CN1710419A

CN1710419A - 全血乳酸检测试条

Info

Publication number: CN1710419A
Application number: CNA2004100483022A
Authority: CN
Inventors: 李华清; 蔡新霞; 王利; 刘春秀; 姜利英; 罗贤波; 崔大付
Original assignee: Institute of Electronics of CAS
Current assignee: Institute of Electronics of CAS
Priority date: 2004-06-17
Filing date: 2004-06-17
Publication date: 2005-12-21

Abstract

本发明全血乳酸检测试条是一种电化学生物传感器。其以一绝缘基片做基底，在基底上纵向有一对互相平行的金属薄膜导电带，两导电带的一端为接入端，在两导电带上覆有隔离片；隔离片与基底同宽，但短于基底，以露出两接入端；隔离片上有一个槽，并露出部分绝缘基片和其上的两部分导电带；暴露的两部分导电带形成工作电极和对电极，在工作电极和对电极上覆设有反应试剂层；隔离片上固接一上绝缘基片，其与隔离片同宽，上绝缘基片将隔离片上的槽覆盖，围成一两端敞口的毛细管腔体，腔体为传感器的反应区。本发明的反应区，在不需要人工干预的情况下即可固定被检测血液的体积，并使微量血液快速进入与反应试剂反应，在短时间内测出血液中乳酸的含量。

Description

全血乳酸检测试条

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，是一种用于全血乳酸定量检测的电化学生物传感器试条及其批量生产的制作方法以及检测技术。

背景技术

以往，血液中的乳酸主要在大型血液生化分析仪上进行，由于需要使用特殊装置，测定所需要的血液较多，时间较长，价格昂贵，适合在大型医院进行，近年来利用酶所具有的特异催化剂作用的各种类型的生物传感器被开发了。由于这类生物传感器检测前不需要做任何预处理，就能在较短的时间内准确地测定全血中的乳酸含量。而且传感器的批量制作工艺简单，成本低廉，特别适合工业化的大规模制作，可供家庭和医院中用于一次性使用的快速检测全血中的乳酸。在医学领域中，电化学的生物传感器被广泛用于分析包括血液在内的生物物质。在这种生物传感器中，利用酶的电化学生物传感器是在医院或诊所实验室中最主要的生物传感器，因为它们容易使用，并且测量灵敏度很高，可以快速获取测试结果。对于电化学的生物传感器，近来广泛采用电极方法。在用传统方法如丝网印刷制造的电极系统中，通过将包括酶的试剂固定在电极上，加入试样，然后在电极两端加上一个电压，可以定量测量血液中的被分析物。但是基于丝网印刷技术的试条生产工艺有其固有的局限性，包括原料的不确定性(如碳、银浆，网板等)，生产效率偏低，生产过程中容易受到污染等。这一方面影响到产品的一致性和准确性，另一方面制约了生产规模的扩大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够快速定量测定全血中乳酸浓度的检测试条。

为达到上述目的，本发明的技术解决方案是提供一种全血乳酸检测试条，是一种电化学生物传感器，由绝缘基片、金属薄膜导电带、隔离片和反应试剂层组成，其以一绝缘基片做基底，在基底上纵向设有一对互相平行的金属薄膜导电带，两导电带的一端为接入端，两接入端与特制的检测仪表连接，在两导电带上覆有隔离片；隔离片与基底同宽，但短于基底，以露出两接入端；隔离片上横向开有一个槽，并露出部分绝缘基片和其上的两部分导电带；暴露的两部分导电带形成工作电极和对电极，在工作电极和对电极上覆设有反应试剂层；在隔离片上固接一上绝缘基片，其与隔离片同宽，上绝缘基片将隔离片上的槽覆盖，围成一两端敞口的毛细管腔体，该腔体为传感器的反应区。

所述的全血乳酸检测试条，其所述反应试剂层，包括多孔状的金属纳米颗粒层和反应试剂，纳米颗粒层作为反应试剂的固定载体，固接于两电极上。

所述的全血乳酸检测试条，其所述绝缘基底，其厚度为0.1～0.5mm，是由聚酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐组成中任选一种聚合物制成，优选是聚乙烯对苯二甲酸盐，该聚合物是片材或卷材。

所述的全血乳酸检测试条，其所述金属薄膜导电带，是采用印刷电路板技术、溅射或蒸镀工艺制作；由金、银、铂、钯中任选一种贵金属材料制成，优选是金。

所述的全血乳酸检测试条，其所述覆设金属薄膜导电带之前，先采用印刷电路板技术、溅射或蒸镀工艺制作一金属粘结层，然后在粘结层上覆盖金属薄膜导电带；金属粘结层材料，优选是铬或镍。

所述的全血乳酸检测试条，其所述隔离片，双面带胶贴片，厚度均一，其厚度为0.05～0.3mm，优选在0.1mm；是由聚酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐组成中任选一种聚合物制成，优选是聚乙烯对苯二甲酸盐，该聚合物是片材或卷材。

所述的全血乳酸检测试条，其所述隔离片上横向开的槽，是以冲压或雕刻的方式制成，槽的面积为0.04～0.2cm²，优选为0.10cm²。

所述的全血乳酸检测试条，其所述工作电极和对电极的面积相等或不等，面积为0.04～0.16cm²。

所述的全血乳酸检测试条，其所述上绝缘基片，是由聚酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐组成中任选一种聚合物制成，优选是聚乙烯对苯二甲酸盐；其向毛细管腔体的一面有一层亲水层。

所述的全血乳酸检测试条，其所述多孔状的金属纳米颗粒层，是将纳米铂黑或纳米金黑多孔状的金属颗粒，用电沉积法制成。

所述的全血乳酸检测试条，其所述在沉积电沉积多孔性的金属纳米颗粒前，要用物理或化学的方法对电极表面进行预处理。

所述的全血乳酸检测试条，其所述反应试剂，包括缓冲液、电子媒介体、生物酶、表面活性剂、亲水高分子和用于保持酶活性的稳定剂组成。

所述的全血乳酸检测试条，其所述电子媒介体，是铁氰化钾、对苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物、beta-萘酚-4-磺酸钾、亚甲基蓝、二茂铁及其衍生物，其中，优选是铁氰化钾。

所述的全血乳酸检测试条，其所述亲水高分子，是羧？甲基纤维素、羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、乙基羟基乙基纤维素、氨基甲基乙基纤维素、聚乙烯基毗咯烷酮、聚乙烯酸、聚赖氨酸和聚氨基酸、聚苯乙烯碘酸、乳胶、丙烯酸或其盐、甲基丙烯酸或其盐、淀粉或其衍生物、马来酐或其盐类、明胶、琼脂糖凝胶、树胶，其中，优选是羧基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、乙基经乙基纤维素、装甲基乙基纤维素。

所述的全血乳酸检测试条，其所述铁氰化钾，其铁氰根离子为每平方厘米0.2～6.6mg，优选为每平方厘米3.3mg。

所述的全血乳酸检测试条，其所述反应试剂，是将10mg乳酸氧化酶，33mg的铁氰化钾，10mg的牛血清白蛋白和10mg羧甲基纤维素溶解在1.0ml的pH值为7.4的0.01M磷酸氢二钠—磷酸二氢钠的缓冲液中，制成混合酶溶液，再将这种混合酶溶液加在工作电极和对电极上的铂纳米颗粒层反应区，再将其在35℃的恒温干燥箱中干燥十分钟，形成试剂反应层。

本发明采用了MEMS工艺和金属纳米技术，与现有技术相比，此生物传感器的优点在于，利用遮蔽掩膜的方法和金属薄膜沉积工艺制作具有精确三维结构的贵金属电极不仅确保了电极表面的一直性，而且使生产流程进一步简化，提高了生产效率，降低了生产成本，通过在电极的表面组装多孔状的金属纳米颗粒，大大增加了有效电极表面面积。也就是增大了在电化学测量中与电极表面面积直接相关的可用信号，提高信噪比，降低生物传感器的检出限，同时也降低了后续检测电路的难度，提高了检测仪表的可靠性。

附图说明

图1为本发明全血乳酸检测试条的结构分解示意图；

图2为本发明全血乳酸检测试条沿图1A-A’剖线的局部剖视图；

图3电沉积铂黑原理装置示意图；

图4乳酸浓度与响应的电流关系图；

图5血清乳酸浓度与传感器的响应电流关系图。

具体实施方式

本发明的全血乳酸检测试条是一种电化学生物传感器。图1为示意性地表示根据本发明的一种电化学生物传感器的结构的透视图。从图1中可看出，本发明的电化学生物传感器包括绝缘基片1，在该基片1上利用遮蔽掩膜的方法和金属薄膜沉积工艺，沿长度方向形成一对互相平行的导电带2a、3a，导电带2a、3a的面积和形状可由掩膜控制，这种方法形成的导电带2a、3a相对于传统方法：例如丝网印刷法和粗导线粘接法，具有更精确的电极三维结构。导电带2a、3a的一端作为插入检测仪器的接入端7和8，在另一端粘贴或热压一个具有三维尺寸的隔离片4，隔离片4上刻有一定面积的槽5，透过槽5露出的导电带2a、3a的部分分别为传感器的工作电极2和对电极3(见图3)，在工作电极2和对电极3上电沉积多孔性的金属纳米颗粒用来固定反应试剂，形成反应试剂层10，这种多孔性的金属纳米颗粒一方面是一种良好的反应试剂固定载体，能够有效地防止反应试剂的脱落和失活，从而提高了传感器的使用寿命，另一方面这种多孔性的金属纳米颗粒具有较高的比表面积，相当于电极2、3的有效面积大为增加，使得电极2、3的响应电流增大，传感器的灵敏度提高。而且这种多孔性的金属纳米颗粒使反应试剂未与电极2、3表面接触，所以，能够防止大分子如蛋白质等吸附在电极2、3表面。待反应试剂被固定和干燥后，再在隔离片4的槽5上粘贴或热压一片面积比隔离片上的槽5略大的透明的上绝缘基片6。隔离片4的槽5与上下两片绝缘基片6、1一起构成了一个两端敞口的类似毛细管的腔体9，这个腔体9在不需要人工干预的情况下即可以固定被检测血液的体积，而且可以使微量血液快速进入并与固定好的反应试剂反应，在短时间内测出血液中乳酸的含量。

作为绝缘基片1，可以使用任何材料，只要该材料具有电气绝缘性质即可；但为了大量生产本发明的电化学生物传感器，最好，该材料的挠性足够大，能承受液压加工，同时刚性也应足够，以满足支承的要求。建议使用聚合物作为该绝缘基片的材料，例如：聚醋、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐等，最好是聚乙烯对苯二甲酸盐。绝缘基片1的厚度在0.1-0.5mm。而作为上绝缘基片6，也可以使用任何材料或者上述材料，但为了提高毛细管腔体9的亲水性，加快血液进入腔体9的速度，可以采用经过特殊处理的上绝缘基片6，如Adhesives Research公司的ARCare4078等。隔离片4也可以使用上述材料，但要求双面带胶，且厚度要求均一。隔离片4的厚度会影响血液的进样体积以及传感器的响应时间等，当电极2、3的面积一定时，隔离片4越厚，需要的血液的体积越大，传感器响应的时间也越长。隔离片4的厚度一般在0.05-0.3mm。优选在0.1mm。隔离片4上的槽5曝露出导电带2a、3a的区域面积决定了工作电极2和对电极3的面积。槽5的面积一般为0.04-0.2平方厘米。优选为0.10平方厘米。

适合用作电极2、3的贵金属很多，例如：钯、铂、金、银等，用这些贵金属制作的电极2、3表面具有一致性好、且电化学性质稳定等优点。尤其是金，因为它相对比较便宜，加工工艺简单，与塑料的粘结性很好且导电率高，通过溅射法，可将金制成薄至100nm的电极，同时为了降低成本，通常先使用与绝缘基片(例如塑料)粘结性好且价格低廉的金属如铬，镍等材料作成粘结层，然后在该粘结层上覆盖一层薄的贵金属。通过隔离片上的5槽所形成的工作电极2和对电极3的面积可以相等也可以不等，面积一般为0.04-0.16平方厘米。这样形成的传感器进样体积为0.5-2.0微升。

参见图2，反应试剂层10上与被分析物起反应的试剂，以适当的宽度横跨固定在绝缘基片1的两个电极2、3上。是利用自动涂敷器或丝网印刷、滚子涂层或旋转涂层方法，将反应试剂涂敷在绝缘基片1的电极2、3区域上。反应试剂由乳酸氧化酶，电子媒介体，用于保持酶活性的稳定剂和亲水高分子组成。

亲水高分子物质可以使样品溶液快速地进入酶反应层进行反应，因此这些物质多为一些易溶于水的高分子化合物，这类物质可以是：氨？基甲基纤维素(CMC)，羟基乙基纤维素(HEC)，羟基丙基纤维素(HPC)、甲基纤维素和乙基纤维素、乙基羟基乙基纤维素、氨基甲基乙基纤维素、聚乙烯基毗咯烷酮、聚乙烯酸、聚赖氨酸和聚氨基酸、聚苯乙烯碘酸、乳胶、丙烯酸或其盐、甲基丙烯酸或其盐、淀粉或其衍生物、马来酐或其盐类、明胶、琼脂糖凝胶、树胶等。其中，较好的是氨甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、乙基经乙基纤维素、装甲基乙基纤维素。

本发明的传感器就是由酶反应产生的还原型电子媒介体在氧化时产生的氧化电流，来求得试样溶液中基质的浓度。电子媒介体使用，可以使传感器的电极在较低的工作电压下进行电化学氧化还原反应，从而可以有效地降低血液中电活性物质如尿酸、抗坏血酸的干挠。血液中的溶解氧是乳酸氧化酶的天然辅助因子，所以在氧的存在下，在氧与氧化还原介体之间存在强烈的竞争，导致信号的降低，类似地，由于血红蛋白是高效率的氧输送介质，样品中血细胞过高将导致信号降低，虽然可以采用保持血细胞远离电极表面的隔离膜，来降低血细胞的影响，但是这种方法也增加了额外的制造步骤。本发明中增加电子媒介体的浓度使其保持足够的竞争力，可以有效地减小氧的影响。电子媒介体可以是：铁氰化钾、对苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物、beta-萘酚-4-磺酸钾、亚甲基蓝、二茂铁及其衍生物等。其中，较好的是铁氰化钾，且铁氰根离子为每平方厘米0.2-6.6mg。优选为每平方厘米3.3mg.。

乳酸氧化酶为每平方厘米1-200活性单位，优选为每平方厘米100活性单位。当传感器的接入端7、8与特制的检测仪表连接，在毛细管腔体9的一端引入一个血样后，该传感器的两个电极2、3两端可以加上电压0.1-0.5V，优选为0.2V。血样便在10秒内使毛细管腔体9里的反应试剂层10迅速溶解并起反应，产生电荷，因为这些通过酶的反应产生的电荷与特定的被分析物的浓度有关，因此定量地确定这些电荷即可以知道被分析物的浓度。

参照附图可以很好地理解本发明全血乳酸检测试条的优选实施例。在附图中，相同的标号分别表示相同的零部件。优选实施例只是为了说明目的，而不是对本发明全血乳酸检测试条的限制。

如图1和图2所示，本发明全血乳酸检测试条的电化学生物传感器包括绝缘基片1为0.5mm厚的聚碳酸酯片，在该基片1上依靠静电力粘贴一层保护性塑料薄膜，利用一台高精度刻字机雕刻出所需要的导电带的遮蔽掩膜的图形，通过金属薄膜沉积工艺，在基片1上沉积出金薄膜，厚度约为100nm，去掉遮蔽掩膜即可沿长度方向形成一对互相平行的导电带2a、3a，导电带2a、3a的一端作为插入检测仪器的接入端7和接入端8，在另一端粘贴一个厚度为0.1mm的隔离片4，隔离片4上刻有一定面积的槽5，槽5沿导电带的长度方向为2.0mm，透过槽5露出的导电带2a、3a的部分分别为传感器的工作电极2和对电极3，面积都为0.2mm×0.2mm。接着在工作电极2和对电极3上电沉积多孔性的金属铂纳米颗粒用来固定反应试剂，形成反应试剂层10。

在沉积电沉积多孔性的金属铂纳米颗粒前用物理或化学的方法对电极2、3表面进行预处理是很有必要的，它能有效提高电极2、3的抗腐蚀能力，降低电极阻抗，增强金属铂纳米颗粒与金薄膜电极表面的粘结度。本发明采用氧离子刻蚀的方法对金薄膜电极2、3表面进行预处理，效果相当明显，不仅可以去除电极2、3表面的污染物，同时还能起到活化电极2、3表面的作用，刻蚀的条件可根据电极2、3表面的情况做适当的调整。如图3所示，然后将要沉积金属铂纳米颗粒工作电极2和对电极3同时与恒电位仪13的工作电极w端相连接，恒电位仪13的参比电极R与对电极C短接后与铂电极12连接。电解池11中的电解液由48mM氯铂酸和2.1mM的醋酸铅溶液组成，电沉积后用大量去离子水冲洗电极2、3表面，去除残留在电极2、3表面的各种离子，在35℃烘箱中放置十分钟，取出保存备用。电沉积时的电压、沉积时间以及不同电解液配比都将影响的金属铂纳米颗粒层的大小和堆积程度。

反应试剂层10含有乳酸氧化酶、电子媒介体、用于酶活性保持的稳定剂和亲水高分子物质。具体的是将10mg乳酸氧化酶，33mg的铁氰化钾，10mg的牛血清白蛋白和10mg羧甲基纤维素溶解在1.0ml的pH值为7.4的0.01M磷酸氢二钠—磷酸二氢钠的缓冲液中，制成混合酶溶液，将这种混合酶溶液滴加在图1所示的电极2、3上的铂纳米颗粒层反应区，将其在35℃的恒温干燥箱中干燥十分钟，形成试剂反应层10。

待反应试剂被固定和干燥后，再在隔离片4的槽5上粘贴一片面积比隔离片上的槽5略大的透明的上绝缘基片6为0.1mm的聚乙烯对苯二甲酸盐。隔离片4的槽5与上下两片绝缘基片6、1一起构成了一个两端空的类似毛细管的腔体9，这个腔体9的体积为1.0微升，当传感器的接入端与特制的检测仪表连接，在毛细管的腔体9一端引入一个血样后，该传感器的两个电极2、3两端加上0.2V电压。血样便在20秒内使毛细管里的试剂反应层10迅速溶解并起反应，产生电荷，因为这些通过酶的反应产生的电荷与特定的被分析物的浓度有关，因此定量地确定这些电荷即可以知道被分析物的浓度。将浓度分别为0、1、2、3、4、5、6、7、8、10、15mM的乳酸溶液引入在上述方法制成的乳酸传感器的反应区中，20秒后在0.2V电压下测试其反应电流，每一个乳酸浓度平行测定三次，乳酸浓度与传感器响应电流关系如图4所示，可见乳酸浓度与传感器响应电流成正比例关系，因此只需测出传感器响应电流即可方便、快捷地测出乳酸的含量。图5为用血清中测定的乳酸浓度与传感器的响应电流关系图。

Claims

1.一种全血乳酸检测试条，是一种电化学生物传感器，由绝缘基片、金属薄膜导电带、隔离片和反应试剂层组成，其特征在于：以一绝缘基片做基底，在基底上纵向设有一对互相平行的金属薄膜导电带，两导电带的一端为接入端，两接入端与特制的检测仪表连接，在两导电带上覆有隔离片；隔离片与基底同宽，但短于基底，以露出两接入端；隔离片上横向开有一个槽，并露出部分绝缘基片和其上的两部分导电带；暴露的两部分导电带形成工作电极和对电极，在工作电极和对电极上覆设有反应试剂层；在隔离片上固接一上绝缘基片，其与隔离片同宽，上绝缘基片将隔离片上的槽覆盖，围成一两端敞口的毛细管腔体，该腔体为传感器的反应区。

2.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述反应试剂层，包括多孔状的金属纳米颗粒层和反应试剂，纳米颗粒层作为反应试剂的固定载体，固接于两电极上。

3.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述绝缘基底，其厚度为0.1～0.5mm，是由聚酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐组成中任选一种聚合物制成，优选是聚乙烯对苯二甲酸盐，该聚合物是片材或卷材。

4.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述金属薄膜导电带，是采用印刷电路板技术、溅射或蒸镀工艺制作；由金、银、铂、钯中任选一种贵金属材料制成。

5.如权利要求1或4所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述覆设金属薄膜导电带之前，先采用印刷电路板技术、溅射或蒸镀工艺制作一金属粘结层，然后在粘结层上覆盖金属薄膜导电带；金属粘结层材料。

6.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述隔离片，双面带胶贴片，厚度均一，其厚度为0.05～0.3mm；是由聚酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐组成中任选一种聚合物制成，该聚合物是片材或卷材。

7.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述隔离片上横向开的槽，是以冲压或雕刻的方式制成，槽的面积为0.04～0.2cm²。

8.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述工作电极和对电极的面积相等或不等，面积为0.04～0.16cm²。

9.如权利要求1所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述上绝缘基片，是由聚酯、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚氯乙烯、聚乙烯，聚乙烯对苯二甲酸盐组成中任选一种聚合物制成；其向毛细管腔体的一面有一层亲水层。

10.如权利要求2所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述多孔状的金属纳米颗粒层，是将纳米铂黑或纳米金黑多孔状的金属颗粒，用电沉积法制成。

11.如权利要求10所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述在沉积电沉积多孔性的金属纳米颗粒前，要用物理或化学的方法对电极表面进行预处理。

12.如权利要求2所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述反应试剂，包括缓冲液、电子媒介体、生物酶、表面活性剂、亲水高分子和用于保持酶活性的稳定剂组成。

13.如权利要求12所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述电子媒介体，是铁氰化钾、对苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物、beta-萘酚-4-磺酸钾、亚甲基蓝、二茂铁及其衍生物。

14.如权利要求12所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述亲水高分子，是羧甲基纤维素、羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、乙基羟基乙基纤维素、氨基甲基乙基纤维素、聚乙烯基毗咯烷酮、聚乙烯酸、聚赖氨酸和聚氨基酸、聚苯乙烯碘酸、乳胶、丙烯酸或其盐、甲基丙烯酸或其盐、淀粉或其衍生物、马来酐或其盐类、明胶、琼脂糖凝胶、树胶。

15.如权利要求13所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述铁氰化钾，其铁氰根离子为每平方厘米0.2～6.6mg。

16.如权利要求12、13、14或15所述的全血乳酸检测试条，其特征在于：所述反应试剂，是将10mg乳酸氧化酶，33mg的铁氰化钾，10mg的牛血清白蛋白和10mg羧甲基纤维素溶解在1.0ml的pH值为7.4的0.01M磷酸氢二钠—磷酸二氢钠的缓冲液中，制成混合酶溶液，再将这种混合酶溶液加在工作电极和对电极上的铂纳米颗粒层反应区，再将其在35℃的恒温干燥箱中干燥十分钟，形成试剂反应层。