CN1665535A - 和免疫治疗剂联合使用的苝醌 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有至少一种苝醌化合物的组合物及其方法，其中活化的苝醌能调节免疫反应。本发明的组合物和方法还可和其它免疫疗法联合使用。例如，本发明可以和抗体、抗原、细胞因子，和/或采用免疫佐剂的免疫疗法一起使用。在本发明的实施方式中，该组合物和方法能调节免疫疗法自身的功能和活性。

Description

和免疫治疗剂联合使用的苝醌
技术领域
本发明涉及一种治疗疾病的组合物和方法，通过给予既具有光敏剂特性又具有声敏剂特性的化合物来加强用于治疗这类疾病的免疫疗法。这种组合物和方法尤其适用于治疗人类和动物的癌症，以及调节免疫治疗剂的功能。
发明背景
免疫治疗根据诱导和活化免疫系统的原理，来识别和去除不需要的细胞，例如肿瘤细胞。任何免疫治疗中的关键因素是诱导或触发宿主免疫系统首先识别出不需要的靶分子，然后诱导系统开始针对该分子有所反应。在健康宿主中，免疫系统识别出分子的表面特征不是宿主的正常组分(也就是说对宿主是外来的)。一旦发生识别功能，宿主就会针对特定外来分子有所反应。
免疫系统的识别和反应涉及到一系列复杂的生物反应。在很多免疫紊乱疾病中，识别阶段的至少一个步骤，或反应阶段的至少一个步骤受到破坏。实际上，破坏这些复杂路径中的任何一步都会导致免疫反应的减弱或失去免疫反应。免疫系统无法破坏肿瘤的生长，是因为存在引起免疫耐受和/或免疫抑制的肿瘤相关抗原(TAA)。例如，在一些癌症中，癌症本身会使宿主误认为外来的癌细胞是自身的正常组分，从而破坏了免疫系统的识别阶段。对癌症的免疫疗法涉及到修正宿主-癌症间的关系，使得免疫系统能被诱导或能放大对TAAs的反应。如果成功的话，免疫系统的诱导或放大可导致肿瘤的退化，肿瘤排异，以及潜在地进行肿瘤治愈。
正向或反向调节免疫反应以及控制潜在的自身反应免疫活性细胞，对正常免疫功能的发挥和存在是至关重要的。调节机制包括克隆的无反应性诱导(通过不适当的抗原呈递细胞)、外周的克隆清除/凋亡，细胞因子(如，转移生长因子-β(TGF-β)或IL-10)诱导的非反应性，“veto”细胞，自反应细胞溶解型T细胞，和非特异性和抗原特异性T抑制细胞。至少理论上，每种调节系统都提供了一种介入治疗的机理基础。
理想的癌症治疗模式不仅能使肿瘤退化和根除，而且还能诱导系统的抗肿瘤免疫性，这对于控制转移性肿瘤和长期的肿瘤抑制是很关键的。在这一方面，光动力治疗(PDT)和声动力治疗(SDT)为癌症治疗提供了一种有前景的新方法。这些治疗方法涉及系统地或局部地给予一种敏感剂，接着用特定波长的光(PDT)激活，或者用特定频率的声(SDT)激活。光敏剂活化导致产生了活性氧和自由基，从而引发了一系列的生化反应，导致对细胞的直接破坏，破坏肿瘤脉管系统，以及免疫炎症反应的发生。免疫炎症反应的诱导以及肿瘤特异性免疫的产生，被认为在实现长期的肿瘤控制方面发挥了决定性作用[1，2]。这个观点已经得到了临床前和临床研究的证实。例如，和野生型小鼠相比，PDT的治疗效果在免疫损害的小鼠(裸鼠和SCID)上被大大削弱，往免疫损害的小鼠身上植入T细胞或骨髓细胞可有效地使经PDT治疗的肿瘤的复发推迟[2，3]。此外，Abdel-Hady等(2001)近期已经证实在外阴上皮内有瘤形成的病人中，对基于ALA的PDT临床反应可以和渗透免疫细胞的数目以及HLA类型I表达相关联[4]。
炎症反应被认为是代表了一个关键的初始发展过程，它使导致对PDT处理过的肿瘤抗原进行识别和确保产生长期的肿瘤免疫反应的事件和谐起来[5-9]。PDT诱导的光氧化损伤导致了过多的前-炎症调节子从癌细胞膜、血管内皮和肿瘤基质中释放出来，接着，嗜中性粒细胞和其它骨髓效应物细胞侵入了肿瘤的位置。PDT处理之后，从肿瘤中产生了许多细胞因子。激活的免疫细胞和释放的细胞因子一起在靶向部位损伤处激发并放大过敏性炎症反应。PDT释放的肿瘤细胞碎片、细胞因子以及能够吞噬并呈递肿瘤抗原给T淋巴细胞的渗透免疫细胞，可能产生一个独特的环境来促进细胞介导的免疫反应并诱导长期的免疫反应。
已发现嗜中性粒细胞，巨噬细胞和CTLs活性有助于PDT的治疗结果[3，6，10-12]。在PDT治疗之后的5分钟，嗜中性粒细胞和巨噬细胞在肿瘤区域聚集。这些细胞通过它们直接的细胞溶解活性杀死肿瘤细胞，或者在淋巴细胞的协助下间接参与到癌症特异的免疫反应中[2，5]。发现将带有小鼠的肿瘤中的嗜中性粒细胞清除，并且阻断参与组织中白细胞补充的细胞粘连分子会降低PDT介导的抗肿瘤效应[8，13]。同样，用硅处理使巨噬细胞失活也会降低PDT治疗肿瘤的效果[14]。在免疫活性和免疫缺陷小鼠之间使用骨髓移植技术和脾细胞/T细胞移植，并且特异性清除CD4+和CD8+细胞，结果表明对于PDT介导的肿瘤治疗，淋巴细胞活性是必须的[12，Korbelik，1996 &num；15，14]。此外还发现，PDT会产生肿瘤特异性的T淋巴细胞，它可以从远距离的淋巴组织，如淋巴结或脾中获得，甚至是在光处理长时间后得到[2，3]。
在过去的20年里，人们已经认识到在生物系统中天然的苝醌型颜料(PQPs)，例如竹红菌素(Hypocrellins)的光敏性和治疗特性。参见Diwu，et al.，J.Photochem.Photobiol.A：Chem.，64：273(1992)；Zhang et al.，(1989)；and Wan，et al.，″Hypocrellin A，a new drug for photochemotherapy，″Kexue Tongbao(English edition)26：1040(1981)。它们的化学特性参见[Weiss，et al.，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.，52：1(1987)and Diwu，et al.，Photochem & Photobiol.，52：609-616(1990)]。PQP′s的光物理和光化学特性参见Diwu，et al.，Pharmac.Ther.，63：1(1994)。竹红菌素属于苝醌型颜料总类颜料，包括竹红菌甲素(HA)和竹红菌乙素(HB)。
人们对PQPs感兴趣的原因在于它们能以非-活性(或无毒)状态使用，然后被激活。人们对PQPs，尤其是竹红菌素衍生物感兴趣还在于它们可以被不同形态的因素激活，例如光，声，及其组合。
超声具有穿透中间组织，到达需要治疗部位的合适的组织衰减系数，同时能够将能量集中于合适小的体积内，因此敏化剂的声动力活化非常有用。在发达国家中，诊断超声作为非侵入性的方法已被接受并得到广泛应用，甚至在胚胎成像上的应用也被认为是安全可靠的。诊断超声的频率在100kHz-12MHz之间，并且50kHz的声音提供的能量足以通过微区域成洞而使细胞遭到破坏。
曝露于超声的生物学效应是物理和化学效应的结果。超声治疗最明显的生物学效应来自于超声经过介质时的加热效应。这种加热已用于物理治疗来治愈受伤的组织(Lehmann et al.，1967；Patrick，1966)，并且作为一种肿瘤治疗的可能方法被研究。这是由于许多肿瘤组织对温度高于42℃的过高热都有敏感性(Doss and McCabe，1976；Marmor et al.，1979；Sculier and Klastersky，1981；Bleehen，1982；Hynynen and Lulu，1990)。和单独使用的放射治疗相比，已有人将超声和放射治疗联合使用来提高体内的治疗反应(Clarke et al.，1970；Repacholi et al.，1971；Mitsumori et al.，1996)。使用超声治疗的主要危险是会形成“热点(hotspots)”，这是由于相长干涉区域的存在使超声能量被低曲率半径的骨骼区域优先吸收(Lehmann et al.，1967；Linke et al.，1973)。这些热点会对周围组织产生严重破坏(Hill，1968；Bruno et al.，1998)。
发明概述
根据本发明的内容，苝醌颜料(PQPs)衍生物同时具有光敏和声敏特性，可通过调节身体的免疫系统和/或任何其他用于疾病治疗的免疫疗法，来治疗疾病和其它症状。
PDT的炎症/免疫特性使得它尤其适合于和各种形式的免疫治疗方法组合使用，可有效提高肿瘤治疗的治愈率。已显示，各种免疫治疗和PDT联合使用很有效。这些方法包括移植入免疫细胞[3，15]，使用不同的细胞因子[16，17]，以及使用各种疫苗作为免疫反应的非特异性提高剂。就后者而言，已报道了当使用Bacillus Calmette-Guerin(BCG)疫苗[18，19]、分枝杆菌细胞壁提取物[20]，以及棒状杆菌菌苗疫苗[21]作为辅助治疗时，PDT介导的肿瘤反应有很好的效果。
BCG是Mycobacterium bovis的衰减菌株，用作人结核病的疫苗。BCG可诱导细胞介导的免疫性，体液免疫和巨噬细胞功能，这些在理论上都能导致对肿瘤的进一步破坏。浅表性膀胱癌是少数BCG的非特异性治疗对其有效的恶性瘤中的一种。
竹红菌素已被选择作为潜在的用于PDT的光敏剂[22]，临床前的研究已经证明它们有能力作为抗癌剂[23]。本发明还包含，当与免疫治疗剂，如BCG联合使用时，氨基取代的竹红菌素具有进一步增强的抗癌能力，例如脱甲氧基的竹红菌乙素(DMHB)。
本发明还涉及改变免疫原性，使得能产生有益效果或治疗所需的效果。正如在此所用，一种有益的或所需的免疫反应是指能产生治疗所需的结果，如控制动物或人中的肿瘤生长。一种有益的治疗反应一般包括激活免疫系统和/或它的一个或多个部分，诱导免疫系统和/或它的一个或多个部分，和/或T细胞免疫反应，和/或体液免疫反应。例如，对于一种癌症，比如卵巢癌，一种有益的或所需的免疫反应包括能够产生抗体，这种抗体能和此前的非免疫反应的卵巢癌抗原发生免疫反应。在该例子中，对抗原的免疫反应得到了加强。在另一个实施例中，例如在炎症条件下，一种有益的或所需的免疫反应包括产生抗体，它能和以前的免疫反应性抗体发生免疫反应，使得抗原成为非免疫反应性的。在该实施例中，免疫反应被减弱。在移植中，免疫系统会攻击导致移植排斥的MHC-全异型供体组织，在自免疫疾病中攻击正常组织，而在过敏症中，免疫系统会对其它无害的环境抗原反应过度。现在认为，免疫抑制治疗用来治疗这些机能紊乱疾病中的每一种都可能是一种合适的方法。通过调节免疫治疗剂本身的活性或功能(例如增加或降低免疫活性)也许能获得有益的结果。
本发明的方法和组合物，经光和/或声激活会在红光光谱区域或超声的治疗频率处表现出显著的吸收；产生大量的单线态氧；可以获得纯的单体形式；可被衍生化以优化红光吸收、超声活化，组织生物分布和毒性等方面的性能；具有更小的残基皮肤光敏性；并且排泄快。它们通过和DNA小沟结合剂(例如stapled lexotropins)共价联结而具有核靶向能力，以提高光毒性。它们不具有基因毒性。在和治疗相关的继发性恶性瘤中，这一点非常重要。
当采用系统化给药时，光敏和声敏性化合物以及本发明的方法会遍布全身。在很短的时间内，也就几个小时至几天，化合物就会从正常组织中消失，但是选择性地继续在快速增生的细胞(如，癌细胞或牛皮癣损伤)上保留几天。本发明的PQPs在激活之前是无活性和无毒性的，激活可以采用例如曝露于特定波长范围的光下，或特定频率范围的声音下，或它们的组合。
使用可以被两种不同激活方式激活的化合物在治疗上应该是有益的。光线能够穿过皮肤表面大约5-7mm的距离激活这种化合物，从而治疗表面损伤或距光源有一定距离的目标细胞。另一方面，超声能够深入穿透身体到达很深处的目标细胞，比如光线很难达到的肿瘤组织。
本发明的化合物也因为其双重可选择性而在疾病治疗上很有用处。本发明的化合物优先将药物定位在预定的靶目标上(如癌细胞)有选择性，在精确发射光线或/和声波到限定的特殊区域也有选择性。
附图简要说明
图1为自然产生的竹红菌素的结构(Fig.1A)，和示范性的合成衍生物，HBBA-R2(Fig.1B)，HBEA-R1(Fig.1C)，和HBDP-R1(Fig.1D)的结构。
图2为本发明的脱甲氧基化的HB化合物的几种结构，其中R1，R2，R3，R4是OCH3或NHCH2Ar(Ar是苯基或吡啶基团)，NHCH(CH2)n(其中-CH(CH2)n是脂环族基团，并且n＝3，4，5，6)。2-BA-2-DMHB中R1，R2，R3是OCH3，并且R4是NH(CH2)3CH3。另外，R1，R2，R3，R4可能是OCH3或者NHCH2(CH2)nAr，其中Ar是苯基，萘基，多环芳香基或者杂环结构，n是0-12。
图3表示在单独使用PDT或者PDT与BCG一起使用时肿瘤体积增大的百分比，动物对PDT治疗仅有部分反应。图3A是用X-Y图表示的结果，而图3B是用条形图表示的结果。
本发明的实施方式
本发明包括利用苝醌(PQP)衍生物作为光敏剂和声敏剂的用途，以及该衍生物作为免疫系统调节剂的医疗用途。在本发明中优选的化合物是从选自HBBA-R2，HBEAR1，HBDP-R1，和DMHB的氨基取代的竹红菌素衍生物。
本发明包括一种组合物和治疗预定疾病或者症状的方法，其中包括给予包含苝醌衍生物的一种组合物，使苝醌衍生物分布到身体的某个部位，最好是整个身体，并且激活苝醌衍生物。
本发明的优选的实施方式中，苝醌衍生物是氨基取代的竹红菌素。本发明最优选的实施方式中，苝醌衍生物是脱甲氧基化的竹红菌素(参见图2)，其中R1，R2，R3，R4是OCH3或者NHCH2Ar(Ar是苯基或者吡啶基团)，NHCH(CH2)n(其中-CH(CH2)n是脂环族基团，n＝3，4，5，6)。  2-BA-2-DMHB中，R1，R2，R3是OCH3，R4是NH(CH2)3CH3。另外，R1，R2，R3，R4可以是OCH3或者NHCH2(CH2)nAr，其中Ar是苯基，萘基，多环芳香基或杂环结构，n＝0-12。
本发明也包括调节宿主机体免疫状态的方法和组合物。本发明的组合物和方法在改变机体免疫状态时，能够提高，降低，或者保持宿主的免疫状态，和/或提高，降低或者保持免疫治疗剂的功能。通过提高免疫原性得到有益治疗作用的一个例子，包括但不限于对癌症和一些传染性疾病，比如肝炎的治疗。降低免疫原性的一个例子包括但不限于对风湿性关节炎的治疗。保持免疫原性的一个例子包括但不限于对抗原的初次反应后产生免疫耐受的病人的一种补充疗法。本发明最优选的实施方法中，该方法和组合物不降低治疗的组合物中活性成分的抗原性。
本发明的组合物和方法可以与其它使用的免疫治疗方法联合使用。比如本发明可以在基于免疫疗法的基础上与抗体、抗原、细胞因子、和/或免疫佐剂共同使用。在本发明的实施方法中，该组合物和方法调节免疫疗法本身的功能和行为。示例性的免疫疗法和免疫调节剂在Mandel，《传染性疾病的原理和实践(第五版)》中有详尽的描述。示例性的免疫调节因子包括但不限于BDG，粒细胞集落刺激因子(filgrastim)，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(sargramostim)，干扰素α，干扰素α-2a，干扰素α-2b，干扰素alfacon-1，干扰素α-n3，静脉免疫球蛋白和咪喹莫特(imiquimod)。
本发明也包括提高宿主整体对疾病或症状的反应的方法和组合物。这些方法和组合物对接受者产生治疗作用。
本发明也包括能产生有益的免疫反应的组合物和方法，特别是本领域的技术人员无法预料到的抗原特异性反应，比如，肿瘤相关抗原(“自身的”)抗原。
本发明也包括如下方法和组合物，涉及到一种PQP，它结合到一个目标制剂，如某种抗体，抗体受体，或者类似物，或者其中的一个片段；使用这种结合物来增强免疫系统；用光线和/或声音来激活这种结合物。
在这里，加强免疫系统是指通过调节(诱导，放大，和/或钝化)免疫系统对肿瘤相关抗原的反应来改变宿主与肿瘤的关系。根据本发明，如此加强免疫系统将会使肿瘤衰退、清除，并可能治愈肿瘤。加强免疫系统也指调节各种免疫系统成分的活性，包括但不限于抗体，抗原，细胞因子，免疫佐剂和类似物。可以认为加强免疫系统将会使巨噬细胞聚集在肿瘤部位和较远的转移区。
本发明涉及通过一种产生有益的或者期望的治疗性效果的方式加强免疫系统。在本应用中，有益的或期望的免疫反应是指能够产生某种期望的治疗效果。这种有益的治疗反应包括调节免疫体系和/或其中的一种或者多种组分，比如，激活或者钝化某种现有的免疫反应。这种调节可以包括诱导免疫系统的和/或其中的一种或多种组分，和/或T细胞免疫反应，和/或某种体液免疫反应。这种对抗原的免疫反应可以被增强或者减弱，这取决于哪种免疫反应能得到有益的结果。
在本应用中，作为一种综合性的方案提供如下一种或多种或者全部的治疗效果：细胞免疫及其产物中的分子；体液免疫及其产物中的分子；ADCC免疫及其产物中的分子；CDC免疫及其产物中的分子；自然杀伤细胞；细胞因子和趋化因子及其产物中的分子和细胞。本领域的技术人员会承认一个有益的免疫反应(和因此克服免疫耐受)可能是由一系列途径所决定。可以通过例如测量治疗前后抗原特异性免疫反应来决定激活免疫系统中多种途径。一种有益的免疫反应的详细示例包括如下一个或多个方面：
1)对给药的免疫原产生的体液免疫反应，包括抗体的证据；
2)对抗原的体液免疫反应，包括的证据有：出现了针对抗原上相同和/或不同表位的抗原特异性抗体，其中表位为对结合剂的表位；
3)抗体依赖性的细胞毒性，包括的证据是：相对于注射前的原始血清，将血清和外周血单核细胞以及目的肿瘤细胞混合培养后，注射后的血清以抗原特异性抗体滴度介导肿瘤杀伤作用；
4)补体依赖性的细胞毒性，包括的证据是：相对于注射前的原始血清，与含有补体的血浆相结合的注射后血清杀死肿瘤细胞；
5)自然杀伤细胞活性，包括相对于处理前的外周血单核细胞，注射处理后得到的血液样品中的外周血单核细胞(包括NK细胞)产生肿瘤细胞杀伤力增强，这些血液样品是在对应于肿瘤相关抗原(TAA)的可测量抗体出现之前得到的；
6)抗原增强的细胞毒性，包括相对于给药前水平，外周血单核细胞(在含TAA的肿瘤细胞存在下)对肿瘤细胞靶向杀伤增强；
7)细胞免疫，包括证据是：相对于注射前而言，注射后T细胞增殖或者是肿瘤细胞分解。
在本应用中，″苝醌衍生物″或者″衍生物″是指从自然或者天然的苝醌(PQPs)中衍生出来的，同时又能被预定波长的光和/或预定频率的声音激活的所有化合物。在本发明的优选实施方案中，衍生物是从自然中产生的苯醌类化合物衍生出来的。根据本发明所述的衍生物也可以与其他活性试剂复合，或者其中包含其他活性试剂，这些活性试剂包括但不限于化疗试剂或烷基化试剂。示例性的PQPs包括但不限于竹红菌素，尾孢菌素(cercosporin)，phleichrome，cladochrome，elsinochromes，蚜红素，和钙磷酸蛋白(calphostins)。优选的PQPs是竹红菌乙素和竹红菌乙素衍生物，其中更优选的是氨基取代的竹红菌素。本发明中最优选的化合物是脱甲氧基的竹红菌素，包括但不限于图2中所示的结构。
在本应用中，″苝醌衍生物″或者″衍生物″也是指从自然或者天然的苝醌(PQPs)中衍生出来的，同时又能被预定波长的光和/或预定频率的声音激活的所有化合物。在本发明的优选实施方案中，相应的衍生物是从自然中产生的竹红菌甲素或者竹红菌乙素和竹红菌素类似化合物中衍生出来的。根据本发明所述的衍生物也可以与其他活性试剂复合，或者该衍生物包括其他活性试剂，这些活性试剂包括但不限于化疗试剂或烷基化试剂。如下面将更详细说明的，这种含有PQP活性试剂的组合物可能包括种类繁多的附加成分，比如包括一种或多种气体，气态前体物，液体，油性物质，稳定化材料，诊断试剂，光敏试剂，生物活性试剂，和/或靶向配体。
在本发明优选的实施方案中，PQP衍生物是一种竹红菌乙素的氨基酸衍生物。目前，最优选的免疫结合物使用竹红菌乙素，使其官能化为具有酸，酰溴，肼，硫醇或者伯胺的抗体结合部位。
本发明的一个竹红菌素衍生物也包括2-丁基氨基-2-脱甲氧基-竹红菌乙素(2-BA-2-DMHB)。2-BA-2-DMHB表现出在红光光谱区很强的吸光率，与其母体化合物HB相比，这种化合物对光的吸收谱系延伸到更长的波长。在583nm处的消光系数相当于HB在548nm处消光系数的2.5倍，在621nm超过HB在580nm处消光系数的3.8倍。这种特性意味着DMHB将展现出更优秀的组织穿透能力，因此可能具有更大的临床意义。
本发明中的化合物可以采用得到纯化或者完全纯化化合物，或者得到可用作光敏剂或声敏剂的化合物的任何方法制造。本发明的化合物也可以形成含有多种化合物，即含有一种以上化合物的某种组合物。这些方式在本领域的技术人员中是众所周知的，比如，Liu，et al.，″新的竹红菌乙素衍生物的合成研究″，Tetrahedron，49：10785(1993)；和Diwu，et al.，抗癌药物设计，8：129-143(1993)。竹红菌素衍生物可以很容易地由母体化合物竹红菌乙素(HB)，即一种真菌Hypocrella bambuase sacc.的天然产物合成，该真菌是一种竹子的植物病原体。HB的衍生物，HBBA-R2(丁基胺化的HB)，HBDP-RI(2-(N，N-二甲基氨基)-丙胺-HB)，和HBEA-RI(乙醇胺化的HB)是通过母体化合物的酚式羟基基团的氨基化制备得到。
在Diwu，et al.，J.Photochem.Photobiol.A：Chem.，64：273(1992)中总结了PQP的许多性质。某些苝醌也是某些病毒的有效抑制剂，特别是人类的免疫缺陷性病毒(HIV)，也是酶蛋白激酶C(PKC)的抑制剂。某些PQPs的抗HIV和抗PKC活性是光依赖性的，即为肿瘤的光动力学治疗包含的一种现象[Diwu，et al.，Biochem.Pharmacol.，47：373-389(1994)]。Diwu et al的论文也揭示了HB与蛋白质的成功结合。
根据本发明，PQP衍生物可能被官能团化，比如包括活性基团，这些活性基团包括但不限于酸，羟基，酰卤(尤其是溴)，肼，硫醇，或伯胺。这些结合试剂包括某些反应性基团，包括但不限于半胱氨酸，赖氨酸，天冬氨酸，谷氨酸和其它二羧基氨基酸和其他三-或多-官能团的氨基酸衍生物。
本发明中苝醌衍生物特别适用于医疗用途，因为它们在光治疗窗口(大约在560nm到大约700nm)中显示了光吸收能力和光毒性活性；在大约1MHz到大约3MHz的频率范围内显示出了优秀的声动力学活性；分子量小(典型的是从大约550道尔顿到880道尔顿)；可以得到纯的单体形式；可以迅速从血清中和皮肤上清除；在体内和体外的细胞毒性可以忽略不计；有优异的光增强作用(如两个数量级)，因此使用安全；光毒性是通过常规II型反应或者I型反应介导的(表明在缺氧癌细胞上的应用)；是有效的蛋白激酶抑制剂；导致凋亡细胞在体内和体外的死亡；没有基因毒性；显示优秀的肿瘤控制能力；可为靶向传递设定分子构成；能够靶向核区以产生进一步增强的声音/光毒性；并且母体竹红菌素可以针对特异性位点进行修饰，这样可以形成许多种衍生物，这些衍生物在光敏和/或声敏特征上有程度上的不同。
含有PQP活性试剂的这种组合物可包括很多种不同的附加组分，比如包括，一种或几种气体，气态前体物，液体，油性物质，稳定化材料，诊断试剂，光活性试剂，生物活性试剂，和/或靶向配体。
在本应用中，“疾病”是指处理，诊断，和/或缓解那些能够用光动力学和声音动力学治疗的任何哺乳动物(包括人类)的疾病，失调，混乱，或者其他症状。“疾病”包括但不限于肿瘤及其转移，如皮肤癌；肿瘤的增生及其转移症状；肿瘤和肿瘤细胞，比如肉瘤和癌，包括实体肿瘤，血液肿瘤和鼻部、膀胱、食道、肺部(包括支气管)的肿瘤；病毒，包括逆转录病毒；细菌性疾病；真菌病；和皮肤病症状及失调，比如阴部损伤，瘢痕，白癜风，银屑病，良性肿瘤，子宫内膜异位，Barett′s食道，头癣(Tinea capitis)，苔藓样淀粉样变性(lichen amyloidosis)。
在本应用中，“给药”是指任何使预定的细胞，细胞群，或组织，特别是哺乳动物，与一种或者多种PQP衍生物曝露或相接触的行为。在本应用中，给药可以活体内，体外，或来自于体内(ex vivo)的方式进行。比如，一种组合物可以通过注射或者通过内窥镜给药。给药也包括将本发明的组合物直接施用到细胞上。比如，在外科手术中，癌细胞可能被暴露出来。根据本发明的实施方法，这种暴露出来的细胞(或者是肿瘤)可以直接曝露于本发明的组合物，比如，通过清洗和灌注手术部位和/或细胞。
在本应用中，激活、活化或者相似术语是指用光源和/或声源使某种组合物或者组合物中的一部分的化学活性增强。根据本发明，任何使用光源和/或声源来激活苝醌衍生物的方式都可以使用，比如，直接使用，用超声仪，聚焦的超声，高强度聚焦的超声和照明的内窥镜法。
使用适当的光或声音能够通过化学改变的方式(比如，通过氧化，还原或者类似方式)改变敏化剂的结构，使其产生毒性，和/或调节免疫反应。比如，在激活一种光敏剂或者声敏剂后，使之处于一个长时间的激发三线态时，目标肿瘤会被通过量子能量传递产生的高度活化的单线态氧(II型机制)，和/或自由基产物(I型机制)所破坏。单线态氧类分子和/或自由基产物的主要生物学目标分子包括核酸，酶和细胞膜。通过将组织曝露在活化过的光敏剂中，本方法另一个次要的治疗效果涉及到的病理生理产物的释放，比如前列腺素，血栓烷素(thromboxanes)和白细胞三烯(leukotrienes)。
根据本发明的实施方式，利用光激活某种光敏剂和用声音激活某种声敏剂可以被联合使用，因为每种方法都是互相补充的。换句话说，能激活某种苝醌衍生物的红色可见光能够穿射进入组织和身体大约5mm到7mm的深度，而激活某种苝醌衍生物的声音能够充分穿透组织和身体。
在本应用中，″光增强因子″是指化合物能够产生光或者声音介导的毒性，这种毒性超过其固有的非活化状态的毒性。在本发明优选的实施方案中，激活因子可以以如下方法计算，即通过计算未经活化化合物处理的细胞的LD50值，与经过活化的化合物处理后的细胞的LD50的比率得到(药物LD50除以活化过的药物LD50)。在这里，上面提及的术语″LD50″也可用″IC50″代替，此时涉及代谢活性的生物检测，而不是最终致死率、生殖能力的丧失或克隆源性死亡。化合物的相关光敏活化率也可以用克隆源性化验确定，这种化验方法是本领域的技术人员所熟知的。
根据本发明，一个令人期望的PQP衍生物应该是这样的：在无激活的条件下即使是在高的药物浓度下也是无毒性(或者低毒性)，无激活的条件即无光的情况下(也指“黑暗”)，和/或无声的情况下；而在给予适当的光波波长或者适当的声音频率时，在较低的浓度下即可产生毒性。正如在本领域的技术人员所公认的，最合适的化合物应该能够在非激活状态下提供一个很宽的无毒的剂量范围，这种特性能够为病人提供很高的安全系数。
在本应用中，在生理学上能够接受的液体是指任何适于与包含PQP衍生物的组合物联合使用的液体或者添加剂。一般来说，这些液体被用作稀释剂或者载体。示例性生理学上可接受的液体包括但不限于防腐剂溶液，盐溶液，等渗(大约0.9％)盐溶液，或者大约5％的白蛋白溶液或悬浊液。本发明不受限于生理学上可利用的溶液类型。组合物也可以包括药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括但不限于盐，消毒水，磷酸盐缓冲液及其它类似物。在本发明中，适于给病人使用的组合物也可以包括其他的缓冲试剂，分散剂，和惰性无毒物质。这种组合物可以是溶液，悬浊液或者任何适于给药的合适剂型，典型的为经过消毒且不含不需要的微粒物质。这种组合物可以用传统的消毒技术进行消毒。
根据本发明的一种方法，敏化剂可能能够以任何生物学上可接受的途径对病人给药。例如，敏化剂可以通过静脉，皮下，腹膜内的，鞘内，膀胱内的，皮内的，肌肉或者淋巴内的等途径在病人身上使用。组合物可以是溶液剂、片剂、气雾剂或多相制剂形式。脂质体，长循环脂质体，免疫脂质体，生物可降解微球，微囊，或者其他类似物也可以作为载体，媒介或者传递系统来使用。此外，利用本领域众所周知的来自于体内(ex vivo)的技术，从病人体内抽取的血液或者血清；任选地，可将患者血液中的抗原纯化；然后与包含本发明敏化剂的组合物相混合；最后这些被处理过的血液或者血清被重新注入病人体内。临床医生可以比较这些不同的治疗途径的抗-独特型(anti-idiotypic)和抗-同型(anti-isotypic)反应，以判定哪种是最为有效的给药方式。本发明不应该被限定于任何一种特殊的将敏化剂引入病人体内的方式。
细胞内的反应可能比较快(比如，2小时之内)，或者需要更多时间(比如大约20小时或者更久)。某些肿瘤的反应要达到一定的速度可能需要调节敏化剂的pKa值，因为在某些肿瘤空隙环境的酸性比正常的组织酸性更强。
本发明包含用于鉴定作用于癌细胞的毒性高于作用于正常细胞的毒性的化合物的方法，该方法通过比较克隆源性试验进行。
佐剂或免疫佐剂定义为一组在结构上不同的化合物，用来激发或者提高对抗原的免疫反应。从理论上讲，任何一种分子或者物质，如果能够促进或者放大免疫生物学反应中某种特定部分，最终引起一个更好的免疫反应，都能被定义为一种佐剂[schijns 2000]。典型公认的佐剂的例子包括乳油，皂角苷，铝或钙盐，非离子嵌段聚合物表面活性剂，脂多糖(LPS)衍生物，分枝杆菌和许多其他种类。佐剂可能通过增强抗原定位(铝化合物，脂质体，水油乳液[福氏不完全佐剂])来加强免疫反应；增强抗体递呈(干扰素γ干扰素诱导剂，铍，胞壁酰二肽，福氏不完全佐剂)；并且激活淋巴细胞(白细胞介素-1和-2)。[Lise LD，Audibert F.免疫佐剂与有免疫调节作用的细菌结构类似物，CurrOpin Immunol 1989；2：269-274]。
本发明的PQP衍生物也可以与各种其它化合物联合和结合使用，如信号试剂，增强剂，和/或靶向试剂。例如，本发明中的一种竹红菌素衍生物能够与某种抗体结合，尤其是与单克隆抗体，或者象铁传递蛋白这样的组分。根据本发明，结合剂包括任何DNA小沟靶向制剂，比如lexotropsin或者纺锤菌素，优选通过细胞核增强毒性。合适的增强剂包括但不限于pKa调节剂，低氧细胞放射敏化剂和生物还原而激活的抗肿瘤试剂，比如丝裂霉素C(尤其适于促进或者加强在低氧细胞或者微生物中化合物的毒性)。合适的信号试剂包括但不限于标记凋亡细胞死亡或者坏死的细胞死亡的标记物，或者控制细胞生长循环或者延迟的调控分子，尤其是能够加强化合物光毒性或者声毒性，这种加强是通过引入凋亡或者坏死的细胞死亡，或者通过抑制任何致命或者潜在的致命损害(PLD)的修复方式而实现。
正如上文中提到的，本发明的实施方法包括结合试剂-PQP结合物(或者免疫结合物)和这些结合物的治疗用途。根据本发明，任何将一种结合剂与PQP相联的方法都是可以采用的。比如，将一个抗体或者抗体片段与某种光敏剂相联接的方法是众所周知。例如，Goff，et al.，British Journal of Cancer，74：1194-1198(1996)公开一种免疫佐剂的产品，这种产品是将光敏剂与单克隆抗体OC125(能够特异性地与卵巢癌相关的CA125抗原联接的抗体)共同培养得到。在典型的免疫结合物中，聚谷氨酸可以结合至单乙二胺单酰胺衍生物上，然后再与远离抗原结合位点的单克隆抗体中铰链区域的碳水化合物部分结合。其它典型的连接物在US Patent 4822906和3959078中公开，在此都作为文献引用。简而言之，这些专利的公开提供了一种光敏剂，其具有选择器基团或潜在的反应基团，潜在的反应基团为一特异性结合对的另一个成员，如与抗体共价键结合的反应基团。
正如本领域的技术人员所公知的，衍生物或者结合物(包括衍生物)的有效剂量部分地取决于病症的严重程度和病人免疫系统的情况。本领域的技术人员也公认这种治疗可以采用各种不同剂量，并且剂量大小取决于公知的各种因素。一般来说，这种组合物包括每公斤体重大约0.1μg到2mg或更多的结合剂，最经常使用的剂量是每公斤体重200μg。其浓度通常至少要大于0.5％。根据选定的给药方式，任何剂量的选择基本上都要取决于流体体积，粘度，抗原性等。
结合剂或者衍生物的给药可以不止一次，在延长的治疗中最好使用三次。本发明的组合物可能被用于治疗病症严重的病人，也就是说有生命危险或者是潜在生命危险的病人，在需要的时候也可以使用过量的结合剂。使用这些药物组合物的实际方法和方案，包括本组合物注射用时的稀释技术，都是本领域的技术人员所熟知或者显而易见的。这些方法和方案在《Remington′s的药物科学》Mack Publishing Co.(1982)中有详尽的描述。
根据本发明的另一种实施方法，本发明的组合物也可以单独给药，或者与其他免疫治疗组合物联合给药(先后使用或者一起使用)。这些特征能够在相继给予敏化剂(其后进行光照处理)的方式时，潜在地提高光动力学和/或声音动力学治疗率。在这种情况下，可以靶向较远的肿瘤转移。
在本发明的实施方式中，一种方法是：先给予第一个活性试剂，最好是摄取速度较慢的，然后给予第二种活性试剂，最好是摄取速度比第一种快。然后通过如上所述的将病人和/或试剂曝露于合适波长的光线和/或合适频率的声波中，从而激活第一种和第二种活性试剂。
缓冲液的使用主要是为了稳定配方，防止当pH值有明显变化时产生化学降解。缓冲系统一般尽量选用缓冲能力较弱的缓冲液，以防止在注射时明显干扰人体体液缓冲系统。缓冲范围和缓冲液对活性的影响必须进行评估。合适的调节可提供最佳条件使得pH依赖性的部分进入目标恶性组织和损伤区域。这种缓冲体系的例子包括如下酸：乙酸，脂肪酸，抗坏血酸，安息香酸，柠檬酸，氨基乙酸，乳酸，酒石酸，盐酸，磷酸，硫酸，碳酸或者二碳酸；及其相应的盐，比如：钾盐，钠盐，镁盐，钙盐和二乙醇胺盐。
实施例
实施例1.竹红菌乙素的直接胺化。
将HB(50mg)在包含胺(1ml)的乙醇(5ml)中溶解，将所得到的溶液回流处理6-18小时，时间长短取决于分别所用的胺。然后将混合物倒入冰水中，用10％的盐酸溶液中和，再用氯仿萃取。用水冲洗氯仿层，用无水Na2SO4干燥，再经过蒸发后得到蓝色固体。首先将该固体通过1％KH2PO4-硅胶凝胶柱进行层析，用二氯甲烷-甲醇(梯度比率)作洗脱液，得到几种组分。每种组分都再过两次1％柠檬酸硅凝胶平板进行层析，用6∶1∶1石油醚-乙酸乙酯-乙醇作为展开剂，从而得到各个衍生物。
实施例2.用乙醇胺对竹红菌乙素进行胺化
根据上述反应步骤，HB与乙醇胺的反应产生五种产物。HBEA-R2和HBEA-R1(Diwu et al.1993)的鉴别和特征如下：
HBEA-R2(20％)：R：3270，1717和1612cm-1；′H-NMR(in DMSO-d6)：11.46(s，＜1H，与D2O可替换，酚式羟基)，1.38(s，＜1H，与D2O可替换，酚式羟基)，6.83(s，1H，ArH)，6.78(s，1H，ArH)，4.09(s，3H，OCH3)，3H，OCH3)，3.94(s，3H，OCH3)，3.92(s，3H，OCH3)，3.85-3.50(m，4H，2NHCH3)，3.40-2.92(m，4H，CH2OH)，2.11(s，3H，COCH3)和1.72ppm(s，3H，CH3)。MS(FAB)：615(M+H)。C34H34N2O9的计算值：614.2264；实测值：614.2270.
HBEA-R1(异构体B)](12％)；IR：3260，1720和1613cm-1；′H-NMR(DMSO-d6中)：12.11(s，＜1H，与D20可替换，酚式羟基)，11.99(s，＜1H，与D2O可替换，酚式羟基)，6.47(s，1H，ArH)，6.35(s，1H，ArH)，4.03(s，3H，OCH3，3.95(s，6H，2x OCH3)，3.93(s，3H，OCH3)，3.88-3.62(m，4H，2NHCH3)，3.20-2.95(m，2CH2OH，2.15(s，3H，COCH3)and 1.90ppm(s，3H，CH3).MS(FAB)：615(M+H).C34H34N2O9的计算值：614.2264；实测值；614.2268.
实施例3.用丁基胺对竹红菌乙素进行胺化
HBBA-R2(异构体A)和3-乙酰基-4，6，8，9，11，13-六甲氧基-2-甲基-1H-芳庚并[ghi]苝-5，12-二酮的合成(Diwu et al.1993)根据上面所述的反应过程中HB与丁基胺的反应产生五种产物。其中两种化合物可用下面所述加以鉴定：
HBBA-R2(21％)：IR：3280，1702 and 1616cm-1；′H-NMR：15.65(s，1H，与D2O可替换，酚式羟基)，14.94(s，1H，与D2O可替换，酚式羟基)，6.41(s，1H，ArH)，6.40(s，1H，ArH)，4.07(s，3H，OCH3)，4.00(s，3H，OCH3)，3.96(s，3H，OCH3)，3.93(d，3H，OCH3)，3.24(m，4H，2NHCH2)，1.98(s，3H，COCH3).1.26(s，3H，CH3)and 1.70-0.85ppm(m，14H，2CH2CH2CH3)。MS(FAB)：639(M+H).C38H42N2O7的计算值：638.2992；实测值：638.2998。
HBBA-R1(11％)：IR：3300，1715 and 1616cm-1，′H-NMR：15.40(s，1H，与D2O可替换，酚式羟基)，15.18(s，1H，与D2O可替换，酚式羟基)，6.48(s，1H，ArH，6.33(s，1H，ArH)，4.01(s，6H，2x OCH3)，3.97(d，1H，CH)，3.96(s，6H)，2x OCH3)，3.54(m，4H，2NHCH2)，3.14(d，1H，CH)，2.16(s，3H，COCH3)，1.69(s，3H，CH3)and 1.60-0.85ppm(m，14H，2CH2CH2CH2).MS(FAB)：639(M+H).C38H42N2O7的计算值：639.2998；实测值：638.2992。
实施例4.
肿瘤模型：在同源BALB/c小鼠中接种乳腺癌EMT6肿瘤细胞，然后从切除的肿瘤中分离出癌细胞并保存在液氮里。在本实验中这些细胞被解冻，并在Waymouth′s介质中培养直到汇合(subconfluent)。将含有105肿瘤细胞的PBS悬浮液接种s.c.到小鼠的侧腹。移植8天之后，当肿瘤体积到达70mm3时进行肿瘤处理。这些小鼠被分成2组，每组5只。
PDT处理：在本实验中，所有的小鼠(10只)都用PDT处理。肿瘤上面的皮肤被剥刮下来，并经腹膜内给予固定剂量的重悬浮于矿物油中的DMHB(整体50uM，200uL/小鼠)。24小时后用methophane麻醉这些小鼠，用635nm光线处理这些肿瘤，这些光线是Biolitec激光器产生经光纤传送。发光点(2cm)的功率是150mW。每个肿瘤使用100焦耳的剂量。
BCG处理：对其中一组小鼠(PDT-BCG group)用BCG处理。BacillusCalmette-Guerin(BCG)疫苗(OncoTICE，Organon，Canada Ltd.)通过提升皮下肿瘤进行单次肿瘤下(subtumoral)给药，在损伤部位下缓慢注射107cfu无菌盐溶液(50μL体积)。BCG的注射应该在PDT处理后立即进行。
肿瘤反应评价：每隔一天通过检测小鼠肿瘤生长的情况来评价肿瘤对治疗的反应。肿瘤体积的变化用卡尺测量损伤部位的三个正交直径。肿瘤的体积按照下面的表达式计算：
V＝π/6×d1×d2×d3
这里V＝体积(mm3)而d1-3是三个正交直径(mm)。
结果
在这个例子中，确定是否将竹红菌素DMHB与BCG结合可能提高DMHB的治疗潜力。基于先前DMHB衍生物HBEA-R1[23]在体内的研究结果，选择50uM剂量的光敏剂和光线处理的条件。对于另一种光敏剂[19]，我们已描述了BCG对PDT活性的增强，并且相同的BCG处理方案适合于我们的方案。
具有EMT6肿瘤的小鼠被随机分成2个小组，每个小组5只小鼠。第一组小鼠(PDT小组)只接受DMHB处理，而第二组小鼠(PDT-BCG)用BCG联合DMHB处理。光处理下DMHB的活性在两组中是相同的。在小鼠用光线处理的前一天(第0天，在这个时间点上观察不到治疗效果，因为没有DMHB被激活或者BCG注射)，我们观察到PDT-BCG组小鼠的平均肿瘤体积(52.73±8mm3)大于PDT组(30.37±4mm3)。为了更精确地表达实验结果，肿瘤增长的数据用百分比，而不是直接用肿瘤体积表示。真正较大的肿瘤相对于较小的肿瘤生长要快得多，因此PDT-BCG小组的有效治疗效果(如果不是非常明显)用这种方式可以很容易地表示。在另一个方面，用肿瘤增长百分比来表示肿瘤的增长速度更有代表性，因此我们认为该方法用来表达两个小组小鼠的肿瘤增长的差异更为精确。肿瘤体积可以用下面的表达式来计算：
增长百分比＝100×[测量日的肿瘤体积/第0天的肿瘤体积]
图3表示了每个小鼠在单独使用DMHB和与BCG结合使用DMHB时对EMT6肿瘤的控制效率。与单独使用PDT相比，当PDT与BCG合用时可以观察到肿瘤生长有相当程度的延迟。
图3中得到的数据表示PDT-BCG结合使用比PDT单独处理有更好的效果，单独采用PDT处理的动物仅对PDT处理有部分反应。图3A和B表示的结果显示，动物部分地对PDT处理发生反应，当PDT与BCG联合使用时，肿瘤的生长速度比单独使用PDT时大约降低50％。
这个例子显示在初始的研究中，PDT与BCG合用的治疗与只用PDT治疗相比产生了有益的抗肿瘤作用，这是一个非常令人鼓舞的结果。
实施例5.
HB的制备是：将HA用一定量的氢氧化钾脱水，然后用HA中和，氯仿萃取，并用苯-石油醚重结晶，与正丁基胺一起在嘧啶中回流得到2-丁基氨基-2-脱甲氧基-竹红菌乙素(2-BA-2-DMHB)，中和，并且用氯仿萃取HB。得到的产物用1％柠檬酸-硅胶凝胶薄层层析(TLC)分离，用石油醚/乙酸乙酯/乙醇(95％)以6∶1∶1比例的混合物作为洗脱液，最后得到3种化合物。这就是目标化合物(洗脱速度(Rr)＝0.64)和两种副产物(分别是Rr＝0.74并且0.40。)，可以用合格的(satisfactory)NMR，质谱和元素分析来鉴别。目标化合物用TLC进一步纯化，得到所需的产物2-BA-2-DMHB，产率达到54％。这种纯化物或者HB和2-BA-2-DMHB可以用高效液相色谱分析，发现纯度高于95％。
实施例6.
苝醌型颜料(竹红菌素)及其光敏性和声敏性特征
化合物     光敏能力*    声敏能力*
DMHBa脱甲基-HB     3.0M    1.0mM
DMHBb 2-丁基氨基-2-脱甲氧基-竹红菌乙素     0.1μM    0.1mM
HA竹红菌甲素     4.0M    无
HBAC-R1胱胺-HB异构体1     1.0M    无
HBAC-R2胱胺-HB异构体1     5.0M    无
HBAM-R1 2-吗啉代-乙胺化HB     4.0M    无
HBDD-R1 2-(N，N-二甲基-氨基)丙胺-竹红菌乙素    1.0mM
HBEA-R1乙醇胺-竹红菌乙素异构体1     0.15M    1.0mM
HBEA-R2乙醇胺-竹红菌乙素异构体2     7.50M    无
HBED-R2乙二胺-竹红菌乙素     4.0μM    无
HBMA-IV甲基胺-竹红菌乙素     1.0μM    无
*固定剂量的光线或者超声波下，在体外EMT6啮齿类肥大细胞瘤中产生LD50的摩尔浓度。
参考文献
1.Hunt DW，Chan AH(2000)Expert Opinion on Investigational Drugs 9：807
2.Korbelik M(1996)Journal of Clinical Laser Medicine & Surgery 14：329
3.Korbelik M，Dougherty GJ(1999)Cancer Research 59：1941
4.Abdel-Hady ES，Martin-Hirsch P，Duggan-Keen M，Stern PL，Moore JV，Corbitt G，Kitchener HC，Hampson IN(2001)Cancer Research 61：192
5.Dougherty TJ，Gomer CJ，Henderson BW，Jori G，Kessel D，Korbelik M，Moan J，Peng Q(1998)Journal of the National Cancer Institute 90：889
6.Korbelik M，Krosl G，Krosl J，Dougherty GJ(1996)Cancer Research 56：5647
7.Ochsner M(1997)Journal of Photochemistry & Photobiology.B-Biology39：1
8.de Vree WJ，Essers MC，Koster JF，Sluiter W(1997)Cancer Research57：2555
9.Gollnick SO，Liu X，Owczarczak B，Musser DA，Henderson BW(1997)Cancer Research 57：3904
10.Krosl G，Korbelik M，Dougherty GJ(1995)British Journal of Cancer 71：549
11.Korbelik M，Krosl G(1994)Photochemistry & Photobiology 60：497
12.Hendrzak-Henion JA，Knisely TL，Cincotta L，Cincotta E，Cincotta AH(1999)Photochemistry & Photobiology 69：575
13.de Vree WJ，Essers MC，de Bruijn HS，Star WM，Koster JF，Sluiter W(1996)Cancer Research 56：2908
14.Korbelik M，Cecic I(1999)Cancer Letters 137：91
15.Korbelik M，Sun J(2001)International Journal of Cancer 93：269
16.Bellnier DA(1991)Journal of Photochemistry & Photobiology.B-Biology8：203
17.Krosl G，Korbelik M，KroslJ，Dougherty GJ(1996)Cancer Research56：3281
18.Cho YH，Straight RC，Smith JA(1992)Journal of Urology 147：743 FileRef.No.652-0008PCT
19.Korbelik M，Sun J，Posakony JJ(2001)Photochemistry & Photobiology73：403
20.Korbelik M，Cecic I(1998)Journal of Photochemistry & Photobiology.B-Biology 44：151
21.Myers RC，Lau BH，Kunihira DY，Torrey RR，Woolley JL，Tosk J(1989)Urology 33：230
22.Estey EP，Brown K，Diwu Z，Liu J，Lown JW，Miller GG，Moore RB，Tulip J，McPhee MS(1996)Cancer Chemotherapy & Pharmacology 37：343
23.Miller GG，Brown K，Ballangrud AM，Barajas O，Xiao Z，Tulip J，LownJW，Leithoff JM，Allalunis-Turner MJ，Mehta RD，Moore RB(1997)Photochemistry & Photobiology 65：714
本发明以阐述和举例的方式进行了详细描述，应该可以理解，本发明允许各种修饰和改变形式而不受限于所提供的具体实施方式。还应该理解，提供这些具体实施方式的意图并不是为了限制本发明，相反，其意图是包含符合本发明精髓和范围内的所有修饰的、等价和可替代的内容。

Claims (11)

1.一种治疗方法，包括给予一种含有氨基取代的竹红菌素的组合物，所述的竹红菌素为一种声敏剂和/或光敏剂，激活该竹红菌素，并使激活的竹红菌素调节免疫治疗剂的效果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法进一步包括使用预定频率的声音来激活竹红菌素。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法进一步包括使用预定波长的光线来激活竹红菌素。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的免疫治疗剂选自抗体，抗原，细胞因子或者免疫佐剂。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的竹红菌素在处于非激活状态的高浓度下是无毒的，而在激活状态的低浓度下是有毒性的。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的竹红菌素衍生物选自丁胺化的竹红菌乙素；2-(N，N-二甲基氨基)-丙胺-竹红菌乙素；乙醇胺化的竹红菌乙素；和1，12-双[2-(乙酰氧)丙基]-2，4，6，7，9，11-六甲氧基-3，10-苝二酮。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的竹红菌素选自图2化合物，其中R1，R2，R3，R4是OCH3或者NHCH2Ar(Ar是苯基或者吡啶基团)，NHCH(CH2)n(这里CH(CH2)n是脂环族基团，n＝3，4，5，6)。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，R1，R2，R3是OCH3，并且R4是NH(CH2)3CH3。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，R1，R2，R3，R4是OCH3或NHCH2(CH2)nAr，其中Ar是苯基，萘基，多环芳香基或者杂环部分，n是0-12。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法进一步包括竹红菌素与某种免疫治疗剂先后给药或者一次联合给药。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的治疗方法包括治疗皮肤病，癌症，病毒性疾病，逆转录酶病毒疾病，细菌性疾病，自身免疫病和真菌性疾病。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102138640A (zh) * 2011-01-14 2011-08-03 江南大学 苝醌化合物在制备防治禽类病毒饲料中的应用
CN109456210A (zh) * 2017-09-06 2019-03-12 中国科学院理化技术研究所 一种竹红菌素迫位和2-位同时氨基取代的衍生物及其制备方法和应用
CN114007649A (zh) * 2019-03-29 2022-02-01 布里格姆及妇女医院股份有限公司 靶向协同癌症免疫疗法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1349965A (zh) * 2000-10-25 2002-05-22 中国科学院感光化学研究所 带有脂肪环或芳香环的脂肪胺基取代去甲氧基竹红菌素及其合成方法和用途
US6627664B2 (en) * 2001-01-30 2003-09-30 Altachem Pharma Ltd. Perylenequinones for use as sonosensitizers
CA2548172A1 (en) 2003-12-04 2005-06-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Quinoxalines useful as inhibitors of protein kinases
CA2615510A1 (en) * 2005-08-10 2007-02-15 Quest Pharmatech Inc. Perylenequinone derivatives and uses thereof
US8454991B2 (en) * 2006-07-24 2013-06-04 Quest Pharmatech Inc. Method and device for photodynamic therapy
CN109453408A (zh) * 2018-11-16 2019-03-12 江南大学 抗菌创伤敷料及其制备方法
CN115282133A (zh) * 2021-12-06 2022-11-04 温州医科大学 竹红菌乙素在制备抗结肠癌药物中的应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001508071A (ja) * 1997-01-10 2001-06-19 アルタレックス コーポレイション 光力学的治療で使用する置換ペリレンキノン
GB9710049D0 (en) * 1997-05-19 1997-07-09 Nycomed Imaging As Method
DK1009413T3 (da) * 1997-09-05 2007-06-11 Univ California Anvendelse af immunstimulerende oligonukleotider til forebyggelse eller behandling af astma
IL139832A0 (en) * 1998-06-15 2002-02-10 Altarex Inc Therapeutic compositions that produce an immune response by altering the antigen
US20020022032A1 (en) * 1999-04-23 2002-02-21 Curry Patrick Mark Immuno-adjuvant PDT treatment of metastatic tumors
EP1204423B1 (en) * 1999-08-18 2005-03-16 AltaRex Medical Corp. Therapeutic antibody against muc-1 antigen and methods for their use
WO2001080888A2 (en) * 2000-04-25 2001-11-01 Immunex Corporation Method for treatment of tumors using photodynamic therapy
US6627664B2 (en) * 2001-01-30 2003-09-30 Altachem Pharma Ltd. Perylenequinones for use as sonosensitizers
EP1357912B9 (en) * 2001-02-06 2012-06-13 QLT Inc. Photodynamic therapy of occult choroidal neovascularization linked to age-related macular degeneration

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102138640A (zh) * 2011-01-14 2011-08-03 江南大学 苝醌化合物在制备防治禽类病毒饲料中的应用
CN109456210A (zh) * 2017-09-06 2019-03-12 中国科学院理化技术研究所 一种竹红菌素迫位和2-位同时氨基取代的衍生物及其制备方法和应用
CN114007649A (zh) * 2019-03-29 2022-02-01 布里格姆及妇女医院股份有限公司 靶向协同癌症免疫疗法

Also Published As

Publication number Publication date
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