CN1626105A

CN1626105A - 含有人参皂苷的纳米乳剂及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN1626105A
Application number: CN 200410064386
Authority: CN
Inventors: 林东海; 张雪梅; 王振华; 刘培丽; 刘珂
Original assignee: Shandong Luye Natural Drug Research and Development Co Ltd
Current assignee: Shandong Luye Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2003-08-25
Filing date: 2004-08-25
Publication date: 2005-06-15
Anticipated expiration: 2024-08-25
Also published as: CN100496505C

Abstract

本发明提供了人参皂苷的纳米乳剂及其制备方法和用途。本发明提供的人参皂苷乳剂含有人参皂苷，水，油、调等渗剂和表面活性剂，还可以含有稳定剂。本发明提供的乳剂不含有机溶媒及有毒副作用的增溶剂，因此无过敏性，副作用小；且本发明提供的纳米乳剂油相中活性成分的含量较高，满足了临床药效所需的高浓度，同时该乳剂还可以改变皂苷在人体内的分布，提高药物的生物利用度，可以使人参皂苷在体内浓集于肿瘤部位，提高该化合物的抑瘤作用。

Description

含有人参皂苷的纳米乳剂及其制备方法和用途

发明领域

本发明涉及一种纳米乳剂及其制备方法和用途，具体地涉及含有人参皂苷Rg₃的纳米乳剂及其制备方法和用途。

背景技术

人参皂苷Rg₃是人参皂苷单组分化合物，但由于其为疏水性，因此制备注射液需要大量的有机溶媒或是使用大量有毒副作用的增溶剂，如使用聚氧乙烯蓖麻油类(Cremophor-EL)等表面活性剂，该类表面活性剂具有致敏性，大量使用后过敏反应的发生率较高，见[魏晓慧，等Chinese Journal of Pharmaceuticals 2001，32(4)：188-192]。鉴于此本发明人提供了一种不含有机溶媒且毒副作用小的人参皂苷Rg₃纳米乳剂。

发明内容

本发明提供了含有人参皂苷Rg₃的纳米乳剂，其中人参皂苷Rg₃为20(R)-人参皂苷Rg₃、20(S)-人参皂苷Rg₃或20(R，S)-人参皂苷Rg₃。

本发明提供了人参皂苷Rg₃的纳米乳剂的制备方法。

本发明提供了人参皂苷Rg₃纳米乳剂在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用。

本发明提供的纳米乳剂，含有人参皂苷、油、表面活性剂、调等渗剂和水，其中人参皂苷∶油∶表面活性剂∶调等渗剂的重量比为1∶1-50∶1-10∶1-10。其还可以含有稳定剂，可以是胆固醇、长链醇(C14-22)、油酸、亚油酸或其衍生物，用量是人参皂苷的0-200倍。

本发明所述的油是指生物可接受的物质，可以是植物油、动物油、精油、矿物油或合成油中的一种或几种。其中，植物油选自大豆油、玉米油、花生油、橄榄油、蓖麻油、棕榈油、椰子油、菜籽油、芝麻油或棉子油中的一种或几种；动物油选自鱼油、油酸、鲸蜡油、单、双、三甘油酯中的一种或几种；精油选自五味子油、沙棘油、桃仁油、杏仁油、红花油、茶油、月见草油、小麦胚芽油、紫苏油、山苍子油、鸦胆子油或莪术油中的一种或几种；矿物油选自脂肪烃、蜡基烃、芳香烃或石蜡油中的一种或几种；合成油选自亚油酸、共轭亚油酸、油酸乙酯、氢化蓖麻油、氢化花生油、氢化棉子油、亚油酸乙酯、共轭亚油酸乙酯、自乳化单硬脂酸酯、辛/癸酸甘油酯或甘油三乙酯中的一种或几种。根据上述油相的理化性质及对人体的有益性优选为富含甘油三酯的豆油。

本发明所述的表面活性剂可以是两性表面活性剂、非离子表面活性剂。其中两性表面活性剂选自豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、丝氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、脑磷脂或氢化磷脂中的一种或几种；非离子表面活性剂选自蔗糖脂肪酸酯类(如蔗糖酯)、司盘类、吐温类、聚氧乙烯脂肪酸酯类(如卖泽Myrij)、聚氧乙烯脂肪醇醚类(如卞泽Brij)、Cetomacrogol类或泊洛沙姆类(如poloxamer)中的一种或几种。经毒理学及物理化学研究筛选，其优选为大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化磷脂或聚氧乙烯-聚氧丙稀嵌段聚合物(泊洛沙姆)中的一种或几种。

本发明所述的调等渗剂是甘油。

本发明提供的人参皂苷乳剂，活性成分的含量为0.1～100mg/ml。

制备人参皂苷乳剂，一般采用有机溶剂来溶解人参皂苷，这样不但造成注射剂中残留有机溶剂而且油相中活性成分的含量较低，因此给临床用药带来困难。本发明人经过大量的实验研究，提供了一种人参皂苷乳剂的制备方法，该方法不采用有机溶剂，且满足了临床药效所需要的人参皂苷油相高浓度。

本发明提供的人参皂苷乳剂的制备方法为：将人参皂苷和表面活性剂先溶解于油中，还可以加入稳定剂，在加热情况下(30-90℃)，混合至澄明，再将溶于水相的表面活性剂和调等渗剂分散到水中。在高速搅拌下把含有人参皂苷的油溶液加到水相中形成粗乳剂。所得的粗乳剂通过超声粉碎机、高压乳匀机进一步乳化，得放置稳定、粒度均匀、无毒的乳剂。

本发明提供的人参皂苷Rg₃纳米乳剂不含有机溶媒及有毒副作用的增溶剂，因此无过敏性，副作用小；且本发明提供的纳米乳剂油相中活性成分的含量较高，满足了临床药效所需的高浓度，同时该乳剂还可以改变皂苷在人体内的分布，提高药物的生物利用度，可以使人参皂苷在体内浓集于肿瘤部位，提高该化合物的抑瘤作用。

具体实施方式

制备例1：制备人参皂苷乳剂

将0.5g 20(S)人参皂苷Rg₃，1.2g蛋黄磷脂，0.04g油酸加入到10g精制大豆油中，加热(60-90℃)，混合至澄明，得到含人参皂苷50mg/g油溶液。将1.2g泊洛沙姆、2.25g甘油分散至注射用水中得水相，在搅拌条件下，滴加含有人参皂苷的磷脂的油溶液得油相到水相分散体系中，制成粗乳剂，加水至100ml。将所得到的粗乳剂在压力100Mpa的条件下，通过乳匀机进一步乳化，乳化结束后可于115℃，30min灭菌，分装即得5mg/ml的乳剂。

制备例2：制备人参皂苷乳剂

将0.5g人参皂苷Rg₃、2g豆磷脂、0.5g油酸加入到10g精制大豆油中，加热，混合至澄明，得到含人参皂苷50mg/g的油溶液。将2.25g甘油、1.2g泊洛沙姆加入至注射用水中制备为水相。在搅拌条件下，滴加含有人参皂苷的磷脂的油溶液到水相分散体系中，制成粗乳剂，加水至100ml。将所得到的粗乳剂在压力100Mpa的条件下，通过乳匀机进一步乳化，乳化结束后可以于115℃，30min灭菌，分装即得5mg/ml的乳剂。

制备例3：制备人参皂苷乳剂

将0.5g 20(R)人参皂苷Rg₃、3.0g蛋黄磷脂、0.1g油酸加入到10g精制豆油中，混合至澄明，得到含人参皂苷20mg/g油溶液。将2.25g甘油加入至注射用水中，在搅拌条件下，慢慢滴加含有人参皂苷的蛋黄磷脂、油酸的油溶液到分散体系中，制成粗乳剂，加水至100ml。将所得到的粗乳剂在压力100Mpa下，通过乳匀机进一步乳化，乳化后可以于115℃，30min灭菌，分装即得5mg/ml的乳剂。

制备例4：制备人参皂苷乳剂

将1.0g 20(S)人参皂苷Rg₃，2.0g蛋黄磷脂，0.06g油酸加入到10g精制豆油中，加热，混合至澄明，得到含人参皂苷100mg/g油溶液。将1.2g泊洛沙姆、2.25g甘油分散至注射用水中得水相。在搅拌条件下，滴加含有人参皂苷的磷脂的油溶液得油相到水相分散体系中，制成粗乳剂，加水至100ml。将所得到的粗乳剂在压力100Mpa的条件下，通过乳匀机进一步乳化，乳化结束后可于115℃，30min灭菌，分装即得10mg/ml的乳剂。

试验例1 人参皂苷20(S)人参皂苷Rg₃乳剂对小鼠体移植性肿瘤生长的抑制作用：

实验材料：乳剂：按制备例1方法制备，临用前以注射用生理盐水稀释至相应浓度。昆明种小鼠，18～22g，雌雄兼用，山东省天然药物工程技术研究中心动物中心提供，合格证号：鲁动质字20010603。小鼠S180肉瘤、H22肝癌和U14宫颈癌购自中国医学科学院北京药物研究所药理室，于昆明种小鼠腹水传代保存。

取已经传代一周生长状态良好的肿瘤传代小鼠，取腹水后，加入三倍体积的注射用生理盐水稀释，接种于50只昆明鼠腋下，每只0.2ml。接种第二天按体重随机分为8组，分别为模型对照组、阳性药组(环磷酰胺60mg/kg，接瘤后第二天单次给药)、人参皂苷20(S)人参皂苷Rg₃乳剂高(100mg/kg)、中(20mg/kg)、低(4mg/kg)剂量组。各组小鼠尾静脉给药(模型组给以等量生理盐水)，每天一次，连续给药10天。于末次给药后24小时处死动物，称体重，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率。

20(S)人参皂苷Rg₃乳剂对小鼠S180肉瘤、H22肝癌和U14宫颈癌体内生长的抑制作用见表1。

表1 20(S)人参皂苷Rg₃乳剂对小鼠S180肉瘤、H22肝癌和U14宫颈癌体内生长的抑制作用

组别	剂量(mg/kg)	对不同肿瘤的抑瘤率(％)
		对不同肿瘤的抑瘤率(％)			S180	H22	U14
		环磷酰胺	60	64.1^**	S180	H22	U14	56.2^**	59.4^**
Rg₃	100	环磷酰胺	60	64.1^**	58.3^**	51.4^**	62.1^**	56.2^**	59.4^**
Rg₃	100	Rg₃	20	34.1^**	58.3^**	51.4^**	62.1^**	29.7^**	38.4^**
Rg₃	4	Rg₃	20	34.1^**	19.6^*	18.3^*	24.3^*	29.7^**	38.4^**

与模型组瘤重比较：P^*＜0.05；P^**＜0.01

结果表明，20(S)人参皂苷Rg₃乳剂在4～100mg/kg间均能明显抑制小鼠S180肉瘤、H22肝癌和U14宫颈癌的生长，且呈一定的剂量依赖性。

实验例2：20(S)人参皂苷Rg₃乳剂对ESC腹水癌小鼠生存期的作用比较：

实验材料：乳剂：按制备例1方法制备，临用前以注射用生理盐水稀释至相应浓度。昆明种小鼠，18～22g，雌雄兼用，山东省天然药物工程技术研究中心动物中心提供，合格证号：鲁动质字20010603。小鼠艾氏腹水癌(ESC)癌购自中国医学科学院北京药物研究所药理室，于昆明种小鼠腹水传代保存。

取接种ESC腹水7天后小鼠的乳白色腹水，加入三倍体积生理盐水稀释，在无菌条件下给80只昆明鼠腹腔注射0.2ml(约500万细胞)，接种后次日随机分为8组，分别为模型对照组、阳性药组(环磷酰胺60mg/kg，接瘤后第二天单次给药)、20(S)人参皂苷Rg₃乳剂高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)剂量组，和20(S)人参皂苷Rg₃水针高(50mg/kg)、中(25mg/kg)、低(12.5mg/kg)剂量组。各组小鼠尾静脉给药(模型组给以等量生理盐水)，每天一次，给药10天。停药后观察小鼠生存状态，记录死亡时间，按生存天数计算生命延长率。

表2 20(S)人参皂苷Rg₃乳剂和水针剂对ESC腹水癌小鼠生存期的影响

生存天数

剂量(mg/kg) 生命延长率(％)

(天)

模型组 - 15.6±1.71 -

环磷酰胺组 60 26.6±1.07^** 70.5

Rg₃ 100 24.4±2.41^** 56.4

Rg₃ 20 21.2±3.08^** 35.9

Rg₃ 4 16.7±1.34 7.1

与模型组比较：P^**＜0.01。

结果表明，人参皂苷20(S)人参皂苷Rg₃乳剂在20～100mg/kg间剂量依赖性地延长ESC腹水癌小鼠的生存时间。

Claims

1.含有人参皂苷的纳米乳剂，其特征为含有人参皂苷Rg3、油、表面活性剂、调等渗剂和水，其中人参皂苷∶油∶表面活性剂∶调等渗剂的重量比为1∶1-50∶1-10∶1-10。

2.根据权利要求1所述的乳剂，人参皂苷Rg3为20(R)-人参皂苷-Rg3、20(S)-人参皂苷-Rg3或20(R，S)-人参皂苷-Rg3。

3.根据权利要求1或2所述的乳剂，油可以是植物油、动物油、精油、矿物油、合成油中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的乳剂，油优选为富含甘油三酯的豆油。

5.根据权利要求1或2所述的乳剂，表面活性剂可以是两性离子表面活性剂或非离子表面活性剂。

6.根据权利要求5所述的乳剂，表面活性剂优选为大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化磷脂或聚氧乙烯-聚氧丙稀嵌段聚合物(泊洛沙姆)中的一种或几种。

7.根据权利要求1或2所述的乳剂，调等渗剂是甘油。

8.根据权利要求1所述的乳剂，其还可以含有稳定剂，稳定剂可以是胆固醇、长链醇(C14-22)、油酸、亚油酸或其衍生物，其用量是人参皂苷的0-200倍。

9.权利要求1-8任一所述的乳剂的制备方法将人参皂苷、表面活性剂加入到油中，还可以加入稳定剂，在加热条件下(30-90℃)，混合至澄明，再将溶于水相的表面活性剂和调等渗剂分散到水中，在高速搅拌下将含有人参皂苷的油溶液加到水相中形成粗乳剂，再通过超声粉碎机、高压乳匀机进一步乳化，即得。

10.权利要求1-8任一所述的乳剂在制备治疗或预防肿瘤的药物中应用。