CN1796403A - 用于多型人乳头瘤病毒感染防治的多肽和疫苗 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种能同时诱导针对多种型别，尤其是同时诱导对高危型和低危型均能产生免疫反应的多肽，以及含有该多肽的疫苗组合物。本发明的疫苗组合物可预防多种型别HPV感染和/或治疗部分型别HPV感染性疾病。

Description

用于多型人乳头瘤病毒感染防治的多肽和疫苗

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体地涉及用于多型人乳头瘤病毒(HPV)感染防治的多肽和疫苗，所述的多肽衍生自HPV外壳蛋白1。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的DNA的病毒，已发现有100多个型。其中HPV16、18、31、33、45、58型是引起消化道、生殖道癌的一个主要因素，特别是宫颈恶性肿瘤；HPV6、11是引起尖锐湿疣等性传播性疾病的重要致病因素^[1-5]。为了有效预防这类病毒的感染和传播，世界各国都在积极开展HPV疫苗的研制。

HPV疫苗大致可分为治疗性疫苗和预防性疫苗两大类，由于HPV至今不能经组织培养，且含有潜在致癌性DNA，故疫苗不能采用HPV减毒活疫苗或死疫苗。肿瘤细胞内病毒癌蛋白E6和E7属于组成型表达，因而可以将它们视作免疫治疗的基本靶抗原，故治疗性的疫苗主要是以HPV早期蛋白E6、E7作为目的蛋白，主要是针对HPV感染后的治疗，尤其对已经发生上皮内变异，或上皮内原位癌的治疗，如CIN，此类疫苗基本不具有HPV感染的预防作用^[6，7]。外壳蛋白L1、L2位于病毒的表面，机体针对L1、L2的免疫，可以有效的保护宿主不受感染，因而预防性疫苗主要是以HPV晚期蛋白L1、L2为目的蛋白，此类疫苗同时对某些型HPV感染所致的疾病具有治疗作用^[8-13]。L1疫苗的表现形式又有L1全蛋白，融合蛋白，嵌合蛋白及短肽等不同形式。HPV L1具备在单独表达体系中自行组装，形成不含病毒DNA病毒样颗粒(VLP)的能力，在一定程度上，能够替代天然病毒，诱导产生针对天然病毒的保护性抗体，防止病毒的感染或再感染^[11]。

VLP疫苗大致可以分为3类。

最常见的是仅由L1单独构成的疫苗，其通过诱导中和性抗体来预防生殖道HPV感染。许多型别的VLP在动物实验均已取得良好的结果。目前，HPV16及其它一些型别的VLP疫苗的临床试验已经开始，初步的全身性的免疫结果显示，能诱导高滴度的中和性抗体，而没有明显的副作用^[10，12]。但不足之处是以HPV16 L1 VLP作疫苗，生产成本较高，且其对其它型别的HPV无预防或治疗作用。Zhang LF等用HPV6 L1 VLP免疫生殖器疣患者也得到了类似的结果，以HPV6 L1VLP免疫对高危型HPV无交叉反应^[14]。刘跃华等报道，其表达的HPV6b L1 VLP诱导的抗血清，除能与HPV6b发生反应外，还能与HPV11发生反应。但且其结果未有其他研究者的实验证实及后继的相关报道，且其反应仅限于两个低危HPV型间，未能与高危型HPV反应^[15]。

第二类是由L1和L2共同构成的疫苗，尽管其预防性效果好于L1单独构成的VLP，但其在制备和成本方面具有明显的劣势。

第三类是将其它乳头瘤病毒蛋白的多肽整合入VLP，成为CVLP，L1或L2为融合蛋白。设计这类嵌合VLP目的想通过诱导对病毒非结构性蛋白，如E7的细胞免疫反应，以增强HPV疫苗的治疗作用。小鼠实验的结果显示，这类疫苗在保持诱导高滴度中和抗体的能力的同时，还产生了抗肿瘤的CTL反应^[16-21]。Thompson HS等及Lacey CJ等用E.coli表达的HPV6L2/E7融合蛋白对一些由HPV6和11所致的、反复发作的生殖器疣进行了治疗，取得了一定的效果。但他们的研究具有的不足仍是对高危型HPV无交叉反应^[22，23]。

既往的许多研究均证实，相近型别的共同表位较之病毒外壳主要型特异性B-细胞决定簇的免疫原性低，且抗原性也有显著的不同。Giroglou T等用ELISA和交叉中和实验，对数种高危HPV16，18，31，33和45型病毒及VLP多克隆免疫血清进行了检测^[8]。进一步证实，尽管家族性L1基因序列变化的程度不同，每一受检型别VLP所诱导的高滴度抗血清多克隆抗体完全是型特异性的。体外感染活性检测，VLP抗血清的中和作用只能发生在同型的HPV病毒之间。仅HPV31和HPV45 VLP免疫血清显示具有低水平的分别对HPV18和HPV33病毒的中和作用。表位阻塞实验的结果提示，主要型特异性外壳蛋白抗原位点与病毒的中和之间具有密切的关联。研究结果支持乳头瘤病毒基因型决定着病毒的独特血清型的观点^[24-26]。

由于病毒的变异性，制作全价的通用疫苗，困难较多，以表位为基础的多肽疫苗开始受到人们的重视。为寻找HPV L1的共同表位，以期达到一种疫苗针对多型HPV的目的，许多研究者采用短肽筛选的办法进行确定。然而，至今未能取得理想的结果。

以HPV16为例，以短肽筛选法前后共有27个不同的氨基酸序列被鉴定为B-细胞表位，覆盖L1氨基酸残基序列总长度的63.2％。它们可以诱导产生能够与HPV16病毒颗粒或与L1发生反应的抗体，或能够与HPV16病毒颗粒或L1诱导的抗体发生反应^[27，28]。但时至今日，真正在HPV16 L1氨基酸序列上得到公认的B-细胞表位是位于aa233-253之间的一段序列。对于这样的结果，研究者普遍的观点是：L1相对保守的氨基酸序列多为埋于蛋白内的区段，而代表型特异性的变异较大的区段多为为于蛋白表面的区段；能够发生型间交叉反应的氨基酸序列多为位于蛋白内部的线性表位，而代表型特异性的氨基酸序列多为位于蛋白表面的结构性表位；L1(aa233-253)位于蛋白的表面，但其具有极为明显的型特异性。

基于多肽的疫苗较之于其它种类的疫苗具有许多优点。首先，没有减毒活疫苗的危险；其次，保护性的免疫反应可以通过表位进行选择，或制成各种多价疫苗；第三，潜在性的有害表位，如促进HIV感染的、与宿主蛋白同源的，可以被选择性的剔除，从而大大降低副反应；第四，肽苗具有安全性好、可大规模基因工程生产和化学合成，易干纯化等优点。如van Driel WJ等以HPV16 E7短肽为疫苗，对经一般治疗无效的HPV16阳性子宫颈癌患者进行了I、II期临床试验，显示具有一定的效果，但其对HPV16感染无预防作用^[29]。

现有的HPV疫苗的研究成果，最大的不足就是所设计的疫苗不能同时针对多种型别的HPV，尤其是不能同时诱导针对高危型和低危型HPV的免疫反应，或不能同时针对多种型别的HPV感染产生预防或治疗作用。迄今为止，由于HPV型特异性强，型间交叉反应少，还没有一种针对多型的HPV疫苗应用于临床。

因此，本领域迫切需要开发针对多型HPV的预防性和/或治疗性的疫苗，以便有效控制与HPV相关疾病的传播与发生。

发明内容

本发明的目的就是提供一种能同时诱导针对多种型别，尤其是同时诱导对高危型和低危型均能产生免疫反应的多肽和疫苗，以便用一种疫苗来预防多种型别HPV感染和/或治疗部分型别HPV感染性疾病。

在本发明的第一方面，提供了一种多肽，该多肽选自下组：

(a)具有SEQ ID NO：1氨基酸序列的多肽；

(b)将SEQ ID NO：1氨基酸序列经过1-3个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有引发针对至少3种HPV型别的免疫应答的由(a)衍生的多肽。

在另一优选例中，所述的短肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、或9。

在本发明的第二方面，提供了一种抗体，所述的抗体特异性地与本发明上述的的多肽结合。

在另一优选例中，所述的抗体是单克隆抗体。

在本发明的第三方面，提供了本发明所述多肽的用途，它被用于制备抗至少3种(较佳地至少4种)HPV型别的抗体。

在本发明的第四方面，提供了本发明所述多肽的用途，它被用于制备预防或治疗至少3种(较佳地至少4种)HPV型别的药物组合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物是疫苗组合物。

在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，它含有本发明所述的多肽(如0.01wt％-99.9wt％)以及药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的药物组合物含有免疫有效量的权利要求1所述的多肽以及任选的药学上可接受的佐剂。

附图说明

图1显示了兔抗血清(RSs-P30)及鼠抗血清(Msa-P30)对重组HPV6b L1(6b-L1)、HPV16(Caski)及HPV18(Hela)的反应无明显差异。

图2显示了Western印迹结果。1，2道为重组HPV16 L1；3道为Caski培养细胞裂解液，4道为Hela培养细胞裂解液；5，6道为重组HPV6b L1。

图3显示了Caski培养细胞，Kawana HPV16 L1单克隆抗体HRP免疫组织化学染色。可见细胞胞浆内染色深，胞核区无反应，呈负染状态。

图4显示了Caski培养细胞，兔抗短肽抗血清HRP免疫组织化学染色。可见细胞胞浆内染色深，呈现出与Kawana HPV16 L1单克隆抗体反应一致的染色特性。

图5显示了Hela培养细胞，Kawana HPV16 L1单克隆抗体HRP免疫组织化学染色。可见细胞胞浆内染色深，胞核区无反应，呈负染状态。

图6显示了Hela培养细胞，兔抗短肽抗血清HRP免疫组织化学染色。可见细胞胞浆内染色深，呈现出与Kawana HPV16 L1单克隆抗体反应一致的染色特性。

具体实施方式

本发明人经过多年广泛而深入的研究，对多种HPV病毒潜在抗原蛋白的序列分析，在一段可诱导针对多型HPV抗体的多肽基础上，找到了兼具很强抗原性和广谱性的氨基酸序列。通过多肽合成，制得该抗原递呈细胞靶向性的HPV广谱性多肽，并对多肽进行的免疫研究表明：该多肽可同时诱导针对多种型别HPV，尤其是同时诱导对高危型HPV和低危型HPV均能产生免疫反应。因此可用于制备有效的抗多型别HPV的疫苗，实现用一种疫苗预防多种型别HPV感染和/或治疗部分型别HPV所致感染性疾病。

如本文所用，“本发明多肽”、“本发明短肽”、“HPV多特异性多肽”、“抗多型别HPV的免疫原性短肽”等可互换使用，指序列如SEQ ID NO：1所示的多肽或其保守性衍生多肽，该多肽可引发针对至少3种(较佳地至少4种)HPV型别的免疫应答。优选的本发明多肽是氨基酸序列如表1所示的多肽(SEQ IDNO：1-9)。

在一个优选例中，本发明多肽以HPV16 L1 448-477aa区段的蛋白序列为基础，并且为了针对多种型别的HPV，在465位引入G→A突变，形成SEQ ID NO：1所示的多肽。

在本发明中，“保守性衍生多肽”指与SEQ ID NO：1的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸差异的多肽。较佳地，所示的差异是用性质相似或相近的氨基酸进行替换。在一优选例中，这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。

                   表A

最初的残基	代表性的取代	优选的取代
			Ala(A)	Val；Leu；Ile	Val
Arg(R)	Lys；Gln；Asn	Lys
			Asn(N)	Gln；His；Lys；Arg	Gln
Asp(D)	Glu	Glu
			Cys(C)	Ser	Ser
Gln(Q)	Asn	Asn

Glu(E)	Asp	Asp
			Gly(G)	Pro；Ala	Ala
His(H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
			Ile(I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe	Leu
Leu(L)	Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
			Lys(K)	Arg；Gln；Asn	Arg
Met(M)	Leu；Phe；Ile	Leu
			Phe(F)	Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Leu
Pro(P)	Ala	Ala
			Ser(S)	Thr	Thr
Thr(T)	Ser	Ser
			Trp(W)	Tyr；Phe	Tyr
Tyr(Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
			Val(V)	Ile；Leu；Met；Phe；Ala	Leu

本发明多肽可用常规方法人工合成，也可用重组方法生产。因此本发明还涉及编码本发明多肽的核酸序列、含所述核酸序列的表达载体、以及含所述表达载体的宿主细胞。

例如，SEQ ID NO：1序列可作为基本结构单元，借连接段肽链连接，形成具有多个重复结构的蛋白(或长肽)。

无论是单体还是多体形式的本发明多肽，都可用于制备预防性和/或治疗性疫苗，用于各型HPV的感染预防和/或多种低危型HPV感染性疾病的治疗。

此外，本发明多肽还与其它具有佐剂效应的蛋白相联接，形成融合蛋白。该融合蛋白也可用于制备预防性和/或治疗性疫苗，用于各型HPV的感染预防和/或多种低危型HPV感染性疾病的治疗。

此外，本发明多肽还可与化学合成佐剂或生物佐剂混合后使用，用于各型HPV的感染预防和/或多种低危型HPV感染性疾病的治疗。

此外，本发明多肽还可与BSA等分子量的蛋白偶联，从而形成多肽偶联物。通常，所述的偶联物由多肽、交联剂、和BSA构成，其中所述的交联剂优选戊二醛(当与本发明多肽的N-端偶联时)、EDAC(当与本发明多肽的C-端偶联时)。

本发明多肽或其偶联物可用于免疫兔、鼠等动物，从而获得抗本发明多肽的抗体(“本发明抗体”)。本发明抗体包括特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于HPV病毒、基因产物或片段。

本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段(如Fab′或(Fab)₂片段)、抗体重链、抗体轻链、嵌合抗体、人源化抗体等。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的本发明多肽或偶联物，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。对于单克隆抗体，可利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人，Nature 256；495，1975；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6：511，1976；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6：292，1976；Hammerling等人，In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.，1981)。

本发明的抗体可用检测样品中是否存在HPV病毒。

本发明的多肽和偶联物还可用于制备治疗性的药物组合物或预防性的疫苗组合物。因此，另一方面，本发明还提供了一种组合物(包括药物组合物如疫苗组合物)，它含有(a)安全有效量的本发明多肽、偶联物或其组合物；以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐剂、及其组合。本发明的组合物可通过常规方法进行制备。此外，载体和配制方法的例子可以参见《Remington药物科学》(Remington’s Phamaceutical Science)。

以本发明多肽计，其用量例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与佐剂或其他治疗剂一起使用。

在优选例中，本发明的组合物是疫苗组合物。本发明的疫苗可以是预防性的(即预防感染)或治疗性的(即在感染后治疗疾病)。

本发明的疫苗组合物包含本发明的针对多型别HPV的免疫性短肽(如SEQID NO：1-9，较佳地SEQ ID NO：1)和“药学上可接受的载体”。这些载体包括本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体的任何载体。合适的载体通常是大的、代谢缓慢的大分子，如多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、氨基酸聚合物、氨基酸共聚物、脂质凝集物(如油滴或脂质体)以及无活性的病毒颗粒。这些载体是本领域普通技术人员所熟知的。另外，这些载体可起免疫刺激剂(“佐剂”)作用。另外，抗原或免疫原可以和细菌类毒素(如白喉、破伤风、霍乱、幽门螺杆菌等病原体的类毒素)偶联。

增强组合物效果的较佳的佐剂包括但不局限于：(1)铝盐(alum)，如氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝等；(2)水包油型乳剂配方(有或没有其它特异性的免疫刺激剂，如胞壁酰肽(见下文)或细菌细胞壁成分)，例如，(a)MF59(PCT出版物No.WO 90/14837)，其含有5％鲨烯、0.5％吐温80和0.5％Span 85(任选地含有不同量的MTP-PE(见下文)，虽然并不需要)，用微量流化器(如110Y型微量流化器(Microfluidics，Newton，MA))制成亚微米级颗粒；(b)SAF，其含有10％鲨烯、0.4％吐温80、5％普卢兰尼克(pluronic)嵌段聚合物L121以及thr-MDP(见下文)，微量流化成亚微米级乳剂或涡流振荡产生粒径较大的乳剂，和(c)Ribi^TM佐剂系统(RAS)(Ribi Immunochem，Hamilton，MT)，其含有2％鲨烯、0.2％吐温80以及取自单磷酰脂A(MPL)、二霉菌酸海藻糖酯(TDM)、和细胞壁骨架(CWS)的一种或多种细菌细胞壁组分，较佳的是MPL+CWS(Detox^TM)；(3)皂素佐剂，例如可采用Stimulon^TM(Cambridge Bioscience，Worcester，MA)或从其产生的颗粒，如ISCOM(免疫刺激性复合物)；(4)Freund完全佐剂(CFA)和Freund不完全佐剂(IFA)；(5)细胞因子，如白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、干扰素(如γ干扰素)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CFS)、肿瘤坏死因子(TNF)等；(6)细菌ADP-核糖基化毒素(如霍乱毒素CT，百日咳毒素PT或大肠杆菌热不稳定毒素LT)的脱毒变异体，尤其是LT-K63、LT-R72，CT-S109、PT-K9/G129；参见例如WO93/13302和WO92/19265；以及(7)作为免疫刺激剂来增强组合物效果的其它物质。

包括免疫原性组合物在内的疫苗组合物(如可包括抗原，药学上可接受的载体以及佐剂)，通常含有稀释剂，如水，盐水，甘油，乙醇等。另外，辅助性物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等可存在于这类运载体中。

本发明的疫苗组合物包含免疫学有效量的本发明免疫原性多肽以及上述其它所需的组分。“免疫学有效量”指以单剂或连续剂一部分给予个体的量对治疗或预防是有效的。该用量根据所治疗个体的健康状况和生理状况、所治疗个体的类别(如非人灵长类等)、个体免疫系统合成抗体的能力、所需的保护程度、疫苗的配制、治疗医师对医疗状况的评估、及其它的相关因素而定。预计该用量将在相对较宽的范围内，可通过常规实验来确定。

通常，可将疫苗组合物或免疫原性组合物制成可注射剂，例如液体溶液或悬液；还可制成在注射前适合配入溶液或悬液、液体赋形剂的固体形式。该制剂还可乳化或包封在脂质体中，在上述药学上可接受的载体下增强佐剂效果。

常规方法是从肠胃外(皮下或肌内)途径通过注射给予免疫原性组合物。适合其它给药方式的其它配方包括口服、或透皮给药。治疗剂量可以是单剂方案或多剂方案。疫苗可以结合其它免疫调节剂一起给予。

本发明的主要优点在于：

(a)本发明多肽可同时诱导针对多种型别HPV，尤其是同时诱导对高危型HPV和低危型HPV均能产生免疫反应。所诱导的高滴度的抗短肽抗血清能分别与重组HPV6b L1，重组HPV16 L1，HPV16及HPV18病毒发生反应。

(b)本发明多肽不含潜在性的有害表位，从而大大降低副反应，安全性好。

(c)本发明的多肽易于大规模基因工程生产和化学合成，并且纯化简便。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

特异性肽段抗血清的制备

(a)HPV L1短肽的合成

在本实施例中，以HPV16 L1 448-477aa区段的蛋白序列为基础，为了针对多种型别的HPV，在465位引入G→A突变。

设计后的HPV L1短肽长度为30个氨基酸，序列如下：

N端-EVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK-C端(SEQ ID NO：1)。

委托北京赛百盛基因技术有限公司在美国Genemed Synthesis Inc.公司用常规方法合成该HPV L1短肽。

(b)抗血清的制备

将如上合成短肽以PBS溶解后，1∶1加Furend.s完全佐剂，乳化后分别以25ug及10ug的剂量免疫日本长耳大白兔及Balb/c小鼠，共3次。于最后一次免疫的第14天，处死动物，取抗短肽的兔抗血清及鼠抗血清。

实施例2

短肽免疫抗血清免疫特异性的ELISA检测

HPV16病毒颗粒、重组HPV16 L1 VLP、HPV6b L1 VLP、HPV16病毒颗粒小鼠抗血清、重组HPV16 L1 VLP及HPV6b L1 VLP的兔和小鼠抗血清均获自中国医学科学院基础医学研究所；HPV16 L1单克隆抗体获自日本国立传染病研究所。HRP标记及荧光标记二抗购于北京中山生物技术有限公司(Sigma产品)。Caski细胞及Hela细胞均购自武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。

分别将HPV16病毒、重组HPV16 L1 VLP、HPV6b L1 VLP、含HPV16病毒的Caski培养细胞及含HPV18的Hela培养细胞裂解液或它们的培养液包被塑料板，以免或小鼠的抗短肽抗血清与之进行反应。

结果如图1所示。小鼠及兔的短肽免疫抗血清，能使HPV16病毒、重组HPV16L1 VLP及HPV6b L1 VLP包被的塑料板呈现阳性反应；能使含HPV16病毒的Caski培养细胞及含HPV18的Hela培养细胞裂解液或它们的培养液所包被的塑料板呈现阳性反应。

实施例3

短肽免疫抗血清免疫特异性的Western印迹检测

分别将Caski细胞、Hela细胞和HPV6b及16 L1重组杆状病毒转染后培养72小时的昆虫细胞进行裂解，裂解液作SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜后以兔抗短肽抗血清作一抗。

结果如图2所示。在蛋白分子量约为56K的区间，均可见有一条阳性反应带。

实施例4

短肽免疫抗血清免疫特异性的培养细胞的免疫组织化学检测

将Caski细胞、Hela细胞以24孔板培养于盖玻片之上，分别以Kawana HPV16单克隆抗体、HPV16病毒颗粒小鼠抗血清或重组HPV16 L1 VLP小鼠抗血清作为阳性一抗对照，检测兔抗短肽抗血清对Caski细胞内HPV16及Hela细胞内HPV18的反应性。

结果如图3-6所示。抗短肽抗血清可使培养Caski细胞的胞质内呈现强阳性反应，可见阳性反应仅出现于胞浆之内，胞质被染成棕黄色，胞核透亮，呈负染状态。反应特征与Kawana HPV16单克隆抗体、HPV16病毒颗粒小鼠抗血清或重组HPV16 L1 VLP小鼠抗血清对此细胞的反应完全一致。Hela细胞的反应与Caski细胞相同。

实施例5

类似于HPV L1短肽的其他免疫原性多肽

按照实施例1的类似方式，合成表1所示的类似于HPV L1短肽的其他免疫原性多肽：

                 表1HPV多特异性短肽

名称	序列	SEQ ID NO：
			短肽1(HPV L1短肽)	EVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK	1
短肽2	EVDLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK	2
			短肽3	EVNLKEKFSADLDQFPLAKKFLLQAGLKAK	3
短肽4	EVNLKEKFSADLDQFPLARRFLLQAGLKAK	4
			短肽5	EVNLKEKFSADLDQYPLARKFLLQAGLKAK	5
短肽6	FWEVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK	6
			短肽7	WEVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK	7
短肽8	EVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLRAK	8
			短肽9	NVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK	9

按照实施例1相同的方式制备小鼠的抗血清，按实施例2相同方式测试抗血清与HPV6b L1、HPV16 L1、HPV16、HPV18的免疫特异性，结果如下表2所示：

               表2免疫特异性测试结果

抗血清	HPV6b L1	HPV16 L1	HPV16	HPV18
					抗短肽2的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
抗短肽3的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
					抗短肽4的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
抗短肽5的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
					抗短肽6的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
抗短肽7的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
					抗短肽8的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
抗短肽9的抗血清	阳性	阳性	阳性	阳性
					对照(短肽1)	阳性	阳性	阳性	阳性

实施例6

疫苗组合物

按以下配方，通过常规的混合法制备一疫苗组合物：

10微克短肽(SEQ ID NO：1)+1毫克磷酸铝(AlPO₄)。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

参考文献

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                               序列表

<110>三峡大学

<120>用于多型人乳头瘤病毒感染防治的多肽和疫苗

<130>048875

<160>9

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>1

Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>2

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>2

Glu Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>3

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>3

Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Lys Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>4

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>4

Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Arg Arg Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>5

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>5

Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Tyr Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>6

<211>32

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>6

Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln

1               5                   10                  15

Phe Pro Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>7

<211>31

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>7

Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe

1               5                   10                  15

Pro Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

<210>8

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>8

Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Arg Ala Lys

            20                  25                  30

<210>9

<211>30

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<221>misc_feature

<223>抗多型别HPV的免疫原性短肽

<400>9

Asn Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro

1               5                   10                  15

Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys

            20                  25                  30

Claims (9)

1.一种多肽，其特征在于，该多肽选自下组：

(a)具有SEQ ID NO：1氨基酸序列的多肽：

(b)将SEQ ID NO：1氨基酸序列经过1-3个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有引发针对至少3种HPV型别的免疫应答的由(a)衍生的多肽。

2.如权利要求1所述的短肽，其特征在于，其氨基酸序列为SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、或9。

3.一种抗体，其特征在于，所述的抗体特异性地与权利要求1所述的多肽结合。

4.如权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述的抗体是单克隆抗体。

5.权利要求1所述的多肽的用途，其特征在于，用于制备抗至少3种HPV型别的抗体。

6.权利要求1所述的多肽的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗至少3种HPV型别的药物组合物。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物是疫苗组合物。

8.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，它含有免疫有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的佐剂。

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