CN1714095A - 心磷脂分子及合成方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了心磷脂、特别是短链心磷脂的新的合成途径，所述心磷脂具有不同链长的不同脂肪酸和/或烷基链、还具有或不具有不饱和度。该方法包含：使1，2－O－sn－二酰基/1，2－O－sn－二烷基甘油或2－O－保护的甘油与亚磷酰胺试剂或磷酸三酯反应，生成保护的心磷脂，对其去保护制备出短链心磷脂。该反应方案可以用于生成心磷脂的新变体。可以将由本方法制备的心磷脂包含在脂质体中，其还可以包含活性剂，例如疏水的或亲水的药物。这样的脂质体可以用于治疗疾病或诊断和/或分析试验中。脂质体还可以包含用于靶向特定细胞类型或特定组织的配体。

Description

心磷脂分子及合成方法

发明领域

本发明涉及用于制备心磷脂类似物/变体的新的合成方法和含有它们的组合物。本发明还涉及含有活性剂或药物的脂质体制剂或复合物或乳剂和它们在治疗人和动物疾病中的应用。

发明背景

脂质体制剂具有提高疏水药物在水性溶液中的溶解度的能力。它们经常会降低与药物治疗有关的副作用，并且为开发活性剂的新制剂提供了有弹性的工具。

通常从天然磷脂中制备脂质体，例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸和磷脂酰肌醇。可以加入阴离子的磷脂，例如磷脂酰甘油和心磷脂，以产生净负表面电荷，其提供胶体稳定化。经常从天然源中纯化这些组分，在有些情况下可以化学合成它们。

脂质体的表面电荷的性质和密度会影响稳定性、动力学、生物分布和与靶细胞的相互作用，并被靶细胞摄入。脂质体表面电荷还影响脂质体聚集的趋势，这使得脂质体难以发挥作用并影响靶细胞的摄入。在这方面，带有中性表面电荷的脂质体具有最高的聚集趋势，但是在全身施用后似乎难以被网状内皮系统(RES)的细胞清除。另一方面，带负电荷的脂质体表现出降低的聚集和提高的稳定性，但是表现出非特异性的体内细胞摄入。因而，已经有人认为小量的带负电荷的脂质可以稳定化中性脂质体，对抗聚集依赖性的摄入机制(参见，例如Drummond等，Pharm.Rev.，51，691-743(1999))。

心磷脂(也称作二磷脂酰甘油)构成了一类复合的阴离子的磷脂，其典型地从与高代谢活性有关的组织的细胞膜中纯化，包括心脏和骨骼肌的线粒体。如上所述，心磷脂的负表面电荷使脂质体稳定化，对抗聚集依赖性的摄入。在动物组织和线粒体中，心磷脂含有高达90％的亚油酸(18:2)。酵母心磷脂的不同之处在于含有更多的油酸(18:1)和棕榈油酸(16:1)脂肪酸，而细菌脂质含有饱和的和单烯的14至18个碳的脂肪酸。但是，至今尚不知道具有短链脂肪酸的心磷脂。尚未阐明心磷脂脂肪酸链(即饱和的或不饱和的)的长度和性质对脂质体聚集的潜在影响。

也还没有描述合成含有短脂肪酸链的心磷脂(″短链心磷脂″)的方法。通常，已知的合成心磷脂的方法主要分成2组：(a)使用磷酸化试剂，将2-保护的甘油的伯羟基连接到1，2-二酰基-sn-甘油，和(b)在存在2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(TPS)或吡啶的情况下，在2-保护的甘油的伯羟基处与磷脂酸缩合(参见，例如Ramirez等，Synthesis，11，769-770(1976)，Duralski等，Tetrahedron Lett.39，1607-1610(1998)，Saunders和Schwarz，J Am.Chem.Soc.88，3844-3847(1966)，Mishina等，Bioorg.Khim.11，992-994(1985)和Stepanov等，Zh.Org.，Khim.20，985-988(1984))。通过二酰基甘油磷酸苯甲酯的银盐与1，3-二碘丙醇二苄醚或1，3-二碘丙醇叔丁醚之间的反应，还生成了心磷脂(参见，例如De Haas等，Biochim.Biophys.Acta，116，114-124(1966)和Inoue等，Chem.Pharm.Bull.11，1150-1156(1963))。尽管该方案适用于制备小量的心磷脂，它们对于大量的常规制备是没有吸引力的，因为包含了许多步骤、需要小心地纯化中间体和使用高度光敏感的银盐衍生物和不稳定的碘中间体。

磷酸三酯和亚磷酰胺(phosphoramidite)酯已经广泛地用于核酸合成中，以形成磷酸酯键，且较少地用于磷脂合成(参见，例如Browne等，JChem.Soc.Perkin Trans，1，653-657(2000))。在该方面，Browne等，supra描述了使用亚磷酰胺方法制备磷脂类似物、特别是磷酸胆碱类似物。已经使用多种亚磷酰胺试剂制备了磷脂酰肌醇PtdIns(4，5)P₂和PtdIns(3，4，5)P₃和其衍生物，包括N，N-二异丙基亚磷酰胺(参见，例如Watanabe等，Tetrahedron Lett.35，123-124(1994))，联芴基亚磷酰胺(参见，例如Watanabe等，Tetrahedron Lett.38，7407-7410(1997))和通过将二酰基甘油与(苄氧基)(N，N-二异丙基氨基)氯化膦反应生成的试剂(参见，例如Chen等，R Org.Chem.，61，6305-6312(1996)和Prestwich等，Acc.Chem.Res.，29，503-513(1996))。另外，已经使用亚磷酰胺试剂2-氰基-乙基N，N，N，N-四异丙基二亚磷酰胺(phosphorodiamidite)制备了PtdIns(4，5)P₂和PtdIns(3，4，5)P₃的磷酸三酯类似物(参见，例如Gu等，J Org.Chem，61，8642-8647(1996))。而且，Murakami等，J.Org Chem，64，648-651(1999)描述了使用甲基四异丙基二亚磷酰胺作为磷酸化试剂从2，5-二苄基-D-甘露糖醇合成磷脂酰甘油。但是，还没有较好地建立磷酸三酯和亚磷酰胺酯在制备磷脂例如心磷脂、特别是具有不同脂肪酸链长的心磷脂物质中的应用。

需要新的合成方法，其可以用于制备大量的饱和的和不饱和的具有不同脂肪酸链长的心磷脂物质，特别是″短链心磷脂″。该方法能提高更多种的心磷脂物质的可利用性，并且能使可以用于开发新的含有活性剂的脂质体制剂的脂质多样化，与目前可以获得的相比，其具有更多的限定的组合物。

本发明提供了这样的方法和组合物。从这里提供的发明描述可以明白本发明的这些和其它优点、以及其它的发明特征。

发明概述

本发明提供了用于制备心磷脂的新的合成方法，所述的心磷脂具有不同的脂肪酸和/或烷基链，它们具有不同的长度和饱和度/不饱和度。该方法包括：(a)使光学纯的1，2-O-二酰基-sn-甘油或1，2-O-二烷基-sn-甘油与一种或多种亚磷酰胺试剂或一种或多种磷酸三酯反应，(b)用2-保护的甘油连接(a)的产物，其中生成了保护的心磷脂，和(c)对保护的心磷脂去保护，制备出心磷脂。本发明还提供了用于制备具有不同脂肪酸链长的心磷脂的方法，其包括：(a)使2-O-保护的甘油与一种或多种亚磷酰胺试剂反应，其中生成了磷酸化试剂，(b)使磷酸化试剂与光学纯的1，2-O-二酰基-sn-甘油或1，2-O-二烷基-sn-甘油反应，其中生成了保护的心磷脂，和(c)对保护的心磷脂去保护，制备出心磷脂。

通过本方法制备的心磷脂可以用于脂质体中，其还可以包含活性剂例如疏水的或亲水的药物、反义核苷酸或诊断剂。这样的脂质体可以用于治疗疾病或诊断性的和/或分析性的实验。

附图说明

图1描述了心磷脂的一般结构。

图2描述了合成心磷脂的一个方案。

图3描述了心磷脂的一个备选合成方案。

图4描述了心磷脂的一个备选合成方案。

图5描述了心磷脂的一个备选合成方案。

图6描述了心磷脂醚类似物的一个备选合成方案。

图7描述了心磷脂醚类似物的一个备选合成方案。

发明详述

本发明描述了合成具有通式I、II和III的心磷脂变体和类似物以及含有这种变体和类似物的组合物的方法。

在式III中，Y₁和Y₂相同或不同地为-O-C(O)-，-O-，-S-，-NH-C(O)-或诸如此类。在式I、II和III中，R₁和R₂相同或不同地为H、饱和的和/或不饱和的烷基，优选C₂至C₃₄饱和的和/或不饱和的烷基。在式III中，R₃是(CH₂)_n且n＝0-15。在式III中，R₄是氢，烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，肽，二肽，多肽，蛋白质，碳水化合物(例如葡萄糖，甘露糖，半乳糖，多糖或诸如此类)，杂环化合物，核苷，多核苷酸或诸如此类。在式III中，R₅是连接物，根据需要和应用，其可以(或不)添加到分子中。但是，当添加时，R₅可以含有烷基，取代的烷基，环烷基，取代的环烷基，烷氧基，聚烷氧基(例如含有约1至500个烷氧基聚物的聚乙二醇化的醚(且可以具有至少约10个烷氧基聚物，例如至少约50个烷氧基聚物或至少约100个烷氧基聚物，例如至少约200个烷氧基聚物或至少约300个烷氧基聚物或至少约400个烷氧基聚物)，取代的聚烷氧基等)，肽，二肽，多肽，蛋白质，碳水化合物例如葡萄糖，甘露糖，半乳糖，多糖等。在式I、II和III中，X是氢或无毒的阳离子，优选铵、钠、钾、钙、钡离子等。

术语″烷基″包含饱和的或不饱和的直链和支链烃部分。术语″取代的烷基″包含还携带一个或多个选自下述的取代基的烷基：羟基，烷氧基(低级烷基的)，巯基(低级烷基的)，环烷基，取代的环烷基，卤素，氰基，硝基，氨基，酰胺基(amido)，亚氨基，硫代，-C(O)H，酰基，氧酰基，羧基等。

在最优选的实施方案中，式III中的Y₁和Y₂是-O-C(O)-或-O-。R₃最优选地为CH₂。另外，在式I、II和III中，R₁和R₂是相同的，为C₂至C₁₃饱和的和/或不饱和的烷基，更优选为4至14个碳原子(例如约6至12个碳原子)。X最优选地为氢或铵离子。在没有连接物(R₅)的情况下，产生了心磷脂的一般结构(图1)。

本发明提供了制备式I、II或III的心磷脂或其类似物的方法，其包括：在存在酸催化剂的情况下，使式VIII的醇与一种或多种磷酰胺试剂和2-O-保护的甘油或2-O-取代的甘油VI反应。

式VI中的Y是羟基保护基，优选烷基等，或甲硅烷基保护基。在式VIII中，R₁、R₂、R₃、Y₁和Y₂可以是如上面关于式I、II或III所述。根据本发明的方法，酸催化剂可以是能促进反应的任何合适的催化剂。这样的催化剂的实例包括4，5-二氯咪唑，1H-四唑，5-(4-硝基苯基)-1H-四唑，5-(3，5-二硝基苯基)-1H-四唑，N-甲基三氟咪唑鎓盐和N-甲基高氯酸咪唑鎓盐，4，5-二氰基咪唑，5-乙基硫代-1H-四唑和5-甲基硫代-1H-四唑。

优选的催化剂是4，5-二氯咪唑或1H-四唑。根据本发明的方法，偶联的亚磷酰胺可以具有式IV或V：

在另一个实施方案中，本发明提供了制备式I、II或III的心磷脂或其类似物的方法，其包括：在存在三溴吡啶鎓的情况下，使2-O保护的甘油与一种或多种磷酸三酯反应。优选的磷酸三酯可以通过使式VIII的醇与通式VII的亚磷酰胺反应来生成。

式IV、V或VII中的X是磷酸保护基，优选苄基或2-氰基乙基或甲硅烷基。合适的保护基的其它实例包括烷基磷酸酯，包括乙基，环己基，叔丁基；2-取代的乙基磷酸酯包括2-氰基乙基，4-氰基-2-丁烯基，2-(甲基二苯基甲硅烷基)乙基，2-(三甲基甲硅烷基)乙基，2-(三苯基甲硅烷基)乙基；卤代乙基磷酸酯包括2，2，2-三氯乙基，2，2，2-三溴乙基，2，2，2-三氟乙基；苄基磷酸酯包括4-氯苄基，芴基-9-甲基，二苯基甲基和酰胺化物。

合成本发明的化合物的一般反应次序如图2和3所示。本发明提供了制备具有不同脂肪酸链长的心磷脂I的方法，其包括：(a)使光学纯的1，2-O-二酰基-sn-甘油2与一种或多种通式IV(图2)或V(图3)的亚磷酰胺试剂反应，(b)使(a)的产物3与2-O-保护的甘油VI在氯化的溶剂(例如二氯甲烷、氯仿等)中偶联，随后用间氯过苯甲酸(m-CPBA)氧化，生成保护的心磷脂4。此后，将保护的心磷脂去保护，然后转化成铵盐，产生心磷脂1(铵盐)。

为了与光学纯的1，2-O-二酰基-sn-甘油2反应，可以使用任何合适的亚磷酰胺试剂或方法学，例如在例如Browne等，见上文，所述。合适的亚磷酰胺试剂的实例包括(苄氧基)(N，N-二异丙基氨基)氯化膦(参见，例如Prestwich等J.Am.Chem.Soc.1991，113，1822-1825)，苄氧基二(二异丙基氨基)膦(参见，例如，Dreef等Tetrahedron Lett.1988，29，6513-6516)，2-氰基乙基-N，N N，N-四异丙基亚磷酰胺(参见，例如Browne等J Chem.Soc.Perkin Trans.1.2000，653-657.)，(2-氰基乙基)(N，N-二异丙基氨基)氯化膦(参见，例如Prestwich等J.Org.Chem.1998，63，6511-6522)，联芴基二异丙基亚磷酰胺(参见，例如，Watanabe等Tetrahedron Lett.1997，38，7407-7410)，甲基-N，N，N，N四异丙基二亚磷酰胺(参见，例如Murakami等J Org.Chem.1999，64，648-651)，二甲基N，N-二异丙基亚磷酰胺(参见，例如Watanabe等Tetrahedron Lett.1993，34，497-500)，二苄基二异丙基亚磷酰胺(参见，例如Watanabe等Tetrahedron Lett.2000，41，8509-8512)，二叔丁基-N，N-二异丙基亚磷酰胺(参见，例如Lindberg等J.Org.Chem.2002，67，194-199.)，2-(二苯基甲基甲硅烷基)乙基-N，N，N，N-四异丙基亚磷酰胺(参见，例如Chevallier等Org.Lett.2000，2，1859-1861)，(N-三氟乙酰基氨基)丁基和(N-三氟乙酰基氨基)戊基-N，N，N，N-四异丙基亚磷酰胺(参见，例如wilk等J.Org.Chem.1997，62，6712-6713)。

本发明的另一个实施方案如图4所示。在该方法中，可以使用亚磷酰胺VII来磷酸化光学纯的1，2-O-二酰基-sn-甘油2，以生成亚磷酸三酯5，使用过溴化吡啶鎓和鏻盐方法学(参见，例如Watanabe等，见上文)，其可以用任何合适的2-O-保护的甘油VI偶联，例如，苄氧基1，3-丙二醇或2-乙酰丙酸基(levulinoyl)-1，3-丙二醇，以得到保护的心磷脂4。在合成方法的上下文中，优选的偶联试剂是二苄基二异丙基亚磷酰胺。

在如图5所述的替代方案中，本发明的方法包含：(a)使2-O-保护的甘油VI与一种或多种亚磷酰胺试剂IV或V反应，其中生成了磷酸化试剂6，(b)使磷酸化试剂6与光学纯的1，2-O-二酰基-sn-甘油2反应，随后用m-CPBA氧化，其中生成了保护的心磷脂4，和(c)对保护的心磷脂去保护，制备出心磷脂。用于本发明的该方面的合适的亚磷酰胺试剂和2-O-保护的甘油如上所述。

如图6所述的本发明的另一个实施方案导致了心磷脂的醚类似物，其中酰基被替换为烷基链。因此，(a)用亚磷酰胺IV或V处理1，2-O-二烷基-sn-甘油7，其中生成了磷酸化试剂8，(b)使磷酸化试剂与2-O-保护的甘油VI反应，随后进行氧化，其中生成了保护的心磷脂9，和(c)对保护的心磷脂去保护，生成了心磷脂10的醚类似物。

本发明的另一个实施方案如图7所述。在该方法中，可以使用亚磷酰胺VII磷酸化光学纯的1，2-O-二烷基-sn-甘油7，以生成亚磷酸三酯11，使用过溴化吡啶鎓和鏻盐方法学(参见，例如Watanabe等，见上文)，其可以用任何合适的2-O-保护的甘油VI偶联，例如，苄氧基1，3-丙二醇或2-乙酰丙酸基-1，3-丙二醇，以得到保护的心磷脂醚类似物9。在合成方法的上下文中，优选的偶联试剂是二苄基二异丙基亚磷酰胺。

上述的本发明是合成心磷脂的较佳的和有效的方法。其路线较短，且具有较好的总体产率。根据保护基，可以通过合适的方法进行去保护。例如，可以通过催化水解、或用NaI、2-氰基乙基处理来去除苄基，用叔碱例如三乙基胺处理来去除芴基甲基，用氟化物离子或酸性介质对甲硅烷基去保护，通过肼解作用去除乙酰丙酸基。

可以用任何合适的方式改进本文所述的合成方法。例如，可以使用多种酸催化剂来制备亚磷酰胺和磷酸酯，包括4，5-二氯咪唑(参见，例如Browne等)，5-(4-硝基苯基)-1H-四唑，5-(3，5-二硝基苯基)-1H-四唑，N-甲基三氟咪唑鎓盐和N-甲基高氯酸咪唑鎓盐(参见，例如Moriguchi等)。类似地，叔丁基氢过氧化物可以用作备选氧化剂。可以用本领域已知的任何合适的方法进一步改进所述的方法。

本发明的方法可以用于制备包含不同长度和饱和度/不饱和度的脂肪酸/烷基链的心磷脂物质。磷脂脂肪酸的一般结构包含烃链和羧酸基团。通常，脂肪酸烃链的长度为约2至约34个碳原子，且可以是饱和的或不饱和的。但是，碳链更典型地是约12至约24个碳原子。在一些实施方案中，烃链理想地含有例如至少约5个碳原子或至少约10个碳原子或甚至至少约15个碳原子。典型地，脂肪酸烃的长度是小于约24个碳的酸，例如小于约24个碳原子，或甚至小于约20个碳原子。

本发明还提供了根据本方法制备的心磷脂或心磷脂类似物。最优选地，根据本方法制备的心磷脂包含短脂肪酸链(即，″短链心磷脂″)，且本发明提供了短链心磷脂。短脂肪酸链包含约2至约14个碳原子，且可以具有约4(或约6)至约12个碳原子，例如约8至约10个碳原子。或者，根据本方法制备的心磷脂可以含有长链的脂肪酸链(即，″长链心磷脂″)。长脂肪酸链包含约14至约34个碳原子，例如约14(或约20)至约24个碳原子。本发明的方法不限于专门生产短或长链的心磷脂物质。实际上，通过本方法也可以制备出含有中等长度的脂肪酸/烷基链的心磷脂。

磷脂脂肪酸典型地根据烃链中的双键和/或三键的数目(即不饱和度)来分类。饱和脂肪酸不含有任何双键或三键，且链中的每个碳上结合有最大数目的氢原子。脂肪酸的不饱和程度依赖于烃链中的双键或三键的数目。在这方面，单不饱和脂肪酸含有一个双键，而多不饱和脂肪酸含有2个或多个双键(参见，例如，Oxford Dictionary ofBiochemistry and MolecularBiology，修改版，A.D.Smith(编)，Oxford University Press(2000)和Molecular Biology ofthe Cell，第3版，B.A.Alberts(编)，Garland Publishing，New York(1994))。无论短链还是长链，通过本发明的方法制备的心磷脂的脂肪酸链，还可以是饱和的或不饱和的。

所述的方法可以用于制备多种新的心磷脂分子。例如，该方法可以用于制备纯的含有短或长脂肪酸侧链的心磷脂变体。优选的脂肪酸碳链长约C₂至C₃₄，优选约C₄至约C₂₄，且包括丁酸(C_4:0)，戊酸(C_5:0)，己酸(C_6:0)，庚酸(C_7:0)，辛酸(C_8:0)，壬酸(C_9:0)，癸酸(C_10:0)，十一烷酸(C_11:0)，十二烷酸(C_12:0)，十三烷酸(C_13:0)，十四烷酸(肉豆蔻酸)(C_14:0)，十五烷酸(C_15:0)，十六烷酸(棕榈酸)(C_16:0)，十七烷酸(C_17:0)，十八烷酸(硬脂酸)(C_18:0)，十九烷酸(C_19:0)，二十烷酸(花生酸)(C_20:0)，二十一烷酸(C_21:0)，二十二烷酸(山萮酸)(C_22:0)，二十三烷酸(C_23:0)，二十四烷酸(C_24:0)，10-十一碳烯酸(C_11:1)，11-十二碳烯酸(C_12:1)，12-十三碳烯酸(C_13:1)，肉豆寇脑酸(C_14:1)，10-十五碳烯酸(C_15:1)，棕榈油酸(C_16:1)，油酸(C_18:1)，亚油酸(C_18:2)，亚麻酸(C_18:3)，二十碳烯酸(C_20:1)，二十碳二烯酸(C_20:2)，二十碳三烯酸(C_20:3)，花生四烯酸(顺式-5，8，11，14-二十碳四烯酸)和顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸，除了别的以外。关于醚类似物，烷基链的范围是C₂至C₃₄，优选约C₄至约C₂₄。其它的脂肪酸链也可以用作R₁和/或R₂取代基。这样的实例包括饱和脂肪酸，例如乙酸(或醋酸)，丙酸(或propionic acid)，丁酸(或butyric acid)，二十六酸(或蜡酸)，二十八酸(或褐煤酸)，三十烷酸(或蜂花酸)，三十二烷酸(或紫胶蜡酸)，三十四酸，三十五酸(或ceroplastic acid)等；单烯的不饱和脂肪酸例如反式-2-丁烯酸(或巴豆酸)，顺式-2-丁烯酸(或异巴豆酸)，2-己烯酸(或异己烯酸)，4-癸酸(或4-十碳烯酸)，9-癸酸(或癸烯酸)，4-十二碳烯酸(或linderic acid)，5-十二碳烯酸(或denticetic acid)，9-十二碳烯酸(或月桂烯酸)，4-十四碳烯酸(或粗租酸)，5-十四碳烯酸(或抹香鲸酸)，6-十八碳烯酸(或petroselenic acid)，反式-9-十八碳烯酸(或反油酸)，反式-11-十八碳烯酸(或牛痘酸)，9-二十碳烯酸(或顺9-二十碳烯酸)，11-二十碳烯酸(或巨头鲸鱼酸)，11-二十二烯酸(或鲸蜡烯酸)，13-二十二烯酸(或芥酸)，15-二十四碳烯酸(或神经酸)，17-二十六碳烯酸(或西门木烯酸)，21-三十碳烯酸(或lumequeic acid)，等；二烯的不饱和脂肪酸例如2，4-戊二烯酸(或β-乙烯基丙烯酸)，2，4-己二烯酸(或山梨酸)，2，4-癸二烯酸(或乌桕酸)，2，4-十二碳二烯酸，9，12-十六碳二烯酸，顺式-9，顺式-12-十八碳二烯酸(或α-亚油酸)，反式-9，反式-12-十八碳二烯酸(或linlolelaidic acid)，反式-10，反式-12-十八碳二烯酸，11，14-二十碳二烯酸，13，16-二十二碳二烯酸，17，20-二十六碳二烯酸等；三烯的不饱和脂肪酸例如6，10，14-十六碳三烯酸(或hiragonic acid)，7，10，13-十六碳三烯酸，顺式-6，顺式-9-顺式-12-十八碳三烯酸(或γ-亚油酸)，反式-8，反式-10-反式-12-十八碳三烯酸(或β-十八碳三烯酸)，顺式-8，反式-10-顺式-12-十八碳三烯酸，顺式-9，顺式-12-顺式-15-十八碳三烯酸(或α-亚麻酸)，反式-9，反式-12-反式-15-十八碳三烯酸(或α-亚麻酸)，顺式-9，反式-11-反式-13-十八碳三烯酸(或α-桐酸)，反式-9，反式-11-反式-13-十八碳三烯酸(或β-桐酸)，顺式-9，反式-11-顺式-13-十八碳三烯酸(或石榴油酸)，5，8，11-二十碳三烯酸，8，11，14-二十碳三烯酸等；四烯的不饱和脂肪酸例如4，8，11，14-十六碳四烯酸，6，9，12，15-十六碳四烯酸，4，8，12，15-十八碳四烯酸(或moroctic acid)，6，9，12，15-十八碳四烯酸，9，11，13，15-十八碳四烯酸(或α-或β-十八碳四烯酸)，9，12，15，18-十八碳四烯酸，4，8，12，16-二十碳四烯酸，6，10，14，18-二十碳四烯酸，4，7，10，13-二十二碳四烯酸，7，10，13，16-二十二碳四烯酸，8，12，16，19-二十二碳四烯酸等；五-和六-烯的不饱和脂肪酸例如4，8，12，15，18-二十碳五烯酸(或二十碳五烯酸)，4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸，4，8，12，15，19-二十二碳五烯酸(或鰶鱼酸)，7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸，4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸，4，8，12，15，18，21-二十四碳六烯酸(或尼生酸)等；支链的脂肪酸例如3-甲基丁酸(或异戊酸)，8-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸(或异月桂酸)，11-甲基十二烷酸(或异十一烷酸)，12-甲基十三烷酸(或异肉豆蔻酸)，13-甲基十四烷酸(或异十五烷酸)，14-甲基十五烷酸(或异棕榈酸)，15-甲基十六烷酸，10-甲基十七烷酸，16-甲基十七烷酸(或异硬脂酸)，18-甲基十九烷酸(或异花生酸)，20-甲基二十一烷酸(或山萮酸)，22-甲基二十三烷酸(或异二十四烷酸)，24-甲基二十五烷酸(或异蜡酸)，26-甲基二十七烷酸(或isomonatonicacid)，2，4，6-三甲基二十八烷酸(或mycoceranic或mycoserosic acid)，2-甲基-顺式-2-丁烯酸(当归酸)，2-甲基-反式-2-丁烯酸(或顺芷酸)，4-甲基-3-戊烯酸(或pyroterebic acid)等。

在本发明中使用的术语′羟基保护基′是指T.W.Greene和P.G.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley & Sons，NewYork(1999)中公开的常用保护基。这样的保护基包括甲基醚，取代的甲基醚包括甲氧基甲基，苄氧基甲基，对甲氧基苄氧基甲基，2-甲氧基乙氧基甲基，四氢吡喃基，四氢呋喃基醚；取代的乙基醚如1-乙氧基乙基，1-甲基-1-苄氧基乙基，烯丙基，炔丙基；苄基和取代的苄基醚包括对甲氧基苄基，3，4-二甲氧基苄基，三苯基甲基；甲硅烷基醚包括三甲基甲硅烷基，三乙基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基，二苯基甲基甲硅烷基；酯包括甲酸酯，乙酸酯，氯乙酸酯，二氯乙酸酯，三氯醋酸酯，苯甲酸酯，levulinylate和碳酸酯。

在本发明中使用的术语′磷酸保护基′是指T.W.Greene和P.G.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley & Sons，NewYork(1999)中所述的常用的保护基。这样的保护基包括烷基磷酸酯包括甲基，乙基，环己基，叔丁基；2-取代的乙基磷酸酯包括2-氰基乙基，4-氰基-2-丁烯基，2-(甲基二苯基甲硅烷基)乙基，2-(三甲基甲硅烷基)乙基，2-(三苯基甲硅烷基)乙基；卤代乙基磷酸酯包括2，2，2-三氯乙基，2，2，2-三溴乙基，2，2，2-三氟乙基；苄基磷酸酯包括4-氯苄基，芴基-9-甲基，二苯基甲基和酰胺化物。

本文所述的心磷脂分子和通过本发明的方法生产的心磷可以用于脂质制剂中，例如脂质体组合物。包含本发明的心磷脂的复合物、乳剂和其它制剂也在本发明的范围内。可以通过任何合适的技术制备根据本发明的这样的制剂。本发明提供了制备脂质体或其它脂质组合物的方法，其包括：制备如本文所述的心磷脂或心磷脂类似物，和将该心磷脂或心磷脂类似物包含在脂质制剂、例如脂质体中。本发明还包括包含本发明的心磷脂和/或心磷脂类似物的这种脂质组合物。

除了本发明的心磷脂外，脂质体组合物、复合物、乳剂等可以包含其它的脂质。因而，例如，组合物可以包含一种或多种磷脂酰胆碱，例如，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二花生四烯酰磷脂酰胆碱、卵磷脂酰胆碱、豆磷脂酰胆碱、氢化的豆磷脂酰胆碱和其混合物。备选或另外地，组合物可以包含一种或多种磷脂酰甘油，例如二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油基磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二花生四烯酰磷脂酰甘油和其混合物。备选或另外地，组合物可以包含一种或多种甾醇，例如胆固醇，胆固醇的衍生物，粪醇，胆甾烷醇，胆甾烷，胆固醇半琥珀酸酯，胆固醇硫酸酯和其混合物。优选地，除了心磷脂或心磷脂类似物外，组合物包含磷脂酰胆碱、甾醇和生育酚(例如，α-生育酚)。

除了心磷脂和任选的其它脂质外，在其它的成分中，组合物还可以包含稳定剂、吸收促进剂、抗氧剂、磷脂、可生物降解的聚合物和医学活性剂。在一些实施方案中，本发明的组合物、特别是脂质体组合物优选地包含一种或多种靶向剂，例如结合特异性的底物例如识别细胞受体的碳水化合物或蛋白质或其它配体。包含这样的试剂(例如碳水化合物或一种或多种选自下述的蛋白质：抗体、抗体片段、肽、肽激素、受体配体例如细胞受体的抗体和其混合物)，可以促进脂质体靶向预定的组织或细胞类型。

为了医用，组合物还可以包含一种或多种活性剂。组合物中可以包含单一的活性剂或活性剂的混合物(例如，两种或多种活性剂)。活性剂(或″药物″)可以以任何合适的的方式存在于组合物中。例如，它们可以与组合物中的心磷脂或心磷脂类似物复合。另外地或备选地，当组合物是脂质体组合物时，可以将一种或多种活性剂包封在脂质体中。

能够用于本发明的活性剂包括例如作用于下述对象的试剂：外周神经、肾上腺素能受体、胆碱能受体、骨骼肌、心血管系统、平滑肌、血液循环系统、突触位点、神经效应器接合位点、内分泌和激素系统、免疫系统、生殖系统、骨骼系统、消化和排泄系统、组胺系统和中枢神经系统。合适的试剂可以选自例如蛋白质、酶、激素、核苷酸、(包括正义和反义寡核苷酸(参见，例如美国专利6,126,965)、多核苷酸、核蛋白、多糖、糖蛋白、脂蛋白、多肽、类固醇。活性剂可以是镇痛药、麻醉剂、抗心律不齐剂、抗生素、抗过敏剂、抗真菌剂、抗癌剂、抗凝血剂、抗抑郁剂、抗糖尿病剂、抗癫痫剂、抗炎的皮质类固醇、用于治疗阿尔茨海默氏病或帕金森氏病的药物、抗溃疡剂、抗原虫药、抗焦虑药、甲状腺制剂、抗甲状腺制剂、抗病毒药、减食欲药物(anoretics)、二膦酸盐、影响心肌收缩力药(cardiac inotropic agents)、心血管药、皮质类固醇、利尿剂、多巴胺能剂、肠胃病药、止血药、高胆固醇药、降压药(例如二氢吡啶)、抗抑郁药和cox-2抑制剂、免疫抑制剂、抗痛风药、抗疟药、类固醇、terpinoids，triterpines，类视色素；抗溃疡H2-受体拮抗剂、降血糖药、保湿剂、化妆品、抗偏头痛药、抗毒蕈碱性剂(antimuscarinic agents)、抗炎药、例如用于治疗风湿病、关节炎、牛皮癣、炎性肠病、局限性回肠炎的药物；或用于治疗脱髓鞘性病、包括多发性硬化的药物、眼药、疫苗(例如抗肺炎、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、霍乱毒素B亚单位、流感病毒、伤寒、恶性疟原虫、diptheria、破伤风、HSV、结核病、HIV、SARS病毒、pordetelapertussis、麻疹、流行性腮腺炎和风疹疫苗(MMV)、细菌类毒素、疫苗病毒、腺病毒、canary、脊髓灰质炎病毒、卡介苗(BCG)、弗里德兰德杆菌肺炎(klebsiella pneumonia)等)、组胺受体拮抗剂、安眠药、保肾剂、调脂剂、肌肉松弛剂、神经抑制药、亲神经剂、阿片样物质激动剂和拮抗剂、拟胆碱药、蛋白酶抑制剂、前列腺素(prostglandins)、镇静药、性激素(例如，雌激素、雄激素)、兴奋剂、拟交感神经药、血管舒张药和花黄素和这些种类的合成类似物。治疗剂可以是肾毒性的，例如环孢素和两性霉素B，或心脏毒性的，例如两性霉素B和紫杉醇。示例性的抗癌剂包括美法仑、氮芥、extramustinephosphate、乌拉莫司汀、异环磷酰胺、甘露莫司汀、trifosfamide、链唑霉素、二溴甘露醇、米托蒽醌(参见，例如公开的国际专利申请WO02/32400)、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、替加氟、idoxide、紫杉烷类(例如，泰素、紫杉醇等，参见，例如公开的国际专利申请WO00/01366)、道诺霉素、柔红霉素、博来霉素、两性霉素、卡铂、顺铂、紫杉醇、BCNU、vinca alkaloids(如长春新碱，长春瑞滨(参见例如公开的国际专利申请WO03/018018)等)喜树碱和其衍生物(例如SN38(参见，例如公开的国际专利申请WO02/058622)、伊立替康(参见，例如公开的国际专利申请WO03/030864)等)、小红霉素(antracyclines)、抗体、cytoxines、多柔比星、依托泊甙(etopside)、细胞因子、核酶、干扰素、寡核苷酸和前述物质的功能衍生物。可以根据本方法输送的药物的其它实例包括乙二磺酸盐丙氯拉嗪(prochlorperzine edisylate)、硫酸亚铁、氨基己酸、盐酸美卡拉明、盐酸普鲁卡因胺、硫酸苯丙胺、盐酸去氧麻黄碱、benzamphetamine hydrochloride、硫酸异丙肾上腺素、盐酸芬美曲秦、氯贝胆碱、氯醋甲胆碱、盐酸毛果芸香碱、硫酸阿托品、东莨菪碱溴化物(scopolamine bromide)、异丙碘铵、曲地氯铵、盐酸苯乙双胍、盐酸哌甲酯、胆茶碱、盐酸头孢氨苄、地芬尼多、盐酸美克洛嗪、马来酸丙氯拉嗪、酚苄明、马来酸硫乙拉嗪(thiethylperzine maleate)、anisindone、二苯茚酮丁四硝酯、地高辛、异氟磷、乙酰唑胺、醋甲唑胺、苄氟噻嗪、chloropromaide、妥拉磺脲、醋酸氯地孕酮、非那二醇、别嘌醇、阿司匹林铝、甲氨蝶呤、醋磺胺异噁唑、红霉素、氢化可的松、hydrocorticosteroneacetate、醋酸可的松、地塞米松和其衍生物例如倍他米松、曲安西龙、甲睾酮、17-(S)-雌二醇、炔雌醇、炔雌醇3-甲基醚、泼尼松龙、1-α-醋酸羟孕酮、19-去甲孕酮、炔诺酮孕、去甲脱氢羟孕酮、炔诺酮、norethiederone、孕酮、诺孕酮、异炔诺酮、阿斯匹林、吲哚美辛、萘普生、非诺洛芬、舒林酸、吲哚洛芬、硝基甘油、硝酸异山梨酯、普萘洛尔、噻吗洛尔、阿替洛尔、阿普洛尔、西咪替丁、可乐定、丙咪嗪、左旋多巴、氯丙嗪、甲基多巴、二羟基苯丙氨酸、茶碱、葡萄糖酸钙、酮洛芬、布洛芬、头孢氨苄、红霉素、氟哌啶醇、佐美酸、乳酸亚铁、长春胺、地西泮、酚苄明、地尔硫、米力农、头孢孟多、quanbenz、氢氯噻嗪、雷尼替丁、氟比洛芬、fenufen、氟洛芬、托美丁、阿氯芬酸、甲芬那酸、氟芬那酸、difuinal、尼莫地平、尼群地平、尼索地平、尼卡地平、非洛地平、利多氟嗪、噻帕米、戈洛帕米、氨氯地平、米氟嗪、赖诺普利、依那普利、依那普利拉、卡托普利、雷米普利、法莫替丁、尼扎替丁、硫糖铝、依汀替丁、tetratolol、米诺地尔、利眠宁、地西泮、阿米替林、和丙米嗪。其它的实例是蛋白和肽，其包括但不限于骨形态生成蛋白、胰岛素、秋水仙碱、胰高血糖素、促甲状腺激素、甲状旁腺和垂体激素、消化激素、降钙素、肾素、催乳素、促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、绒毛膜促性腺激素、促性腺激素释放激素、牛促生长素、猪促生长素、催产素、血管升压素、GRF、促生长素抑制素、赖氨加压素、促胰酶素、黄体生成素、LHRH、LHRH激动剂和拮抗剂、亮丙立德、干扰素(例如共有干扰素、干扰素α-2a、干扰素α-2b、α-、β-或γ-干扰素)、白介素、生长激素例如人生长激素和其衍生物例如甲硫胺(methione)-人生长激素和des-苯丙氨酸人生长激素、牛生长激素和猪生长激素、生育抑制剂例如前列腺素、生育促进剂、生长因子例如胰岛素样生长因子、凝固因子、胰激素释放因子(pancreashormone releasing factors)、这些化合物的类似物和衍生物和这些化合物的药用盐或它们的类似物或衍生物。治疗剂可以是药物或试剂(例如，两种或多种试剂)的混合物，它们可以在脂质体制剂中有益地共同施用。

通常，脂质体可以是净中性的，或带负电荷或正电荷。例如，可以从含有磷脂酰胆碱、胆固醇、足够的硬脂胺以克服心磷脂的净负电荷的溶液中形成阳离子脂质体。通过本文所述的方法，可以从含有磷脂酰胆碱、胆固醇和/或心磷脂变体的溶液制备出带负电荷的脂质体。

根据制备它们的具体组成和方法，本发明的脂质体可以是多层的或单层的囊。脂质体可以制备成具有实质上均匀的在选定尺寸范围内的大小，例如约1微米或更小，或约500nm或更小，约200nm或更小，或约100nm或更小。一种有效的设定大小的方法包括：将脂质体的水性悬浮液从一系列具有选定的均匀孔径的聚碳酸酯膜中挤出；膜的孔径大致与穿过该膜挤出生成的脂质体的最大大小相对应。

脂质体(或其它脂质)组合物可以是任何理想的形式。例如，为了药物用途，组合物可以是已经准备好施用给患者，或者，组合物可以是干燥的或冻干的形式。当组合物是干燥的或冻干的时，优选地组合物还包含冷冻保护剂。合适的冷冻保护剂包括，例如，糖类例如海藻糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖和葡聚糖，从性能的观点看，最优选的糖是海藻糖和蔗糖。还可以使用其它更复杂的糖，例如，氨基糖苷，包括链霉素和二氢链霉素。

可以使用任何合适的方法来制备脂质体。例如，可以将能形成亲脂的脂质体的成分，例如磷脂酰胆碱、通过上述方法制备的心磷脂、胆固醇和α-生育酚)溶解或分散到合适的溶剂或溶剂组合中，并干燥。合适的溶剂包括任何非极性的或轻微极性的溶剂，例如叔丁醇、乙醇、甲醇、氯仿或丙酮，它们可以蒸发掉而不留下任何药学上不可接受的残余物。可以通过任何合适的方法进行干燥，例如通过冻干。脱水典型地在真空下进行，且可以在存在或不存在事先冷冻脂质体制品的情况下进行。亲水的成分可以溶解到极性溶剂、包括水中。

将干燥的亲脂成分与亲水混合物相混合，可以形成脂质体。可以通过任何能强烈地均质化混合物的方法混合极性溶液与干脂质膜。涡流、磁力搅拌和/或超声处理可以实现均质化。

当脂质体中包含有活性剂(或活性剂的混合物)时，本发明提供了将药物维持在脂质体中的方法。根据该方法，如本文所述制备了心磷脂或心磷脂类似物，且将心磷脂或心磷脂类似物和一种或多种药物(例如，活性剂或活性剂的混合物)包含在脂质体中。例如，可以将活性剂溶解或分散在合适的溶剂中，并在混合前添加到脂质体混合物中。典型地将亲水的活性剂直接添加到极性溶剂中，将疏水的活性剂添加到用于溶解其它成分的非极性溶剂中，但这不是必须的。活性剂可以溶解在第3种溶剂或溶剂混合物中，并在均质化混合物之前添加到极性溶剂与脂质膜的混合物中。

可以给脂质体包裹可生物降解的聚合物例如蔗糖、表氯醇、分支的亲水的蔗糖聚合物、聚乙二醇、聚乙烯醇、甲氧基聚乙二醇、乙氧基聚乙二醇、聚环氧乙烷、聚氧乙烯、聚氧丙烯、乙酸纤维素、藻酸钠、N，N-二乙基氨基醋酸酯、聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯X-月桂醚，其中X是9至20，和聚氧乙烯山梨糖醇酯。

抗氧化剂可以包含在脂质体组合物或其它脂质组合物中。合适的抗氧化剂包括化合物例如抗坏血酸、生育酚和deteroxime mesylate。

吸收促进剂可以包含在脂质体组合物或其它脂质组合物中。合适的吸收促进剂包括水杨酸钠-鹅去氧胆酸钠、去氧胆酸钠、聚氧乙烯9-月桂醚、鹅去氧胆酸盐-去氧胆酸盐和聚氧乙烯9-月桂醚、甘油一油酸酯、牛磺-24，25-二氢夫西地酸钠(Na taruo-24，25-dihydrofusidate)、牛磺去氧胆酸钠、甘氨鹅去氧胆酸钠(Na glycochenodeoxycholate)、油酸、亚油酸、亚麻酸。还可以包含聚合的吸收促进剂，例如聚氧乙烯醚、聚氧乙烯脱水山梨醇酯、聚氧乙烯10-月桂醚、聚氧乙烯16-月桂醚、氮酮(1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮)。

本发明的脂质(例如，脂质体)组合物还可以包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。例如，药学上合适的赋形剂包括固体、半固体或液体稀释剂、填料和各种制剂辅料。本发明还包括剂量单位形式的药物制剂。这意味着，制剂是单个部分的形式，例如小瓶、注射器、胶囊、丸剂、栓剂或安剖，其中活性剂在脂质体制剂中的含量与单次给药剂量的分数或倍数相对应。剂量单位可以含有例如1、2、3或4个单次给药剂量，或1/2、1/3或1/4单次给药剂量。单次给药剂量优选地含有一次施用的活性剂量，其通常与每日给药剂量的全部、1/2、1/3或1/4相对应。

片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂、粒剂、栓剂、溶液、悬浮液和乳剂、糊剂、软膏剂、凝胶、霜剂、洗剂、粉末和喷雾剂可以是合适的药物制剂。栓剂可以含有，除了脂质体活性剂外，合适的水溶性的或水不溶性的赋形剂。合适的赋形剂是这样的，本发明的脂质体活性剂在其中是足够稳定的，以用于治疗用途，例如聚乙二醇、某些脂肪和酯或这些物质的混合物。软膏、糊剂、乳剂和凝胶还可以含有合适的赋形剂，脂质体活性剂在其中是稳定的。通过包含一种或多种适用于注射的赋形剂(例如，缓冲盐水)，还可以将组合物配制成用于注射(例如静脉内地、间质地、肿瘤内地等)的制剂。

活性剂或其药物制剂可以静脉内地、皮下地、局部地、经口地、肠胃外地、腹膜内地和/或直肠地施用，或通过已知的或开发的方法，直接注射进肿瘤或需要治疗的位点中。基于心磷脂和心磷脂类似物的制剂还可以局部地使用，例如作为霜剂、皮肤软膏剂、干皮肤软化剂、增湿剂等。

本发明提供了组合物在制备用于治疗疾病的药物中的应用。在此意义上，本发明还提供了治疗人或动物疾病的方法。根据本发明的方法，将本发明的组合物暴露于(施用给)需要该治疗的人或动物患者。当组合物还包含一种或多种活性剂时，本发明的方法有利于活性剂向患者的输送。

该方法可以用于施用一种或多种活性剂。认为对于在有表面活性剂存在时是稳定的活性剂是通用的。亲水的活性剂是合适的，且可以包含在脂质体内部，这样脂质体双分子层建立起扩散屏障，防止它遍布机体随机地扩散。认为疏水的活性剂特别良好地适用于本方法的用途，因为它们不但具有能表现出低毒性的优点，而且它们倾向于在脂质体的脂双分子层中较好地溶解。

治疗的合适疾病取决于活性剂的选择，例如如本文所述。但是，优选的疾病是癌症，在该情况下，包含在组合物中的至少一种活性剂是抗癌剂。化疗剂也较好地适用于该用途。含有化疗剂的脂质体制剂可以直接注射到肿瘤组织中，以将化疗剂直接输送到癌细胞中。在一些情况下，特别是在切除肿瘤后，可以将脂质体制剂直接植入产生的空腔中，或可以应用到残余组织上作为包衣。在术后施用脂质体制剂的情况下，可以使用具有约1微米的更大直径的脂质体，因为它们无需穿过脉管系统。

在一些实施方案中，该方法可以用于治疗患者中的疾病、紊乱或症状，甚至在组合物不含有除了心磷脂以外的其它活性药物时。本发明提供了心磷脂在制备用于抵抗或治疗这样的疾病、紊乱或症状的药物中的应用。本发明还提供了治疗患者中的这样的疾病、紊乱或症状的方法，和给患者施用治疗有效量的心磷脂对这样的疾病、紊乱或症状的影响。不受任何具体理论的限制，认为心磷脂提供了有益的抗氧化作用，其可以缓解许多疾病、紊乱或症状的影响。根据本方法可以治疗的疾病的实例包括，例如，与年龄有关的疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、心脏病、局部缺血和皮肤病(例如，痤疮、牛皮癣、湿疹等).。该方法还可以用于抵抗老化的影响。为了这样的用途，心磷脂可以配制成如本文所述的脂质体或非脂质体的制剂(例如，乳剂，霜剂等)，且可以包含除了心磷脂之外的一种或多种药学上可接受的载体。在应用中，可以通过任何合适的途径施用组合物。例如，可以皮肤地、静脉内地、或通过其它理想的给药途径施用组合物。

本发明还涉及向细胞输送活性剂(或活性剂的混合物)的方法。通过制备包含活性剂和通过如上所述的方法合成的心磷脂变体/类似物的脂质体，可以实现该方法。然后将脂质体输送给一个或多个细胞，根据需要，其可以是体外地或体内地。可以根据本文所述或普通技术人员已知的方法，实现体内施用。为了体外应用，可以例如将组合物(例如，脂质体)添加到细胞培养基中，实现活性剂的输送。

下面的实施例进一步解释了本发明，但是不应当理解为以任何方式限制其范围。

实施例1四肉豆蔻酰心磷脂的合成

1A.2-苄基-1，3-二[(1，2-二肉豆蔻酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝肉豆蔻酰基(C_14:0链)

在室温、在氩气下，将1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油(10g，19.53mmol)、苄基N，N-四异丙基亚磷酰胺(9.87g，29.29mmol)和1H-四唑(65mL 0.45M乙腈溶胶，29.29mmol)在CH₂Cl₂(125mL)中的溶液搅拌3小时。加入2-苄氧基1，3-丙二醇(1.18g，6.47mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液，随后加入1H-四唑(37.7mL 0.45M乙腈溶胶，16.85mmol)，并搅拌3小时。将反应混合物冷却到-40℃，并加入叔丁基氢过氧化物(TBHP，6.4mL 5-6M癸烷溶胶，32.35mmol)。在-40℃搅拌30分钟后，将反应混合物加热到室温，用CH₂Cl₂(250mL)稀释，洗涤{饱和的Na₂SO₃水溶液(2×50mL)，饱和的NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)}，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。将残余物在SiO₂柱(2∶3EtOAc∶己烷)上纯化，得到6.68g(69％)保护的心磷脂，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.48.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，80H)，1.52-1.66(m，8H)，2.22-2.29(m，8H)，3.70-3.78(m，1H)，4.01-4.16(m，10H)，4.22-4.28(m，2H)，4.60(d，J＝7.8Hz，2H)，5.01-5.05(m，4H)，5.15-5.18(m，2H)，7.28-7.36(m，15H).

1B.1，3-二[(1，2-二肉豆蔻酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐(四肉豆蔻酰心磷脂)

               R₁，R₂＝肉豆蔻酰基(C_14:0链)

将从1A得到的保护的心磷脂(2.5g，1.65mmol)在四氢呋喃(40mL)中的溶液，在50psi下、经10％Pd/C(900mg)氢化10小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，用4mL 30％氨溶液处理，浓缩，将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，并用丙酮进行沉淀，得到白色固体状的四肉豆蔻酰(C_14:0)心磷脂(1.75g，83％)。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.50.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(br s，80H)，1.52-1.66(m，8H)，2.26-2.34(m，8H)，3.06(bs，1H)，3.82-3.98(m，9H)，4.12-4.18(m，2H)，4.35-4.42(m，2H)，5.14-5.24(m，2H)，7.41(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z 1240.2(M-2NH₄ ⁺+H⁺)，1011.9(M-2NH₄ ⁺-RCOO^-)，619.9(M-2NH₄ ⁺)^2-.

实施例2四月桂酰心磷脂的合成

2A.2-苄基-1，3-二[(1，2-二月桂酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝月桂酰基(C_12:0链)

方法1：将1，2-二月桂酰基-sn-甘油(2.2g，4.82mmol)、苄基N，N-四异丙基亚磷酰胺(1.95g，5.78mmol)和1H-四唑(12.84mL 0.45M乙腈溶胶，5.78mmol)在CH₂Cl₂(25mL)中的溶液在室温、在氩气下搅拌3小时。加入2-苄氧基1，3-丙二醇(352mg，1.92mmol)在CH₂Cl₂(10mL)中的溶液，随后加入1H-四唑(12.84mL 0.45M乙腈溶胶，5.78mmol)，并搅拌3小时。将反应混合物冷却至-40℃，并逐份地加入3-氯过氧过苯甲酸(m-CPBA，2.77g，9.64mmol)。在-40℃搅拌30分钟后，将反应混合物加热至室温，用CH₂Cl₂(150mL)稀释，洗涤{饱和的Na₂SO₃水溶液(2×50mL)，饱和的NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)}，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(2∶3EtOAc∶己烷)上纯化，得到1.68g(62％)保护的心磷脂，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.44.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，64H)，1.52-1.66(m，8H)，2.22-2.29(m，8H)，3.70-3.78(m，1H)，4.01-4.16(m，10H)，4.22-4.28(m，2H)，4.60(d，J＝7.8Hz，2H)，5.01-5.05(m，4H)，5.15-5.18(m，2H)，7.28-7.36(m，15H).

方法2：向1，2-二月桂酰基-sn-甘油(5.0g，10.96mmol)和四唑(29.2mL0.45M乙腈溶胶，13.15mmol)在40mL无水CH₂Cl₂的搅拌溶液中，加入二苄基二异丙基亚磷酰胺(4.54g，13.15mmol)，并在室温搅拌2小时。用100mL CH₂Cl₂稀释内容物，然后用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，真空浓缩，将油状残余物(7.68g)在干燥器中干燥8小时，并这样应用于下一步反应中。将该亚磷酸盐、2-苄氧基-1，3-丙二醇(0.8g，4.38mmol)、吡啶(4.43mL，54.77mmol)和Et₃N(7.63mL，54.77mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的溶液冷却到-40℃，并一次加入三溴吡啶鎓(5.25g，16.42mmol)。将混合物在相同温度下搅拌1小时，经过2小时的时间逐渐达到室温，并用水(30mL)处理。用EtOAc(150mL)稀释内容物，连续用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(8％丙酮的CH₂Cl₂溶液)上纯化，得到3.8g(62％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)Rf～0.44.

2B.1，3-二[(1，2-二月桂酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐(四月桂酰心磷脂)

               R₁，R₂＝月桂酰基(C_12:0链)

将从2A得到的保护的心磷脂(1.5g，1.07mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液，在50psi下、经10％Pd/C(600mg)氢化10小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，用2mL 30％氨溶液处理，浓缩，将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，并用丙酮进行沉淀，得到白色固体状的四月桂酰(C_12∶0)心磷脂(1.0g，80％)。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.48.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(br s，64H)，1.52-1.66(m，8H)，2.26-2.34(m，8H)，2.94(bs，1H)，3.82-3.98(m，9H)，4.12-4.18(m，2H)，4.35-4.42(m，2H)，5.14-5.24(m，2H)，7.41(bs，8H).¹³CNMR δ(CDCl₃，125MHz)14.07，22.67，24.87，24.93，29.18，29.22，29.36，29.37，29.40，29.57，29.60，29.66，29.67，29.69，29.72，31.91，34.09，34.28，62.62，63.57，66.77，69.47，70.29，173.25，173.56.FTIR(ATR)3207，3035，2956，2918，2850，1737，1467，1378，1206，1092，1067cm^-1.ESI-MS(负的)，m/z  1150(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)，1127.4(M-2NH₄ ⁺)，1128.4(M-2NH₄ ⁺+H⁺)，928.4(M-2NH₄ ⁺-RCOO^-)，563.7(M-2NH₄ ⁺)^2-.C₅₇H₁₁₆N₂O₁₇P₂的分析计算：C，58.84；H，10.05；N，2.41；P，5.32.实测：C，57.75；H，9.83；N，2.34：P，5.28.

实施例3四月桂酰心磷脂的合成

在该方法中，通过2-氰基乙基亚磷酰胺合成了四月桂酰心磷脂。

3A.2-苄基-1，3-二[(1，2-二月桂酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二氰基乙基酯

               R₁，R₂＝月桂酰基(C_12:0链)

在氩气氛下，向1，2-二月桂酰基-sn-甘油(1.74g，3.79mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(545mg，4.22mmol)在无水醚(20mL)中的混合物中，加入2-氰基乙基二异丙基氯亚磷酰胺(1g，4.22mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，过滤分离的二异丙基胺氢氯化物，将滤液真空浓缩。残余物这样用于磷酸化反应。

向上面亚磷酰胺和1H-四唑(9.4mL 0.45M乙腈溶胶，4.22mmol)在无水CH₂Cl₂(30mL)中的混合物中，加入2-苄氧基1，3-丙二醇(312mg，1.71mmol)在CH₂Cl₂(5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌3小时，冷却至-40℃，并逐份地加入m-CPBA(1.36g，4.73mmol)。在-40℃搅拌30分钟后，将反应混合物加热至室温，用CH₂Cl₂(200mL)稀释，洗涤{饱和的Na₂SO₃水溶液(2×50mL)，饱和的NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)}，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(1∶4丙酮∶CH₂Cl₂)上纯化，得到1.48g(70％)无色浆状物。TLC(SiO₂)EtOAc/CH₂Cl₂(1∶3)R_f～0.48.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.39(m，64H)，1.53-1.66(m，8H)，2.26-2.36(m，8H)，2.64-2.75(m，4H)，3.83-3.88(m，1H)，4.06-4.36(m，16H)，4.67(s，2H)，5.19-5.28(m，2H)，7.28-7.38(m，5H).

3B.1，3-二[(1，2-二月桂酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]-2-苄基甘油二铵盐

               R₁，R₂＝月桂酰基(C_12:0链)

将来自3A的前体(1.48g，1.2mmol)和Et₃N(1.66mL，12mmol)在10mL乙腈中的溶液搅拌过夜(TLC表明没有残余的原料)，并蒸发至干燥。通过加入2mL NH₄OH将残余物转化成铵盐并在SiO₂柱(15％MeOH，在含有1％NH₄OH的CH₂Cl₂中)上纯化，得到850mg(60％)无色浆状物，其缓慢地凝固。¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.39(m，64H)，1.53-1.63(m，8H)，2.22-2.34(m，8H)，3.66-3.76(m，1H)，3.82-4.06(m，8H)，4.08-4.18(m，2H)，4.26-4.37(m，2H)，4.60(s，2H)，5.14-5.26(m，2H)，7.22-7.36(m，5H)，7.49(bs，8H).

3C.1，3-二[(1，2-二月桂酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐(四月桂酰心磷脂)

               R₁，R₂＝月桂酰基(C_12:0链)

将从3B得到的保护的心磷脂(1.12g，0.89mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液在50psi经10％Pd/C(450mg)氢化10小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，并浓缩，将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，并用丙酮进行沉淀，得到四月桂酰(C_12:0)心磷脂(750mg，75％)心磷脂白色固体。TLC(SiO₂)柱CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.48。通过本文所述的方法制备的四月桂酰心磷脂在所有方面与2B的相同。

实施例4四癸酰基心磷脂的合成

4A.12-二癸酰基-3-苄基-sn-甘油的合成

               R₁，R₂＝癸酰基(C_10:0链)

向(R)-(+)-3-苄氧基-1，2-丙二醇(2.0g，10.97mmol)和Et₃N(6.89mL，49.36mmol)在CH₂Cl₂(30mL)中的冰冷的溶液中，在10分钟的时间内逐滴加入癸酰基氯化物(5.1mL，24.69mmol)，随后加入4-(二甲基氨基)吡啶(DMAP，268mg，2.19mmol)。将反应混合物在室温搅拌12小时，用CH₂Cl₂(200mL)稀释，连续用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(3％EtOAc的己烷溶液)上纯化，得到4.5g(83％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(9∶1)R_f～0.54.¹HMRδ(CDCl₃，300MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，24H)，1.52-1.66(m，4H)，2.22-2.34(m，4H)，3.58(d，J＝4.2Hz，2H)，4.18(dd，J＝6.4和11.9Hz，1H)，4.34(dd，J＝6.4和11.9Hz，1H)，4.51(d，J＝12.2Hz，1H)，4.57(d，J＝12.2Hz，1H)，5.21-5.28(m，1H)，7.28-7.36(m，5H).

4B.1，2-二癸酰基-sn-甘油

               R₁，R₂＝癸酰基(C_10:0链)

将从4A得到的保护的二癸酰基甘油(4.68g，9.55mmol)在EtOH∶EtOAc∶AcOH(9∶1∶0.1)(40mL)中的溶液在40psi经10％Pd/C(600mg，10％)氢化3小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，并浓缩；在高真空下干燥得到的DDG(3.52g，92％)。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.39。¹HNMRδ(CDCl₃，300MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，24H)，1.52-1.66(m，4H)，2.03(t，J＝6.2Hz，1H，D₂O可交换的)，2.32(t，J＝7.6Hz，2H)，2.35(t，J＝7.6Hz，2H)3.73(t，J＝6.0Hz，2H))，4.22(dd，J＝5.8和11.9Hz，1H)，4.33(dd，J＝5.8和11.9Hz，1H)，5.08(五重峰，J＝5.1Hz，1H).4C.2-苄基-1，3-二[(1，2-二癸酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝癸酰基(C_10:0链)

将来自4B的1，2-二癸酰基-sn-甘油(3.52g，8.8mmol)、苄基N，N-四异丙基亚磷酰胺(3.26g，9.68mmol)和1H-四唑(21.51mL 0.45M乙腈溶胶，9.68mmol)在CH₂Cl₂(25mL)中的溶液，在室温、在氩气下搅拌3小时。加入2-苄氧基1，3-丙二醇(712mg，3.9mmol)在CH₂Cl₂(10mL)中的溶液，随后加入1H-四唑(21.51mL 0.45M乙腈溶胶，9.68mmol)，并搅拌3小时。将反应混合物冷却至-40℃，并逐份地加入m-CPBA(5.06g，17.6mmol)。在-40℃搅拌30分钟后，将反应混合物加热至室温，用CH₂Cl₂(200mL)稀释，洗涤{饱和的Na₂SO₃水溶液(2×50mL)，饱和的NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)}，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(2∶3EtOAc∶己烷)上纯化，得到3.21g(64％)保护的心磷脂，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.44.¹H NMRδ(CDCIs，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，48H)，1.52-1.66(m，8H)，2.22-2.29(m，8H)，3.70-3.78(m，1H)，4.01-4.16(m，10H)，4.22-4.28(m，2H)，4.60(d，J＝7.8Hz，2H)，5.01-5.05(m，4H)，5.15-5.18(m，2H)，7.28-7.36(m，15H).

4D.1，3-二[(1，2-二癸酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐

               R₁，R₂＝癸酰基(C_10:0链)

将从4C得到的保护的保护的心磷脂(1.5g，1.16mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液在50psi经10％Pd/C(600mg)氢化10小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，用2mL 30％氨溶液处理，并浓缩。将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，浓缩，得到四癸酰基(C_10:0)心磷脂(1.0g，80％)半固体。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.42.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(br s，48H)，1.52-1.66(m，8H)，2.26-2.34(m，8H)，3.62(bs，1H)，3.82-3.98(m，9H)，4.12-4.18(m，2H)，4.35-4.42(m，2H)，5.14-5.24(m，2H)，7.41(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z1038(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)，1015(M-2NH₄ ⁺)，843.7(M-2NH₄ ⁺-RCOO^-)，507.5(M-2NH₄ ⁺)^2-.

实施例5四辛酰基心磷脂的合成

5A.1，2-二辛酰基-3-苄基-sn-甘油

               R₁，R₂＝辛酰基(C_8:0链)

向(R)-(+)-3-苄氧基-1，2-丙二醇(4.0g，21.95mmol)在无水吡啶(40mL)的溶液中，经10分钟的时间逐滴加入辛酰基氯化物(8.93g，54.87mmol)，然后加入DMAP(267mg，2.19mmol)。将反应混合物在55℃搅拌48小时，用EtOAc(300mL)稀释，连续用水(100mL)、1N HCl(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(3％EtOAc的己烷溶液)上纯化，得到7.3g(75％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(9∶1)R_f～0.52.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，16H)，1.52-1.66(m，4H)，2.22-2.34(m，4H)，3.58(d，J＝4.2Hz，2H)，4.18(dd，J＝6.4和11.9Hz，1H)，4.34(dd，J＝6.4和11.9Hz，1H)，4.51(d，J＝12.2Hz，1H)，4.57(d，J＝12.2Hz，1H)，5.21-5.28(m，1H)，7.28-7.36(m，5H).

5B.1，2-二辛酰基-sn-甘油

               R₁，R₂＝辛酰基(C_8:0链)

将从5A得到的保护的二辛酰基甘油(6.8g，15.66mmol)在EtOH∶EtOAc∶AcOH(9∶1∶0.1)(30mL)的溶液在40psi经10％Pd/C(900mg，10％)氢化3小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，并浓缩；在高度真空下干燥得到的DOG(5.0，93％)。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.31.¹HNMRδ(CDCl₃，300MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，16H)，1.52-1.66(m，4H)，2.03(t，J＝6.2Hz，1H，D₂O可交换的)，2.32(t，J＝7.6Hz，2H)，2.35(t，J＝7.6Hz，2H)3.73(t，J＝6.0Hz，2H))，4.22(dd，J＝5.8和11.9Hz，1H)，4.33(dd，J＝5.8和11.9Hz，1H)，5.08(五重峰，J＝5.1Hz，1H)。

5C.2-苄基-1，3-二[(1，2-二辛酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基)甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝辛酰基(C_8:0链)

向从5B得到的1，2-二辛酰基-sn-甘油(5.0g，14.53mmol)和四唑(40.3mL 0.45M乙腈溶胶，18.16mmol)在50mL无水CH₂Cl₂中的溶液中，加入二苄基二异丙基亚磷酰胺(6.26g，18.16mmol)，并在室温搅拌2小时。用200mL EtOAc稀释内容物，然后用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，真空浓缩，将油状残余物(7.0g)在干燥器中干燥8小时，并这样应用于下一步反应中。

将上面的亚磷酸盐、2-苄氧基-1，3-丙二醇(0.660g，3.63mmol)、吡啶(10.6mL，131.13mmol)和Et₃N(8.0mL，65.65mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的溶液冷却到-40℃，并一次加入三溴化吡啶鎓盐(6.3g，19.69mmol)。将混合物在相同温度下搅拌1小时，经过2小时的时间逐渐达到室温，并用水(30mL)处理。用EtOAc(250mL)稀释内容物，连续用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(10％丙酮的CH₂Cl₂溶液)上纯化，得到2.72g(64％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.44.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，32H)，1.52-1.62(m，8H)，2.22-2.29(m，8H)，3.70-3.78(m，1H)，4.01-4.16(m，10H)，4.22-4.28(m，2H)，4.60(d，J＝7.8Hz，2H)，5.01-5.05(m，4H)，5.15-5.18(m，2H)，7.28-7.36(m，15H).

5D.1，3-二[(1，2-二辛酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]-2-苄基甘油二铵盐

               R₁，R₂＝辛酰基(C_8:0链)

将从5C得到的保护的心磷脂(2.5g，2.12mmol)在2-丁酮(15mL)和碘化钠(956mg，6.36mmol)中的溶液在90℃回流3小时。蒸发掉挥发物，残余物在SiO₂柱(20％甲醇，在含有1％氨的CH₂Cl₂中)上纯化，得到1.52g(75％)产物，呈无色半固体。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.53.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，32H)，1.56-1.64(m，8H)，2.22-2.34(m，8H)，3.66-3.76(m，1H)，3.82-4.06(m，8H)，4.08-4.18(m，2H)，4.26-4.37(m，2H)，4.60(s，2H)，5.14-5.26(m，2H)，7.22-7.36(m，5H)，7.49(bs，8H).

5E.1，3-二[(1，2-二辛酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐

               R₁，R₂＝辛酰基(C_8:0链)

将从5D得到的保护的心磷脂(1.5g，1.27mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液在50psi经10％Pd/C(600mg)氢化10小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，用2mL 30％氨溶液处理，并浓缩。将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，浓缩，得到C₈心磷脂(950mg，80％)，呈半固体状。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.43.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，32H)，1.56-1.64(m，8H)，2.22-2.34(m，8H)，3.82-3.98(m，9H)，4.12-4.18(m，2H)，4.35-4.42(m，2H)，5.14-5.24(m，2H)，7.41(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z 925.7(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)^-，903.1(M-2NH₄ ⁺)，760.6(M-2NH₄ ⁺-RCOO^-)，451.2(M-2NH₄ ⁺)^2-.

实施例6四己酰基心磷脂的合成

6A.1，2-二己酰基-3-苄基-sn-甘油

               R₁，R₂＝己酰基(C_6:0链)

向(R)-(+)-3-苄氧基-1，2-丙二醇(2.6g，14.26mmol)在无水吡啶(30mL)中的溶液中，经10分钟的时间逐滴加入己酰基氯化物(4.8g，35.67mmol)，然后加入DMAP(175mg，1.42mmol)。将反应混合物在55℃搅拌48小时，用EtOAc(200mL)稀释，连续用水(100mL)、1N HCl(2×100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(3％EtOAc的己烷溶液)上纯化，得到4.1g(76％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(9∶1)R_f～0.48.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，8H)，1.52-1.66(m，4H)，2.22-2.34(m，4H)，3.58(d，J＝4.2Hz，2H)，4.18(dd，J＝6.4和11.9Hz，1H)，4.34(dd，J＝6.4和11.9Hz，1H)，4.51(d，J＝12.2Hz，1H)，4.57(d，J＝12.2Hz，1H)，5.21-5.28(m，1H)，7.28-7.36(m，5H).

6B.1，2-二己酰基-sn-甘油

               R₁，R₂＝己酰基(C_6:0链)

将从6A得到的保护的二己酰基甘油(3.1g，8.2mmol)在EtOH∶EtOAc∶AcOH(9∶1∶0.1)(30mL)中的溶液在40psi经10％Pd/C(600mg，10％)氢化3小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，并浓缩；在高度真空下干燥得到的甘油(3.52g，92％)。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.34.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，8H)，1.52-1.66(m，4H)，2.03(t，J＝6.2Hz，1H，D₂O可交换的)，2.32(t，J＝7.6Hz，2H)，2.35(t，J＝7.6Hz，2H)3.73(t，J＝6.0Hz，2H))，4.22(dd，J＝5.8和11.9Hz，1H)，4.33(dd，J＝5.8和11.9Hz，1H)，5.08(五重峰，J＝5.1Hz，1H).

6C.2-苄基-1，3-二[(1，2-二己酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝己酰基(C_6:0链)

向从6B得到的1，2-二己酰基-sn-甘油(3.5g，13.19mmol)和四唑(35.1mL 0.45M乙腈溶胶，15.83mmol)在40mL无水CH₂Cl₂中的溶液中，加入二苄基二异丙基亚磷酰胺(5.46g，15.83mmol)，并在室温搅拌2小时。用200mL CH₂Cl₂稀释内容物，然后用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，真空浓缩，将油状残余物(7.0g)在干燥器中干燥8小时，并这样应用于下一步反应中。

将上面亚磷酸盐、2-苄氧基-1，3-丙二醇(0.957g，5.25mmol)、吡啶(10.6mL，131.13mmol)和Et₃N(8.0mL，65.65mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的溶液冷却到-40℃，并一次加入三溴化吡啶鎓盐(6.3g，19.69mmol)。将混合物在相同温度下搅拌1小时，经过2小时的时间逐渐达到室温，并用水(30mL)处理。用EtOAc(250mL)稀释内容物，连续用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(10％丙酮的CH₂Cl₂溶液)上纯化，得到3.57g(64％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)R_f～0.40.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.87(t，J＝7.0Hz，6H)，0.89(t，J＝7.0Hz，6H)，1.22-1.34(m，16H)，1.52-1.62(m，8H)，2.22-2.29(m，8H)，3.70-3.78(m，1H)，4.01-4.16(m，10H)，4.22-4.28(m，2H)，4.60(d，J＝7.8Hz，2H)，5.01-5.05(m，4H)，5.15-5.18(m，2H)，7.28-7.36(m，15H).

6D.1，3-二[(1，2-二己酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐

               R₁，R₂＝己酰基(C_6:0链)

将从6C得到的保护的心磷脂(1.5g，1.41mmol)在四氢呋喃(25mL)中的溶液在50psi经10％Pd/C(600mg)氢化10小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，用2mL 30％氨溶液处理，并浓缩。将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，浓缩，得到半固体状的C₆心磷脂(940mg，81％)。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.36.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，16H)，1.56-1.64(m，8H)，2.22-2.34(m，8H)，3.82-3.98(m，9H)，4.12-4.18(m，2H)，4.35-4.42(m，2H)，5.14-5.24(m，2H)，7.41(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z 813(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)，791(M-2NH₄ ⁺+H⁺)，395(M-2NH₄ ⁺)^2-.

实施例7四油酰基心磷脂(不饱和的)的合成

7A.顺式-5-乙酰丙酸基-2-苯基-1，3-二噁烷

向顺式-1，3-O-苯亚甲基甘油(5.0g，27.74mmol)在CH₂Cl₂(80mL)中的溶液中，在0℃连续加入DCC(8.58g，41.61mmol)、DMAP(3.38g，27.74)和乙酰丙酸(4.0g，34.68mmol)。将混合物在室温搅拌24小时。过滤分离的脲，浓缩滤液，使用80％EtOAc/己烷作为洗脱液通过快速色谱纯化，得到白色固体状产物(5.86g，76％)。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(1∶1)R_f～0.51.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)2.19(s，3H)，2.58-2.89(m，4H)，4.18(dd，J＝12.0，1.5Hz，2H)，4.25(dd，J＝12.0，1.5Hz，2H)，4.71(dd，J＝1.5，1.5Hz，1H)，5.55(s，1H)，7.24-7.53(m，5H).

7B.2-乙酰丙酸基-1，3-丙二醇

将保护的甘油7A(5.8g，20.86mmol)在EtOH∶EtOAc(1∶1)(100mL)中的溶液在50psi经10％Pd/C(800mg，10％)氢化8小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，并浓缩；使用6％MeOH/CH₂Cl₂作为洗脱剂，通过快速色谱纯化得到的2-乙酰丙酸基甘油，得到白色固体状的产物(2.82g，70％)。TLC(SiO₂)MeOH/CH₂Cl₂(1∶9)R_f～0.31.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)2.19(s，3H)，2.58(dd，J＝6.0，6.0Hz，2H)，2.80(dd，J＝6.0，6.0Hz，2H)，3.09(bs，2H)，3.72-3.87(m，4H)，4.90(q，J＝5.1Hz).

7C.2-乙酰丙酸基-1，3-二[(1，2-二油酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝油酰基(C_18:1链)

向1，2-二油酰基-sn-甘油(1.5g，2.41mmol)和四唑(8mL 0.45M乙腈溶胶，3.62mmol)在20mL无水CH₂Cl₂中的溶液中，加入二苄基二异丙基亚磷酰胺(1.25g，3.62mmol)，并在室温搅拌2小时。用100mL CH₂Cl₂稀释内容物，然后用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，真空浓缩，将油状残余物(2.08g)在干燥器中干燥8小时，并这样应用于下一步反应中。

将上面的亚磷酸盐、来自7B的2-乙酰丙酸基-1，3-丙二醇(0.185g，0.96mmol)、吡啶(2mL，24.1mmol)和Et₃N(1.2mL，12.05mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液冷却到-40℃，一次加入三溴化吡啶鎓盐(1.15g，3.61mmol)。将混合物在相同温度下搅拌1小时，经过2小时的时间逐渐达到室温，用水(10mL)处理。用EtOAc(100mL)稀释内容物，连续用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(5％丙酮的CH₂Cl₂溶液)上纯化，得到1.09g(66％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(1∶2)R_f～0.64.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，80H)，1.52-1.66(m，8H)，1.96-2.07(m，16H)，2.15(s，3H)，2.22-2.31(m，8H)，2.52-2.57(m，2H)，2.66-2.74(m，2H)，4.01-4.32(m，12H)，5.01-5.10(m，5H)，5.15-5.18(m，2H)，5.28-5.39(m，8H)，7.28-7.39(m，10H).

7D.1，3-二[(1，2-二油酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]-2-乙酰丙酸基甘油二铵盐

               R₁，R₂＝油酰基(C_18:1链)

将来自7C的保护的心磷脂(0.525g，0.324mmol)在2-丁酮(8mL)和碘化钠(145mg，0.972mmol)中的溶液在90℃回流3小时。蒸发除去挥发物，残余物在SiO₂柱(10％甲醇，在含有1％氨的CH₂Cl₂中)上纯化，得到240mg(50％)无色半固体状的产物。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.63.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.39(m，80H)，1.52-1.65(m，8H)，1.96-2.07(m，16H)，2.18(s，3H)，2.23-2.35(m，8H)，2.52-2.59(m，2H)，2.71-2.79(m，2H)，3.83-4.04(m，6H)，4.12-4.23(m，4H)，4.31-4.39(m，2H)，5.01-5.09(m，1H)，5.17-5.26(m，2H)，5.28-5.39(m，8H)，7.41-7.59(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z 1576.5(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)^-，1554(M-2NH₄ ⁺)，1272.2(M-2NH₄ ⁺RCOO^-)，776(M-2NH₄ ⁺)^2-.

7E.1，3-二[(1，2-二油酰基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐(四油酰基心磷脂的合成)

               R₁，R₂＝油酰基(C_18:1链)

向来自7D的lev-保护的心磷脂(140mg，0.088mmol)在吡啶∶乙酸(3mL，4∶1)的溶液中，加入hydazine(14mg，0.44mmol)，搅拌30分钟。在旋转蒸发器中除去挥发物，残余物在SiO₂(10％甲醇，在含有1％氨的CH₂Cl₂中)上纯化，得到80mg(61％)无色半固体状的产物。TLC(SiO₂)(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.55.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.39(m，80H)，1.52-1.65(m，8H)，1.82(bs，1H)，1.96-2.07(m，16H)，2.23-2.35(m，8H)，3.83-3.94(m，7H)，4.12-4.23(m，4H)，4.33-4.39(m，2H)，5.17-5.23(m，2H)，5.28-5.39(m，8H)，7.41-7.59(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z 1478(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)^-，1456(M-2NH₄ ⁺)，1174.2(M-2NH₄ ⁺-RCOO^-)，727.5(M-2NH₄ ⁺)^2-.

心磷脂醚类似物

实施例8.四月桂基心磷脂的合成

8A.2-苄基-1，3-二[(1，2-二月桂基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝月桂基(C_12:0链)

向搅拌的1，2-二月桂基-sn-甘油(3.0g，7.00mmol)和四唑(19.5mL 0.45M乙腈溶胶，8.76mmol)在40mL无水CH₂Cl₂的溶液中，加入二苄基二异丙基亚磷酰胺(3.02g，8.76mmol)，并在室温搅拌2小时。用100mL CH₂Cl₂稀释内容物，然后用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，真空浓缩，将油状残余物(4.5g)在干燥器中干燥8小时，并这样用于下一步反应中。

将上面的亚磷酸盐、2-苄氧基-1，3-丙二醇(0.48g，2.67mmol)、吡啶(5.43mL，66.8mmol)和Et₃N(4.63mL，33.4mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的溶液冷却到-40℃，一次加入三溴化吡啶鎓盐(3.25g，10.02mmol)。将混合物在相同温度下搅拌1小时，经过2小时的时间逐渐达到室温，并用水(30mL)处理。用EtOAc(150mL)稀释内容物，连续用5％NaHCO₃水溶液(2×50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)和浓缩。残余物在SiO₂柱(30％乙酸乙酯的己烷溶液)上纯化，得到2.34g(67％)产物，呈无色浆状。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)Rf～0.47.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝6.6Hz，12H)，1.22-1.34(m，72H)，1.47-1.56(m，8H)，3.35-3.58(m，14H)，3.72-3.78(m，1H)，3.95-4.18(m，8H)，4.59-4.61(m，2H)，5.02-5.07(m，4H)，7.26-7.34(m，15H).

8B.1，3-二[(1，2-二月桂基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐(四月桂酰基心磷脂)

               R₁，R₂＝月桂基(C_12:0链)

将来自8A的保护的心磷脂(650mg，0.48mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液在50psi经10％Pd/C(200mg)氢化6小时。经硅藻土床过滤除去催化剂，用2mL 30％氨溶液处理，并浓缩，将残余物溶解于CHCl₃，经0.25μ过滤器过滤，用丙酮进行沉淀，得到白色半固体状的C₁₂心磷脂(400mg，75％)。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.39.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，72H)，1.52-1.66(m，8H)，3.39-3.48(m，9H)，3.51-3.61(m，6H)，3.80-3.96(m，8H)，7.31-7.59(bs，8H).ESI-MS(负的)，m/z 1094.1(M-2NH₄ ⁺+Na⁺)，1072.0(M-2NH₄ ⁺+H⁺)，535.5(M-2NH₄ ⁺)^2-.

实施例9四己基心磷脂的合成

9A.2-苄基-1.3-二[(1，2-二己基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二苄基酯

               R₁，R₂＝己基(C_6:0链)

根据实施例8A所述的方法制备了标题化合物。TLC(SiO₂)己烷/EtOAc(3∶2)Rf～0.39.¹H NMRδ(CDCl₃，300MHz)0.88(t，J＝6.6Hz，12H)，1.22-1.37(m，24H)，1.47-1.58(m，8H)，3.34-3.58(m，14H)，3.72-3.78(m，1H)，3.94-4.18(m，8H)，4.59-4.61(m，2H)，5.02-5.08(m，4H)，7.26-7.34(m，15H).

9B.1，3-二[(1，2-二己基-sn-丙三基-3)-磷酰基]甘油二铵盐(四己基心磷脂)

               R₁，R₂＝己基(C_6:0链)

根据实施例8B所述的方法制备了标题化合物。TLC(SiO₂)CHCl₃/MeOH/NH₄OH(6.5∶2.5∶0.5)R_f～0.31.¹H NMRδ(CDCl₃，500MHz)0.88(t，J＝7.0Hz，12H)，1.22-1.34(m，24H)，1.50-1.61(m，8H)，1.88(bs，1H)，3.39-3.48(m，9H)，3.51-3.61(m，6H)，3.80-3.96(m，8H)，7.31-7.69(bs，8H).

实施例10

该实施例示范了本发明的含有心磷脂的脂质体组合物的制备。通过混合19.1μmol根据本文所述的方法生产的心磷脂、96.2μmol磷脂酰胆碱和64.6μmol胆固醇，制备了小单层囊泡。彻底搅拌后，使用旋转蒸发器，将混合物在50ml圆底烧瓶中蒸发至干。随后将干燥的脂膜重新悬浮到10ml无菌的不致热的水中。经过30分钟的溶涨时间后，在25℃的恒温浴中超声处理得到的悬浮液15分钟。然后与海藻糖一起冻干脂质体制品。

所有的参考文献，包括出版物、专利申请和专利，都在这里引作参考，其程度与每篇文献各自地和特别地引作参考一样，且在这里完整阐述。

在描述发明的上下文(特别是在下面的权利要求的上下文中)中使用的术语“一种”和“该”和类似对象应该理解为覆盖了单数和复数，除非在本文中另有说明或者在上下文中清除地予以排除。术语″包含″、″具有″、″包括″和″含有″应该理解为开放式的术语(即指″包括，但不限于″)，除非另有说明。本文中的数值范围的列举仅仅用作简略方法，个别提及的每个单个值都在该范围内，除非本文另有说明，每个单个值都引用在说明书中，如同它是在本文中单独引用。可以以任何合适的次序实现本文所述的所有方法，除非在本文中另有说明或者在上下文中清除地予以排除。本文提供的任何和所有实施例、或示例性的语言(例如，“例如”)的使用，仅仅意在更好地说明本发明，而不限制本发明的范围，除非另有说明。说明书中的任何语言都不能理解成暗示任何未声明的要素对完成本发明是必需的。

本文描述了本发明的优选实施方案，包括发明人已知的实现本发明的最佳实施方式。在阅读前面的说明之后，这些优选的实施方案的变化对于本领域的普通技术人员是显而易见的。发明人预见到技术人员采用这样的变化是合适的，发明人认为可以通过本文具体说明以外的方法实现本发明。因此，本发明包括可适用的法律允许的所附权利要求中引用的主题的所有改进和等同物。而且，上面所述的要素以其所有可能的变化进行的任何组合都包含在本发明内，除非在本文中另有说明或者在上下文中清除地予以排除。

参考文献

1.Drummond，D.C.；Meyer，O.；Hong，K.；Kirpotin，D.B.；Papahadgopoulos，D.Pharm.Rev.，1999，51，691-743.

2.Ramirez，F.；Ioannou，P.V.；Marecek，J.F.；Golding，B.T.；Dodd，G.H.Synthesis.1976，11，769-770.

3.Duralski，A.A.；Spooner，P.J.R.；Watts，A.Tetrahedron Lett.1989，30，3585-3588.

4.Duralski，A.A.；Spooner，P.J.R.；Rankin，S.E.；Watts，A.TetrahedronLett.1998，39，1607-1610.

5.Saunders，R.M.；Schwarz.J.Am.Chem.Soc.1966，88，3844-3847.

6.Mishina，I.M.；Vasilenko，A.E.；Stepanov，A.E.；Shvets，V.I.Bioorg.Khim.1985，11，992-994.

7.Stepanov，A.E.；Makarova，I.M.；Shvets，V.I.Zh.Org.，Khim.1984，20，985-988.

8.DeHaas，G.H.；Bonsen，P.P.M.；VanDeenen，L.L.M.Biochim.Biophys.Acta，1966，116：114-124.

9.Inoue，K.；Suhara，Y.；Nojima，S.Chem.Pharm.Bull.，1963，1150-1156.

10.Browne，J.E.；Driver，M.J.；Russel，J.C.；Sammes，P.G.J.Chem.Soc.Perkin Trans.1.2000，653-657.

11.Watanabe，Y.；Inada，E.；Jinno，M.；Ozaki，S.Tetrahedron Lett.1993，34，497-500.

12.Watanabe，Y.；Hirofuji，H.；Ozaki，S.Tetrahedron Lett.1994，35，123-124.

13.Watanabe，Y.；Nakamura，T.；Mitsumoto，H.Tetrahedron Lett.1997，38，7407-7410.

14.Watanabe，Y.；Ishikawa，H.Tetrahedron Lett.2000，41，8509-8512.

15.Watanabe，Y.；Nakatomi，M.Tetrahedron Lett.1998，39，1583-1586.

16.Chen，J.；Feng，L.；Prestwich，G.D.J Org.Chem.1998，63，6511-6522.

17.Lindberg，J.；Ekeroth，J.；Konradsson，P.J Org.Chem.2002，67，194-199.

18.Chen，J.；Profit，A.A.；Prestwich，G.D.J Org.Chem.1996，61，6305-6312.

19.Prestwich，G.D.Acc.Chem.Res.1996，29，503-513.

20.Gu，Q.M.；Prestwich，G.D.J Org.Chem.1996，61，8642-8647.

21.Murakami，K.；Molitor，E.J.；Liu，H.W.J Org.Chem.1999，64，648-651.

22.Prestwich，G.D.；Marecek，J.F.；Mourey，R.J.；Thiebert，A.B.；Ferris，C.D.；Danoff，S.K.；Snyder，S.H.J.Am.Chem.Soc.1991，113，1822-1825.

23.Dreef，C.E.；Elie，C.J.J.；Hoogerhout，P.；van der Marel，G.A.；vanBoom，J.H.Tetrahedron Lett.1988，29，6513-6516.

24.Inoue，K.；Nojima，S.Chem.Pharm.Bull.1968，16，76-81.

25.Ioannou，P.V.；Marecek，J.F.Chem.Chron.1986，15，205-220.

26.Ramirez，F.；Ioannou，P.V.；Marecek，J.F.；Dodd，G.H.；Golding，B.T.Tetrahedron.1977，33，599-608.

27.Mishina，I.M.；Vasilenko，A.E.；Stepanov，A.E.；Shvets，V.I.BioorgKhim.1987，13，1110-1115.

28.Keana，J.F.W.；Shimiju，M.；Jernstedt，K.K.J Org.Chem.1986，51，2297-2299.

29.Chevallier，J.；Sakai，N.；Robert，F.；Kobayashi，T.；Gruenberg，J.；Matile，S.Org Lett.2000，2，1859-1861.

30.Wilk，A.；Srinivasachar，K.；Beaucage，S.J Org.Chem.1997，62，6712-6713.

31.Moriguchi，T.；Yanagi，T.；Kunimori，M.；Wada，T.；Sekine，M.J.OrgChem.2000，65，8229-8238.

Claims (63)

1.一种制备式I、II或III的心磷脂类似物的方法，

其包含在存在酸催化剂的情况下使式VIII的醇与一种或多种磷酰胺试剂和2-O-保护的甘油或2-O-取代的甘油反应，

其中，在式I、II、III或VIII中，

Y₁和Y₂相同或不同地为-O-C(O)-，-O-，-S-或-NH-C(O)-；

R₁和R₂相同或不同地为H，C₂至C₃₄饱和的或不饱和的烷基；

R₃是(CH₂)_n且n＝0-15；

R₄是氢、烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、肽、二肽、多肽、蛋白质、碳水化合物、杂环、核苷、多核苷酸；

R₅是连接物，其含有烷基、取代的烷基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、聚烷氧基、肽、二肽、多肽、蛋白质、碳水化合物；

X是氢、无毒的阳离子。

2.如权利要求1的方法，其中酸催化剂选自4，5-二氯咪唑，1H-四唑，5-(4-硝基苯基)-1H-四唑，5-(3，5-二硝基苯基)-1H-四唑，N-甲基三氟咪唑鎓盐和N-甲基高氯酸咪唑鎓盐，4，5-二氰基咪唑，5-乙基硫代-1H-四唑和5-甲基硫代-1H-四唑。

3.权利要求1或2的方法，其中至少一种偶联的亚磷酰胺具有式IV：

4.权利要求1或2的方法，其中至少一种偶联的亚磷酰胺具有式V：

5.一种制备式I、II或III的心磷脂或其类似物的方法，其包含使2-O保护的甘油在存在三溴化吡啶鎓盐的情况下与一种或多种磷酸三酯反应。

6权利要求5的方法，其中一种或多种磷酸三酯是通过使式VIII的醇与通式VII的亚磷酰胺反应来制备

7.权利要求3、4或6中的任一项的方法，其中式IV、V或VII中的X是磷酸保护基，其包括包含乙基、环己基、叔丁基的烷基磷酸酯；包含2-氰基乙基、4-氰基-2-丁烯基、2-(甲基二苯基甲硅烷基)乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(三苯基甲硅烷基)乙基的2-取代的乙基磷酸酯；包含2，2，2-三氯乙基、2，2，2-三溴乙基、2，2，2-三氟乙基的卤代乙基磷酸酯；包含4-氯苄基、芴基-9-甲基、二苯基甲基和酰胺化物的苄基磷酸酯。

8.权利要求1-7中的任一项的方法，其中至少一个R₁和/或R₂是饱和的或不饱和的具有4至14个碳的烷基。

9.权利要求1-8的方法，其中心磷脂包含具有2至14个碳的短链脂肪酸。

10.权利要求9的方法，其中心磷脂包含具有4至12个碳的脂肪酸。

11.权利要求1-8的方法，其中心磷脂包含具有14至34个碳的长链脂肪酸。

12.权利要求11的方法，其中心磷脂包含具有14至24个碳的脂肪酸。

13.权利要求1-12的方法，其中心磷脂是饱和的和/或不饱和的。

14.一种心磷脂或心磷脂类似物，其由权利要求1-13中的任一项的方法制备。

15.一种制备脂质体的方法，其包括通过权利要求1-13的方法制备心磷脂或心磷脂类似物，和将该心磷脂或心磷脂类似物包含在脂质体中。

16.一种将药物维持在脂质体中的方法，其包括通过权利要求1-13的方法制备心磷脂或心磷脂类似物，和将该心磷脂或心磷脂类似物和药物包含在脂质体中。

17.一种将药物维持在脂质体中的方法，其包括通过权利要求1-13的方法制备心磷脂或心磷脂类似物，和将该心磷脂或心磷脂类似物和药物混合物包含在脂质体中。

18权利要求17的方法，其中所述混合物包含两种或多种药物。

19.一种脂质体组合物，其由权利要求15-18中的任一项的方法制备。

20.一种脂质组合物，其含有通过权利要求1-13中的任一项的方法制备心磷脂或心磷脂类似物。

21.权利要求20的组合物，其是脂质体。

22.权利要求19或21的组合物，其包含单层囊泡、多层囊泡、或其混合物。

23.权利要求19或21的脂质体组合物，其中所述脂质体具有约1微米或更小的直径。

24.权利要求19或21的脂质体组合物，其中所述脂质体具有约500nm或更小的直径。

25.权利要求19或21的脂质体组合物，其中所述脂质体具有约200nm或更小的直径。

26.权利要求19或21的组合物，其中所述脂质体具有约100nm或更小的直径。

27.权利要求20的组合物，其是脂质体以外的。

28.权利要求19-27中的任一项的组合物，其还包含磷脂酰胆碱、甾醇和生育酚。

29.权利要求19-28中的任一项的组合物，其还包含选自下述的磷脂酰胆碱：二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二花生四烯酰磷脂酰胆碱、卵磷脂酰胆碱、豆磷脂酰胆碱、氢化的豆磷脂酰胆碱和其混合物。

30.权利要求19-29中的任一项的组合物，其还包含选自下述的磷脂酰甘油：二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油基磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二花生四烯酰磷脂酰甘油和其混合物。

31.权利要求19-30中的任一项的组合物，其还包含选自下述的甾醇：胆固醇，胆固醇的衍生物，粪醇，胆甾烷醇，胆甾烷，胆固醇半琥珀酸酯，胆固醇硫酸酯和其混合物。

32.权利要求19-31中的任一项的组合物，其包含一种或多种靶向剂。

33.权利要求32的组合物，其中所述靶向剂是蛋白质。

34.权利要求33的组合物，其中所述蛋白质选自由下述组成的蛋白质的组：抗体、抗体片段、肽、肽激素、受体配体和其混合物。

35.权利要求19-34中的任一项的组合物，其为冻干形式。

36.权利要求35的组合物，还包含冷冻保护剂。

37.权利要求19-36中的任一项的组合物，还包含配体。

38.权利要求37的脂质体组合物，其中所述配体是抗体或细胞受体的配体。

39.权利要求19-38中的任一项的组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。

40.权利要求18-39中的任一项的组合物，还包含活性剂。

41.权利要求19-40中的任一项的组合物，还包含活性剂的混合物。

42.权利要求41的任一项的组合物，其中所述的混合物包含两种或多种活性剂。

43.权利要求19-42中的任一项的组合物，其中至少一种所述的活性剂与心磷脂或心磷脂类似物复合。

44.权利要求19-43中的任一项的组合物，其中至少一种所述的活性剂是包封在脂质体中。

45.权利要求40-44中的任一项的组合物在制备用于治疗疾病的药物中的应用。

46.权利要求45的应用，其中疾病是癌症。

47.一种向细胞输送活性剂或活性剂的混合物的方法，其包括制备根据权利要求40-44中的任一项的组合物，和将该组合物暴露给细胞。

48.权利要求47的方法，其中该细胞是体外的。

49.权利要求47的方法，其中该细胞是体内的。

50.一种治疗人或动物疾病的方法，包括制备根据权利要求40-44中的任一项的组合物，和将该组合物暴露给需要治疗的人或动物，使活性剂输送到人或动物患者。

51.权利要求50的方法，其中所述疾病是癌症，且至少一种所述的活性剂是抗癌剂。

52.心磷脂在制备抗老化的药物中的应用。

53.心磷脂在制备抗哺乳动物疾病的药物中的应用。

54.根据权利要求53的应用，其中所述的疾病选自与年龄有关的疾病，动脉粥样硬化，糖尿病，心脏病，局部缺血和皮肤病。

55.权利要求52-54中的任一项的应用，其中心磷脂是脂质体组合物的形式。

56.权利要求52-55中的任一项的应用，其中心磷脂是脂质体组合物形式以外的。

57.一种治疗患者中的老化作用的方法，其包含给患者施用治疗有效量的心磷脂，从而抵抗所述患者中的老化作用。

58.一种治疗哺乳动物疾病的方法，其包含给需要治疗的患者施用足以治疗所述疾病量的心磷脂。

59.权利要求58的方法，其中所述的疾病选自与年龄有关的疾病，动脉粥样硬化，糖尿病，心脏病，局部缺血和皮肤病。

60.权利要求57-59中的任一项的方法，其中所述组合物包括除了心磷脂以外的一种或多种药学上可接受的载体。

61.权利要求57-60中的任一项的方法，其中所述组合物是通过皮肤施用。

62.权利要求57-61中的任一项的方法，其中所述组合物是静脉内施用。

63.权利要求57-62中的任一项的方法，其中所述组合物是脂质体组合物以外的。

Images