述培养基都可以补充必要的激素和/或其它生长因子(如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐(如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(如N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸,HEPES)、核苷酸(如腺苷和胸苷)、抗生素(如庆大霉素GENTAMYCIN(TM)药)、微量元素(定义为通常存在的终浓度在微摩尔范围内的无机化合物)和葡萄糖或等价能量源。还可以含有本领域技术人员公知的适当浓度的任何其它的必需补充物。所述培养条件如温度、pH等为先前用于筛选表达宿主细胞的培养条件,该培养条件对本领域普通技术人员而言是显而易见的。
本发明的另一个主题是含有药剂有效量的上述定义的分离并重组的融合peptaboday作为活性物质的药物组合物,所述活性物质选择性地与医药上可接受的载体、稀释剂和辅料联合使用。本发明优选的药物组合物包括药物适合的载体、稀释剂和辅药。所述适合的载体、稀释剂和辅药应该无毒并且应该不影响活性成分的功效。所述药物组合物优选用作用于制备用于治疗或预防癌症、用于抑制细胞增殖的药剂的试剂,更优选用作抗肿瘤试剂即抑制肿瘤生长的试剂。
所述药物组合物可以是任何合适的形式,例如溶液、悬浮液、粉剂、冻干物、油膏或酊剂的形式。所述组合物能以任何合适的方法给药,如通过注射(全身的或局部的)或外用。所述载体或其它材料的精确属性有赖于给药的途径,所述途径包括口服、外用或者通过注射如静脉内注射、皮内注射。
口服给药的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉剂或液体形式。片剂可以包括固体载体如明胶或辅料。液体药物组合物通常包括液体载体如水、乳油(petroleum oil)、动物油或植物油、矿物油或合成油。
还可以含有生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖类溶液或二元醇如乙二醇、丙二醇、或聚乙二醇。
对于静脉内注射、或病痛位点注射而言,活性成分存在于以注射用药物可接受的水溶液剂型中,该剂型无热原、具有适宜的pH值、等张性和稳定性。例如本领域相关技术人员利用等张载体如氯化钠注射液、林格注射液(Ringer′s Injection)和乳酸钠林格注射液能够制备合适的溶液。
防腐剂、稳定剂、缓冲液、抗氧化剂和/或其它添加剂作为必需成分也包括在内。
药剂有效量取决于具体接受治疗的病人、治疗的疾病和给药的方法。再者,药剂有效量有赖于具体使用的多肽、特别是所述多肽是否额外还含有细胞毒性成分。治疗通常包括药物组合物的多次给药,通常间隔几小时、几天或几周。单位剂量的所述多肽药剂的药剂有效量通常在0.001纳克到100微克每千克接受治疗病人体重的范围内。
根据本发明,通过将具有所需纯度级别的药剂有效量的上述定义的分离并重组的融合多聚肽体,以冻干制剂或水溶液形式与所选择的药物适合的载体、赋形剂或稳定剂混合制备用于储存所用的药物组合物(Remington′sPharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))。适合的载体、赋形剂或稳定剂在应用剂量和浓度下对受试者无毒,包括缓冲液,例如磷酸盐、柠檬酸和其它有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸和甲硫氨酸;防腐剂(如氯化十八烷基二甲基苄基铵(octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride)、氯化己烷双胺(hexamethonium chloride)、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、苯索氯铵(benzethonium chloride)、苯酚、丁基苄基醇(butyl orbenzyl alcohol)、对羟基苯甲酸烷基酯(alkyl parabens)如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚);低分子量多肽(少于约10个残基);蛋白质如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精;鳌合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA);糖如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇;成盐反离子如钠;金属络合物(如锌蛋白络合物(Zn-protein complexes));和/或非离子表面活性形剂如吐温TWEEN(TM)、PLURONICS(TM)或聚乙二醇(PEG)。
药物组合物或制剂还可以包括一种以上作为治疗特殊指征所必需的活性化合物,优选那些具有互补活性而又不互相起反作用的化合物。例如,药物组合物还可以根据需要在一种制剂中进一步含有可结合EGFR、ErbB2(如结合ErbB2上不同抗原决定簇的抗体)、ErbB3、ErbB4或血管内皮因子(VEGF)的抗体。显然药物组合物可以单独给药,或者根据治疗条件选择性地或附加地与其它治疗、疗法或药剂或同时或顺次结合。优选药物组合物还包括化疗剂、细胞毒素剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、EGFR-靶向药物、抗血管生成剂、抗癌剂、免疫调节剂和/或保心药。所述分子适合以达到既定目的所需的有效量的组合形式存在。
更常见的抗癌剂可以是酪氨酸激酶抑制剂或级联磷酸化作用抑制剂、翻译后调节子、细胞生长或分裂抑制剂(如抗有丝分离剂)、或信号转导抑制剂。其它治疗或疗法可以包括给予适当剂量的疼痛减缓药物如非甾体类消炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug)(如阿斯匹林、扑热息痛、布洛芬或酮洛芬)或麻醉剂如吗啡、或止吐剂。所述组合物可以与下列药物联合给药(或顺次(即在之前或之后)或同时):酪氨酸激酶抑制剂(包括但不仅限于AG1478和ZD1839、ST1571、OSI-774、SU-6668)阿霉素、替莫唑胺(temozolomide)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、亚硝基脲(nitrosoureas)、甲基苄肼(procarbazine)、长春新碱(vincristine)、羟基脲(hydroxyurea)、5-氟尿嘧啶(5-fluoruracil)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosinearabinoside)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)、卡氮芥(carmustine)、环己亚硝脲(lomustine)和/或其它化疗试剂。因此所述试剂可以是抗EGFR特异性试剂、或酪氨酸激酶抑制剂如AG1478、ZD1839、ST1571、OSI-774或SU-6668,或是更常用的抗癌和抗肿瘤性转化试剂如阿霉素、顺铂、替莫唑胺、亚硝基脲、甲苄肼、长春新碱、羟基脲、5-氟脲嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷、环磷酰胺、表鬼臼毒素、卡氮芥或环己亚硝脲。此外药物组合物还可以与下列药物结合给药:激素如地塞米松,免疫调节剂如白细胞介素、肿瘤坏死因子(TNF)或其它刺激免疫应答并减小或消除癌细胞或肿瘤的生长因子或细胞因子。
活性成分或活性试剂也可以在胶质药物给药系统(如脂质体、白蛋白微球体、微乳、纳米微粒、纳米微胶囊)或粗乳状液中,通过例如凝聚技术或界面聚合技术,分别包埋于例如由羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚甲基丙烯酸甲酯(poly-(methylmethacylate))微胶囊制得的微胶囊中。上述技术公开于Remington′s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)。
可以制备出常释制剂。合适的常释制剂的实例包括含抗体的固体疏水聚合物半透性基质。所述基质的形态为成型粒子,如膜或微胶囊。常释制剂基质的例子包括聚酯、水凝胶(如聚甲基丙烯-2-羟乙酯、或聚乙烯醇)、聚交酯(US 3773919)、L-谷氨酸和[γ]乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、非可降解性乙烯-乙酸乙烯酯、可降解性乳酸-羟基乙酸共聚物如LUPRON DEPOT(TM)(包括乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林的可注射用微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
用于体内给药的制剂必须无菌。此要求通过如无菌滤膜过滤可以很容易地达到。
可以预见,含有药剂有效量上述定义的分离并重组的融合多聚肽体作为活性物质的药物组合物,可以用于治疗多种疾病或紊乱。通常所述被治疗的疾病或紊乱是癌症。特别是本发明提供了治疗和预防癌症的方法。所述癌症表达表皮生长因子受体(ErbB-表达癌),优选癌症的特征在于ErbB受体过度活化,或癌症“过度表达”所述ErbB受体。
这里接受治疗的癌症的实例包括但不仅限于:癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤(包括脂肪肉瘤)、神经内分泌瘤、间皮瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、和白血病或淋巴样恶性肿瘤。更具体的癌症实例包括鳞状细胞癌(如鳞状上皮细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部腺癌和肺部鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌(hepatocellular cancer)、胃(gastric)或胃部(stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤(hepatoma)、乳癌、结肠癌(colon cancer)、直肠癌(rectal cancer)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、子宫内膜或子宫癌、唾腺癌、肾(kidney)或肾脏(renal)癌、前列腺癌、阴门癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道癌、以及头颈癌。
这里接受治疗的癌症更优选是头部癌、颈部癌、膀胱癌或黑素瘤。
本发明还提供了一种诱导凋亡和/或坏死的方法,该方法包括使细胞与本发明所述分离并重组的融合多聚肽体接触。被接触细胞优选上述癌症细胞。
提供抑制细胞增殖的方法也是本发明的目的,包括使细胞与本发明所述分离并重组的融合多聚肽体接触。被接触细胞优选上述癌症细胞。
为了预防和治疗疾病特别是癌症,所述分离并重组的融合多聚肽体适当的剂量取决于上述限定的所治疗疾病的种类、所述疾病的严重程度和进程、给予所述分离并重组的融合多聚肽体以预防还是以治疗为目的、前期治疗、病人的临床病史和对所述分离并重组的融合多聚肽体的应答,以及主治医生的判断力。所述分离并重组的融合多聚肽体适于给予初次给药或经过系列治疗的病人。根据所述疾病的严重程度和进程,给予病人的初始候选给药剂量约为1微克/千克至15毫克/千克(如0.1-20毫克/千克)的多聚肽体,例如或者通过一次或多次分别给药,或者通过连续输注。通常日剂量的变动范围可以是从1微克/千克到100毫克/千克或者更多,取决于上述提及的因素。根据病人状态经过几天或者更长时间反复给药,持续治疗直至想得到的疾病症状的抑制出现。所述分离并重组的融合多聚肽体的首选剂量在约0.005毫克/千克至约1.0毫克/千克范围内变动。这样一剂或多剂约0.05毫克/千克、2.0毫克/千克、4.0毫克/千克、或10毫克/千克(或它们的任何组合)可以给予病人。所述剂量可以间歇给药,如每周或每三周(如这样病人接受以从约2-20毫克/千克,如约六剂所述分离并重组的融合多聚肽体)。初始给予较高给药剂量,随后可以少给予一剂或多剂。典型的剂量方案包括初始给药剂量为约0.4毫克/千克所述分离并重组的融合多聚肽体,随后一周的维持剂量为约0.2毫克/千克所述分离并重组的融合多聚肽体。但是其它剂量方案也可以应用。治疗的过程很容易通过常规的技术和化验检测监控。
由于本发明所述分离并重组的融合多聚肽体具有高度的特异性,因此它们也可以用于基因治疗,如靶向活化或钝化特定受体;或如果连接有有毒化合物,可以用于破坏受体。基于使用上述事先转染以表达载体宿主细胞的细胞疗法,也包括在本发明范围之内。
本发明还预期了诊断癌症的方法,该方法包括对病人给予上述限定的分离并重组的融合多聚肽体,选择性地与适宜的药物载体、稀释剂和辅料结合给药。
本发明的另一个目的是提供病人表达表皮生长因子受体的癌症的诊断试剂盒,所述试剂盒包括上述限定的带有至少一个检测部分的分离并重组的融合多聚肽体,选择性地带有试剂和/或使用说明书。
体外评估EGFR的状态、特别是体外评估有关EGFR异常表达的诊断化验和试剂盒,可以用来诊断、估计和监控病人样本,所述样本包括那些已知患有或怀疑患有癌症、癌症前期状态、过度增殖细胞生长相关的状态的病人、或来自肿瘤样本。评估EGFR状态还有利于判定病人对临床试用药品的适应性;或有利于判定相对于不同的试剂而言,特定化学疗法制剂、或特别是本发明所述分离并重组的融合多聚肽体包括其组合物的给药情况。
本领域最常使用的所述标记或检测部分为放射性元素、酶、暴露在紫外光下发荧光的化学药品等。
本发明的另一个实施方式是提供病人表达表皮生长因子受体的癌症的治疗试剂盒,所述试剂盒包括本发明所述分离并重组的融合多聚肽体,选择性地带有试剂和/或使用说明书。
本发明所述试剂盒还包括单独的药物剂型,该剂型包括附加的选自由化学疗法试剂、抗表皮生长因子受体抗体、放射免疫疗法试剂、以及它们的组合物组成的组的抗癌试剂。
通常,试剂盒包括容器、在容器上或关联在容器上的标签或包装嵌入物。适合的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器等。所述容器可以用多种材料(如玻璃或塑料)形成。所述容器盛装治疗特定状态有效的组合物,有无菌通路出口(例如所述容器可以是静脉输液袋、或可用皮下注射针刺穿瓶塞的具塞小瓶)。组合物中至少一种活性成分是本发明所述分离并重组的融合多聚肽体。所述标签或包装嵌入物指明组合物应用于治疗的所述状态(如癌症)的选择。在一种实施方式中,所述标签或包装嵌入物指明含有与EGFR结合的本发明所述分离并重组的融合多聚肽体的组合物可用于治疗癌症,所述癌症表达ErbB受体,该受体选自由表皮生长因子受体(EGFR)、ErbB3和ErbB4组成的组,优选EGFR。此外,所述标签和包装嵌入物可以说明接受治疗的病人为患有癌症特征为ErbB受体过度活化的病人,所述ErbB受体选自EGFR、ErbB3或ErbB4。
所述试剂盒选择性地或附加地还可以包括另一个(或多个)盛装有药物适宜缓冲液的容器,所述缓冲液例如为抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲生理盐水、林格液和葡萄糖溶液。从商业角度和使用者的立场出发,所述试剂盒还可以包括其它物质,如其它的缓冲液、稀释剂、过滤器、注射针、注射器。
已经可以通过几种方法合成现有技术的多聚肽体。因为能结合受体(配体)的结构域在长度上相对较短,所以已经优选化学合成如通过固相合成现有技术的多聚肽体。
选择性地混合制备已有报道。发明单元的部分通过合适的宿主表达,并与化学合成部分连接。例如寡聚部分通过微生物合成,并通过化学合成延长加上能结合受体的结构域。
通过基因工程制备具有复杂结构和大小的配体如多肽或蛋白质尚未见报道。只有不大于六肽的配体能够作为融合蛋白通过表达发明单元得到。大多数配体以不可溶的形式制得,由此可见在发明单元上制备复杂结构的困难程度。
本发明所述分离并重组的融合多聚肽体优选通过基因工程方法制备。构建上述公开的表达载体包括构建用于编码所述分离并重组的融合多聚肽体完整的DNA序列的表达框,该序列在上述合适的宿主细胞中表达。适合的表达框可以通过基因工程标准技术制备。
除了用于合成想要的分离并重组的融合多聚肽体所必需的信息外,所述表达框可以附加地包括强制分泌所制备蛋白的信号序列。
本发明提供了制备本发明所述分离并重组的融合多聚肽体的方法,该方法包括如下步骤:
a)构建编码上述分离并重组的融合多聚肽体的分离纯化的DNA分子,
b)在细胞系统中以适宜的条件使所述分离纯化的DNA分子得到表达,
c)复性所述分离并重组的融合多聚肽体。
多聚肽体是通过软骨低聚基质蛋白的多聚化作用形成的多聚体分子。当单体在适宜条件(低变性条件)下混合在一起时自发发生多聚化作用。然而五聚体形成效率根据物理化学条件和单体的浓度可能发生变化。此外,配体特别是含有二硫键的配体的复杂性,可能引起多聚肽体聚集体和多聚体的形成。
如上所述,细胞表达系统或宿主细胞是真核或者原核细胞。优选细胞表达系统是原核细胞。
所述步骤b)的适宜条件为在10-40℃的温度下将细胞表达系统培养2-40个小时,优选在37℃下培养8-16小时。
此外,步骤c)是通过从细胞表达系统中提取所述分离并重组的融合多聚肽体,随后进行纯化和重折叠步骤完成的。
当重组融合多聚肽体分泌出来时,所述重组融合多聚肽体可以从培养基中提取和复性;当重组融合多聚肽体没有分泌出来,所述重组融合多聚肽体可以从细胞表达系统中提取,并通过本领域公知的技术如高效液相、凝胶电泳、亲和层析、超滤、离子交换等进行纯化得到。具体用于纯化重组融合多聚肽体的实际条件部分取决于以下因素如净电荷、疏水性、亲水性等等,具体条件对本领域技术人员而言是显而易见的。
任何特异性结合所述重组融合多聚肽体或所述组氨酸标签(His tag)的抗体都可以用于亲和层析纯化。其它亲和分子如Ni2+-次氮基三乙酸交联琼脂糖珠,和特异结合组氨酸尾的亲和分子也包括在本发明范围内。
纯化在还原剂存在下进行,结果导致杂质的去除。
重折叠步骤通过直接在重折叠缓冲液中稀释完成,所述重折叠步骤还包括系列透析。关键点是完成在复性液中快速稀释变性的多聚肽体。
为了避免聚集体形成,复性所述分离并重组的融合多聚肽体在低浓度下进行。优选直接在重折叠缓冲液中稀释至所述分离并重组的融合多聚肽体的终浓度在300纳摩尔/升以下,最优选如实施例4所示稀释至终浓度在100纳摩尔/升以下。
系列透析包括至少2个不同的透析,但是优选至少3个或4个甚至更优选如实施4例所示的至少5个不同的透析。然而,在不背离本发明范围的情况下,本领域技术人员能够选择其它透析顺序或透析系列。
所述重折叠步骤存在于所述分离并重组的多聚肽体浓缩前的氧化过程中。
根据本发明制备出来的所述多聚肽体非常稳定。所述多聚肽体分子的稳定性是指所述分子维持稳定的可溶形式而没有转换成不溶形式,或没有形成聚集体,或没有形成多聚肽体的多聚体,或丧失生物学活性。
本发明的另一个目的是提供具有蛋白合成增强活性的分离纯化的增强子序列。所述分离纯化的增强子序列优选选自由YSFE、YSFED、YSFEDL、YSFEDLY、YSFEDLYR和YSFEDLYRR以及它们的片段、它们的分子嵌合体和它们的变体所组成的组。
“蛋白合成增强活性”指所述分离纯化的增强子序列的活性,具体定义如下:在适当的条件下被引入到真核或原核宿主细胞后,与没有转染所述增强子序列的细胞培养物相比,所述序列能够增加细胞中蛋白合成的水平。
所述增强子序列还增强其它类型重组蛋白的合成比如人激肽释放酶hK2(产量增加至少3倍)或人丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)抗胰凝乳蛋白酶(ACT)(产量增加至少2倍),见实施例7。通常所述增加为1.5-100倍,优选增加3-10倍(还见图25、图26)。
除非特别说明,本领域技术人员可以意识到本发明允许改变和修饰。可以理解本发明包括所有不背离本发明精华或实质特征的改变和修饰。本发明还包括本说明书单独或共同提及或说明的所有步骤、特征、组合物和化合物、以及任何两个或多个步骤或特征的任意和所有组合。因此认为,本发明的公开在所有方面都进行了非限制性的详细说明,本发明的范围通过后附的权利要求书指明,所有在其意义范围内及等价范围之内的变化都确定为包括在内。
本说明书引用了大量参考文献,上述文献在此一并引入参考。
通过参考下列实施例,可以对上述描述进行更充分的理解。但是所述实施例是实施本发明的示例方法,并不用于限定本发明的范围。
实施例1
抗EGFR多聚肽体的构建和制备
所述编码人表皮生长因子的基因通过含有该全长基因的质粒PCR扩增,用合适的酶消化并插入到含多聚肽体基因的质粒中。多聚肽体在细菌体内制备,并通过在37℃下诱导过夜作为包涵体进入到细胞质内。大肠杆菌(E.coli)细胞室温下在变性溶液(8摩尔/升尿素)中裂解。离心之后,多聚肽体分子通过亲和层析纯化,并通过直接在重折叠缓冲液中稀释重折叠(见图3)。
多聚肽体EGF与肿瘤细胞表面EGF受体的结合
结合化验用单克隆抗体Mab425(作为Retuximab用于治疗)、多聚肽体EGF和未关联的多聚肽体在A431细胞上进行。概括地,10000个细胞接种于96孔板培养基/10%胎牛血清(FCS)中培养10小时。去除培养基后,多聚肽体或单克隆抗体在不同的浓度下与贴壁细胞在冰上孵育90分钟。洗涤之后,用过氧化物酶偶联的多克隆抗Fab抗体(anti-Fab)或过氧化物酶偶联的抗(anti-His)单克隆抗体分别与MAb425和多聚肽体进行显色分析(见图4)。
对6.67纳摩尔/升的Mab425和递增用量的多聚肽体EGF(0.1-200纳摩尔/升)进行竞争性定量分析,证明Mab425和多聚肽体EGF竞争相同的结合位点,EGF受体(见图5)。
实施例2
对不同癌细胞系的体外作用
通过生存能力试验来测定多聚肽体对人类癌细胞的影响。概括地,2500个细胞被接种于96孔板,在含10%胎牛血清(FCS)的DMEM培养基中培养。一天以后,去除培养基,代之以含peptaboday的欧普特蒙(optimen)。在不同的时间,细胞板用MTT[3-(4,5)-双甲基-乙-噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝]法显色估测细胞数。
表皮样瘤癌细胞A431:
图6显示人表皮样瘤癌细胞A431在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;抑制作用的百分率(%)通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算得出。图7用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗2天后,无血清DMEM培养基体外培养的表皮样癌细胞A431照片。
人前列腺癌细胞DU145:
图8显示人前列腺癌细胞DU145在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;抑制作用的百分率(%)通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算得出。图9用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗2天后,无血清DMEM培养基体外培养的前列腺癌细胞DU145照片。
人前列腺癌细胞LNCaP:
图10显示人前列腺癌细胞LNCaP在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;抑制作用的百分率(%)通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算得出。图11用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗2天后,无血清DMEM培养基体外培养的前列腺癌细胞LNCaP照片。
人前列腺癌细胞PC-3:
图12显示人前列腺癌细胞PC-3在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;抑制作用的百分率(%)通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算得出。图13用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗2天后,无血清DMEM培养基体外培养的前列腺癌细胞PC-3照片。
人乳癌细胞MCF-7:
图14显示人乳癌细胞MCF-7在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;抑制作用的百分率(%)通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算得出。图15用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗2天后,无血清DMEM培养基体外培养的乳癌细胞MCF-7照片。
人正常肌细胞对照:
图16显示人正常肌细胞在不同浓度的多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)存在下治疗一天、两天和三天后的存活能力测试;抑制作用的百分率(%)通过存活细胞与空白对照存活细胞的比率计算得出。图17用多聚肽体EGF(p-EGF)或未关联的多聚肽体(p-IRR)治疗2天后,无血清DMEM培养基体外培养的肌细胞照片。
对不同癌症细胞系的体外作用:
通过生存能力试验来测定多聚肽体对人类癌细胞的影响。概括地,2500个细胞被接种于96孔板,在含10%胎牛血清(FCS)的DMEM培养基中培养。一天以后,去除培养基,代之以含peptaboday的欧普特蒙(optimen)。在一天内的不同时间,测定10纳摩尔/升的多聚肽体对人癌细胞的作用(见图18)。细胞板用MTT[3-(4,5)-双甲基-乙-噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝]法显色估测细胞数。
总之,可以观察到,相对于未关联的多聚肽体(p-IRR)(空白)而言,多聚肽体EGF(p-EGF)的存在对细胞生长有强抑制作用(见图7、图9、图11、图13和图15)。
实施例3
细胞凋亡检测
在DMEM培养基中孵育A-431癌细胞(在500微升细胞液每孔的5×105个细胞)。24小时以后,换以500微升含10纳摩尔/升的p-EGF或p-IRR且不含血清的OPTIMEM培养基。在0-360分钟之间的确定时间点(T0、T30、T60、T180、T360),收集并合并贴壁细胞和悬浮细胞,用磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)凋亡检测试剂盒(Apotech瑞士)分析凋亡。所述试剂盒能检测到细胞膜外表面的磷脂酰丝氨酸。概括地,细胞用PBS缓冲液和着色缓冲液各洗涤一次,然后在室温下用50微升磷脂结合蛋白(annexin)V-FITC(5毫克/毫升)染色15分钟。着色细胞团用着色缓冲液和FACS缓冲液(1xPBS、5%FCS、0.02%NaN3)各洗涤一次,重悬于200微升FACS缓冲液中,用FACS计数分析。
30分钟后,多聚肽体EGF确定无疑地诱导了A431癌细胞的凋亡,然而多聚肽体IRR没有作用(见图19a和图19b)。
实施例4
多聚肽体的制备和重折叠方案
-在细菌中制备:使用含有编码多聚肽体质粒的E.coli TG1菌株制备重组蛋白。经过过夜的预培养,新鲜培养开始于1/100预培养母液稀释剂,在37℃下250毫升补充有100微克/毫升氨苄青霉素(ampicilin)的2xTY培养基中培养。菌液OD值为0.6(600纳米)时,培养物用250纳摩尔/升的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导。
-纯化:诱导16小时后,细菌通过离心收获,细胞团重悬于25毫升变性溶液(8摩尔/升尿素、1xPBS、10毫摩尔/升β-巯基乙醇,pH为7.4)中,室温下变性2个小时。10000克重力加速度下离心10分钟后不溶物质成团,上清混以250微升Ni2+-次氮基三乙酸交联琼脂糖珠(Qiagen)。室温下旋转2小时后,用洗涤液(5摩尔/升尿素、1xPBS、10毫摩尔/升β-巯基乙醇、20毫摩尔/升咪唑,pH为7.4)洗涤树脂3次。蛋白质在2.5毫升洗脱缓冲液(5摩尔/升尿素、1xPBS、10毫摩尔/升β-巯基乙醇、150毫摩尔/升咪唑,pH为7.4)中洗脱。
-重折叠:
●1.25毫克洗脱出的蛋白质在250毫升的重折叠缓冲液(50毫摩尔/升三(羟甲基)胺基甲烷(Tris)、50毫摩尔/升NaCl、10毫摩尔/升β-巯基乙醇、0.1%Triton-X100,pH=8.2)快速稀释至终浓度低于5微克/毫升,然后在此条件下维持至少6小时。
●然后用下列的缓冲液(透析体积4升)顺序透析蛋白质:
●透析缓冲液1:50毫摩尔/升Tris、50毫摩尔/升NaCl、1毫摩尔/升β-巯基乙醇、0.1%Triton-X100,pH=8.2,透析6小时。
●透析缓冲液2:50毫摩尔/升Tris、50毫摩尔/升NaCl、0.1%Triton-X100,pH=8.2,透析过夜。
●透析缓冲液3:50毫摩尔/升Tris、50毫摩尔/升NaCl、0.01%Triton-X100,pH=8.2,透析4小时。
●透析缓冲液4:50毫摩尔/升Tris、50毫摩尔/升NaCl、0.001%Triton-X100,pH=8.2,透析4小时。
●透析缓冲液5:50毫摩尔/升Tris、50毫摩尔/升NaCl,pH=8.2,沸水浴(bubbling bath)透析过夜。
●所述重折叠蛋白质用氮气搅拌细胞系统和超离心装置(Millipore)浓缩到最终体积250微升,在-80℃下保存。
实施例5:
材料
启动子购自Microsynth(瑞士)。
分子生物学试剂(Taq聚合酶、连接酶、磷酸酯酶)购自Promega(德国)。
表达载体pQE-09和Ni2+-次氮基三乙酸交联琼脂糖(Ni-NTA)柱购自Qiagen(德国)。
抗-EGFR的多聚肽体的制备
1)表达载体的制备
表达载体pQE-09用Xhol和Notl限制酶消化。
2)多聚肽体GBP/多聚肽体EGF/未关联的多聚肽体
编码生长抑制多肽(GBP)的合成基因用于构建多聚肽体GBP。所述GBP为昆虫生物起源的生长因子,由25个氨基酸组成,来自东方粘虫(Pseudaletia separata)的血淋巴。
编码人表皮生长因子的基因通过PCR含有此全长基因的质粒得到扩增。
GBP或EGF被插入包括Bglll/Notl消化的编码decabody分子质粒中。用PCR和特定引物扩增多聚肽体部分(软骨低聚基质蛋白-COMP-、铰链、配体)。结果所得产物为插入pQE-09表达载体进行消化。
3)多聚肽体GBP/多聚肽体EGF/未关联的多聚肽体的制备
多聚肽体在细菌细胞质中作为包涵体被制备,并被重折叠成相应五聚化单体的稳定可溶形式。
-编码人表皮生长因子的基因通过PCR含有此全长基因的质粒得到扩增。
-GBP或EGF被插入包括编码根据本发明修饰的多聚肽体分子质粒中。
结果所得产物为它们插入pQE-09表达载体进行消化。
4)多聚肽体GBP/多聚肽体EGF/未关联的多聚肽体的制备和纯化
通过37℃过夜诱导,多聚肽体在细菌细胞质中作为包涵体被制备。
大肠杆菌细胞在8摩尔/升的尿素中室温下裂解2小时。离心后,裂解物与Ni2+-次氮基三乙酸交联琼脂糖珠混合90分钟,多聚肽体分子通过咪唑/尿素溶液洗脱。
5)多聚肽体GBP/多聚肽体EGF/未关联的多聚肽体的重折叠
多聚肽体分子通过直接在重折叠缓冲液(pH为8.3的50毫摩尔/升TrisHCl、0.01%Triton-X100、10毫摩尔/升β-巯基乙醇)中稀释到终浓度5微克/毫升(稀释必须高于100倍),在pH为8.3的50毫摩尔/升Tris HCl和10毫摩尔/升的β-巯基乙醇中透析24小时,在pH为8.3的50毫摩尔/升Tris HCl中透析两天。
6)多聚肽体GBP/多聚肽体EGF/未关联的多聚肽体的最终纯化
透析后的多聚肽体沉淀在阴离子交换柱上,并用盐梯度洗脱。
结果见图20。图20表示在非还原或还原条件下多聚肽体的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。MDP01对应多聚肽体EGF,MDP03对应多聚肽体GBP,MDP00代表未关联的多聚肽体。
多聚肽体抗EGFR(anti-EGFR)对肿瘤细胞的作用
重折叠多聚肽体在不同的肿瘤细胞中进行测试(A431:人表皮样癌细胞、DU145和PC-3:人前列腺癌细胞)以评价它们的细胞毒作用。
结果见图21。图21表示用MTT[3-(4,5)-双甲基-乙-噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝]法对癌细胞的细胞毒定量分析,癌细胞与浓度为2微克/毫升的多聚肽体或特异EGFR单克隆抗体孵育。MDP01和MDP03与EGF受体结合百分率大大高于MAb 425(数据未显示),所述MAb 425为特异性结合EGF受体的单克隆抗体。多聚肽体存在下,在A-431和DU145癌细胞系中观察到细胞增殖的减少和细胞凋亡的增加,但是PC-3对MDP03较不敏感。
总之,多聚肽体表现出比单克隆抗体425更强的介导癌细胞死亡作用。
实施例6
多聚肽体增强子序列
过去开发出过各种不同类型的多聚肽体,但是它们中大多数产量非常低,而多聚肽体/decabody在产量上观察到了的巨大变化。
图25是关于融合到不同增强子的decabody的产量;显示了用细菌系统生产的decabody产量,所述decabody进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后用考马斯亮蓝染色;A)对应不溶性片段,B)对应可溶性片段;
图26是关于融合以不同增强子多聚肽体的产量;显示了用细菌系统生产的多聚肽体的蛋白质印迹分析;检测用抗-His抗体对尿素细菌提取物进行。
实施例7
用其它蛋白质对增强子序列在产量水平上进行评价。增强子序列(E0、E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7,见图25和图26)融合到人激肽释放酶2基因或人丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)α-1抗胰凝乳蛋白酶(ACT)基因的氮末端部分,通过IPTG诱导后37℃下过夜培养衡量产量水平。增强子序列增加了人激肽释放酶hK2(至少3倍)和人丝氨酸蛋白酶抑制剂ACT(至少2倍)的产量。
序列表
SEQUENCE LISTING
<110>洛桑大学
<120>用于治疗癌症的多聚肽体
<130>P5496KAT
<150>US 60/460,490
<151>2003-04-04
<160>4
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>417
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>多聚肽体EGF的DNA序列:MDP01
<400>1
atgtatagct ttgaagatct ggctagccat catcatcacc atcatggaga cctgggcccg 60
cagatgctgc gtgaactgca ggaaaccaac gctgctctgc aggacgttcg tgactacctg 120
cgtcagctgg ttcgtgaaat caccttcctg aaaaacaccg ttatggaatg cgacgcttgc 180
ggtatgcagc agactagtcc gcctactccg ccaactccgt ctccgtctac tccgccaact 240
ccgtctccga gatccaattc tgactctgaa tgcccattgt ctcacgacgg ttactgcttg 300
cacgacggtg tttgcatgta catcgaagct ctggacaaat acgcttgcaa ctgcgttgtt 360
ggttacatcg gtgaacgttg ccaataccga gatctgaaat ggtgggaact gcgttaa 417
<210>2
<211>138
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>多聚肽体EGF的蛋白序列:MDP01
<400>2
Met Tyr Ser Phe Glu Asp Leu Ala Ser His His His His His His Gly
1 5 10 15
Asp Leu Gly Pro Gln Met Leu Arg Glu Leu Gln Glu Thr Asn Ala Ala
20 25 30
Leu Gln Asp Val Arg Asp Tyr Leu Arg Gln Leu Val Arg Glu Ile Thr
35 40 45
Phe Leu Lys Asn Thr Val Met Glu Cys Asp Ala Cys Gly Met Gln Gln
50 55 60
Thr Ser Pro Pro Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr
65 70 75 80
Pro Ser Pro Arg Ser Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp
85 90 95
Gly Tyr Cys Leu His Asp Gly Val Cys Met Tyr Ile Glu Ala Leu Asp
100 105 110
Lys Tyr Ala Cys Asn Cys Val Val Gly Tyr Ile Gly Glu Arg Cys Gln
115 120 125
Tyr Arg Asp Leu Lys Trp Trp Glu Leu Arg
130 135
<210>3
<211>333
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>多聚肽体GBP的DNA序列:MDP03
<400>3
atgtatagct ttgaagatct ggctagccat catcatcacc atcatggaga cctgggcccg 60
cagatgctgc gtgaactgca ggaaaccaac gctgctctgc aggacgttcg tgactacctg 120
cgtcagctgg ttcgtgaaat caccttcctg aaaaacaccg ttatggaatg cgacgcttgc 180
ggtatgcagc agactagtcc gcctactccg ccaactccgt ctccgtctac tccgccaact 240
ccgtctccga gatctgaaaa cttttccggc ggctgcgtgg cgggctatat gcgtaccccg 300
gatggccgtt gcaaaccgac cttttatcag taa 333
<210>4
<211>110
<212>PRT
<213>人工序列
<223>多聚肽体GBP的蛋白序列:MDP03
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(110)
<223>
<400>4
Met Tyr Ser Phe Glu Asp Leu Ala Ser His His His His His His Gly
1 5 10 15
Asp Leu Gly Pro Gln Met Leu Arg Glu Leu Gln Glu Thr Asn Ala Ala
20 25 30
Leu Gln Asp Val Arg Asp Tyr Leu Arg Gln Leu Val Arg Glu Ile Thr
35 40 45
Phe Leu Lys Asn Thr Val Met Glu Cys Asp Ala Cys Gly Met Gln Gln
50 55 60
Thr Ser Pro Pro Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr
65 70 75 80
Pro Ser Pro Arg Ser Glu Asn Phe Ser Gly Gly Cys Val Ala Gly Tyr
85 90 95
Met Arg Thr Pro Asp Gly Arg Cys Lys Pro Thr Phe Tyr Gln
100 105 110
Claims (45)
1、一种分离并重组的融合多聚肽体,该多聚肽体结合表皮生长因子受体成员,所述多聚肽体至少包括:
(a)人源化软骨低聚基质多肽部分或人的软骨低聚基质多肽部分;
(b)铰链部分和
(c)表皮生长因子受体的配体,该配体至少包括具有三维结构的模体,因此所述分离并重组的融合多聚肽体能诱导表达表皮生长因子受体的细胞死亡。
2、如权利要求1所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述表皮生长因子受体成员为ErbB1、ErbB3或ErbB4。
3、如权利要求2所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述表皮生长因子受体成员为ErbB1。
4、如权利要求1-3中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述分离并重组的融合多聚肽体完全为人的或人源化的。
5、如权利要求1-4中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述分离并重组的融合多聚肽体是多聚化的。
6、如权利要求1-5中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述铰链部分为免疫球蛋白多肽区域,该区域位于人源化的软骨低聚基质多肽部分的羧基末端。
7、如权利要求1-6中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述表皮生长因子受体的配体位于铰链部分的羧基末端。
8、如权利要求1-7中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,该分离并重组的融合多聚肽体还包括增强子序列,其中,所述增强子序列位于人源化的软骨低聚基质多肽部分的氨基末端。
9、如权利要求8所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述增强子序列选自包括YSFE、YSFED、YSFEDL、YSFEDLY、YSFEDLYR和YSFEDLYRR的组中。
10、如权利要求1-9中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述表皮生长因子受体的配体选自下面的组中:
(a)表皮生长因子多肽或其片段或其变体,
(b)生长阻断肽或其片段或其变体,
(c)转化生长因子α多肽或其片段或其变体,
(d)浆细胞扩散肽或其片段或其变体,
(e)麻痹肽或其片段或其变体,
(f)作用于心脏的肽或其片段或其变体,
(g)双调蛋白多肽或其片段或其变体,
(h)结合表皮生长因子的肝磷脂样多肽或其片段或其变体,
(i)β动物纤维素多肽或其片段或其变体,或
(j)病毒表皮生长因子样多肽或其片段或其变体。
11、如权利要求10所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述表皮生长因子受体的配体以其全长序列的形式存在。
12、如权利要求1-11中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,该多聚肽体还包括聚组氨酸标签序列。
13、如权利要求1-12中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体,其中,该多聚肽体还包括至少一个效应区域。
14、如权利要求13所述分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述效应区域包括细胞毒素。
15、如权利要求13所述分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述效应区域包括检测部分。
16、如权利要求15所述分离并重组的融合多聚肽体,其中,所述检测部分为荧光的。
17、一种分离纯化的DNA序列,其中,所述DNA序列编码权利要求1-13中任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体。
18、一种载体,该载体含有权利要求17所述分离纯化的DNA序列的至少一个拷贝。
19、如权利要求18所述的载体,其中,该载体还包括可操作地与所述分离纯化的DNA分子连接的启动子。
20、一种原核或真核宿主细胞,该宿主细胞能表达权利要求17所述分离纯化的DNA分子。
21、一种药物组合物,该组合物包括含有药剂有效量的权利要求1-16中任意一项所述分离并重组的融合多聚肽体作为活性物质,所述活性物质选择性地与药物适合的载体、稀释剂和辅料结合。
22、权利要求21所述药物组合物用于制备治疗或预防癌症的制剂的用途。
23、如权利要求22所述的用途,其中,所述癌症选自由癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、脂肪肉瘤、神经内分泌瘤、间皮瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、白血病、淋巴样恶性肿瘤、鳞状细胞癌、鳞状上皮细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部腺癌、肺部鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃或胃部癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾腺癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、阴门癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道癌以及头颈癌组成的组中。
24、如权利要求23所述的用途,其中,所述癌为头部癌、颈部癌、膀胱癌或黑素瘤。
25、一种治疗或预防表达表皮生长因子受体的癌症的方法,所述癌症选自由癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、脂肪肉瘤、神经内分泌瘤、间皮瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、白血病、淋巴样恶性肿瘤、鳞状细胞癌、鳞状上皮细胞癌、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部腺癌、肺部鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃或胃部癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾腺癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、阴门癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道癌、以及头颈癌组成的组中,其中,该方法包括给予治疗对象治疗有效量的权利要求21所述的药物组合物。
26、如权利要求25所述的方法,其中,癌症为头部癌、颈部癌、膀胱癌或黑素瘤。
27、一种诱导凋亡和/或坏死的方法,该方法包括使细胞与权利要求1-16中任意一项所述分离并重组的融合多聚肽体接触。
28、如权利要求27所述的方法,其中,所述细胞为癌细胞。
29、一种抑制细胞增殖的方法,该方法包括使细胞与权利要求1-16中任意一项所述分离并重组的融合多聚肽体接触。
30、如权利要求29所述的方法,其中,所述细胞为癌细胞。
31、一种诊断癌症的方法,该方法包括给予治疗对象权利要求15或16所述分离并重组的融合多聚肽体,所述多聚肽体选择性地与药物适合的载体、稀释剂和辅料结合。
32、一种用于治疗表达病人体内表皮生长因子受体的癌症的试剂盒,所述试剂盒包括权利要求1-16中任意一项所述分离并重组的融合多聚肽体,并选择性地带有试剂和/或使用说明书。
33、如权利要求32所述的试剂盒,所述试剂盒还包括单独的药物剂型,所述剂型包括附加的抗癌试剂,所述试剂选自由化疗剂、抗表皮生长因子受体抗体、放射免疫疗法试剂、以及它们的组合物组成的组中。
34、一种用于诊断表达病人体内表皮生长因子受体的癌症的试剂盒,所述试剂盒包括权利要求15或16所述分离并重组的融合多聚肽体,并选择性地带有试剂和/或使用说明书。
35、一种制备权利要求1-16中任意一项所述分离并重组的融合多聚肽体的方法,该方法包括如下步骤:
a)构建编码权利要求1-13任意一项所述的分离并重组的融合多聚肽体的分离纯化的DNA分子,
b)在细胞系统中以适宜的条件使所述分离纯化的DNA分子得到表达,
c)复性所述分离并重组的融合多聚肽体。
36、如权利要求35所述的方法,其特征在于,所述细胞表达系统为原核细胞。
37、如权利要求35或36所述的方法,其特征在于,所述适宜的条件为在10-40℃的温度下将细胞表达系统培养2-40个小时。
38、如权利要求37所述的方法,其特征在于,所述适宜的条件为在37℃下培养8-16小时。
39、如权利要求35-38中任意一项所述的方法,其特征在于,所述步骤c)是通过从细胞表达系统中提取所述分离并重组的融合多聚肽体,随后进行纯化和重折叠步骤来完成的。
40、如权利要求39所述的方法,其特征在于,所述纯化在还原剂存在下进行,结果除去杂质。
41、如权利要求39所述的方法,其特征在于,所述重折叠步骤通过直接在重折叠缓冲液中稀释完成,所述重折叠步骤还包括系列透析。
42、如权利要求41所述的方法,其特征在于,所述直接在重折叠缓冲液中的稀释使所述分离并重组的融合多聚肽体的终浓度在300纳摩尔/升以下。
43、如权利要求41所述的方法,其特征在于,所述系列透析包括至少2种不同的透析缓冲液。
44、如权利要求41所述的方法,其特征在于,所述重折叠步骤存在于所述分离并重组的融合多聚肽体浓缩前的氧化过程中。
45、一种具有蛋白合成增强活性的分离纯化的增强子序列,其特征在于,所述分离纯化的增强子序列选自由YSFE、YSFED、YSFEDL、YSFEDLY、YSFEDLYR和YSFEDLYRR以及它们的片段、它们的分子嵌合体和它们的变体所组成的组中。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US46049003P | 2003-04-04 | 2003-04-04 | |
US60/460,490 | 2003-04-04 | ||
PCT/IB2004/001049 WO2004087766A2 (en) | 2003-04-04 | 2004-04-05 | Peptabody for cancer treatment |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1798770A true CN1798770A (zh) | 2006-07-05 |
CN1798770B CN1798770B (zh) | 2010-06-09 |
Family
ID=33131924
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2004800152672A Expired - Fee Related CN1798770B (zh) | 2003-04-04 | 2004-04-05 | 用于治疗癌症的多聚肽体 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20060233808A1 (zh) |
EP (1) | EP1613661B1 (zh) |
JP (1) | JP2007527206A (zh) |
KR (1) | KR20060017585A (zh) |
CN (1) | CN1798770B (zh) |
AT (1) | ATE514718T1 (zh) |
AU (1) | AU2004226162A1 (zh) |
BR (1) | BRPI0409554A (zh) |
CA (1) | CA2521393A1 (zh) |
MX (1) | MXPA05010575A (zh) |
NO (1) | NO20055209L (zh) |
WO (1) | WO2004087766A2 (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111295392A (zh) * | 2017-11-01 | 2020-06-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Compbody–多价靶结合物 |
WO2023126009A1 (zh) * | 2021-12-31 | 2023-07-06 | 康码(上海)生物科技有限公司 | 聚合分子、包括其的单一结构和多聚结构 |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG10202109176RA (en) * | 2006-02-23 | 2021-09-29 | Viacyte Inc | Compositions and methods useful for culturing differentiable cells |
US20110200618A1 (en) * | 2008-02-14 | 2011-08-18 | Chang-Gyu Hahn | Erbb4 inhibitors and uses thereof in treatment of neuropsychiatric disorders |
WO2010033249A2 (en) * | 2008-09-22 | 2010-03-25 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions of and methods using ligand dimers |
EP2352851A1 (en) | 2008-11-12 | 2011-08-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department of Health and Human Services | Use of erbb4 as a prognostic and therapeutic marker for melanoma |
WO2010103475A2 (en) | 2009-03-10 | 2010-09-16 | Med Discovery Sa | Use of serine protease inhibitors in the treatment of neutropenia |
WO2011119836A1 (en) | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and compositions for cardioprotection and cardioregeneration |
US9168297B2 (en) | 2010-06-23 | 2015-10-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Regulation of skin pigmentation by neuregulin-1 (NRG-1) |
TW201302793A (zh) | 2010-09-03 | 2013-01-16 | Glaxo Group Ltd | 新穎之抗原結合蛋白 |
KR20130137637A (ko) * | 2010-09-30 | 2013-12-17 | 에밀 골럽 | 수중 박테리아 추출물-농축물로부터 건조 분말을 제조하는 방법 |
KR101633159B1 (ko) * | 2013-11-28 | 2016-06-23 | 부경대학교 산학협력단 | 클라미도모나스 유래 활성 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 위장 질환 치료 및 예방용 조성물 |
KR101587622B1 (ko) * | 2014-05-23 | 2016-01-22 | 한국과학기술원 | 상피세포 성장인자 수용체의 세포외 도메인과 결합하는 신규 폴리펩타이드 |
US11787764B2 (en) * | 2018-02-15 | 2023-10-17 | Children's National Medical Center | Heptamethine cyanines for use as fluorescent markers of the biliary and renal systems |
US12014835B2 (en) | 2020-02-19 | 2024-06-18 | Vanderbilt University | Methods for evaluating therapeutic benefit of combination therapies |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5571507A (en) * | 1992-02-25 | 1996-11-05 | Seragen, Inc. | Methods of treating diabetes |
AU6171194A (en) * | 1993-02-05 | 1994-08-29 | Affymax Technologies N.V. | Receptor-binding antiproliferative peptides |
EP0938571B8 (en) * | 1996-10-28 | 2008-07-02 | University of Lausanne | Method for the oligomerisation of peptides |
US6350860B1 (en) * | 1997-08-18 | 2002-02-26 | Innogenetics N.V. | Interferon-gamma-binding molecules for treating septic shock, cachexia, immune diseases and skin disorders |
US6656906B1 (en) * | 1998-05-20 | 2003-12-02 | Trimeris, Inc. | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties |
US6258782B1 (en) * | 1998-05-20 | 2001-07-10 | Trimeris, Inc. | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties |
WO2001005433A2 (en) * | 1999-07-14 | 2001-01-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Delivery and retention of activity agents to lymph nodes |
AU2001259063A1 (en) * | 2000-04-12 | 2001-10-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
AU2001265154A1 (en) * | 2000-05-31 | 2001-12-11 | Genvec, Inc. | Method and composition for targeting an adenoviral vector |
WO2002006469A2 (en) * | 2000-07-18 | 2002-01-24 | Enchira Biotechnology Corporation | Methods of ligation mediated chimeragenesis utilizing populations of scaffold and donor nucleic acids |
DE10108100A1 (de) * | 2001-02-20 | 2002-08-29 | Aventis Pharma Gmbh | Verwendung supersekretierbarer Peptide in Verfahren zu deren Herstellung und paralleler Verbesserung der Exportate eines oder mehrerer anderer Polypeptide von Interesse |
JP2004528368A (ja) * | 2001-05-08 | 2004-09-16 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 抗egfr抗体と抗ホルモン剤を用いた組合せ療法 |
US7081443B2 (en) * | 2002-05-21 | 2006-07-25 | Korea Advanced Institutes Of Science And Technology (Kaist) | Chimeric comp-ang1 molecule |
-
2004
- 2004-04-05 AT AT04725746T patent/ATE514718T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-04-05 JP JP2006506445A patent/JP2007527206A/ja active Pending
- 2004-04-05 US US10/551,977 patent/US20060233808A1/en not_active Abandoned
- 2004-04-05 AU AU2004226162A patent/AU2004226162A1/en not_active Abandoned
- 2004-04-05 CA CA002521393A patent/CA2521393A1/en not_active Abandoned
- 2004-04-05 CN CN2004800152672A patent/CN1798770B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-05 KR KR1020057018924A patent/KR20060017585A/ko not_active Application Discontinuation
- 2004-04-05 WO PCT/IB2004/001049 patent/WO2004087766A2/en active Search and Examination
- 2004-04-05 MX MXPA05010575A patent/MXPA05010575A/es unknown
- 2004-04-05 BR BRPI0409554-5A patent/BRPI0409554A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-04-05 EP EP04725746A patent/EP1613661B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-11-04 NO NO20055209A patent/NO20055209L/no not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111295392A (zh) * | 2017-11-01 | 2020-06-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Compbody–多价靶结合物 |
WO2023126009A1 (zh) * | 2021-12-31 | 2023-07-06 | 康码(上海)生物科技有限公司 | 聚合分子、包括其的单一结构和多聚结构 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1613661A2 (en) | 2006-01-11 |
NO20055209L (no) | 2006-01-02 |
WO2004087766A3 (en) | 2004-12-16 |
AU2004226162A1 (en) | 2004-10-14 |
JP2007527206A (ja) | 2007-09-27 |
BRPI0409554A (pt) | 2006-04-25 |
WO2004087766A2 (en) | 2004-10-14 |
CN1798770B (zh) | 2010-06-09 |
ATE514718T1 (de) | 2011-07-15 |
MXPA05010575A (es) | 2006-03-09 |
US20060233808A1 (en) | 2006-10-19 |
KR20060017585A (ko) | 2006-02-24 |
CA2521393A1 (en) | 2004-10-14 |
EP1613661B1 (en) | 2011-06-29 |
NO20055209D0 (no) | 2005-11-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1214044C (zh) | ErbB3抗体 | |
CN1606453A (zh) | Cripto阻断抗体及其用途 | |
CN1798770A (zh) | 用于治疗癌症的多聚肽体 | |
CN1268744C (zh) | 新的神经营养因子 | |
CN1836048A (zh) | 可转导的dna结合蛋白 | |
CN1552855A (zh) | 人血管内皮生长因子2 | |
CN1694902A (zh) | 调节癌症的方法 | |
CN1252260C (zh) | 肿瘤特异性启动子 | |
CN1668630A (zh) | 新的血管内皮细胞生长抑制剂同种型 | |
CN1947012A (zh) | 激动剂抗-trkC抗体和使用其的方法 | |
CN1305527A (zh) | 血管发生相关分子 | |
CN1170850C (zh) | 人血管生成素样蛋白和编码序列及其用途 | |
CN1257187C (zh) | 钙网蛋白-肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的融合蛋白及其制法和用途 | |
CN1244595C (zh) | 一种肿瘤抑制蛋白及其应用 | |
CN1160370C (zh) | 新的人细胞周期控制相关蛋白及其编码序列 | |
CN1765925A (zh) | 肝癌中上调表达的两种新的人蛋白及其编码序列和另外二十种人蛋白在肝癌诊断中的新用途 | |
CN1234728C (zh) | 新的人淋巴因子、其编码序列及用途 | |
CN1219882C (zh) | 以erbb-3为基础的用于肿瘤治疗的方法和组合物 | |
CN1177862C (zh) | 人nip2相关蛋白和编码序列及其用途 | |
CN1289524C (zh) | 一种人端粒酶活性抑制蛋白及其应用 | |
CN1277844C (zh) | 新型人细胞周期蛋白,其编码序列及用途 | |
CN1170844C (zh) | 人长寿保障蛋白和编码序列及其用途 | |
CN1249082C (zh) | 促凋亡基因bnipl及其编码蛋白和用途 | |
CN100340574C (zh) | 肿瘤标志物及其用途 | |
CN1213069C (zh) | 发育促进因子、其制法及用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C17 | Cessation of patent right | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20100609 Termination date: 20120405 |