CN1766616A - 用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片/微阵列检测系统及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了用胶体金标记c1q做指示剂的蛋白芯片检测系统及其检测方法，该检测系统由蛋白芯片及指示剂组成，所述指示剂为胶体金标记c1q；所述检测方法包括将待测标本与胶体金标记c1q同时加入到检测芯片上，然后采用洗涤的方法去除未结合的金标c1q，可通过目视或芯片检测仪检测芯片/微阵列判断待测标本中是否含有芯片/微阵列的检测靶物质；采用本发明的指示剂及检测方法在一张蛋白芯片上可同时检测同一抗原抗体对，无需针对不同的检测目的物去开发不同的二抗，且蛋白芯片/微阵列的开发难度更小、成本更低，特别适合献血车这种没有复杂装备的简易场合。

Description

用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片/微阵列检测系统及检测方

技术领域

本发明涉及医疗卫生领域，特别涉及胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片/微阵列检测系统及检测方法。

背景技术

现有蛋白芯片或微阵列主要采用荧光素、酶和化学发光剂作为指示剂，需要严格的实验条件和昂贵的检测设备，限制了蛋白芯片/或微阵列的使用范围。

近年来也有用胶体金/胶体银作为蛋白芯片指示剂的报道，主要使用以下几种方法：(1)检测物为抗原，以多克隆或单克隆抗体作为芯片探针，将生物素标记待测抗原，以抗生物素蛋白链菌素包裹的胶体金作为芯片杂交的指示剂，但该方法需要标记待测抗原，手续繁琐，费时费力，只适合研究使用而不适合普及推广；(2)检测物为抗原，以多克隆抗体为芯片探针，以单克隆抗体(第二抗体)作为检测抗体，用针对第二抗体的抗体包被胶体金作为芯片杂交指示剂；(3)检测物为抗体，以纯化的抗原或抗体作为芯片探针，以第二抗体、SPA或G蛋白包被的胶体金颗粒作为芯片杂交指示剂；但这两种方法需要第二抗体，而且，针对每种不同的检测目的物，就需要一种不同的第二抗体，因此试剂开发难度很大，成本也非常高；并且由于检测抗原和抗体使用不同方案，在一张芯片上同时检测抗原和抗体(特别是同一抗原抗体对)就非常复杂，甚至不可能实现。

发明内容

为克服上述现有技术存在的缺陷与不足，本发明的目地在于提供一种用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片/微阵列检测系统，该系统把胶体金clq作为指示剂，解决了胶体金免疫层析技术对每种把抗原都需要两种特异性抗体的问题，不仅使新检测项目的开发更容易、成本更低，利用该技术还可以在具有多个被检抗体、抗原的检测板上同时实现同一抗原、抗体对的检测。

本发明的另一目地在于提供一种上述检测系统的检测方法，使用本发明的检测方法，如果待测标本中含有蛋白芯片/微阵列的检测目的物，将与芯片上相应位点的探针形成免疫复合物(IC)，胶体金标记的Clq/Clq+金标Clq复合物特异性地与结合，从而将胶体金固定到发生了免疫反应的芯片点阵上。用缓冲液洗涤后，未结合的胶体金被去除，未发生免疫反应的位点不呈色，发生了免疫反应的位点呈现胶体金颗粒聚集的黄红色，因此，随待测标本中含有检测目的物的不同，芯片在于标本进行反应后的呈色位点所组成的图案(芯片杂交模式)也不同，据此可以确定待测标本中含有何种检测目的物。

为实现上述发明目地，本发明用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片检测系统由蛋白芯片及指示剂组成，所述指示剂为胶体金标记clq。

用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片检测系统的检测方法，包括以下步骤：

a、制备溶血液

按体积比，取待测标本20ul，溶于180ul含1％SDS和1mmol/L金标Clq的0.1mol/L，且pH值为7.4的PBS中，将溶血液加入到蛋白芯片表面，5-10min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗涤微阵列；

b、结果判读：

检测芯片上发生了反应的位点将显示胶体金的颜色，而未发生抗原抗体反应的位点则无色，从而可目测出或使用芯片检测仪分析检测标本中含有那种待测靶物质。

与现有技术比，本发明具有以下优点：

(1)与用荧光素、酶和化学发光剂作为蛋白芯片/微阵列的指示剂的方法相比，利用本发明的方法可以制作能目视检测的芯片/微阵列，不依赖昂贵的荧光扫描仪最为检测设备，特别适合献血车这种没有复杂装备的简易场合；

(2)与现有蛋白芯片的胶体金/银指示剂相比，利用本发明的方法的优点在于；①对抗原、抗体的检测方案相同，蛋白芯片/微阵列的设计更简单；②在一张蛋白芯片上可以同时检测同一抗原抗体对，在血型鉴定和病原体的全程检测中具有重要意义；③不需要对待测标本进行标记，简化了检测流程，节约了检测时间；④不需要针对不同的检测目的物去开发不同的二抗，蛋白芯片/微阵列的开发难度更小、成本更低，特别是使得那些难以制备二抗的目的物也可以实现蛋白芯片/微阵列的检测。

具体实施方式

下面结合优选的具体实施方式对本发明做进一步说明，但不是限制本发明。

实施例1

目视胶体金标记Clq血液检测

a制作血液检测微阵列

以抗A抗体、抗B抗体、抗HBsAg、HCV重组抗原、HIVP24、HIVgp36和梅毒重组抗原作为检测探针，以羊抗人IgG作为阳性对照，以胎牛血清白蛋白作为阴性对照，分别固定在微阵列基片上，形成3×3的微阵列，阵列内每个点直径1mm，间隔2mm，然后以小牛血清白蛋白封闭、干燥；

b血液检测与结果判读

检测操作：取20ul献血者血液，溶于180ul含1％SDS和0.1mmol/L金标Clq的0.1mol/L pH值为7.4PBS中，将溶血液加入到微阵列表面，5min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗涤微阵列。结果判读；羊抗人IgG位点呈色表明检测结果有效，否则应更换检测阵列再次检测；抗A位点呈色而抗B位点不呈色，表明献血者为A型；抗B位点呈色而抗A位点不呈色，表明献血者为B型；抗A位点呈色且抗B位点呈色，表明献血者为AB型；抗A位点和抗B位点都不呈色，表明献血者为O型；血型A物质位点呈色，表明献血者可能是B型或O型；血型B物质位点呈色，表明献血者可能是A型或O型；血型A物质、B物质位点都呈色，献血者为O型；血型A物质、B物质位点都不呈色，献血者为AB型；抗D位点呈色，表明献血者Rh(D)阳性，不呈色为阴性；抗HBsAg呈色表明献血者HBsAg阳性；HCVAb抗抗体位点呈色表明献血者HCVAb阳性；HIVP24/gp36嵌合抗原位点呈色表明献血者HIV抗体阳性；抗HIVp24位点呈色表明献血者HIV-1病毒阳性；抗HIVgp36位点呈色表明献血者HIV病毒阳性；抗HCMV位点呈色表明献血者HCMV病毒阳性；抗EBV位点呈色表明献血者HCMV病毒阳性；梅毒抗抗体位点呈色表明献血者梅毒抗体阳性。

实施例2

自动胶体金标记Clq血液检测

a制作胶体金标记Clq血液检测微阵列

将血型A物质、B物质、血型A抗体、B抗体、D抗体、抗HBsAg、HCV重组抗原、HCV抗体、HIVp24、HIVgp36、HIVp24抗体、HIVgp36抗体、TP重组抗原作为检测探针，以羊抗人IgG作为阳性对照，以胎牛血清白蛋白作为阴性对照，分别固定在制作好的微阵列基片上，形成5×3的微阵列，阵列内每个点直径0.2mm，间隔0.5mm，然后以小牛血清白蛋白封闭、干燥；

b封装血液检测微阵列

将盖片密封地扣盖在带有上述检测探针微阵列的基片上，在盖片的条形码区域印上或贴上标识该微阵列信息(检测内容、探针排列方式等)的条码，即制得血液检测微阵列；

c血液检测与结果判断

检测操作：取20ul献血者血液，溶于180ul含1％SDS、0.1-5mmol/L胶体金标记Clq和1-5mmol/L Clq的0.1mol/L pH7.4PBS中，将溶血液加入到微阵列表面，5min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗涤微阵列，将检测微阵列。结果判读：微阵列扫描仪对检测微阵列进行扫描，从阅读窗读取微阵列的杂交模式，从条码区读取微阵列检测内容与探针排列方式等信息，并据此调用内置软件对检测结果进行判断，检测结果可以打印也可以存入计算机。

Claims (2)

1、用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片检测系统，由蛋白芯片及指示剂组成，其特征在于：所述指示剂为胶体金标记clq。

2、用胶体金标记clq做指示剂的蛋白芯片检测系统的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

a、制备溶血液

按体积比，取待测标本20ul，溶于180ul含1％SDS和1mmol/L金标Clq的0.1mol/L，且pH值为7.4的PBS中，将溶血液加入到蛋白芯片表面，5-10min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗涤微阵列；

b、结果判读：

检测芯片上发生了反应的位点将显示胶体金的颜色，而未发生抗原抗体反应的位点则无色，从而可目测出或使用芯片检测仪分析检测标本中含有那种待测靶物质。