CN1798746B - 回折拟态及其相关方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了结构受限制的化合物，其模仿生物活性肽和蛋白质回折区的二级结构。这种回折拟态结构可用于宽范围的领域，包括用作诊断剂和治疗剂。本发明还公开了含有本发明的回折拟态结构的库，以及用于对该库进行筛选以便识别生物活性成员的方法。本发明还涉及使用这些化合物来抑制或治疗受Wnt-信号通道调节的病症，例如癌症，尤其是结肠癌；与血管成形术有关的再狭窄；多囊肾疾病；异常血管生成病；风湿性关节炎病；结节性硬化症；阿尔茨海默式症；毛发生长过剩或脱发；或者溃疡性结肠炎。

Description

回折拟态及其相关方法
技术领域
本发明一般涉及回折拟态(reverse-turn mimetic)结构和与其相关的化合物库。本发明还涉及在例如癌症疾病之类的医学疾病治疗中的用途，并且涉及含有该拟态的药学组合物。
背景技术
为确定分子作为治疗剂的可能活性，对其进行随机筛选已经存在了多年，并且导致大量重要药物的发现。当分子生物学和计算化学的进展已经导致对被称为“合理化药物设计(rational drug design)”的兴趣日益增长的时候，这种技术并未证实如最初所预期的那样快捷或可靠。因此，近几年来人们的兴趣重新转向随机药物筛选。因此，基于组合化合物库的发展和在生物活性成员检索中对这种库的筛选的新技术，迈出了特殊的一步。
通常，组合化合物库仅仅是分子的收集。这种库随该库中化学物种，以及用来产生库成员并且分辨哪些成员与所关心的生物靶互相作用的方法而改变。虽然这一领域尚属初期，用于生成并筛选库的方法已经变得非常多样和成熟。例如，最近的关于各种组合化合物库的综述已经识别了一定数目的这种技术(Dolle，J.Com.Chem.，2(3)：383-433，2000)，包括标记的和未标记的库成员的使用(Janda，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：10779-10785，1994)。
最初，组合化合物库通常限于肽源或核苷酸源的成员。因此，Houghten等人的技术说明了被称为“双重定义迭代(dual-definediterative)”法的例子，其通过裂分合成(split synthesis)技术汇集可溶性组合肽库(Nature(London)354：84-86，1991；Biotechniques 13：412-421，1992；Bioorg.Med.Chem.Lett.3：405-412，1993)。通过这种技术，可以获得含有数千万成员的可溶性肽库。这种库已经在例如甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽的阿片样肽的识别中显示出效果(Dooley和Houghten，Life Sci.52，1509-1517，1993)，而N-酰化肽库已经用于识别acetalins，其是有效的阿片样物质拮抗剂(Dooley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：10811-10815，1993)。近来，已经构建了全D-氨基酸阿片样肽库，并且对其对mu(“μ”)阿片样物质受体的镇痛活性进行了筛选(Dooley等，Science 266：2019-2022，1994)。
虽然含有肽源和核苷酸源成员的组合库具有重要价值，该领域中仍然需要含有不同源成员的库。例如，传统的肽库很大程度上仅仅改变氨基酸序列而产生库成员。虽然确实要承认肽的二级结构对生物活性至关重要，这种肽库无法赋予其库成员受限的二级结构。
因此，一些研究人员用二硫桥使肽环化，试图提供更受限的二级结构(Tumelty等，J.Chem.Soc.1067-68，1994；Eichler等，Peptide Res.7：300-306，1994)。然而，这种环化的肽通常仍然非常容易变形，很难进行生物应用，因此仅仅获得了有限的成功。
最近，发展了非肽化合物，其非常接近地模仿了在生物活性蛋白质或肽中发现的回折的二级结构。例如，Kahn的美国专利第5,440,013号和Kahn公开的PCT申请第WO94/03494、WO01/00210A1和WO01/16135A2分别公开了结构受限的非肽化合物，其模仿了回折的三维结构。此外，均属于Kahn的美国专利第5,929,237号及其部分继续申请美国专利第6,013,458号公开了结构受限的化合物，其模仿了生物活性肽和蛋白质的回折区的二级结构。Obrecht对结构受限的回折拟态的合成和识别，及其对疾病的应用进行了详细地综述(Advances inMed.Chem.，4，1-68，1999)。
虽然在结构受限的回折拟态的合成和识别上已经取得显著的进展，该领域中仍然需要模拟肽二级结构的小分子。该领域还需要含有这种成员的库，以及合成和筛选所关注的靶，特别是生物靶的库成员的技术，以识别生物活性库成员。
本发明也满足了这些需要，并且通过提供模仿生物活性肽和蛋白质回折区二级结构的结构受限化合物，而进一步提供了相关的优势。
Wnt信号通道(Wnt signaling pathway)调节多种过程，包括细胞生长、肿瘤发生和发展(Moon等，1997，Trends Genet.13，157-162；Miller等，1999，Oncogene 18，7860-7872；Nusse和Varmus，1992，Cell 69，1073-1087；Cadigan和Nusse，1997，Genes Dev.11，3286-3305；Peifer和Polakis，2000 Science 287，1606-1609；Polakis 2000，Genes Dev.14，1837-1851)。已经在各种生物体内对Wnt信号通道进行了深入的研究。已经发现通过Wnt信号转导(Wnt signal transduction)激活的TCF4/β-连蛋白介导的转录，在其生物功能中扮演关键角色(Molenaar等，1996，Cell 86：391-399；Gat等，1998 Cell 95：605-614；Orford等，1999J.Cell.Biol.146：855-868；Bienz和Clevers，2000，Cell 103：311-20)。
在缺少Wnt信号的情况下，肿瘤抑制基因结肠腺瘤样息肉(APC)同时与丝氨酸激酶糖原合成酶激酶(GSK)-3β和β-连环蛋白相互作用(Su等，1993，Science 262，1734-1737；Yost等，1996Genes Dev.10，1443-1454；Hayashi等，1997，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，242-247；Sakanaka等，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95，3020-3023；Sakanaka和William，1999，J.Biol.Chem 274，14090-14093)。通过GSK-3β进行的APC磷酸化作用，对APC与β-连环蛋白之间的相互作用加以调节，其可以反过来调节β-连环蛋白的信号功能(B.Rubinfeld等，Science 272，1023，1996)。Wnt信号稳定了β-连环蛋白，允许其易位到其与转录因子的淋巴增强因子(LEF1)/T-细胞因子(TCF4)家族中的成员相互作用的核处(Behrens等，1996Nature 382，638-642；Hsu等，1998，Mol.Cell.Biol.18，4807-4818；Roose等，1999Science 285，1923-1926)。
近来显示，公知的肿瘤基因c-myc作为β-连环蛋白/TCF4-介导的转录的靶基因(He等，1998Science 281，1509-1512；Kolligs等，1999 Mol.Cell.Biol.19，5696-5706)。已经识别出许多其它重要基因，包括细胞周期蛋白D1和金属蛋白酶，其也涉及肿瘤形成，这些基因是受TCF4/β-连环蛋白转录通道所调节的(Crawford等，1999，Oncogene 18，2883-2891；Shtutman等，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，11，5522-5527；Tetsu和McCormick，1999Nature，398，422-426)。
此外，发现Wnt信号的几种下游介质的超量表达调节了编程性细胞死亡(Moris等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93，7950-7954；He等，1999，Cell 99，335-345；Orford等，1999J.Cell.Biol.，146，855-868；Strovel和Sussman，1999，Exp.Cell.Res.，253，637-648)。人类结肠癌细胞中APC的超量表达，诱导了编程性细菌死亡(Moris等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，93，7950-7954)，β-连环蛋白的异位表达抑制了与胞外基质附着物缺失有关的编程性细胞死亡(Orford等，1999，J.CellBiol.146，855-868)。通过TCF4的显性负突变体的表达对TCF4/β-连环蛋白转录的抑制，阻断了Wnt-1-介导的细胞存活，并且使细胞对例如抗癌剂之类的编程性细胞死亡刺激物敏感(Shaoqiong Chen等，2001，J.Cell.Biol.，152，1，87-96)，并且APC突变通过允许一种公知的抗编程性细胞死亡的蛋白质的结构性存活蛋白基因表达，来抑制编程性细胞死亡(Tao Zhang等，2001，Cancer Research，62，8664-8667)。
尽管在人类癌症中尚未发现Wnt基因的突变，APC或β-连环蛋白中的突变，如在大多数结肠肿瘤的案例中那样，导致了TCF4的不适当的激活、c-myc的超量表达和肿瘤生长的产生(Bubinfeld等，1997，Science，275，1790-1792；Morin等，1997，Science，275，1787-1790；Casa等，1999，Cell.Growth.Differ.10，369-376)。在85％的结肠癌以及各种其它癌中，肿瘤抑制基因(APC)缺失或未激活(Kinzler和Vogelstein，1996，Cell 87，159-170)。APC的主要作用是Wnt信号转导系统(Wntsignal transduction cascade)的负调节物。该通道的中心特征包括，通过与含有APC的大Axin基复合体的相互作用，而对β-连环蛋白的胞质池的稳定性和定位进行调节。这种相互作用导致β-连环蛋白的磷酸化，从而将其定为目标而降解。
最初，CREB结合蛋白质(CBP)/p300是在蛋白质相互作用分析中识别的，其首先通过其与转录因子CREB的关联(Chrivia等，1993，Nature，365，855-859)，然后通过其与腺病毒转化蛋白质E1A的相互作用(Stein等，1990，J.Viol.，64，4421-4427；Eckner等，1994，Genes.Dev.，8，869-884)。CBP具有参与包括转录共激活功能在内的各种细胞功能的潜力(Shikama等，1997，Trends.Cell.Biol.，7，230-236；Janknecht和Hunter，1996，Nature，383，22-23)。CBP/p300加强了作为公知的Wnt靶的siamois启动子的β-连环蛋白介导激活(Hecht等，2000，EMBO J.19，8，1839-1850)。β-连环蛋白直接与CBP的CREB结合区相互作用，并且β-连环蛋白与CBP一起协同增效以刺激TCF4/β-连环蛋白的转录激活(Ken-Ichi Takemaru和Randall T.Moon，2000J.Cell.Biol.，149，2，249-254)。
发明内容
由背景技术可看到，TCF4/β-连环蛋白和Wnt通道的CBP复合体可以用作调节细胞生长、肿瘤形成和细胞的编程性细胞死亡等的靶分子。因此，本发明涉及通过抑制CBP来阻断TCF4/β-连环蛋白转录通道的化合物，因此该化合物可用于治疗癌症，尤其是结肠癌。
简要的说，本发明涉及一种新型的结构受限的化合物，其模仿生物活性肽和蛋白质回折区的二级结构。本发明还公开了含有这些化合物的库，以及对其的合成与筛选。
本发明的化合物具有以下通式(I)：
Figure A20048001505700151
其中A是-(CHR3)-或-(C＝O)-，B是-(CHR4)-或-(C＝O)-，D是-(CHR5)-或-(C＝O)-，E是-(ZR6)-或-(C＝O)-，G是-(XR7)n-、-(CHR7)-(NR8)-、-(C＝O)-(XR9)-或-(C＝O)-，W是-Y(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(SO2)-或空缺，Y是氧、硫或-NH-，X和Z独立地是氮或CH，n＝0或1；而R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9可以相同或不同，并且独立地选自氨基酸侧链部分或其衍生物、分子残余部分、连接基或固体载体、及其立体异构体。
在一个实施方式中，其中A是-(CHR3)-，B是-(C＝O)-，D是-(CHR5)-，E是-(C＝O)-，并且G是-(XR7)n-，本发明的化合物具有下式(II)：
Figure A20048001505700152
其中W、X、Y和n如上定义，并且R1、R2、R3、R5和R7如下面的详细说明所定义。
在一个实施方式中，其中A是-(C＝O)-，B是-(CHR4)-，D是-(C＝O)-，E是-(ZR6)-，并且G是-(C＝O)-(XR9)-，本发明的化合物具有下式(III)：
Figure A20048001505700161
其中W、X和Y如上定义，Z是氮或CH(限定当Z是CH时，那么X是氮)，并且R1、R2、R4、R6和R9如下面的详细说明所定义。
在一个实施方式中，其中A是-(C＝O)-，B是-(CHR4)-，D是-(C＝O)-，E是-(ZR6)-，并且G是-(XR7)n-，本发明的化合物具有以下通式(IV)：
其中W、Y和n如上所述，Z是氮或CH(当Z为氮时，则n为0，而当Z为CH时，则X为氮并且n不为0)，并且R1、R2、R4、R6和R7如下面的详细说明所定义。
本发明还涉及含有一种或多种上式(I)的化合物，以及用于合成这种库的方法和用于对这种库进行筛选从而识别生物活性化合物的方法。还公开了含有本发明的化合物与药学上可接受载体或稀释剂相组合的组合物。
本发明还涉及使用含有一种或多种式(I)的化合物的库，识别生物活性化合物的方法。在相关的方面，本发明提供了一种用于进行结合分析(binding assay)的方法，包括(a)提供含有第一共激活剂(firstco-activator)和相互作用蛋白(interacting protein)的组合物，所述第一共激活剂含有LXXLL、LXXLI或者FXXFF的结合基序，其中X是任何氨基酸；(b)将第一共激活剂和相互作用蛋白与检测化合物相结合；以及(c)在具有通式(I)的化合物的存在下，检测第一共激活剂和相互作用蛋白之间的结合的改变。
本发明还提供了用于预防或治疗与Wnt信号通道有关的病症。可以用本发明的化合物或组合物治疗或预防的病症包括肿瘤或癌症(例如，与KSHV相关的肿瘤)、与血管成形术有关的再狭窄、多囊肾病、异常血管生成病、类风湿性关节炎病、溃疡性结肠炎、结节性硬化综合症、脱发和阿尔茨海默氏病。这种方法包括根据需要对受体施用可达到预期结果的有效量的本发明的化合物或组合物。
在相关的方面，本发明进一步提供了用于促进神经突生成、神经干细胞分化和癌细胞编程性细胞死亡的方法。这种方法包括对合适的细胞施予可达到预期结果的有效量的本发明的化合物或组合物。
参考附图和下面的详细说明，本发明的这些方面和其它方面将会是显而易见的。因此，本文中列出了多种更详细地说明了某些程序、化合物和/或组合物的参考文件，它们整体引入作为参考。
附图说明
图1提供了制备本发明的回折拟态的一般合成方案。
图2提供了制备本发明的回折拟态的一般合成方案。
图3显示了使用SW480细胞测量的本发明化合物A的IC50的曲线图，其中在实施例4所制备的化合物A的各种浓度下测量对SW480细胞的细胞生长抑制，以得到IC50值。具体地说，测定了化合物A对萤火虫和海肾(renilla)荧光素酶活性的抑制度。结果，发现化合物A对SW480细胞生长的IC50如表4所示。详细程序如实施例6所公开。
图4.PC-12细胞在有被平皿(coated dish)上培养，并且在50ng/ml的神经生长因子(NGF)中分化10天(如实施例7所述)。(A、B)载体转染的PC-12细胞(A)和PC-12细胞超量表达wt PS-1(B)在NGF中10天后表现出广泛的神经突生成。(C)PC-12细胞表达突变体PS-1/L286V在相同的培养条件下未显示明显的神经突。(D、E)神经突生成的分子标记GAP-43的免疫荧光分析(如实施例7所述)，证明了在PC-12细胞(E)中载体转染的和超量表达的PS-1/WT的神经突(D)中对GAP-43的强染色。(F)神经突生成的缺乏对应于突变体细胞中的弱GAP-43免疫染色。数据代表至少两个独立实验。(G)用Topflash转染分化细胞，Topflash是一种TCF/β-连环蛋白报道构造(reporter construct)。使细胞溶解，并且在转染后6小时测量其荧光素活性(如实施例7所述)。数据代表三个独立实验的平均(±SD)。星号表示P＜0.05。
图5.化合物D表型地矫正了PC-12超量表达的突变体PS-1/L286V细胞中的不完全神经元分化。在分化期间，除NGF之外，突变体细胞暴露在10μM化合物D中(Misner等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，11714(2001))。(A)在用化合物D处理过的PC-12细胞超量表达的PS-1/L286V中观察到神经突的延伸和伸展。(B)GAP-43(绿)在突变体细胞中明显的提高了，并且可以在神经突中看到。(C)PC-12细胞中神经突生成的量化。神经突长度大于两个细胞直径的突变体细胞的数目，少于PC-12细胞中载体转染的和超量表达的PS-1/WT数目的10％。具有所定义的神经突长度的突变体PS-1/L286V细胞的数目，在用10μM化合物D处理过后明显提高。结果是三次独立测定的平均(±SD)。星号表示P＜0.05。
图6.Ephrin B2(EphB2)受体表达。进行免疫荧光分析和RT-PCR以检测EphB2受体表达(如实施例7所述)。(A、B)EphB2受体在载体转染的和超量表达的PS-1/WT细胞的神经突中清楚地展示。染色的强度与高表达水平有关。(C)相反，PS-1/L286V PC-12细胞具有显著降低的EphB2受体表达。(D)用化合物D治疗突变体细胞，从而导致EphB2受体表达升高，其聚焦于神经突生长点。(E)EphB2受体的表达先前显示为转录地调节(Guo等，J.Neurosci.17，4212(1997))。线道1，载体转染的PC-12细胞，线道2，超量表达的PS-1/WT细胞，线道3，超量表达的突变体PS-1/L286V细胞，线道4，用化合物D处理过的突变体细胞。RT-PCR分析显示，细胞超量表达的突变体PS-1/L285V中的EphB2受体的信息，与载体转染的和超量表达的wtPS-1 PC-12细胞相比均有所下降。用10μM化合物D处理上调了EphB2信息。
图7.A，化合物D在G1中抑制了细胞。在SW480(下部的一系列)上进行FACS分析，并且用化合物D(25μM)(右)或者对照(0.5％0DMSO(左)将HCT116(上部的一系列)细胞处理24小时。5.5×106个细胞用碘化丙锭(PI)进行固定和染色。B，化合物D选择性地激活了结肠癌细胞系中的胱天蛋白酶(caspase)。SW480和HCT116(左图)细胞(105)连同正常的colonocyte CCD18Co(右图)一起用对照(0.5％DMSO)或者化合物D(25μM)进行处理。经过处理后24小时，使细胞溶解并且测量胱天蛋白酶-3/7的酶活性。通过从处理过的样品(化合物D或对照)减去空白(对照，没有细胞)来计算相对荧光单位(RFU)，并且绘图。
图8.化合物D减少了菌落在软琼脂中剂量依赖形式的生长。向三个孔的SW480(5000个细胞/孔)中加入提高浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)(0.5-32μM)和化合物D(0.25-5μM)。洗涤细胞并使其悬浮在软琼脂菌种生长培养基中。计算8天后菌落的数目(直径超过60μM的菌落)并且用其对化合物浓度作图。显示了三个测定结果的平均±SE。不存在该化合物的对照的菌落数目为1,637±71。
图9.A，化合物C降低了裸鼠模型的肿瘤生长。B，化合物C稍微降低了裸鼠模型的体重。
图10.存活蛋白的转录活性被Wnt1向上调节，但是被化合物D压下。在野生型CBP+/-和p300+/-3T3细胞中，在不存在Wnt1和化合物D的情况下，或者在存在Wnt1或化合物D的情况下或者二者均存在的情况下，测量荧光素酶活性百分比。
图11.化合物A(右图)和化合物D(左图)抑制了SW480细胞中存活蛋白荧光素酶报道基因的活性。在用各种浓度的化合物A或者化合物D处理过的SW480细胞中，测量在存活蛋白启动子(survivinpromoter)的控制下的荧光素酶活性。
图12.RT-PCR分析表明，化合物D处理降低了存活蛋白基因的表达水平。
图13.化合物D降低了各种蛋白与存活蛋白启动子的关联。在用化合物D(25μM)或对照(0.5％DMSO)处理了18个小时的SW480细胞上进行ChIP化验。
图14.化合物D在翻译水平上降低了存活蛋白的表达。A，使用存活蛋白6E4单克隆抗体(Cell Signaling Technolgy)对用单独的载体(0.5％DMSO)、10μM或25μM化合物D、或者5μM 5-FU处理过的细胞提取物进行蛋白质印迹分析。B，存活蛋白免疫荧光显微镜检查。用抗存活蛋白绿对培养的癌细胞进行固定和染色。C，存活蛋白免疫荧光显微镜检查。用抗存活蛋白绿对用化合物D处理过的SW480细胞进行固定和染色。
图15.化合物D经过对存活蛋白表达的抑制而激活了胱天蛋白酶3的活性(但是不是胱天蛋白酶2的活性)。用星形孢菌素(stausporine)(0.5μM)、化合物D(2.5μM或5.0μM)或者这二者，对用或未用含有存活蛋白基因的结构转染过的培养细胞进行处理。测量这些细胞中胱天蛋白酶2和胱天蛋白酶3的活性。
图16.化合物D通过对存活蛋白表达的抑制促进了细胞的死亡。用星形孢菌素(0.5μM)、化合物D(5.0μM)或者这二者，对用或未用含有存活蛋白基因的结构转染过的培养细胞进行处理。测量这些细胞的细胞死亡。
图17.化合物D提高了G0中细胞的数目。用星形孢菌素(0.5μM)、化合物D(5μM)或者这二者，对用或未用含有存活蛋白基因的结构转染过的培养细胞进行处理。对这些细胞进行FACS分析并且显示了G0中细胞的百分比。
具体实施方式
本发明涉及模仿了生物肽和蛋白质回折区的二级结构的结构受限的化合物(本文中也称为“回折拟态“)，并且还涉及与其相关的化合物库。
本发明的回折拟态结构可用作生物活性剂，包括(但是不限于)用作诊断剂、预防剂和/或治疗剂。本发明的回折拟态结构库可用于识别具有这种用途的生物活性剂。在本发明的实际用途中，库可以含有数十至数百至数千(或者更多)种独立的回折结构(本文中也被称为“成员”)。
在本发明的一个方面，公开了具有下式(I)的回折拟态结构：
Figure A20048001505700201
其中A是-(CHR3)-或-(C＝O)-，B是-(CHR4)-或-(C＝O)-，D是-(CHR5)-或-(C＝O)-，E是-(ZR6)-或-(C＝O)-，G是-(XR7)n-、-(CHR7)-(NR8)-、-(C＝O)-(XR9)-或-(C＝O)-，W是-Y(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(SO2)-或空缺，Y是氧、硫或-NH-，X和Z独立地是氮或CH，n＝0或1；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9可以相同或不同，并且独立地选自氨基酸侧链部分或其衍生物、分子残余部分、连接基团或固体载体、及其立体异构体。
在一个实施方式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9独立地选自氨基C2-5烃基、胍C2-5烃基、C1-4烃基胍基C2-5烃基、二C1-4烃基胍基-C2-5烃基、脒基C2-5烃基、C1-4烃基脒基C2-5烃基、二C1-4烃基脒基C2-5烃基、C1-3烷氧基、苯基、取代苯基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、苄基、取代苄基(其中苄基上的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、萘基、取代萘基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、双苯基甲基、取代双苯基甲基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、吡啶基、取代吡啶基(其中取代基独立地选自一个或多个氨基脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、吡啶基C1-4烃基、取代吡啶基C1-4烃基(其中吡啶的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、嘧啶基C1-4烃基、取代嘧啶基C1-4烃基(其中嘧啶的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、三嗪-2-基-C1-4烃基、取代三嗪-2-基-C1-4烃基(其中三嗪的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、咪唑并C1-4烃基、取代咪唑并C1-4烃基(其中咪唑的取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羟基)、咪唑啉基C1-4烃基、N-脒基哌嗪基-N-C0-4烃基、羟基C2-5烃基、C1-5烃基氨基C2-5烃基、羟基C2-5烃基、C1-5烃基氨基C2-5烃基、C1-5二烃基氨基C2-5烃基、N-脒基哌啶基C1-4烃基和4-氨基环己基C0-2烃基。
在一个实施方式中，E的R1、R2、R6和G的R7、R8和R9可以相同或不同，并且表示化合物的残余部分，而A的R3、B的R4或D的R5选自氨基酸侧链部分或其衍生物。这里所使用的术语“化合物的残余部分”表示共价结合到回折拟态结构的R1、R2、R5、R6、R7、R8和/或R9位置的任何分子部分、试剂、化合物、载体(support)、分子、连接基团、氨基酸、肽或蛋白质。该术语也包括氨基酸侧链部分及其衍生物。
在另一个实施方式中，A的R3、D的R5、E的R6和G的R7、R8和R9可以相同或不同，并且表示化合物的残余部分，而在B的R1、R2和R4中的一个或多个，并且在一个方面其全部表示氨基酸侧链。在这种情况下，术语“化合物的残余部分”表示共价结合到回折拟态结构的R3、R5、R6、R7、R8和/或R9位置的任何分子部分、试剂、化合物、载体、分子、连接基团、氨基酸、肽或蛋白质。该术语也包括氨基酸侧链部分及其衍生物。
这里所使用的术语“化合物的残余部分”表示共价结合到回折拟态结构的任何分子部分、试剂、化合物、载体、分子、原子、连接基团、氨基酸、肽或蛋白质。该术语也包括氨基酸侧链部分及其衍生物。在本发明的一个方面，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和/或R9中的任意一个或多个位置可以表示化合物的残余部分。在本发明的一个方面，R1、R2和R4中的一个或多个表示氨基酸侧链部分或其衍生物。
这里所使用的术语“氨基酸侧链部分”表示任何天然蛋白质中所存在的氨基酸侧链部分，包括(但是不限于)表1中载明的天然氨基酸的侧链部分。本发明的其它天然氨基酸侧链部分包括(但是不限于)3，5-二溴酪氨酸、3，5-二碘酪氨酸、羟赖氨酸、γ-羧基谷氨酸盐、磷酸酪氨酸和磷酸丝氨酸。此外，在本发明的实际应用中也可以使用糖基化的氨基酸侧链，包括(但是不限于)糖基化的苏氨酸、丝氨酸和天门冬酰胺。
                 表1
氨基酸侧链部分          氨基酸
-H                        甘氨酸
-CH3                     丙氨酸
-CH(CH3)2               缬氨酸
-CH2CH(CH3)2          亮氨酸
-CH(CH3)CH2CH3        异亮氨酸
-(CH2)4NH3 +           赖氨酸
-(CH2)3NHC(NH2)NH2 +  精氨酸
Figure A20048001505700231
                           组氨酸
-CH2COO-                天门冬氨酸
-CH2CH2COO-            谷氨酸
-CH2CONH2               天门冬酰胺
-CH2CH2CONH2           谷酰胺
Figure A20048001505700232
                          苯丙氨酸
Figure A20048001505700233
                          酪氨酸
Figure A20048001505700234
                          色氨酸
-CH2SH                   半胱氨酸
-CH2CH2SCH3           甲硫氨酸
-CH2OH                   丝氨酸
-CH(OH)CH3               苏氨酸
Figure A20048001505700235
                          脯氨酸
                          羟基脯氨酸
除天然氨基酸侧链部分外，本发明的氨基酸侧链部分还包括它们的各种衍生物。这里所使用的氨基酸侧链部分的“衍生物”包括天然氨基酸侧链部分的变体和/或变异。例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的氨基酸侧链部分通常可以被归类为低链烃基、低链芳基或低链芳基烃基部分。氨基酸侧链部分的衍生物包括其它直链或支链的、环状或非环状的、取代或非取代的、饱和的或非饱和的低链烃基、低链芳基或低链芳基烃基部分。
这里所使用的“低链烃基部分”含有1-12个碳原子，“低链芳基部分”含有6-12个碳原子，而“低链芳基烃基部分”含有7-12个碳原子。因此，在一个实施方式中，氨基酸侧链衍生物选自C1-12烃基、C6-12芳基和C7-12芳基烃基，并且在一个更优选的实施方式中，其选自C1-7烃基、C6-10芳基和C7-11芳基烃基。
本发明的氨基酸侧链衍生物进一步包括低链烃基、低链芳基和低链芳基烃基部分的取代衍生物，其中取代基选自(但是不限于)以下化学部分的一个或多个：-OH、-OR、-COOH、-COOR、-CONH2、-NH2、-NHR、-NRR、-SH、-SR、-SO2R、-SO2H、-SOR和卤素(包括F、Cl、Br和I)，其中各个R的存在独立地选自直链或支链的、环状或非环状的、取代或非取代的、饱和或不饱和的低链烃基、低链芳基和低链芳基烃基部分。此外，本发明的环状低链烃基、低链芳基和低链芳基烃基部分包括萘，以及杂环化合物，例如噻吩、吡咯、呋喃、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、3-吡咯啉、吡咯烷、吡啶、嘧啶、嘌呤、喹啉、异喹啉和咔唑。氨基酸侧链衍生物进一步包括低链烃基和低链芳基烃基部分的烃基部分的杂烃基衍生物，包括(但是不限于)烃基和芳基烃基的磷酸酯和硅烷。
代表性的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9部分具体包括(但是不限于)-OH、-OR、-COR、-COOR、-CONH2、-CONR、-CONRR、-NH2、-NHR、-NRR、-SO2R和-COSR，其中各个R的存在如上所述。
在另一个实施方式中，除了可以是氨基酸侧链部分或其衍生物(或者R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9是化合物的残余部分)，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9可以是促进化合物与另一个部分或化合物连接的连接基团。例如，本发明的化合物可以连接到一种或多种用于诊断或筛选化验的公知化合物上，例如生物素。此外，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8或R9可以是将化合物连接到固体载体(例如在固相肽合成中所使用的载体)上的连接基团，或者也可以是载体本身。在此实施方式中，连接到另一个部分或化合物上、或者到固体载体上，优选在R1、R2、R7或R8、或者R9位置上，更优选在R1或R2位置上。
在A是-(CHR3)-、B是-(C＝O)-、D是-(CHR5)-、E是-(C＝O)-并且G是-(XR7)n-的实施方式中，本发明的回折拟态化合物具有下式(II)：
Figure A20048001505700251
其中R1、R2、R3、R5、R7、W、X和n如上所述。在优选实施方式中，R1、R2和R7表示化合物的残余部分，并且R3或R5选自氨基酸侧链部分。
在A是-(C＝O)-、B是-(CHR4)-、D是-(C＝O)-、E是-(ZR6)-、G是-(C＝O)-(XR9)-的实施方式中，本发明的回折拟态化合物具有下式(III)：
Figure A20048001505700252
其中R1、R2、R4、R6、R9、W和X如上所述，Z是氮或CH(当Z是CH时，则X是氮)。在优选实施方式中，R1、R2、R6和R9代表化合物的残余部分，并且R4选自氨基酸侧链部分。
在更具体的实施方式中，其中A是-(C＝O)-、B是-(CHR4)-、D是-(C＝O)-、E是-(ZR6)-并且G是(XR7)n-，本发明的回折化合物具有下式(IV)：
Figure A20048001505700253
其中R1、R2、R4、R6、R7、W、X和n如上所述，并且Z是氮或CH(当Z是氮时，则n是0，当Z是CH时，则X是氮并且n不是0)。在优选实施方式中，R1、R2、R6和R7代表化合物的残余部分，并且R4选自氨基酸侧链部分。在一个方面，当Z和X都是CH时，R6或R7选自氨基酸侧链部分。
这些化合物可以通过使用合适的起始组分分子(下文中称为“组分片段”)而制备。简单的说，在具有式(I)的回折拟态结构的合成中，使第一和第二组分片段偶联以形成结合的第一-第二中间体，如果必要，使第三和/或第四组分片段偶联以形成结合的第三-第四中间体(或者，如果商品化，可以使用单独的第三中间体)，然后使结合的第一-第二中间体与第三-第四中间体偶联以提供第一-第二-第三-第四中间体(或者第一-第二-第三中间体)，将该中间体环化从而生成本发明的回折拟态结构。或者，式(I)的回折拟态结构可以通过单独的组分片段在溶液中逐步地，或者如固相肽合成中所常用的一样通过固相合成，进行连续偶联而制备。
制备本发明的化合物的具体组分片段及其组装如图1所示。例如，“第一组分片段”可以具有下式S1：
其中R2如上所述，并且R是适用于肽合成的保护基，其中该保护基可以连接到聚合载体上以使固相合成能够进行。合适的R基团包括烃基，并且在优选实施方式中，R是甲基。在图1中，R基团之一是聚合(固体)载体，在该图中显示为“Pol”。这种第一组分片段可以通过H2N-R2和CH(OR)2-CHO的还原性胺化作用，或者通过H2N-R2与CH(OR)2-CH2-LG(其中LG代表离去基团，例如卤素(Hal)基团)之间的取代反应而容易地合成。
“第二组分片段”可以具有下式S2：
Figure A20048001505700262
其中P是适用于肽合成的氨基保护基团，L1是羟基或羧基-活化基团，并且R4如上所述。优选的保护基团包括叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)，叔丁氧基羰基(BOC)、甲氧基羰基(MOC)、9H-芴甲氧羰基(FMOC)，和丙烯氧基羰基(Alloc)。N-保护的氨基酸是商品化的；例如可从各种来源得到FMOC氨基酸。为使第二组分片段与第一组分片段反应，L1是羧基-活化基团，并且通过本领域中公知的羧基活化方法可以容易地完成羧基到活化羧基的转换。合适的活化羧酸基团包括酸卤，其中L1是例如氯或溴的卤素；酸酐，其中L1是例如乙酰基的酰基；活性酯，例如N-羟基琥珀酰亚胺酯和五氟苯基酯；以及其它活性中间体，例如使用例如二环己基碳二亚胺(DCC)的碳二亚胺在偶联反应中形成的活性中间体。因此，市售的N-保护氨基酸可以通过本领域技术人员公知的手段转化为羧酸活性形式。
在氨基酸的叠氮衍生物充当第二组分片段的情况下，这种化合物可以通过Zaloom等人所公开的反应(J.Org.Chem.46：5173-76，1981)，由相应的氨基酸制备。
或者，本发明的第一组分片段可以具有下式S1’：
Figure A20048001505700271
其中R如上所定义，并且L2是离去基团，例如卤原子或甲苯磺酰基，并且本发明的第二组分片段可以具有下式S2’：
其中R2、R4和P如上所定义。
本发明的“第三组分片段”可以具有下式S3：
Figure A20048001505700273
其中G、E、L1和L2如上所定义。合适的第三组分片段可以是各种来源的市售产品，或者可以通过有机化学中公知的方法制备。
在图1中，式(1)的化合物的A是-(C＝O)-、B是-(CHR4)-、D是-(C＝O)-并且E是-(CR6)-。如图2所示，其中的羧基在B位并且R基团在B位的式(1)的化合物，即，其中A是-(CHR3)-并且B是-(C＝O)-的化合物，可以用与图1所示方法类似的方法制备。图2也说明了向第一-第二-第三组分中间体中加入第四组分片段，而不是在与第一-第二中间体片段反应之前将第四组分片段附在第三组分片段上。此外，图2说明了其中D是-(CHR5)-(而不是图1所示的-(C＝O)-)并且E是-(C＝O)-(而不是图1所示的-(CHR6)-)的本发明的化合物的制备过程。最后，图2说明了其中G是NR7的化合物的制备过程。
因此，如上所述，式(I)的回折拟态化合物可以通过以下方法合成，使第一组分片段与第二组分片段反应从而生成结合的第一-第二中间体，然后继续使结合的第一-第二中间体与第三组分片段反应以提供结合的第一-第二-第三-第四中间体，然后使该中间体环化以生成回折拟态结构。
本发明代表性的组分片段的合成如制备实施例和工作实施例所述。
式(III)和(IV)的回折拟态结构可以通过与以上公开的模块化组分合成相类似的技术而制备，但是对组分片段进行适当的更改。
本发明的回折拟态结构可用作生物活性剂，例如诊断剂、预防剂和治疗剂。例如，本发明的回折拟态结构可以通过包括对动物施予有效量的式(I)化合物的方法，用于调节恒温动物中的细胞信号转录因子相关的肽。
此外，本发明的回折拟态结构还可以有效地用于抑制结合到恒温动物的PTB结构域的肽、调节恒温动物的G蛋白偶合受体(GPCR)和离子通道、调节恒温动物的细胞因子。
同时，已经发现式(I)的化合物，尤其是式(VI)的化合物有效地抑制或治疗受Wnt-信号通道调节的病症，例如癌症、尤其是结肠癌。
Figure A20048001505700281
其中Ra是苯基；带有一个或多个取代基的取代苯基，其中的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基和羟基；苄基；带有一个或多个取代基的取代苄基，其中的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、脒基、胍基、肼基、amidazonyl、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基和羟基；或者具有8至11个环原子的二环芳基，其具有1至3个选自氮、氧或硫的杂原子；萘基；喹啉基；或者异喹啉基；Rb是具有5至7个环原子的单环芳基，其可以具有1至2个选自氮、氧或硫的杂原子，并且该化合物的芳环可以具有一个或多个选自卤素、羟基、氰基、低级烃基和低级烷氧基的取代基；Rc是饱和或不饱和的C1-6烃基、C1-6烷氧基、全氟C1-6烃基基团；并且X1、X2和X3可以相同或不同，并且独立地选自氢、羟基和卤素。
在另一方面，本发明的一个目的是提供一种含有安全和有效量的具有通式(VI)的化合物和药学上可接受的载体的药学组合物，其可以用于治疗受Wnt信号通道调节，尤其是受TCF4-β-连环蛋白-CBP复合体调节的病症。
此外，本发明提供了一种使用上述本发明的化合物抑制肿瘤细胞生长的方法；一种使用上述本发明的组合物诱导肿瘤细胞的编程性细胞死亡的方法；一种使用上述本发明的组合物治疗受TCF4-β连环蛋白-CBP复合体调节的病症的方法；以及一种通过将本发明的组合物与其它抗癌剂一起进行给药来治疗例如结肠癌的癌症的方法，其它抗癌剂例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(taxol)、顺铂、丝裂霉素C、喃氟啶、雷替曲塞(raltitrexed)、卡培他滨(capecitabine)和伊立替康(irinotecan)等。
在本发明的一个优选实施方式中，本发明的化合物具有如下(6S，10R)-构型：
Figure A20048001505700291
其中Ra和Rb与前述具有相同的含义。
在本发明的另一方面，公开了含有本发明的回折拟态结构的库。一旦组装完成，可以对本发明的库进行筛选以识别具有生物活性的单个成员。这种对于库生物活性成员的筛选可以涉及，例如，评价库成员的结合活性或者评价库成员在功能分析中的效果。筛选通常是通过将库成员(或者库成员的亚型)与所关注的靶，例如抗体、酶、受体或细胞系，相接触而完成的。能够与所关注的靶相互作用的库成员，在本文称为“生物活性库成员”或者“生物活性拟态”。例如，生物活性拟态可以是能够结合到抗体或者受体上的库成员，或者是能够抑制酶的库成员，或者是能够引起或者对抗例如与细胞系有关的功能反应的库成员。换句话说，本发明的库的筛选确定了哪些库成员能够与一种或多种所关注的生物靶相互作用。此外，当相互作用确实发生时，则可以由库成员识别生物活性拟态(或多种拟态)。由库识别单个(或有限数量)的生物活性拟态产生了本身具有生物活性的回折拟态结构，因此可用作诊断剂、预防剂或者治疗剂，还可以进一步用于极大地发展这些领域中先导化合物的识别。
合成本发明的库的肽拟态，可以使用已知的肽合成技术进行，使本发明的第一、第二和第三组分片段结合。更具体地说，可以向结构受限的回折拟态的N-末端和/或C-末端添加任意的氨基酸序列。因此，拟态可以通过已知技术在固体载体上(例如PAM树脂)合成(参见，例如，John M.Stewart和Janis D.Young，Solid Phase Peptide Synthesis，1984，Pierce Chemical Comp.，Rockford，III.)，或者通过醇连接(alcoholattachment)在甲硅烷基键连的树脂上合成(参见Randolph等，J.AmChem.Soc.117：5712-14，1995)。
此外，可以组合使用溶液合成技术和固相合成技术以合成本发明的肽拟态。例如，可以利用固体载体合成链状肽序列，直到结构受限的回折加入该序列中。然后可以将通过溶液合成技术预先合成的合适的结构受限的回折拟态结构，作为下一个“氨基酸”加入到固相合成中(即，可以使用既具有N-末端又具有C-末端的结构受限的回折拟态作为将要加入到链状肽中的下一个氨基酸)。通过将结构受限的回折拟态结构结合到序列中，然后可以加入另外的氨基酸以使结合到固体载体上的肽完成。或者，可以在固体载体上合成链状的N-末端和C-末端受保护的肽序列，将其从载体上移开，然后在溶液中使用公知的溶液偶联技术偶联到结构受限的回折拟态结构上。
在本发明的另一方面，公开了构造库的方法。传统的组合化学技术(参见，例如，Gallop等，J.Med.Chem.37：1233-1251，1994)允许通过试剂在基本分子框架的顺序组合而迅速制备大量化合物。组合技术已经用于构造由天然氨基酸衍生的肽库。例如，通过取20种适当保护的不同氨基酸的20种混合物，并且每一种均与20种氨基酸之一进行偶联，从而建立了400种(即，202)二肽的库。重复该程序7次，结果制成了由大约260亿(即，208)种八肽组成的肽库。
具体地说，合成本发明的库的肽拟态，可以使用公知肽合成技术来进行，例如如下的[4，4，0]回折拟态库的一般方案：
合成本发明的库的肽拟态，可以使用具有96孔板的FlexChem反应堆舱通过公知技术进行。在以上方案中，“Pol”表示溴乙缩醛树脂(Advanced ChemTech)，详细程序如下所述。
步骤1
将溴乙缩醛树脂(37mg，0.98mmol/g)和R2-胺的DMSO溶液(1.4mL)放置在带有96孔板的Robbins舱(FlexChem)中。在60℃下使用转炉[Robbins Scientific]将反应混合物振荡12小时。用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤2
将市售的Fmoc氨基酸(4当量)、PyBob(4当量)、HOAt(4当量)和DIEA(12当量)的DMF溶液加入到树脂中。将反应混合物在室温下振荡12小时后，用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤3
向在反应前被DMF溶涨的树脂中加入在DMF中的25％的哌啶，并且在室温下将该反应混合物振荡30分钟。再次重复该去保护步骤，并且用DMF、甲醇，然后用DCM清洗该树脂。向该树脂中加入肼酸(4当量)、HOBt(4当量)和DIC(4当量)的DMF溶液，并且在室温下将该反应混合物振荡12小时。用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤4a(当肼酸是MOC氨基甲酸盐时)
在室温下用甲酸(每个孔1.2mL)将步骤3中获得的树脂处理18小时。过滤除去树脂后，在减压下使用SpeedVac[SAVANT]浓缩滤液以给出油状产品。用50％的水/乙腈稀释该产品，然后在冷冻后进行冷冻干燥。
步骤4b(当使用Fmoc肼酸通过异氰酸酯制备脲时)
向在反应前被DMF溶涨的树脂中加入在DMF中的25％的哌啶，并且在室温下将该反应混合物振荡30分钟。再次重复该去保护步骤，并且用DMF、甲醇，然后用DCM清洗该树脂。向在反应前被DCM溶涨的树脂中加入在DCM中的异氰酸酯(5当量)。在室温下将该反应混合物振荡12小时后，用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。在室温下用甲酸(每个孔1.2mL)将该树脂处理18小时。过滤除去树脂后，在减压下使用SpeedVac[SAVANT]浓缩滤液以给出油状产品。用50％的水/乙腈稀释该产品，然后在冷冻后进行冷冻干燥。
步骤4c(当使用Fmoc-肼酸通过活性氨基甲酸酯制备脲时)
向在反应前被DMF溶涨的树脂中加入在DMF中的25％的哌啶，并且在室温下将将该反应混合物振荡30分钟。再次重复该去保护步骤，并且用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。向在反应前被DCM溶涨的树脂中加入在DCM中的对硝基苯基氯甲酸酯(5当量)和二异丙基乙胺(5当量)。在室温下将该反应混合物振荡12小时后，用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。在室温下向该树脂中加入在DCM中的伯胺并保持12小时，并且用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。反应后，在室温下用甲酸(每个孔1.2mL)将该树脂处理18小时。过滤除去树脂后，在减压下使用SpeedVac[SAVANT]浓缩滤液以给出油状产品。用50％的水/乙腈稀释该产品，并且在冷冻后进行冷冻干燥。
为生成这些嵌段库，根据制备实施例中说明的程序，合成了关键中间体肼酸。
表2A和2B显示了可以通过本发明制备的[4，4，0]回折拟态库，其代表性的制备过程在实施例4中给出。
表2A
[4，4，0]回折拟态库
Figure A20048001505700331
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  1   2，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   533   534
  2   2，4-二氯-苄基   4-硝基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   562   563
  3   2，4-二氯-苄基   2，4-二氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   553   554
  4   2，4-二氯-苄基   4-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   552   553
  5   2，4-二氯-苄基   2，2-双苯基乙基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   594   595
  6   2，4-二氯-苄基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   590   591
  7   2，4-二氯-苄基   4-甲基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   531   532
  8   2，4-二氯-苄基   环己基甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   523   524
  9   2，4-二氯-苄基   4-氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   535   536
  10   2，4-二氯-苄基   2-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   552   553
  11   2，4-二氯-苄基   2，4-二氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   586   587
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  12   2，4-二氯-苄基   萘-2-基甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   567   568
  13   2，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   583   584
  14   2，4-二氯-苄基   4-硝基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   612   613
  15   2，4-二氯-苄基   2，4-二氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   603   604
  16   2，4-二氯-苄基   4-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   602   603
  17   2，4-二氯-苄基   2，2-双苯基乙基   苄基   OCH<sub>3</sub>   644   645
  18   2，4-二氯-苄基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   640   641
  19   2，4-二氯-苄基   4-甲基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   582   583
  20   2，4-二氯-苄基   环己基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   574   575
  21   2，4-二氯-苄基   4-氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   585   586
  22   2，4-二氯-苄基   2-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   602   603
  23   2，4-二氯-苄基   2，4-二氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   636   637
  24   2，4-二氯-苄基   萘-2-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   618   619
  25   2，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   479   480
  26   2，4-二氯-苄基   4-硝基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   508   509
  27   2，4-二氯-苄基   2，4-二氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   499   500
  28   2，4-二氯-苄基   4-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   497   498
  29   苯乙基   2，2-双苯基乙基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   539   540
  30   苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   535   536
  31   苯乙基   4-甲基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   477   478
  32   苯乙基   环己基甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   469   470
  33   苯乙基   4-氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   481   482
  34   苯乙基   2-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   497   498
  35   苯乙基   2，4-二氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   531   532
  36   苯乙基   萘-2-基甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   513   514
  37   苯乙基   4-羟基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   529   530
  38   苯乙基   4-硝基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   558   559
  39   苯乙基   2，4-二氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   549   550
  40   苯乙基   4-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   547   548
  41   苯乙基   2，2-双苯基乙基   苄基   OCH<sub>3</sub>   589   590
  42   苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   585   586
  43   苯乙基   4-甲基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   527   528
  44   苯乙基   环己基-甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   519   520
  45   苯乙基   4-氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   531   532
  46   苯乙基   2-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   547   548
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  47   苯乙基   2，4-二氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   582   583
  48   苯乙基   萘-2-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   563   564
  49   苯乙基   4-羟基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   497   498
  50   苯乙基   4-硝基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   526   527
  51   苯乙基   2，4-二氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   517   518
  52   苯乙基   4-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   515   516
  53   4-氟-苯乙基   2，2-双苯基乙基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   557   558
  54   4-氟-苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   553   554
  55   4-氟-苯乙基   4-甲基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   495   496
  56   4-氟-苯乙基   环己基-甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   487   488
  57   4-氟-苯乙基   4-氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   499   500
  58   4-氟-苯乙基   2-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   515   516
  59   4-氟-苯乙基   2，4-二氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   549   550
  60   4-氟-苯乙基   萘-2-基甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   531   532
  61   4-氟-苯乙基   4-羟基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   547   548
  62   4-氟-苯乙基   4-硝基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   576   577
  63   4-氟-苯乙基   2，4-二氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   567   568
  64   4-氟-苯乙基   4-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   565   566
  65   4-氟-苯乙基   2，2-双苯基乙基   苄基   OCH<sub>3</sub>   607   608
  66   4-氟-苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   603   604
  67   4-氟-苯乙基   4-甲基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   545   546
  68   4-氟-苯乙基   环己基-甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   537   538
  69   4-氟-苯乙基   4-氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   549   550
  70   4-氟-苯乙基   2-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   565   566
  71   4-氟-苯乙基   2，4-二氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   599   600
  72   4-氟-苯乙基   萘-2-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   581   582
  73   4-氟-苯乙基   4-羟基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   509   510
  74   4-氟-苯乙基   4-硝基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   538   539
  75   4-氟-苯乙基   2，4-二氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   529   530
  76   4-氟-苯乙基   4-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   527   528
  77   4-甲氧基-苯乙基   2，2-双苯基乙基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   569   570
  78   4-甲氧基-苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   565   566
  79   4-甲氧基-苯乙基   4-甲基-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   507   508
  80   4-甲氧基-苯乙基   环己基-甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   499   500
  81   4-甲氧基-苯乙基   4-氟-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   511   512
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  82   4-甲氧基-苯乙基   2-氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   527   528
  83   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氯-苄基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   561   562
  84   4-甲氧基-苯乙基   萘-2-基甲基   烯丙基   OCH<sub>3</sub>   543   544
  85   4-甲氧基-苯乙基   4-羟基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   559   560
  86   4-甲氧基-苯乙基   4-硝基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   588   589
  87   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   579   580
  88   4-甲氧基-苯乙基   4-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   577   578
  89   4-甲氧基-苯乙基   2，2-双苯基乙基   苄基   OCH<sub>3</sub>   619   620
  90   4-甲氧基-苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   615   616
  91   4-甲氧基-苯乙基   4-甲基-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   557   558
  92   4-甲氧基-苯乙基   环己基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   549   550
  93   4-甲氧基-苯乙基   4-氟-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   561   562
  94   4-甲氧基-苯乙基   2-氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   577   578
  95   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氯-苄基   苄基   OCH<sub>3</sub>   612   613
  96   4-甲氧基-苯乙基   萘-2-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   593   594
  97   异戊基   4-羟基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   521   522
  98   异戊基   4-硝基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   550   551
  99   异戊基   2，4-二氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   541   542
  100   异戊基   4-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   539   540
  101   异戊基   2，2-双苯基乙基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   581   582
  102   异戊基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   497   498
  103   异戊基   4-甲基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   519   520
  104   异戊基   环己基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   511   512
  105   异戊基   4-氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   523   524
  106   异戊基   2-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   539   540
  107   异戊基   2，4-二氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   574   575
  108   异戊基   萘-2-基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   555   556
  109   异戊基   4-羟基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   563   564
  110   异戊基   4-硝基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   592   593
  111   异戊基   2，4-二氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   583   584
  112   异戊基   4-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   582   583
  113   异戊基   2，2-双苯基乙基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   624   625
  114   异戊基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   540   541
  115   异戊基   4-甲基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   562   563
  116   异戊基   环己基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   554   555
  编   号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  117   异戊基   4-氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   565   566
  118   异戊基   2-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   582   583
  119   异戊基   2，4-二氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   616   617
  120   异戊基   萘-2-基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   598   599
  121   3-甲氧基-丙基   4-羟基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   523   524
  122   3-甲氧基-丙基   4-硝基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   552   553
  123   3-甲氧基-丙基   2，4-二氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   543   544
  124   3-甲氧基-丙基   4-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   541   542
  125   3-甲氧基-丙基   2，2-双苯基乙基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   583   584
  126   3-甲氧基-丙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   499   500
  127   3-甲氧基-丙基   4-甲基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   521   522
  128   3-甲氧基-丙基   环己基-甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   513   514
  129   3-甲氧基-丙基   4-氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   525   526
  130   3-甲氧基-丙基   2-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   541   542
  131   3-甲氧基-丙基   2，4-二氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   575   576
  132   3-甲氧基-丙基   萘-2-基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   557   558
  133   3-甲氧基-丙基   4-羟基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   565   566
  134   3-甲氧基-丙基   4-硝基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   594   595
  135   3-甲氧基-丙基   2，4-二氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   585   586
  136   3-甲氧基-丙基   4-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   584   585
  137   3-甲氧基-丙基   2，2-双苯基乙基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   626   627
  138   3-甲氧基-丙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   541   542
  139   3-甲氧基-丙基   4-甲基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   563   564
  140   3-甲氧基-丙基   环己基-甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   556   557
  141   3-甲氧基-丙基   4-氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   567   568
  142   3-甲氧基-丙基   2-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   584   585
  143   3-甲氧基-丙基   2，4-二氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   618   619
  144   3-甲氧基-丙基   萘-2-基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   600   601
  145   4-甲氧基-苯乙基   4-羟基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   585   586
  146   4-甲氧基-苯乙基   4-硝基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   614   615
  147   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   605   606
  148   4-甲氧基-苯乙基   4-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   603   604
  149   4-甲氧基-苯乙基   2，2-双苯基乙基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   645   646
  150   4-甲氧基-苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   561   562
  151   4-甲氧基-苯乙基   4-甲基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   583   584
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  152   4-甲氧基-苯乙基   环己基-甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   575   576
  153   4-甲氧基-苯乙基   4-氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   587   588
  154   4-甲氧基-苯乙基   2-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   603   604
  155   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   638   639
  156   4-甲氧基-苯乙基   萘-2-基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   619   620
  157   4-甲氧基-苯乙基   4-羟基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   628   629
  158   4-甲氧基-苯乙基   4-硝基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   657   658
  159   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   648   649
  160   4-甲氧基-苯乙基   4-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   646   647
  161   4-甲氧基-苯乙基   2，2-双苯基乙基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   688   689
  162   4-甲氧基-苯乙基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   604   605
  163   4-甲氧基-苯乙基   4-甲基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   626   627
  164   4-甲氧基-苯乙基   环己基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   618   619
  165   4-甲氧基-苯乙基   4-氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   630   631
  166   4-甲氧基-苯乙基   2-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   646   647
  167   4-甲氧基-苯乙基   2，4-二氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   680   681
  168   4-甲氧基-苯乙基   萘-2-基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   662   663
  169   四氢呋喃-2-基  甲基   4-羟基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   535   536
  170   四氢呋喃-2-基  甲基   4-硝基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   564   565
  171   四氢呋喃-2-基  甲基   2，4-二氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   555   556
  172   四氢呋喃-2-基  甲基   4-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   553   554
  173   四氢呋喃-2-基  甲基   2，2-双苯基乙基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   595   596
  174   四氢呋喃-2-基  甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   511   512
  175   四氢呋喃-2-基  甲基   4-甲基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   533   534
  176   四氢呋喃-2-基  甲基   环己基-甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   525   526
  177   四氢呋喃-2-基  甲基   4-氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   537   538
  178   四氢呋喃-2-基  甲基   2-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   553   554
  编  号   R<sub>2</sub>  R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  179   四氢呋喃-2-基  甲基  2，4-二氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   588   589
  180   四氢呋喃-2-基  甲基  萘-2-基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   569   570
  181   四氢呋喃-2-基  甲基  4-羟基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   577   578
  182   四氢呋喃-2-基  甲基  4-硝基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   606   607
  183   四氢呋喃-2-基  甲基  2，4-二氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   597   598
  184   四氢呋喃-2-基  甲基  4-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   596   597
  185   四氢呋喃-2-基  甲基  2，2-双苯基乙基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   638   639
  186   四氢呋喃-2-基  甲基  3-叔丁基-4-羟 基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   553   554
  187   四氢呋喃-2-基  甲基  4-甲基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   575   576
  188   四氢呋喃-2-基  甲基  环己基-甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   568   569
  189   四氢呋喃-2-基  甲基  4-氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   579   580
  190   四氢呋喃-2-基  甲基  2-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   596   597
  191   四氢呋喃-2-基  甲基  2，4-二氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   630   631
  192   四氢呋喃-2-基  甲基  萘-2-基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   612   613
  193   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   528   529
  194   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   548   549
  195   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   苯基氨基   514   515
  196   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   542   543
  197   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   528   529
  198   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   544   545
  199   苯乙基  4-羟基-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   592   593
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  200   苯乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   582   583
  201   苯乙基   4-羟基-苄基   甲基   戊氨基   508   509
  202   苯乙基   4-羟基-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   542   543
  203   苯乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   558   559
  204   苯乙基   4-羟基-苄基   甲基   环己基氨基   520   521
  205   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   604   605
  206   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   624   625
  207   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   苯基氨基   590   591
  208   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   618   619
  209   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   604   605
  210   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   620   621
  211   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   669   670
  212   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   658   659
  213   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   戊氨基   584   585
  214   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   618   619
  215   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   634   635
  216   2，2-双苯基乙基   4-羟基-苄基   甲基   环己基氨基   596   597
  217   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   581   582
  218   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   601   602
  219   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   苯基氨基   566   567
  220   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   595   596
  221   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   苄基氨基   581   582
  222   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   597   598
  223   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   645   646
  224   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   634   635
  225   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   戊氨基   561   562
  226   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   595   596
  227   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   611   612
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  228   苯乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   环己基氨基   573   574
  229   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   657   658
  230   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   677   678
  231   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   苯基氨基   643   644
  232   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   671   672
  233   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   苄基氨基   657   658
  234   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   673   674
  235   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   721   722
  236   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   711   712
  237   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   戊氨基   637   638
  238   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   671   672
  239   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   687   688
  240   2，2-双苯基乙基   3，4-二氯-苄基   甲基   环己基氨基   649   650
  241   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   478   479
  242   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   498   499
  243   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   苯基氨基   464   465
  244   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   492   493
  245   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   478   479
  246   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   494   495
  247   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   542   543
  248   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   532   533
  249   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   戊氨基   458   459
  250   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   492   493
  251   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   508   509
  252   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   环己基氨基   470   471
  253   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   554   555
  254   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   574   575
  255   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   苯基氨基   540   541
  256   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   568   569
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  257   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   554   555
  258   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   570   571
  259   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   619   620
  260   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   608   609
  261   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   戊氨基   534   535
  262   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   568   569
  263   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   584   585
  264   异戊基   4-羟基-苄基   甲基   环己基氨基   546   547
  265   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   526   527
  266   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   546   547
  267   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   苯基氨基   512   513
  268   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   540   541
  269   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   苄基氨基   526   527
  270   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   542   543
  271   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   591   592
  272   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   580   581
  273   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   戊氨基   506   507
  274   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   540   541
  275   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   556   557
  276   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   环己基氨基   518   519
  277   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲基-苯基)氨基   602   603
  278   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-氯-苯基)氨基   622   623
  279   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   苯基氨基   588   589
  280   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   ((R)-α-甲基苄  基)氨基   616   617
  281   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   苄基氨基   602   603
  282   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苯基)  氨基   618   619
  283   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-溴-苯基)氨基   667   668
  284   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-三氟甲基-苯  基)氨基   656   657
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  285   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   戊氨基   582   583
  286   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   616   617
  287   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   632   633
  288   4-甲基-苄基   3，4-二氯-苄基   甲基   环己基氨基   594   595
  289   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   751   752
  290   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (萘-2-基甲基)氨基   614   615
  291   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   578   579
  292   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   608   609
  293   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   632   633
  294   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   594   595
  295   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (4-氟-苯乙基)氨基   596   597
  296   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   633   634
  297   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (2-羟基-乙基)氨基   518   519
  298   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   546   547
  299   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   558   559
  300   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   (环己基甲基)氨基   570   571
  301   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   779   780
  302   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (萘-2-基甲基)氨基   642   643
  303   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (2-苯乙基)氨基   606   607
  304   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   636   637
  305   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   660   661
  306   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   622   623
  307   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (4-氟-苯乙基)氨基   624   625
  308   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   661   662
  309   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (2-羟基-乙基)氨基   546   547
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  310   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   574   575
  311   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   586   587
  312   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   丙基   (环己基甲基)氨基   598   599
  313   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   771   772
  314   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (萘-2-基甲基)氨基   634   635
  315   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   598   599
  316   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   628   629
  317   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   652   653
  318   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   614   615
  319   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (4-氟-苯乙基)氨基   616   617
  320   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   653   654
  321   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (2-羟基-乙基)氨基   538   539
  322   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   566   567
  323   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   578   579
  324   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   甲基   (环己基甲基)氨基   590   591
  325   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   799   800
  326   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (萘-2-基甲基)氨基   662   663
  327   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (2-苯乙基)氨基   626   627
  328   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   656   657
  329   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   680   681
  330   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   642   643
  331   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (4-氟-苯乙基)氨基   644   645
  332   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   681   682
  333   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (2-羟基-乙基)氨基   566   567
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  334   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   594   595
  335   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   606   607
  336   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   丙基   (环己基甲基)氨基   618   619
  337   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   811   812
  338   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (萘-2-基甲基)氨基   674   675
  339   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (2-苯乙基)氨基   638   639
  340   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   668   669
  341   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   692   693
  342   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   654   655
  343   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (4-氟-苯乙基)氨基   656   657
  344   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   693   694
  345   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (2-羟基-乙基)氨基   578   579
  346   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   606   607
  347   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   618   619
  348   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   甲基   (环己基甲基)氨基   630   631
  349   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   839   840
  350   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (萘-2-基甲基)氨基   702   703
  351   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (2-苯乙基)氨基   666   667
  352   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   696   697
  353   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   720   721
  354   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   682   683
  355   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (4-氟-苯乙基)氨基   684   685
  356   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   721   722
  357   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (2-羟基-乙基)氨基   606   607
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  358   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   634   635
  359   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   646   647
  360   萘-1-基甲基   4-联苯基甲基   丙基   (环己基甲基)氨基   658   659
  361   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   807   808
  362   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (萘-2-基甲基)氨  基   670   671
  363   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (2-苯乙基)氨基   634   635
  364   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   664   665
  365   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   688   689
  366   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   650   651
  367   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (4-氟-苯乙基)氨  基   652   653
  368   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   689   690
  369   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (2-羟基-乙基)氨  基   574   575
  370   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   602   603
  371   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   614   615
  372   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   (环己基甲基)氨  基   626   627
  373   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (N-Cbz-3-吲哚  乙基)氨基   835   836
  374   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (萘-2-基甲基)氨  基   698   699
  375   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (2-苯乙基)氨基   662   663
  376   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   [2-(4-甲氧基-苯  基)乙基]氨基   692   693
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  377   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (3-三氟甲基-苄  基)氨基   716   717
  378   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (4-甲氧基-苄基)  氨基   678   679
  379   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (4-氟-苯乙基)氨  基   680   681
  380   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (3，4-二氯-苄基)  氨基   717   718
  381   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (2-羟基-乙基)氨  基   602   603
  382   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (3-甲氧基-丙基)  氨基   630   631
  383   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (四氢呋喃-2-基  甲基)氨基   642   643
  384   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   丙基   (环己基甲基)氨  基   654   655
  385   4-甲氧基苄基   OCH<sub>3</sub>   5-氟-苄基   OCH<sub>3</sub>   470   471
  386   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   591   592
  387   萘-1-基甲基   4-硝基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   620   621
  388   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   611   612
  389   萘-1-基甲基   4-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   609   610
  390   萘-1-基甲基   4-苯基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   651   652
  391   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   647   648
  392   萘-1-基甲基   4-甲基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   589   590
  393   萘-1-基甲基   环己基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   581   582
  394   萘-1-基甲基   4-氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   593   594
  395   萘-1-基甲基   2-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   609   610
  396   萘-1-基甲基   3，4-二氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   644   645
  397   萘-1-基甲基   萘-1-基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   625   626
  398   3，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   610   611
  399   3，4-二氯-苄基   4-硝基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   639   640
  400   3，4-二氯-苄基   3，4-二氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   629   630
  401   3，4-二氯-苄基   4-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   628   629
  402   3，4-二氯-苄基   4-苯基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   670   671
  403   3，4-二氯-苄基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   666   667
  404   3，4-二氯-苄基   4-甲基-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   608   609
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  405   3，4-二氯-苄基   环己基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   600   601
  406   3，4-二氯-苄基   4-氟-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   611   612
  407   3，4-二氯-苄基   2-氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   628   629
  408   3，4-二氯-苄基   3，4-二氯-苄基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   662   663
  409   3，4-二氯-苄基   萘-1-基甲基   苯乙烯基甲基   OCH<sub>3</sub>   644   645
  410   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   634   635
  411   萘-1-基甲基   4-硝基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   663   664
  412   萘-1-基甲基   3，4-二氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   654   655
  413   萘-1-基甲基   4-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   652   653
  414   萘-1-基甲基   4-苯基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   694   695
  415   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   690   691
  416   萘-1-基甲基   4-甲基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   632   633
  417   萘-1-基甲基   环己基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   624   625
  418   萘-1-基甲基   4-氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   636   637
  419   萘-1-基甲基   2-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   652   653
  420   萘-1-基甲基   3，4-二氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   686   687
  421   萘-1-基甲基   萘-1-基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   668   669
  422   3，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   652   653
  423   3，4-二氯-苄基   4-硝基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   681   682
  424   3，4-二氯-苄基   3，4-二氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   672   673
  425   3，4-二氯-苄基   4-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   671   672
  426   3，4-二氯-苄基   4-苯基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   712   713
  427   3，4-二氯-苄基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   708   709
  428   3，4-二氯-苄基   4-甲基-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   650   651
  429   3，4-二氯-苄基   环己基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   642   643
  430   3，4-二氯-苄基   4-氟-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   654   655
  431   3，4-二氯-苄基   2-氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   671   672
  432   3，4-二氯-苄基   3，4-二氯-苄基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   705   706
  433   3，4-二氯-苄基   萘-1-基甲基   2，6-二氯-苄基   OCH<sub>3</sub>   686   687
  434   2-哌啶-1-基-乙基   (S)-4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   535   536
  435   3，4-二氯-苄基   (S)-4-羟基-苄基   甲基   2-哌啶-1-基-乙  基氨基   604   605
  436   3，4-二氯-苄基   (S)-4-羟基-苄基   甲基   2-(1-甲基-吡咯烷  -2-基)-乙基氨基   604   605
  437   3-吡啶甲基   (S)-4-羟基-苄基   甲基   3，4-二氯-苄基  氨基   583   584
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>  R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+  H
  438   2-吗啉-4-基-乙  基   (S)-4-羟基-苄基   甲基  3，4-二氯-苄基 氨基   606   607
  439   3，4-二氯-苄基   (S)-4-羟基-苄基   甲基  3-吡啶甲基氨基   583   584
  440   3，4-二氯-苄基   (S)-4-羟基-苄基   甲基  2-吗啉-4-基-乙 基氨基   606   607
  441   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  3-咪唑-1-基-丙 基氨基   582   583
  442   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  4-氨基苯乙基氨基   593   594
  443   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  3-吡啶甲基氨基   565   566
  444   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  2-(3-吡啶乙基) 氨基   579   580
  445   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  4-吡啶甲基氨基   565   566
  446   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  苄氧基羰基氨基   622   623
  447   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  4-氟-苄基氨基   582   583
  448   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  4-羧基-苄基氨基   608   609
  449   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  4-三氟甲基-苄 基氨基   632   633
  450   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  (S)-α-甲基苄基 氨基   578   579
  451   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  (R)-α-甲基苄基 氨基   578   579
  452   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  2-氟-苄基氨基   582   583
  453   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  2，3-二甲氧基苄 基氨基   624   625
  454   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  氰甲基氨基   513   514
  455   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  苯肼基   565   566
  456   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  4-氨基苄基氨基   579   580
  457   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  (S，S){2-[(2-羟基-1- 甲基-2-苯基-乙 基)-甲基-氨基甲酰 基]-乙基}-氨基   693   694
  458   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  [4-(1，3-二氧-1，3-二 氢-异氮杂茚-2-基 甲基)-环己基]-甲 氨基   715   716
  459   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  茚满-1-基氨基   590   591
  460   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  苯基甘氨酸   622   623
  461   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基  2，6-二氟-苄基 氨基   600   601
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  462   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   3-氟-苄基氨基   582   583
  463   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   苯并咪唑-2-基-  氨基   604   605
  464   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   二苯甲基氨基   640   641
  465   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   呋喃-2-基-甲基  氨基   554   555
  466   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   4-二甲氨基-苄  基氨基   607   608
  467   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   噻吩-2-基-甲基  氨基   584   585
  468   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   4-硝基-苄基氨  基   609   610
  469   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   BnO   565   566
  470   4-甲氧基-萘-1-  基甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   594   595
  471   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   苯乙基   563   564
  472   萘-1-基甲基   4-甲氧基-苄基   甲基   苄基氨基   578   579
  473   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   618   619
  474   萘-1-基甲基   4-硝基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   647   648
  475   萘-1-基甲基   4-硝基-苄基   甲基   苄基氨基   593   594
  476   苄基   萘-1-基甲基   4-氰基-苄基   OCH<sub>3</sub>   574   575
  477   噻吩-2-基-甲基   萘-1-基甲基   4-氰基-苄基   OCH<sub>3</sub>   594   595
  478   4-二甲氨基-苄  基   萘-1-基甲基   4-氰基-苄基   OCH<sub>3</sub>   617   618
  479   苯乙基   萘-1-基甲基   4-氰基-苄基   OCH<sub>3</sub>   588   589
  480   8-喹啉-1-基-甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   565   566
  481   4-吡啶甲基   萘-1-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   550   551
  482   3，4-二甲氧基苄基   萘-1-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   609   610
  483   3，4-二甲氧基-  苯乙基   萘-1-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   623   624
  484   噻吩-2-基-甲基   萘-1-基甲基   苄基   OCH<sub>3</sub>   569   570
  485   萘-1-基甲基   3-吡啶甲基   甲基   苄基氨基   549   550
  486   萘-1-基甲基   五氟化苄基   甲基   苄基氨基   638   639
  487   萘-1-基甲基   3-氟-4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  488   4-氟-苯乙基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   598   599
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  489   4-甲氧基-苯乙  基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   610   611
  490   3，4-二甲氧基-  苯乙基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   640   641
  491   萘-1-基甲基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   616   617
  492   3，4-二甲氧基苄基   萘-1-基甲基   4-氰基-苄基   OCH<sub>3</sub>   634   635
  493   3，4-二甲氧基-  苯乙基   萘-1-基甲基   4-氰基-苄基   OCH<sub>3</sub>   648   649
  494   4-喹啉-1-基-甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   565   566
  495   2-吡啶甲基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   567   568
  496   3-吡啶甲基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   567   568
  497   3，4-二甲氧基苄  基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   626   627
  498   4-甲基-苄基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   580   581
  499   噻吩-2-基-甲基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   572   573
  500   4-三氟甲基-苄  基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   634   635
  501   2，6-二氟-苄基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   602   603
  502   4-氟-苄基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   584   585
  503   噻吩-2-基-乙基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   586   587
  504   3，4-二氯-苄基   4-甲基-苄基   甲基   4-三氟甲基-苯  基氨基   634   635
  505   4-羧基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   558   559
  506   萘-1-基甲基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   苄基氨基   620   621
  507   萘-1-基甲基   3，4-二羟基-苄基   甲基   苄基氨基   580   581
  508   2-氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   532   533
  509   3-氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   532   533
  510   4-氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   532   533
  511   2，4-二氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   550   551
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  512   2，6-二氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   550   551
  513   2，5-二氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   550   551
  514   3-三氟甲基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  515   4-三氟甲基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  516   3，4，5-三氟-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   568   569
  517   2-氯-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   548   549
  518   3-氯-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   548   549
  519   2，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  520   (S)-甲苯基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   528   529
  521   (R)-甲苯基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   528   529
  522   4-甲基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   528   529
  523   4-甲氧基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   544   545
  524   3，4-二甲氧基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   574   575
  525   呋喃-2-基-甲基  氨基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   504   505
  526   (R)-甲基萘-1-基  甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   578   579
  527   (S)-甲基萘-1-基  甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   578   579
  528   萘-1-基甲基   3-氧代-吡啶-1-  基甲基   甲基   苄基氨基   565   566
  529   (R)-α-甲基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   578   579
  530   萘-2-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   564   565
  531   4-氟-萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  532   2-甲氧基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   544   545
  533   4-氯-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   548   549
  534   3，4-二氯-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  535   2-三氟甲氧基-  苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   598   599
  536   2-三氟甲硫基-  苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   614   615
  537   2-三氟甲基-苄  基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  538   5-喹啉-1-基-甲  基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   565   566
  539   8-喹啉-1-基-甲  基   3-叔丁基-4-羟  基-苄基   甲基   苄基氨基   621   622
  540   8-喹啉-1-基-甲基   4-硝基-苄基   甲基   苄基氨基   594   595
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  541   8-喹啉-1-基-甲  基   (1H-吡咯-2-基)-  甲基   甲基   苄基氨基   538   539
  542   萘-1-基甲基   4-苄氧基-羰基  氨基苄基   甲基   苄基氨基   697   698
  543   2，3-二氯-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   582   583
  544   五氟化苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   604   605
  545   苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   514   515
  546   喹喔啉-5-基-甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   566   567
  547   8-喹啉-1-基-甲基   3-吡啶甲基   甲基   苄基氨基   550   551
  548   8-喹啉-1-基-甲基   五氟化苄基   甲基   苄基氨基   639   640
  549   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基(硫脲)   580   581
  550   萘-1-基甲基   4-氨基-苄基   甲基   苄基氨基   563   564
  551   3，4，5-三甲氧基  苄基   4-氨基-苄基   甲基   苄基氨基   603   604
  552   萘-1-基甲基   4-吡啶甲基   甲基   苄基氨基   549   550
  553   萘-1-基甲基   (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   550   551
  554   2-羟基-3-甲氧  基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   560   561
  555   萘-1-基甲基   3-硝基-4-羟基-  苄基   甲基   苄基氨基   609   610
  556   萘-1-基甲基   4-CO<sub>2</sub>H-CH<sub>2</sub>O-  苄基   甲基   苄基氨基   622   623
  557   萘-1-基甲基   1-萘酚氨基-甲基   甲基   苄基氨基   641   642
  558   萘-1-基甲基   4-氧代-吡啶甲基   甲基   苄基氨基   565   566
  559   4-氟-α-甲基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   546   547
  560   萘-1-基甲基   苯甲酰氨基乙基   甲基   苄基氨基   605   606
  561   8-喹啉-1-基-甲基   3，4-二羟基-苄基   甲基   苄基氨基   581   582
  562   4-N，N-二甲氨基  -苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   557   558
  563   萘-1-基甲基   (R)4-氟-苄基   甲基   苄基氨基   609   610
  564   萘-1-基甲基   4-羟基-苄基   甲基   2-氯乙基氨基   536   537
  565   萘-1-基甲基   4-羟基-苯乙基   甲基   苄基氨基   578   579
  566   4-氟-苄基   3-氟，4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   550   551
  567   2，4-二氟-苄基   3-氟，4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   568   569
  568   3-三氟甲基-苄基   (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   568   569
  569   (S)-甲萘-1-基甲基   (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   514   515
  570   (R)-甲萘-1-基甲基   (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   514   515
  571   2，3，6-三氟-苄基   (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   554   555
  编  号   R<sub>2</sub>  R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  572   3-氟-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   518   519
  573   4-氯-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   534   535
  574   3-氯-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   534   535
  575   2-氯-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   534   535
  576   3，4-二氯-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   568   569
  577   3-三氟甲氧基-  苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   584   585
  578   4-氟-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   518   519
  579   2，4-二氟-苄基  (R)4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   536   537
  580   3-(2-氯-乙基)-  脲基]-苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   634   635
  581   3-氨基苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   529   530
  582   3-N-甲氨基苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   543   544
  583   3-N，N-二甲氨基  苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   557   558
  584   1H-苯并咪唑-4-  基甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   554   555
  585   2-羟基-苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   530   531
  586   2-吡啶甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   515   516
  587   4-吡啶甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   515   516
  588   8-喹啉-2-基甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   565   566
  589   8-苯并呋喃-4-  基甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   554   555
  590   萘-1-基甲基  4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   550   551
  591   4-氟-苄基  4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   518   519
  592   2，4-二氟-苄基  4-羟基-苯基   甲基   苄基氨基   536   537
  593   (R)-甲苯甲酰基  甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   542   543
  594   (S)-甲苯基酰基  甲基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   542   543
  595   1，2，3，4-四氢-萘  -2-基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   554   555
  596   萘-1-基甲基  3，4-二甲氧基苄基   甲基   苄基氨基   608   609
  597   2-二甲氨基-6-  氟-苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   575   576
  598   2-二甲氨基苄基  4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   557   558
  599   萘-1-基甲基  4-氰基-苄基   甲基   苄基氨基   573   574
  编  号   R<sub>2</sub>   R<sub>4</sub>   R<sub>7</sub>   R<sub>1</sub>-Y’   分子   量   M+   H
  600   4-氟-2-三氟甲  基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   599   600
  601   4-氯-2-二甲氨  基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   591   592
  602   3-N，N-乙基甲基  氨基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   571   572
  603   3-二乙基氨基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   585   586
  604   4-氯-3-二甲氨  基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   591   592
  605   4-氟-2-二甲氨  基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   575   576
  606   3，5-二甲基-2-二  甲氨基-苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   585   586
  607   3-甲基-2-二甲  氨基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   571   572
  608   6-甲基-2-二甲  氨基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   571   572
  609   3，4-二氟-2-二甲  氨基苄基   4-羟基-苄基   甲基   苄基氨基   593   594
表2B
[4，4，0]回折拟态库
Figure A20048001505700551
Figure G04815057319950320D000471
Figure G04815057319950320D000481
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Figure G04815057319950320D000531
Figure G04815057319950320D000541
Figure G04815057319950320D000551
Figure G04815057319950320D000561
Figure G04815057319950320D000571
Figure G04815057319950320D000581
Figure G04815057319950320D000591
Figure G04815057319950320D000601
Figure G04815057319950320D000611
Figure G04815057319950320D000621
Figure G04815057319950320D000651
Figure G04815057319950320D000661
Figure G04815057319950320D000681
Figure G04815057319950320D000691
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Figure G04815057319950320D000711
Figure G04815057319950320D000731
Figure G04815057319950320D000741
Figure G04815057319950320D000751
Figure G04815057319950320D000761
Figure G04815057319950320D000781
Figure G04815057319950320D000801
Figure G04815057319950320D000821
Figure G04815057319950320D000841
Figure G04815057319950320D000851
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Figure G04815057319950320D000871
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Figure G04815057319950320D000891
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Figure G04815057319950320D000921
Figure G04815057319950320D000941
Figure G04815057319950320D000951
Figure G04815057319950320D000961
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Figure G04815057319950320D000981
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Figure G04815057319950320D001051
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Figure G04815057319950320D001201
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Figure G04815057319950320D001221
Figure G04815057319950320D001231
Figure G04815057319950320D001241
Figure G04815057319950320D001251
Figure G04815057319950320D001261
Figure G04815057319950320D001271
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Figure G04815057319950320D001321
Figure G04815057319950320D001341
Figure G04815057319950320D001351
Figure G04815057319950320D001361
Figure G04815057319950320D001371
Figure G04815057319950320D001381
Figure G04815057319950320D001391
Figure G04815057319950320D001401
Figure G04815057319950320D001411
Figure G04815057319950320D001421
Figure G04815057319950320D001451
Figure G04815057319950320D001461
Figure G04815057319950320D001471
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Figure G04815057319950320D001491
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Figure G04815057319950320D001511
Figure G04815057319950320D001521
Figure G04815057319950320D001551
Figure G04815057319950320D001561
Figure G04815057319950320D001571
Figure G04815057319950320D001591
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Figure G04815057319950320D001681
Figure G04815057319950320D001691
Figure G04815057319950320D001741
Figure G04815057319950320D001751
Figure G04815057319950320D001761
Figure G04815057319950320D001771
Figure G04815057319950320D001781
Figure G04815057319950320D001791
Figure G04815057319950320D001801
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Figure G04815057319950320D001841
Figure G04815057319950320D001851
Figure G04815057319950320D001861
Figure G04815057319950320D001871
Figure G04815057319950320D001901
Figure G04815057319950320D001911
Figure G04815057319950320D001921
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Figure G04815057319950320D001961
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Figure G04815057319950320D001981
Figure G04815057319950320D001991
Figure G04815057319950320D002001
Figure G04815057319950320D002021
Figure G04815057319950320D002031
Figure G04815057319950320D002041
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Figure G04815057319950320D002061
Figure G04815057319950320D002071
Figure G04815057319950320D002081
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Figure G04815057319950320D002111
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Figure G04815057319950320D002151
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Figure G04815057319950320D002411
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Figure G04815057319950320D002462
Figure G04815057319950320D002472
Figure G04815057319950320D002492
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Figure G04815057319950320D002512
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Figure G04815057319950320D002571
Figure G04815057319950320D002591
Figure G04815057319950320D002611
Figure G04815057319950320D002631
Figure G04815057319950320D002641
Figure G04815057319950320D002651
Figure A20048001505702761
此外，合成本发明的库的肽拟态，可以使用如下的[4，3，0]回折拟态库的一般方案来进行：
Figure A20048001505702762
合成本发明的二环模板库的肽拟态，可以使用具有96孔板的FlexChem反应堆舱通过公知技术进行。在上述方案中，“Pol”表示溴乙缩醛树脂(Advanced ChemTech)，并且其具体程序如下所述。
步骤1
将溴乙缩醛树脂(1.6mmol/g)和R1胺的DMSO溶液(2M溶液)置于96孔Robbins舱(FlexChem)中。在60℃下使用转炉[RobbinsScientific]将反应混合物振荡12小时。用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤2
将市售的Fmoc-氨基酸(4当量)、PyBob(4当量)、HOAt(4当量)和DIEA(12当量)的DMF溶液加入到该树脂中。在室温下将反应混合物振荡12小时后，用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤3
向在反应前被DMF溶涨的树脂中加入在DMF中的25％的哌啶。之后在室温下将反应混合物振荡30分钟。再次重复该去保护步骤，然后用DMF、甲醇，然后用DCM进行清洗。将氨基甲酰氯(4当量)、HOBt(4当量)和DIC(4当量)的DMF溶液加入该树脂。在室温下将该反应混合物振荡12小时后，用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤4
向在反应前被DMF溶涨的树脂中加入在DMF中的25％的哌啶。之后在室温下将反应混合物振荡30分钟。再次重复该去保护步骤，然后用DMF、甲醇，然后用DCM进行清洗。向在反应前被DCM溶涨的树脂中加入在DCM中的R1-异氰酸酯(5当量)。在室温下将该反应混合物振荡12小时后，用DMF、MeOH，然后用DCM清洗该树脂。
步骤5
在室温下将树脂用甲酸(每个孔1.2mL)处理18小时。过滤除去树脂后，在减压下使用SpeedVac[SAVANT]浓缩该滤液，以给出油状产品。用50％的水/乙腈稀释这些产品，然后在冷冻后进行冷冻干燥。
表3显示了可以根据本发明制备的[4，3，0]回折拟态库，其代表性的制备过程在实施例5中给出。
                     表3
            [4，3，0]回折拟态库
Figure A20048001505702781
Figure G04815057319950320D002691
Figure G04815057319950320D002701
Figure G04815057319950320D002711
Figure G04815057319950320D002721
在本发明的另一方面，本发明提供了用于筛选库生物活性的方法和分离具有生物活性的库成员的方法。
在本发明的又一个方面，本发明提供了一种用于进行结合分析的方法。该方法包括提供一种含有第一共激活剂、相互作用蛋白质和测试化合物的组合物。第一共激活剂的氨基酸结构包括LXXLL、LXXLI或FxxFF的结合基序，其中X是任意氨基酸。该方法进一步包括，由于该化合物的存在，检测第一共激活剂与相互作用蛋白质之间的结合的改变，然后根据其结合效果表征该测试化合物。
该分析法可以通过任何能够测量测试化合物对两种蛋白质之间结合的影响的方法来进行。很多这种分析法在本领域中是公知的，并且可以在本发明的方法中应用，包括所谓的双杂交系统和分裂杂交系统。
双杂交系统，以及使用这种系统进行测定的各种方法，例如，美国专利6,410,245所述。分裂杂交系统，例如，Hsiu-Ming Shiu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：13896-13901，November 1996和John D.Crispino等，Molecular Cell，3：1-20，February 1999所述。在分裂杂交系统中，使用融合蛋白质，其中蛋白质X融合到lexA DNA结合结构域(plexA)并且蛋白质Y融合到转录激活剂VP16(pSHM.1-LacZ)。lexA-X与VP16-Y之间的相互作用导致四环素阻抑蛋白(TetR)的表达。TetR防止了HIS3报道基因的转录，使细胞不能在缺少组氨酸的介质上生长。蛋白质-蛋白质相互作用的破坏，将通过切断四环素阻遏剂的表达而使细胞在这种介质上的生长能力恢复。因此，可以将本发明的化合物加入到生长细胞中，并且如果该化合物的加入使细胞在介质上生长的能力恢复，则该化合物可以被视为蛋白质-蛋白质相互作用的有效破坏剂。
使分裂杂交系统工作所需的酵母菌株可以与双杂交lexA/VP16构造一起使用，例如Stanley M.Hollenberg等，Molecular and CellularBiology 15(7)：3813-3822，July 1995所述的那些。Takemaru，K.I.和Moon，R.T.，J.Cell Biol.149：249-254使用了分裂杂交系统的有用的变化。
其它分析形式也适用。例如，AP-1、ELISA的报道基因分析法，例如，通过用CD3和CD28刺激后的T-细胞系阻断了IL-2的生产，以寻找IL-2转录的抑制剂。直接结合分析法(在共激活剂与其伙伴之间)可以通过表面等离子体共振谱仪(Biacore，Sweden制造合适的仪器)或ELISA来进行。
示例性的转录调节剂包括但不限于VP16、VP64、p300、CBP、PCAF、SRC1PvALF、AtHD2A和ERF-2。参见，例如，Robyr等(2000)Mol.Endocrinol.14：329-347；Collingwood等(1999)J.Mol.Endocrinol.23：255-275；Leo等(2000)Gene 245：1-11；Manteuffel-Cymborowska(1999)Acta Biochim.Pol.46：77-89；McKenna等(1999)J.SteroidBiochem.Mol.Biol.69：3-12；Malik等(2000)Trends Biochem.Sci.25：277-283；以及Lemon等(1999)Curr.Opin.Genet.Dev.9：499-504。其它示例性的转录因子包括但不限于，OsGAI、HALF-1、C1、AP1、ARF-5、-6、-7和-8、CPRF1、CPRF4、MYC-RP/GP和TRAB1。参见，例如，Ogawa等(2000)Gene 245：21-29；Okanami等(1996)Genes Cells 1：87-99；Goff等(1991)Genes Dev.5：298-309；Cho等(1999)Plant Mol.Biol.40：419-429；Ulmason等(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：5844-5849；Sprenger-Haussels等(2000)Plant J.22：1-8；Gong等(1999)Plant Mol.Biol.41：33-44；以及Hobo等(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA96：15,348-15,353。
在一个优选实施方式中，转录共激活剂是人类转录共激活剂。在另一个优选实施方式中，转录共激活剂是具有组蛋白乙酰转移酶活性的p300/CBP族共激活剂的成员。p300，例如，Eckner等，1994所述，并且CBP如Bannister和Kouzarides，1996所述。对本发明来说，p300/CBP指的是p300的人类等位基因变体和合成变体，和p300的其它哺乳动物的变体和等位基因变体和合成变体，以及所述p300的人类和哺乳动物形式的片段。在该测定法的一个方面，相互作用蛋白质是转录因子或第二共激活剂。
在该测定法的一个方面，相互作用蛋白质是RIP140、SRC-1(NCoA-1)、TIF2(GRIP-1、SRC-2)、p(CIP、RAC3、ACTR、AIB-1、TRAM-1、SRC-3)、CBP(p300)、TRAPs(DRIPs)、PGC-1、CARM-1、PRIP(ASC-2、AIB3、RAP250、NRC)、GT-198和SHARP(CoAA、p68、p72)中的任何一个。在该测定法的另一方面，相互作用蛋白质是TAL 1、p73、MDm2、TBP、HIF-1、Ets-1、RXR、p65、AP-1、Pit-1、HNF-4、Stat2、HPV E2、BRCA1、p45(NF-E2)、c-Jun、c-myb、Tax、Sap 1、YY1、SREBP、ATF-1、ATF-4、Cubitus、Interuptus、Gli3、MRF、AFT-2、JMY、dMad、PyLT、HPV E6、CITTA、Tat、SF-1、E2F、junB、RNA解旋酶A、C/EBPβ、GATA-1、Neuro D、Microphthalimia、E1A、TFIIB、p53、P/CAF、Twist、Myo D、pp9ORSK、c-Fos和SV40Large T中任意一种。在该测定法的另一方面，相互作用蛋白质是ERAP140、RIP140、RIP160、Trip1、SWI1(SNF)、ARA70、RAP46、TIF1、TIF2、GRIP1和TRAP中的任意一种。在本发明的另一方面，相互作用蛋白质是VP16、VP64、p300、CBP、PCAF、SRC1 PvALF、AtHD2A、ERF-2、OsGAI、HALF-1、C1、AP-1、ARF-5、ARF-6、ARF-7、ARF-8、CPRF1、CPRF4、MYC-RP/GP和TRAB1中的任意一种。在本发明的另一方面，第一共激活剂是CBP或者p300。
测试化合物选自如本文所述的化合物。例如，具有通式(I)、(II)、(III)、(IV)、(VI)和(VIa)的化合物。通常，测试化合物以几种不同的浓度进行评价，其中这些浓度部分地基于测定条件进行选择，例如第一共激活剂和相互作用蛋白质的浓度。浓度通常在大约0.1至10μM的范围内。在一个方面，该测定法评价了两种化合物影响两种蛋白质之间的结合相互作用的相对效力，其中那两种化合物中至少一种是本发明的化合物。在对化合物结构和化合物活性之间关系的研究中，更有效的化合物可以充当参比化合物。
通过各种技术和方法对本发明的库的生物活性进行筛选。通常，筛选测定法可以通过以下方式进行：(1)使库的拟态与例如受体的所关注的生物靶相接触，以使库的拟态与靶之间的结合得以发生，以及(2)通过合适的测定法对结合结果进行检测，例如Lam等(Nature 354：82-84，1991)或Griminski等(Biotechnology 12：1008-1011，1994)所公开的量热测定法(二者均引入本文作为参考)。在优选实施方式中，库成员在溶液中并且靶被固定在固相上。或者库可以固定在固相上，并且可以通过使其与溶液中的靶相接触而探测。
下表4显示了选自本发明的库、用于生物活性测试的化合物及其IC50值，其是通过如实施例6所述的报道基因测定法所测量的。
                  表4
      所选择的库化合物的IC50(μM)
Figure A20048001505702871
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Figure G04815057319950320D002901
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根据本发明已经发现，通式(I)的化合物，尤其是通式(VI)的化合物，由于其对CBP的特定结合，能够抑制癌细胞中的CBP-介导转录的激活。这个结论是由SW480细胞的CBP与本发明的化合物的免疫沉淀法所支持的。
本发明的化合物还能够抑制SW480细胞中存活蛋白的表达，因此抑制了癌细胞中的致癌活性。本发明的化合物可以用于抑制癌细胞，因此可用于调节细胞的生长。支持这个结果，本发明的化合物进一步显示了其可以诱导SW480细胞中胱天蛋白酶-3的激活，从而诱导细胞的凋亡活性。本发明的化合物还可以有利地用于诱导细胞中的编程性细胞死亡。
为了在生物体外确定癌细胞中的致癌活性，通过以下方法测试了MTS的细胞毒性分析。
(1)细胞毒性测试
将SW480或者HCT116细胞放置在96孔微量培养板上(104个细胞/孔)并且在37℃下培育24小时。用各种浓度的TCF4化合物处理该细胞24小时。向每一个孔中加入20μl的MTS溶液(Promega)，并且在37℃下培育24小时。通过使用微量培养板读数器(Molecular Device)在490nm下读取吸光度来测量细胞生存力，并且计算化合物在各浓度下的细胞毒性。
(2)生长抑制分析
将SW480或者PCT116细胞放置到96孔微量培养板中(104个细胞/孔)并且在37℃下培育24小时。将20μl的[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑鎓内盐](MTS)溶液(Promega)加入到每个孔中，并且在37℃(负控制)下培育2小时后读取吸光度。然后，用各种浓度的TCF4化合物处理该细胞48小时。向每个孔中加入20μl的MTS溶液(Promega)，并且在37℃下培育2小时。使用微量培养板读数器(Molecular Device)在490nm下读取吸光度以测量细胞生存力，并且计算化合物在各浓度下的细胞毒性。
所选择的库化合物的致癌活性结果如表5所示。表5中化合物的编号与表4中化合物的编号无关。
                      表5
              所选择的库化合物通过MTS或者
      磺酰罗丹明B(sulforhodamine B)分析的致癌活性
Figure A20048001505703241
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在其它方面，本发明提供了含有具有通式(I)、或者通式(II)、或者通式(III)、或者通式(IV)、或者通式(VI)的化合物的药学组合物。这些组合物可以用于如以下详细描述的本发明的各种方法中(例如治疗癌症或者阿尔茨海默式症)。
本发明的药学组合物配制为使其与其预计给药路径相容。给药路径的例子包括胃肠外给药，例如静脉给药、皮内给药、皮下给药、口服给药(例如，吸入法给药)、经皮给药(局部给药)、经粘膜给药和直肠给药。用于胃肠外、皮内或者皮下应用的溶液或者悬浮液可以包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如苄醇或者羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或者亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，例如氯化钠或者葡萄糖。此外，pH可以用酸或者碱来调节，例如盐酸或氢氧化钠。胃肠外制剂可以封装在由玻璃或者塑料制成的安瓿、一次性注射器或多次剂量小瓶中。
适用于注射用途的药学组合物包括无菌水溶液(其中是水溶性的)或悬浮液，以及用于临时配制无菌可注射溶液或悬浮液的无菌粉末。对于静脉给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或者磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的，并且其流动性应当达到易于注射的程度。其必须在生产和存储条件下稳定，并且必须保存而不受例如细菌和真菌的微生物的污染作用影响。载体可以是含有例如水、乙醇、多醇(例如，甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)及其适当的混合物的溶剂或分散介质。例如，通过使用例如卵磷脂的涂层，在分散液的情况下通过保持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂，可以保持合适的流动性。对微生物作用的预防可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂获得，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖，例如甘露醇(manitol)、山梨糖醇的多醇，氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的药剂，例如，单硬脂酸铝和凝胶，而达到可注射组合物的延长吸收。
无菌可注射溶液可以通过如下制备：将所需量的活性化合物(例如，具有通式(I)、(II)、(III)、(IV)或者(VI)的化合物)结合到含有以上所列成分中的一种或组合的适当溶液中，接着根据需要进行过滤除菌。通常，悬浮液通过将活性化合物结合到无菌载体中来制备，该无菌载体含有分散介质和所需的以上列举的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其由预先的无菌过滤溶液获得活性成分加任意其它所需成分的粉末。
口服组合物通常含有惰性稀释剂或者可食用的载体。其可以被封装在凝胶胶囊中或者被压制成片剂。为了口服治疗给药，活性化合物可以与赋形剂相结合并且以片剂、锭剂或者胶囊的形式使用。口服组合物也可以使用流体载体制备以用作漱口水，其中流体载体中的化合物在口中应用和漱动(swished)，然后吐出或吞咽。可以包括药学相容的结合剂，和/或辅药物质作为该组合物的部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任意以下成分或者性质相近的化合物：结合剂，例如微晶纤维素、面黄蓍胶或凝胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如褐藻酸、Primogel或者玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或者矫臭剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或者橙味香料。
对于吸入法给药，化合物以气溶胶喷雾的形式由含有合适推进物的加压容器或喷雾器来输送，该合适推进物例如气体，如二氧化碳。
也可以通过经粘膜或者经皮方式进行系统的给药。对于经粘膜或者经皮给药，在配方中使用适合渗透障碍物的渗透剂。这种渗透剂在本领域中是公知的，并且包括，例如，用于经粘膜给药的除垢剂、胆汁盐和羧链孢酸衍生物。经粘膜给药可以通过使用鼻喷雾或者栓剂来进行。对于经皮给药，如本领域所公知的那样，将活性化合物配制为软膏、油膏、凝胶或者乳膏。
该化合物也可以被制备为栓剂的形式(例如，用例如可可豆油和其它甘油酯的常规栓剂基)或者用于直肠输送的保留灌肠形式。
在一个实施方式中，活性化合物与将会保护该化合物免于从体内被迅速排出的载体一起制备，该载体例如长效制剂，包括植入片和微胶囊输送系统。可以使用生物降解、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯、聚酐、聚羟基乙酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这种制剂的方法对本领域技术人员来说是显而易见的。这些物质也可以由Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc.商业获得。脂质体悬浮液(包括用病毒抗原的单克隆抗体定向到受感染细胞的脂质体)也可以用作药学可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员公知的方法制备，例如，如美国专利第4,522,811号所述。
为了给药的便利性和剂量的均匀性，配制成剂量单位形式的口服或胃肠外组合物尤其具有优势。这里所使用的剂量单位形式指的是对被治疗个体来说，适合作为单剂使用的物理离散单位；每个单位含有预定数量的活性化合物和所需药学载体，该活性化合物的数量经计算可产生预期治疗效果。对本发明剂量单位形式的说明是由该活性化合物的独特特性以及要达到的特定治疗效果、以及合成这种用于治疗个体的活性化合物的领域的内在限制所规定的，并且与其直接相关。
这种化合物的毒性和疗效可以通过细胞培养或实验动物的标准药学程序来测定，例如测定LD50(对50％种群致死的剂量)和ED50(对50％种群有疗效的剂量)。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，其可以表达为LD50/ED50比。优选表现出大的治疗指数的化合物。虽然可以使用表现出毒性副作用的化合物，应当小心地设计输送系统，其将这种化合物定向到受患组织的位置，以便使对未感染细胞的潜在危害最小化，从而减少副作用。
由细胞培养实验和动物研究得到的数据可以用于调制人类所使用的剂量范围。优选这种化合物的剂量处于包括很少或没有毒性的ED50的循环浓度的范围内。剂量在此范围内可以随所采用的剂型和所使用的给药路径而改变。对于本发明的方法中所使用的任何化合物，均可以从细胞培养实验初步估算治疗有效剂量。可以在动物模型上调制剂量以达到包括如细胞培养中所测定的IC50(即，对症状的抑制达到最大的一半时的测试化合物的浓度)的循环血浆浓度范围。这种信息可以用于更准确地测定人类的可用剂量。可以通过，例如，高效液相色谱测量血浆中的水平。
例如，在某些实施方式中，本发明的药学组合物是一种适于口服给药的单位剂量形式的组合物，例如含有大约1mg至大约1g本发明的化合物的片剂或胶囊。在另一些实施方式中，本发明的药学组合物是一种适用于静脉注射、皮下注射或者肌肉注射的组合物。患者可以接受，例如，含大约1μg/kg至大约1g/kg本发明化合物的静脉、皮下或肌肉剂量。静脉、皮下或肌肉剂量可以通过弹丸式注射的方式或者通过经过一段时间的连续灌输来给予。或者患者将接受大约等于一日胃肠外剂量的一日口服剂量，每天施用该化合物1至4次。
下表说明了含有用于人类治疗或预防的化合物或其药学可接受盐的示例性的药学剂量形式：
  片剂1   mg/片
  化合物   100
  乳糖Ph.Eur.   179
  交联羧甲基纤维素钠   12.0
  聚乙烯基吡咯烷酮   6
  硬脂酸镁   3.0
 
  片剂2   mg/片
  化合物   50
  乳糖Ph.Eur.   229
  交联羧甲基纤维素钠   12.0
  聚乙烯基吡咯烷酮   6
  硬脂酸镁   3.0
  片剂3   mg/片
  化合物   1.0
  乳糖Ph.Eur.   92
  交联羧甲基纤维素钠   4.0
  聚乙烯基吡咯烷酮   2.0
  硬脂酸镁   1.0
 
  胶囊   mg/胶囊
  化合物   10
  乳糖Ph.Eur.   389
  交联羧甲基纤维素钠   100
  硬脂酸镁   1.0
 
  注射剂I   (50mg/ml)
  化合物   0.5％w/v
  等渗水溶液   至100％
含有通式(I)或(II)或(III)或(IV)或(VI)的化合物的药学组合物可以用于治疗受Wnt信号通道调节的病症，尤其是癌症，特别是结肠癌。
在一个方面，本发明提供了抑制放射性同位素标记的脑啡肽衍生物与δ和μ鸦片受体结合的化合物。因此，本发明的回折拟态可以用作受体激动剂和潜在的止痛剂。
在另一个方面，本发明提供了用于抑制肿瘤生长的方法。这种方法包括对带有肿瘤的个体(例如哺乳动物个体)施予抑制肿瘤生长有效量的通式(I)的化合物的步骤，尤其是通式(VI)的化合物。如果接受化合物或组合物治疗的个体与未接受治疗的个体相比，肿瘤尺寸在统计上显著较小，则该化合物或组合物抑制了肿瘤的生长。
本发明的特定化合物或组合物对肿瘤生长的抑制效果可以用本领域公知的任何合适方法来特征。例如，可以测量该化合物或组合物在存活蛋白表达上的效果。化合物或组合物向下调节了存活蛋白表达，可能对肿瘤生长具有抑制效果。此外，也可以如实施例中所详细说明地使用利用肿瘤细胞系的分析(例如，使用SW480细胞的软琼脂分析)和用于肿瘤生长的动物模型(例如移植了肿瘤细胞的裸鼠和小鼠(minmouse)模型)，以评价给定化合物或组合物对肿瘤生长的抑制效果。其它示例性的用于肿瘤生长的动物模型或者异种移植物包括那些用于乳癌(Guo等，Cancer Res.62：4678-84，2002；Lu等，Breast Cancer Res.Treat.57：183-92，1999)、胰腺癌(Bouvet等，Cancer Res.62：1534-40，2002)、卵巢肿瘤(Nilsson等，Cancer Chemother.Pharmacol.49：93-100，2002；Bao等，Gynecol.Oncol.78：373-9，2000)、黑素瘤(Demidem等，Cancer Res.61：2294-300，2001)、结肠癌(Brown等，Dig.Dis.Sci.45：1578-84，2000；Tsunoda等，Anticancer Res.19：1149-52，1999；Cao等，Clin.Cancer Res.5：267-74，1999；Shawler等，J.Immunother.EmphasisTumor Immunol.17：201-8，1995；McGregor等，Dis.Colon.Rectum.36：834-9，1993；Verstijnen等，Anticancer Res.8：1193-200，1988)、肝细胞癌(Labonte等，Hepatol.Res.18：72-85，2000)、以及胃癌(Takahashi等，Int.J.Cancer 85：243-7，2000)的。
抑制肿瘤生长的化合物或组合物可以根据，例如，其中肿瘤所处的组织，经由适当的路径给药至带有肿瘤的个体。合适的剂量可以使用如上所述的本领域公知的知识和技术来确定。化合物或组合物对肿瘤生长的疗效也可以使用本领域公知的方法进行监控。例如，可以使用各种方法来监控结肠癌的进展和/或生长，包括结肠镜检查、乙状结肠镜检查、活体检查、计算机断层成像、超声、磁共振成像和正电子发射断层成像。用于监控卵巢癌的发展和/或生长的方法包括，例如，超声、计算机断层成像、磁共振成像、胸部X射线、腹腔镜检查和组织取样。
在相关的方面，本发明提供了一种用于治疗或预防癌症的方法。这种方法包括根据需要对个体施予治疗或预防个体癌症有效量的具有通式(I)的化合物或组合物的步骤，尤其是通式(VI)的化合物。要理解治疗癌症包括减少或消除癌症的发展(例如，癌症的生长和转移)。要理解预防癌症包括防止或延缓癌症的发病。通过本发明可以治疗或预防各种类型的癌症。其包括，但不限于，肺癌、乳癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、子宫癌、卵巢癌、神经胶质瘤、黑素瘤、淋巴瘤和白血病。
需要治疗的个体可以是患有各种类型癌症的人类或非人类灵长类动物或其它动物。需要预防的个体可以是具有发展癌症的风险的人类或非人类灵长类动物或其它动物。用于诊断癌症和对具有高癌症风险的个体进行筛选的方法在本领域中是公知的，并且可以在本发明中使用。例如，结肠癌可以通过粪便潜血检验、乙状结肠镜检查、结肠镜检查、用空气做对照的钡剂灌肠和模拟结肠镜检查来诊断。具有高结肠癌风险的个体可以具有一种或多种结肠癌风险因素，例如结肠癌或息肉的强家族史、遗传性结肠癌综合症的已知家族史、腺瘤性息肉的个人史、和慢性发炎性肠道疾病的个人史。
可用于癌症治疗或预防的具有通式(I)的化合物，可以通过本领域公知的方法来识别。也可以使用如上所述的可以用来选择对肿瘤生长有抑制效果的化合物的方法。可以使用本领域公知的知识和技术来确定给药的路径、特定化合物的剂量和治疗的有效性。进行这种确定可能需考虑的因素包括，例如，要治疗的癌症的类型和阶段。
用于癌症的治疗和预防的具有通式(I)的化合物，可以与抗肿瘤剂联合给药。抗肿瘤剂指的是抑制肿瘤生长的化合物。示例性的抗肿瘤机包括氟尿嘧啶、5-氟-2，4(1H，3H)-尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇、顺铂、丝裂霉素C、喃氟啶、雷替曲塞、卡培他滨和伊立替康(Arango等，Cancer Research 61，20014910-4915)。与抗肿瘤剂联合给药的具有通式(I)的化合物不需要将该化合物与抗肿瘤剂同时给药。该化合物和抗肿瘤剂可以单独给药，只要在某时间点，它们在相同的癌症细胞上均有效果。
在另一个相关方面，本发明提供了用于促进癌症细胞中编程性细胞死亡的方法。这种方法包括使癌症细胞与促进这些细胞编程性细胞死亡的有效量的具有通式(I)的化合物相接触的步骤，尤其是具有通式(VI)的化合物。如果在该化合物的存在下经受了编程性细胞死亡的癌症细胞的数量，在统计上明显大于不存在该化合物时的数量，则该化合物促进了编程性细胞死亡。这种化合物可以使用培养的癌症细胞系、异种移植物或者动物癌症模型，通过本领域公知的方法(例如，测量胱天蛋白酶的活性和/或细胞死亡)来识别。在促进编程性细胞死亡上，优选该化合物在癌症细胞中比在正常细胞中具有更大的活性。用本发明的方法可以治疗的癌症细胞可以来自各种组织源。
在本发明的另一个方面，公开了一种用于治疗受Wnt信号通道调节的病症的方法，其中该方法包括对患者施予安全和有效量的具有通式(I)的化合物，尤其是具有通式(VI)的化合物。含有本发明化合物的药学组合物也可以用于此目的。关于这一点，在本发明中已经发现具有通式(I)的化合物，尤其是具有通式(VI)的化合物或者含有它们的药学组合物，可以用于治疗受TCF4-β连环蛋白-CBP复合体调节的病症，该复合体被认为对与Wnt信号通道相关的癌细胞超量表达的引发有责任。因此，本发明的另一个方面是提供一种使用具有通式(I)的化合物，尤其是具有通式(VI)的化合物，治疗受TCF4-β连环蛋白-CBP复合体调节的病症的方法。
本发明还提供了用于抑制存活蛋白表达的化合物和方法。存活蛋白是TCF/β-连环蛋白通道的靶基因，更具体的说是TCF/β-连环蛋白/CBP通道的靶基因。其是IAP(编程性细胞死亡蛋白质的抑制剂)族蛋白质的一员。与存活蛋白有关的生物活性包括：G2/M的高度表达，其调节细胞周期的进入和脱离；根据细胞周期的阶段，与微管、中心体、着丝粒和中间体有关；以及经由与胱天蛋白酶(例如，胱天蛋白酶3、7和9)的直接或间接的相互作用的抗-编程性细胞死亡。与癌症相关，存活蛋白在肿瘤细胞中广泛地和高度地表达，但是很少或不会在正常组织细胞中表达。同样，已经观察到肿瘤表达了存活蛋白的癌症患者具有降低的整体生存率。此外，存活表达的程度已经与其它癌症标志关联起来，例如，Ki67、PNCA、p53、APC等。
本发明的特定化合物对于存活蛋白表达的效果，可以通过本领域公知的方法表征。这些方法包括用于在转录或翻译层次上表征存活蛋白表达的方法。用于在转录层次上表征存活蛋白表达的示范性方法是：cDNA微阵列、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、染色质免疫沉淀法(ChIP)、和通过存活蛋白启动子驱动的报道基因活性检验。用于在翻译层次上表征存活蛋白表达的示范性方法是：蛋白质印迹分析、免疫化学和胱天蛋白酶活性。以上示范性方法的详细说明可以在以下实施例中找到。
如上所述，本发明提供了用于抑制存活蛋白表达的方法。这些方法包括使存活蛋白表达的细胞与抑制存活蛋白表达有效量的本发明的化合物相接触的步骤。如果在该化合物的存在下细胞中存活蛋白的表达比不存在该化合物时存活蛋白的表达减少了，则该化合物抑制了存活蛋白的表达。存活蛋白表达的细胞包括以下肿瘤细胞，其表达例如在肺癌、乳癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、子宫癌、卵巢癌、神经胶质瘤、黑素瘤、结肠癌、淋巴瘤和白血病中的或者来自其中的细胞。使存活蛋白表达的细胞与该化合物接触的步骤可以在体外、先体外后体内、或在体内进行。可以通过如上所详细说明的本领域公知的方法，来识别可用于抑制存活蛋白表达的化合物，以及来表征本发明的特定化合物的效果。
本发明的化合物已经显示出对存活蛋白的表达的抑制。Blanc-Brude等，Nat.Medicine 8：987(2002)，已经显示了存活蛋白是平滑肌细胞编程性细胞死亡的关键调节剂，其在病理性血管壁重塑中至关重要。因此，本发明的另一方面提供了一种治疗或预防与血管成形术有关的再狭窄的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。在一个实施方式中，本发明治疗了再狭窄，即，对患有再狭窄的个体施予本发明的回折拟态，使得再狭窄的严重程度、范围或等级等有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了再狭窄，即，对预期将发展新的或额外的再狭窄的个体施予本发明的回折拟态，使得再狭窄预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明的化合物已经显示出抑制TCF/B-连环蛋白转录。Rodova等，J.Biol.Chem.277：29577(2002)，已经显示了PKD-1启动子是B-连环蛋白/TCF通道的靶。因此，本发明的另一方面提供了一种治疗或预防多囊肾疾病的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。在一个实施方式中，本发明治疗了多囊肾疾病，即，对患有多囊肾疾病的个体施予本发明的回折拟态，使得多囊肾疾病的严重程度、范围或等级等有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了多囊肾疾病，即，对预期将发展新的或额外的多囊肾疾病的个体施予本发明的回折拟态，使得多囊肾疾病预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明的化合物已经显示出抑制Wnt信号的表达。Hanai等，J.CellBio.158：529(2002)，已经显示了内皮抑制素，一种公知的抗血管生成因子，抑制Wnt信号。因此，本发明的另一方面提供了一种治疗或预防异常血管生成病的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。在一个实施方式中，本发明治疗了异常血管生成病，即，对患有异常血管生成病的个体施予本发明的回折拟态，使得异常血管生成病的严重程度、范围或等级等有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了异常血管生成病，即，对预期将发展新的或额外的异常血管生成病的个体施予本发明的回折拟态，使得异常血管生成病预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明的化合物已经显示出抑制Wnt信号的表达。Sen等，P.N.A.S.(USA)97：2791(2000)，已经显示了患有风湿性关节炎的哺乳动物在RA滑液组织中显示了升高的Wnt和Fz表达。因此，本发明的另一方面提供了一种用于治疗或预防风湿性关节炎病的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。在一个实施方式中，本发明治疗了风湿性关节炎病，即，对患有风湿性关节炎病的个体施予本发明的回折拟态，使得风湿性关节炎病的严重程度、范围或等级等有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了风湿性关节炎病，即，对预期将发展新的或额外的风湿性关节炎病的个体施予本发明的回折拟态，使得风湿性关节炎病预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明的化合物已经显示出抑制Wnt信号的表达。Uthoff等，Int.J.Oncol.19：803(2001)，已经显示了在溃疡性结肠炎中发生了凌乱的和fz(Wnt通道分子)的分化上调(differential upregulation)(与Chron氏病患者相比)。因此，本发明的另一方面提供了一种治疗或预防溃疡性结肠炎的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。在一个实施方式中，本发明治疗了溃疡性结肠炎，即，对患有溃疡性结肠炎的个体施予本发明的回折拟态，使得溃疡性结肠炎的严重程度、范围或等级等有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了溃疡性结肠炎，即，对预期将发展新的或额外的溃疡性结肠炎的个体施予本发明的回折拟态，使得溃疡性结肠炎预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明的化合物已经显示出抑制Wnt TCF/连环蛋白信号。因此，本发明的另一方面提供了一种治疗或预防结节性硬化综合症(TSC)的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。患有TSC的个体通常在大脑、心脏、肾脏和其它组织中发展多重局灶性病变(参见，例如，Gomez，M.R.Brain Dev.17(suppl)：55-57(1995))。哺乳动物细胞中的研究已经显示TSC1(其表达错构瘤蛋白)和TSC2(其表达马铃薯球蛋白)的超量表达负面调节细胞的增殖，并且诱导G1/S败育(参见，例如，Miloloza，A等，Hum.Mol.Genet.9：1721-1727(2000))。其它研究已经显示错构瘤蛋白和马铃薯球蛋白在β-连环蛋白降解复合体的层次上起作用，更具体地说，这些蛋白质通过参与β-连环蛋白降解复合体而对β-连环蛋白的稳定性和活性有负调节(参见，例如，Mak，B.C.等，J.Biol.Chem.278(8)：5947-5951，(2003))。β-连环蛋白是95-kDa蛋白质，其通过其与膜结合钙粘着蛋白族的成员的联合参与细胞粘附，并且作为Wnt/Wingless通道的关键组分参与细胞增殖和分化(参见，例如，Daniels，D.L.等，Trends Biochem.Sci.26：672-678(2001))。已经显示该通道的误调节在人类和啮齿动物中是致癌的。本发明提供了调节β-连环蛋白的活性，具体地说是调节其与其它蛋白质的相互作用，因此可以用于TSC治疗的化合物。因此，在一个实施方式中，本发明治疗了TSC，即，对患有TSC的个体施予本发明的回折拟态，使得TSC的严重程度、范围或等级等方面有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了TSC，即，对预期将发展新的或额外的TSC的个体施予本发明的回折拟态，使得TSC预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明的化合物已经显示出抑制Wnt信号的表达。与卡波济氏肉瘤有关的疱疹病毒(KSHV)潜伏期相关的核抗原(LANA)在所有KSHV相关的肿瘤中均有表达，包括卡波济氏肉瘤(KS)和β-细胞恶性疾病，例如原发渗出性淋巴瘤(PEL)和多中心性卡斯特莱曼病。Fujimuro，M.等，Nature Medicine 9(3)：300-306(2003)，已经显示出LANA明显地通过负性调节剂GSK-3β的重新分布而起到稳定β-连环蛋白的效果。本发明提供了用于抑制β-连环蛋白的蛋白质相互作用的化合物和方法，例如，抑制β-连环蛋白/TCF复合体的形成。因此，本发明的化合物阻断了LANA诱导的β-连环蛋白/TCF复合体的积累，并且至少部分地阻断了KSHV感染的后果。因此，本发明的另一个方面是提供一种治疗或防止由与卡波济氏肉瘤有关的疱疹病毒(KSHV)感染所引起的疾病的方法。这种疾病包括KSHV相关的肿瘤，包括卡波济氏肉瘤(KS)和原发渗出性淋巴瘤(PEL)。该方法包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态。在一个实施方式中，本发明治疗了KSHV相关的肿瘤，即，对患有KSHV相关的肿瘤的个体施予本发明的回折拟态，使得肿瘤的严重程度、范围或等级等有所降低。在另一个实施方式中，本发明预防了KSHV相关的肿瘤，即，对预期将发展新的或额外的KSHV相关的肿瘤的个体施予本发明的回折拟态，使得肿瘤预期的严重程度、范围或等级等有所降低。任选地，该个体是哺乳动物个体。
LEF/TCF DNA-结合蛋白与活化的β-连环蛋白(Wnt信号的产物)合作起到了反向激活下游靶基因的效果。DasGupta，R.和Fuchs，E.Development 126(20)：4557-68(1999)，证明了当在细胞命运和分化责任中发生变化时，活化的LEF/TCF复合体于不同的时间在毛发发展和循环中的重要性。此外，在皮肤形态发生中，β-连环蛋白已经显示出对于毛囊形成是必需的，其超量表达引起小鼠的“毛皮的”显型(Gat，U.等，Cell 95：605-614(1998)和Fuchs，E.Harvey Lect.94：47-48(1999)。还参见Xia，X.等，Proc.Natl.Aad.Sci.USA 98：10863-10868(2001))。本发明的化合物已经显示出抑制Wnt信号的表达，并且显示出阻断β-连环蛋白复合体的形成。因此，本发明的化合物提供了一种用于调节头发生长的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态，其中该量有效地调节了个体的头发生长。任选地，该个体是哺乳动物个体。
本发明提供了可用于治疗或预防阿尔茨海默式症的化合物。阿尔茨海默式症(AD)是一种伴有进行性痴呆的神经变性疾病。该病伴有大脑中三处主要结构的变化，即，i)细胞内蛋白质沉积(也称为神经元纤维缠结，或者NFT)，ii)细胞外蛋白质沉积，术语称为淀粉样蛋白斑块，其被营养不良的神经炎围绕，和iii)神经元的弥漫性流失。
本发明的化合物或组合物拯救了由早老蛋白-1突变引起的神经元分化缺陷，并且可以降低阿尔次海默氏病患者大脑中神经元前体群分化为神经元的数量或比率。早老蛋白是透膜蛋白质，其功能与Notch和淀粉样前体蛋白的运输、更新和解理有关。早老蛋白1(PS-1)中的错义突变与早发家族性阿尔茨海默式症有关(Fraser等，Biochem.Soc.Symp.67，89(2001))。本发明的化合物不仅可用于带有PS-1家族性阿尔茨海默式突变的个体，还适用于一般的阿尔茨海默式症患者。
此外，本发明提供了一种用于治疗或预防阿尔茨海默式症的方法，包括根据需要对个体施予安全和有效量的本发明的回折拟态，其中该量有效地治疗或预防个体的阿尔茨海默式症。要理解治疗阿尔茨海默式症包括减少或消除阿尔茨海默式症病症特性的表现，或者延缓该疾病的发展。要理解预防阿尔茨海默式症包括预防或延缓该病的发作。
需要治疗的个体可以是处于阿尔茨海默式症的各种阶段的人类或非人灵长类动物或其它动物。用于诊断阿尔茨海默式症的方法在本领域是公知的(参见，例如，Dinsmore，J.Am.Osteopath.Assoc.99(9 Suppl.)：S1-6，1999；Kurz等，J.Neural Transm.Suppl.62：127-33，2002；Storey等，Front Viosci.7：e155-84，2002；Marin等，Geriatrics 57：36-40，2002；Kril和Halliday，Int.Rev.Neurobiol.48：167-217，2001；Gurwitz，TrendsNeurosci.23：386，2000；Muller-Spahn和Hock，Eur.Arch.Psychiatry Clin.Neurosci.249Suppl.3：37-42；Fox和Rossor，Rev.Neuro.(Paris)155Suppl.4：S33-7，1999)，包括神经心理学方法、功能影像方法、生物标记和脑组织尸体解剖的应用。需要进行预防的个体可以是具有发展阿尔茨海默式症风险的人类或非人灵长类动物或其它动物，例如带有作为该病肇因的某些基因(例如，编码了淀粉样前体蛋白、早老蛋白1和早老蛋白2的基因)、和/或涉及该病发病机理的基因(例如，载脂蛋白E基因)的突变的个体(Rocchi等，Brain Res.Bull 61：1-24，2003)。
具有如式(I)所列出的结构的化合物，可以通过本领域公知的任何合适方法对其在治疗或预防阿尔茨海默式症中的活性进行筛选。这种筛选最初可以使用在体外培养的细胞(例如，实施例8所述的PC-12细胞)来进行。可以使用各种阿尔茨海默式症的动物模型，来对能够拯救由早老蛋白1突变引起的神经元分化缺陷的化合物进行进一步的筛选。或者，具有式(I)所列出的结构的化合物可以在阿尔茨海默式症的动物模型中直接进行测试。许多模型系统在本领域中是公知的，并且可以在本发明中使用(参见，例如，Rowan等，Philos.Trans.R.Soc.Lond.B.Biol.Sci.358：821-8，2003；Lemere等，Neurochem.Res.28：1017-27，2003；Sant’Angelo等，Neurochem.Res.28：1009-15，2003；Weiner，Harv.Rev.Psychiatry4：306-16，1997)。所选择的化合物在治疗或预防阿尔茨海默式症上的效果，可以用本领域公知的用于评价阿尔茨海默式症发展的方法来表征或监控，包括如上所述的那些用于诊断该病的方法。
本发明还提供了用于促进神经突生长的方法。这种方法包括使神经元与促进神经突生长有效量的根据式(I)的化合物接触的步骤。这些方法可用于治疗神经变性疾病(例如，青光眼、黄斑部变性、帕金森氏病和阿尔茨海默式症)和神经系统损伤。如果在该化合物的存在下神经元的神经突长度在统计学上明显长于不存在该化合物时的神经元的神经突长度，则该化合物促进了神经突生长。这种化合物可以使用在体外培养的细胞(例如，PC-12细胞，成神经细胞瘤B104细胞)进行识别(Bitar等，Cell Tissue Res.298：233-42，1999；Pellitteri等，Eur.J.Histochem.45：367-76，2001；Satoh等，Biochem.Biophys.Res.Commun.258：50-3，1999；Hirata和Fujisawa，J.Neurobiol.32：415-25，1997；Chauvet等，Glia 18：211-23，1996；Vetter和Bishop，Curr.Biol.5：168-78，1994；Koo等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：4748-52，1993；Skubitz等，J.Cell Biol.115：1137-48，1991；O’Shea等，Neuron 7：231-7，1991；Rydel和Greene，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：1257-61，1988)，或者使用外植物来进行识别(Kato等，Brain Res.31：143-7，1983；Vanhems等，Eur.J.Neurosci.2：776-82，1990；Carri等，Int.J.Dev.Neurosci.12：567-78，1994)。使神经元与根据本发明的化合物相接触可以在体外或体内进行。所得到的治疗过的神经元，如果是在体外生成的，可以被移植到需要的组织中去(Lacza等，Brain Res.Brain Res.Protoc.11：145-54，2003；Chu等，Neurosci.Lett 343：129-33，2003；Fukunaga等，Cell Transplant 8：435-41，1999)。
本发明还提供了用于促进神经干细胞分化的方法，包括使神经干细胞与促进神经干细胞分化有效量的根据式(I)的化合物相接触。这种方法也可用于治疗神经变性疾病(例如，青光眼、黄斑部变性、帕金森氏病和阿尔茨海默式症)和神经系统损伤。“神经干细胞”指的是在适当的条件下能够分化为神经元、星形胶质细胞或少突胶质细胞的产克隆的、未分化的、多潜能细胞。如果在该化合物的存在下神经干细胞表现出的分化程度明显高于不存在该化合物时神经干细胞的分化程度，则该化合物促进了神经干细胞的分化。这种化合物可以使用涉及体外培养的神经干细胞或者动物模型的分析来进行识别(Albranches等，Biotechnol.Lett.25：725-30，2003；Deng等，Exp.Neurol.182：373-82，2003；Munoz-Elias等，Stem Cells 21：437-48，2003；Kudo等，Biochem.Pharmacol.66：289-95，2003；Wan等，Chin.Med.J.116：428-31，2003；Kawamorita等，Hum.Cell 15：178-82，2002；Stavridis和Smith，Biochem.Soc.Trans.31：45-9，2003；Pachernik等，Reprod.Nutr.Dev.42：317-26，2002；Fukunaga等，如上)。神经干细胞可以是培养的干细胞、由其源组织刚刚分离出来的干细胞、或者其源生物体内的干细胞。因此，使该神经干细胞与根据本发明的化合物相接触可以在体外(对于培养干细胞或者刚刚分离的干细胞来说)或者在体内(对于在其源生物体内的干细胞来说)进行。所得的分化的神经细胞，如果是在体外生成的，可以被移植到需要的组织中去(Lacza等，如上；Chu等，如上；Fukunaga等，如上)。这种组织包括遭受外伤或神经变性疾病的脑组织或其它神经组织。
以下非限定性实施例说明了本发明使用的化合物、组合物和方法。
                      实施例
                    制备实施例1
           (N-Fmoc-N’-R3-肼基)-乙酸的制备
(1)N-Fmoc-N’-甲基肼的制备
Figure A20048001505703701
为2L的双颈圆底烧瓶配上玻璃塞和钙管。加入硫酸甲基肼(20g，139mmol，其中R3是甲基)的THF(300mL)溶液，并且加入DiBoc(33g，153mmol)的THF溶液。经2小时，用加料漏斗滴加入饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)，同时剧烈搅拌。6小时后，缓慢加入Fmoc-Cl(39g，153mmol)的THF溶液。所得到的悬浮液在0℃下搅拌6小时。用乙酸乙酯(EA，500mL)萃取该混合物，并且保留有机层。用硫酸钠干燥该溶液并且真空蒸发。无需纯化进行下一步。
为1L的双颈圆底烧瓶配上玻璃塞和钙管。加入由前步得到的产物在MeOH(300mL)中的溶液，并且用加料漏斗缓慢加入浓盐酸(30mL，12N)，同时在冰水浴中用磁力进行搅拌，并且搅拌过夜。用EA(1000mL)萃取该混合物并且保留有机层。用硫酸钠干燥该溶液并且真空蒸发。通过用正己烷和EA重结晶来对残余物进行纯化，从而得到N-Fmoc-N’-甲基肼(32.2g，83％)。1HNMR(DMSO-D6)δ7.90～7.88(d，J＝6Hz，2H)，δ7.73～7.70(d，J＝9Hz，2H)，7.44～7.31(m，4H)，4.52～4.50(d，J＝6Hz，2H)，4.31～4.26(t，J＝6Hz，1H)，2.69(s，1H)。
(2)(N-Fmoc-N’-甲基-肼基)-乙酸叔丁基酯的制备
Figure A20048001505703702
为1L的双颈圆底烧瓶配上玻璃塞和连接到钙管的回流冷凝器。加入N-Fmoc-N’-甲基肼(20g，75mmol)的甲苯(300mL)溶液。缓慢加入溴乙酸叔丁酯(t-butylbromo acetate，22g，111mmol)的甲苯(50mL)溶液。缓慢加入Cs2CO3(49g，149mmol)。缓慢加入NaI(11g，74mmol)同时剧烈搅拌。在回流温度下将反应混合物搅拌1天。过滤产品混合物并且用EA(500mL)萃取。用硫酸钠干燥该溶液并且真空蒸发。用己烷∶EA＝2∶1的溶液通过色谱对产品进行纯化以得到(N-Fmoc-N’-甲基-肼基)-乙酸叔丁酯(19.8g，70％)。
1H-NMR(CDCl3-d)δ7.78～7.75(d，J＝9Hz，2H)，δ7.61～7.59(d，J＝6Hz，2H)，7.43～7.26(m，4H)，4.42～4.40(d，J＝6Hz，2H)，4.23(b，1H)，3.57(s，2H)，2.78(s，3H)，1.50(s，9H)。
(3)(N-Fmoc-N’-甲基-肼基)-乙酸的制备
为1L的双颈圆底烧瓶配上玻璃塞和连接到钙管的回流冷凝管。加入(N-Fmoc-N’-甲基-肼基)-乙酸叔丁酯(20g，52mmol)。缓慢加入盐酸溶液(150mL，在二氧己环中的4M溶液)，同时在冰水浴中剧烈搅拌。反应混合物在室温下搅拌1天。在减压下于40℃下将该溶液完全浓缩。加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)，并且用乙醚(100mL)洗涤水层。在0℃下缓慢滴加浓盐酸(pH2-3)。萃取该混合物并且保留有机层(500mL，MC)。用硫酸钠干燥该溶液并且真空蒸发。用正己烷和乙酸乙酯通过重结晶对残余物进行纯化，从而得到(N-Fmoc-N’-甲基-肼基)乙酸(12g，72％)。1H-NMR(DMSO-d6)δ12.38(s，1H)，8.56(b，1H)，7.89～7.86(d，J＝9Hz，2H)，7.70～7.67(d，J＝9Hz，2H)，7.43～7.29(m，4H)，4.29～4.27(d，J＝6Hz，2H)，4.25～4.20(t，J＝6Hz，1H)，3.47(s，2H)，2.56(s，3H)。
                         制备实施例2
                (N-Moc-N’-R7-肼基)-乙酸的制备
(1)(N’-甲氧基羰基-肼基)乙酸乙基酯的制备
Figure A20048001505703712
将MOC-NH-NH2(50g，0.55mol)溶解在DMF(300ml)中，然后向反应容器中加入溴乙酸乙酯(68ml，0.555mol)和碳酸钾(77g，0.555mol)。将该混合物加热到50℃并保持5小时。反应完成后，将该混合物过滤，并且用EtOAc稀释，然后用盐水洗涤(3次)。粗产品用柱纯化(洗脱液：Hex/EtOAc＝4/1)，从而得到72克无色的油。
(2)[N-R7-N’-甲氧基羰基-肼基]-乙酸乙基酯
Figure A20048001505703721
将乙基酯(10g，0.05mol)、碳酸钾(6.9g，0.05mol)和R7-溴(14.1g，0.06mol)溶解在DMF(200ml)中，并且将该混合物加热到50℃并保持5小时。反应完成后，将该混合物过滤，并且用EA稀释，然后用盐水洗涤(3次)。用色谱纯化粗产品(洗脱液：Hex/EtOAc＝4/1)。
(3)[N-R7-N’-甲氧基羰基-肼基]-乙酸
将烷基化的乙基酯(9.5g，0.03mol)溶解在THF/水(1/1，ml)中，并且在0℃下加入2N的NaOH(28.3ml)溶液。在室温将该混合物搅拌2小时。当在紫外下检测不到起始的酯时，用EA稀释该溶液，然后分离。用1N的盐酸将水层酸化到pH3～4，并且用DCM萃取化合物(3次)。合并的有机层经MgSO4干燥后进行蒸发，得到黄色固体。
                    实施例1
(1)Nβ-Moc-Nα-苄基-肼基甘氨酸的制备
Figure A20048001505703724
该化合物是根据文献的程序而制备的。(Cheguillaume等，Synlett2000，3，331)。
(2)1-甲氧基羰基-2，8-二苄基-6-甲基-4，7-二氧-六氢-吡嗪并[2，1-c][1，2，4]三嗪的制备
将溴乙缩醛树脂(60mg，0.98mmol/g)和苄胺的DMSO溶液(2.5ml，2M)放置在配有螺帽的管形瓶中。在60℃下使用转炉[RobbinsScientific]将该反应混合物振荡12小时。过滤收集树脂，并且用DMF，然后用DCM清洗该树脂，从而得到第一组分片段。
将Fmoc-丙氨酸(4当量，市售，第二组分片段)，HATU(PerSeptiveBiosystems，4当量)和DIEA(4当量)的NMP(Advanced ChemTech)溶液加入到树脂中。在室温下将反应混合物振荡4小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶。在室温下将该反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
将Nβ-Moc-Nα-苄基-肼基甘氨酸(4当量，制备实施例2中的化合物(3)，其中R7是苄基，第三组分片段)、HOBT[Advanved ChemTech](4当量)和DIC(4当量)的DMF溶液加入到以上制备的树脂中。在室温下将反应混合物振荡3小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用MeOH清洗该树脂。在室温下真空干燥该树脂。
在室温下用甲酸(2.5ml)将该树脂处理18小时。过滤除去树脂后，在减压下浓缩滤液，从而得到作为油的产品。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；1.51(d，3H)，2.99(m，1H)，3.39(d，1H)，3.69(m，1H)，3.75(m，1H)，3.82(s，3H)，4.02(d，1H)，4.24(d，1H)，4.39(d，1H)，4.75(d，1H)，5.14(q，1H)，5.58(dd，1H)，7.10-7.38(m，10H)。
实施例2
Figure A20048001505703741
(1)N’-Fmoc-N-甲基-肼基碳酰氯的制备
Figure A20048001505703742
迅速地搅拌在15ml的CH2Cl2中的N-甲基肼羧酸9H-芴-9-基甲基酯(107mg，0.4mmol)和15ml的饱和NaHCO3水溶液的冰冷却的两相混合物，同时加入在甲苯中的1.93M光气(1.03ml，2mmol)作为单独的部分。将反应混合物搅拌30分钟，收集有机相，并且用CH2Cl2萃取水相。合并的有机相经MgSO4干燥后，过滤，真空浓缩以得到作为泡沫状固体的128mg(97％)氨基甲酰氯。[警告：光气蒸汽剧毒。在通风橱中使用]。该产品无需进一步纯化即用于以下的固相合成。
(2)2，5-二甲基-7-苄基-3，6-二氧-六氢-[1，2，4]三嗪并[4，5-a]吡嗪-1-羧酸苄酰胺的制备
将溴乙缩醛树脂(30mg，0.98mmol/g)和苄胺的DMSO溶液(1.5ml，2M)放置在带有螺帽的管形瓶中。在60℃下使用转炉[RobbinsScientific]将反应混合物振荡12小时。过滤收集树脂，并且用DMF，然后用DCM清洗该树脂，以得到第一组分片段。
将Fmoc-丙氨酸(3当量，第二组分片段，市售)、HATU(PerSeptiveBiosystems，3当量)和DIEA(3当量)的NMP(Advanced ChemTech)溶液加入到树脂中。在室温下将反应混合物振荡4小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂，从而将第二组分片段加入到第一组分片段上。
向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶。在室温下将反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
将上述步骤(1)中所获的N’-Fmoc-N-甲基-肼基碳酰氯(结合的第三和第四组分片段，5当量)、DIEA(5当量)的DCM溶液加入到上述制备的树脂中。在室温下将反应混合物振荡4小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶(1g树脂加入10ml)。在室温下将反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
在室温下用异氰酸苄酯(4当量)和DIEA(4当量)在DCM中的混合物对该树脂进行4小时的处理。然后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用MeOH清洗该树脂。在室温下真空干燥该树脂。
在室温下用甲酸将该树脂处理14小时。过滤除去树脂后，在减压下浓缩滤液，从而得到作为油的产品。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；1.48(d，3H)，2.98(s，3H)，3.18(m，1H)，3.46(m，1H)，4.37-4.74(m，5H)，5.66(dd，1H)，6.18(m，1H)，7.10-7.40(m，10H)。
                       实施例3
2，5，7-三甲基-3，6-二氧-六氢-[1，2，4]三嗪并[4，5-a]吡嗪-1-羧酸苄酰胺的制备
根据实施例2所述的相同程序制备题述化合物，但是使溴乙缩醛树脂与甲基胺溶液进行反应而非苄胺。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；1.48(d，3H)，2.99(s，3H)，3.03(s，3H)，3.38(m，1H)，3.53(dd，1H)，4.36(dd，1H)，4.52(q，1H)，4.59(dd，1H)，5.72(dd，1H)，6.19(br.t，1H)，7.10-7.38(m，5H)。
                          实施例4
2-甲基-5-(对羟基苯甲基)-7-萘甲基-3，6-二氧-六氢-[1，2，4]三嗪并[4，5-a]吡嗪-1-羧酸苄酰胺的制备
将溴乙缩醛树脂(30mg，0.98mmol/g)和萘甲胺的DMSO溶液(1.5ml，2M)放置在带有螺帽的管形瓶中。使用转炉[RobbinsScientific]将反应混合物在60℃下振荡12小时。过滤收集树脂，并且用DMF、然后用DCM清洗该树脂，从而得到第一组分片段。
向该树脂中加入Fmoc-Tyr(OBut)-OH(3当量)、HATU(PerSeptiveBiosystems，3当量)和DIEA(3当量)的NMP(Advanced ChemTech)溶液。在室温下将反应混合物振荡4小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂，从而将第二组分片段加入到第一组分片段上。
向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶。在室温下将反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
向以上制备的树脂中加入N’-Fmoc-N-肼基碳酰氯(5当量)、DIEA(5当量)的DCM溶液。在室温下将反应混合物振荡4小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM、和DMF清洗该树脂。
向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶(1g树脂中加入10ml)。在室温下将反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
在室温下用异氰酸苄酯(4当量)和DIEA(4当量)在DCM中的混合物将该树脂处理4小时。然后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用MeOH清洗该树脂。在室温下真空干燥该树脂。
在室温下用甲酸将该树脂处理14小时。过滤除去树脂后，在减压下浓缩滤液，从而得到作为油的产品。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；2.80-2.98(m，5H)，3.21-3.37(m，2H)，4.22-4.52(m，2H)，4.59(t，1H)，4.71(d，1H)，5.02(dd，1H)，5.35(d，1H)，5.51(d，1H)，6.66(t，2H)，6.94(dd，2H)，7.21-8.21(m，12H)。
                             实施例5
2-甲基-6-(对羟基苯甲基)-8-萘基-4，7-二氧-六氢-吡嗪并[2，1-c][1，2，4]三嗪-1-羧酸苄酰胺的制备
将溴乙缩醛树脂(60mg，0.98mmol/g)和萘胺的DMSO溶液(2.5ml，2M)放置在带有螺帽的管形瓶中。使用转炉[Robbins Scientific]将反应混合物在60℃下振荡12小时。过滤收集树脂，并且用DMF，然后用DCM清洗该树脂。
将Fmoc-Tyr(OBut)-OH(4当量)、HATU[PerSeptive Biosystems](4当量)和DIEA(4当量)的NMP(Advanced ChemTech)溶液加入到该树脂中。在室温下将反应混合物振荡4小时后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶。在室温下将反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
将Nβ-Fmoc-Nα-苄基-肼基甘氨酸(4当量)、HOBT[AdvancedChemTech](4当量)和DIC(4当量)的DMF溶液加入到以上制备的树脂中。在室温下将反应混合物振荡3小时后，过滤收集树脂，并且用DMF，然后用DCM清洗该树脂。向该树脂中加入在DMF中的20％的哌啶(1g树脂中10ml)。在室温下将反应混合物振荡8分钟后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用DMF清洗该树脂。
在室温下用异氰酸苄酯(4当量)和DIEA(4当量)在DCM中的混合物将该树脂处理4小时。然后，过滤收集树脂，并且用DMF、DCM，然后用MeOH清洗该树脂。在室温下真空干燥该树脂后，在室温下用甲酸(2.5ml)将该树脂处理18小时。过滤除去树脂后，在减压下浓缩滤液，从而得到作为油的产品。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；2.73(s，3H)，3.13(d，1H)，3.21-3.38(m，3H)，3.55(d，1H)，3.75(t，1H)，4.22(dd，1H)，4.36(dd，1H)，4.79(d，1H)，5.22(t，1H)，5.47(m，2H)，6.68(d，2H)，6.99(d，2H)，7.21-8.21(m，12H)；
MS(m/z，ESI)564.1(MH+)586.3(MNa+)。
                     实施例6
           对SW480细胞的IC50进行测量的生物分析
              和对该细胞系的细胞毒性测试
本实施例中所使用的测试化合物(化合物A)是在实施例4中制备的。
Figure A20048001505703781
a.报道基因分析
使用SuperfectTM转染试剂(Qiagen，301307)对SW480细胞进行转染。在转染前，细胞用胰蛋白酶消化短暂的1天时间，并且放置在6孔板上(5×105细胞/孔)，以便使其在转染当天有50-80％的融合。
在150μl的无血清培养基中稀释DNA的4微克(TOPFlash)和1微克(pRL-null)，并且加入30μl的SuperfectTM转染试剂。在室温下将DNA-Superfect混合物培育15分钟，然后，向该复合体中加入1ml10％的FBS DMEM并且继续培育3小时。当复合体形成时，用不含抗菌素的PBS将细胞洗涤两次。
将DNA-SuperfectTM转染试剂复合体施加到细胞上，然后在37℃下在5％的CO2中培育3小时。培育后，加入含有10％FBS的回收培养基以使最终体积达到1.18ml。在3小时的培育后，收获细胞，并且将其补种到96孔板上(3×104个细胞/孔)。于37℃下在5％的CO2中培育过夜后，用化合物A将该细胞处理24小时。最后，通过荧光素酶分析(Promega，E1960)的方式检查活性。
图3说明了化合物A对SW480细胞的IC50的测量结果。
b.磺酰罗丹明B(SRB)分析
化合物A对下列细胞的生长抑制效果通过磺酰罗丹明B分析进行测量。将在100μl培养基中的SW480细胞放置在96-孔板的每一个孔中，并且使其附着24小时。将化合物A加入孔中以便产生预期的最终浓度，并且将该板在37℃下培育48小时。然后通过向每一个孔中平缓加入100μl冷(4℃)的10％的三氯乙酸而使细胞固定，随后在4℃下培育1小时。板用去离子水清洗五次，并且使其风干。然后通过向孔中加入100μl SRB溶液(在1％的乙酸(v/v)中的0.4％SRB(w/v))而将细胞染色15分钟。染色后，该板用1％的乙酸迅速清洗5次以除去任何未结合的染料，并且使其风干。在读取该板前，用10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷(tris base)(pH10.5)使结合染料溶解。光学密度(OD)用Molecular Device在515nm的波长下在板读数器上读取。生长抑制表达为相对生存力(对照的％)，并且GI50由对数/概率值转换后的浓度-响应曲线来计算。
表6显示了实施例4中所获得的化合物A的体外细胞毒性(SRB)检验数据。表6中数值的单位是μg/ml。
                          表6
Figure G04815057319950320D003701
                     实施例7
                     小鼠模型
在小鼠模型中对所选择的本发明的化合物(化合物B和化合物C)进行评价，从而对其作为抗癌剂的效力进行评价。
Figure A20048001505703811
化合物B
Figure A20048001505703812
化合物C
小鼠模型是一种广泛用于测试这种类型效力的模型。在各种处理后，对这些小鼠的小肠和结肠中形成的息肉数量进行测量(表7)。数据显示，与那些仅仅用载体处理的对照小鼠中的息肉数量相比，当这两种化合物的给药量为大约300mpk时，减少了小鼠中息肉的数量。
                        表7
                   小鼠模型数据
Figure G04815057319950320D003711
                  实施例8
对CBP/β-连环蛋白相互作用的化学基因组的抑制，
补救在由早老蛋白-1突变所引起的神经元分化中的缺陷以下化合物(化合物D)在本实施例中使用：
Figure A20048001505703821
材料和方法
质粒。TOPFLASH和FOPFLASH报道基因构造根据标准流程转化为DH5α感受态细胞。使用EndoFree Maxi kit(Oiagen，Valencia，CA)对用于转染检验的质粒进行分离和纯化。
PC-12细胞培养。PC-12细胞被保存在补充了10％马血清、5％胎牛血清、4.5g/L葡萄糖、2mM L-谷氨酰胺、1.0mM丙酮酸钠和10μg/ml青霉素-链霉素的RPMI 1640中。
细胞分化。细胞培养盘用0.25mg/ml骨胶原(Cohesion，CA)、10μg/ml聚-L-赖氨酸(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)和12μg/ml聚乙烯亚胺(ICN，La Mesa，CA)预涂覆过夜。在涂覆过的盘上以15,000个细胞/cm2来培养细胞，并且通过在含有50ng/ml神经生长因子(NGF)(Sigma-Aldrich)的减少血清的培养基(1％胎牛血清)中培育10天，而使这些细胞分化为类神经元显型。含NGF的培养基每隔2-3天更换。
用化合物D处理。化合物D，β-连环蛋白/CBP相互作用的小分子抑制剂，以100mM的原料浓度溶解在DMSO中。分化的PC-12/L286V细胞用浓度不断升高的这种化合物处理4小时。然后在该处理期后开始转染。对于细胞分化实验，化合物D在整个分化期间以10μM的浓度与NGF一起加入。
转染。PC-12细胞在60毫米的盘上进行培养和分化。在10天的分化期的结尾，细胞用每60毫米盘上2μg报道基因构造，TOPFLASH和FOPFLASH，进行转染。转染是使用Superfect(Qiagen)根据厂商的用法说明来进行的。
荧光素酶分析。在转染后6小时，在100μl的细胞培养溶解剂(Promega，Madison，WI)中将细胞溶解，并且将其刮到微量离心管中。然后将该管以12000rpm短暂离心(大约10秒)以使细胞碎片结成小球。对20μl细胞溶解产物和来自荧光素酶检验系统(Promega)的100μl基质测量荧光素酶的活性。荧光素酶活性使用PackardLumiCount(Hewlett Packard)来测量。荧光素酶的量化进行三次，并且至少在三个独立的实验中重复。
免疫荧光。将细胞以10,000个细胞/cm2的密度涂在6孔培养板中无菌涂覆的22×22毫米盖玻片上。如前所述，开始10天的分化。然后在-20℃下于甲醇中将分化细胞固定15分钟。然后用PBS+0.1％Triton X-100进行15分钟的培育。在37℃下，将盖玻片与针对Ephrin B2受体(Santa Cruz Biotechnology)和Gap-43(Novus Biologicals)产生的抗体培育40分钟。在用PBS-Triton X-100进行一系列的清洗之后，施用与FITC(Jackson Immuno Resarch，Westgrove，PA)结合的第二抗体。使用固定在Nikon Eclipse E600直立型显微镜(Nikon，Melville，NY)上的Nikon PCM2000激光扫描共焦显微镜获取所有的玻片影像。
神经突生长的量化。由六个随机选取的显微视野(10×)中获取细胞计数。在每一个视野中，测定细胞总数，以及显示出神经突大于细胞体长度两倍的细胞的总数。然后将具有这种生长的细胞的数目表达为细胞总数的百分比。所获的值来自双重的三个独立实验。
RT-PCR。为分析Ephrin B2(EphB2)受体的mRNA水平，使用Trizol(Invitrogen-GIBCO-BRL，Baltimore，MD)将总的RNA由分化细胞中分离出来。在含有随机六聚物(50ng)的20μl总体积中，使用Superscirpt II逆转录系统(Invitrogen-GIBCO-BRL)，根据厂商的指南对2μg的RNA进行逆转录。PCR是在含有5μl cDNA、100pmol引物、100μM dNTPs、1×Taq缓冲液和1.5mM MgCl2的50μl体积中进行的。将反应混合物加热到80℃并保持10分钟，然后加入Taq。使cDNA放大25(EphB2受体)或15(GAPDH)个周期。一圈的放大由在94℃下1分钟、在60℃下2分钟和在72℃下2分钟，同时在72℃下最后延展10分钟而组成。PCR产物被重新溶解，并且在用溴化乙锭染色的2％凝胶中进行电泳以进行显现。所使用的EphB2受体PCR引物为，5’-CACTACTGGACCGCACGATAC-3’和5’-TCTACCGACTGGATCTGGTTCA-3’。用于GAPDH的引物对是5’-GGTGCTGAGTATGTCGTGGA-3’和5’-ACAGTGTTCTGGGTGGCAGT-3’。
结果
大鼠PC-12细胞衍生自神经嵴系谱，并且经过神经生长因子(NGF)处理，经历了分化变为神经突轴类交感神经的神经元(neurite-bearingsympathetic-like neuron)(Greene和Tischler，Proc Natl Acad Sci U S A73，2424(1976))。利用PC-12细胞基模型，表征了与PS-1突变，PS-1/L286V，相关的早发性FAD，对TCF/β-连环蛋白介导的转录和神经元分化的效果。说明了特异地阻断TCF/β-连环蛋白/CBP介导的转录，减轻了神经元分化中PS-1诱导的缺陷。
PC-12细胞稳定地超量表达了野生型PS-1(PS-1/WT)或突变体PS-1(PS-1/L286V)，并且载体转染对照细胞系(Guo等，Neuroreport，8，379(1996))被放置在涂覆有骨胶原、聚-L-赖氨酸和聚乙烯亚胺的盘上。用50ng/ml的NGF处理10天以诱导分化。超量表达的PS-1/WT细胞或者载体转染的细胞广泛形成了神经突(与来自ATCC的PC-12细胞克隆相似)，然而PS-1/L286V突变细胞仅仅形成了断株样的神经突(图4A-C)。此外，载体转染的PC-12对照和PS-1/WT细胞显示了神经原分化标记GAP-43的广泛表达(Gorgels等，Neurosic Lett.83，59(2987))(图4D、E)，然而PS-1/L286V细胞基本上没有这种标记(图4F)。
为评定PS-1/L286V突变对典型的Wnt/β-连环蛋白信号的效果，我们用Topflash，一种Wnt/β-连环蛋白信号报道基因构造，临时转染了NGF处理过的PC-12细胞(Morin等，Science 275，1787(1997))。如图4F中可见，超量表达的PS-1/WT细胞具有与载体对照细胞相似的TCF/β-连环蛋白信号水平。然而，PS-l/L286V突变细胞显示了明显提高的Topflash表达(10倍)。相反，负控制报道基因构造Fopflash未显示任何明显的不同。
假设PS-1/L286V突变细胞中调节异常的TCF/β-连环蛋白信号是有缺陷的分化和神经突生长的原因。为检验这一假定，使用了特定的TCF/β-连环蛋白信号的小分子抑制剂，化合物D(Emami等，CancerCell，in press)。该小分子选择性地阻断了β-连环蛋白/CBP的相互作用，而不是β-连环蛋白/p300的相互作用，从而中断了TCF/β-连环蛋白亚型的转录。与未处理的细胞相比(图4C)，类似于在超量表达的PS-1/WT细胞中所见的情况(图5A、B)，用10μM的化合物D加NGF处理PS-1/L286V突变细胞减少了TCF/β-连环蛋白报道基因转录，并且导致基本上正常的神经突生长和分化(图5A)。此外，用化合物D处理的PS-1/L286V突变体显示了与PS-1/WT和载体转染的细胞(图4B)相似的强GAP-43染色。为了说明化合物D处理过的突变细胞发展了与载体对照或PS-1/WT细胞相似的神经突，计算了具有大于细胞体长度两倍的神经突的细胞。用化合物D进行处理基本上将细胞轴神经突的百分比提高到与载体转染细胞和超量表达的PS-1/WT细胞(图5C)相似的水平。得到的结论是，阻断由TCF/β-连环蛋白/CBP介导的转录，修正了许多由于PS-1/L286V突变引起的神经突生长和神经元分化中的显型缺陷。
Ephrin B2受体(EphB2)与突触形成有关(Wilkinson，Nat.Rev.Neurosci.2，155(2001))，并且近来显示Ephrin A族在海马树突棘形态学中扮演角色(Murai等，Nat.Neurosci.6，153(2003))。观察了焦点EphB2表达，其在载体和PS-1/WT转染的细胞(图6A、B)中使得神经元过程局部化了，然而PS-1/L286V突变细胞显示了非常弱和分散的EphB2信号(图6C)。PS-1/L286V突变细胞中增大的TCF/β-连环蛋白信号，表明了其自身降低了的EphB2表达，如RT-PCR所判断的一样(图6E，线道3)。此外，加入10μM化合物D导致这些细胞中提高的EphB2信息(图6E，线道4)以及提高的EphB2表达(图6D)。这些结果与Batlle和同事的数据吻合(Batlle等，Cell 111，251(2002))，他们近来表示EphB2/EphB3受体及其配合基ephrin-B1的表达经由TCF/β-连环蛋白的转录在结肠隐窝中反向控制，并且合理的调节对于适当的细胞增殖、分化和分类来说是重要的。我们提出了PS-1/L286V突变的证据，经由提高的TCF/β-连环蛋白信号、降低的EphB2受体的表达，并且其由化合物D所介导的β-连环蛋白/CBP相互作用的抑制所修正。
                     实施例9
化合物D引起G1/S-阶段败育并且激活胱天蛋白酶的活性流式细胞仪分析(FACS)
为进行FACS分析，将大约5×106个用化合物D处理过的或者用载体处理过的细胞用70％的冷乙醇固定，并且在-20℃下存贮至少30分钟。这些细胞用1×PBS清洗一次，并且用碘化丙锭(PI)溶液(85μg/ml碘化丙锭，0.1％乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40)，10mg/mlRNAse)在室温下培育30分钟。使用Beckman Coulter EPICS XL-MCL流式细胞仪为每一个样品获取10,000个染色细胞，并且通过Expo32ADC软件(Coulter Corporation，Miami，Florida，33195)测定细胞周期的不同阶段中细胞的百分比。。
胱天蛋白酶-3活性检验
在处理前24小时将SW480，HCT116和CCD18Co细胞以每孔105个细胞(96-孔板)涂覆。向每个孔中加入25μM的化合物D或者对照(0.5％DMSO)。处理后24小时，将细胞溶解，并且使用胱天蛋白酶-3/7活性试剂盒(Apo-One均相胱天蛋白酶-3/7检验，#G77905，Promega)。通过由实验测量值减去空白(对照，无细胞)的单位值获得相对荧光单位(RFU)。
化合物D引起G1/S-阶段败育并且激活胱天蛋白酶的活性
已经显示了对细胞周期蛋白D1基因表达的抑制，在细胞周期的G1/S-阶段引起败育(Shintani等，“Infrequent alternations of RB Pathway(Rb-p 161INK4A-cyclin D1)in adenoid cystic carcinoma of salivaryglands”，Anticancer Res.20：2169-75(2000))。HCT116(图7A，上部的一系列)和SW 480(图7A，下部的一系列)细胞用化合物D(25μM)(图7A，右)或对照(0.5％DMSO)(图7A，左)处理24小时。随后用碘化丙锭(PI)将细胞染色，并且通过FACS细胞荧光光度术分析DNA含量。如所预期的，对照细胞，(图7A，左)具有正常的周期，然而用化合物D处理过的细胞(图7A，右)在细胞周期的G1/S-阶段显示出提高的积累。因此，可以看出化合物D在G1阶段引起了细胞的败育。
胱天蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶类，其通常在通过编程性细胞死亡刺激触发的细胞的给定种群中被激活。为评价SW480，HCT116和野生型colonocyte(CCD18Co细胞)，将细胞用化合物D(25μM)或者对照(0.5％DMSO)处理24小时，随后检验胱天蛋白酶-3/7的活性。如图7B所示，与CCD18Co细胞相比，在SW480和HCT116细胞中，化合物D特异地并且显著地激活了胱天蛋白酶-3/7通道。
                         实施例10
化合物D减少了转化的结肠细胞的增殖
软琼脂检验
软琼脂菌落形成检验是用SW480细胞通过具有某些修改的前述程序而进行的(Moody等，“A vasoactive intestinal peptide antagonistinhibits non-small cell lung cancer growth”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.90：4345-49(1993))。
6-孔板(Nalge Nunc International，Roskide，Denmark)的每一个孔(35mm)用1ml在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中的0.8％的底部琼脂(bottom agar)涂覆。在其固化后，将含有0.4％顶部琼脂(top agar)、10％胎牛血清、浓缩两倍的化合物和5,000个单个的活细胞的1ml DMEM培养基加入到每个孔中。在37℃下在加湿的5％CO2培养箱中对菌种进行培育。每天监控软琼脂中的菌落，并且在培育8天后拍照。计算出直径大于60μM的菌落数。
化合物D减少了转化的结肠细胞的增殖
软琼脂菌落形成检验是使用经化合物D(0.25-5μM)和5-氟尿嘧啶(5-FU)(0.5-32μM)处理过的SW480细胞来进行的。如图8A所示，化合物D显示出在菌落形成的数目中剂量相关的减少。化合物D和5-FU的IC50值分别为0.87±0.11μM和1.98±0.17μM。因此，化合物D提高了胱天蛋白酶的活性，并且减少了结肠细胞在体外的生长，该细胞是由激活了β-连环蛋白信号的突变所转化的。
                      实施例11
           化合物C降低了裸鼠模型中肿瘤的生长
在第0天的时候，将SW620细胞(9×106个细胞/鼠)皮下移植到裸鼠上。从第1天开始，小鼠每隔1天接受300mg/kg化合物C的腹腔内注射，4次后，每隔1天接受200mg/kg化合物C的腹腔内注射，直到第21天。与载体对照小鼠(图9A)相比，化合物C减少了治疗过的小鼠中肿瘤的生长，并且与那些载体对照小鼠(图9B)相比，轻微地降低了受治疗的小鼠的体重。
                     实施例12
             化合物D抑制了存活蛋白的表达
在转录和翻译两个层次上研究了化合物D对存活蛋白表达的效果。在转录层次上使用的方法包括cDNA微阵列分析、RT-PCR、存活蛋白报道基因检验和染色质免疫沉淀法(ChIP)。翻译层次上所使用的方法包括蛋白质印迹分析法和免疫化学。
在存活蛋白启动子控制下的含荧光素酶的质粒，被构造并且转染为野生型、CBP+/-或者p300+/-3T3细胞。结果(图10)显示Wnt1在三种类型的细胞中均激发了存活蛋白基因的表达，然而化合物D减少了存活蛋白基因的表达，并且减少了在那些细胞中Wnt1对存活蛋白基因表达的激发。类似地，化合物D及其类似物(化合物A)显示出抑制SW480细胞中存活蛋白的表达(图11)。
实时逆转录-PCR分析是根据由SYBR Green PCR Master Mix Kit(Perkin Elmer Biosystems，Shelton，ST)所提供的规约来进行的。用RNeasy Midi Kit(Qiagen)从用化合物D(25μM)或对照(0.5％DMSO)处理过24小时的细胞中，提取RT-PCR反应的总RNA样板。RT-PCR反应所使用的引物是5’-AGCCCTTTCTCAAGGACCAC-3’和5’-GCACTTTCTTCGCAGTTTCC-3’。表8显示了分析的结果。小于0.5的比率表明，由于化合物D的处理，基因表达有了显著的降低，而大于1.5的比率表明，基因表达有了显著的提高。如表8和图12所示，与对照相比，在化合物D的存在下，存活蛋白基因的表达有了显著地降低。
   表8有和无化合物D时的基因表达
 基因   比率(处理过的/DMSO对照)
 遍在蛋白   0.98
 GADPH   0.98
 HLAC   1.01
 存活蛋白   0.30
 PCNA   0.33
 抗原KI-67   0.45
 MIC-1   7.0
 GADD-153   7.00
对用化合物D(25μM)或对照(0.5％DMSO)处理过的SW 480细胞进行ChIP检验。如图13所示，存活蛋白启动子是通过对照处理细胞中的CBP、β-连环蛋白、Tcf4和乙酰化组蛋白而发生的。用化合物D进行处理降低了所有这些蛋白质与存活蛋白启动子的关联。
为了表征化合物D在翻译层次上对存活蛋白表达的效果，使用存活蛋白6E4单克隆抗体(Cell Signaling Technolgy)对单独用载体(0.5％DMSO)、10μM或25μM的化合物D或者5μM 5-FU处理过的细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。结果(图14A)显示，用两种浓度的化合物D进行处理和用5-FU进行处理减少了存活蛋白的量。用两种浓度的化合物D进行处理在降低存活蛋白表达方面比用5-FU进行处理更有效，并且用浓度较高(即，25μM)的化合物D进行处理最有效。
使用免疫荧光显微镜检查来进一步表征化合物D在翻译层次上对存活蛋白表达的效果。在不存在化合物D的情况下，存活蛋白局限于有丝分裂纺锤体，与染色体分离涉及存活蛋白的观念相符(图14B)。在用化合物D处理后在SW480细胞中未观察到该表达模式，而几乎没有或无存活蛋白被检测到(图14C)。
                    实施例13
      各种化合物对存活蛋白和TCF4表达的效果
表征了具有通式(I)的各种化合物对存活蛋白和TCF4表达的效果。结果如表9所示。
表9.化合物对存活蛋白和TCF4表达的效果
Figure G04815057319950320D003801
Figure A20048001505703911
Figure A20048001505703921
Figure A20048001505703931
Figure A20048001505703941
Figure A20048001505703951
Figure G04815057319950320D003862
Figure G04815057319950320D003871
                    实施例14
化合物D经由对存活蛋白表达的抑制促进了编程性细胞死亡
为确定化合物D对编程性细胞死亡的效果以及存活蛋白在这种效果中的作用，测量了胱天蛋白酶2和3在用化合物D或对照处理过的培养的肿瘤细胞中的活性。结果(图15)显示，(1)化合物D(2.5μM或5.0μM)激活了胱天蛋白酶3的活性，但是未激活胱天蛋白酶2的活性；(2)星形孢菌素(0.5μM)同时提高了胱天蛋白酶2和胱天蛋白酶3的活性；(3)用星形孢菌素和化合物D的共同处理产生了胱天蛋白酶3活性的协同刺激，但是未产生胱天蛋白酶2活性的协同刺激；以及(4)存活蛋白基因的转染降低了由星形孢菌素或化合物D的处理所诱导的胱天蛋白酶3活性的激活，和由星形孢菌素和化合物D的共同处理所诱导的胱天蛋白酶3活性的协同刺激。以上结果显示，化合物D经由对存活蛋白基因表达的抑制刺激了胱天蛋白酶3的活性。
通过测量用星形孢菌素(0.5μM)、化合物D(5.0μM)或这二者处理过的培养肿瘤细胞的细胞死亡，来进一步表特化合物D对编程性细胞死亡的效果和存活蛋白在这种效果中的作用。结果(图16)显示，化合物D和星形孢菌素二者均促进了细胞死亡，并且存活蛋白基因的转染降低了用星形孢菌素、化合物D、或这二者进行处理所诱导的细胞死亡的上升。以上结果显示，化合物D经由对存活蛋白基因表达的抑制促进了编程性细胞死亡。
为确定化合物D在细胞周期中的效果和存活蛋白在这种效果中的作用，对经过或未经过含有存活蛋白基因的构造的转染并且用星形孢菌素(0.5μM)、化合物D(5μM)、或者这二者进一步处理的培养肿瘤细胞进行FACS分析。结果(图17)显示，星形孢菌素和化合物D二者均在G0中提高了细胞的数目，并且细胞中存活蛋白的超量表达降低了用星形孢菌素、化合物D、或这二者进行处理的效果。这些结果显示，化合物D在细胞周期中的效果可能至少部分经由对存活蛋白基因表达的抑制。
将意识到，尽管为说明的目的在本文中对本发明的具体实施方式进行了说明，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以作出各种修改。因此，本发明除受所附权利要求限制外，不受其它限制。
本说明书所引用的和/或本申请数据表所列出的所有以上美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利文献，包括2002年3月1日提交的美国专利申请序列号第10/087,443号，和2001年10月12日提交的美国专利申请序列号第09/976,470号，均并入本文作为参考。
由前述内容可以意识到，尽管为说明的目的在本文中对本发明的具体实施方式进行了说明，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以作出各种修改。因此，本发明除受所附权利要求限制外，不受其它限制。

Claims (16)

1.一种具有以下式(VI)的化合物：
其中
Ra是苯基；带有一个或多个取代基的取代苯基，其中所述的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、羧基和羟基；
苄基；带有一个或多个取代基的取代苄基，其中所述的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-3烷氧基、羧基和羟基；或者
具有8至11个环原子的二环芳基，其可以具有1至3个选自氮、氧或硫的杂原子；
Rb是苯基，其可以具有一个或多个选自卤素和羟基的取代基；
Rc是饱和或不饱和的C1-6烃基、全氟C1-6烃基基团；并且X1、X2和X3可以相同或不同，并且独立地选自氢、羟基和卤素。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中
Ra是苯基；带有一个或多个取代基的取代苯基，其中所述的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、羧基和羟基；
苄基；带有一个或多个取代基的取代苄基，其中所述的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-3烷氧基、羧基和羟基；
萘基；
喹啉基；或者异喹啉基；并且
Rb是苯基，其任选地被一个或多个选自卤素和羟基的取代基所取代。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中
Ra是苯基；带有一个或多个取代基的取代苯基，其中所述的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-4烃基、C1-3烷氧基、羧基和羟基；
苄基；带有一个或多个取代基的取代苄基，其中所述的一个或多个取代基独立地选自一个或多个氨基、C1-4烃基氨基、C1-4二烃基氨基、卤素、全氟C1-4烃基、C1-3烷氧基、羧基和羟基；或萘基；并且
Rb是苯基，其任选地被一个或多个选自卤素和羟基的取代基所取代。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为：
Figure FSB00000031856600021
Figure FSB00000031856600031
Figure FSB00000031856600041
Figure FSB00000031856600051
Figure FSB00000031856600061
Figure FSB00000031856600071
Figure FSB00000031856600081
Figure FSB00000031856600091
Figure FSB00000031856600101
Figure FSB00000031856600111
Figure FSB00000031856600121
Figure FSB00000031856600131
Figure FSB00000031856600142
Figure FSB00000031856600151
Figure FSB00000031856600161
Figure FSB00000031856600171
Figure FSB00000031856600201
Figure FSB00000031856600231
Figure FSB00000031856600241
5.化合物，其为：
Figure FSB00000031856600251
Figure FSB00000031856600261
Figure FSB00000031856600271
Figure FSB00000031856600291
Figure FSB00000031856600321
Figure FSB00000031856600331
Figure FSB00000031856600351
Figure FSB00000031856600381
Figure FSB00000031856600391
Figure FSB00000031856600401
Figure FSB00000031856600421
Figure FSB00000031856600422
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Figure FSB00000031856600471
Figure FSB00000031856600481
Figure FSB00000031856600511
Figure FSB00000031856600521
Figure FSB00000031856600531
Figure FSB00000031856600541
Figure FSB00000031856600551
6.一种药学组合物，其含有根据权利要求1-5中任意一项所述的化合物和药学可接受的载体。
7.根据权利要求6所述的药学组合物，所述组合物含有安全和有效量的所述化合物。
8.一种用于进行结合分析的方法，包括：
a)提供含有第一共激活剂和相互作用蛋白的组合物，所述第一共激活剂含有结合基序LXXLL、LXXLI或FXXFF，其中X是任意氨基酸；
b)使所述第一共激活剂和所述相互作用蛋白与测试化合物结合；以及
c)在所述化合物的存在下，检测第一共激活剂与相互作用蛋白之间的结合的改变；
其中所述测试化合物选自权利要求1-5中任意一项所述的化合物，其中所述方法于体外进行。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述相互作用蛋白是转录因子或第二共激活剂。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述相互作用蛋白选自RIP140；SRC-1/NCoA-1；TIF2/GRIP-1/SRC-2；p/CIP/RAC3/ACTR/AIB-1/TRAM-1/SRC-3；CBP/p300；TRAPs/DRIPs；PGC-1；CARM-1；PRIP/ASC-2/AIB3/RAP250/NRC；GT-198和SHARP/CoAA/p68/p72。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述相互作用蛋白选自TAL 1；p73；MDm2；TBP；HIF-1；Ets-1；RXR；p65；AP-1；Pit-1；HNF-4；Stat2；HPV E2；BRCA1；p45/NF-E2；c-Jun；c-myb；Tax；Sap 1；YY1；SREBP；ATF-1；ATF-4；Cubitus；Interruptus；Gli3；MRF；AFT-2；JMY；dMad；PyLT；HPV E6；CITTA；Tat；SF-1；E2F；junB；RNA解旋酶A；C/EBPβ；GATA-1；Neuro D；Microphthalimia；E1A；TFIIB；p53；P/CAF；Twist；Myo D；pp9O RSK；c-Fos和SV40Large T。
12.根据权利要求8所述的方法，其中所述相互作用蛋白选自ERAP140；RIP140；RIP160；Trip1；SWI1/SNF；ARA70；RAP46；TIF1；TIF2；GRIP1和TRAP。
13.根据权利要求8所述的方法，其中所述相互作用蛋白选自VP16；VP64；p300；CBP；PCAF；SRC1PvALF；AtHD2A；ERF-2；OsGAI；HALF-1；C1；AP-1；ARF-5；ARF-6；ARF-7；ARF-8；CPRF1；CPRF4；MYC-RP/GP和TRAB1。
14.根据权利要求8所述的方法，其中所述第一共激活剂是CBP或p300。
15.根据权利要求1-5中任意一项所述的化合物或根据权利要求6或权利要求7所述的组合物在制备用于抑制肿瘤生长的药物中的应用，其中所述肿瘤是结肠癌。
16.根据权利要求1-5中任意一项所述的化合物或者根据权利要求6或权利要求7所述的组合物在制备用于治疗或预防结肠癌的药物中的应用。
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