CN1690201A - 一类新的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类新的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签的序列。利用本发明的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝癌中特异表达的相关基因，从而在研究肝癌的致病机理以及开发治疗肝癌的药物中发挥重要作用。

Description

一类新的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一类新的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签。

背景技术

肝脏的恶性肿瘤80％来自于肝细胞，所以肝脏肿瘤多称为肝细胞癌或肝细胞(hepatocellular cancer-HCC or hepatoma)，肝癌是目前世界上比较多见的恶性肿瘤之一。在亚洲它是最常见的肿瘤占所有癌中的20-30％。中国肝癌的发生率又高达45％，而且近年的研究表明，发生率仍有继续上升的趋势。尽管对进展中的肿瘤进行常规手术切除可以延长部分患者的生存期，但是大多数晚期肝癌患者生存机会仍然很小。肝癌已经严重危害了人们的生命健康。

生物基因组中可转录表达的序列(即基因)仅占总序列的3-5％，对这部分序列进行测定，将直接导致新基因的发现，并获取基因组中与产业化关系最为密切的信息。20世纪80年代，高通量的自动测序的出现，使从质粒互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA)文库随机选取许多cDNA克隆和决定来自非载体两端的几百个碱基的DNA序列成为可能。这些短的DNA序列叫做“表达序列标签”(Expressed Sequence Tags，简称ESTs)。表达序列标签的概念最早是由Adams等在1992年提出来的(Nature，355,642-644)。1992年Sikela和Matsubara(Sikela，et al.Nucleic Acids Res.19，1837-1843；Matsubara，etal.Nature Genetics，2,173-179)针对获得大量信使核糖核酸(mRNA)序列的迫切需要，提出大规模互补脱氧核糖核酸(cDNA)测序的研究战略。随后Venter创立了大规模表达序列标签技术。其基本特征就是从以质粒为载体，构建完成的目的组织互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA)文库中，随机选择许多cDNA克隆，利用质粒上携带的通用引物对cDNA两端进行一轮脱氧核糖核酸序列测定，所获得的来自3’端或5’端的几百个碱基的非载体短脱氧核糖核酸(DNA)序列。简而言之，表达序列标签是来自表达基因片段3’端或5’端的短脱氧核糖核酸序列，代表一个表达基因的部分转录片段。

表达序列标签可用于新基因克隆、人类基因组图谱绘制、基因组序列编码区的确定等。如果一个表达序列标签在基因组中只出现一次，那么它可以作为序列标签位点(STS)。由表达序列标签构建的物理图谱叫表达图或转录图(expression or transcript map)。利用表达序列标签进行基因图制作，可以加快序列标签位点的制作和新基因的染色体定位。表达序列标签可以作为基因特异性探针，对组织特异性基因表达的研究具有重要的作用。表达序列标签还可以进行新基因的遗传进化关系分析。表达序列标签可以对所有动植物的基因作为一种数据库，通过不同的序列比较可以获得保守序列片段，从而获得基因的遗传进化图谱。

由本发明的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝癌中的特异表达相关基因，从而在研究肝癌的致病机理以及开发治疗肝癌的药物中发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一类在人类肝癌中特异表达的表达序列标签。

本发明的上述目的是通过如下技术方案来实现的：

本发明提供了一类分离出的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签的序列，其包括：

(a)SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列；

(b)SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列中每条序列的互补序列；

(c)与SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列中每条序列有至少70％同源性的序列，及

(d)上述(a)～(c)中一条或数条的组合。

本发明还提供了一种探针分子，所述的探针分子含有上述序列中约8-100个连续的核苷酸。

由本发明的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签，可以方便的寻找出在人类肝癌中特异表达的相关基因，从而在研究肝癌的致病机理以及开发治疗肝癌的药物中发挥重要作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

人肝癌组织的mRNA的分离

组织分离(Tissue isolation)：肝脏来源于5个成年男性肝癌患者，在肝癌切除手术后，将肝癌组织和癌旁组织立即置于液氮中冷冻保存。

mRNA的分离(mRNA isolation)：取出组织，用研钵研碎，加入盛有裂解液的50ml管，充分振荡后，再移入玻璃匀浆器内，匀浆后移至50ml新管，抽提总RNA(TRIzol Reagents，Gibco，NY，USA)。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量。用带Oligo d(T)的纤维素柱分离总RNA中的mRNA，定量。

实施例2

cDNA文库的构建(Constuction of cDNA library)

以mRNA为模板，合成双链cDNA。补平末端后，加含EcoRI切点的接头。磷酸化EcoRI末端后，用XhoI限制性内切酶消化1.5小时，再进行片断分离。过柱筛选长度＞500bp的片段，用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，无菌水溶解，连接至Uni-ZAP XR载体(Strategene，CA9203，USA)，以ZAP-cDNA Gigapack III GoldCloning Kit(Strategene，CA9203，USA)进行包装，宿主菌使用XL 1 Blue MRF’(Strategene，CA9203，USA)细菌。涂板并测定滴度。

实施例3

测序及数据库建立(Seqencing and Database Constructing)

挑选文库中有外源片段插入的克隆，扩增后抽提质粒(Qiagen Germany)，用T3和T7作为3’和5’端的通用引物，采用终止物荧光标记(Big-Dye，Perkin-Elmer，USA)的方法，在ABI 377测序仪(Perkin-Elmer，USA)上进行EST大规模测序。从中可获得本发明的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签。测序结果用FACTURA软件去除载体序列，传输到SUN Ultra 450 Server上进行下一步的处理。所有的序列信息再用GCG软件包(Wisconsin group，USA)中的BLAST和FASTA软件搜索已有的数据库(Genebank+EMBL)，将无同源性或同源性低于95％的序列视为新基因建立数据库。

实施例4

基因的全长克隆(Cloning of Full-length cDNA)

在得到的新基因片段序列信息基础上，进行cDNA全长克隆，分两阶段进行：

(1)“电子克隆”(Electronic Cloning)

以新基因片段序列作为探针搜寻dbEST数据库，将重叠序列)50bp，同源性在98％以上的表达序列标签(Expressed Sequence Tag，简称“EST”)序列认为同一序列(Consensus Sequence)，取出并用AUTOASSEMBLER软件进行连接，部分EST可以延伸探针序列。再用STRIDER软件分析被延伸的序列是否具有完整的开放阅读框架(Open Reading Frame，ORF)，用BLAST搜寻Genbank或SwissProt以确定该序列的核苷酸和氨基酸水平上是否与其他物种有同源性，以帮助判别所得到的基因全长完整性如何。通过电子克隆的方法，通常可获取人肝癌相关基因的全长序列。

(2)cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE)

如果通过“电子克隆”方法仍未得到完整的cDNA全长，则在已有序列5’或3’端设计引物，在人类肝脏Marathon-Ready cDNA文库(Clontech Lab，Inc，USA)中进行长距离PCR反应。然后对PCR产物克隆、测序。用AUTOASSEMBLER及STRIDER软件分析被延长的序列有无完整的ORF，如无，重复上述过程直至获得全长。

(3)RT-PCR

对于5’和3’端的已知的序列，如果中间有一段间隙(gap)无法从已有的公共数据库或自身数据库获得，可考虑采用RT-PCR的方法。在序列5’端设计引物，3’端引物采用Oligo-dT，在肝脏总RNA库中进行扩增。然后对产物进行克隆、测序。最后拼接便获得全长。

通过组合使用上述3种方法，可获得人肝癌相关蛋白的全长编码序列。

                                      序列表

<110>上海人类基因组研究中心

<120>一类新的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签

<130>NP-1239

<160>34

<170>PatentIn version 3.2

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caggagttca tgagaaatag catgaaaagc ttgggatgct tattccatgg aacttaagac   420

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caaagagcac atcatagatg tggtttgtag tttgtagacc caaaaaaaaa aaaaaaaaaa   540

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                               560

<210>9

<211>838

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>9

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tcctggatta cacactttac taaagtacag tgctcaaatt gataagatgc agccaaattt   240

ctactcactt tgtgctgtgt agaccctgct agtttcctgt gcctattcta gaagctgtgg   300

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aatgacataa aggagctgca caaatggaaa gcaaataaaa ggcctataat taaagccagt   780

gtattatttc gactgaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa     838

<210>10

<211>838

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>10

gaggcggccg ctctagaact agtggatccc ccgggctgca ggaattcggc acgaggactt   60

attgaattgt ccacttaaaa ttggtccatt ttcttccata taaattacac ctcagaaaag   120

ttaatttctt aaagcaaaaa atacgaaatt aaacaaagaa aaagaaacta ttgtaattaa   180

tcctggatta cacactttac taaagtacag tgctcaaatt gataagatgc agccaaattt   240

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tagtctagtc tctgaataca tacatgtgta tatatatgta tgaacatgtg tgtgcatata   600

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aatgacataa aggagctgca caaatggaaa gcaaataaaa ggcctataat taaagccagt   780

gtattatttc gactgaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa     838

<210>11

<211>1049

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>11

gctacaccgc ggtggcggcc gctctagaac tagtggatcc cccgggctgc aggaattcgg   60

cacgagctcg agtttttttt tttccaataa ggagcaacat ggataagttt aagctactct   120

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gattactaca caaaaaaaaa aaaaaaaaa                                     1049

<210>12

<211>951

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>12

cttcctaaaa gctggacgtc caccgcggtg gcggccgctc tagaactagt ggatcccccg   60

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<210>13

<211>2144

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>13

aaaactagtg gatcccccgg gctgcaggaa ttcggcacga ggggaccagg ctgtgtgctt   60

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gattttgtcc gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa                    2144

<210>14

<211>1017

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>14

agactgggac tcccccgcgg tggcggccgc tctaactagt ggatcccccg ggctgcagga   60

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tgtacagaac cctaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa      1017

<210>15

<211>1751

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>15

ggcggccgct ctagaactag tggatccccc gggctgcagg aattcggcac gagctagtct   60

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<210>16

<211>1884

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>16

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ttgcatccgg atcctttcca gacagaagac cccttcaaat ctgacccatt taaaggagct   960

gaccccttca aaggcgaccc gttccagaat gacccctttg cagaacagca gacaacttca   1020

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ttctgtaaga aaaacagttt ctcaataaaa aaaaaaagag ccgcaaaaaa aaaaaaaaaa   1860

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa                                          1884

<210>17

<211>670

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>17

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gaattcggca cgagagctgg aacatttttg aaatgctgaa agaaaagaac tatcaacttg   120

gaatcccata cctggtgaaa caatccttca ggaattgggg ggaagggctg tgggggagga   180

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tatagggatt actaaaggca attctctaaa caaagggagt ggtaacaaaa ggaatcttgg   300

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ctttttcctc ttgagtattc taaattatgt tcaacagttg aagcaaaaat tacgcttgtc   420

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<210>18

<211>1019

<212>DNA

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<400>18

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aaaatgcaac agcgaaagac attgccccta ctttaacact ctatgtgggg aaaaagcagc   300

ttgtagagat tgagaaggtt gttctacacc ctaactactc ccaggtagat attgggctca   360

tcaaactcca aacagaaggt gtctgttaat gagagagtga tgcccatctg cctaccttca   420

aaggattatg cagaagtagg gcgtgtgggt tatgtttctg gctgggggcg aaatgccaat   480

tttaaattta ctgaccatct gaagtatgtc atgctgcctg tggctgacca agaccaatgc   540

ataaggcatt atgaaggcag cacagtcccc gaaaagaaga caccgaagag ccctgtaggg   600

gtgcagccca tactgaatga acacaccttc tgtgctggca tgtctaagta ccaagaagac   660

acctgctatg gcgatgcggg cagtgccttt gccgttcacg acctggagga ggacacctgg   720

tatgcgactg ggatcttaag ctttgataag agctgtgctg tggctgagta tggtgtgtat   780

gtgaaggtga cttccatcca ggactgggtt cagaagacca tagctgagaa ctaatgcaag   840

gctggccgga agcccttgcc tgaaagcaag atttcagcct ggaagagggc aaagtggacg   900

ggagtggaca ggagtggatg cgataagatg tggtttgaag ctgatgggtg ccagccctgc   960

attgctgagt caatcaataa agagtttttt tgaccctttt taaaaaaaaa aaaaaaaaa    1019

<210>19

<211>940

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>19

gaaaggctga agaagcagaa acagggaacg aaaggtagat tggcgtttca gagttacttc   60

ccttgcaggg ttaaagcatg ggggacttcc tcatcaaacc tgctcaggta aactgggccc   120

cttctgatta gctgctgtgc atctcctatt tttttgaaaa gctgcccttt ttaaagttcc   180

gttggacagc ctggcaccta gcaggagtga ctccattctg gtttggtctg gtccgttggg   240

cctagtgtaa gagttcagtc ctcccataaa ttttatttaa gattattctt gaactactat   300

tctccttgct attcatgggc tttcccaatt accaatataa cagagcctgt tctgaatcat   360

ccataatcca atccttcgca tagcatatat tctgcactct gaaaatatgt ggtgagtggg   420

tgggtgagag agtgagttca ccgacccgac cgataaatcc caagcatgga gggtagaaag   480

ggccctctga catcagacgg aaccaagttt acatgcaggc tcctttatgc ccagtttgtg   540

tgaatttaag gaagttatct gagtctcttc aacctgtagt tccatcctct gtcaaagatg   600

gatactgaaa ggctgttgca ttattttggg ggagggttac acacaatgct gtgtgtgcgt   660

gtgtgtgtgt gtgtgtgtat gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gaatagcaag tccagaacat   720

cccagtttgc atgggactgt ccaggtttta gccctgattg tatgggactg tccaggtttt   780

agccctgatt gtcccgcatt ctgggaaact tcagtcgccg gtgaactgca attgttgtta   840

ccttgtcccc ttccctaagc ccataaaact gttttgggtt gttactatcc attaaaaagg   900

aagtgctgac ttccaaactc tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa                         940

<210>20

<211>1204

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>20

tcccccgggc tgcaggaatt cggcacgagg aactcctggc ctcaagggtc ctcctgcctc   60

ggcctcccag agtgctggga ttacaggtat gaggcactgt gcccagctgg ctctttaatc   120

tttactatta gactgatttt catatgacac agtaggcata gggctctttt agttactagt   180

gattccaaaa gtgactttaa tcccattact caggatctct atggtactgt caattagatc   240

ttcctcattt ttgcaacatg tttacgtagc attaatgata ttattgtttc ataagtgaga   300

aaatgaagac acagaaggat aaaatagttt gttgcatcag cttgcgggca taataagcaa   360

cctttcttct ctctgttaat tctgttttgt aggccagtat aatggcttta gtgtcactgt   420

tgttaaggag tttttgatgg gttgtttcta ttttcttttt gagatgtgaa ctgtccagat   480

taattctaat ctataacttt tgggaaaagt atattgatat acatgttaga atgtgtgtgt   540

gtatgtgtgt gtgttgtgtg tatgtagtaa aatgataacc tttagctttg gttttcaata   600

agaattttaa aatttattac aattagaaaa tttttcctcc agtttttatt cagttgtcct   660

ttttcccttt ggaaatagtg gacctgaccc aattcttttt tgagaattca tttcatagag   720

cagcgtgtta gaatattttt gttcttctaa tcaagtgcag tgtaagaact gagacatcca   780

taatttcttt tctatccctt gggttaagat attaaccttt attactatat ttaactgggc   840

ttggaatagc aaggcataat ctgaggagca tagctacttc atctgtgtaa taaattgctc   900

tttcactaca aacattttaa tactgatttt gttggtcatt taactttcta atagtggtcc   960

ttaaattatg ctctaaaaga agaataccat atatattgga aattaaattt gttgttgaat   1020

aaaattagaa ttattataaa attcaacacg accttattgc tacctcagga taatttcttg   1080

gcaaaaagtt gatccaaact gggtgtggtg gctcatgcat gtcatcccag cacctgggag   1140

gctgagacag aaggattgct tcagcccagg agttccctga tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa   1200

aaaa                                                                1204

<210>21

<211>614

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>21

ggccttccac cgcggtggcg gccgctctag aactagtgga tcccccgggc tgcaggaatt   60

cggcacgaga ggaggaacat gaggtggctg tgctgggggc accccccagc accatccttc   120

caaggtccac cgtgatcaac atccacagcg agacctccgt gcccgaccat gtcgtctggt   180

ccctgttcaa caccctcttc ttgaactggt gctgtctggg cttcatagca ttcgcctact   240

ccgtgaagtc tagggacagg aagatggttg gcgacgtgac cggggcccag gcctatgcct   300

ccaccgccaa gtgcctgaac atctgggccc tgattctggg catcctcatg accattggat   360

tcatcctgtg actggtattc ggctctgtga cagtctacca tattatgtta cagataatac   420

aggaaaaacg gggttactag taccgcccat agcctgcaac ctttgcactc cactgtgcaa   480

tgctggccct gcacgctggg gctgttggcc ctgccccctt ggtcctgccc tagatacagc   540

agtttatacc cacacacctg tctacagtgt cattcaataa agtgcacgtg cttgtgaaaa   600

aaaaaaaaaa aaaa                                                     614

<210>22

<211>1363

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>22

aactggagct ccaccgcggt ggcggccgct ctagaactag tggatccccc gggctgcagg   60

aattcggcac gagggagccc ccagtgccct gtggtggtgg acaccatgca gaaccagagc   120

agccagctct acgcagcact gcctgagagg ctctacataa tccaggaggg caggatcctc   180

tacaagggta aatctggccc ttggaactac aacccagagg aagttcgtgc tgttctggaa   240

aagctccaca gttaatctgg acagatacct caattctagg tgaccaacgg gagggcttct   300

caaggcttag ctctccctga gacccagctg gcttttaccc ttgacctggt gtccctacct   360

gaatcactag ctcagatttt tctgatctaa gcaaacaact cccagctgag gaatgcaggc   420

cacagcaccc aatcaagaca aattgttatt atcagaaaat gaagcaacac ttgagctgtt   480

caggccagtt ccctgttgaa gaaacagttc cctgttgaag aaagtagagc ctgacactgc   540

tcccactttg gagaccacat tccctgcaca cggtctttga gagagcagtt gcactctaca   600

ggcacacttc tgaggtacgg tatctctctc cagccactct gatacaagta attcaagctg   660

gcattccttc tattaggaaa ttcattttac ccaatttgca tttatggaat tgatcattta   720

agacactaaa ttagttttta gaaccaatta tgggaagaat tccagttgtt aggaagagat   780

gaggagttgg aagaggaggg attagaaaca ggaggaggca gtcatcctct ccttgccaaa   840

agatttaaac ctgtccacat tggtggtgat gatgggtgag tttccatggt aacacatccc   900

taattttacc agggaagagg agagtactca ctttaccatc tttgaatata tttcatagaa   960

atctagctct ctgtaccctg aaatcttcca ctagcctcac ttttcaacag agtcatctag   1020

aagggagggt tggcttccca aaagcataac cttgaccaaa ccaaacaata ggcaccagca   1080

atgctgtcat tcagttatgc agaagctcat ttgtgaaatt ctgtttctct gatttcttcg   1140

caagtctctt aatggtcatt tgtgttagat tacatcaaac tgatggatag ccattggtat   1200

tcatctattt taactctgtg tctttacata tttgtttatg atggccacag cctaaagtac   1260

acacggctgt gacttgattc aaaagaaaat gttataagat gcagtaaact aataacagaa   1320

ttattaaaat atatcaggct aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa                     1363

<210>23

<211>1990

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>23

caggggcggg aaacactgac cacagaagac aagttgagct gtatattctt tgagatactt   60

gagatctttc tggttcatgc cctcatctgg aaaatggaaa taataacatc tctgcatggg   120

agatgacaaa gtgtgggtac aatgcctacc acactgtagc tactcaagaa atggaagtca   180

caatcattct catgccacca gcctactgag cagatcaatg ttctggtgat gttctgcatc   240

cagaccatct ttcaagaact gaatggttac taccctgggt cttctaccga aagaaagaac   300

atgggtgtgg gcattcaagt atagcctcta aaaaaagaac acataagtgg ttgctgggtg   360

ctgttatata atcacacaca tacaaggctt aaatcatgaa tatttccttt ttgaagggga   420

aaaaaagcaa aaatccaatt gtgtagagtt ttaggacaag aatattatat gaagaaaata   480

tagctccaag agatagtggc tgaaagggca gaattagaga agcagaagaa gcaagaagtt   540

accgcaaagg cttccaaaaa taaaatagga tgatacgccc aagaaaacaa aggctacttt   600

tgctaagtca ggggtgagag aaaataatga aagatgcaaa gaagaatgac tatggagcta   660

ctattttgtc tcagccttta gcacaaagaa cgaaggaagc aggagctcag taagataaat   720

attaatgagt ctctgggaat atcaagaaac agaattaata agaggcaggt aaaagaatac   780

ttatacaatt taaatattta taaatcagta cagctgggtg agattcattt gacaaattca   840

aagaaccagc taaggcagga catacctgca atactagtgt ttgtcataga gagttatgta   900

ccagggaaat ttaagcaggc tgatttaatg ttggagctta agcagcccaa agcagataca   960

ggaaaaggtg ggctagttag cgcatccaaa ctaccagtca aaactctaaa tgaaatcata   1020

aatcagtcca tgagcatctt cagaaaaata acatagtaag tcatagccaa agaggttcat   1080

aaaaaacaga gcctgtcaaa gcaacttaat ccattttttg gaaatgctaa gaaatttgga   1140

ttatagacat agtttacaga ggccctgcag atgccaccag acaactcaat ttgaacccat   1200

cttggtgatg gaatggctgt tactctcact gtttccaaca gagaagggca atttcacctg   1260

cacatttaat acacagggat agggttctct gttcattccc catcatagcc caggacagag   1320

ttaatttagt tcttagctaa atagagtcag tgcccagaag tatccaaatg agaatgaaat   1380

atattgataa ttctgttatc caaatgagag tgaaagataa tgataatttg gagcaaactg   1440

gactaacatt ttcagaaaaa acaatatata tatgtgtatg tgtatgtctg caattatcag   1500

gataattcaa ggaaaacaaa tactattgct cgaattgatc atataattat ggaaaatata   1560

agaagatgtg aaaacaaagg ccctttataa aatacaaaga cctgaccggg tcaccaggct   1620

tgctgaaact gttcaatgac ttcccagggt tttaggccag aaccctcagc ctccttcaag   1680

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cctgggcaag ccagctcctc tgcccttctt tcagctcttg caagacttcc tcttgttttt   1800

gccactgagc ctttgcacat gctgcccttg cttttactta ccctagctac ttattctata   1860

gtttttactc aaatcccact ttgggaggta aacctttttt acctcccaga acataatatt   1920

ttcatagtat ttggctctaa taaaaccaat tttttttccc agaaaaaaaa aaaaaaaaaa   1980

aaaaaaaaaa                                                          1990

<210>24

<211>969

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>24

ctgccacata aatcctctgc gggagatgat gacaattcac tgctgattaa tgccattctg   60

cctttactgt aattagaagg aaataacccc agcaatacaa ggtaatttag caagataagg   120

aacccctgct gctacctaaa catccatcta aacaaagatg tttggctttt gaagcaaaga   180

gtttggttct taagactgtg ttctttgaca gttaattttc aagaagactg aagactgaat   240

tatcattgtt gagaattctc taggtctcag taaccctctg aaccagcagt ttgggtggtc   300

gatgcccagc aaataggagt gggtggcctt ttctctggtg tataagattc atctaatttt   360

taggaatttt tgtaccattt tccccctcta gaaacacatt tactccccaa taattgtacg   420

ggaggtgatc gaggaagaag aaccaagtga aaaatcagag gccacctaca tgaccatgca   480

cccagtttgg ccttctctga ggtcagatcg gaacaactca cttgaaaaaa agtcaggtgg   540

gggaatgcca aaaacacagc aagccttttg agaagaatgg agagtccctt catctcagca   600

gcggtggaga ctctctcctg tgtgtgtcct gggccactct accagtgatt tcagactccc   660

gctctcccag ctgtcctcct gtctcattgt ttggtcaata cactgaagat ggagaatttg   720

gagcctggca gagagactgg acagctctgg aggaacaggc ctgctgaggg gaggggagca   780

tggacttggc ctctggagtg ggacactggc cctgggaacc aggctgagct gagtggcctc   840

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aagaatcaga gataaaaacc aacccaaatc aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa   960

aaaaaaaaa                                                           969

<210>25

<211>2215

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>25

ttccccggct ctagcaggcc ggcttctctg tccaatgccc acccggagct gggaggagga   60

gtctgcgtaa tgtgcgtgtg aagagactgg gggagctggc cggggctcac ggtgtttgac   120

ccgtcggtcg tgcgtgagag gaaagggaag gaggaggtcc cgaatagcgg tcgccgaaat   180

gttccggtgt ggaggcctgg cggcgggtgc tttgaagcag aagctggtgc ccttggtgcg   240

gaccgtgtgc gtccgaagcc cgaggcagag gaaccggctc ccaggcaact tgttccagcg   300

atggcatgtt cctctagaac tccagatgac aagacaaatg gctagctctg gtgcatcagg   360

gggcaaaatc gataattctg tgttagtcct tattgtgggc ttatcaacag taggagctgg   420

tgcctatgcc tacaagacta tgaaagagga tgaaaaaaga tacaatgaaa gaatttcagg   480

gttagggctg acaccagaac agaaacagaa aaaggccgcg ttatctgctt cagaaggaga   540

ggaagttcct caagacaagg cgccaagtca tgttcctttc ctgctaattg gtggaggcac   600

agctgctttt gctgcagcca gatccatccg ggctcgggat cctggggcca gggtactgat   660

tgtatctgaa gatcctgagc tgccgtacat gcgacctcct ctttcaaaag aactgtggtt   720

ttcagatgac ccaaatgtca caaagacact gcgattcaaa cagtggaatg gaaaagagag   780

aagcatatat ttccagccac cttctttcta tgtctctgct caggacctgc ctcatattga   840

gaatggtggt gtggctgtcc tcactgggaa gaaggtagta cagctggatg tgagagacaa   900

catggtgaaa cttaatgatg gctctcaaat aacctatgaa aagtgcttga ttgcaacagg   960

aggtactcca agaagtctgt ctgccattga tagggctgga gcagaggtga agagtagaac   1020

aacgcttttc agaaagattg gagactttag aagcttggag aagatttcac gggaagtcaa   1080

atcaattacg attatcggtg ggggcttcct tggtagcgaa ctggcctgtg ctcttggcag   1140

aaaggctcga gccttgggca cagaagtgat tcaactcttc cccgagaaag gaaatatggg   1200

aaagatcctc cccgaatacc tcagcaactg gaccatggaa aaagtcagac gagagggggt   1260

taaggtgatg cccaatgcta ttgtgcaatc cgttggagtc agcagtggca agttacttat   1320

caagctgaaa gacggcagga aggtagaaac tgaccacata gtggcagctg tgggcctgga   1380

gcccaatgtt gagttggcca agactggtgg cctggaaata gactcagatt ttggtggctt   1440

ccgggtaaat gcagagctac aagcacgctc taacatctgg gtggcaggag atgctgcatg   1500

cttctacgat ataaagttgg gaaggaggcg ggtagagcac catgatcacg ctgttgtgag   1560

tggaagattg gctggagaaa atatgactgg agctgctaag ccgtactggc atcagtcaat   1620

gttctggagt gatttgggcc ccgatgttgg ctatgaagct attggtcttg tggacagtag   1680

tttgcccaca gttggtgttt ttgcaaaagc aactgcacaa gacaacccca aatctgccac   1740

agagcagtca ggaactggta tccgatcaga gagtgagaca gagtccgagg cctcagaaat   1800

tactattcct cccagcaccc cggcagttcc acaggctccc gtccaggggg aggactacgg   1860

caaaggtgtc atcttctacc tcagggacaa agtggtcgtg gggattgtgc tatggaacat   1920

ctttaaccga atgccaatag caaggaagat cattaaggac ggtgagcagc atgaagatct   1980

caatgaagta gccaaactat tcaacattca tgaagactga agccccacag tggaattggc   2040

aaacccactg cagcccctga gaggaggtcg aatgggtaaa ggagcatttt tttattcagc   2100

agactttctc tgtgtatgag tgtgaatgat caagtccttt gtgaatattt tcaactatgt   2160

aggtaaattc ttaatgttca catagtgaaa taaattctga ttcttctaaa ttaaa        2215

<210>26

<211>839

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>26

ccctcctgcg atcgcagccc agcgcgtggc gggcgcgcta aaataatgtg attccccggg   60

ctgcaggaat tcggcacgag gaaaaaagaa agagaaaggg gaaggaataa gccggaatgc   120

cttttgtgaa caagattcga aacttacaca cttctgccac actttttaaa cgttatttat   180

ttatttctta gagacagagt cttgctccgt cacccaggct ggaatgcagg gacctgatct   240

tggcttactg caccttggaa ctcctgagct caagcaatcc tgcctcagac tcccaagtag   300

ctgagactac aggtgtgagc catttcctcc ggcacatgtt attcaatata aacaagtcac   360

tgaaatctgg cacataccca gaagtagaat taagctacac cctttcagat aagaatagta   420

aaagaactta ttgaaatatt ccaaagccaa aaatgtggac attgacccca actgcaaaaa   480

tacctcagca aattccaaag tcttgaagac ttctgagtag atccccccgt gggtgaggag   540

gccaaccaca agcaacactc agtggtagca ggaggtggca ggcgtgaggg caggaagcag   600

tgcccctctc agtctcccag cagacctgcc accatgatca gccagccctc tataccaccc   660

actggccagc ccatcctgga agatgccaag tggacaagcc agcactcaga cacacagatt   720

tgggaaagtg aaaaaccatt tagccctggg gcttgaggca gggaaaggga tgggatgggc   780

aagaagtgca tggccatgcc cagtcccagg aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa    839

<210>27

<211>615

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>27

gctggacttc accgcggtgg cggccgctct agaactagtg gatcccccgg gctgcaggaa   60

ttcggcacga gctggggcgt agcctccttt ctccagaaag gaaatgatga ccactggatc   120

gtcgacacag actacgacac gtatgccgtg cagtactcct gccgcctcct gaacctcgat   180

ggcacctgtg ctgacagcta ctccttcgtg ttttcccggg accccaacgg cctgccccca   240

gaagcgcaga agattgtaag gcagcggcag gaggagctgt gcctggccag gcagtacagg   300

ctgatcgtcc acaacggtta ctgcgatggc agatcagaaa gaaacctttt gtagcaatat   360

caagaatcta gtttcatctg agaacttctg attagctctc agtcttcagc tctatttatc   420

ttaggagttt aatttgccct tctctcccca tcttccctca gttcccataa aaccttcatt   480

acacataaag atacacgtgg gggtcagtga atctgcttgc ctttcctgaa agtttctggg   540

gcttaagatt cagaatctga ttcattaaac tatagtcacc ccgtgaaaaa aaaaaaaaaa   600

aaaaaaaaaa aaaaa                                                    615

<210>28

<211>1100

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>28

ggcggccgtt ctacaactag tggatccccc gggctgcagg aattcggcac gagctacagt   60

tgaaaccctc acaccacgca ggaagaggtc atcatcatgt cggacgattt cttatggttt   120

gaaggcatag ctttccctac tatgggtttc agatccgaaa ccttaagaaa agtacgtgat   180

gagttcgtga taagggatga agatgtaata atattgactt accccaaatc aggaacaaac   240

tggttggctg agattctctg cctgatgcac tccaaggggg atgccaagtg gatccaatct   300

gtgcccatct gggagcgatc accctgggta gagagtgaga ttgggtatac agcactcagt   360

gaaacggaga gtccacgttt attctcctcc cacctcccca tccagttatt ccccaagtct   420

ttcttcagtt ccaaggccaa ggtgatttat ctcatgagaa atcccagaga tgttttggtg   480

tctggttatt ttttctggaa aaacatgaag tttattaaga aaccaaagtc atgggaagaa   540

tattttgaat ggttttgtca aggaactgtg ctatatgggt catggtttga ccacattcat   600

ggctggatgc ccatgagaga ggagaaaaac ttcctgttac tgagttatga ggagctgaaa   660

caggacacag gaagaaccat agagaagatc tgtcaattcc tgggaaagac gttagaaccc   720

gaagaactga acttaattct caagaacagc tcctttcaga gcatgaaaga aaacaagatg   780

tccaattatt ccctcctgag tgttgattat gtagtggaca aagcacaact tctgagaaaa   840

ggtgtatctg gggactggaa aaatcacttc acagtggccc aagctgaaga ctttgataaa   900

ttgttccaag agaagatggc agatcttcct cgagagctgt tcccatggga ataacgtcca   960

aaacactctg gatcttattt ggagaatgac attgattctc ctgtccttgt acatgtacct   1020

gactggggtc ttggtgtaag acttattatt ttatcctgaa accttaatat caaaccctgc   1080

tctctaaaaa aaaaaaaaaa                                               1100

<210>29

<211>242

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>29

cgcggtggcg gccgctctag aactagtgga tcccccgggc tgcaggaatt cggcacgagc   60

cgtcatctac tctaccatct ttgcaggcac actcatcaca gcgctaagct cgcactgatt   120

ttttacctga gtaggcctag aaataaacat gctagctttt attccagttc taaccaaaaa   180

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa   240

aa                                                                  242

<210>30

<211>1897

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>30

aaactcagaa aacaattaac tggccagcaa gcatgctaaa agggaaaaga gaatccaaaa   60

atttcagtag ctacagtata gaaagatgca actctcataa caaaaaggta agaaaaaaat   120

caagaaatgc tttgagaaac aatgacaaat aattaaggca accttaaagc aaaagccaac   180

ttgagggcat gccaatctta ttatttgcta tagcctctga ataatttcag ttgattcatg   240

ataaatcctt tcaattgact aaaatggctt agtgaaaata aactaatagt gagcttcttt   300

cacattatcc ttataaatta aacataatga gaatgaaatt tatagaacat atctttaatc   360

tttaaaatac tctatacttt ttgatgtgtc tattggcatg tagaaaaaat tgccatcaag   420

taggtaaaaa gccaaaaaaa aatctttttt cagtgaattg cactgccaaa tgaaccatca   480

gctaaaaatg aaagactgtt attatcaaat tttaaaataa ctcttggatt cctaaacttc   540

tacaggcaaa aacaggttga gacattaact tattccaata gaggatatag tctccttttc   600

agatgtggcc aagaaggata ctgaacttca agggaagagc caagattcaa aaagaatgga   660

tggaggtcct cctcctatgc agtagaagtt ttactttcaa gaaaatgctt ttcatccaac   720

atagaagact cttgcaaata tctgtatttc ttggtttcag aatttttaca taccagtaat   780

ggcaatgttc ctcctattct ttccttttct caaaggaagt gtttattgtc ataaatatgt   840

ccttgtttct ccattatatc ttaaggatgg agacataacc ttccatttta ttcacatatc   900

tttagactaa gaaaagtgat atgtaaaaca tatttaaaat tgtggacatt aagtgaatat   960

tgaggtatct ttgtatcttt cttagtgatg gggcgaatga tgttgaataa aaaaggaagg   1020

aaacttaata tctgttacca agatagtaga ttctggtata ttagagtatt agataagact   1080

atgtatgaga gtgttgctcc cattatatat ccacctcacc tgactgtagg aatattgtat   1140

ttatgtttct tccttttctt aaaaaatggc attctttcta tctgaatact gaaattaacc   1200

agacatgtgg agcagagcca gagctgacct accactgctg cagatcatat caagtgagag   1260

tgagaaatat ttctgttgca aatcattgag tttgttaaag tcgtttgtta ccacagtaag   1320

aactaacaca cccgctcaat ttcaaactca ttttttcaca attcctttta atttgatctt   1380

tattttttta ttaatgtgat ttttctccta gtacatatta ctttcaacat ccaatatagt   1440

ttatgcattt ataatggtta ttgtgaactg tatgaccatt ttattagatt ataagccata   1500

agaagtcagg gattctttca cattttgttt ggtaatgtat ctggagtaca aaaagcaaaa   1560

tatggactta aatatttgta gaatgaatga atcatgctgt cataaaactt gtggcaaata   1620

aatgctaggg aaaaaatttg gaattaagct catcctgtag aggtaaccta tattaaaaat   1680

ttgaaaattc taacacatag caacagttat cacgaatgtt attggtggag ggatagaaaa   1740

atagatcaat gaaacagaat aaagaaacca aaaatagatt tttgcttaac cgatttttga   1800

aaacaggtgc aaaggtaatg aaatggtagc agcatagcct tttcaaaaaa tggtgctaga   1860

agaaatgtac tctagaggca aaaaaaaaaa aaaaaaa                            1897

<210>31

<211>499

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>31

cgcggtggcg gccgctctag aactagtgga tcccccgggc tgcaggaatt cggcacgagg   60

acttgctggc cctggggcct tctttgcctt ggcagcgacc cagtgtggca gaatgcaatg   120

ttctggtttg gggtctcaag ctaagggctg gtgaggaagg ctgcggaagt ataaatcttc   180

aaagtgaata tgtcccaaag gggctggaga gttgcaccaa cctttagggt cttgatttcc   240

ctcagtggtt cctacatttc atgtaactgt tttctataat tttttttgca cttttaagag   300

actttttatg taaatgaatt tataggttaa tgaaaaattt ttgtcataac atatatccca   360

acttttggtt cagaaaatgt ggccaccatg cccactggga aatgttggga tctccatgaa   420

agaggtggct ggatgaaaaa gctcatggct tgaaggtggg aaagaaaaaa aaaaaaaaaa   480

aaaaaaaaaa aaaaaaccc                                                499

<210>32

<211>1075

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>32

ccaacgcggt ggcggccgct ctagaactag tggatccccc gggctgcagg aattcggcac   60

gagaaaacta tgctgaggca aaggatgtct tcctgggcat gtttttgtat gaatatgcaa   120

gaaggcatcc tgattactct gtcgtgctgc tgctgagact tgccaagaca tatgaaacca   180

ctctagagaa gtgctgtgcc gctgcagatc ctcatgaatg ctatgccaaa gtgttcgatg   240

aatttaaacc tcttgtggaa gagcctcaga atttaatcaa acaaaattgt gagctttttg   300

agcagcttgg agagtacaaa ttccagaatg cgctattagt tcgttacacc aagaaagtac   360

cccaagtgtc aactccaact cttgtagagg tctcaagaaa cctaggaaaa gtgggcagca   420

aatgttgtaa acatcctgaa gcaaaaagaa tgccctgtgc agaagactat ctatccgtgg   480

tcctgaacca gttatgtgtg ttgcatgaga aaacgccagt aagtgacaga gtcaccaaat   540

gctgcacaga atccttggtg aacaggcgat catgctttca gctctggaag tcgatgaaac   600

atacgttccc aaagagttta atgctgaaac attcaccttt ccatgcagat atatgcacac   660

tttctgagaa ggagagacaa atcaagaaac aaactgcact tgttgagctc gtgaaacaca   720

agcccaaggc aacaaaagag caactgaaag ctgttatgga tgatttcgca gcttttgtag   780

agaagtgctg caaggctgac gataaggaga cctgctttgc cgaggagggt aaaaaacttg   840

ttgctgcaag tcaagctgcc ttaggcttat aacatcacat ttaaaagcat ctcagcctac   900

catgagaata agagaaagaa aatgaagatc aaaagcttat tcatctgttt ttctttttcg   960

ttggtgtaaa gccaacaccc tgtctaaaaa acataaattt ctttaatcat tttgcctctt   1020

ttctctgtgc ttcaattaat aaaaaatgga aagaatctaa aaaaaaaaaa aaaaa        1075

<210>33

<211>852

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>33

ccttaaagct ggagctccac cgcggtggcg gccgctctag aactagtgga tcccccgggc   60

tgcaggaatt cggcacaggc gtggttgggg gccatccggg caactcaccc tggacagtca   120

gcttgcggaa tcggcagggc cagcatttct gcggggggtc tctagtgaag gagcatggat   180

actgactgcc cggcagtgct tctcctcctg ccatatgcct ctcacgggct atgaggtatg   240

gttgggcacc ctgttccaga acccacagca tggagagcca agcctacagc gggtcccagt   300

accaagatgg tgtgtgggcc ctcaggctcc cagcttgtcc tgctcaagct ggaagatctg   360

tgaccctaac cagcgtgtgg ccctgatctg cctgccccct gaatggtatg tggtgcctcc   420

agggaccaag tgtgagattg cagctggggt gagaccaaag gtacgggtaa tgacacagtc   480

ctaaatgtgg ccttgctgaa tgtcatctcc aaccagagtg taacatcaag caccgaggac   540

gtgtgcggga gagtgagatg tgcactgagg gactgttggc ccctgtgggg gcctgtgagg   600

gtgactacgg gggcccactt gcctgcttta cccacaactg ctgggtcctg gaaggaatta   660

taatccccaa ccgagtatgc gcaaggtccc gctggccagc tgtcttcacg cgtgtctctg   720

tgtttgtgga ctggattcac aaggtcatga gactgggtta ggcccagcct tgatgccata   780

tgccttgggg aggacaaaac ttcttgtcag acataaagcc atgtttcctc tttaaaaaaa   840

aaaaaaaaaa aa                                                       852

<210>34

<211>694

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>34

ccaccgcggt ggcggccgct ccagaactag tggatccccc gggctgcagg aattcggcac   60

gaggtataat agatgtcatg cagccaatcc aaacggcaga tactactggg gtggacagta   120

cacctgggac atggcaaagc atggcacaga tgatggtgta gtatggatga attggaaggg   180

gtcatggtac tcaatgaaga agatgagtat gaagatcagg cccttcttcc cacagcaata   240

gtccccaata cgtagatttt tgctcttctg tatgtgacaa catttttgta cattatgtta   300

ttggaatttt ctttcataca ttatattcct ctaaaactct caagcagacg tgagtgtgac   360

tttttgaaaa aagtatagga taaattacat taaaatagca catgattttc ttttgttttc   420

ttcatttctc ttgctcacca agaagtaaca aaagtatagt tttgacagag ttggtgttca   480

taatttcagt tctagttgat tgcgagaatt ttcaaataag gaagaggggt ctctttatcc   540

tggccgtagg aaaaccatga cggaaaggaa aaactgatgt ttaaaagtcc acttttaaaa   600

ctatatttat ttatgtagga tctgtcaaag aaaacttcca aaaagattta ttaattaaac   660

cagactctgt tgcaataaaa aaaaaaaaaa aaaa                               694

Claims (3)

1.一类分离出的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签的序列，其包括：

(a)SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列；

(b)SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列中每条序列的互补序列；

(c)与SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列中每条序列有至少70％同源性的序列，及

(d)上述(a)～(c)中一条或数条的组合。

2.根据权利要求1所述的一类分离出的在人类肝癌中特异表达的表达序列标签的序列，其特征在于：所述序列包括具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.34所示的序列。

3.一种探针分子，其特征在于：所述的探针分子含有权利要求1中所述的序列中约8-100个连续的核苷酸。