JP2001508071A

JP2001508071A - 光力学的治療で使用する置換ペリレンキノン

Info

Publication number: JP2001508071A
Application number: JP53289398A
Authority: JP
Inventors: ラグパシーマディヤラカン; ジェイウィリアムロウン; ジェラルドジーミラー; ロナルドビームーアー; ツェンジュンディウー
Original assignee: アルタレックスコーポレイション; ザユニヴァーシティオブアルバータ
Priority date: 1997-01-10
Filing date: 1998-01-09
Publication date: 2001-06-19
Also published as: AU6017198A; WO1998033470A3; EP1015033A2; WO1998033470A2; EP1015033A4; CA2277362A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、光力学的治療において使用する方法と組成物を包含する。新規なペリレンキノン誘導体、ペリレンキノン誘導体と結合剤を含む結合体、およびこれらの組成物を用いる治療法を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】光力学的治療で使用する置換ペリレンキノン発明の技術分野本発明は、ヒトを含む動物において、坑癌活性、抗ウィルス活性、表面改良性、および／または非悪性疾患活性を有する化合物の活性を使用しかつ強化する方法を包含する。また、本発明は、診断における方法と組成物をも包含する。発明の背景伝統的に、癌に対する治療には主に３つの方法、すなわち外科手術、化学療法そして放射線療法がある。これらの分野はかなり進歩したが、これに取って代わるより効果的で安全な治療法の研究が続いている。Lipson氏らは1966年にMayo診療所で初めて光力学的治療（photodynamic therapy=PDT）を行なった。［参照： Proc.IX Internat Cancer Congress，p393(1966)］。1972年までにこのPDTへの関心が広まり、動物実験を促進した。その結果、感光剤（例えばフルオレセイン）、光、および細胞の酸素を組み合わせると腫瘍の成長が阻害されることが分かった[参照：Dougherty,T.J.,JNCI 52:1333(1974)]。ヘマトポルフィリン誘導体(hematoporphyrin derivatives=HpD)を使用した動物での最初の研究は1975年に報告された[参照:Dougherty氏他、JNCI55:115(1975)]。 HpDが出現しその純度がより高めらて以来、腫瘍に対するPDTは進歩しフェーズ IIIのクリニカルトライアルに達した。HpDは有益な組織感光剤であるが、次のような問題点がある。すなわち皮膚に対して長期にわたり光毒性を示し、この組成物は分子凝集性の傾向がある親水性の分子からなる強重合体の混合物であり（凝集に伴って光効果が減少する）、薬物動力学が悪化し、「治療の窓（Therapeutic window）」(600nm〜850nm、すなわち可視赤色光線)における吸収および光活性が低下する。さらに、診療の組成物でさえ、その回分再現性は低かった。ヒトの悪性および非悪性の状態を治療するPDTおける関心はヘマトポルフィリンが出現し診療に使用されるようになって以来、著しく高まった。（実験室およなポルフィリン系感光剤を使用する。ポルフィリン系感光剤が最適には及ばない光吸収特性でしかなかったり、原料依存性の生物的応答や分子組成物、およびホストにおける長期の感光性と結び付く困難があるにもかかわらず、これらの化合物は使用され、PDTへの関心も高まった。これらの制約があるため、それに代わる感光剤への探究が促進された。現在の候補にはベンゾポルフィリン誘導体−酸環Ａ[Richter氏他、「Photochem.photobi ol.」52:495(1990)]および５−アミノレブリン酸／プロトポルフィリンＩＸ［ken nedy氏他、「J．Photochem.photobiol Ｂ Biol.］6(l-2):143(1990)]がある。付加的な研究ではメロシアニン540、フタロシアニン(CASPC)、モノ−Ｌ−アスパルチル塩素₆(MACF)、ナイルブルー、アントラピラゾール、アントラセンジオン、アントラサイクリン、ヒポクレリン[Diwu氏他、「Photochem.photobiol.」52( 3):609(1990)]がある。生物系でのヒポクレリンのようなペリレンキノイド色素（ＰＱＰ）の感光性が過去２０年間に認められた。参照：Diwu氏他、「J．Photochem.Photobiol.A：Ch em.」64:273(1992)、Zhang氏他、(1989)、およびWan氏他、「Hypocrellin A,a new drug for photochemotherapy」（ヒポクレリンA、光化学療法に対する新薬)、Ke xue Tongbao(英語版)26:1040(1981)。ヒポクレリンの名称は、Hypocrella bambusae sacc．すなわちSinarundinaria 種の寄生的な真菌に由来し、これは雲南省(中華人民共和国)の北西、チベットの南東、およびスリランカのある地方に豊富に生育する。ピポクレインはペリレンキノイド色素の一般的な分類に属し、ヒポクレリンA(HA)とヒポクレリンB(HB)とを含む。HAの経口投与はハイパリシズム(hypericism)，すなわち可視光感受性皮膚の状態を引き起こす。HAの感光性効果が酸素の存在に依存し、天然のHAを光学的な薬剤として使用できることを示している(上記のWan氏他)。発明の概要本発明によると、ペリレンキノン色素（ＰＱＰ）の誘導体は新しい感光剤の分類であり、光学的治療で使用される。さらに、PQP誘導体、特に官能化した（functionalized）PQPは、インビボあるいはインビトロで所定の細胞あるいは構造に結合する結合剤に結合され得る。ばヒポクレリンは赤色スペクトル領域で高い吸収を示し、一重項酸素を高い収率で生じ、純粋に、単量体の形で生産でき、赤色光の吸収特性、組織生物分布、毒性を最適に誘導でき、残りの皮膚の感光性を減少させ、急速に排出される。光毒性を高めるために、ステープルレキシトロピン（stapled lexitropin）のようなDNA小溝結合剤に共有結合的に結合することによって核標的を可能にする。それらは遺伝子毒性ではない。この特性は治療に関連した二次的に生じる悪性の事情において重要である。モノクローナル抗体との結合（例えば、免疫結合（イノムジュゲイト））は、卵巣癌および乳房癌を含む種々の疾患の治療に関して特異性を示す。ヒポクレリンの蛍光性すなわち、それらが強く着色されるということは腫瘍や転移性疾患の診断での使用を容易にし、それらのスペクトル指紋が悪性、通常、炎症性、あるいは物理的に損傷した組織の間の識別を容易にする。さらに蛍光性は種々の光検出手段を介して検出できる。また、モノクローナル抗休との結合は卵巣癌や乳房癌を含む種々の疾患に対する光治療、特異性を高める。例えば、HBEA-R1の経皮的な光治療はBalb/cマウスの脇腹で生成するEMT6/Ed腫瘍を永久に除去する。この結合は断片化した細胞の死を介して、主として細胞内および膜の目標とのII型の光化学反応を介して、光毒性を媒介する。酸素が全体的に存在しない場合、光毒性はＩ型の光学反応(「ラジカルカスケード」)を介して媒介される。この特徴は低酸素症の腫瘍細胞の取り扱いに重大であり、これは放射線や薬剤により治療を現在のところ制限している。これは光治療の窓の内の688nmに重要な光毒性を有する[Estey氏他、Cance r Chemother．Pharmacol.」37:343(1996)」。ペリレンキノンは生育している種々の天然の色素を含み、独特な化学的かつ生物的特性を有している。天然のペリレンキノイド色素(PQP)はヒポクレリン、セリコスポリン(cercosporin)、フェレイクロム(phleichrome)、クラドクロム(cla dochrome)、エルシノクロム(elsinochrome)、エリスロアフィン(erythroaphin) 、およびカルホスチン(calphostin)を含む。これらのうちのほとんどは種々の糸状菌により生産され、そのホストの光力学的植物毒素として作用する。ただしエリスロアフィンはアリマキから単離される。これら一般的な化学的性質については以下を参照のこと[Weiss氏他、「Prog.Chem.Org.Nat.Prod.」52:l(1987)およびD iwu氏他、「Photochem&photobiol.」52:609〜616(1990)」。PQPの一般的な光物理的および光化学的性質は以下に載っている［Diwu氏他、「Pharmac.Ther.」63:1(1994 )］。対して非常に強い、光力学的作用を及ぼすことが示された。ヒポクレリン（PQP の光力学的治療適用の代表として）は、現在使用されるヘマトポルフィリン誘導体を超えて幾つかの利点を有している。例えば、調整が早いこと、精製が容易なこと、三重項量子収率が高いこと、赤色光吸収率が高いこと、排出が早いために適正な組織の感光性が大きく減少することである。PQPの性質の多くは、Diwu氏他、「J.Photochem.Photobiol.A:Chem.」64:273(1992)に載っている。また、幾つかのペリレンキノンはあるウィルス、特にヒト免疫不全ウィルス(HIV)の強力な阻害剤であり、酵素プロテインキナーゼＣ（PKC）でもある。あるPQPの抗HIVおよび抗PKC活性は共に光依存性であり、癌の光力学治療に影響を与える[Dwiu氏他、「Biochem.Pharmacol.」47:373〜389(1994)]。また、Diwu氏他の論文はHBのプロテインへの結合に成功したことを明らかにしている。ヘマトポルフィリン誘導体の場合のように、天然のPQPは600nmより長い吸収率を示さず、組織を貫通する能力が減少する特性を有している。このことは天然のPQPが光力学的治療に対して充分な強さを有しておらず、光力学的治療の適用を制限することを意味している。光力学的治療に対する現在のポルフィリン感光剤の不足は、赤色スペクトル領域の光吸収、純度、薬物動力学および皮膚の感光性の減少に関して性質を向上させる第２の化合物の開発を刺激した。発明者はペリレンキノン誘導体、ヒポクレリンＢの開発に力を注いだ。発明者は優れた物理化学的および生物的性質を有する化合物を同定し、包括的な生物的特徴および前臨床評価を完成した。例えば図２のHBEA-R1(構造3)およびEBBA-R2(構造6)である。これらの化合物は（630または688nmの光の存在下で）暗細胞毒性に関して100 〜500倍に光強化した。HBEA-R1(構造3)およびHBBA-R2(構造6)はネズミの投与量を漸増する研究に成功した。全体投与量50μMで急性または慢性(60日以上)の毒性の問題は観察されなかった。観察期間の終時における考えられる終点は体重、挙動、および明白な病理学上の試験であった。薬物動力学の研究は¹⁴ C-ヒポクレリンB(Liu氏他、1995)を使用して、EMT6/Ed腫瘍のBalb/Cマウスで完成した。HB研究からの情報により、HBE A-R1を用いた腫瘍成長遅延/コントロールの研究において、光照射のタイミング（表１）の有益なガイドラインを得た。図面の簡単な説明図１は種々のアミノ化ピポクレリンＢ誘導体の調製の模式図である。Ｒは炭素原子２〜１０のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコールであり得る。図２はヒポクレリンＡ、ヒポクレリンＢ、およびヒポクレリン誘導体の化学構造、２つのブチルアミノ化HB構造、２つのエタノールアミノ化HB構造、２−（N, N-ジメチルアミノ）プロピルアミン-HB、およびJL-1-1を示す。図３はHA(ジメチルホルムアミド)、HB(ジメチルホルムアミド)、HBBA-R2(クロロホルム)、HBDP-R1(クロロホルム)、HBEA-R1(ジメチルスルホキシド)、および構造4(JL-1-1)(クロロホルム)の吸収スペクトルを示す。図４は、放射能標識化ヒポクリレンＢの合成の模式図である。この化合物は、その後放射能標識化ヒポクレリン誘導体合成に使用できる。図５ａ〜ｂは選択した感光剤の細胞の取込みを示す。（ａ）は標準濃度曲線、（ｂ）はEMT6/Ed細胞による取込み(10⁶細胞に調整)である。縦座標は適当な検出波長における相対蛍光であり(参照：本文)、横座標は感光剤の濃度（マイクロモル)である。図６ａ〜ｅは、細胞毒性の生残り曲線（ａ）、(縦座標：生残り％、横座標：感光剤濃度μM)および光毒性(b〜e)単層培養のFMT6/ED細胞のクローン産生アッセイにより定量したヒポクレリン感光剤の(縦座標:生残り％、横座標：光投与量 J/cm²)を示す。ｂはHBBA-R2、CはHBEA-R1、dはHBDP-R1、eはJL-1-1である。エラーバーは５回培養プレートの標準偏差を表す。図７は、Balb/cマウスの脇腹で生長しているEMT6/Ed腫瘍について種々の条件下でのHBEA-R1のPDTにおける腫瘍成長遅延を示す。経皮的な照射(非高温体)である。図８は、HBFA-R1の存在下でのマウスの治療中の腫瘍に対する光強度の効果を示す。このマウスはBalb/cであり、脇腹にEMT6/Ed腫瘍がある。マウスは50μmol /kgのHBEA-R1を注射された後、経皮的に照射された。図９ａ〜ｅは、EMT6/Ed細胞への（ａ）ヒポクレリンＢ、(b)¹⁴C−HB、(C)HBBA -R2、(d)HBFA-R1および(e)HBDP-R1の取り込み対時間を示す。図10は、630nmの光を段階的に投与し、0.25μMの感光剤を使用した後のHBEA-R 1およびHBBA-R2の酸素依存性を示す。両化合物は酸素不存在下で光毒性を示し、この条件下でのＩ型の光化学プロセスに対する証拠を得た。図11は、ヨウ化プロピジウム(propidium)法を使って定量した単層におけるEMT 6/Ed細胞のPDT処理後の時間の関数として導かれる断片化細胞死を示す。感光剤濃度は0.20μMである。図12は、EMT6/Ed細胞の細胞毒性に対するpHの効果を示す。(a)ヒポクレリンA, 630nmの光、(b)ヒポクレリンA、暗中、(C)ヒポクレリンB、630nmの光、(d)ヒポクレリンB、暗中。図13は、ヒポクレリンＢのアミノ酸誘導体の合成を示す。図14はヒポクレリンＢの付加的なアミノ酸誘導体の構造を示す。図15は本発明のヒポクレリンＢ誘導体を製造するための図を示す。図16はある前駆体化合物を製造するための先行技術のプロセスを示す。発明を実施するための態様本発明は光力学的薬剤としてのペリレンキノン(PQP)誘導体の使用、光力学的治療(PDT)におけるPQP誘導体の使用を含む。PDTは従来の治療に抗してその代わりとなる悪性疾患等に対する独特な治療を提供し、これは悪性細胞(本明細書に示すような)を選択的に破壊する能力を用いる。また、本発明は、少なくとも1のPQP誘導体を治療に必要な充分量投与し、その誘導体を活性、典型的にはPQP誘導体を光活性化することにより、疾患を治療する方法を含む。典型的にPQP誘導体は、誘導体を所定の波長の光に当てることにより活性化され得る。また、本発明は約400nmと約850nmnの間の波長の存在下で強化される癌治療法を含む。多くの化合物に対する吸収スペクトルを図3に示し、各化合物に対する主な吸収ピークを表1に示す。これらの化合物の多くは600nm 〜700nmの範囲に有意な吸光度を有する。また、本発明は一重項の酸素および種々の毒性のないラジカルを生じる1またはそれ以上のPQP誘導体を使用することを含む。典型的に、一重項酸素および/または非毒性ラジカルを生じ得る化合物はある疾患などを治療するのに使用できる。また、本発明は、抗癌および／または抗ウイルス活性を有するヒポクレリン誘導体を使用し、誘導体を光活性化することによりこれらの誘導体の活性を高めることを含む。また、本発明は癌細胞を好ましくは破壊し、あるいは好ましくは標的とするヒポクレリン誘導体を使用することを含む。また、本発明はヒポクレリンのような天然のペリレンキノン、ヒポクレリンＡおよびヒポクレリンＢのような合成ペリレンキノン誘導体、放射能標識化ヒポクレリンＢおよび放射能標識化ヒポクレリンＢ誘導体を製造する方法を含む。また、本発明はペリキノン誘導体、ヒポクレリン誘導体、放射能標識化ヒポクレリンＢおよび放射能標識化ヒポクレリンＢ誘導体、ペリレンキノン結合体、およびヒポクレリン結合体を含む組成物を含む。また、本発明は、本発明のPQP誘導体を抗体あるいは抗体フグラメントのような１またはそれ以上の結合剤に結合することを含む。また、本発明は抗体または抗体フグラメントのような１またはそれ以上の結合剤に結合されたPQP誘導体を含む。また、本発明はPQP誘導体（例えばヒポクレリン誘導体）をDNA小溝結合剤に結合して、細胞核のような細胞構造に光毒性をおこすことを含む。本発明では「ペリレンキノン誘導体」または「誘導体」とは天然のあるいは自然のペリレンキノンに由来し、所定の波長の光によって活性化され得るすべての化合物をさす。本発明の好ましい態様では、誘導体は自然に産出するヒポクレリンＡまたはヒポクレリンＢおよびヒポクレリン様化合物に由来する化合物である。本発明では、ヒポクレリン誘導体は光によって活性化されることができ、光力学的薬剤として使用できる。本発明のＡ誘導体は他の活性試薬と錯体化あるいは含有することができ、それは化学療法薬あるいはアルキル化剤を含むがこれに限定されない。例示の誘導体の構造を図に示す。本発明では「疾患」とはヒトを含む任意の哺乳動物の病気、異常、疾病、あるいは光力学的療法により治療できる状態の治療、診断および／または軽減にわたる。「疾病」は、皮膚癌のような癌やその動物；成長または腫瘍やその転移；固形の腫瘍、血液運搬性の腫瘍、および鼻腔、膀胱、食道、肺、気管の腫瘍を含む肉腫や癌腫のような腫瘍や腫瘍細胞；レトロウィルスを含むウィルス；細菌疾患、菌疾患や陰門病変、ケロイド、白斑、乾癖、良好腫瘍、子宮内膜病、バレット食道、頭部白癬や苔癬アミロイド症のような皮膚条態あるいは異常を含むがこれに限定されない。本発明では「投与」は１またはそれ以上のPQP誘導体を所定の細胞、細胞群、典型的には哺乳動物にさらすまたは接触させる任意の作用をさす。また、本発明では投与はインビボ、インビトロ、エクスビボで行うことができる。例えば、組成物は注射または内視鏡を介して投与できる。また投与は本発明の組成物を細胞に直接適用することも含む。例えば、外科手術の間に腫瘍細胞をさらすことができる。本発明の態様では露出したこれらの細胞（または腫瘍）を本発明の組成物を例えば外科的な部位および／または細胞を洗浄または湿らすことにより直接さらすことができる。本発明では「結合剤」は例えば卵巣癌のCA125抗原に結合する抗体または抗体フラグメントあるいは細胞のある領域や構造を標的とする薬剤のような標的部位に作用するレセプターと特異的な結合を形成する任意の試薬等をさす。本発明の好ましい態様では、結合剤は癌細胞に特異的に結合する抗体または抗体フラグメントである。本発明のより好ましい態様では、結合剤は、卵巣癌、乳房癌、または胃腸の癌の抗原のエピトープに結合する(例、卵巣癌のCA125のエプトープ、乳癌のCA15.3エピトープ、または胃腸癌のCA19.9エピトープ)。抗体またはフラグメントは標識化(例えば、放射性同位体または他のマーカーで)あるいは非標識化され、および／または錯体、キメラモノクローナル抗体(「C -MAb」)、発生的に設計されたモノクローナル抗体(「G-MAb」)、モノクローナル抗体のフラグメント(「F(Ab)₂」、「F(Ab)」、および「Dab」を含むが、これに限定されない)、モノクローナル抗体の反応部位を表す一本鎖(「SC-MAb」),腫瘍結合ペプチド、エフェクター作用を和らげる分子に結合した上記の任意の物、および上記の任意の模擬物である。種々の結合剤、抗体、抗原および抗体の調製、単離、使用法は米国特許第4,471,057号(Koprowski)および米国特許第5,075,218号(Jette 他)に記載されており、共に参照により取り込む。さらに、これらの抗体または結合剤の多くは、Centocor,Abbott Laboratories,Commissariat a L’Fnergie A tomigue,Hoffman-LaRoche,Inc.,Sorin Biomedica,およびFujiRebioから市販されている。本発明では、「光強化ファクター」は固有の暗毒性が過剰な場合に、光媒介毒性を及ぼす化合物の性質をいう。本発明の好ましい態様では、光活性フアクターは光活性化化合物を用いて処理した細胞のＬＤ₅₀に対する光なしで処理した細胞のＬＤ₅₀の比として計算できる(薬品により除算した薬品ＬＤ₅₀と光ＬＤ₅₀)。用語「ＬＤ₅₀」を上記のように使用した場合、用語「ＩＣ₅₀」は致死量の終点、再現可能性の喪失、クローン産生的死よりも代謝活性に関するバイオアッセイに関連して置換可能である。化合物の相対的な光活性効率はクローン産生アッセイを用いて決定され得る。このアッセイは当業者には知られている（参照：例えば実施例１３）。本発明では、望ましいPQP誘導体は光なし（すなわち「暗」）で高濃度の薬剤にて非毒性（または低毒性）であり、適当な波長の光をあてると、低濃度で毒性であるものである。当業者には認識されるとおり、最も望ましい化合物は暗中で広い範囲の投与量で非毒性の化合物である。このことは患者の安全性を増す。実施例において、より詳細に示したように、インビトロの光強化ファクター試験はヒポクレリンコンジナーはインビボで腫瘍を殺す可能性に最も優れていることを示すのに成功した。例えば、HBEA−R1およびHBBA-R2では、630nmまたは688nmの光の存在下で暗細胞毒性について100倍またはそれ以上光強化する（表１）。ここで使用したように、生理的に許容できる流体とはPQP誘導体を細胞組成物と組み合わせるのに適した流体や添加剤をいう。典型的にこれらの流体は希釈剤やキャリアヤーとして使用される。生理的に許容できる流体として保存溶液、塩溶液、等張性（約９０％）塩溶液、または約５％アルブミン溶液または懸濁液を例示できるが、これらに限定されない。本発明は使用された生理的に許容できる流体の型に制限することを意図しない。また組成物は薬学的に許容できるキャリヤーも含み得る。このキャリアーとしては、塩、滅菌水、リン酸緩衝液等を例示でき、これらに限定されない。患者へ分配するのに適した他の緩衝剤、分配剤、不活性非毒性物質を本発明の組成物に含み得る。組成物は容液、懸濁液、または投与に適した任意の形式であってよい。また組成物は典型的に無菌であり、望ましくない粒子を含まない。組成物は従来の滅菌法で滅菌される。本発明の方法では、結合剤は所定の結合部位またはレセプターの結合が可能でなければならない。免疫的に適当な経路で患者に投与され得る。例えば、結合剤は、静脈内、皮下、腹膜内、鞘内、膀胱内、皮内、筋肉内、リンパ内の経路で患者に導入され得る。組成物は溶液、錠剤、エーロゾル、または多層形態であり得る。リポソーム、長環状リポソーム、イムノリポソーム、生物分解性微小球、ミセル他はキャリヤー運搬体または分配系として使用できる。更に業界周知のexvi vo手順を用いて、患者からの血液または血清を患者から除去し、患者の血液中の抗原を精製することが好ましく、その後血液または血清を本発明の結合剤を含んだ組成物と混合し、処理した血液または血清を患者にもどす。臨床医は、最適な投与経路の決定の際に、これらの異なる経路に結びついた抗−イディオタイプおよび抗−イソタイプの応答を比べることができる。本発明は患者に結合剤を導入する方法について特定のものに限定されない。本発明の組成物は、精製された、または実質的に精製された化合物、または光力学的薬剤として役立つ化合物に結果としてなる任意の方法で製造できる。本発明の化合物は例えばひとつの化合物より多い化合物のカクテルを含む組成物を形成し得る。これらの方法は業界周知である。例えば、Liu氏他による「Synthetic studies in novel hypocrellin B derivatives」Tetrahedron ４９：１０７８５（１９９３）、およびDiwu氏他によるAnti-Cancer Drug Design,８：１２９− １４３（１９９３）。ヒポクレリン誘導体は親化合物、ヒポクレリンＢ（ＨＢ）、Hypocrella bambusae sacc．真菌の自然の産物、竹の植物病原体から容易に合成できる。親化合物は実施例に示したように合成してもよい。この化合物を合成する方法は実施例において例示している。本発明はヒポクレリン誘導体を製造し、単離し、または精製する方法を制限しない。要するに、ＨＡの合成では、粗ＨＡをHypocrella bambusae（Ｂ．およびＢｒ）のアセトン抽出物により調製できる。脂質を石油エーテルを用いて向流抽出法により除去できる。更に、精製はシリカゲルカラム、１％リン酸二水素カリウム −シリカゲル薄層クロマトグラフィー、およびアセトンからの再結晶により行なわれる。ＨＢの合成では、粗ＨＢを多量のＨＡの水酸化カリウム乾燥、ＨＣｌクロロホルム抽出物中和、ベンゼン−石油エーテルからの再結晶により調製できる。生成物は溶離剤として石油エーテル、アセトン、エタノールの６：２：１混合物を用いて、１％クエン酸−シリカゲル薄層クロマトグラフィーにかけた。ＨＢ誘導体、ＨＢＢＡ−Ｒ２（ブチルアミノ化ＨＢ）、ＨＢＤＰ−Ｒ１（２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−プロピルアミン−ＨＢ）、およびＨＢＥＡ−Ｒ１（エタノールアミノ化ＨＢ）を親化合物のフェノール性ヒドロキシル基のアミノ化により調製した。ＪＬ−１−１（構造４）をLiu氏他による「Tetrahedron」４９：ｌ０７８５（１９９３）の方法に従って調製した。これらの誘導体の吸収スペクトルをHe wlett-Packardダイオードアレイ分光光度計で決定した（図３）。細胞内取込みは急速（例えばＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２では２時間以内）、あるいはもっとかかる場合もある（例えば、ＨＢＤＰ−Ｒ１では約２０時間）。幾つかの腫瘍の間質環境は正常組織より酸性であるからある程度の選択的な腫瘍取込みは感光剤のｐＫａの変更により達成できる。本発明は、比較的なクローン産生アッセイを介して、正常細胞より癌細胞に対してより高い毒性を有する化合物を同定する方法を含む（図１２および１３）。本発明のＰＱＰ誘導体は多くの他の化合物、信号試薬、増強剤、および／又は標的剤と結合して使用できる。例えば、本発明のヒポクレリン誘導体は抗体、好ましくはモノクローナル抗体と結合する。本発明では、結合剤はレキシトロプシンまたはネトロプシン等のＤＮＡ小溝標的剤を含み、好ましくは細胞核の光毒性の標的性を高める。適当な強化剤はｐＫａ変更剤、低酸素細胞放射性感受性剤、およびマイトマイシンＣ等の生物的減少性活性化抗新生物剤を含むがこれに限定されない（好ましくは、低酸素細胞または微生物中の化合物毒性を高める作用をする）。適当な信号試薬は断片化細胞死または壊死性細胞死のマーカー、または細胞サイクルコントロールまたは遅延に内発的な規則性分子を含むが、これに限定されず、好ましくは断片化あるいは壊死性細胞死を生じて、または致死または致死損傷可能性（ＰＬＤ）の修復阻害により、化合物の光毒性を高める。上記のように、本発明の態様は結合剤−ＰＱＰ結合体（またはイムノコンジェゲイト）およびこれらの結合体の治療的使用を包含する。本発明では、結合剤とＰＱＰの結合法は任意の方法を使用できる。例えば、抗体または抗体フラグメントと感光剤との結合法は周知である。例えば、Goff氏他による「British Journa l of Cancer」７４：１１９４〜１１９８（１９９６）は感光剤をモノクローナル抗体ＯＣ１２５、ほとんどの卵巣癌に結合するＣＡ１２５抗原に特異的に結合する抗体をインキュベートすることによりイムノコンジュゲイトを製造することを開示している。この例示のイムノコンジュゲイトでは、ポリグルタミン酸がモノエチレンジアミンモノアミド誘導体に結合し、抗原結合部位から離れたモノクローナル抗体のヒンジ領域にて炭水化物部位に共有的に結合する。他の例示的な結合は、ＵＳ特許第４，７２２，９０６号および第３，９５９，０７８号に開示され、両方を参照して本発明に含める。要するに、これらの特許は特異的結合対の他の種、例えば抗体に共有的に結合する反応性の基、選択基または潜在的な反応性基を有する感光剤の提供を開示している。本発明では、ＰＱＰ誘導体は例えば酸、ヒドロキシル、酸ハロゲン化物（好ましくは臭化物）、ヒドラジン、チオール、または１級アミンを含む反応基（これらに限定されない）の官能基を有することができる。結合剤は、システイン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸、および他のジカルボン酸のアミノ酸、および他のトリーまたはポリ−官能基のアミノ酸誘導体（これに限定されない）を含む反応性基を含む。本発明の好ましい態様では、ＰＱＰはヒポクレリンＢのアミノ酸誘導体である（図１３，１４、実施例２０）。全Ｒ基は潜在的な抗体結合部位である。また、最も好ましいイムコンジュゲイトはヒポクレリンＢ誘導体６（図１４）を使用し、これは、酸、酸臭化物、ヒドラジン、チオール、１級アミン抗体結合部位（例えばＲ基）を含む。本発明の好ましい態様では、これらの誘導体の任意のものは、卵巣癌（例えばＣＡ１２５エピトープ）、乳癌（例えばＣＡ１５．３エピトープ）、または胃腸癌（例えばＣＡ１９．９エピトープ）に特異的に結合するモノクローナル抗体に結合できる。本発明では、最も好ましいイムノコンジュゲイトは卵巣癌に特異的に結合するＯＣ１２５、Ｂ４３、Ａｒ８．１またはＰＤＬ１０抗体；乳癌に特異的に結合するＤＦ３またはＡＲ２０．５抗体；胃腸癌に特異的に結合するＢ６７．４、ＮＳ１１１６、またはＡＲ１８．４抗体；に結合するヒポクレリンＢ誘導体６（図１４）である。これらの多くのものまたは他の結合剤は市販されている。当業者には分かるように、誘導体または誘導体を含む結合体の効果的な投与量は患者の免疫系の状態における疾患の重さに部分的に依存する。当業者は、種々の投与量を使用でき、周知の種々のファクターに依存することがわかる。例えば、投与量は診断と治療では異なるだろうし、一時的な抑制と管理治療とは異なるであろう。一般に、組成物は約０．１μｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（体重）またそれ以上の結合剤を含み、普通、投与量は約２００μｇ／ｋｇ（体重）である。濃度は普通少なくとも０．５％である。投与の仕方に応じて、流体体積、粘度、抗原性等にまず基づいて量を決める。結合体または誘導体の投与は期間にわたり１回より多く、好ましくは３回である。本発明の組成物は、生命の危機、または生命の危機の可能性がある重い症状の患者に使用されるので、所望ならば、過剰の結合剤を投与できる。この組成物の注入用の希釈法を含めて、薬剤組成物の実際の投与法およびプロトコルは当業者には周知である。これらの方法やプロトコルは「Re mington’s Pharmaceutical Science」Mack PublishingCo．（１９８２）に開示されているものもある。本発明の別の態様では、本発明の組成物は単独で、他の組成物と組みあわせて、または他のＰＤＴ組成物と連続して投与される。例えばＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２の細胞の取込みは急速で、先ず細胞質に分配されることが上記に記載されている。これに対して、ＨＢＤＰ−Ｒ１は約２０時間後に細胞内濃度がピークに達し、細胞膜に先ず分配される。これらの特徴により、連続的な感光剤の投与の間、光力学的治療割合を増大する可能性がある（次いで光治療される）。これらの条件下で、多数のオルガネラを標的にできる。本発明の態様では、ＰＤＴ法は、好ましくはゆっくりと取込まれる光力学的薬剤をまず投与し、次にこれよりもっと早く取込まれる光力学的薬剤を投与する。両方の薬剤は、続いて、上記のような適当な波長の光に、患者および／またはその薬剤をさらすことによって活性化される。ヒポクレリンおよびその誘導体の優れた蛍光性により、共焦レーザー走査顕微鏡（ＣＬＳＭ）を用いて、細胞内の取込みおよび分配力学をモニターする有効な手段が得られる。各薬剤は取込みや分配において独特な性質を有している（図９）(Miller氏他ｌ９９５ａ，ｂ）。ＨＢＥＡ−Ｒ１（構造３）およびＨＢＢＡ− Ｒ２（構造６）を投与した最初の２時間以内に取込みは完了される。インビトロおよびインビボでヒトの薬剤の細胞での取込み速さはLiu氏他（１９９５）およびMiller氏他（ｌ９９５ａまたはｂ）と類似のプロトコルを用いて決められる。インビボでは、薬剤の静脈注射または投与と光照射の間の理想的な時間は、好ましくは光力学薬剤の腫瘍での濃度が正常組織に関して最適な場合、典型的には約２４時間までであり、長くて４８時間程である（表２）。また本発明の態様は、酸素の有無でさらに効果のあるものもある。したがって本発明は、充分に酸素がある、あるいは部分的にまたは充分に低酸素症である固体腫瘍の治療に効果的なものもある。 Miller氏他（１９９５ａまたはｂ）と類似のプロトコルを用いて決められる。インビボでは、薬剤の静脈注射または投与と光照射の間の理想的な時間は、好ましくは光力学薬剤の腫瘍での濃度が正常組織に関して最適な場合、典型的には約２４時間までであり、長くて４８時間程である（表２）。また本発明の態様は、酸素の有無でさらに効果のあるものもある。したがって本発明は、充分に酸素がある、あるいは部分的にまたは充分に低酸素症である固体腫瘍の治療に効果的なものもある。実施例実施例１ヒポクレリンＡから得られた誘導体要するに、粗ＨＡをＨｙｐｏｃｒｅｌｌａ（ニクザキン科）ｂａｍｂｕｓａｅ（B.et Br.）Ｓａｃｃ．のアセトン抽出物より調製した。脂質は石油エーテルを用いて向流抽出により除去した。さらに、精製をシリカゲルカラム、続いて１％リン酸二水素カリウム−シリカゲル薄層クロマトグラフィー、そしてアセトンからの再結晶により行った。ＨＢをＨＡの多量の水酸化カリウム脱水により調製し、続いて、ＨＣｌクロロホルム抽出物で中和し、ベンゼン−石油エーテルから再結晶した。生成物を１％クエン酸−シリカゲル薄層クロマトグラフィーにかけ、その際、溶離剤として石油エーテル、酢酸エチル、エタノールの６：２：１の混合物を使用した。ＨＢ誘導体、ＨＢＢＡ−Ｒ２、ＨＢＤＰ−ＲＩおよびＨＢＥＡ −ＲＩを親化合物のフェノールヒドロキシル基のアミノ化により調製した。ＪＬ −１−１（構造４）をＬｉｕ氏他〔１９９３〕の方法に従って調製した。これらの誘導体の吸収スペクトルをＨｅｗｌｅｔｔ−Ｒａｃｋａｒｄダイオードアレイ分光光度計で定量した（図３）。実施例２ヒポクレリンＢから得られた誘導体下記の構造の化合物を合成する方法を以下に示す。式中、任意のまたはＭｅ基（「＊」で印）は２〜６の炭素数のアルキル基（分枝または直鎖）または他の化学基で置き換えることができる。これらの化合物および方法は抗癌剤、抗ウイルス剤、抗レトロウイルス剤、抗殺菌剤、抗真菌剤、ペリレンキノンおよびその誘導体、ヒポクレリンおよびその誘導体、ヒポクレリンＡおよびその誘導体、ヒポクレリンＢおよびその誘導体、セルコスポリン(cer cosporin)およびその誘導体、フレイクロム(phleichrome)およびその誘導体、エルシノクロム（elsinochrome）およびその誘導体、クロドラロム(cladchrome)およびその誘導体、エリスロアフィン（erythroaphin）およびその誘導体、カルホスチン（calphostin）およびその誘導体、および光力学活性を有する他の化合物を含み、これに限定されない化合物の前駆体または中間体を作るのに使用できる。前駆体を使用したＨＢの効率的な全合成を図１５に示す。市販されている３，５−ジメトキシベンズアルデヒドをＨａｕｓｅΓ氏他「J．Org.Chem.」５９：１９６７（１９９４）に示された手順に従って７つの反応段階を使って化合物５に転化した。無水ＴＨＦ中のベンゼンセレニン無水物を使用した化合物５の酸化により８７％の収率で１，２−ナフトキノン６を得た。ＴＦＡおよびＦｅＣｌ₃による化合物６の対応するペリレンキノン結合は試みたけれども成功しなかった。しかし、Ａ_c2Ｏ、ピリジン、および触媒量のＤＭＡＰの存在下で９５％の収率で調製されたそのエステルの結合により、８８％の収率でペリレンキノン７を得た。無水ＴＨＦ中のヨウ化メチルおよびＣｓＦを用いた７のメチル化により、多量の化合物８を得た。Ｋ₂ＣＯ₃およびＭｅＯＨ・Ｈ₂Ｏ溶液中の８の加水分解、続いてＣＨ₂Ｃｌ₂中のＣｒＯ₃およびピリジンを用いた酸化により、全体の収率６３％で、メチルケトン１を得た。８５％の収率で分子内アルドール縮合反応により、１から得た化合物９を４８％の臭化水素酸で選択的に脱メチル化し、１：１のエナンチオマー混合物（９０％）を得、これを天然の産物ＨＢを用いてＴＬＣ、ＩＲ、ＮＭＲのすべての点で確認した。この合成法により、他のペリレンキノン合成法が与えられる。１−アセチルオキシ−３−アセトニル−６，８−ジメトキシナフタレン（３）：この化合物を６反応段階を用いて、Ｈａｕｓｅｒ氏他「J．Org.Chem.」５９：１９６７（１９９４）に示された手順に従って、３，５−ジメトキシベンズアルデヒドから調製した。１−ヒドロキシ−３−アセトニル−６，８−ジメトキシナフタレン（４）：ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）中の３（６２４ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の溶液に水（１０ｍｌ）中のＫ₂ＣＯ₃（１．０ｇ）を加え、この混合物を２時間攪拌し、５％ＨＣｌで酸性にし、水（１００ｍｌ）で希釈し、ＣＨＣｌ₃で抽出した。結合した抽出物を水で洗浄し、その後、乾燥し、（Ｎａ₂ＳＯ₄）、ろ過し、蒸発により、生成物４を得た（５０５ｍｇ、収率９４％）。（±）−４−ヒドロキシ−５，７−ジメトキシ−α−メチルナフタレン−エタノール（５）：ＨａｕｓｅΓ氏他による「J．Org.Chem.」５９：１９６７（１９９４）に開示された手順に従ってこの化合物を調製した。（±）−３−［２−（ヒドロキシ）プロピル］−６，８−ジメトキシ−１，２− ナフトキノン（６）：乾燥ＴＨＦ（１５ｍｌ）中の５（４４０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃にてＴＨＦ（１５ｍｌ）中の７０％ベンゼンセレニン無水物（９００ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に１５分かけて滴下し、１０分間攪拌を続けた。反応混合物を水（１００ｍｌ）中に注ぎ、ＣＨＣｌ₃で抽出した。この抽出物をＨａＨＣＯ₃水溶液（１０％）と水で洗浄し、その後で乾燥した。蒸発に続いて、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（２０：１ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルのカラムクロマトグラフィーを行い、生成物６（４０２ｍｇ、収率８７％）をオレンジ色の固体として得た。ｍ．ｐ．は７０〜７２℃であった。３−アセトニル−６，８−ジメトキシ−１，２−ナフトキノン（２）：この化合物は６に対して記載したのと類似の方法で４から収率８１％で調製した。この化合物は不安定であり、クロマトグラフィーで精製できないが、ＣＨＣｌ₃から再結晶でき、ｍ．ｐ．は１８５℃（ｄｅｃ．）であった。ＣＨＣｌ₃（１０ｍｌ）中の６（３００ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｃ₂Ｏ（１．５ｍｌ）、ピリジン（１．５ｍｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１００ｍｇ）を加えた。この反応混合物を３時間室温で攪拌し、Ｈ₂Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、そしてＣＨＣｌ₃で抽出した。この抽出物を１ＮＨＣ１とＨ₂Ｏでそれぞれ洗浄した。残査を溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（５０：１ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、エステル（３３０ｍｇ、収率９５％）ｍ．ｐ．６２〜６４℃を得た。１，１２−ビス［２−（アセチルオキシ）プロピル］−４，６，７，９−テトラメトキシ−２，１１−ジヒドロキシ−３，１０−ペリレンジオン（７）：ＣＨＣｌ₃（４．０ｍｌ）およびＴＦＡ（１．５ｍｌ）中のナフトキノン（２００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の溶液をＮ₂下、２０分間、室温で攪拌した。ＣＨ₃ＣＮ（５．０ｍｌ）中の無水ＦｅＣｌ₃（５１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり１時間にわたり滴下した。ＴＬＣによりモニターし、この反応に出発材料は残っていないことが示された。得られた混合物をＨ₂Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、ＣＨＣｌ₃で抽出した。この抽出物をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥し、（Ｎａ₂ ＳＯ₄）、ろ過し、蒸発させた。溶離剤としてＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ（５０：１ｖ／ｖ）を用いて残査についてシリカデルのクロマトグラフィーを行って、生成物（１７５ｍｇ、収率８８％）を得た。１，１２−ビス［２−（アセチルオキシ）プロピル］−２，４，６，７，９，１１−ヘキサメトキシ−３，１０−ペリレンジオン（８）：無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の７（２５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液にＣｓＦ（５００ｍｇ）およびヨウ化メチル（０．５ｍｌ）を加えた。室温で一晩攪拌した後、反応混合物をＨ₂Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、ＣＨＣｌ₃で抽出した。結合した抽出物を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、ろ過し、蒸発させた。溶離剤としてＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ（６０：１ｖ／ｖ）を用いて残査についてシリカデルクロマトグラフィを行って、生成物（２４５ｍｇ、収率９４％）を得た。１，１２−ビス［２−（ヒドロキシ）プロピル］−２，４，６，７，９，１１− ヘキサメトキシ−３，１０−ペリレンジオン：ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中の８（１６０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液にＨ₂ Ｏ（５ｍｌ）中のＫ₂ＣＯ₃（５００ｍｇ）を加え、この混合物を一晩攪拌し、５％ＨＣｌで酸性化し、Ｈ₂Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、ＣＨＣｌ₃で抽出した。結合した抽出物をＨ₂Ｏで洗浄し、その後、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、ろ過し、蒸発させて生成物（１３４ｍｇ、収率９６％）を得た。１，１２−ビスアセトニル−２，４，６，７，９，１１−ヘキサメトキシ−３，１０−ペリレンジオン（１）：ＣＨ₂Ｃｌ₂（５．０ｍｌ）中の乾燥ピリジン（３００μｌ）の溶液に、ＣｒＯ₃ （３００ｍｇ）を加え、この後、この混合物を１５分間攪拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂ （２．０ｍｌ）中の上記化合物４０ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、急速に１分間攪拌した。得られた溶液をＨ₂Ｏで洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、ろ過し、蒸発させた。溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（５０：１ｖ／ｖ）を用いて残査についてシリカゲルクロマトグラフィーを行って生成物（２６ｍｇ、収率６６％）ｍ．ｐ．１７１〜１７３℃を得た。３−アセチル−４，６，８，９，１１，１３−ヘキサメトキシ−２−メチル−１Ｈ−シクロヘプタ［ｇｈｉ］ペリレン−５，１２−ジオン（９）：ＭｅＯＨ（３．０ｍｌ）中の１（２０ｍg、０．０３５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてＨ₂Ｏ（１．０ｍｌ）中のＬｉＯＨ（１００ｍｇ）を加えた。この反応混合物を室温で４０分間攪拌し、Ｈ₂Ｏ（１００ｍｌ）で希釈し、１ＮＨＣｌで酸性化し、ＣＨＣｌ₃で抽出した。結合した抽出物を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、ろ過し、蒸発させた。溶離剤としてＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ（１５：１ｖ／ｖ）を用いて残査についてシリカゲルクロマトグラフィーを行い、生成物（１６．５ｍｇ、収率８５％）ｍ．ｐ．１５４〜１５６℃を得た。ヒポクレリンＢ（ＨＢ）：ＣＨＣｌ₃（２ｍｌ）中の９（１５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）の溶液に、１．０ｍｌの４８％ＨＢｒを２５℃にて１時間攪拌しながら加えた。この混合物を水（１０ｍｌ）中に注ぎ、ＣＨＣｌ₃で抽出し、乾燥した。この残査を展開溶媒としてＣＨＣｌ₃を用いて予備のＴＬＣにより精製し、１：１の混合物のエナンチオマーＨＢ（１３．０ｍｇ、収率９０％）を得、これは天然の産物ＨＢを用いて全観点（ＴＬＣ、ＩＲおよびＮＭＲ）において確認した。他の物により開示された方法に基づくＨＢ誘導体の製造への別の合成アプローチを図１６に示す。要するに、メチルケトンのレトローアルドール縮合によるＨＢの単純化により化合物１が得られる。レトロ合成法における１の２つのビアリール結合の開裂により、３−アセトニル−６，８−ジメトキシ−１，２−ナフトキノン（化合物２）を得た。Ｔａｋｕｗａ氏他による「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」３１５（１９９３）は３−（２−オキソアルキル）−１，２−ナフトキノンを調製するためのワンポット（ｏｎｅ−ｐｏｔ）光化学反応を開示するが、この方法はナフトキノン中の２つのメトキシ置換基が光活性を著しく下げるため、前駆体２の収率がきわめて低くなる。Ｈａｕｓｅｒ氏他による「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」５９：１９６７（１９９４）はカルホスチン（ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ）Ｄの全合成を開示し、これによると、全体の収率の高い前駆体３の調製法が得られる。３の加水分解に続いて、酸化を行い、高収率で２を得る。前駆体２は不安定で、ＦｅＣｌ₃またはＴＦＡによる次の結合反応にただちに使用されたが、予測した精製物は得られなかった。実施例３ヒポクレリンＢの直接アミノ化ＨＢ（５０ｍｇ）をアミン（１ｍｌ）を含むエタノール（５ｍｌ）に溶解し、得られた溶液を使用した個々のアミンに応じて６〜１８時間還流した。この混合物を氷水に注ぎ、１０％塩化水素酸を用いて中性化し、クロロホルムで抽出した。クロロホルム層を水で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、蒸発させて、青色の固体を得た。この固体を先ず溶離剤としてジクロロメタンーメタノール（傾斜比）を用いて１％ＫＨ₂ＰＯ₄−シリカゲルカラムのクロマトグラフィーにかけ、幾つかの成分を得た。各成分を展開剤として６：１：１の石油エーテル一酢酸エチル−エタノールを用いて１％のクエン酸−シリカゲルプレート上で２回再クロマトグラフィーにかけ、個々の誘導体を得た。実施例４エタノールアミンを用いたヒポクレリンＢのアミノ化上記の方法に従って、エタノールアミンを用いてＨＢの反応を行い、５つの生成物を得た。化合物８（３ＡまたはＨＢＥＡ−Ｒ２として示される図２の構造８）および化合物３［（ＨＢＥＡ−Ｒ１または３Ｂとして示される図２の構造３）（異性体Ｂ）］（Ｄｉｗｕ氏他１９９３）を確認し、以下のような特性を得た。実施例５ブチルアミンを用いたヒポクレリンＢのアミノ化構造６（ＨＢＢＡ−Ｒ２または４Ａとしても示される図２構造６）および構造９（４Ｂとしても示される図２の構造９）の合成（Ｄｉｗｕ氏他１９９３）。上記５つの生成物を得た手順に従って、ブチルアミンを用いてＨＢの反応を行う。これら２つの化合物を以下のように固定した。実施例６ＪＬ−１−１（図２中の構造４）の合成ＪＬ−１−１をＬｉｕ氏他による「Tetrahedron」４９：１０７８５（１９９３）に開示された方法に従って調製した。実施例７ＨＢＤＰ−Ｐ１（図２中の構造７）の合成ＨＢＤＰ−Ｒ１をＤｉｗｕ氏他による「J.Photochem.Photobiol.B:Biol．」１８：１３１（１９９３）に開示された方法に従って調製した。実施例８放射能標識化誘導体本発明は放射能標識化ＨＢおよび誘導体の調製法を提供する。１４−Ｃ−ＨＢの合成法はＬｉｕ氏他（１９９５）により開示されている。ＨＢを１３０ｍｇの無水塩化アルミニウムを含んだ６．０ｍｌの無水ベンゼン中に溶解し、この溶液を窒素下で１時間還流する。この混合物を１０％フッ化アンモニウム水溶液中に注ぎ、クロロホルムで抽出した。クロロホルム層を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ ＳＯ₄）、蒸発させて図４に示した化合物２，３および４を含んだ赤色固体を得た（ＤｉｗｕおよびＬｏｗｎ１９９３ｂ）。放射能標識化ヒポクレリンＢの合成を図４に示す。この赤色の固体を２００ｍｇのフッ化セシウムを含んだ２．０ｍｌの無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解し、その後、１．０ｍｌの無水ＴＨＦ中の¹⁴Ｃ −ヨウ化メチル（１．０ｍＣｉ）を密封フラスコに注入した。この混合物を室温で２４時間攪拌し、攪拌を室温でさらに１２時間続けて、０．３ｍｌのヨウ化メチルを加えた。得られた溶液を水に加え、クロロホルムで抽出した。図４の化合物１．５、および６を含む有機層を約５．０ｍｌに窒素流蒸発により濃縮した。４８％臭化水素酸（２．０ｍｌ）をクロロホルム溶液に加え、混合物を室温で３０分間攪拌した。この反応混合物を水に注ぎ、クロロホルムで抽出した。クロロホルム層の蒸発により赤色固体を得た。この固体を溶離剤としてクロロホルムを使用してシリカゲルのクロマトグラフィーにかけ、放射能標識化ＨＢを得た。その後、この化合物を使用して記載の手順に従ってヒポクレリンＢの放射能標識化誘導体を合成した。これらの放射能標識化化合物を使用して組織中の薬剤分布を研究し、薬剤分配系を開発し証明するのに使用できる。実施例９他のアミノ化生成物炭素数２〜１０を含むアルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコールであるＲを有する他のアミノ化化合物を記載の手順に基づいて容易に合成できる。当業者は適当な溶媒、他の適当な試薬、および条件を過度の実験を行うことなく容易に確かめ決定できる。一重項の酸素の収量は９，１０ジフェニルアントラセン（ＤＰＡ）ブリーチング法により定量した（ＤｉｗｎおよびＬｏｗｎ１９９２）。試供感光剤を所定の波長で示し、ＤＰＡにより¹Ｏ₂が受取られるので３７４ｎｍのＤＰＡ吸収ピークにおける減少力学を追跡した。インビトロで毒性に対してスクリーンされた合成ヒポクレリン化合物の物理的および化学的性質を表１に示す。暗細胞毒性および光強化の非常に好ましい特性を有する化合物を表１に太字で示す。ヒポクレリンおよびその誘導体の分子量の平均は約６４０ダルトンである（範含んでいると思われるヘマトポルフィリン（２−８ポルフィリン単位）の主にエステルおよびエーテル結合のオリゴマーに対する約１，１３０〜４，５２０ダルトンのより高い分子量と対照をなす。この研究で報告されたヒポクレリンは赤色スペクトル領域に吸収バンドを有する（図３）。６３０ｎｍ付近に有意な吸収を有する化合物は表１の吸収ピーク欄に星印を付けて示す。親化合物、ＨＡおよびＨＢ、および感光剤である４つの有効な同族体は図３に示す。一重項酸素収量（表１）は光強化とあまり強い関係がないことを示している。実施例１０腫瘍治療Ｂａｌｂ／ｃマウス／ＥＭＴ６／Ｅｄ腫瘍モテルを用いて、本発明はＨＢＥＡ −Ｒ１（構造３）および臨床的に関連した６３０ｎｍの光の経皮的投与量（１００ｍＷのフル−エンス（ｆｌｕｅｎｃｅ）割合）を使用した腫瘍治療を示した。これらの結果を図８にまとめる。光処理の条件は高熱効果を示さず、１００Ｊ／ｃｍ²の光投与量は試験した日付の１０の動物のうちの９において８０日治療した。事実、犠牲的な時間（処理後１００日）まででさえ、腫瘍の再成長の証拠を示した動物はいなかった。５０μｍｏｌ／ｋｇの一定の感光剤「全体」投与量では、光投与量の削減は腫瘍抑制の効果が下がった。ＨＢＥＡ−Ｒ１（構造３）投与の後の約２時間の光分配により目立つ皮膚の光毒性なく、良好な腫瘍抑制を示した。乾紅斑およびその次の焼痂形成に続いて、処理された腫瘍をおおう皮膚は３０時間以内に正常にもどった。ＨＢＥＡ−Ｒ１ＰＤＴ（≧ＩＯＯＪ／ｃｍ²６３０）は４８時間までの等級間隔における５０μｍｏｌ／ｋｇＨＢＥＡ−Ｒ１で処理した腫瘍のないＢａｌｂ／ｃマウスに皮膚の応答をおこさなかった。これらの光性という主な制限を克服することを示す。ヒトの腫瘍の局所的な低酸素症に対する可能性および光力学効果に対する酸素の要求のために、光毒性に対するＩ型およびII型の光化学反応の相対的な寄与を理解するのに重要である。ＰＤＴの間の気体相におけるきびしく酸素濃度を制御した懸濁培養中のＥＭＴ６／Ｅｄ細胞における発見はII型反応の優位性を明らかにした。にもかかわらず、酸素の不存在下で細胞をＨＢＥＡ−Ｒ１またはＲ２（構造６）で感光性にした場合にＩ型の光毒性の成分が存在する。実施例１１感光剤の細胞の取込み螢光収量対濃度の標準曲線を、１ＮＮａＯＨ中の０．４ｍｌの０．５％Ｔｗｅｅｗ２０でペトリ皿から除去した標識化していないＥＭＴ６／Ｅｄ細胞と混合した３．６ｍｌジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解した選択化合物について作成した。この手順により、実際の細胞の取込みアッセイを用いた標準曲線と同等である。ヒポクレリンＢで２時間標識化した細胞および選択同族体を３回リン酸緩衝塩で洗浄し、過剰な薬品を完全に除去し、上記のペトリ皿から除去し、ＤＭＳＯに添加した。洗浄の手順を分光光度計でモニターした。ペトリから細胞を除去するのに使用したＴｗｅｅｎ２０−ＮａＯＨ溶液は完全に細胞融解をひきおこし、細胞からヒポクレリンの抽出をおこなった。蛍光をＳｐｅｘＦｌｕｏｒｏＭａｘ^TM フルオロメーターで測定した。光および検出スリット幅は１ｎｍに設定された。最適な励起波長を各化合物について定量した。例えばＨＢ励起は４３８ｎｍ、ＨＢＢＡ−Ｒ１は４１１ｎｍ、ＨＢＥＡ−Ｒ１は３５２ｎｍ、ＨＢＤＰ−Ｒ１は４１０ｎｍ、およびＪＬ−１−１は５９４ｎｍであった。１０⁶細胞当りの取込みは個々の取込曲線の回帰分析により定量され、以下に概要を示す。標準２時間培養間隔を選択して経験的に選択した細胞毒性／光毒性前培養を合わせた。螢光共焦顕微鏡によりなされた細胞内取込み力学実験により、細胞内取込みは２時間培養間隔のうちに完成することがわかった（図９）（ＭｉｌｌｅΓ氏他１９９５ａ，ｂ）。実施例１２細胞系および培養条件ＥＭＴ６／Ｅｄマウス腫瘍細胞は数年間発明者によって増殖された［Ｃｈａｐｍａｎ氏他１９８３］。それらは９５％空気と５％ＣＯ₂からなる湿った雰囲気中で３７℃にて、１２．５％胎児子牛血清を含むＷａｙｍｏｕｔｈの培地で単層培養として保持される。それらは指数関数的な成長を保持するために２回週毎に移動しなければならない。年当り最適３回、細胞系はＢＡＬＢ／ｃマウスの固形腫瘍として継代される。新しく継代されたＥＭＴ６／Ｅｄ細胞系は再確立され、インビトロで少なくとも２週間増殖し、その後実験に使われる。この手順は悪性の表現型を保持する。実施例１３感光剤およびクローン産生アッセイ精製したヒポクレリン誘導体を凍結乾燥した形態で得た。各実験の前日、指数関数的に成長するＥＭＴ６／Ｅｄ細胞（２．０ｍｌ中２５，０００／ｍｌ）を３．０ｃｍ組織培養ペトリプレートにまいた。感光剤を実験の日まで凍結乾燥の形態で保持し、その時、それらをＤＭＳＯに溶解した。貯蔵感光剤−ＤＭＳＯ溶液をHankの平衡塩類溶液で希釈し、感受性研究用の１２．５％胎児子牛血清を含んだWaymouthの培地中の細胞に加えた。培地中のＤＭＳＯの最大濃度は１％（ｖ／ｖ）であった。クローニング効率におけるＤＭＳＯの効果は適当な濃度のＤＭＳＯを含むが感光剤を含まない一連の皿でコントロールされた。予備的な研究により胎児子牛血清の存在は毒性に重大な影響を与えないことがわかる。ＥＭＴ６／Ｅｄ細胞を２時間等級化した投与量の試供化合物にさらした。その後、試供化合物をHankの平衡塩類溶液での洗浄を繰り返して除去した。その後、細胞を室内の空気中で等級化した投与量の６３０ｎｍの光で単層として照らした（以下を参照のこと）。細胞をトリプシンで処理し、計数し、Waymonthの培地に既知の密度でプレートした。培養物を６日間インキュベートし、標準クローン産生アッセイにかけた〔PuckおよびMarcus１９５６〕。各化合物の暗毒性特性を別々に評価し、２時間等級化投与量感光剤に細胞をさらす以下の類似の手順をおこなった。細胞を感光剤にさらす間または感光剤を含んでいる間、細胞を光にさらすことを避ける予防措置をとった。生残り曲線最小の３つの独立実験を示す。データは必要に際してプレーティング効率に対して補正され、光毒性曲線を各薬品濃度に対する暗毒性について補正した。実施例１４細胞培養物の照射 Kiton Red色素(Exciton，Dayton，Ohio)を有する２０ワットのアルゴン調節可能色レーザー装置（Coherent，Innova−２０，Model CR５９9）を使用して６３０ｎｍにて光を発生した。波長をモノクロメーターを確かめて、実験をおこなった。光線を１本の０．４ｍｍ石英光ファイバーで送り、９．３ｃｍの上記細胞培養皿に向けた。ファィバーの端を照射テーブルの平らな表面を均一に照らすレンズに固定した。照射の間、テーブルを回転させて均一な光分布を最適化した。細胞培養物の表面における投与量をパワーメーター（Coherent−２１０）により１Ｊ／cm²に決めた。照射は周囲温度（〜２３℃）でおこない、最も長くさらした時間は１分であった。感光剤の取込み研究をクローン産生アッセイで用いたのと同じインキュベーション条件下でおこなった。図５ａと５ｂはそれぞれ標準曲線と細胞取込みデータを示す。暗中で１０⁶細胞あたり５０％の致死率になるのに必要な感光剤のモル量を暗毒性生残り曲線図６ａの観察および図５ｂの適当な細胞外薬品濃度を達成する細胞内濃度の観察から評価した（以下参照）。ＨＢに対して、この値は８ナノモルであり、ＨＢＥＡ−Ｒ１は１２０ナノモルであり、ＪＬ−１−１は３２ナノモルである。６３０ｎｍの光を照射すると５０％の細胞を殺すのに必要な細胞内感光剤の量が著しく減少した。１Ｊ／cm²までの光投与量に対して、１６０pmo le／１０⁶細胞のＨＢまたは結合薬剤において５０倍の減少が必要である。ＨＢＥＡ−Ｒ１は１nmole／１０⁶細胞（１２０倍より少ない）で、ＨＢＤＰ−Ｒ１は１１nmole／１０⁶細胞で、ＪＬ−１−１は０．３２nmole／１０⁶細胞、５０％致死率の１００倍の光強化にて効果がある。試験した化合物の中で、クローン産生アッセイでＬＤ₅₀の濃度範囲は約１０μMから１００μMより多い（平均は約２５ μM）。６３０ｍｍの光の存在下でヒポクレリンのＬＤ₅₀感光投与量を減少した場合もある。（０．１５〜＞６μM、平均約３μM）。インビトロで５００倍の光強化まで例証されたＨＢＢＡ−Ｒ２またはＨＢＥＡ−Ｒ１，ＨＢＤＰ−Ｒ１（図２構造７）はそれぞれ１６７倍、５０倍および３５倍の光強化ファクターにより特徴付けられる。クローン産生アッセイに基づく光強化値は化合物について一般に薬剤取込みに比例して変わり、両値を化合物について決定した。４つのヒポクレリン誘導体のインビトロの暗毒性の生残り曲線を図６ａに示す。エラーバーは各化合物に対する３つの独立の実験からの５回の培養プレートの標準偏差を示す。各誘導体は特徴的な細胞毒性を有する。ＨＢＢＡ−Ｒ２とＪＬ −１−１は試験した濃度範囲内（≦８０μM）の５０％致死率を示さなかった。ＨＢＤＰ−Ｒ１は４０μMの過剰な濃度で５０％の細胞死をまねいた。ＨＢＥＡ −Ｒ１は２０μMの範囲で効果的である。表１の化合物の多くは光強化され、これらの化合物の多くに対してのＬＤ₅₀はＨＡまたはＨＢより低い。癌細胞は正常な細胞よりわずかに酸性のものがある。従って、ｐ７．０よりｐＨ６．５にてより活性な化合物が癌治療に望ましいこともある。ＨＢ（図１２ｃおよびｄ）及び他の誘導体の幾つかはｐＨ６．５（±０．５）で最も活性であり、酸性の細胞でより活性である。一方ＥＭＴ６／Ｅｄ細胞を殺すＨＡの能力はｐＨ５．５〜７．５の間の変化には影響を受けないことがわかる（図１２ａとｂ）。ＨＢＢＡ−Ｒ２の優れた光強化特性および優れた感光性は暗細胞毒性が著しく低いためである（図６ａとｂ）。ＨＢＥＡ−Ｒ１は０．１５〜０．３μM、０．２５〜１．００Ｊ／cm²の範囲における相反の薬剤−光投与量を有する別の優れた感光剤である（図６ａおよびｃ）。図６ｄのデータはＨＢＤＰ−Ｒ１のＬＤ₅₀ または光毒性が０．７５Ｊ／cm²、６３０ｎｍ光の存在下で０．５〜２．５μMの範囲にあることを示している。最後に、ＪＬ−１−１の毒性を図６ｅに示す。再び、薬剤と光投与量の間に相反の関係があり、２．０〜４．０μMの薬剤濃度範囲で優れた光毒性を有する。ＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２の活性は酸素レベルによって影響を受ける（図１０）。両化合物は酸素がないか低酸素レベルで細胞を殺すことができる。低酸素レベルでは高酸素レベルの場合より、より多い光投与量が細胞を殺すのに必要である。これらの化合物は低く酸素レベルで細胞を殺せるので、低酸素症が存在し得る固形腫瘍の処理に適している。実施例１５親構造の部位特異的修飾親ヒポクレリンの基本的な構造は部位特異的修飾を受けやすい（DiwnおよびLo wn１９９０）。光力学的治療に対する感光剤としてのヒポクレリンの主な利点は単量体の形態で純粋に合成できるところにある。この特徴のおかげでインビトロの光毒性のメカニズムについての研究が非常に容易になる。しかし、主な利点は単純さにあると思われ、簡単に薬力学の研究ができる。低分子量なので組織中で急速に分布できる。オクタノール−水分配係数は部位特異的変更を容易にし、この特徴は等級化した疎水性の一連の誘導体の合成を促進するであろう。例えば、ＨＢＥＡ−Ｒ１とＨＢＤＰ−Ｒ１の側鎖にそれぞれ末端ヒドロキシルと第４級窒素原子を加えると水溶解性が増す。この性質は血漿タンパクとリポタンパクとの会合、腫瘍と正常組織の分布および取込みおよびクリアランスの力学に影響するだろう。ＨＢＢＡ−Ｒ２およびＨＢＢＡ−Ｒ１を産出するフェノール性ヒドロキシルのブチルアミノ置換はＨＢと比べて６倍以上吸光係数（ε）が上がり、同時に７〜１０倍光毒性が上がる。同じ置換で親化合物と比べて少なくとも５倍の細胞毒性の低下があった。ＨＢＥＡ−Ｒ１になるエタノールアミン置換は同程度ε を高め、付随して光毒性が高まる。最後に、ＨＢのフェノール性ヒドロキシルの２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピルーアミノ化はεにおいて４．８倍高まり、光毒性活性も高まる。これら３つの修飾物は実際には一重項酸素量を減少させ、種々の程度になり、高められた光毒性は細胞内感光剤分布の変化に関係し得、光毒性種の標的化が有利になる。日付けにスクリーンされた２５以上のヒポクレリン誘導体のうち、全てにおいてインビトロにおける許容できるレベルの細胞毒性を示した。少なくとも７つの化合物が１０倍光強化し、４つは例外的な光強化能を有する。細胞毒性または光強化の所定の程度に作用するのに必要なヒポクレリ低分子量特性を考慮すると、単量体の形態としての優位性を示し、本発明者らは伝統的なポルフィリンの長期にわたる薬剤前培養の時間に固執する必要がないと考える。前培養力学研究により、間隔に対する前培養時間を２４時間まで変更することにより、５０％細胞毒性や細胞を殺すための光強化を及ぼすのに必要な薬剤濃度について大きな影響を与えないことを確認した。最近の蛍光共焦顕微鏡研究により、試験したほとんどの化合物に対して、取込みは２時間培養の期間内に完成されることがわかる。力学研究は潜在的な感光性化合物の未成熟拒絶を避けるために重要である。これらのインビトロのクローン産生スクリーニングアッセイにより、ヒポクレリン誘導体となる可能性のある、より良い物理化学的性質（および典型的に細胞毒性および光強化）を有する化合物の分別法が提供される。このアプローチは、細胞毒性および光強化に影響を与えるのに必要な感光剤の濃度範囲を評価するのに役立ちかつ効果的である。この方法は前診療および診療の評価に適する化合物を選択するのに使用できる。他の機構的研究は細胞サイクルについての感光剤およびＰＤＴの効果に関する。ＨＢＥＡ−Ｒ１及びＨＢＢＡ−Ｒ２に対する予備的な発見は、光処理下あるいは光処理なしで、主な細胞サイクル摂動を示さなかった。この発見は、共時的または選択的毒性を引きおこす処理は、残りのＰＤＴ耐性腫瘍細胞集団の原因となるので、重要である。本発明者らはこれら両方の感光剤がＰＤＴの次に実質的な断片化細胞死を促進する証拠をも発見した。ＥＭＴ６／Ｅｄ単層細胞の制御および処理物をヨウ化プロピディウム（propidium）染色およびゼロ積分磁場電気泳動（ＺＩＦＥ）にかけた。両方の技術によって、ＰＤＴ毒性の主な貢献者としての断片化を示すデータを得た（図１１）。実施例１６インビボ研究本発明者らは、選択した化合物の推定される組織的毒性および薬剤力学特性を評価するためにネズミにおいてインビボ研究をした。これらの化合物は脂肪親和性であり、水溶液中で凝集する傾向がある。リポソーム形式ではない薬剤の投与の好ましいルートは腫瘍の真近への注射あるいは静脈注射（ｉｖ）である。ＨＢのＢａｌｂ／ｃＥＭＴ６／Ｅｂ細胞への静脈注射（ｉｖ）の後、腫瘍における薬剤の最大濃度は注射時と注射後２時間の間最も高かった（表２）。細胞取込みのこの時期はインビトロのデータと一致する（図９ａ）。皮膚におけるＨＢのレベルは薬剤投与後直ちに低下し、薬のほとんどは２４時間以内に体内から排出された（表２）。ＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２の予備的な分析はこれら２つの化合物が６８８ｎｍにてインビトロで重要な有効性を有することを示す。等級化した投与量のＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２は、それぞれ３１および３９ｍｇ／ｋｇ体重の最大値まで、（５０μM）、Ｂａｌｂ／ｃマウスに投与された。ＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２を用いたラットにおける急性および慢性の毒性研究は、７．５ｍｇ／ｋｇ全体重１１〜１２μMを含む等級化した投与量に有意な影響を与えないことを示す。急性または慢性毒性（６０日）の問題は、これらの薬剤の５０μMの全投与量について観察されなかった。最初の終点において、コントロールの動物と比べてグルーミング、ハンチング、変った歩き方、無気力、攻撃、呼吸速さ、体重等の挙動や物理的サインを伴った。実施例１７レーザー光波長および投与量薬剤濃度と光投与量は腫瘍の治療には重要である。ＥＭＴ６／Ｅｄ腫瘍でＨＢＥＡ−Ｒ１を５０μｍｏｌ／ｋｇ体重で投与されたＢａｌｂ／ｃマウスに種々の量で光を投与した。６３０ｎｍの光を１００Ｊ（約１０分間）受けたマウスは約９０％腫瘍が治った。６３０ｎｍの光を５０Ｊ受けたものは４０％治っただけであった。照射量が少ないと治癒率も低い（図７および８）。本発明は４００と８５０ｎｍの間の波長の存在下で癌治療を高める方法を提供する（図３および表１または個々の化合物の最適波長参照）。多くの化合物に対する吸収スペクトルを図３に示す。各化合物の主な吸収ピークは表１に示す。これらの化合物の多くは６３０ｎｍの付近（６００〜７００ｎｍ）に有意な吸収を有する。最適な波長は各化合物によって異なる（表１）。少なくとも６３０と６８８ｎｍの間の波長は、ＨＢＥＡ−Ｒ１およびＨＢＢＡ−Ｒ２について、細胞を殺すことができる。深く大きい腫瘍にはより長い波長が好ましい。表面の腫瘍には、貫通性が低いのでより短い波長または緑のスペクトルの使用がより適当である（Ｎｓｅｙｏ氏他、１９９３）。より高波長にて光強化されるこれらの化合物の効力はＰＤＴで治療できる組織のサイズを増し、ＰＤＴを用いて治療する深さを増す。ファイバー光プローブはレーザー光を向けるのに使用できる。また、適当な光源およびシールドを用いて光を選んだ領域に配ることができる。膀胱の治療法はＮｓｅｙｏ氏他により開示され（１９９３）、この方法は表１または図２の化合物およびここに記載の薬剤投与量と波長を用いて使用できる。局所へのあるいは標的抗原を用いた薬剤の適用に対しては、適当ないくっかの方法がある。この分配法は薬剤−リポソーム形式、モノクローナル抗体−リポソームのような薬剤−モノクローナル抗体分配系からなり、標準脂肪親和性皮膚クリームを用いて、露出した表面に適用する。薬剤は局所的に適用され、または薬剤の投与経路は腫瘍内注射または経口により静脈内、腹膜内、胸郭内、血管内を利用できる。実施例１８組成物分配これらの化合物は細胞に、従来のおよび「スティールス(Stealth」リポソームを含むリポソーム−媒介薬剤分配および特異的な器官は癌タイプを標的とするために設計されたイムノリポソームを介して分配できる。例えば、表面にモノクローナル抗体（ｍＡｂ）４８−１２７を付着した図２の化合物のうちのあるものを含むリポソーム（Ｙ．Ｆｒａｄｅｔの研究所より）を膀胱癌を標的とするのに使用できた（Ｈａｒｖｅｎ氏他、１９９２）。４８〜１２７はヒト膀胱転移性細胞癌腫（ＴＣＣ）およびＡＹ−２７ラットＴＣＣの両方上で発見された表面グリコプロテインを認識するｍＡｂである（Ｆｒａｄｅｔ氏他、１９９２，１９８６；ＦｒａｄｅｔおよびＣｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ，１９９３；Ｒａｏ氏他、１９９３）。スティールスイムノリポソームの調製法の例を次に示す。特別な薬剤を含むリポソームは水素化大豆ホスファチジルコリンおよびコレステロールおよび５％ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（ポリエチレングリコール−ジエステアロイルホスファチジルエタノールアミン）からＡｌｌｅｎ氏他（１９９１）によるプロトコルを用いて調製できる。次に抗体を、チオエステル結合によりＰＧＥ末端に共有結合的に付着させることがき、詳細はＡｌｌｅｎによる（１９９４）。リポソームおよびイノムリポソームを調製する多くの他の方法は文献や特許に開示されており、これらの薬剤に適したキャリヤーとなるであろう。リポソームおよびイムノリポソームは公知の方法でここに記載した１つまたはそれ以上の化合物を含んで作ることができる。当業者は適当な溶媒、試薬、条件を容易に決定できる。実施例１９新規なＰＤＴ感光剤の固定および試験法望ましいＰＤＴ感光剤の特性は以下の特性を１またはそれ以上含んでいる。すなわち、所望の深さまで組織を貫通する波長において光をよく吸収すること（６００〜８５０ｎｍの波長は皮膚を何ｍｍも貫通できる）、ｐＨ不活性な化合物であること、正常な組織のｐＨでは活性が失われるか下がること、しかし、処理されるべき細胞や器官のｐＨでは活性であるか活性が上がること、体からすぐに排出される化合物であること、固体の腫瘍を治療する化合物の場合には、腫瘍細胞低酸素症の問題に関連して、酸素の有無にかかわらず作用活性を有すること。感光剤は低暗細胞毒性および細胞損傷のすぐれた光強化性を有する必要がある。ＰＤＴ毒性効果は壊死性、断片化細胞死、腫瘍脈管血行停止、脈管ベッドによりあられる。実施例２０接合目的に対するヒポクレリンＢのアミノ酸誘導体の合成ａ．２５ｍｌの４ＭのＮａＯＨ水溶液中の１（７．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）の冷却した溶液（氷浴）に、ゆっくり、交替に、クロロギ酸ベンジル（１７ｇ、１００ｍｍｏｌ）および２５ｍｌの４ＭＮａＯＨ水溶液（各々５つの部分で）を３０分かけて加えた。得られた混合物を濃ＨＣｌで酸性化し、沈殿物をろ過し、乾燥した。クロロホルムからの再結晶により純粋な生成物（２）を７２％の収率で得た（１５．１ｇ）。ｂ．ジクロロメタン（１００ｍｌ）中の２（６．３ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液を −５℃に冷却（氷浴）し、濃Ｈ₂ＳＯ₄（０．３ｍｌ）を加える。この溶液をイソブテンで飽和し、その後、室温で４８時間攪拌する。過剰なイソブテンを水ポンプで除去し、有機層を水（２ｘ、１００ｍｌ）、５％重炭酸ナトリウム水溶液（２ｘ）１００ｍｌ）、水（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥した（Ｎａ₂ＳＯ₄）。減圧下で溶媒を除去し、オイルとして３を生成した。収率８５％、６．８ｇ。ｃ．室温で２．０ｇの５％Ｐｄ−Ｃの存在下および加圧下で８０ｍｌの無水アルコール中の３（７．９５ｇ、３０ｍｍｏｌ）を３時間で水素化した。触媒を除去した後、得られた溶液を減圧下で約３０ｍｌに濃縮し、６０ｍｌの酢酸エチル中のリン酸（２．５ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。有機層を除去し、蒸発させ、未反応の３を得た（０．４ｇ、５％）。水層をＮａＯＨ（１．４ｇ）でアルカリにし、その後、酢酸エチルで抽出し（３ｘ、５０ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で蒸発させて、４を収率75％で得た（２．９７ｇ）。ｄ．ヒポクレリンＢ（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）および４（５０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）の混合物を２４時間アセトニトリル中で還流した。減圧下で溶媒を除去し、溶離液としてクロロホルム：メタノール（６０：１ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、５を得た（収率７０％、３５ｍｇ）。ＩＲ，ＮＭＲおよびＦＡＢ−ＭＳにより生成物が単付加物であることが示された。ｅ．ジクロロメタン（３０ｍｌ）中の５（５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ゆっくりトリフルオロ酢酸（１６ｍｇ、０．０１ｍｌ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間攪拌した。その後、混合物をジクロロメタン（２ｘ、３０ｍｌ）で抽出し、水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で溶媒を除去し、６を得た。溶離剤としてクロロホルム：メタノール（３０：１，ｖ／ｖ）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、生成物６を得た（収率８０％、４６ｍｇ）。ｆ．１５ｍｌのジクロロメタン中の６（５０ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）および臭化チオニル（１７．３ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１．５時間攪拌した。その後、有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で溶媒を除去し、７を得た。溶離剤としてクロロホルム：メタノール（５０：１，ｖ／ｖ）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、純粋な生成物７を得た（収率７５％、４１ｍｇ）。実施例２１ｐＨ依存性細胞外環境のｐＨの効果を、感光剤取込みを高めて腫瘍の低ｐＨ特性が光毒性効果を高めるか否かを決める光毒性に関して試験した。単層培養で生長するＥＭＴ６／Ｅｄ細胞を上記の概要に従って、ＰＤＴにかけた。しカル、培地のｐＨは２時間感光剤培養の間乳酸（０．０〜４．０ｍＭ）供給して、７．５〜５．５の範囲で増やして調節したことは除外される。未処理のコントロールに対する生き残りの割合をクローン産生アッセイで決めた。単層培養のＥＭＴ６／Ｅｄ細胞における光毒性について細胞外ｐＨを変えた効果を図１２に０．０〜５．０μＭのＨＢに対してまとめた。ＨＢの不存在下で、乳酸を用いた細胞外ｐＨの操作はクローニング効率についてわずかな影響しか示さない。ｐＨ効果は、光の存在下で３．０μＭの感光剤にて、最大効果を有し、全ＨＢ濃度に対する６．５の細胞外ｐＨで最も著しい。これらの条件下で、細胞毒性はｐＨによって４〜５倍強化される。実施例２２遺伝子毒性予備的な研究を、突然変異誘発性の可能性を評価するためにＨＢＢＡ−Ｒ２について行った。サルモネラ・ティフィムリウムヒスチジン復帰系を使用して、Or ganization for Economic Cooperation and Development（ＯＥＣＤ）ガイドライン４７１〜４７２に従って、フレームシフト突然変異（菌株：ＴＡ９８）またはＤＮＡ中の塩基置換を検出した。プレートインコーポレーションアッセイ法（エイムスアッセイ）を、最大１００μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１．０ｍｇ／プレートまでＨＢＢＡ−Ｒ２を培養混合物に導入して、使用した。この感光剤濃度は両試験株について検出可能な細胞毒性を示した。以下の表３に、感光剤ＨＢＢＡ−Ｒ２の推定される遺伝子毒性を確認および特徴付けるために設計された実験の結果をまとめる。データは、暗中で、サルモネラ・ティフィムリウムの２つの菌株、ＴＡ９８およびＴＡ１００と共に培養したＨＢＢＡ−Ｒ２の性質を示す。これらの菌株は突然変異可能性を有する広い範囲の化合物を検出する傾向に対して選択される。両菌株に対する陰性コントロールは、試供化合物に対して使用したのと同じ濃度で適用したＤＭＳＯ（溶媒）であった。ＤＭＳＯに対しては突然変異活性は観察されなかった。陽性コントロールは２−ニトロフルオレン、アジ化ナトリウム、および２−アミノフルオレンを含む。これらは各菌株において咄乳動物の代謝活性系（Ｓ９）の存在下および不存在下で予期したパターンの突然変異活性を示した。ＨＢＢＡ−Ｒ２はいずれの菌株にも、診療的な濃度を含む１００μｇ／プレートの濃度で突然変異活性を示さなかった。ＨＢＢＡ−Ｒ２は塩基置換もフレームシフト突然変異も促進しない。これらの突然変異性研究で遺伝子毒性を示さなかったことから、検出限界内では、遊離の薬剤が細胞の核に発見されないまたは本来的に遺伝子毒性ではないという知見に結びつき得る。核に入る接合体、例えばＰＱＰ接合ＤＮＡ小溝結合剤は試験しなかった。核標識化は細胞毒性は高めることなく、ＤＮＡ標的を介して光毒性を高めるかもしれない。本発明を実施例および図面を用いて説明した。本発明は種々の変更が可能であるが、特定の態様に限定されるものではなく、本発明の範囲内の等価なすべての変更を包含する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/00 Ａ６１Ｐ 31/00 35/00 35/00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者マディヤラカンラグパシーカナダ国アルバータティー６ジー２エス１エドモントン 89 アヴェニュー 9741 (72)発明者ロウンジェイウィリアムカナダ国アルバータティー６エイチ３エス１エドモントン 117 エイストリート 4704 (72)発明者ミラージェラルドジーカナダ国アルバータティー７エックス３ヴイ４スプラスグローヴレンジロード 275 54014 ４ (72)発明者ムーアーロナルドビーカナダ国アルバータティー６アール１ズィー５エドモントンバッチャートドライヴ 425 (72)発明者ディウーツェンジュンアメリカ合衆国オレゴン州 97405 ユージーンブルックサイドドライヴ 1020

Claims

【特許請求の範囲】１．結合剤に結合したペリレンキノンを含む結合体（コンジュゲイト）を投与し、所定の波長の光にペリレンキノンをさらすことによりペリレンキノンを活性化することを含む治療法。２．ペリレンキノンがヒポグレリン(hypocrellin)、セルコスポリン(cercospor in)、フレイクロム(phleichrome)、エルシノクロム(elsinochrome)、クラドクロム(cladochrome)、エリスロアフィン(erythroaphin)およびカルホスチン(ca lphostin)を含む群から選択される請求項１記載の方法。３．ペリレンキノンが官能化される請求項２記載の方法。４．ペリレンキノンがヒポクレリンである請求項１記載の方法。５．ペリレンキノンが非活性化状態では高濃度で非毒性であり、かつ活性化状態では低濃度で毒性である請求項１記載の方法。６．ヒポクレリンはヒポクレリンＡまたはヒポクレリンＢの誘導体である請求項４記載の方法。７．ヒポクレリンＢが官能化される請求項６記載の方法。８．官能化されたヒポクレリンＢが結合剤に結合する請求項７記載の方法。９．ヒポクレリンＢが非活性化状態では高濃度で非毒性であり、かつ活性化状態では低濃度で毒性である請求項８記載の方法。 10．結合剤が抗体、モノクローナル抗体、そのフラグメントからなる群から選択される請求項1記載の方法。 11．結合剤が癌細胞の抗原に結合した抗体である請求項１０記載の方法。 12．癌細胞が卵巣癌、乳癌および胃腸癌からなる群から選択される請求項11に記載の方法。 13．結合体投与がモノクローナル抗体またはそのタンパク質に結合したヒポクレリンＢ誘導体を含む結合体を投与することを含む請求項１記載の方法。 14．結合剤がＤＮＡ小溝に結合する請求項１記載の方法。 15．モノクローナル抗体または抗体フラグメントに結合したヒポクレリンＢ誘導体を含む結合体を投与し、所定の波長の光へヒポクレリンＢ誘導体をさらすことによってヒポクレリンＢ誘導体を活性化することを含む治療法。 16．モノクローナル抗体または抗体フラグメントが癌細胞のエピトープと結合し、前記癌細胞が卵巣癌、乳癌および胃腸癌からなる群から選択される請求項15 記載の方法。 17．ヒポクレリン誘導体が非活性化状態では高濃度で非毒性であり、かつ活性化状態では低濃度で毒性である請求項15記載の方法。 18．結合剤に結合（コンジュゲイト）したペリレンキノンを含む組成物。 19．ペリレンキノンがヒポクレリン、セルコスポリン、フレイクロム、エルシノクロム、クラドクロム、エリスロアフィン、およびカルホスチンを含む群から選択される請求項18記載の組成物。 20．ペリレンキノンがヒポクレリンＡおよびヒポクレリンＢの誘導体である請求項18 記載の組成物。 21．ペリレンキノンが非活性化状態では高濃度で非毒性であり、かつ活性化状態では低濃度で毒性である請求項19記載の組成物。 22．ヒポクレリン誘導体が非活性化状態では高濃度で非毒性であり、かつ活性化状態では低濃度で毒性である請求項20記載の組成物。 23．結合剤が疾患、異常、疾病、または異常状態に対する標的剤である請求項18 記載の組成物。 24．結合剤が抗体、モノクローナル抗体、またはそのフラグメントからなる群から選択される請求項18記載の組成物。 25．結合剤が癌細胞のエピトープに結合する抗体であり、前記癌細胞が卵巣癌、乳癌および胃腸癌からなる群から選択される請求項24記載の組成物。 26．結合剤がＤＮＡ小溝に結合する請求項18記載の組成物。 27．結合剤に結合（コンジュゲイト）したヒポクレリン誘導体を含む組成物。 28．ヒポクレリン誘導体が非活性化状態では高濃度で非毒性であり、かつ活性化状態では低濃度で毒性である請求項27記載の組成物。 29．結合剤が疾患、異常、疾病または異常状態に対する標的剤である請求項27記載の組成物。 30．結合剤が抗体、モノクローナル抗体、またはそのフラグメントからなる群から選択される請求項27記載の組成物。 31．結合剤が癌細胞の抗原に結合する抗体であり、前記癌細胞が卵巣癌、乳癌および胃腸癌からなる群から選択される請求項27記載の組成物。 32．結合剤がＤＮＡ小溝に結合する請求項27記載の組成物。 33．ヒポクレリン誘導体がヒポクレリンＢの誘導体である請求項27記載の組成物。 34．結合剤に結合（コンジュゲイト）したヒポクレリンＢ誘導体を含む組成物であって、前記結合剤が抗体、モノクローナル抗体、またはそのフラグメントからなる群から選択され、前記結合剤が癌細胞の抗原に結合し、前記癌細胞が卵巣癌、乳癌および胃腸癌からなる群から選択され、前記ヒポクレリンＢ誘導体が所定の波長の光にその誘導体をさらすことにより活性化できる官能化誘導体である組成物。 35．皮膚の状態、癌、ウイルス性疾患、レトロウイルス性疾患、細菌性疾患、および真菌性疾患を治療することを含む請求項１記載の治療法。 36．所定の波長が約４００ｎｍと約８５０ｎｍの間である請求項１記載の方法。 37．所定の波長が約６００ｎｍと約７００ｎｍの間である請求項36記載の方法。 38．適当量の少なくとも１つのヒポクレリン誘導体を投与し、ヒポクレリン誘導体を活性化することを含む腫瘍細胞を破壊または不活性化する方法。 39．ヒポクレリン誘導体の活性化が、ヒポクレリン誘導体を所定の波長の光にさらすことを含む請求項38記載の方法。 40．ヒポクレリン誘導体と少なくとも１つのｐＫａ変更剤、緩衝剤、塩(salt)、塩基、酸、塩(saline)、および助剤を含む組成物の投与を含む疾患または異常状態を治療する方法。