CN1727473A - 裸胚冷冻技术 - Google Patents

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黄河
李鑫
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Shandong Liuhe Group Co Ltd
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LIUHE LIVESTOCK DEVELOPMENT Co Ltd QINGDAO
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Abstract

一种裸胚的冷冻方法，其特征是冷冻液主要成分为：乙二醇、蔗糖、葡聚糖、血清白蛋白、PBS、超纯水。成分比例为：乙二醇20－30％、蔗糖20－10％、葡聚糖10－15％、血清白蛋白10－15％，PBS30－10％、超纯水10－20％。它可尽量避免冷冻时的溶质效应和物理损伤对脱除透明带的裸露细胞团的破坏作用，使胚胎解冻后保持较好的活力，保证获得与带有透明带的胚胎相同的移植成功率。

Description

裸胚冷冻技术
技术领域：
本发明涉及胚胎移植冷冻胚胎生产领域，具体的说是将胚胎脱除透明带后进行超低温保存的一种冷冻方法。
背景技术：
目前，早期胚胎的性别鉴定技术必须取得部分胚胎细胞，进行基因扩增，从而判定胚胎的性别，达到性别控制的目的。但是胚胎经过切割取样后，透明带遭到破坏，若将裸露的细胞团重新放入另外的透明带中，所需设备投资很大，而且携带不方便，不利于产业化操作。因此，采用独特的冷冻液和冷冻技术，可大大减少不必要的投资，更方便进行大规模推广。
发明内容：
本发明为了解决胚胎脱除透明带后，抗低温的性能降低，同时对冷冻防护液的渗透功能加强，造成冷冻过程中，溶质效应和物理损伤对裸露细胞团的损伤问题，发明了一种用乙二醇、蔗糖、葡聚糖等为主要原料，来冷冻裸露胚胎的方法。
本发明为了解决上述技术问题，所采取的技术方案是，一种高保护功能的冷冻液，其配方成分为：乙二醇、蔗糖、葡聚糖、血清白蛋白、PBS、超纯水。
成分比例：10％乙二醇    20-30％
          1M蔗糖        20-10％
          10％葡聚糖    10-15％
          血清白蛋白    10-15％
          PBS           30-10％
          超纯水        10-20％
冷冻程序：室温平衡5min--6.5℃平衡5min-植冰--6.5℃平衡5min-降温-平衡后投入液氮。
冷冻操作过程：
1)平衡：室温下将胚胎洗净，在冷冻液中平衡5-10分钟，装管。
2)植冰前平衡：将细管放入冷冻仪，在-6.5℃平衡5分钟。
3)植冰：将镊子在液氮中放置足够低温，于细管上1/3处植冰。
4)植冰后平衡：在-6.5℃平衡5分钟。
5)降温：以0.5℃/min的速率降温至-35℃。
6)平衡10分钟后，投入液氮保存。
具体实施例：
下面结合具体实施例对本发明进一步说明。
实施例1
1、配药：取乙二醇2ml，蔗糖1ml，葡聚糖1ml，血清白蛋白1.5ml，PBS 2.5ml，超纯水2ml。
2、打开无菌操作台的紫外消毒灯，照射30min后，进行操作。将葡聚糖配成10％的水溶液，然后分别取乙二醇2ml，蔗糖1ml，葡聚糖1ml，血清白蛋白1.5ml，PBS 2.5ml，超纯水2ml，放入高温消毒后的小玻璃瓶内，混匀。用细菌滤器过滤后，4℃恒温保存5-7天。
3、使用该配方冷冻的裸胚，解冻后复苏率87％，移植成功率42％。
实施例2
1、配药：取乙二醇3ml，蔗糖1ml，葡聚糖1ml，血清白蛋白1ml，PBS 3ml，超纯水1ml。
2、打开无菌操作台的紫外消毒灯，照射30min后，进行操作。将葡聚糖配成10％的水溶液，然后分别取乙二醇3ml，蔗糖1ml，葡聚糖1ml，血清白蛋白1ml，PBS 3ml，超纯水1ml，放入高温消毒后的小玻璃瓶内，混匀。用细菌滤器过滤后，4℃恒温保存5-7天。
3、使用该配方冷冻的裸胚，解冻后复苏率81％，移植成功率40％。
实施例3
1、配药：取乙二醇2ml，蔗糖2ml，葡聚糖1ml，血清白蛋白1ml，PBS 3ml，超纯水1ml。
2、打开无菌操作台的紫外消毒灯，照射30min后，进行操作。将葡聚糖配成10％的水溶液，然后分别取乙二醇2ml，蔗糖2ml，葡聚糖1ml，血清白蛋白1ml，PBS 3ml，超纯水1ml，放入高温消毒后的小玻璃瓶内，混匀。用细菌滤器过滤后，4℃恒温保存5-7天。
3、使用该配方冷冻的裸胚，解冻后复苏率86％，移植成功率40％。

Claims (3)

1、一种裸露胚胎的冷冻保存方法，其特征是，主要成分为：乙二醇、蔗糖、葡聚糖、血清白蛋白、PBS、超纯水。
2、根据权利要求1所述的裸露胚胎的冷冻保存方法，其特征是，成分比例为：乙二醇20-30％、蔗糖20-10％、葡聚糖10-15％、血清白蛋白10-15％，PBS30-10％、超纯水10-20％。
3、根据权利要求1所述的裸露胚胎的冷冻保存方法，其特征是，冷冻规程为：室温平衡5min--6.5℃平衡5min-植冰--6.5℃平衡5min-降温-平衡后投入液氮。
具体冷冻操作过程为：
1)平衡：室温下将胚胎洗净，在冷冻液中平衡5-10分钟，装管。
2)植冰前平衡：将细管放入冷冻仪，在-6.5℃平衡5分钟。
3)植冰：将镊子在液氮中放置足够低温，于细管上1/3处植冰。
4)植冰后平衡：在-6.5℃平衡5分钟。
5)降温：以0.5℃/min的速率降温至-35℃。
6)平衡10分钟后，投入液氮保存。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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