CN1793846A - 一种监测叶绿素a的方法 - Google Patents
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Abstract
一种监测叶绿素a的方法,属于环保监测技术,是对现有的分光光度法的改进,包括有下列步骤组成:(1)采集水样;(2)过滤水样;(3)提取;(4)离心测定光密度;(5)最后按给出的叶绿素a浓度计算公式,计算样品提取液中的叶绿素a浓度。与现有技术相比,本发明提高了试验的效率,加快了试验的进程,还具有操作方便、快捷等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种监测方法,特别是涉及一种监测叶绿素a的方法,属于环保监测技术。
背景技术
藻类具有叶绿体,含有叶绿素a,b,c,d,各类胡萝卜素及叶黄素等,能够进行光合作用。叶绿素a包含在所有的藻类之中,约占藻体有机物干重的1%-2%。在光合作用过程中,叶绿素b,c,d所吸收的光能都要传递给叶绿素a,因而叶绿素a是间接衡量藻类生物量的较理想指标。在利用化学氧化剂除藻时,不宜采用计数法。大多数强氧化剂能够穿透藻类细胞壁,快速扩散至藻细胞内部氧化叶绿素,使藻类代谢终止,并死亡。由于氧化剂直接作用于叶绿素,使得叶绿素a法更具有实际意义。但药品在常用剂量范围内,不足以使藻体完全溶裂,因而藻细胞减少有限,镜检可见完整的硅藻细胞结构。对于群体藻类较多的水体而言,氧化剂还会破坏细胞间的胶质,导致藻细胞分散开来,给计数工作带来极大困难和误差。现有监测叶绿素a的方法主要有分光光度法和荧光光度法。其中分光光度法监测叶绿素a的机理是:由于在叶绿素a的吸收光谱曲线上存在最大的吸收峰663nm,故可用分光光度测定其含量。在实际操作中,由于其操作步骤的缺陷,致使试验的进展缓慢,无法满足日益严格的环保监测需要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的上述不足,在通过大量的试验后,对现有的分光光度法进行了改进,给出了一种监测叶绿素a的方法,这种新的监测方法提高了试验的效率,加快了试验的进程。具有操作方便、快捷等优点。
本发明给出的技术方案是:这种监测叶绿素a的方法包括有下列步骤组成
(1).采集水样:每天须在同一时间,同一取样点,液面下同一深度采集水样;
(2).过滤水样:在避光条件下进行抽滤,在蔡氏滤器上装好滤膜,将刚采集来的水样进行稀释,取出100mL稀释完的水样进行抽滤,抽滤时,抽滤的压力不大于150mm汞柱,在水样被抽干前加入0.2mLMgCO3悬液,直至抽干水样;
(3).提取:将滤膜放于研钵内,加2~3mL90%的丙酮溶液,匀浆,然后用移液管将匀浆移入带刻度的玻璃离心管中,用90%丙酮冲洗两次,最后补加90%丙酮于离心管中,使管内总体积为10mL,塞紧塞子并注意遮光,充分振荡,放入温度为4C°冰箱内避光提取18~24h;
(4).离心测定光密度:提取完毕后,置离心管于3500r/min的台式离心机上,进行对称布置离心10min取出离心管,用移液管将上清液移入刻度离心管中,塞上塞子,3500r/min再离心10min;用移液管将提取液移入1.5cm比色皿中,将比色皿放入分光光度计4中,以体积分数90%的丙酮溶液作为空白,待提取液稳定20min后,分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的光密度(OD);
(5).最后按下列的叶绿素a浓度计算公式,计算样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为:
Pa(ug/L)=11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)
在本发明给出的上述技术方案中,所采用的设备、试剂、计算公式均为现有技术。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:提高了试验的效率,加快了试验的进程,还具有操作方便、快捷等特点。
附图说明
图1为本发明给出实施例的流程图;
图2为在玻璃离心管中,叶绿素a值随稳定时间的变化情况;
图3为在塑料离心管中,叶绿素a值随稳定时间的变化情况。
具体实施方式
如图1所示,这种监测叶绿素a的方法有:(1).采集水样:每天须在同一时间,同一取样点1液面下同一深度采集水样;(2).过滤水样:在避光条件下进行抽滤,在蔡氏滤器上装好滤膜,将刚采集来的水样进行稀释,取出100mL稀释完的水样进行抽滤,抽滤时,抽滤的压力不大于150mm汞柱,在水样被抽干前加入0.2mLMgCO3悬液,直至抽干水样;(3).提取:将滤膜放于研钵内,加2~3mL90%的丙酮溶液,匀浆,然后用移液管将匀浆移入带刻度的玻璃离心管中,用90%丙酮冲洗两次,最后补加90%丙酮于离心管中,使管内总体积为10mL,塞紧塞子并注意遮光,充分振荡,放入温度为4C°冰箱3内避光提取18~24h;(4).离心测定光密度:提取完毕后,置离心管于3500r/min的台式离心机2上,进行对称布置离心10min取出离心管,用移液管将上清液移入刻度离心管中,塞上塞子,3500r/min再离心10min;用移液管将提取液移入1.5cm比色皿中,将比色皿放入分光光度计4中,以体积分数90%的丙酮溶液作为空白,待提取液稳定20min后,分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的光密度(OD);(5).最后按下列的叶绿素a浓度计算公式,计算样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为:
Pa(ug/L)=11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)
从将比色皿放入分光光度计4中开始计时,到读数的那一刻称为稳定时间。从图2~图3中可以看出,叶绿素a随着稳定时间的增长,逐渐趋于稳定。由于丙酮本身具有挥发性,稳定时间如果一再延长,一旦被检测液的液面高度低于比色皿高度的2/3,会使测量结果出错;样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为:
Pa(ug/L)=11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)
从叶绿素a的计算公式中,可以看出叶绿素a的值与3个差值有关,要求D663,D645,D630的光度值都比D750处的光度值大。
结合试验内容,可以得出这样的结论:当稳定时间达到20min时,读数趋于稳定。
从图中可以看出,在0,5,10,15,20,25这六个时间点上,采用塑料离心管所测得的叶绿素a值,始终比采用玻璃离心管测得的值大。因为丙酮对塑料具有腐蚀性,使得从离心管中提取液体中,搀杂了塑料的成分,致使测量结果偏大。
Claims (1)
1.一种监测叶绿素a的方法,其特征在于包括有下列步骤组成
(1).采集水样:每天须在同一时间,同一取样点,液面下同一深度采集水样;
(2).过滤水样:在避光条件下进行抽滤,在蔡氏滤器上装好滤膜,将刚采集来的水样进行稀释,取出100mL稀释完的水样进行抽滤,抽滤时,抽滤的压力不大于150mm汞柱,在水样被抽干前加入0.2mLMgCO3悬液,直至抽干水样;
(3).提取:将滤膜放于研钵内,加2~3mL90%的丙酮溶液,匀浆,然后用移液管将匀浆移入带刻度的玻璃离心管中,用90%丙酮冲洗两次,最后补加90%丙酮于离心管中,使管内总体积为10mL,塞紧塞子并注意遮光,充分振荡,放入温度为4℃冰箱内避光提取18~24h;
(4).离心测定光密度:提取完毕后,置离心管于3500r/min的台式离心机上,进行对称布置离心10min取出离心管,用移液管将上清液移入刻度离心管中,塞上塞子,3500r/min再离心10min;用移液管将提取液移入1.5cm比色皿中,将比色皿放入分光光度计4中,以体积分数90%的丙酮溶液作为空白,待提取液稳定20min后,分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的光密度(OD);
(5).最后按下列的叶绿素a浓度计算公式,计算样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为:
Pa(ug/L)=11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)。
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