CN1769469A - 一种定量检测鳗弧菌的选择性培养基及其制备 - Google Patents
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Abstract
一种定量检测鳗弧菌M3的选择性培养基及其制备，培养基组成为，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏2～5g；NaCl 20～60g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂12～20g；蒸馏水1000ml。本发明利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性，以及细菌对碳源利用能力的不同，可有效将鳗弧菌M3从坎氏弧菌，哈维氏弧菌，灿烂弧菌，解藻酸弧菌，河流弧菌，副溶血弧菌，创伤弧菌中区分出来，从而方便快速地对养殖海水中的鳗弧菌M3进行定量检测，以减少M3对鱼类养殖造成的损失。
Description
技术领域
本发明涉及微生物培养基，具体地说是一种定量检测养殖海水中鳗弧菌M3的选择性培养基及其制备。
背景技术
对海水中鳗弧菌进行定量检测的方法有菌落杂交(Aoki，T.，I.Hirono，T.de Castro，and T.Kitao.1989.Rapid identification of Vibrio anguillarum bycolony hybridization.J.Appl.Ichthyol.5：67-73.)，southern杂交(Martinez-Picado，J.，A.R Blanch，and J.Jofre.1994.Rapid detection andidentification of Vibrio anguillarum by using a specific oligonucleotide probecomplementary to 16S rRNA.Appl.Environ.Microbiol.60：732-737.和Rehnstam，A.-S.，A.Norqvist，H.Wolf-Watz，and A.Hagstrom.1989.Identification of Vibrio anguillarum in fish by using partial 16S rRNA sequencesand a specific 16S rRNA oligonucleotide probe.Appl.Environ.Microbiol.55：1907-1910.)，但杂交的方法对技术和设备的要求高，不利于养殖人员操作。而已有的对鳗弧菌进行定量检测的方法(MERCEDES ALSINA，JAVIERMARTINEZ-PICADO，JOAN JOFRE，AND ANICET R.BLANCH*，AMedium for Presumptive Identification of Vibrio anguillarum，，Appl.Environ.Microbiol.，May 1994，p.1681-1683)则不适于M3的检测。
发明内容
为了克服现有技术在对鳗弧菌的定量检测中对技术和设备要求高、操作复杂的缺点，本发明提供一种可对鳗弧菌M3进行定量快速地检测的选择性培养基。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
培养基组成为，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏2～5g；NaCl 20～60g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂12～20g；蒸馏水1000ml。
按上述培养基组成称取各组份，将除了氨苄青霉素外(山梨醇、酵母粉或酵母膏、NaCl、甲酚红、溴麝香酚蓝兰、琼脂、蒸馏水)，所有的成分加在一起并加热搅动，使其溶解。溶解后冷却到45～50℃，将pH用3～5MNaOH调到8.6(±0.2)，然后加入氨苄青霉素。将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于15℃培养箱；保存时间不能超过3周。将养殖海水直接涂布于该培养基上，对养殖海水中的鳗弧菌M3进行定量检测，鳗弧菌M3菌落在该培养基上呈黄色。
本发明利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性，以及细菌对碳源利用能力的不同，可有效将鳗弧菌M3从坎氏弧菌，哈维氏弧菌，灿烂弧菌，解藻酸弧菌，河流弧菌，副溶血弧菌，创伤弧菌中区分出来，从而方便快速地对养殖海水中的鳗弧菌M3进行定量检测，以减少M3对鱼类养殖造成的损失。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
培养基组成：山梨醇15g；酵母粉4g；NaCl 35g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂15g；蒸馏水1000ml。
除了氨苄青霉素外，所有的成分加在一起并加热搅动，使其溶解；溶解后冷却到50℃，将pH用5M NaOH调到8.6(±0.2)，然后加入氨苄青霉素；将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于15℃培养箱；保存时间不能超过3周。鳗弧菌M3菌落在该培养基上呈黄色。
实施例2
培养基组成：山梨醇15g；酵母粉5g；NaCl 30g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂15g；蒸馏水1000ml。
除了氨苄青霉素外，所有的成分加在一起并加热搅动，使其溶解。溶解后冷却到50℃，将pH用4M NaOH调到8.6，然后加入氨苄青霉素；将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于15℃培养箱；保存时间不能超过3周。鳗弧菌M3菌落在该培养基上呈黄色。
实施例3
培养基组成：山梨醇15g；酵母粉3g；NaCl 35g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂18g；蒸馏水1000ml。
除了氨苄青霉素外，所有的成分加在一起并加热搅动，使其溶解；溶解后冷却到50℃，将pH用5M NaOH调到8.6，然后加入氨苄青霉素；将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于15℃培养箱；保存时间不能超过3周。鳗弧菌M3菌落在该培养基上呈黄色。
实施例4
培养基组成：山梨醇15g；酵母膏2g；NaCl 20g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂20g；蒸馏水1000ml。
除了氨苄青霉素外，所有的成分加在一起并加热搅动，使其溶解。溶解后冷却到45℃，将pH用3M NaOH调到8.4，然后加入氨苄青霉素；将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于15℃培养箱；保存时间不能超过3周。鳗弧菌M3菌落在该培养基上呈黄色。
实施例5
培养基组成：山梨醇15g；酵母膏2g；NaCl 60g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂12g；蒸馏水1000ml。除了氨苄青霉素外，所有的成分加在一起并加热搅动，使其溶解。溶解后冷却到48℃，将pH用3M NaOH调到8.5，然后加入氨苄青霉素；将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于15℃培养箱；保存时间不能超过3周。鳗弧菌M3菌落在该培养基上呈黄色。
应用例1
将养殖海水直接涂布于实施例1制备的培养基上，对养殖海水中的鳗弧菌M3进行定量检测。
用无菌容器取养殖海水，取100ul均匀涂布到已经制备好的选择性平板上，半小时后倒置于28℃培养箱中培养36-48hr(本例为36hr)，数出黄色菌落的个数N。则1ml养殖海水中鳗弧菌M3的个数为10×N。
应用例2
将养殖海水直接涂布于实施例3制备的培养基上，对养殖海水中的鳗弧菌M3进行定量检测。
将100ml养殖海水用抽滤器抽滤，滤膜放置于已经制备好的选择性平板上，正置于28℃培养箱中培养36-48hr(本例为48hr)，数出黄色菌落的个数N。则100ml养殖海水中鳗弧菌M3的个数为N。
Claims (3)
1.一种定量检测鳗弧菌M3的选择性培养基，其特征在于：
培养基组成为，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏2～5g；NaCl 20～60g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂12～20g；蒸馏水1000ml。
2.按照权利要求1所述的定量检测鳗弧菌M3的选择性培养基，其特征在于：培养基组成为，山梨醇15g；酵母粉或酵母膏4g；NaCl 35g；氨苄青霉素5mg；甲酚红40mg；溴麝香酚蓝兰40mg；琼脂15g；蒸馏水1000ml。
3.一种权利要求1所述的定量检测鳗弧菌M3的选择性培养基的制备，其特征在于：按权利要求1所述培养基组成称取各组份，将山梨醇、酵母粉或酵母膏、NaCl、甲酚红、溴麝香酚蓝兰、琼脂、蒸馏水加在一起并加热搅动，使其溶解，溶解后冷却到45～50℃，将pH用3～5M NaOH调到8.4～8.8，然后加入氨苄青霉素，将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于培养箱中。
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| CN100487127C (zh) * | 2006-07-11 | 2009-05-13 | 中国医学科学院皮肤病研究所 | 改良皮肤癣菌试验培养基 |
| CN106065413A (zh) * | 2015-04-20 | 2016-11-02 | 上海绿奥生物科技有限公司 | 一种检测水产养殖水体中弧菌含量的弧菌培养基 |
| CN110343736A (zh) * | 2019-08-12 | 2019-10-18 | 安徽天邦生物技术有限公司 | 一种改进型水产弧菌选择性鉴别培养基 |
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