CN1657042A - 灯盏花乙素苷元在制药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了灯盏花乙素苷元在制备治疗或预防脑卒中以及心脑血管疾病药物中的应用。灯盏花乙素苷元对急性脑缺血具有明显的保护作用，并可明显增强纤维蛋白溶解酶的活性、延长血液凝血时间、抑制血栓形成。而所有这些作用都非常有利于治疗和预防脑卒中和心脑血管疾病。灯盏花乙素苷元在治疗和预防脑卒中及心脑血管疾病方面比灯盏花素具有更为显著的功效。

Description

灯盏花乙素苷元在制药中的应用

技术领域

本发明涉及灯盏花乙素苷元(4′-羟基黄芩素)的用途，具体地说是灯盏花乙素苷元在制药领域中的应用。

背景技术

灯盏花乙素苷元是从灯盏花全株植物中分离提取出的化合物，其化学结构如下：

灯盏花又名灯盏细辛，属菊科短亭飞蓬类植物。它具有活血化瘀、散寒解表、舒筋活络、祛风除湿之功效，临床上常用于治疗心脑血管疾病。目前临床中使用的灯盏花制剂，其有效成分一般都是利用乙醇和乙酸乙酯进行提取的，如CN1091301公开的灯盏花注射液就是如此。其具体制备方法是，将灯盏花直接用水提取，乙醇沉降，低温减压浓缩得到粗制浸膏，调整pH值后，经乙酸乙酯精提，再以得到的浸膏为原料，配制成注射液。由于利用乙醇和乙酸乙酯提取的灯盏花有效成份均以灯盏花乙素为主，同时含有少量的灯盏花甲素，所以目前临床中所使用的灯盏花制剂也常常被称为灯盏花素制剂。灯盏花素在心脑血管疾病治疗方面已有很多的文献报道。临床应用表明其具有增加脑、冠状血管血流量，降低血管阻力，抗血小板、红细胞凝聚，降低血液粘稠度等作用，疗效确切。近年来人们在对灯盏花全株植物所含成份的分离研究中，又分离出除灯盏花乙素、甲素以外的四种黄酮类成份，其分别是EB-I(芹菜素)、EB-II(4′-羟基黄芩素)、EB-III(芹菜素-7-B-D-葡萄糖甙)、EBIV(4′-羟基黄芩素-7-B-D-葡萄糖甙)(张人伟等人，《中草药》，1988年第19卷第5期，第7页)。这四种单体化合物，其药理作用如何，能否在制药领域中被应用，目前人们对此研究甚少，也未见有关报道。

发明内容

本发明的目的就是提供除灯盏花素以外的灯盏花单一成份在制药领域中的应用。

本发明的目的是这样实现的：

本发明提供了灯盏花乙素苷元在制药中的两项应用，即：

灯盏花乙素苷元在制备治疗或预防脑卒中药物中的应用。

灯盏花乙素苷元在制备治疗或预防心脑血管疾病药物中的应用。

本发明是经过对除灯盏花素以外的四种单体化合物进行分离，并用其进行动物实验研究所得出的结论。

灯盏花乙素苷元用于制备治疗或预防脑卒中药物，或用于制备治疗和预防脑血管疾病的药物，其药理活性强于灯盏花素，效果是人们意想不到的。

下面以灯盏花乙素苷元与灯盏花素的药理试验比较及结果来进一步说明灯盏花乙素苷元在制药领域中的应用及其有益效果。

受试药物：

灯盏花乙素苷元注射液

采用云南灯盏花全株植物2.5kg，加入95％乙醇回流提取、浓缩，浸膏加入80℃热水溶解后，加入氯仿处理，再用乙醚及醋酸乙酯分别提取，回收溶剂，得黄色析出物，以吡啶和水的混合溶剂重结晶，再经聚酰胺柱层析，得到EB-II(即灯盏花乙素苷元)2000mg。称取灯盏花乙素苷元2000mg，溶于1000ml水中，制成水溶液，加热溶解，分装成4mg/2ml/支浓度的注射液，灭菌。

注射用灯盏花素

昆明龙津药业有限公司，批号20021023；溶剂对照：灭菌生理盐水，大同市惠达药业有限责任公司产品，批号0209011。

试剂

伊文思蓝，上海化学试剂采购供应站分装产品，批号94117；甲酰胺溶液，天津市博迪化工有限公司产品，批号20010809；氨基甲酸乙酯(乌拉坦)，北京通县育才精细化工厂产品，批号20001220。

动物

昆明种小鼠，wistar种大鼠，均由北京大学医学部实验动物中心提供。

试验方法

一、对实验性大鼠急性脑缺血的影响

伊文思蓝标准曲线的制作：将伊文思蓝配成梯度浓度，用721型分光光度计，于620nm处测定OD值，得标准曲线回归方程为y＝-0.0134+0.0985x(r＝0.9997)。

取健康雄性大鼠60只，体重230-290g，按体重随机分成6组，每组10只，分别为假手术组(生理盐水组)，脑缺血模型组，注射用灯盏花素组(8mg/kg)及灯盏花乙素苷元小、中、大剂量组(2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)。每日腹腔注射给药一次，连续给药6天，末次给药后10min，以乌拉坦1g/kg剂量腹腔注射麻醉，背位固定，手术分离双侧颈总动脉，于给药后30min股静脉注射伊文思蓝50mg/kg，假手术组不结扎双侧颈动脉，其它各组均于注射伊文思蓝5min后立即结扎双侧颈动脉，结扎3h后断头取脑称重，计算脑指数(mg/g)，另取部分脑称重后，置4ml甲酰胺溶液中，置于45℃恒温箱中72h，离心，取上层液于620nm处测定OD值，按标准曲线计算出脑内伊文思蓝含量(μg/g脑湿重)。将离心后脑组织置110℃烘箱中至恒重，计算脑含水量[脑含水量％＝(湿重-干重)/湿重×100％]。结果见表1。

  表1  灯盏花乙素苷元对实验性大鼠急性脑缺血的影响( x±s，n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	脑指数(mg/g)	脑含水量(％)	伊文思蓝含量(μg/g脑湿重)
					生理盐水模型注射用灯盏花素灯盏花乙素苷元	--8248	5.71±0.396.58±0.25▲▲6.23±0.23*6.25±0.526.15±0.49*6.11±0.17**	78.41±1.5282.21±1.29▲▲80.24±1.12**80.61±1.18*80.40±0.85**80.09±0.86**	5.56±0.696.91±0.87▲▲5.96±0.56*6.18±0.855.70±0.59**5.66±0.47**

与生理盐水组比较：^▲▲P＜0.01，与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表1可见，灯盏花乙素苷元，尤其大、中剂量组动物的脑指数、脑含水量及伊文思蓝脑含量与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05-0.01)，表明灯盏花乙素苷元对实验性大鼠急性脑缺血具有明显的保护作用。同剂量组中，灯盏花乙素苷元的作用优于注射用灯盏花素。

二、对大鼠血液纤溶酶活性的影响

取健康大鼠50只，体重200-270g，雌雄各半，按性别体重随机分为5组，每组10只，分别为注射用灯盏花素组(8mg/kg)及灯盏花乙素苷元小、中、大剂量组(2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)及等容量生理盐水组。每日腹腔注射给药一次，连续给药6天，末次给药后10min，以乌拉坦1g/kg剂量腹腔注射麻醉，背位固定，分别于给药后30min和90min由腹主动脉取抗凝血15ml混匀，冰浴下离心。取0.3ml血浆加至预先冷却的54ml乙酸溶液中，混匀，置4℃冰箱中静置30min，离心，倾去上清液，保留沉淀部分，吸尽余酸，加硼酸溶液0.3ml，置超声波上溶解，再加CaCl₂溶液0.3ml，约1-2min形成凝块，记录从凝块形成至完全溶解的时间，计算纤溶酶活性单位。结果见表2。

表2灯盏花乙素苷元对大鼠血液纤溶酶活性的影响( x±s，n＝10)

组别	剂量(mg/kg)	药后30min酶活性(u)	药后90min酶活性(u)
				生理盐水注射用灯盏花素灯盏花乙素苷元	8248	76.01±16.5897.11±11.01**99.69±20.12*106.18±17.17**110.23±19.79**	80.10±13.4991.66±10.52*87.97±13.3896.12±13.72*100.89±12.85**

与生理盐水组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表2显示，与生理盐水组比较，灯盏花乙素苷元在给药后30min和90min均可使大鼠血液中纤维蛋白溶解酶活性明显增加(P＜0.05-0.01)。同剂量组中，灯盏花乙素苷元的作用优于注射用灯盏花素。

三、对小鼠血液凝血时间的影响

取健康小鼠65只，体重18-22g，雌雄近半，按性别体重随机分成5组，每组13只，分别为等容量生理盐水组、注射用灯盏花素组(8mg/kg)及灯盏花乙素苷元小、中、大剂量组(2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg)。每日腹腔注射给药一次，连续给药6天，末次给药后30min眶静脉取血，采用毛细管法，观察药物对小鼠血液凝血时间的影响。

表3灯盏花乙素苷元对小鼠血液凝血时间的影响( x±s)

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	凝血时间(min)
				生理盐水注射用灯盏花素灯盏花乙素苷元	-8248	1313131313	1.59±0.632.78±1.01**3.21±0.84**3.55±0.76**▲4.07±0.79**▲▲

^**P＜0.01，与生理盐水组比较；^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01与注射用灯盏花素比较

由表3可见，与生理盐水组比较，灯盏花乙素苷元可使小鼠血液凝血时间明显延长(P＜0.01)，且灯盏花乙素苷元注射液中、大剂量组动物血液凝血时间明显长于注射用灯盏花素组(P＜0.05-0.01)。

四、对大鼠血液血栓形成的影响

取健康大鼠50只，体重210-270g，雌雄各半，按性别体重随机分5组，每组10只，分组设置及给药方法同血液纤溶酶活性实验，于末次给药后10min，以乌拉坦1g/kg剂量腹腔注射麻醉，固定，分离右侧颈总动脉及左侧颈外静脉，按旁路法进行血栓形成测定，使右侧动脉插管血液流经置有棉线(6cm)的聚乙烯管进入左侧颈外静脉，循环15min后，立即取出棉线称重，计算血栓湿重及抑制率。

表4灯盏花乙素苷元对大鼠血液血栓形成的影响( x±s)

组别	剂量(mg/kg)	动物数(只)	血栓湿重(mg)	抑制率(％)
					生理盐水注射用灯盏花素灯盏花乙素苷元	-8248	1010101010	24.21±2.8818.02±1.58**18.31±2.09**17.35±1.45**16.12±2.01**▲	-25.5724.3728.3433.42

与生理盐水组比较：^**P＜0.01；与注射用灯盏花素组比较：^▲P＜0.05

表4显示，与生理盐水组比较，灯盏花乙素苷元及注射用灯盏花素组均可使大鼠血栓湿重明显减轻(P＜0.01)，且灯盏花乙素苷元大剂量的作用要优于注射用灯盏花素(P＜0.05)，表明灯盏花乙素苷元对大鼠血栓形成具有显著的抑制作用。

实验表明，灯盏花乙素苷元对急性脑缺血具有明显的保护作用，并可明显增加纤维蛋白溶解酶的活性、延长血液凝血时间、抑制血栓形成。而所有这些作用都非常有利于治疗和预防脑卒中和心脑血管疾病。

实验同时表明，灯盏花乙素苷元的上述作用均明显优于灯盏花素，说明本发明对治疗和预防脑卒中及心脑血管疾病具有更为显著的功效。

具体实施方式

实施例：

采用云南灯盏花全株植物2.5kg，加入95％乙醇提取，提取物加入70-80℃热水溶解，用氯仿萃取后，再用乙醚及醋酸乙酯分别提取，回收溶剂，得黄色析出物，将析出物经吡啶和水的混合溶剂重结晶，再经聚酰胺柱层析，得到2000mg灯盏花乙素苷元，其为淡黄色粉末。

质谱EI-MS：(M⁺)286；核磁共振碳谱13CNMR：163.59(C-2)，103.9(C-3)，182.0(C-4)，149.6(C-5)，129.1(C-6)，161.0(C-7)，93.8(C-8)，147.0(C-9)，102.4(C-10)，128.4(C-1’)，121.5(C-2’)，115.9(C-3’)，153.3(C-4’)，115.9(C-5’)，121.5(C-6’).

核磁共振氢谱1H-NMR：6.73(s，H-3)，6.57(s，H-8)，12.77(s，OH-5)，8.77(s，OH-6)，10.53(s，OH-7)，10.37(s，OH-4’)，7.89(d，2H，H-2’，-6’)，6.90(d，2H，H-3’，5’)。

灯盏花乙素苷元口服液：

将2500mg灯盏花乙素苷元，溶于1000ml水中，制成0.25％浓度的水溶液，加热溶解，混合均匀，装入20ml药瓶中，封口、消毒。

服用方法：口服，每日服用灯盏花乙素苷元50-100mg。

灯盏花乙素苷元注射液：

取灯盏花乙素苷元2000mg，溶于1000ml水中，制成水溶液，加热溶解，混合均匀，分装成4mg/2ml/支浓度的注射液，蒸汽流通灭菌30分钟。

用法用量：肌注或静脉注射，每日4-100mg。

灯盏花乙素苷元片剂：

取灯盏花乙素苷元2000mg，按公知片剂制备方法，加入淀粉，糊精、硬酯酸镁等，混合制成湿粒，机器冲压成片，每片含灯盏花乙素苷元25mg。

用法用量：口服，每日2-3次，每次25mg-100mg。

本发明在制药领域中的应用，完全不局限于此，例如：灯盏花乙素苷元还可引入药学上可以接受的盐类，如灯盏花乙素苷元磷酸盐，灯盏花乙素苷元盐酸盐，灯盏花乙素苷元硫酸盐等等。

本发明的药物剂型也完全不限于此，它可以制备成更多的剂型，如滴丸、胶囊剂、软胶囊剂、缓控释制剂等等。

Claims (2)

1、灯盏花乙素苷元在制备治疗或预防脑卒中药物中的应用。

2、灯盏花乙素苷元在制备治疗或预防心脑血管疾病药中的应用。