CN1640437A - 用于治疗胃肠道疾病的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新的由紫草、当归、麝香、牛黄、冰片、珍珠、硼砂、炉甘石组成的治疗胃肠道疾病的组合物。所述组合物可以用于治疗胃肠道炎症及溃疡性疾病。
Description
技术领域
本发明涉及一种新的组合物以及该组合物用于制备治疗胃肠道疾病的药物的用途。
背景技术
常见的胃肠道炎症疾病包括有慢性胃炎、胃十二指肠球部溃疡、慢性结肠炎、溃疡性结肠炎等。
慢性胃炎一般分为两种类型:炎症病变比较表浅,局限在胃粘膜表面一层(不超过三分之一)者,称作慢性浅表性胃炎;而炎症病变波及胃粘膜的全层,并伴有胃腺体萎缩者,则为慢性萎缩性胃炎。慢性胃炎是常见病和多发病。胃镜普查证实,我国人群中慢性胃炎的发病率高达60%以上,萎缩性胃炎约占其中的20%,拥有一个庞大的患者群。我国目前对消化性溃疡的临床治疗药物主要有质子泵抑制剂(如奥美拉唑、兰索拉唑等)、H2受体拮抗剂(法莫替丁、雷尼替丁等)、粘膜保护剂(铋剂等)、抗酸剂(氢氧化铝、碳酸氢钠等)。抗酸剂虽然价格便宜,但疗效较差,副作用显著,不宜长期使用;粘膜保护剂常作为辅助用药;质子泵抑制剂虽然有很好的疗效,且副作用轻微,但在我国的市场价格普遍较高;H2受体拮抗剂中第一个用于消化性溃疡的为西米替丁,其疗效确切,但可能发生较严重的副作用,已很少使用,目前常用的有法莫替丁、雷尼替丁等,疗效比西米替丁进一步提高,副作用较小,价格大大低于质子泵抑制剂,所以常作为临床首选药。
溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)是一种原因尚未完全明确的炎症性肠病。过去认为UC在西方国家比较多见,每10万人群中发病率为42.0-79.9,我国发病率较西方国家低。但近十余年来,随着人们生活方式的改变、疾病谱的变迁、消化内镜的普及和诊断手段的完善,本病的检出率与发病率有明显增加的趋势,UC在我国也成了一种较为常见的消化道疾病,据估计,在我国有多达100~200万例炎性肠病患者,其中溃疡性肠炎约占50%。因溃疡性结肠炎发病机理复杂,是多因素、多环节相互作用的结果(可能与氧自由基、NO异常、炎症介质、细胞因子和UC肠粘膜损伤密切相关),因此,其治愈难度较大,病情轻重悬殊,多数病程缓慢,反复发作,迁延不愈,与结肠癌关系密切,被公认是结肠癌的癌前病变。溃疡性结肠炎已被世界卫生组织列为现代难治性疾病之一,是消化病领域研究的热点。目前治疗溃疡性结肠炎的一线药物均为水杨酸类药物,包括柳氮磺胺吡啶(SASP)、奥柳氮(olasslazine)、美沙拉嗪(mesalazine),及1997年首先在英国上市的巴柳氮(balsalazide)。
但目前仍需开发针对慢性胃炎或溃疡性结肠炎有良好疗效且副作用小的产品。
发明内容
本发明涉及新的组合物,所述组合物包含紫草、当归、麝香、牛黄、冰片、珍珠、硼砂、炉甘石和/或药用载体或赋形剂。
本发明的另一个方面涉及本发明组合物的制备方法,该方法包括将麝香、冰片、牛黄等活性成分按配方比例混合后加入紫草提取物浓缩液制粒,并根据所需剂型进行制剂。
根据本发明,本发明组合物中的紫草可以紫草形式直接使用或以紫草提取物形式使用。溶剂提取物所采用的溶剂包括那些适于用于中药材活性成分提取的常用溶剂,如水、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿等。其中紫草提取物优选为其乙醇或水或乙醇与水混合物的提取物。
与目前临床上使用的治疗药物相比,本发明所涉及的组合物除具有良好的抗菌消炎疗效外,还具有良好的胃粘膜保护作用及促进胃粘膜修复作用,对治疗或缓解胃肠道炎症及溃疡性疾病效果显著,且无明显的不良反应,另外由于药物作用机制独特,靶向性准确,在临床药效上具有较大的优势。
因此,本发明的另一个方面涉及上述组合物用于制备治疗胃肠疾病的药物的用途。
在本发明的一个实施方案中,本发明的组合物包含以紫草、当归、麝香、牛黄、冰片、珍珠、硼砂、炉甘石的原药材或溶剂提取物作为活性成分和/或药用载体或赋形剂。
在本发明的一个优选实施方案中,组合物中各活性成分的含量范围为:麝香0.1-3%,牛黄0.1-5%,珍珠0-20%,冰片5-25%,炉甘石0-25%,硼砂0-20%,,紫草乙醇提取物0-10%,当归水或含水乙醇提取物0-30%。
在本发明的进一步的优选方案中,组合物的配方为麝香10g,牛黄25g,珍珠100g,冰片100g,炉甘石100g硼砂100g,紫草乙醇提取物40g,当归水或含水乙醇提取物250g。
具体实施方式
实施例1
紫草的提取
紫草1000g,粉碎,过5号筛,75%或95%乙醇湿润1h,浸泡24h,5-10倍量渗漉,减压回收乙醇,60℃以下干燥,得紫草素粗品。
含量测定方法:取紫草素粗品适量,于50℃干燥3小时,粉碎,过3号筛,精密称取约0.5002g,置100ml量瓶中,加乙醇至刻度,4小时内不时振摇,滤过,精密量取5ml,置25ml量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀。照分光光度法,在波长516nm处测定吸收度,按左旋紫草素的百分吸收度为242,按下式计算,即得。
0.553*5*100%/242*0.5002=2.284%
组合物的制备:
将麝香1g和冰片5g分别研成极细粉加牛黄1g,等量递加法与当归粉50g混匀,加5%粘合剂Carbopol 934,3%崩解剂PVP XL-10(内加/外加=1/1),再加剩余的当归粉50g混匀,用95%紫草提取浓缩液30ml,制粒,得颗粒样品。在50℃下干燥2h,采用0.25%润滑剂硬脂酸镁,压片,包衣。
鉴别
取上述制得组合物样品0.25g,研碎,加石油醚15ml(60-90),超声15min,用2%NaOH 30ml分3次洗涤,石油醚层挥干,1ml无水乙醇溶解。另取当归对照药材0.25g,同法处理。点样与含CMC-Na的硅胶薄层板上,以石油醚∶乙酸乙酯(8.5∶1.5),在365nm下,可见同样大小的亮白色萤光斑点。
取上述制得组合物样品0.25g,研碎,加石油醚15ml(60-90),超声15min,用2%NaOH 30ml分3次洗涤,石油醚层挥干,1ml无水乙醇溶解。另取冰片对照品10mg,同法处理。点样与含CMC-Na的硅胶薄层板上,以石油醚∶乙酸乙酯(8∶2),1%香草醛硫酸显色,挥干后,110℃,烘5min可见同样的斑点。
含量测定
1.阿魏酸的含量测定:
色谱条件:高效液相色谱仪,色谱柱YWGC18,5μm,4mm×25cm
流动相:甲醇-1%乙酸(35∶65),用前超声脱气20min。流速1.0ml/min,紫外检测波长320nm。
标准曲线:精密称取阿魏酸对照品1mg,置50ml量瓶中,加甲醇-甲酸(95∶5)溶解并稀释至刻度,摇匀。
分别精密量取阿魏酸标准液0.5、2.5、5、7.5、10ml,置5只10ml量瓶中,加甲醇-甲酸(95∶5)稀释至刻度,摇匀,备用。
在已确定好的色谱条件下,取20μl进样,得回归方程。
阿魏酸在0.04-0.40μg之间线性关系良好。
样品的测定:取0.18g组合物样品,置25ml量瓶中,加甲醇-甲酸(95∶5)20ml,置超声波清洗器上超声提取1h,放置数小时,过滤,用甲醇-甲酸(95∶5)稀释至刻度,得供试液。阿魏酸的含量约为0.0392%,含阿魏酸0.07mg。
回收率实验:在0.18g当归粉末中,加入一定量的阿魏酸对照品,同时以不加对照品的一份为对照样品,按上法测定,计算平均回收率。
2.紫草的测定
含量测定方法:取制得的组合物样品适量,研碎,精密称取约0.180g,置100ml量瓶中,超声15min,静置1小时,滤过,加乙醇至刻度,在波长516nm处测定吸收度,按左旋紫草素的百分吸收度为242计算,吸收度为0.711,含紫草素3.0mg,紫草素的百分含量约为1.67%。
实施例2.本发明组合物对溃疡性结肠炎的作用
依据上述组合物,制成结肠定位丸,观察其对溃疡性结肠炎的疗效及机理研究。
为证实本发明组合物的疗效,通过采用大鼠(豚鼠)作为UC模型,观察不同药物的疗效,比较麝香结肠丸在治疗UC的效果。
方法:
动物分组:将昆明小鼠40只,10±1W龄,体重25-30g随机分为4组:A、B、C、D组,每组10只,(雌雄各半,预实验用雄鼠)
造模:小鼠禁食不禁水24h后,用戊巴比妥0.3ml腹腔麻醉后,将灌肠器从肛门插入肠道约4cm处,以生理盐水清洗肠道,任取3组造模,用0.25ml含3mg三硝基苯磺酸(TNBS,Sigma公司)的50%乙醇一次性直肠注入(100mg/kg)。
药物与给药方法
阳性对照组:柳氮磺胺吡啶250mg/kg/天的0.5%CMC-Na混悬液,各含10mg/ml柳氮磺胺吡啶。
配方1:本发明组合物样品300mg/kg/天溶于0.5%CMC-Na混悬液,各含10mg/ml本发明组合物样品。
空白对照组:0.5%CMC-Na
正常对照组 0.5%CMC-Na
自造模次日开始用药,每日0.25ml/只灌肠,10天为一疗程。未造模组灌肠0.5%CMC-Na对照。
观察指标与方法:
于造模之前及用药结束后次日,每天分别称重,并观察大便形状等一般情况。
大体形态及组织学损伤:取各组大鼠肛门至回盲部结肠,沿肠系膜纵行剖开,观察大体形态改变,按标准评分。
每段结肠自距肛门1cm、3cm、8cm处及横结肠和升结肠,取5块组织标本(2mm×10mm),另于炎症严重或溃疡处至少取1块组织,于10%福尔马林溶液中固定,石蜡包埋、切片HE染色,观察组织学改变,按模型标准评分。
中性粒细胞髓过氧化酶(MPO)活性测定:
取远端结肠组织(200-400mg)称重,每200mg加1ml 0.2%十六烷基三甲基溴化铵,于小烧杯中用剪刀剪碎,转移至试管中,于高速组织匀浆仪上匀浆10秒,冻溶3次,离心(10min,2000rpm)取上清液0.1ml,以四甲基联苯胺为底物,用UV-200紫外分光光度计于波长665nm处测定5min内光密度(OD)变化均值,每分钟OD变化1.0为1个酶活性单位。
组别 | (结肠重量/体重)mg/g | MPO(U/g) |
空白组 | 2.55±0.24(N=10) | 0.1155±0.0171(N=10) |
模型组 | 4.80±0.47(N=11)* | 0.6517±0.0639(N=9)* |
对照组 | 3.28±0.17(N=11)*Δ | 0.2577±0.0272(N=9)*Δ |
药物组 | 3.23±0.25(N=10)*Δ | 0.2591±0.0217(N=9)*Δ |
*药物组与模型组均有显著差异,Δ药物组与空白组有显著差异,*Δ药物组与对照组无差异。
实施例3:本发明组合物对于慢性萎缩性胃炎的效果
方法:
动物分组:将雄性昆明小鼠40只,10±1W龄,体重25-30g随机分为A、B、C、D 4组,每组10只。
造模:,任取3组造模,0.04%氨水自由饮用,隔日换一次氨水,每周2,5空腹灌0.1ml/10g的60%乙醇,连续30天,期间Co60照射一次。
药物与给药方法:
阳性对照组:三九胃泰100mg/kg/d的0.5%CMC-Na混悬液,各含10mg/ml的三九胃泰。
药物组:本发明组合物样品100mg/kg*d溶于0.5%CMC-Na混悬液使各含10mg/ml。
空白对照组:0.5%CMC-Na
正常对照组:0.5%CMC-Na
自造模次日开始用药,每日0.25ml/只灌胃,30天为一疗程。未造模组灌0.5%CMC-Na对照。
观察指标及方法:
于造模之前及用药结束后次日,每天称重,并观察一般大便形状等情况。
胃酸pH值测定:用pH-3C微玻璃电极酸度计测定胃液的pH(用滴定法测游离酸)
组织学改变:沿胃小弯自前胃至幽门取全肌层一块,显微镜下观察形态改变,按标准评分。
取实验小鼠胃,沿胃小弯自前胃至幽门取全肌层一块,用10%的中性甲醛固定,石蜡包埋、切片HE染色,在Olympus下观察组织学改变,按模型标准评分。
结果与讨论:
正常对照组胃粘膜呈浅红色,表面平整光滑,全层胃壁较厚,手感弹性较好。空白对照组(模型对照组)胃粘膜颜色呈浅灰白色,粘膜较薄,血管清晰可见。给药组和阳性对照组胃粘膜颜色呈暗红色。
光镜下给药组和阳性对照组与模型对照组相比,胃粘膜上皮细胞形态基本正常,腺体无明显萎缩,炎细胞浸润显著减少。
实验期间药物治疗组小鼠较模型组精神与活动状态好,体重无显著差异,与小鼠体重增长极限有关。
胃粘膜的pH值和胃游离酸值(N=10)测定结果如下:
胃粘膜的pH 胃游离酸值(m mol/L)
空白组 3.12±0.56* 37.25±9.78*
模型组 5.04±0.62 23.60±9.08
对照组 3.68±0.43* 31.75±8.85*
药物组 3.73±0.42* 32.21±7.98*
*与模型组相比P<0.05均有显著差异
实验结果表明本发明组合物对慢性萎缩性胃炎有显著疗效。
实施例4.本发明组合物对幽门杆菌(HP)的抑制作用
药敏实验采用琼脂稀释法,组合物样品以卵黄做乳化剂,乳浊液用灭菌蒸馏水配比稀释后,分别混入MLE培养基中,倾注平皿,以换种环分别括取6株性状典型HP经传代培养48h的固体物1/4环接种于平板,经37℃、微需氧环境培养72h后,观察HP生长情况,结果MIC在0.05-0.1mg/ml之间,说明本药对HP有抑制作用。
实施例5.本发明组合物对幽门结扎术的保护作用
实验方法:昆明小鼠20只,分A、B两组连续灌胃给药一周(A组0.5%CMC-Na,B组0.5%CMC-Na组合物样品混悬液(2.0g/kg/d),第5天开始禁食48h,自由饮水,用乙醚麻醉,作幽门结扎术,停止供水供食,18h后处死,打开腹腔,在近隔处结扎食道,将胃取出沿胃大弯剪开胃壁,用放大镜观察胃部损伤情况,记录小鼠溃疡面积,计算溃疡愈合率,以平均记分为溃疡指数来评价损伤程度,比较组间差异。S=π*(d1*d2)/4,d1为最长直径,d2为最短直径。溃疡指数结果显示两组有显著差异,说明本发明组合物对幽门结扎术有保护作用。
实施例6.本发明组合物对小鼠胃肠道的影响实验
方法:昆明小鼠30只(雌雄各半)分空白对照组(生理盐水组),阳性对照组(肠舒通胶囊),药物组(组合物)。灌胃给药4h后,测量小鼠的排便量,评估药物对胃肠道的影响。
组别 动物只数 剂量 排便量(4h)g
空白 10 0.1ml/10g 0.256±0.041
阳性对照组* 10 0.1ml/10g 0.561±0.027
药物组 10 0.2g/kg 0.293±0.058
*阳性对照组与空白组显著性差异
结果与讨论:给药组4h小鼠的排便量累计为0.293±0.058g,与空白对照组0.256±0.041g无显著差异,与阳性对照组0.561±0.027g有显著差异,说明本发明组合物对胃肠道的分泌、排空与蠕动无显著影响。
实施例7.本发明组合物对小鼠的镇痛的影响
实验方法:实验用鼠为昆明小鼠,预先用55℃热板对小鼠进行筛选,在10s-30s内出现舔足反应的为合格小鼠,实验分为空白对照组,低剂量组0.1g/kg,高剂量组0.3g/kg。实验前1小时,灌胃给药。记录各组痛阈的变化,并按下式计算痛阈的提高百分率。如60s内未出现舔足反应,痛阈记为60s。
痛阈提高百分率=(给药后痛阈(s)-给药前痛阈(s))/给药前痛阈(s)*100%。
组别 | 动物数 | 剂量 | 给药前痛阈(s) | 给药后痛阈(s) | 提高值(s) |
空白对照组 | 10 | 0.1ml/10g | 12.6±2.8 | 13.9±3.8 | 1.4±2.1 |
组合物样品 | 10 | 0.1g/kg | 12.2±2.9 | 15.1±3.6 | 2.8±1.7 |
组合物样品 | 10 | 0.3g/kg | 12.4±2.6 | 18.5±5.5* | 6.1±5.0* |
*与空白对照组相比有显著性差异。
结果与讨论:低剂量组给药后痛阈为15.1±3.6s,痛阈提高百分率为23.0%,与空白对照组的痛阈13.9±3.8s相比无显著改变。高剂量组给药后痛阈为18.5±5.5s,痛阈提高百分率为49.2%,与空白对照组的痛阈13.9±3.8s相比有显著提高。结果表明组合物以0.3g/kg剂量给药时有镇痛作用。
Claims (10)
1.组合物,其包含紫草、当归、麝香、牛黄、冰片、珍珠、硼砂、炉甘石的原药材或溶剂提取物和/或药用载体或赋形剂。
2.根据权利要求1的组合物,其中含有麝香0.1-3%,牛黄0.1-5%,珍珠0-20%,冰片5-25%,炉甘石0-25%,硼砂0-20%,紫草乙醇提取物0-10%,当归水或含水乙醇提取物0-30%。
3.根据权利要求1或2的组合物,其含有麝香10g,牛黄25g,珍珠100g,冰片100g,炉甘石100g,硼砂100g,紫草乙醇提取物40g,当归水或含水乙醇提取物250g。
4.权利要求1或2的组合物,其中的溶剂为水或含水乙醇。
5.根据权利要求1或2的组合物,其特征在于所述组合物可以片剂、胶囊剂、颗粒剂、微球、纳米粒、口服液、栓剂和外用软膏剂、搽剂、凝胶剂、喷雾剂形式存在。
6.根据权利要求1或2的组合物,其特征在于所述的组合物为可通过口服粘膜给药或直肠给药的组合物。
7.根据权利要求1的组合物,其中借助波长为516nm的吸收度测定,得到组合物样品中紫草素的含量为1.67%。
8.根据权利要求1的组合物,其中借助高效液相色谱法测得的组合物中阿魏酸的含量为0.0392%。
9.权利要求1的组合物用于制备治疗或改善胃肠道炎症的药物的用途。
10.权利要求9的用途,其中的胃肠道炎症为慢性胃炎、胃十二指肠球部溃疡或溃疡性结肠炎。
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