CN1637009A - 地黄总苷提取物的提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种地黄总苷提取物的制备方法，该方法是将地黄的提取物的水溶液用活性炭吸附处理，用碱水洗去酸性成分，再用水洗至中性后，用水溶性有机溶剂的低浓度水溶液洗脱糖和其它杂质，再用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，洗脱液浓缩成小体积，加乙醇产生沉淀后，分取上清液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物。地黄总苷提取物的主要有效成分是环烯醚萜苷类化合物。
Description
技术领域
本发明涉及具有多种医药用途的地黄总苷提取物及其提取工艺，地黄总苷提取物能有效地预防和治疗哮喘病、过敏病症和慢性阻塞性肺病(COPD)等。
背景技术
地黄是玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libsch.的新鲜块茎或干燥块茎，多年生草本，主要为栽培品，亦野生于海拔50-1100米的山坡及路旁荒地。分布于辽宁、内蒙古、河北、河南、山西、陕西、山东、安徽、浙江、湖北、湖南、四川等地。文献记载，地黄中含有环烯醚萜苷类、单萜及其苷、有机酸和有机酸酯苷、多糖、氨基酸、甾醇等多种化学成分，及钙、镁、钾、铁、锌、锰等二十种金属元素。
发明内容
现行药典记载，地黄有鲜地黄、生地黄、熟地黄之分。提取地黄总苷提取物使用的地黄是鲜地黄、生地黄以及鲜地黄自然干燥品(晒干或风干)或者鲜地黄用沸水煮5-10分钟(杀酶)后，晒干或风干的干燥品。
本发明的目的是提供地黄总苷提取物的制备方法。地黄总苷提取物是从中药地黄中提取的，地黄总苷提取物主要由以下化学成分组成：梓醇(catalpol)、地黄苷A，B，C，D(rehmannioside A，B，C，D)、乙酰梓醇(acetylcatalpol)、二氢梓醇(dihydrocatalpol等
本发明提供了地黄总苷提取物的提取、分离、纯化的方法。该方法是：
1、取地黄切片，用水、或水与甲醇、乙醇、丙酮等溶剂组成的二种及多种混合溶剂提取，提取液在真空中70℃以下浓缩并蒸去有机溶剂(如无有机溶剂时可以不浓缩)，加水至合适的体积，去除沉淀(如有沉淀)。
2、上述水溶液通过活性炭分离柱。
3、用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)。
4、用pH值8以上的碱性溶液洗脱后，用水洗脱至中性。
碱性溶液是氢氧化钠，或者氢氧化钾，或者氨水，或者碳酸钠用水所制备的溶液。
5、为了提高地黄总苷的含量，再用水溶性有机溶剂低浓度水溶液洗脱多糖和其它杂质。
水溶性有机溶剂低浓度水溶液是10％以下的稀乙醇，或是15％以下的稀甲醇，或是10％以下的稀丙酮，或是8％以下的稀丙醇。
6、用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至小体积。
水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液是10％以上的乙醇水溶液，或是15％以上的甲醇水溶液，或是10％以上的丙酮水溶液，或是8％以上的丙醇溶液。
7、浓缩至小体积的提取液，加水溶性有机溶剂至有机溶剂含量45％-85％进行沉淀，分取上层部分，减压浓缩干，即得地黄环烯醚萜苷总苷提取物。
水溶性有机溶剂是乙醇，或是丙酮，或是异丙醇，沉淀时，乙醇浓度为60％-85％，或者丙酮浓度为50％-80％，或者异丙醇浓度为45％-75％。
对上述提取物进行TLC分析，点上相应的对照品，能很容易检测出梓醇，也能检出地黄苷A，B，C，D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。检测条件是高效硅胶板HSGF254板。展开剂是以下系统，1、乙酸乙酯-甲乙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)；2、氯仿-甲醇-水(15∶10∶1)；3、氯仿∶甲醇∶水∶甲酸(30∶10∶1∶1)。显色剂用碘蒸汽显色，也可以用2％的硫酸香草醛溶液喷雾显色。
本发明的创造性在于通过科学可行的方法从地黄中提取分离出了用于治疗哮喘病和其它过敏性疾病的地黄环烯醚萜苷总苷有效部位。如前所述，本发明提供的用于治疗哮喘病和其它过敏性疾病的药物的有效成分是包括含有梓醇、地黄苷A，B、乙酰梓醇、二氢梓醇等的地黄总苷提取物。
具体实施方式
用以下的实施例对本发明作具体说明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。
[实施例一]
取地黄500g，用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(1kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用5％的稀甲醇洗脱至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用70％的甲醇5000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加酒精750ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物12.4克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量52.7％。
[实施例二]取地黄1kg，用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(500g活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀甲醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的甲醇3000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至500ml，在搅拌下加酒精1000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物23.6克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量50.8％。
[实施例三]取地黄2kg，用30％的甲醇16升加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的甲醇16升加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的甲醇16升ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(2kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用13％的稀甲醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用60％的甲醇10000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至1000ml，在搅拌下加酒精4000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物42.5克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量56.7％。
[实施例四]取地黄500g，用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(5kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用4％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用30％的丙酮25000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加丙酮500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物13.6克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量51.8％。
[实施例五]取地黄1kg，用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(10kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用7％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的丙酮50000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至500ml，在搅拌下加丙酮1500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物15.4克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量51.7％。
[实施例六]取地黄500g，用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(500g活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀丙酮洗脱至洗脱液接近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用70％的丙酮3000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加丙酮1000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物8.6克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。地黄总苷含量50.3％。
[实施例七]取地黄500g，用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(3kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用4％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用20％的乙醇15000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇750ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物16.4克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量52.7％。
[实施例八]取地黄500g，用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(6kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用7％的异丙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的异丙醇30000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物12.6克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量53.4％。
[实施例九]取地黄500g，用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(8kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇40000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇1000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物12.5克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。地黄总苷含量53.8％。
[实施例十]取地黄500g，用水4000m1加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭105℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用4％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇5000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇250ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物13.3克。其化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量50.5％。
[实施例十一]取地黄1kg，用水6000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭110℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用7％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇4000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至500ml，在搅拌下加丙酮500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物23.3克。其化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量52.9％。
[实施例十二]取地黄2kg，用水12升加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水8升加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水8升加热煎煮小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭120℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇4000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至干，即得地黄总苷提取物42.5克。化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量53.5％。
[实施例十三]取地黄500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭130℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用40％的乙醇4000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至干，即得地黄总苷提取物48.6克。其化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量36.5％。
[实施例十四]取地黄10kg，用水60升加热煎煮30小时，倾取提取液，药渣再用水50升加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水50升加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀，上已处理好的活性炭(10kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用5％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇50000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至5000ml，在搅拌下加酒精15000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得地黄总苷提取物485克。其化学成分主要含有梓醇、地黄苷A，地黄苷B、地黄苷C、地黄苷D、乙酰梓醇、二氢梓醇等。环烯醚萜苷总苷含量31.7％。
地黄总苷胶囊的制备
地黄总苷：200克；淀粉：50克；水：适量。
取淀粉加水制成15％的淀粉浆，加入RGTG50混匀制成软材，10-20目筛制粒，40-60℃干燥，分装于1000粒胶囊。即为本发明的地黄苷胶囊制剂。规格为200mg/粒。
地黄总苷片的制备
地黄总苷：200克；乳糖：32克；蔗糖：32克；金合欢胶(Acacia rubber)：4克；滑石粉：4克；硬脂酸镁：0.4克；纯化水：适量。
将地黄总苷、乳糖、蔗糖和金合欢胶混合，加入适量水，通过8号筛选粒，再将湿粒在40℃干燥，然后通过10号筛制成小颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁，压片1000片。
Claims (10)
1、一种地黄总苷提取物的制备方法，其特征是地黄提取液通过活性炭吸附分离地黄总苷。
2、按照权利要求1中所述的方法，其中地黄提取水溶液通过活性炭分离柱，用碱性溶液洗脱除去酸性杂质，再用水洗脱，用含有机溶剂的水溶液洗脱地黄总苷部分。
3、按照权利要求2中所述的方法，其中地黄提取水溶液通过活性炭分离柱，用碱性溶液洗脱除去酸性杂质，用水洗脱，用含有机溶剂浓度较低的水溶液洗脱，再用有机溶剂浓度较高的水溶液洗脱地黄总苷部分。
4、按照权利要求3中所述的方法，其中地黄提取水溶液通过活性炭分离柱，用碱性溶液洗脱除去酸性杂质，用水洗脱，用含有机溶剂浓度较低的水溶液洗脱，再用有机溶剂浓度较高的水溶液洗脱，收集有机溶剂浓度较高的洗脱液，浓缩成小体积后，加入有机溶剂进行沉淀，分取上层清液地黄总苷部分。
5、按照权利要求2，或3，或4中所述的方法，其中的有机溶剂是乙醇，或甲醇，或丙醇，或丙酮。
6、按照权利要求4中所述的方法，其中的用于沉淀的有机溶剂是乙醇，或丙醇，或丙酮。
7、按照权利要求3，或4中所述的方法，其中含有机溶剂浓度较低的水溶液是低于10％的乙醇水溶液，或者低于15％的甲醇水溶液，或者低于10％的丙酮，或者低于8％的丙醇水溶液；含有机溶剂浓度较高的水溶液是高于10％的乙醇水溶液，或者高于15％的甲醇水溶液，或者高于10％的丙酮水溶液，或者高于8％的丙醇溶液。
8、按照权利要求6中所述的方法，其中的用于沉淀的有机溶剂的浓度是乙醇浓度为60％-85％，或者是丙酮浓度为50％-80％，或者是异丙醇浓度为45％-75％。
9、按照权利要求2，或3，或4中所述的方法，其中碱性溶液是用氢氧化钠，或者氢氧化钾，或者氨水，或者碳酸钠所制备的溶液。
10、按照权利要求1中所述的方法，其中活性炭是40目以上的颗粒。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| AD01 | Patent right deemed abandoned | ||
| C20 | Patent right or utility model deemed to be abandoned or is abandoned |