CN1293205C

CN1293205C - 用a－fabp基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法

Info

Publication number: CN1293205C
Application number: CNB2004100441068A
Authority: CN
Inventors: 李辉; 王启贵; 李宁
Original assignee: Northeast Agricultural University
Current assignee: Northeast Agricultural University
Priority date: 2004-12-08
Filing date: 2004-12-08
Publication date: 2007-01-03
Anticipated expiration: 2024-12-08
Also published as: CN1654681A

Abstract

本发明提供的是用A-FABP基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法。根据鸡A-FABP基因序列设计一对引物；利用该引物对鸡的基因组DNA进行PCR扩增，并利用限制性内切酶Taq I消化扩增的PCR产物；然后使用2%的琼脂糖凝胶对消化后的PCR产物进行电泳分离，检测出A-FABP基因外显子I中的C/T变异位点；分别对鸡A-FABP基因外显子I中C碱基、T碱基及该位点杂合时进行命名。实验结果表明具有AA基因型个体的腹脂重和腹脂率比BB基因型个体的腹脂重低8.67-13.02克和0.34%-0.66%。本发明操作简单、费用低、精确度高，可进行快速检测。

Description

用A-FABP基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法

(一)、所属领域

本发明属于动物分子遗传学领域，特别是涉及一种用分子标记检测鸡腹脂量的方法。

(二)、背景技术

快大型肉鸡体脂(尤其是腹脂)蓄积过多已成为一个突出的问题。肉仔鸡体内沉积过多的脂肪有诸多不利：(1)明显降低饲料转化效率，因为沉积单位重量的脂肪组织比沉积单位重量的瘦肉多消耗三倍的能量；(2)降低了胴体瘦肉对脂肪组织的比例，因而降低了分割肉产量；(3)加工者和消费者将肉仔鸡体内沉积的这些脂肪的很大一部分(腹脂垫、肌胃周围脂肪、嗉囔脂肪及肠系膜脂肪等)丢弃，这不仅增加了加工者和消费者的负担，而且增加了废物及处理水中的脂肪含量，从而污染环境。由此看来，肉仔鸡体内沉积过多的脂肪将会给生产者、加工者和消费者造成显而易见的经济损失。肉种鸡过肥将会严重影响产蛋率、受精率和孵化率，并且会诱导脂肪肝综合症的发生，从而加大了产蛋期的死淘率。因此，控制脂肪在鸡体内的过多蓄积，进一步提高肉鸡的饲料转化效率和胴体质量是我国急需研究解决的重大问题。

脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein，FABP)属于脂类结合蛋白超家族的成员，存在于动物体的细胞内，是一类分子量为14-15KD的蛋白。FABP对长链脂肪酸具有很强的结合能力，其主要功能是运输细胞内的长链脂肪酸、调节细胞的生长及分化、细胞的信号传导、基因转录和保护游离脂肪酸的酶解。在哺乳动物中至少有9种FABP已经被分离出来，它们分别是肝脏(L-)FABP、小肠(I-)FABP、心脏(H-)FABP、脂肪(A-)FABP、表皮(E-)FABP、回肠(IL-)FABP、脑(B-)FABP、髓磷脂(M-)FABP和睾丸(T-)FABP。

在禽类有至少5种FABP被分离出来，它们分别是肝脏(L-)FABP、小肠(I-)FABP、脂肪(A-)FABP、肌肉(M-)FABP和视网膜(R-)FABP。这些蛋白由126-134个氨基酸组成，并且由第一个被分离的组织而命名。编码这些蛋白的基因具有相同的结构，都是由4个外显子和3个内含子构成，并且外显子的长度基本相同或相近，但内含子的长度变异很大。

在哺乳动物中，对各种不同类型的FABP的功能已经有了较为深入地研究。其中A-FABP基因敲除的小鼠表现出正常的生理状态，可以发育正常的脂肪组织，在脂类代谢的稳定性上变化很小(HotamisLigiL等，1996)。这主要是由于E-FABP基因的上调表达对其产生了补偿效应(Coe等，1999；Shaughnessy等，2000)，而在正常情况下E-FABP基因在脂肪组织中较低水平的表达(Krieg等，1993)。与野生型小鼠相比，A-FABP基因敲除的小鼠脂肪组织内的脂肪酸流速或脂化作用没有发生变化，但基础脂解作用却降低了大约40％(Coe等，1999)。在II型糖尿病的发病机理中，A-FABP可能通过调节脂解作用和胰岛素分泌来发挥其调控胰岛素过多和胰岛素抵抗的作用。敲除肥胖小鼠的A-FABP基因实验表明，A-FABP的缺失不仅可以改善外围胰岛素抵抗，还可以维护胰腺β-细胞的正常功能，有利于脂类代谢的正常进行(UysaL等，2000)。最近，A-FABP在巨噬细胞中的表达也已经被研究(Makowski等，2001)。A-FABP在巨噬细胞生物反应中显示出其重要的作用，并对动脉硬化症的发生有影响。载脂蛋白E和A-FABP同时缺陷的小鼠可以防止动脉硬化症的发生(Makowski等，2001)。人的巨噬细胞中被氧化的低密度脂蛋白可以诱导A-FABP的mRNA和蛋白的表达(Fu等，2000)。这些数据表明在脂肪细胞和巨噬细胞中A-FABP有不同的作用，这为动脉硬化症的预防提供了一个新的治疗靶点。Gerbens等(1998)在A-FABP基因的第一个内含子检测到了一个微卫星序列，对六个猪种的测试发现具有多态性。在杜洛克群体中，A-FABP的遗传变异和IMF含量有关。

FABP在禽类的肝脏、肌肉、小肠、视网膜和脂肪组织中也已被分离出来(SeweLL等，1989a，1989b；Sams等，1990，1991；Gotz等，1996；SeLLner等，1993)。鸡脂肪型FABP(A-FABP)也已经被分离出来，其分子量为14KD，等电点为5.1，从氨基酸组成方面分析，该蛋白与哺乳动物H-FABP和A-FABP在结构上高度同源，配体结合特点研究表明，鸡A-FABP对亚油酸具有极强的结合能力，其次是油酸、棕榈酰CoA和棕榈酸，而不能结合胆固醇(Sams等，1990)。禽类FABP基因多态性的研究刚刚起步。王启贵等(2001)研究表明EX-FABP基因的多态性与腹脂含量极显著的相关(p＜0.01)。

王启贵等(2002)克隆了鸡A-FABP基因，研究表明该基因由4个外显子和3个内含子构成(Genbank Accession No.AF432507)，并且仅在脂肪组织中表达。

(三)、发明内容

本发明的主要目的是提供一种分子生物学技术，即采用PCR-RFLP方法来检测鸡基因型，从而预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法。

本发明的目的是这样实现的：

1、根据鸡A-FABP基因序列设计一对引物AFF和AFR：

AFF：5’-AGA CTG CTA CCT GGC CTG ACA-3’

AFR：5’-CAT CCT ACT GGA ATA CGG-3’

2、利用该引物对鸡的基因组DNA进行PCR扩增，PCR扩增片段长度为702bp；

3、利用限制性内切酶Taq I消化扩增的PCR产物；

4、使用2％的琼脂糖凝胶对消化后的PCR产物进行电泳分离，检测出A-FABP基因外显子I中的C/T变异位点；

5、当鸡A-FABP基因外显子I中多态性位点为C碱基时，会产生限制性内切酶Taq I的酶切位点即T/CGA，Taq I消化PCR产物后会产生2个片段即629bp和73bp，将其命名为BB基因型；该位点为T碱基即TTGA时，则不存在Taq I酶切位点，Taq I消化PCR产物后只有1个片段即702bp，将其命名为AA基因型；该位点为C/T杂合时，Taq I消化PCR产物后会产生3个片段即702bp、629bp和73bp，将其命名为AB基因型。

本发明还可以包括：

1、其中分析基因多态性的方法是通过检测根据碱基的突变而分类的基因型。

2、其中用于分析基因多态性的部位是外显子。

3、其中用于分析基因多态性的部位是由AFF和AFR表示的引物扩增的外显子区。

4、其中用于分析多态性的位点选自鸡A-FABP基因如下序列中第74位的C-T的碱基突变。

1 AGACTGCTAC CTGGCCTGAC AAAATGTGCG ACCAGTTTGT GGGCACCTGG AAGCTCCTTT

61 CTAGTGAAAA CTTCGAGGAC TATATGAAAG AGCTGGGTGA GAAATGTTAC CTGAAATTAT

121 TGTGTCTGGG GAAGGGAGGG AATGCTGAAC TTGAGCTCTA TTCCTTACTT GCTTTTTCAG

181 TCTATGCTGT TTACCAAGGT CTTTTTAGTC CAACTACTTT TATTAAATAG TTCTAAACTG

241 GAAAACTTGG CTGTTTGGAT TAGCGTTGTC ACATTCCTAT AACATAGGAA AGCTTGACTG

301 GGAGGAATAG TTTCAGGTAG GCCAAGTCTA TGCATGCCTA ACTGCTAGTG CTATAAATGA

361 AAGTAAACAC TTTGCTGCAG TATTTTATGT GAATTTGCTT TTAAACTTTT GGAAGTACAA

421 AGTGATGTAA TGCTAGAATG CAGGAAGCTT CTCTGTGTCT ATGAGCAACA CACCTAAATT

481 TGCTCTTGGA CTAGGACACT GATTAATTGT CATGGCTATT ATAGTAAGTG AATGAAACTC

541 TGCGATTGCC TCCAGTGAAT ATTAACAAAG AAAGTTGCAC AGATTCATGA CAGGTACTGC

601 AGTATACCTG CAAAAGTATT CAAGGAATAA CACTCTAAAG GTGTTGACTT CTCACTTAGA

661 ATTAAATCTG GGCTTTAAAA TTTTCCGTAT TCCAGTAGGA TG

5、其中鸡腹脂量是鸡的腹脂重和腹脂率。

6、其中用于消化PCR产物的限制性内切酶是Taq I。

7、其中用于琼脂糖凝胶电泳的琼脂糖凝胶浓度为2％。

实验证明具有AA基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于具有BB基因型鸡的腹脂重和腹脂率(P＜0.05)。在我们所研究的2个群体中，具有AA基因型个体的腹脂重比BB基因型个体的腹脂重低8.67-13.02克；具有AA基因型个体的腹脂率比BB基因型个体的腹脂率低0.34-0.66％。

本发明巧妙地采用PCR-RFLP的方法检测鸡A-FABP基因外显子I中C/T变异位点。

本发明操作简单、费用低、精确度高，可进行快速检测。使用本发明的标记基因型对鸡的腹脂量进行选择时，将使腹脂重降低10克左右。我国每年要规模化生产40亿只商品肉鸡，如果每只鸡能够减少10克腹脂，至少相当于节约2.4亿公斤饲料，可以带来很大的经济效益。总之，该研究发现的标记可以用于鸡脂肪性状的标记辅助选择，不仅有重要的生产意义，而且为禽类脂肪代谢在分子水平上的研究打开了新的窗口。

(四)、附图说明

附图是A-FABP基因Taq I酶切位点分析图谱。

(五)、具体实施方案

下面举例对本发明做更详细地描述：

一、实验材料

1.实验动物和性状测定

东北农业大学育种基地建立的以肉鸡高脂品系和白耳鸡为亲本杂交产生的F₂资源群体。本研究选取5个家系，共计455只鸡。中国农业大学建立的以明星肉鸡和丝毛乌骨鸡为亲本杂交产生的F₂资源群体，其中肉鸡做父本为正交，乌骨鸡做父本为反交。本研究选取正反交各4个家系，共计558只鸡。

两个F₂代群体于12周龄时翅静脉采血，草酸盐抗凝，称量活重后屠宰，然后剥离腹脂并称量腹脂重(g)，并除以12周龄活重计算出腹脂率。

2.药品和酶

三羟甲基氨基甲烷(Tris)，Sigma ChemicaLs Co；Tris饱和酚，北京鼎国生物技术发展中心；蛋白酶K(Proteinase K)，MMERCK Co；DL 2000、dNTP(dATP；dTTP；dCTP；dGTP)、Taq酶，大连宝生物公司；琼脂糖(Agarose)、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺，原平皓公司。

3.主要仪器

PTC-200PCR仪(PERKIN ELMER)、Biometra梯度PCR仪、UVP多功能成像系统、ULtrospec 1000紫外分光光度计、BECKMAN冷冻离心机、MiLLi-Q超纯水仪、DYY-III2稳压电泳仪及配套电泳槽。

二、实验方法

1.缓冲液与常用试剂的配制

1M Tris CL：121.14gTris碱溶于800mL双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至1000mL，高压灭菌。

TE缓冲液：10mM Tris·CL，1mM EDTA，pH8.0，高压灭菌。

20×SET缓冲液：3MNaCL，1M Tris CL(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，高压灭菌。

5×TBE缓冲液：54g Tris碱，27.5g硼酸，20mL 0.5M EDTA(pH8.0)，加水至1L。

50×TAE缓冲液：242g Tris碱，57.1mL冰乙酸，100mL 0.5MEDTA(pH8.0)，加水至1L。

1M Tris CL：121.14g Tris碱溶于800mL双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至1000mL，高压灭菌。

0.5M EDTA：186.1g EDTA溶于800mL双蒸水中，用NaOH调pH值至8.0，定容至1000mL，高压灭菌。

3M NaAc(pH5.2)：408.1g NaAc 3H₂O溶于800mL双蒸水中，用冰乙酸调pH至7.0，定容至1000mL。

200mL银染液：NH₃ H₂O 2mL；3.6％NaOH 4.2mL；20％ AgNO₃ 3.6mL，加去离子水至200mL。

200mL显色液：1％柠檬酸钠1mL；甲醛100uL；加去离子水至200mL。

禽血裂解液：10mM Tris·CL(pH8.0)，0.1M EDTA(pH8.0)，0.5％SDS。

2.引物的设计与合成

以下引物由上海博亚生物公司合成：

AFF：5’-AGA CTG CTA CCT GGC CTG ACA-3’

AFR：5’-CAT CCT ACT GGA ATA CGG-3’

3.鸡基因组DNA的小量提取

方法一：

(1)取20μL抗凝血液，加入500μL禽裂解液，加入蛋白酶K至终浓度为100-200μg/mL，混匀55℃消化12hr，直至溶液中不再有粘稠的团块。

(2)将溶液冷却至室温，加入5M NaCL至终浓度1.5M，混匀10min。加入等体积酚/氯仿，反复颠倒离心管混匀10min。□

(3)12,000rpm，室温离心10min。取上清，加等体积氯仿混匀10min。□

(4)12,000rpm，室温离心10min。取上清2倍体积无水乙醇沉淀DNA。□

(5)将DNA挑出放到1.5mL离心管中，用70％乙醇洗1次。□

(6)7,500rpm，室温离心5min，弃上清。

(7)将DNA干燥后(注意不能太干)溶于200μL TE中。

方法二：

(1)将20μL全血加入装有700μL1×SET的1.5mL离心管中，轻轻混匀。

(2)加入蛋白酶K(10mg/mL)至终浓度100-200μg/μL和10％的SDS至终浓度0.5％，55℃消化12h。

(3)待消化完全后，加入等体积的Tris饱和酚，来回颠倒，使其混匀

(4)12,000rpm离心10min，用剪去尖端的吸头将上层水相小心移入另一个离心管中，弃去有机相。重复第三和第四步骤一次。

(5)向水相中加入等体积的酚、氯仿、异戊醇混合液(体积比为24∶23∶1)，混合10min。12,000rpm.，离心10min，移出水相到另一个离心管。

(6)向水相中加入等体积的氯仿、异戊醇混合液(23∶1)，来回颠倒混合10min，12,000rpm，离心10min，移出水相到另一个离心管。

(7)向水相中加入1/10体积NaAc(3M，pH5.2)和2倍体积的无水乙醇，来回颠倒，沉淀DNA。

(8)将DNA挑出放到1.5mL离心管中，用70％乙醇洗1次。

(9)7,500rpm离心5min。小心倒掉管中乙醇，将倒置在滤纸上，让乙醇流尽，置于空气中干燥。

(10)加入200μL的TE，置50℃水浴中过夜溶解DNA。溶解后贮存于-20℃备用。

4.PCR反应

(1)以鸡DNA为模板进行PCR扩增，10uL反应体系中包含以下溶液或试剂：

10×PCR reaction buffer 1μL

dNTP Mixture(各2.5mM) 0.8μL

引物1(10μM) 0.2μL

引物2(10μM) 0.2μL

EX-Taq(5U/μL) 0.1μL

去离子水 6.7μL；

基因组DNA(50ng/μL) 1.0μL

(2)将上述溶液混合并按以下条件进行PCR反应。

94℃变性5min；94℃30sec，58℃30sec，72℃50sec，32个循环；72℃延伸7min。

(3)反应结束后，取PCR反应液(3μL)进行琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物。

5.PCR-RFLP反应体系及条件

酶切体系如下：

Taq I内切酶10U/μL 0.5μL

10×Buffer： 2μL

PCR Production 5μL

加去离子水至 20μL

将上述反应液混匀，于65℃水域中消化3～5小时。

6.琼脂糖凝胶电泳检测

将消化之后将全部反应液进行2％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物酶切片段多态性。

7.统计模型建立

根据F₂资源群体的特点，构建线性模型如下：

Y＝μ+G+F+S+H+R+e

Y为性状观察值，μ为群体均值，a为剩余多基因效应，G为基因型固定效应，F为家系固定效应，S为性别固定效应，R为正反交(组合)固定效应(东北农大建立的资源群体无此效应)，H为孵化批次固定效应，e为剩余值。使用统计软件JMP 4(SAS Institute Inc.，Cary，NC)检验基因型与性状间的相关程度，并估计性状的最小二乘均值。

实施例1、鸡A-FABP基因的多态性与东北农大F₂资源群体腹脂性状的相关

利用本发明的引物(AFF和AFR)对东北农业大学建立的F₂资源群体455个个体的基因组DNA进行PCR扩增，并利用Taq I限制性内切酶消化PCR产物，然后进行2％琼脂糖凝胶电泳分析。在F₂资源群体中共检测到3种基因型，当鸡A-FABP基因外显子I中变异位点为C碱基时，会产生限制性内切酶Taq I的酶切位点(T/CGA)，Taq I消化PCR产物后会产生2个片段(629bp和73bp)，将其命名为BB基因型；该位点为T碱基时(TTGA)，则不存在Taq I酶切位点，Taq I消化PCR产物后只有1个片段(702bp)，将其命名为AA基因型；该位点为C/T杂合时，Taq I消化PCR产物后会产生3个片段(702bp、629bp和73bp)，将其命名为AB基因型(附图)。

对A-FABP基因C/T变异位点产生的3种基因型与东北农大F₂资源群体455个个体的腹脂重和腹脂率进行最小二乘分析，结果表明基因型对F₂资源群体的腹脂重和腹脂率有极显著影响(P＜0.01)(表1)。

表1.东北农大F2资源群体腹脂性状的最小二乘分析结果(P值)

	腹脂重	腹脂率
	腹脂重	腹脂率	基因型性别孵化批次家系	0.00480.10470.92410.0001	0.00500.00010.16580.0001

对3种基因型间F₂资源群体腹脂性状的最小二乘均值进行多重比较，结果表明AA基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于AB和BB型个体的腹脂重和腹脂率(P＜0.05)；具有AA基因型个体的腹脂重和腹脂率比BB基因型个体的腹脂重和腹脂率分别低8.67克和0.34％(表2)。

表2.A-FABP基因不同基因型对东北农大F₂资源群体鸡只腹脂性状的影响

基因型	个体数	腹脂重最小二乘均值(克)	腹脂率最小二乘均值
基因型	个体数	腹脂重最小二乘均值(克)	腹脂率最小二乘均值	AAABBBadD	115227113	73.90±2.57^b84.08±1.58^a82.57±2.62^a4.3355.8451.348	0.0375±0.0011^b0.0419±0.0008^a0.0409±0.0011^a0.00170.00271.588

均值比较时同一列无相同字母者差异显著(^a-bp＜0.05)

D：显性度D＝d/a；a＝(BB-AA)/2；d＝AB-(AA+BB)/2

实施例2、鸡A-FABP基因的多态性与中国农大F₂资源群体腹脂性状的相关

利用本发明的引物(AFF和AFR)对中国农业大学建立的F₂资源群体588个个体的基因组DNA进行PCR扩增，并利用Taq I限制性内切酶消化PCR产物，然后进行2％琼脂糖凝胶电泳分析。结果在中国农大F₂资源群体中也检测到3种基因型，并且与在东北农大F₂资源群体中检测到的基因型相同。当鸡A-FABP基因外显子I中变异位点为C碱基时，会产生限制性内切酶Taq I的酶切位点(T/CGA)，Taq I消化PCR产物后会产生2个片段(629bp和73bp)，将其命名为BB基因型；该位点为T碱基时(TTGA)，则不存在Taq I酶切位点，Taq I消化PCR产物后只有1个片段(702bp)，将其命名为AA基因型；该位点为C/T杂合时，Taq I消化PCR产物后会产生3个片段(702bp、629bp和73bp)，将其命名为AB基因型(附图)。

对A-FABP基因Taq I酶切多态位点的3种基因型与中国农大F₂资源群体558个个体的腹脂重和腹脂率进行最小二乘分析。结果表明基因型对F₂资源群体的腹脂重和腹脂率有显著影响(P＜0.05)(表3)。

表3.中国农大F2资源群体腹脂性状的最小二乘分析结果(P值)

	腹脂重	腹脂率
	腹脂重	腹脂率	基因型	0.0224	0.0778

性别孵化批次家系正反交(组合)

0.00010.00010.00650.6818

0.00010.00010.00030.3434

对3种基因型间F₂资源群体腹脂性状的最小二乘均值进行多重比较，结果表明AA基因型个体的腹脂重和腹脂率显著低于AB和BB型个体的腹脂重和腹脂率(P＜0.05)；具有BB基因型个体的腹脂重和腹脂率比AA基因型个体的腹脂重和腹脂率分别低13.02克和0.66％(表4)。

表4.A-FABP基因不同基因型对中国农大F₂资源群体鸡只腹脂性状的影响

基因型	个体数	腹脂重最小二乘均值(克)	腹脂率最小二乘均值
基因型	个体数	腹脂重最小二乘均值(克)	腹脂率最小二乘均值	AAABBBadD	35200323	35.46±6.69^b49.21±5.12^a48.47±5.04^a6.517.251.11	0.0260±0.0038^b0.0322±0.0030^a0.0326±0.0028^a0.0033-0.0132-0.88

均值比较时同一列无相同字母者差异显著(^a-bp＜0.05)

D：显性度D＝d/a；a＝(BB-AA)/2；d＝AB-(AA+BB)/2

Claims

1、用A-FABP基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：

(1)、根据鸡脂肪-脂肪酸结合蛋白即A-FABP基因序列设计一对引物

AFF：5’-AGA CTG CTA CCT GGC CTG ACA-3’

AFR：5’-CAT CCT ACT GGA ATA CGG-3’

(2)、利用该引物对鸡的基因组DNA进行PCR扩增，PCR扩增片段长度为702bp；

(3)、利用限制性内切酶Taq I消化扩增的PCR产物；

(4)、使用2％的琼脂糖凝胶对消化后的PCR产物进行电泳分离，检测出A-FABP基因外显子I中第74位的C/T多态性位点；

(5)、当鸡A-FABP基因外显子I中多态性位点为C碱基时，会产生限制性内切酶Taq I的酶切位点即T/CGA，Taq I消化PCR产物后会产生2个片段即629bp和73bp，将其命名为BB基因型；该位点为T碱基即TTGA时，则不存在Taq I酶切位点，Taq I消化PCR产物后只有1个片段即702bp，将其命名为AA基因型；该位点为C/T杂合时，Taq I消化PCR产物后会产生3个片段即702bp、629bp和73bp，将其命名为AB基因型。

2、根据权利要求1所述的预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中分析基因多态性的方法是通过检测根据碱基的突变而分类的基因型。

3、根据权利要求1所述的预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中用于分析多态性的位点选自鸡A-FABP基因如下序列中第74位的C/T的碱基突变：

1 AGACTGCTAC CTGGCCTGAC AAAATGTGCG ACCAGTTTGT GGGCACCTGG AAGCTCCTTT

61 CTAGTGAAAA CTTCGAGGAC TATATGAAAG AGCTGGGTGA GAAATGTTAC CTGAAATTAT

121 TGTGTCTGGG GAAGGGAGGG AATGCTGAAC TTGAGCTCTA TTCCTTACTT GCTTTTTCAG

181 TCTATGCTGT TTACCAAGGT CTTTTTAGTC CAACTACTTT TATTAAATAG TTCTAAACTG

241 GAAAACTTGG CTGTTTGGAT TAGCGTTGTC ACATTCCTAT AACATAGGAA AGCTTGACTG

301 GGAGGAATAG TTTCAGGTAG GCCAAGTCTA TGCATGCCTA ACTGCTAGTG CTATAAATGA

361 AAGTAAACAC TTTGCTGCAG TATTTTATGT GAATTTGCTT TTAAACTTTT GGAAGTACAA

421 AGTGATGTAA TGCTAGAATG CAGGAAGCTT CTCTGTGTCT ATGAGCAACA CACCTAAATT

481 TGCTCTTGGA CTAGGACACT GATTAATTGT CATGGCTATT ATAGTAAGTG AATGAAACTC

541 TGCGATTGCC TCCAGTGAAT ATTAACAAAG AAAGTTGCAC AGATTCATGA CAGGTACTGC

601 AGTATACCTG CAAAAGTATT CAAGGAATAA CACTCTAAAG GTGTTGACTT CTCACTTAGA

661 ATTAAATCTG GGCTTTAAAA TTTTCCGTAT TCCAGTAGGA TG

4、根据权利要求1、2或3所述的预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法，其特征是：其中鸡腹脂量是鸡的腹脂重和腹脂率。