CN1769487A - 用igfbp2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法 - Google Patents

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CN1769487A CN 200510010450 CN200510010450A CN1769487A CN 1769487 A CN1769487 A CN 1769487A CN 200510010450 CN200510010450 CN 200510010450 CN 200510010450 A CN200510010450 A CN 200510010450A CN 1769487 A CN1769487 A CN 1769487A
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Abstract

本发明提供的是一种用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法。根据鸡IGFBP2基因序列设计一对引物IGFBP2F和IGFBP2R；利用该引物对鸡的基因组DNA进行PCR扩增，然后应用SSCP的方法，使用聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行电泳分离，检测出IGFBP2基因3’调控区中的1个单碱基变异位点；分别对鸡IGFBP2基因该位点两种纯合型及杂合型进行命名。利用本发明的分子标记方法对鸡体脂性状进行选择，不仅为鸡育种工作中标记辅助选择提供了一个更为有效、简便易行的分子标记方法，同时也为鸡的体脂性状改良提供了一种有效的分子标记育种手段，从而可以加速低脂肉鸡的育种进程。

Description

用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法
(一)、所属领域
本发明属于动物分子遗传学领域，特别是涉及一种用分子标记检测鸡体脂性状的方法。
(二)、背景技术
经过多年对肉鸡的科学选育，现代肉鸡的生产性能有了显著提高。但是，在肉鸡早期生长速度得以明显提高的同时，伴随着出现的突出问题是腹脂沉积过多，肉仔鸡体内沉积过多的脂肪有诸多不利：(1)明显降低饲料转化效率，因为沉积单位重量的脂肪组织比沉积单位重量的瘦肉多消耗三倍的能量；(2)降低了胴体瘦肉对脂肪组织的比例，因而降低了分割肉产量；(3)加工者和消费者将肉仔鸡体内沉积的这些脂肪的很大一部分(腹脂垫、肌胃周围脂肪、嗉囔脂肪及肠系膜脂肪等)丢弃，这不仅增加了加工者和消费者的负担，而且增加了废物及处理水中的脂肪含量，从而污染环境。由此看来，肉仔鸡体内沉积过多的脂肪将会给生产者、加工者和消费者造成显而易见的经济损失。肉种鸡过肥将会严重影响产蛋率、受精率和孵化率，并且会诱导脂肪肝综合症的发生，从而加大了产蛋期的死淘率。因此，控制脂肪在鸡体内的过多蓄积，进一步提高肉鸡的饲料转化效率和胴体质量是我国急需研究解决的重大问题。
类胰岛素生长因子结合蛋白II(Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2，IGFBP2)是循环系统中含量第二大的IGFBPs(Rajaram等，1997)，分子量大约在31-32KDa(Vivian等，1999)，具有广泛的生物学功能，它能调节IGFs、TGFβ等生长因子的生物活性，还可能拥有自己的特异性受体直接发挥调节作用(Slootweg等，1995)。试验表明，在生物体内IGFBP2具有影响脂类代谢、调节体重等重要生理功能(Hoeflich等，1998；Brockmann等，2001)。
IGFBP2被多种细胞所分泌，存在于细胞外、细胞质和细胞核内。完整的IGFBP2能与IGFs结合，但被蛋白酶水解之后，与IGFs的亲和力会随之降低(Hoeflich个人主页)。IGFBP2对IGFs活性有抑制作用，由于与IGF2的亲和力远大于IGF1(Rajaram等，1997)，所以对IGF2的抑制作用更强一些。IGFs和TGFβ是刺激脂肪前体细胞增殖分化的调节因子(Butterwith等，1991)，IGFBP2可以调节IGFs(Rajaram等，1997)和TGF β(Richardson等，1998)在脂肪组织的活性，间接影响脂肪细胞的增殖。据报道，人的IGFBP2血浆含量与体重、腹脂重呈负相关(P＜0.05)(Brockmann等，2001)。同时发现，IGFBP2血浆含量与瘦素(Leptin)血浆含量呈负相关(P＜0.05)，Leptin是脂肪代谢的重要调节因子，影响脂肪沉积，可见IGFBP2对脂肪代谢有影响，但IGFBP2与Leptin之间的具体作用机制还不清楚。在生长激素超量表达的小鼠中，通过转基因的方法使IGFBP2超量表达，发现转基因小鼠的腹脂降低(P＝0.08)(Hoeflich等，2001)；对小鼠IGFBP2的血浆含量研究发现，低脂小鼠血浆IGFBP2的相对含量明显高于肥胖小鼠，IGFBP2相对含量与脂肪重呈负相关(Brockmann等，2001)，这一结果与在人上的研究结果相似。
鸡IGFBP2的cDNA是从胚胎的视网膜中克隆得到的(Schoen等，1995)，其前体蛋白包含311个氨基酸残基组成，除去36个残基的信号肽，成熟蛋白为275个氨基酸残基，与鼠、牛、绵羊和人的cDNA同源性分别为71％、68％、68％、66％。鸡IGFBP2有4个外显子，也具有哺乳动物的IGFBP2拥有的RGD和ATTTA结构域，其mRNA比人、鼠、绵羊的mRNA都长，约2.3kb，因为鸡的IGFBP2有一个较长的3’调控区(Schoen等，1995)。与哺乳动物相似，鸡胚胎期IGFBP2基因就有丰富表达，表达部位有眼睛、脑、骨骼肌、心脏、小肠和肝脏(Schoen等，1995)。
李志辉等(2003)对鸡IGFBP2基因研究发现，在该基因的中发现一个多态位点，该位点是由序列中1196处一个C→A的点突变造成的(GenBank Accession No：U15086)。
(三)、发明内容
本发明的主要目的是提供一种分子生物学技术，即采用PCR和SSCP方法，用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测鸡腹脂含量，从而预示和鉴定鸡体脂性状的分子标记方法。
本发明的目的是这样实现的：
1、根据鸡IGFBP2基因序列设计一对引物
IGFBP2F：5’-GGG ACT GCT TTC CAA TAG-3’
IGFBP2R：5’-TTA CAG TCT TTG GTC TCG G-3’
2、利用该引物对鸡的基因组DNA进行PCR扩增。
3、使用聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行电泳分离，检测出IGFBP2基因3’调控区的C1196A的单碱基变异。
4、将PCR产物进行SSCP分析发现3种谱带分别命名为AA、AB、BB基因型(图1)。取两个纯合基因型的片断进行回收，并克隆到载体，测序结果表明，AA型的基因序列和GenBank(Accession No：U15086)中的一致，定义为野生型；BB型发生了1196处发生碱基突变，为C1196A，定义为突变型。
本发明还可以包括：
1、其中分析基因多态性的方法是通过检测单碱基变异而分类的基因型。
2、其中用于分析基因多态性的区域是3’调控区。
3、其中用于分析基因多态性的区域是由IGFBP2F和IGFBP2R表示的引物扩增的3’调控区。
4、其中用于分析多态性的位点选自在GenBank(Accession No：U15086)登录的鸡IGFBP2基因序列中第1196位的1个C→A碱基的变异。
5、其中鸡体脂性状是鸡的腹脂重，腹脂率。
6、其中SSCP分析中的聚丙烯酰胺凝胶浓度为16％。
实验证明AA基因型鸡只的腹脂重、腹脂率均显著(P＜0.05或极显著P＜0.01)低于BB基因型鸡只的腹脂重、腹脂率。
本发明巧妙地采用PCR扩增和SSCP的方法检测了鸡IGFBP2基因3’调控区的C1196A的单碱基变异，操作简单、费用低、精确度高，可进行自动化检测。使用本发明的标记基因型对鸡的体脂进行选择时，7周龄的腹脂重和腹脂率最高可以分别取得17.62％和15.14％的遗传进展，可以加速低脂鸡的育种进程。
(四)、附图说明
附图1是IGFBP2基因C1196A单碱基变异多态位点分析。
(五)、具体实施方案
下面举例对本发明做更详细地描述：
一、实验材料
1.实验动物和性状测定
①AA肉鸡、海兰蛋鸡和地方品种北京油鸡、白耳鸡、石歧杂共5个随机群体。
②东北农业大学高低脂系第六世代、第七世代资源群体，分别选取了227和435只鸡。7周龄时翅静脉采血，草酸盐抗凝；称量活重之后屠宰，称量屠体重、腹脂重等性状。
③东北农业大学建立的以高脂肉鸡和白耳鸡为亲本杂交产生的F2资源群体(NEAUF2)，本研究共计选取540只鸡。12周龄时翅静脉采血，草酸盐抗凝；称量活重之后屠宰，称量屠体重、腹脂重等性状。
2.药品和酶
三羟甲基氨基甲烷(Tris)，Sigma Chemicals Co；Tris饱和酚，北京鼎国生物技术发展中心；蛋白酶K(Proteinase K)，MMERCK Co；DL 2000、dNTP(dATP；dTTP；dCTP；dGTP)、Taq酶，大连宝生物公司；琼脂糖(Agarose)、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺，原平皓公司。
3.主要仪器
PTC-200PCR仪(PERKIN ELMER)、Biometra梯度PCR仪、UVP多功能成像系统、Ultrospec 1000紫外分光光度计、BECKMAN冷冻离心机、Milli-Q超纯水仪、DYY-III2稳压电泳仪及配套电泳槽。
二、实验方法
1.缓冲液与常用试剂的配制
1M Tris Cl：121.14g Tris碱溶于800ml双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至1000ml，高压灭菌。
TE缓冲液：10mM Tris·Cl，1mM EDTA，pH8.0，高压灭菌。
20×SET缓冲液：3MNaCl，1M Tris Cl(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，高压灭菌。
5×TBE缓冲液：54g Tris碱，27.5g硼酸，20ml 0.5M EDTA(pH8.0)，加水至1L。
50×TAE缓冲液：242g Tris碱，57.1ml冰乙酸，100ml 0.5MEDTA(pH8.0)，加水至1L。
1M Tris Cl：121.14g Tris碱溶于800ml双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至1000ml，高压灭菌。
0.5M EDTA：186.1g EDTA溶于800ml双蒸水中，用NaOH调pH值至8.0，定容至1000ml，高压灭菌。
3M NaAc(pH5.2)：408.1g NaAc 3H2O溶于800ml双蒸水中，用冰乙酸调pH至7.0，定容至1000ml。
200ml银染液：NH3H2O 2ml；3.6％NaOH 4.2ml；20％AgNO3 3.6ml，加去离子水至200ml。
200ml显色液：1％柠檬酸钠1ml；甲醛100ul；加去离子水至200ml。
禽血裂解液：10mM Tris·Cl(pH8.0)，0.1M EDTA(pH8.0)，0.5％SDS。
2.引物的设计与合成
以下引物由上海博亚生物公司合成：
IGFBP2F：5’-GGG ACT GCT TTC CAA TAG-3’
IGFBP2R：5’-TTA CAG TCT TTG GTC TCG G-3’
3.鸡基因组DNA的小量提取
方法一：
(1)取20μl抗凝血液，加入500μl禽裂解液，加入蛋白酶K至终浓度为100-200μg/ml，混匀55℃消化12hr，直至溶液中不再有粘稠的团块。
(2)将溶液冷却至室温，加入5M NaCl至终浓度1.5M，混匀10min。加入等体积酚/氯仿，反复颠倒离心管混匀10min。□
(3)12,000rpm，室温离心10min。取上清，加等体积氯仿混匀10min。□
(4)12,000rpm，室温离心10min。取上清2倍体积无水乙醇沉淀DNA。□
(5)将DNA挑出放到1.5ml离心管中，用70％乙醇洗1次。□
(6)7,500rpm，室温离心5min，弃上清。
(7)将DNA干燥后(注意不能太干)溶于200μl TE中。
方法二：
(1)将20μl全血加入装有700μl 1×SET的1.5ml离心管中，轻轻混匀。
(2)加入蛋白酶K(10mg/ml)至终浓度100-200μg/μl和10％的SDS至终浓度0.5％，55℃消化12h。
(3)待消化完全后，加入等体积的Tris饱和酚，来回颠倒，使其混匀
(4)12,000rpm离心10min，用剪去尖端的吸头将上层水相小心移入另一个离心管中，弃去有机相。重复第三和第四步骤一次。
(5)向水相中加入等体积的酚、氯仿、异戊醇混合液(体积比为24∶23∶1)，混合10min。12,000rpm.，离心10min，移出水相到另一个离心管。
(6)向水相中加入等体积的氯仿、异戊醇混合液(23∶1)，来回颠倒混合10min，12,000rpm，离心10min，移出水相到另一个离心管。
(7)向水相中加入1/10体积NaAc(3M，pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，来回颠倒，沉淀DNA。
(8)将DNA挑出放到1.5ml离心管中，用70％乙醇洗1次。
(9)7,500rpm离心5min。小心倒掉管中乙醇，将倒置在滤纸上，让乙醇流尽，置于空气中干燥。
(10)加入200μl的TE，置50℃水浴中过夜溶解DNA。溶解后贮存于-20℃备用。
4.PCR反应
(1)以鸡DNA为模板进行PCR扩增，25ul反应体系中包含以下溶液或试剂：
10×PCR reaction buffer         2.5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)           2.0μl
引物1(10μM)                    0.5μl
引物2(10μM)                    0.5μl
EX-Taq(5U/μl)                  0.25μl
去离子水                        18.25l
基因组DNA(50ng/μl)             1.0μl
(2)将上述溶液混合并按以下条件进行PCR反应。
94℃变性5min；94℃30sec，48.5℃30sec，72℃40sec，35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
(3)反应结束后，取PCR反应液(5～10μl)进行琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物。
5.SSCP分析
以浓度为16％、体积为25ml，厚度为0.1cm的胶为例。
(1)清洗制胶用的玻璃板并用蒸馏水冲洗干净，烘干后，用0.8％琼脂糖封闭玻璃板和胶条间的缝隙。
(2)在100ml烧杯内加入30％丙烯酰胺11.7ml，50％甘油2.5ml，5×TBE 5ml，10％过硫酸铵0.175ml，TEMED8μl，去离子水5.617ml，混匀后迅速灌胶。
(3)当浇灌至离玻璃板上沿0.1cm时停止灌胶，插入梳子，室温聚和半小时，多余的丙烯酰胺4℃保存。随时观察凝胶聚合情况，并补加丙烯酰胺。
(4)凝胶聚合好后，向电泳槽加入1×TBE，用注射器冲洗加样孔。
(5)预电泳10min，同时准备点样。
(6)取1μl PCR产物置于PCR管中，加5-6μl变性上样Buffer混匀，置于100度沸水中变性10分钟，然后迅速放置冰水中冷却10分钟，用微量注射器点样。
(7)100伏，电泳14-16h。
6.硝酸银染色方法
(1)电泳结束后关上电泳仪，放出电泳液，小心取下凝胶，置于70％乙醇中，水浴震荡器缓慢摇匀固定10-15min。(乙醇用完可以回收)。
(2)双蒸水洗胶2遍，每次2min，去除残留乙醇。
(3)用200ml染色液染色30min。
(4)双蒸水洗胶3遍，每次2min。
(5)用200ml显色液显色，约10-30min，当DNA带的强度合适时，倒掉显色液。
(6)去离子水洗掉多余的显色液，保鲜膜封好，扫描照相或保存。
7.统计模型建立
根据资源群体的特点构建合适统计模型：
□Y＝μ+G+L+G*L+BW7+e
□Y＝μ+G+L+H+G*L+BW7+e
③Y＝μ+G+S+H+F+D(F)+G*S+BW12+e
其中Y为性状观察值，μ为群体均值，G为基因型固定效应，S为性别固定效应，H为孵化批次固定效应，F为家系随机效应，D(F)为母鸡(家系内)的随机效应，G*S为基因型与性别的互作效应，G*L为基因型与品系的互作效应，BW12为12周龄体重，BW7为7周龄体重，e为剩余值。
模型□应用于东北农业大学高低脂系第六世代资源群体，模型□应用于东北农业大学高低脂系第七世代资源群体，模型③应用于东北农业大学F2资源群体。使用SAS 6.12版本进行卡方检验。使用统计软件JMP 4.0(SAS Institute Inc.，Cary，NC)检验基因型与性状间的相关程度，并估计性状的最小二乘均值。使用统计软件MTDFREML估计基因型对性状的遗传和表型贡献率。
实施例1、在不同品种基因型和基因频率统计结果
利用本发明的引物(IGFBP2F和IGFB2R)对AA肉鸡、海兰蛋鸡和地方品种北京油鸡、白耳鸡、石歧杂，共5个随机群体个体的基因组DNA进行PCR扩增，然后进行SSCP分析。共检测到3种基因型，分别将其命名为AA、AB、BB基因型(图1)。
计算了不同鸡种该基因的基因型频率和基因频率并进行卡方检验。基因型和基因频率统计结果见表1。独立性检验(X2)总体结果表明，品种间基因型频率差异极显著(P＜0.01)。进行一步分析发现，在其它任意两个鸡种间差异都达到显著的水平(P＜0.05)。北京油鸡和白耳鸡A基因频率和AA基因型频率明显高于其它品种，而AA肉鸡中A基因频率和AA基因型频率是5个品种中最低的。白耳鸡是一种体形较小的蛋用地方品种，成年体重1.0-1.2千克(中国家禽品种志)，脂肪沉积较少，北京油鸡是一种体形较小的蛋肉兼用型地方品种，成年体重1.6-1.7千克(中国家禽品种志)，肌间脂肪分布良好，肉质细致，肉味鲜美，腹脂沉积较少；而肉鸡由于多年的人工选择，伴随着早期生长速度的提高，有着极强脂肪沉积能力，因此，等位基因A可能与降低脂肪沉积有关。
                              表1  基因型和基因频率在不同品种间比较
  品种(系)   检测个体数 AA AB BB A B X2
北京油白耳鸡石岐杂海兰蛋鸡AA肉鸡 73180108119409 0.904(66*)0.972(175)0.731(79)0.529(63)0.215(88) 0.096(7)0.022(4)0.259(28)0.403(48)0.384(157) 0(0)0.006(1)0.01(1)0.068(8)0.401(164) 0.9830.9830.8610.7310.407 0.0170.0170.1390.2690.593 X2＝410.67P＜0.01
*括号内是检测个体数
实施例2、鸡IGFBP2基因的多态性与肉鸡高低脂双向选择品系第六世代腹脂性状的相关
利用本发明的引物(IGFBP2F和IGFB2R)对肉鸡高低脂双向选择品系第六世代的基因组DNA进行PCR扩增，然后进行SSCP分析。共检测到3种基因型，分别将其命名为AA、AB、BB基因型(图1)。
对IGFBP2基因C1196A位点的3种基因型与第六世代227个个体的腹脂重和腹脂率进行最小二乘分析，结果表明基因型对第六世代个体的腹脂重、腹脂率有显著影响(P＜0.05)(表2)。
表2  第六世代腹脂性状的最小二乘分析结果(P值)
  腹脂重   腹脂率
  基因型品系体重(协变量)基因型与品系互作   0.01830.00010.00010.0894   0.01190.00010.00010.0890
对3种基因型间第六世代鸡只腹脂性状的最小二乘均值进行多重比较，结果表明AA基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于AB型个体的腹脂重和腹脂率(P＜0.05)；AA基因型个体的腹脂重和腹脂率比AB基因型个体的腹脂重和腹脂率分别低6.6克和0.28％(表3)。
          表3  IGFBP2基因不同基因型对第六世代鸡只腹脂性状的影响
  基因型   个体数   腹脂重最小二乘均值(克)   腹脂率最小二乘均值
  AAABBB   458597   49.51±2.20b56.11±1.42a51.25±1.85ab   0.0191±0.0009b0.0219±0.0006a0.0199±0.0007ab
均值比较时同一列无相同字母者差异显著(a-bp＜0.05)
表4列出基因型对第六世代肉鸡腹脂性状的遗传贡献率和表型贡献率。IGFBP2基因的变异位点对第六世代肉鸡的腹脂重和腹脂率的遗传贡献率都较大，分别为12.43％和10.09％。因此推测用该基因对腹脂性状进行标记辅助选择，会获得较大的遗传进展。
             表4  IGFBP2基因对第六世代肉鸡腹脂性状的遗传和表型贡献率
  性状   A1   E   G   遗传贡献率(％)   表型贡献率(％)
腹脂重腹脂率 102.79860.00002 59.535190.00001 14.599604630.00000225 12.435971410.0923848 8.25147026.9624834
1A为剩余多基因效应方差；E为残差的方差；G为检测的基因效应方差实施例3、鸡IGFBP2基因的多态性与肉鸡高低脂双向选择品系第七世代腹脂性状的相关
利用本发明的引物(IGFBP2F和IGFB2R)对肉鸡高低脂双向选择品系第七世代的基因组DNA进行PCR扩增，然后进行SSCP分析。共检测到3种基因型，分别将其命名为AA、AB、BB基因型(图1)。
对IGFBP2基因C1196A位点的3种基因型与第七世代435个个体的腹脂重和腹脂率进行最小二乘分析，结果表明基因型对第七世代个体的腹脂重、腹脂率有显著影响(P＜0.05)(表5)。
表5  第七世代腹脂性状的最小二乘分析结果(P值)
  腹脂重   腹脂率
  基因型品系体重(协变量)批次基因型与品系互作   0.03590.00010.00010.03950.0591   0.03880.00010.07040.04830.0887
对3种基因型间第七世代鸡只腹脂性状的最小二乘均值进行多重比较，结果表明AA基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于BB型个体的腹脂重和腹脂率(P＜0.05)；具有AA基因型个体的腹脂重和腹脂率比BB基因型个体的腹脂重和腹脂率分别低4.73克和0.19％(表6)。
            表6  IGFBP2基因不同基因型对第七世代鸡只腹脂性状的影响
  基因型   个体数   腹脂重最小二乘均值(克)   腹脂率最小二乘均值
  AAABBB   62174199   46.02±1.51b49.85±0.83a50.75±1.23a   0.0193±0.0006b0.0209±0.0003a0.0212±0.0005a
均值比较时同一列无相同字母者差异显著(a-bp＜0.05)
表7列出基因型对第七世代鸡只腹脂性状的遗传贡献率和表型贡献率。IGFBP2基因的变异位点对第七世代肉鸡的腹脂重和腹脂率的遗传贡献率都较大，分别为17.62％和15.14％。因此推测用该基因对腹脂性状进行标记辅助选择，会获得较大的遗传进展。
            表7  IGFBP2基因对第七世代肉鸡腹脂性状的遗传和表型贡献率
  性状   A1   E   G   遗传贡献率(％)   表型贡献率(％)
  腹脂重腹脂率   94.335330.00002   42.174680.00001   20.17205170.00000357   17.616376715.1353473   12.874510.62634
1A为剩余多基因效应方差；E为残差的方差；G为检测的基因效应方差实施例4、鸡IGFBP2基因的多态性与东北农业大学F2资源群体体脂性状的相关分析
利用本发明的引物(IGFBP2F和IGFB2R)对东北农业大学F2资源群的基因组DNA进行PCR扩增，然后进行SSCP分析。共检测到3种基因型，分别将其命名为AA、AB、BB基因型(图1)。
对IGFBP2基因C1196A位点的3种基因型与东北农业大学F2资源群540个个体的腹脂重和腹脂率进行最小二乘分析，结果表明基因型对东北农业大学F2资源群个体的腹脂重、腹脂率有极显著影响(P＜0.01)(表8)。
表8  东北农业大学F2资源群腹脂性状的最小二乘分析结果(P值)
  腹脂重   腹脂率
  基因型性别批次家系母鸡体重(协变量)基因型与性别互作   0.00390.00010.15040.09310.00010.00010.5514   0.00450.00010.31910.06760.00010.00010.8590
对3种基因型间东北农业大学F2资源群鸡只腹脂性状的最小二乘均值进行多重比较，结果表明AA基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于BB型个体的腹脂重和腹脂率(P＜0.05)；具有AA基因型个体的腹脂重和腹脂率比BB基因型个体的腹脂重和腹脂率分别低10.29克和0.5％(表9)。
   表9  IGFBP2基因不同基因型对东北农业大学F2资源群鸡只腹脂性状的影响
  基因型   个体数   腹脂重最小二乘均值(克)   腹脂率最小二乘均值
  AAABBB   19624698   78.80±3.92b81.91±3.80b89.09±4.35a   0.0385±0.0020b0.0404±0.0019b0.0435±0.021a
均值比较时同一列无相同字母者差异显著(a-bP＜0.05)
表10列出基因型对东北农业大学F2资源群鸡只腹脂性状的遗传贡献率和表型贡献率。IGFBP2基因的变异位点对东北农业大学F2资源群肉鸡的腹脂重和腹脂率的遗传贡献率分别为2.95％和3.02％。
            表10  IGFBP2基因对东北农业大学F2资源群肉鸡腹脂性状的遗传和表型贡献率
  性状   A1   E   G   遗传贡献率(％)   表型贡献率(％)
腹脂重腹脂率 428.574640.00009 255.238870.00006 13.012867070.0000028 0.0294683770.03021372 0.0186744750.017222878
1A为剩余多基因效应方差；E为残差的方差；G为检测的基因效应方差

Claims (8)

1、一种用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：
(1)、根据鸡IGFBP2基因序列设计一对引物
IGFBP2F：5’-GGG ACT GCT TTC CAA TAG-3’
IGFBP2R：5’-TTA CAG TCT TTG GTC TCG G-3’
(2)、利用该引物对鸡的基因组DNA进行PCR扩增；
(3)、使用16％聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行SSCP分析，检测出IGFBP2基因3’调控区中的1个单碱基突异位点；
(4)、多态性分析：经SSCP分析分别发现3种基因型，分别命名为AA、AB和BB型。
2、根据权利要求1所述的用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中分析基因多态性的方法是通过检测单碱基变异而确定基因型。
3、根据权利要求2所述的用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中用于分析基因多态性的区域是3’调控区。
4、根据权利要求3所述的用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中用于分析基因多态性的区域是由IGFBP2F和IGFBP2R表示的引物扩增的3’调控区。
5、根据权利要求4所述的用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中用于分析多态性的位点位于鸡IGFBP2基因(GenBank AccessionNo：U15086)序列中第1196位的1个C→A碱基突变。
6、根据权利要求1-5任何一项所述的用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中鸡体脂性状是鸡的腹脂重和腹脂率。
7、根据权利要求1-5任何一项用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中用于SSCP分析的聚丙烯酰胺凝胶浓度为16％。
8、根据权利要求6所述的用IGFBP2基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中用于SSCP分析的聚丙烯酰胺凝胶浓度为16％。
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