CN1781557A - 一种胶原蛋白膜及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胶原蛋白膜及其制备方法。本发明的胶原蛋白膜，基本上由重量份数比为0.25－0.4∶1的胶原蛋白和乙酸盐组成，其制备按如下过程进行：先将胶原蛋白的乙酸溶液和碱溶液混合，然后将混合溶液经喷射形成所述胶原蛋白膜，所述混合溶液的pH为6.8－7.2。本发明利用胶原蛋白在中性pH条件下易于形成不溶性胶状物的特性，将酸性胶原蛋白溶液用碱中和，经喷射形成高纯度的胶原蛋白膜，可以用于临床创伤修复和日常生活。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白膜及其制备方法。
背景技术
在人们的日常生活中，因为意外事故所致的皮肤擦伤、烧伤等时有发生，为了快速的止血、减少感染及促进伤口愈合，创伤敷料应运而生并得到广泛应用。现有的医用敷料主要可以分成传统敷料、合成敷料与生物敷料。传统敷料，如纱布等，方便易用，但对伤口保护太弱，容易感染；合成材料机械性较好，透气性强，并具有使用方便的优点，但是合成材料降解产生的小分子常具有细胞毒性，敷料常与伤口的伤疤粘连，容易在去除时造成皮肤的二次损伤，而且对于较大和较深的伤口，没有显著的帮助；生物敷料相比与前两种材料，对较深、较大的创伤有很好的效果(黄穎斐《科学发展》2004年8月，380期，24～29)。
胶原蛋白(Collagen)是哺乳动物体内含量最丰富的蛋白之一，占人体总蛋白的25％左右，在皮肤中胶原的含量占到了一半以上(chi H.Lee(2001)InternationalJournal of Pharmaceutics 221：1-22)。胶原蛋白是一个大家族，目前已发现超过21种的胶原，其中在皮肤中主要为I型与III型胶原(DEAN J.HARRINGTON(1996)infection and immunity.vol64.6：1885-1891)，在创伤发生的早期给伤口补充足够的胶原，对于伤口的愈合将有很大的促进作用。
目前，已有一些基于胶原的生物敷料产品，如基质胶原海绵伤用敷料(MatrixCollagen Sponge Wound Dressing)与基质胶原薄膜伤用敷料(Matrix Collagen FilmWound Dressing)等已被FDA批准上市，前者由中性胶原液冻干而成的，后者为胶原乙酸溶液风干后形成，它们在处理较深的伤口如烧伤上有明显的效果，能很好的促进伤口愈合；但是这两种敷料的操作过程需由专业医生实施，需要无菌保存，成本较高，在日常生活中无法得到广泛的应用。国内常用的产品敷料存在有潜如免疫排斥的风险，而且胶原敷料多为凝胶，保存较难，成本较高。
发明内容
本发明的目的是提供一种胶原蛋白膜及其制备方法。
本发明所提供的胶原蛋白膜，基本上由重量份数比为0.25-0.4∶1的胶原蛋白和乙酸盐组成。
其中，所述乙酸盐是优选为乙酸钠。
本发明的胶原蛋白膜可按如下过程进行制备：先将胶原蛋白的乙酸溶液和碱溶液混合，然后将混合溶液经喷射形成所述胶原蛋白膜，所述混合溶液的pH为6.8-7.2。
其中，所述胶原蛋白的乙酸溶液中胶原蛋白的含量为10-15mg/ml，所用溶剂乙酸的浓度为0.5-0.7mol/L；所述胶原蛋白的乙酸溶液中胶原蛋白的含量优选为10mg/ml，所用溶剂乙酸的浓度优选为0.5mol/L。
所述碱溶液优选为Na2CO3溶液，其浓度为1.5-2.1mol/L；优选为2mol/L。
在制备胶原蛋白膜时，混合溶液的喷射可利用喷射瓶进行；所述喷射瓶包括瓶体，内瓶和喷头，所述内瓶位于所述瓶体的内部并与瓶体的上表面相连接；所述内瓶的内部以及所述瓶体与所述内瓶之间均设有若干条导管，所述导管均贯穿于所述瓶体的上表面；所述喷头位于所述瓶体的上表面。
本发明所用的胶原蛋白的来源是广泛的，可以按常规方法进行制备得到，也可以购买得到。
本发明利用胶原蛋白在中性pH条件下易于形成不溶性胶状物的特性，将酸性胶原蛋白溶液用碱中和，经喷射形成高纯度的胶原蛋白膜，所得胶原蛋白膜可以用于临床创伤修复；也可以在人们日常生活中得到很好的应用，如作为护肤用的面膜。采用本发明方法，可以简单快速的得到形状厚度符合要求的胶原蛋白膜；相比于现有的敷料，本发明胶原蛋白膜具有操作容易、价格低廉等优点，而且可以根据需要形成不同形状和厚度的胶原膜，在敷料行业中有很好的潜在应用价值。
附图说明
图1A为本发明的喷射瓶的结构示意图；
图1B为喷射瓶的出液口的截面图；
图2为胶原蛋白膜的照片。
具体实施方式
实施例1、胶原蛋白膜的制备
(一)胶原蛋白胶的制备
1、取新鲜牛肌腱1kg，切成小块，在组织捣碎匀浆机中匀浆；
2、加入含1M NaCl的0.05M Tris/HCl(pH 7.5)溶液5000ml进行前提取，以除去非胶原性杂质；在4℃冰箱内放置4天，每天定时振摇4次-6次，每隔1天换一次液；
3、弃上清，加入0.5M乙酸10升，4℃下提取4天，并定时振摇；然后高速低温离心3小时(离心力2000g)，去除不溶解的碎片，其上清液即为液态粗制胶原；
4、在粗制胶原液中加入等量的20％NaCl液，胶原即以白色絮状沉淀析出，2000g离心力下高速离心3小时，以生理盐水清洗沉淀物数遍后，将胶原沉淀物再次溶入10升0.5M乙酸内；
5、将胶原酸溶液缓缓注入冷的60升的PBS缓冲液中(pH 6.0)，不断搅拌，胶原以絮状沉淀析出，静置过夜；
6、去上清，将下层溶液离心，低温离心半小时(离心力5000g)，收集沉淀后用冷水清洗数遍，放入透析袋内用10倍体积的三蒸水透析4天，每天换蒸馏水2次；
7、将胶原沉淀从透析袋中取出，低温离心半小时(离心力5000g)，沉淀为凝胶状；取一小块凝胶，称重，计为w1；
8、将同一块凝胶冻干，称重，计为w2；
9、根据w2/w1的数值，计算出凝胶中纯胶原蛋白的百分含量；
10、按胶原蛋白浓度为10mg/ml的标准，将凝胶溶于适量的0.5M乙酸中，充分搅拌溶解，保存备用。
(二)胶原蛋白膜的形成
图1A为制备胶原蛋白膜的喷射瓶的结构示意图，该喷射瓶包括瓶体1，位于瓶体内的内瓶2和喷头4，内瓶2与瓶体1的上表面相连接，在内瓶2的内部以及瓶体1与内瓶2之间均设有若干条导管3，导管3均贯穿于瓶体1的上表面，用于将装于内瓶2和瓶体1的液体吸出；喷头4位于瓶体1的上表面，从导管3中吸出的液体在喷头4中混合，混合后的液体从喷嘴41喷出。
图1B为该喷射瓶的出液口5的截面图。
在制备胶原蛋白膜时，内瓶2中装用0.5M乙酸溶解的胶原蛋白溶液(10mg/ml)，瓶体1中装有2M碳酸钠溶液，内瓶1与瓶体2上部通气相连，用压缩的方法给内瓶2和瓶体1同时加压0.01个大气压，使两种溶液从导管3中吸出，Na2CO3溶液和胶原蛋白的乙酸溶液的体积比为1∶4，在喷头4的下部空间混合，混合液的pH为7.0；此时，胶原可从溶液中析出，中和反应产生的CO2从凝胶中排出，反应方程式如下：
胶原液由喷嘴41以1ml/s的速度喷出，接触温热的皮肤后能迅速形成固体胶原蛋白膜，可视具体情况决定胶原膜的厚度，所得到的胶原蛋白膜中胶原蛋白与乙酸钠的重量比为0.25∶1。
如图2所示，所制备的胶原蛋白膜具有良好的粘附性，即使在竖直的状态下，仍可以很好的依附在培养皿上而不下滑；并且有一定的力学强度。
Claims (10)
1、一种胶原蛋白膜，基本上由重量份数比为0.25-0.4∶1的胶原蛋白和乙酸盐组成。
2、根据权利要求1所述的胶原蛋白膜，其特征在于：所述乙酸盐是乙酸钠。
3、根据权利要求2所述的胶原蛋白膜，其特征在于：所述胶原蛋白膜按如下过程制备：先将胶原蛋白的乙酸溶液和碳酸钠溶液混合，然后将混合溶液经喷射形成所述胶原蛋白膜，所述混合溶液的pH为6.8-7.2。
4、根据权利要求3所述的胶原蛋白膜，其特征在于：所述胶原蛋白的乙酸溶液中胶原蛋白的含量为10-15mg/ml，所用溶剂乙酸的浓度为0.5-0.7mol/L；所述胶原蛋白的乙酸溶液中胶原蛋白的含量优选为10mg/ml，所用溶剂乙酸的浓度优选为0.5mol/L。
5、根据权利要求3或4所述的胶原蛋白膜，其特征在于：所述Na2CO3溶液的浓度为1.5-2.1mol/L；优选为2mol/L。
6、制备权利要求1所述胶原蛋白膜的方法，先将胶原蛋白的乙酸溶液和碱溶液混合，然后将混合溶液经喷射形成所述胶原蛋白膜，所述混合溶液的pH为6.8-7.2。
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述胶原蛋白的乙酸溶液中胶原蛋白的含量为10-15mg/ml，所用溶剂乙酸的浓度为0.5-0.7mol/L；所述胶原蛋白的乙酸溶液中胶原蛋白的含量优选为10mg/ml，所用溶剂乙酸的浓度优选为0.5mol/L。
8、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述碱溶液为Na2CO3溶液。
9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述Na2CO3溶液的浓度为1.5-2.1mol/L；优选为2mol/L。
10、根据权利要求6-9任一所述的方法，其特征在于：所述喷射是利用喷射瓶进行的，所述喷射瓶包括瓶体，内瓶和喷头，所述内瓶位于所述瓶体的内部并与瓶体的上表面相连接；所述内瓶的内部以及所述瓶体与所述内瓶之间均设有若干条导管，所述导管均贯穿于所述瓶体的上表面；所述喷头位于所述瓶体的上表面。
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