CN1786018B - 高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺 - Google Patents
高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1786018B CN1786018B CN 200510122291 CN200510122291A CN1786018B CN 1786018 B CN1786018 B CN 1786018B CN 200510122291 CN200510122291 CN 200510122291 CN 200510122291 A CN200510122291 A CN 200510122291A CN 1786018 B CN1786018 B CN 1786018B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- purification
- separation
- antioxidant
- deoxidation
- virus inactivation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 45
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims description 43
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims description 43
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 title claims description 28
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 37
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 37
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 25
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 25
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 35
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 16
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 16
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 13
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 claims description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 3
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 29
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 10
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 9
- -1 saccharide compound Chemical class 0.000 abstract description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 abstract 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 34
- 230000008859 change Effects 0.000 description 15
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 7
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 description 4
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 4
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 3
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 2
- 108010064719 Oxyhemoglobins Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- QOOQLKSEGVNYLA-UHFFFAOYSA-N 1-$l^{1}-oxidanylbutane Chemical compound CCCC[O] QOOQLKSEGVNYLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 206010007191 Capillary fragility Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003320 Carboxyhemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N Dehydro-L-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N Nitrous Oxide Chemical compound [O-][N+]#N GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000006392 deoxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011082 depyrogenation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000002635 electroconvulsive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical group 0.000 description 1
- 210000003617 erythrocyte membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005986 heart dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002120 nanofilm Substances 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 description 1
- 238000007348 radical reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005201 scrubbing Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 description 1
- 108010001708 stroma free hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical compound [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种用于红细胞代用品的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于在0～4℃条件下，由天然红细胞经溶血处理得到初制溶血液，然后加入适量抗氧化剂调节溶液pH，再经物理脱氧与化学脱氧，充分脱除存在于血红蛋白中的氧后，按与脱氧血红蛋白溶液重量/体积比为0.5～1％加入过量抗氧化剂，再按与脱氧血红蛋白溶液重量/体积比为2～3％加入糖类化合物作为保护剂的条件下，于60～80℃加热处理10～12小时，加热过程中持续通入惰性气体，然后作常规过滤和超滤膜处理并调节pH 7.0～7.4。
Description
(一)技术领域：
本发明涉及血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，特别是一种用于红细胞代用品的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺。
(二)背景技术：
虽然传统的输血方式在医疗救护方面发挥了重要的作用，但是同时也存在各种问题，如血源短缺、病毒传播、免疫反应，以及过期血的处理等。在各种临床医疗和急救中，对输血的质和量的要求也越来越高，因而研发和使用红细胞代用品已普遍受到重视。在各种血红蛋白氧载体中，都需要纯化的血红蛋白制品作为原料。纯化血红蛋白的各项理化指标对最终的血红蛋白氧载体的质量和成本有直接的影响，只有提供了足够数量，足够纯度的血红蛋白溶液，进一步的修饰、交联、微囊化等才有可能进行。可以说，要解决血红蛋白氧载体研制这一世界性的难题，血红蛋白的分离纯化与病毒灭活是要解决的技术难题之一。
血红蛋白主要有三个来源：(1)过期的人全血，经纯化的人血红蛋白无免疫源性，可以大量多次输入人体而不引起补体激活；然而过期的人血来源有限，血红蛋白原料的质量和数量的限制成为基于血红蛋白的血液代用品的主要障碍。研制携氧血液代用品的一个主要目的是为了解决血源不足问题。随着血库管理经验的提高，过期血液将会越来越少。1997年美国过期血液仅有4％～7％，即使这么少量的过期血液也不能完全利用。国际上还经常通过血库间疏通血液来进一步减小过期血液的数量。由于生产一个单位的血液代用品至少需要两个单位的过期人血，因此过期人血远远不能满足红细胞代用品产品的商业规模的生产。而且监测和灭毒处理不当可能造成各种病毒的交叉感染。为了开辟新的血源和降低成本，杨成民等首先采用人脐带血为原料提取血红蛋白，仅在中国每年的新生儿超过2000万，以每个胎盘可以采血量150ml计算，来源十分可观。(2)来源广泛的动物血。Feola等人以牛血红蛋白为原料制备红细胞代用品并取得了很好的效果。但是动物血源可能存有引起免疫反应与传播人畜交叉感染疾病如疯牛病、口 蹄疫的潜在危险。(3)基因重组人血红蛋白或人血干细胞体外培养人工红细胞等基因工程技术的产物。但是这些技术由于工艺复杂，产率较低，成本过高等原因限制了它在红细胞代用品研发中的应用。目前，各类基于血红蛋白的血液代用品的制备主要还是以人和动物来源的血液为原料。
血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺的研究已经有很长的时间，但是文献中指出的工艺往往将两者分开进行，如先分离纯化再进行病毒灭活，或先病毒灭活再进行分离纯化，由此延长了工艺路线耗费的时间，使血红蛋白氧化、变性的几率增加。文献报道的工艺路线大都都采用柱层析的方法对血红蛋白进行分离纯化，如1999年一篇美国专利(US 6,506,725)就是通过超滤和用丙烯葡聚糖凝胶柱S-100处理，然后经高压液相柱层析，最后通过亲合层析进行纯化，这样可以得到高纯度的血红蛋白。但是层析的方法操作工序较繁琐，设备造价高，血红蛋白产品回收率低，并且层析的方法对病毒的清除效率并不高，还需要联合其他的病毒灭活操作才能保证血红蛋白溶液中病毒灭活达到规定的要求。目前公认的病毒灭活方法包括巴斯德消毒法、终产品干热法、蒸汽加热、有机溶剂/去污剂(S/D)法、酸性PH法、纳米膜过滤法等，各种方法各有优缺点。加热法是最早研究应用的血液病毒灭活的方法。当20世纪80年代初，流行病学研究确定AIDS可经输血和血液制品传播并发现其病原体HIV后，卫生主管部门和各国的科学工作者投入了大量的人力、物力研究可用于血液制品处理的病毒灭活技术，以提高输血和血液制品的安全性。自1984年开始，巴氏消毒法(60℃，液态加热10小时)已成功应用于白蛋白制品的生产并得到各国主管部门法定认可。加热法相对比较简单，使用的仪器设备也不复杂，易于消毒、灭菌、除热原等处理，并且加热法允许在制品灌装封口后再加热，这样可以防止加热灭活病毒后的样品再次被病毒污染，因此在病毒灭活工艺的研究和应用中受到广泛重视。早期获得药政当局批准的病毒灭活制品也均为热处理制品。已有美国专利报道(US5,476,764)，使血红蛋白处于脱氧状态能提高其对加热温度的耐受性。但是，将氧合血红蛋白转变为一氧化碳血红蛋白较为容易，而使已结合的一氧化碳再与血红蛋白解离则较为困难，且增加了操作成本。另有美国专利报道(US 5,840,851)，血红蛋白在通入氮气、氩气等无氧 惰性气体或真空条件下，也可使血红蛋白中所结合的氧充分释放后，再加入谷胱甘肽等具有还原性的化合物，并在保持脱氧状态下加热数小时至数天，以使非血红蛋白类的蛋白质成分变性沉淀除去，同时灭活病毒，得到无基质血红蛋白。该文献虽对有关脱氧、加热及病毒灭活等条件的研究作了说明，但在其研究中使用的多数抗氧化剂毒性较大，并未解决加入过量无毒抗氧化剂的关键技术，而且上述方法所得的血红蛋白纯度低于99％，而且得率也仅仅只有80％左右。杨成民等于2001年发表专利(专利号CN01108643.2)指出在50～60℃加热，可以有效地分离纯化血红蛋白，但是该工艺得率仅为80％，而且也无法达到病毒灭活的目的，所以必须进一步改进其工艺，以期使工艺路线更为合理，得到的纯化血红蛋白质量与收率更高。
(三)发明内容：
本发明的目的在于提供一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，它是一种操作简便、生产设备简单、生产周期短、成本低且安全有效的用于红细胞代用品的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，该工艺在对血红蛋白溶液进行病毒灭活的同时，使得杂蛋白热变性沉淀除去，一举两得，得到的血红蛋白制品不仅可以达到高纯度要求，而且得率高，可以满足规模生产的要求。
本发明的技术方案：一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于它是由以下步骤构成：
(1)在0～4℃条件下，由天然红细胞经溶血处理得到初制溶血液；
(2)加入抗氧化剂调节溶液PH值，其中，加入适量抗氧化剂调节溶液的PH值至6.00～6.50，抗氧化剂为维生素C；
(3)经物理脱氧与化学脱氧，充分脱除存在于血红蛋白中的氧，其中，物理脱氧取减压真空抽气脱氧与惰性气体鼓泡式脱氧，化学脱氧为加入过量抗氧化剂，抗氧化剂为维生素C；
(4)加入保护剂后，进行加热处理，加热过程中持续通入惰性气体，加热处理的温度为60～70℃，加热处理的时间为10～12小时；
(5)作常规过滤和超滤膜处理并调节PH 7.0～7.4。
上述步骤(1)中所用的天然红细胞来源于人胎盘血。
上述步骤(2)中加入适量抗氧化剂调节溶液的PH值至6.00。
上述步骤(3)中的化学脱氧按与脱氧血红蛋白溶液重量/体积比为0.5～1％的量加入过量抗氧化剂溶液。
上述步骤(3)中加入的过量抗氧化剂溶液PH值为6.00。(优选例)
上述步骤(4)中加入保护剂后的加热处理的温度为60℃，加热处理的时间为12小时。
上述步骤(4)中加入的保护剂为葡萄糖。
上述步骤(4)中加入的保护剂浓度为2～3％(W/V)。
本发明的工作原理在于：已有文献报道，在血红蛋白处理过程中加入具有还原作用的抗氧化剂对维持其脱氧状态是有益的，能够提高血红蛋白的耐热性，防止或减少热变性造成的损失，增加血红蛋白的得率。为此，本发明的特点在于加入过量的抗氧化剂。例如，一种可供选择的方式是按液重量/体积比为0.5～1％的量加入抗氧化剂维生素C溶液，由于维生素C溶液本身是显示酸性，因此在加入前应当先用稀碱溶液调节其PH至6.00～6.50。经过实验证实，在此PH范围内维生素C结构没有改变，保持了抗氧化活性，同时对血红蛋白溶液的体系PH值没有太大影响(加入过量维生素C溶液后，体系PH变化在0.02以内)。而使用过量未调节PH的维生素C溶液的对比试验结果显示，由于体系PH值显著下降，造成大量血红蛋白变性，回收率极低。使用过量调节了PH值的抗氧化剂的好处在于可以充分保证血红蛋白处于脱氧状态，避免加热过程中混入的少量氧气造成血红蛋白重新结合上氧而变性沉淀。同时，由于维生素C安全可靠，在后续纯化步骤中也很容易清除，质量控制及检测工作的难度大大降低。实验结果显示，未加入过量维生素C的血红蛋白溶液，回收率在85％左右，高铁血红蛋白含量高于2％；而使用过量抗氧化剂维生素C后，血红蛋白的回收率高于90％，提高了至少5个百分点，高铁血红蛋白含量低于2％，纯度检测结果显示其纯度＞99％。本发明的核心内容在于加入了过量的抗氧化剂维生素C。完整的红细胞中既有血红蛋白，还包含了一系列的还原酶系统，如过氧化氢酶、谷胱甘肽、NADPH等，经纯化的血红蛋白失去了红细胞膜和细胞内还原酶系统的保护很容易被氧化。同时文献报道和本发明人的实验结果证实，仅仅通过通入惰性气体和/或抽真空脱氧，而不加入抗氧化剂，血红蛋白加热处理后得率较低，因而本发明在优选合适的抗氧化剂的品种及其用量上做了大量研究。抗氧化 剂在促使血红蛋白保持脱氧构象上有积极的促进作用，不同的抗氧化剂起作用的机理不同，效果也不同。常用的抗氧化剂如还原型谷胱甘肽是一个含巯基的三肽，其还原作用主要由巯基提供，捕获未成对电子的能力很强，能够直接清除氧自由基，虽说在红细胞内可以起到保护血红蛋白的作用，但是在纯化血红蛋白溶液中，它会促使高铁血红蛋白生成。连二亚硫酸盐也是一种很强的抗氧化剂，但是只要有少量氧存在，它就会生成NaHSO3，亚硫酸根会破坏血红蛋白的稳定性，造成变性沉淀。同时溶液也会显酸性，改变整个加热体系的PH值。有资料显示，即使是在无氧环境，连二亚硫酸钠在PH低于7.6时也不稳定。因此配制连二亚硫酸钠溶液时，要保证无氧和使用微碱性的缓冲液，限制了其应用。实验中，我们考虑到使用的抗氧化剂必须无毒、易于除去、对Hb无不良影响等因素，因此选择了维生素C，它的2，3位碳位的烯醇结构具有很强的还原性，在酸性条件能被一些氧化性物质选择性地氧化成脱氢抗坏血酸，见附图1。因此它既可以清除Hb溶液中残留的氧，也可以还原MetHb，转变成有携氧功能的二价铁Hb。
过量维生素C加入的另一个作用是减少氧自由基的产生，降低缺血再灌注损伤。由于近年医学的发展进步；使缺血再灌注损伤愈益受到重视。在缺血基础上恢复血流后引起的更为剧烈的损伤称为再灌注损伤，这种情况多数发生在失血性休克和各种外科手术中，例如断肢再植和器官移植就存在缺血肢体和器官的再灌注问题，又如动脉搭桥术后、溶栓疗法之后，休克治疗之后均可能发生缺血与再灌注损伤。因而研究渐多，已成为一个医学重要问题，所以我们要对可能发生的输血再灌注损伤提起足够的重视。再灌注损伤的重要机制是生成大量活性氧化物，血红蛋白携带的分子氧重新进入以前缺血的心肌细胞后逐步被还原生成氧自由基。除分子氧被还原外其他途径也可产生氧自由基，其中包括酶类(例如黄嘌呤氧化酶、细胞色素氧化酶、环氧合酶)和儿茶酚胺的氧化。再灌注可使中性粒细胞激活和聚集，后者也可刺激活性氧化物的生成。氧自由基可与多种不饱和脂肪酸发生反应，产生脂质过氧化物和氢过氧化物损伤细胞。同时氧自由基可刺激内皮系统释放血小板活化因子，后者可进一步促进中性粒细胞聚集，增加氧自由基的生成，加重再灌注损伤。氧自由基还可抑制一氧化氮从而加重内皮损伤和微血管功能障碍。除氧自由基生成增加外同时还存在 内源性氧自由基清除酶的相对缺乏从而进一步加重自由基介导的心脏功能障碍。综合再灌注损伤的发生机理，人们认为用抗氧化剂来治疗减轻再灌注损伤是合理的，有效的。维生素C作为强抗氧化剂，能够直接与氧自由基反应，生成对人体无害的物质，因此对人体清除氧自由基有积极的作用，从而阻断再灌注损伤的重要诱因，避免血红蛋白输入人体缺血器官造成的损伤。
维生素C也是人体必需的微量物质，其生理功能包括维持细胞的正常代谢，保护体内酶活性；对铅化物、砷化物、苯以及细菌毒素等具有解毒作用；使三价铁还原为二价铁，有利于铁的吸收，并参与铁蛋白的合成；参与胶原蛋白合成羟脯氨酸的过程，防止毛细血管脆性增加；促进心肌利用葡萄糖及心肌糖原的合成，有扩张冠状动脉的效应等。因此维生素C的加入不仅不会造成毒副作用，反而对于维持人体的正常生理功能有利。但是由于维生素C本身酸性比较强，1％的维生素C溶液PH值约为2.5，如果直接加入会造成血红蛋白溶液PH值大幅度下降，不利于其稳定。因此，在总结大量实验的基础上，我们提出将维生素C溶解在注射用水中，并用稀碱调节其PH值至6.00(血红蛋白加热体系的PH范围)，因而即使是加入过量的维生素C，也不会对体系的PH值造成改变。以维生素C溶液作为抗氧化剂还有一个好处就是其在100℃以内对热有相对稳定性，因此在60～70℃加热时不会发生结构改变而丧失其抗氧化活性。
文献报道和本发明人的实验结果证实，血红蛋白在加热过程中保持何种状态，将直接影响到血红蛋白变性与否。血红蛋白如果不经过脱氧处理，在加热时会很不稳定，绝大部分都会变性沉淀，因此在用加热的方法制备纯化血红蛋白溶液的过程中，需要对血红蛋白进行预处理。有文献报道用一氧化碳取代血红蛋白中结合的氧，如日本、美国。因为血红蛋白对一氧化碳的亲和力比氧高得多，所以用一氧化碳处理，可以使血红蛋白在很短时间内充分脱氧，形成一氧化碳合血红蛋白。一氧化碳合血红蛋白热稳定性高，加热处理时不会造成血红蛋白变性。但是，这种方法也有一定的局限性。一氧化碳气体属于剧毒气体，稍有不慎，就可能威胁到操作者的人身安全；如果使用量大的话，其管理也有困难。此外，加热处理后，需要将一氧化碳合血红蛋白转换成氧合血红蛋白，普遍采用的是光照下通氧处理，光照时会产 生热量，促使血红蛋白变性，所以时间不宜过长，这进一步限制了这种方法的使用。另有文献报道将血红蛋白转换为脱氧血红蛋白的形式。脱氧血红蛋白也有较高的热稳定性，加热时稳定，不用使用有害气体，使用的设备也相对简单，易于扩大生产。在本发明上述制备方法中，主要是使血红蛋白中所结合的氧充分脱除。例如，采用不含氧的氮气、氩气等惰性气体，或使用二氧化碳等与血红蛋白没有亲和力的气体以鼓泡的方式，结合真空泵抽气脱氧的方式，两种方式交替使用3次以上，以使得结合氧、溶解氧等各种形式存在于血红蛋白中的氧能够充分释放并被移走，直至氧分压降到0毫米汞柱为止。
试验表明，在本发明上述制备方法中，对滤除沉淀物的粗制脱氧状态血红蛋白溶液在加入如葡萄糖、蔗糖等多羟基化合物作为保护剂的条件下再进行加热处理，对于减少血红蛋白在加热处理过程中的损失，提高回收率，是有显著意义和重要作用的。但是保护剂加入的量也应当有限制，因为保护剂在保护血红蛋白的同时，也会保护要灭活的病毒。试验结果表明，按与脱氧血红蛋白溶液重量/体积比为3％加入保护剂，能起到很好的血红蛋白保护效果，而对病毒灭活效果没有影响。
在制备过程中通过加热处理，使粗制溶血液中的非血红蛋白类蛋白质变性沉淀而被除去，是目前此类制备方法中必要的措施。有文献报道(US 5,840,851)，在加入保护剂的前提下，在50～60℃温度范围内加热可得到满意的纯化效果。在本发明方法中，将加热的温度提升到60℃以上，仍能够得到满意的纯化效果；同时，参照经典巴斯德消毒的条件，在60～70℃温度下加热10小时以上，也能够获得满意的病毒灭活效果。试验结果证实，在本发明的条件下，在血红蛋白被纯化的同时，经血液制品传播的主要脂质包膜病毒HIV、HBV、HCV以及非脂质包膜病毒HAV等都能够很好地灭活。
本发明的优越性在于：1、操作过程及其技术条件的难度和要求都大大简化，生产所需要的设备也相对简单，所以生产成本大大降低；2、以前需要两步进行的纯化步骤与病毒灭活步骤在本发明中整合到一起，使整个制备过程所需的时间周期由目前的24～72小时缩短为约12～15小时，大大提高了生产效率；3、由于本发明所述的方法虽然加热的温度提高了，但制备过程所需时间周期大为缩短，并采取了有利 于进一步减少损失和提高收率的相应措施，在保证血红蛋白不变性的前提下使得病毒灭活能够达到国家规定的要求，最终得到的血红蛋白收率在90％左右，高于目前报道的水平，纯度达到99％以上，与目前报道的国际水平相当，高铁血红蛋白含量低于2％，其它常规检测，如ABO血型检测，内毒素含量检测等均合格。
(四)附图说明：
附图1为本发明所涉一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺中维生素C的还原机理图。
附图2为本发明所涉一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺中纯化前后样品的SDS-PAGE对比结果图。
1，3-Purified Hb；2，4-Hb before purification
Marker为SDS-PAGE低分子量标准蛋白质，分子量如图所示
附图3为本发明所涉一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺中纯化血红蛋白HPLC图谱。
(五)具体实施方式：
实施例：一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于它是由以下步骤构成：将采集的胎盘血，在4℃的低温条件下，按常规方法用无热原的生理盐水反复洗涤、离心后，得到压积红细胞，再以渗透压为15毫渗摩尔及PH7.4的磷酸盐缓冲液进行溶血处理，得到粗制的溶血液。在粗制溶血液中按10万单位/1000毫升的量加入青霉素和链霉素等常规的抑菌药物并充分混合均匀后，加入3％浓度的维生素C溶液调节溶血液PH6.00。混合溶液先用真空泵抽气，待溶液表面的真空度降到0，保持该状态15分钟；然后通入不含氧的高纯氮气体，流量为每分钟2L，持续15分钟。重复上述脱氧步骤3次，使存在于血红蛋白中的结合氧和溶解氧充分释放脱除并被移走，至其氧分压为0毫米汞柱为止。再按重量/体积比为0.5％的量加入预先用稀碱(如碳酸钠)调节PH为6.00的维生素C溶液作为抗氧化剂。混合均匀后，在脱氧处理后的血红蛋白处理液中按重量/体积比3％的量加入葡萄糖溶液作为保护剂并充分混合均匀后，于60℃加热12小时，使得血红蛋白溶液中可能存在的病毒得到灭活，同时非血红蛋白类蛋白质等成分变性沉淀。冷却至4℃并保证在此温度范围下，按重量/体积比为0.1％的量加入活性炭或白陶土等医用吸附剂，充分混合后 保持0.5小时，然后按照常规方式以4000转/分钟做离心沉淀后，再以切向流方式过滤，最大限度除尽血红蛋白溶液中沉淀的杂质成分。用碳酸氢钠或磷酸二氢钠等弱碱将滤液调整至PH7.4后，以截留分子量为10KD的超滤膜按常规方式进行超滤处理，再经除菌过滤，即可得到经巴氏消毒法消毒的、高纯度的血红蛋白溶液。
用于检测其纯度的HPLC图谱及SDS-PAGE扫描图谱分别如图2、3所示。
由上述方法制备的血红蛋白主要指标检测结果如表1所示。
Claims (8)
1.一种高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于它是由以下步骤构成：
(1)在0～4℃条件下，由天然红细胞经溶血处理得到初制溶血液；
(2)加入抗氧化剂调节溶液PH值，其中，加入适量抗氧化剂调节溶液的PH值至6.00～6.50，抗氧化剂为维生素C；
(3)经物理脱氧与化学脱氧，充分脱除存在于血红蛋白中的氧，其中，物理脱氧取减压真空抽气脱氧与惰性气体鼓泡式脱氧，化学脱氧为加入过量抗氧化剂，抗氧化剂为维生素C；
(4)加入保护剂后，进行加热处理，加热过程中持续通入惰性气体，加热处理的温度为60～70℃，加热处理的时间为10～12小时；
(5)作常规过滤和超滤膜处理并调节PH 7.0～7.4。
2.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(1)中所用的天然红细胞来源于人胎盘血。
3.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(2)中加入适量抗氧化剂调节溶液的PH值至6.00。
4.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(3)中的化学脱氧按与脱氧血红蛋白溶液重量/体积比为0.5～1％的量加入过量抗氧化剂溶液。
5.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(3)中加入的过量抗氧化剂溶液PH值为6.00。
6.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(4)中加入保护剂后的加热处理的温度为60℃，加热处理的时间为12小时。
7.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(4)中加入的保护剂为葡萄糖。
8.根据权利要求1所述的高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺，其特征在于步骤(4)中加入的保护剂浓度为2～3％(W/V)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510122291 CN1786018B (zh) | 2005-12-12 | 2005-12-12 | 高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510122291 CN1786018B (zh) | 2005-12-12 | 2005-12-12 | 高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1786018A CN1786018A (zh) | 2006-06-14 |
| CN1786018B true CN1786018B (zh) | 2011-06-22 |
Family
ID=36783635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200510122291 Expired - Fee Related CN1786018B (zh) | 2005-12-12 | 2005-12-12 | 高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1786018B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101575373B (zh) * | 2009-06-12 | 2013-03-20 | 中国人民解放军第三军医大学野战外科研究所 | 一种血红蛋白提取液的制备方法 |
| ES2432075T3 (es) * | 2011-07-23 | 2013-11-29 | Sastomed Gmbh | Espray para heridas |
| CN103341187B (zh) * | 2012-06-28 | 2016-06-22 | 四川远大蜀阳药业股份有限公司 | 一种终端灭活病原微生物的方法 |
| EP3088006A1 (de) * | 2015-04-28 | 2016-11-02 | Bayer Technology Services GmbH | Verfahren zur kontinuierlichen virusinaktivierung in einem mikroreaktor |
| CN105288627A (zh) * | 2015-09-17 | 2016-02-03 | 协和同仁科技（天津）有限责任公司 | 一种有携供氧功能的心脏停搏液与制备方法及其应用 |
| CN107137699B (zh) * | 2017-06-15 | 2021-02-09 | 中国医学科学院输血研究所 | 一种天然血红蛋白类血液代用品的脱氧方法和制备工艺 |
| CN112546206A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-03-26 | 云锦华彰(北京)生物科技有限公司 | 一种人源性血红蛋白类氧载体的制备方法及其产品和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2235860A (en) * | 1989-06-26 | 1991-03-20 | Barry A Scherr | Antioxidant containing blood substitutes |
| CN1333296A (zh) * | 2001-07-17 | 2002-01-30 | 杨成民 | 用于红细胞代用品的高纯度无热原无基质血红蛋白的制备方法 |
-
2005
- 2005-12-12 CN CN 200510122291 patent/CN1786018B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2235860A (en) * | 1989-06-26 | 1991-03-20 | Barry A Scherr | Antioxidant containing blood substitutes |
| CN1333296A (zh) * | 2001-07-17 | 2002-01-30 | 杨成民 | 用于红细胞代用品的高纯度无热原无基质血红蛋白的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 赵东旭等.血红蛋白的制备及质量控制.第十届全国生物化工学术会议论文集.2002, * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1786018A (zh) | 2006-06-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1786018B (zh) | 高纯度血红蛋白的分离纯化与病毒灭活工艺 | |
| CN101289493B (zh) | 一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法 | |
| EP2550973B1 (en) | Wound spray | |
| Ketcham et al. | Hemoglobin-based oxygen carriers: development and clinical potential | |
| CN107137699B (zh) | 一种天然血红蛋白类血液代用品的脱氧方法和制备工艺 | |
| JPS62246520A (ja) | 白内障の予防及び逆転方法及び眼の組成物 | |
| JPS59137417A (ja) | 人尿由来コロニ−形成刺激因子及びカリクレインの製造法 | |
| Wong | Conjugated Hemoglobin: Rightshifted Dextran-Hemoglobin as Blood Substitute | |
| JP2010120971A (ja) | 鉄ニトロシル化ヘモグロビンの生成 | |
| WO2024074159A1 (zh) | 小分子阿胶多肽制品的制备方法 | |
| CN116621934B (zh) | 来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽及其应用 | |
| KR20040032802A (ko) | 뇌졸중 치료를 위한 폴리에틸렌글리콜-헤모글로빈 결합체 | |
| US7166577B2 (en) | Albumin having enhanced antimicrobial activity | |
| JPH05504766A (ja) | プリン誘導体及びグルタチオンで安定化されたポリヘモグロビン | |
| Bruning et al. | Prothrombal: a new concentrate of human prothrombin complex for clinical use | |
| WO1993017693A1 (en) | Albumin-iodine preservation of blood, tissues and biological fluids | |
| US20090275105A1 (en) | Process for the production of bromelain by means of substances that induce proteins in pineapple plants | |
| Chiba et al. | Stabilization of urinary erythropoietin | |
| CN100392076C (zh) | 一种超氧化物歧化酶提取修饰方法 | |
| CN1108378C (zh) | 一种超氧化物歧化酶的生产方法 | |
| CN1333296A (zh) | 用于红细胞代用品的高纯度无热原无基质血红蛋白的制备方法 | |
| AU656763B2 (en) | Improved blood substitute | |
| Ün et al. | Artificial blood | |
| CN116693657A (zh) | 一种猪纤维蛋白止血剂的制备方法 | |
| CN103387613A (zh) | 一种血红蛋白及血红蛋白氧载体病毒灭活的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Lu Feng Document name: Notification of Passing Examination on Formalities |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: XIEHE TONGREN TECHNOLOGY (TIANJIN) LLC Free format text: FORMER OWNER: TIANJIN XIEHE BIOLOGICAL SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT CO., LTD. Effective date: 20150225 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20150225 Address after: 300457 International Joint Institute of Biomedical Sciences, 220 Dongting Road, Tianjin economic and Technological Development Zone, S1301 Patentee after: Xiehe Technology (Tianjin) Co., Ltd. Address before: 300457, Tianjin economic and Technological Development Zone Fourth Street 80, Tian Da Science and Technology Park, C5 building, 3 floor Patentee before: Tianjin Xiehe Bioengineering Science and Technology Co., Ltd. |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Xiehe Technology (Tianjin) Co., Ltd. Document name: Notification to Pay the Fees |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Xiehe Technology (Tianjin) Co., Ltd. Document name: Notification of Decision on Request for Restoration of Right |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Xiehe Technology (Tianjin) Co., Ltd. Document name: Notification to Pay the Fees |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Xiehe Technology (Tianjin) Co., Ltd. Document name: Notification of Termination of Patent Right |
|
| DD01 | Delivery of document by public notice | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110622 Termination date: 20181212 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |