CN1727475A

CN1727475A - 一种鸡蛋提取溶菌酶的方法

Info

Publication number: CN1727475A
Application number: CN 200410060632
Authority: CN
Inventors: 涂小燕
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-07-26
Filing date: 2004-07-26
Publication date: 2006-02-01

Abstract

一种鸡蛋提取溶菌酶的方法，所需原料及工具有：离心机、搅拌器、pH试纸、透折袋、真空旋转蒸发器、真空泵。试剂有：硫酸铵、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠，724树脂、盐酸(36％－38％)、氢氧化钠、无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸铵。工艺流程是：蛋清→搅拌→与树脂混合→冲洗→加缓冲液→冲洗→硫酸氨→过滤→硫酸氨→沉淀→过滤→成品。该方法简便，可是取效率高，对加入此行的企业要求不高，可大大提高提取溶菌酶的产量。

Description

一种鸡蛋提取溶菌酶的方法

技术领域

本发明涉及溶菌酶的提取方法和工艺，尤其是一种高效、简便地从鸡蛋中提取溶菌酶的方法和工艺。

背景技术

溶菌酶的分子量为14388，由129个安基酶组成碱性球蛋白，是一种稳定的蛋白质，在鸡蛋蛋清中含量最丰富。溶菌酶是一种国内外很紧俏的生化物质，广泛用于医药、化工、食品等行业。在医药上，溶菌酶可水解细胞壁，所以具有抗炎作用并保护机体不受感染，在化工上可作多种生产原料的中间体应用，在食品上可在用于抗腐保鲜，尤其重要的是近年来溶酶已成为基因工程及细胞工程必不可少的工具酶，随着生物工程的发展，提取溶菌酶具有重要的战略意义。

溶菌酶的生产一般以鸡蛋清为原料，主要有树脂吸附、盐析与结晶及超滤法等提取方法。结晶纯化法态费时，且生产率较低。超滤纯化浓缩法需要特殊设备，蛋清必需用磷酸盐缓冲液(I＝0.2)稀释10倍，蛋清蛋白质难于回收利用。纯化液常用冷冻干燥法，冷冻设备昂贵、耗电多。以上种种原因使高活性的溶菌酶生产成本高、而产品在国际上定价低、限制了溶菌酶的规模化生产。

发明内容

本发明的任务是提供一种操作简便，提取效率高，且产品品质优良的从鸡蛋蛋清中提取溶菌酶的方法和工艺，从而可降低溶菌酶的生产成本和生产提取门槛。

发明内容

溶菌酶的所述提取方法步骤是：

A、取新鲜鸡蛋，除去杂质，将处理过的蛋清，在搅拌条件下按15％加入724型离子交换树脂，使树脂全部悬浮在蛋清中，于5-15℃搅拌吸附6小时，阴凉处静置过夜，待分层后弃去上清液，下层沉淀用树脂反复冲洗几次，除去蛋白，最后滤干树脂；

B、将10％硫酸铵溶液倒入树脂中，搅拌；

C、1600ml水加160克硫酸铵搅拌2小时过滤；

D、1200ml水加120克硫酸铵搅拌1小时过滤。

E、将二次过滤的溶菌酶溶液混合，加入总量3％的硫酸铵即84克，搅拌溶化，沉淀过滤。

F、将过滤出的溶菌酶放在阴凉通风的地方晾干，包装即可。

缓冲液的配比：800ml水加磷酸氢二钠28.64克，磷酸二氢钠12.48克，搅拌溶化。

最后，将用过的树脂用清水冲干净，然后用1200ml水加96克氢氧化钠溶液倒入树脂里浸泡三小时，冲洗树脂至PH6.5克，再用缓冲液浸泡备用。

用本方法提取溶菌酶所需原料及工具有：

离心机、搅拌器、PH试纸、透折袋、真空旋转蒸发器、真空泵。试剂有：硫酸铵、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠，724树脂、盐酸(36％-38％)、氢氧化钠、无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸铵。

该方法简便，可是取效率高，对加入此行的企业要求不高，可大大提高提取溶菌酶的产量。

具体实施方式

本发明的工艺流程是：

蛋清→搅拌→与树脂混合→冲洗→加缓冲液→冲洗→硫酸氨→过滤→硫酸氨→沉淀→过滤→成品

归纳前述，本发明所说方法和工艺大致可分为五大步：

1、取蛋清、除杂质；

2、洗脱：在724树脂中加入等体积PH值6.5，0.15摩尔/升缓冲液，搅拌20分钟，弃去缓冲液，按同法再处理一次，最后将除去杂物的树脂加入1倍量浓度为10％的硫酸铵溶液，搅拌洗脱1小时，滤出并收集洗脱液，按上法再收集一次合并二次洗脱液放入沉淀缸中。

3、沉淀：在沉淀缸中按洗脱液体积分别加入32％的固体硫酸铵，充分搅拌使其完全溶解，此时，白色沉腚产生，在冷处置过夜，去上清液，收集沉淀。

4、透析：将沉淀用量蒸馏水全部溶解，然后装入透折袋中，在冷水透析过夜，收集透所液。

5、盐析、干燥：将透析过认收集在溶器中用1∶5的盐酸(即1份盐酸加5份水)调PH3.5，加入5％的氢氧化钠，搅均，冷处放置48小时左右，收集沉淀物干燥即得溶菌酶产品。

实施例：蛋清1178克，按比例加处理好的724树脂、搅拌吸附6小时。离心、收集树脂，用水和磷酸盐缓冲液分别洗去杂蛋白，再用等体积10％的硫酸铵浸泡、搅拌洗脱。三次洗脱液的总体积为820ml。每83ml洗脱液加32克细硫酸铵搅拌至完全溶解，静置分层后，离心，收集盐析沉淀。沉淀对水透折，透析后调整PH4-5、离心、弃褐色沉淀。其上清液(约40ml)调整PH＝5.5、再加1mol/L磷酸氢二钠～磷酸二氢钾缓冲液(PH＝5.5)最终浓度为10mmol/L(约0.4ml)，静置10分钟，离心、弃沉淀。其纯化液在(40±2)℃下真空旋转蒸发，变浊时倒出，冷冻后25℃以下真空干燥。获产品为淡黄色大颗粒结晶0.7248克，其产品活性范围13539U/mg～15741U/mg。回收的蛋清可直接食用，磷酸盐、硫酸铵及蛋白质废水液可回收作肥料。724树脂经酸、碱处理，可反复利用。这样除可大大降低成本，实现蛋清的综合应用之外，主要是使溶菌酶的生产综合效率较传统方法可提高近15倍，效益显著。

Claims

1.一种鸡蛋提取溶菌酶的方法，其特征是，按如下步骤提取：

B、将10％硫酸铵溶液倒入树脂中，搅拌；

C、1600ml水加160克硫酸铵搅拌2小时过滤；

D、1200ml水加120克硫酸铵搅拌1小时过滤。

F、将过滤出的溶菌酶放在阴凉通风的地方晾干，包装即可。

2.如权利要求1所说的鸡蛋提取溶菌酶的方法，其特征是，缓冲液的配比为：800ml水加磷酸氢二钠28.64克，磷酸二氢钠12.48克，搅拌溶化。

3.如权利要求1所说的鸡蛋提取溶菌酶的方法，其特征是，其工艺流程是：蛋清→搅拌→与树脂混合→冲洗→加缓冲液→冲洗→硫酸氨→过滤→硫酸氨→沉淀→过滤→成品。