CN1559400A - 一种黄芩素液的配制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种黄芩素液的配制方法，1)称取黄芩素粉及抗氧化剂，其中黄芩素粉按所需体积及设定的浓度称取，抗氧化剂为每100ml加0.1－0.2g，然后添加注射用水至预配量体积的75－85％；2)用2％－10％碱性溶液和2％－10％酸性溶液调节pH至6.5－8.5，按设定的浓度加水定容并静置72小时，即100毫升含设定值的黄芩素，测渗透压合格；3)添加适量活性炭，每1000ml液体加0.05－0.5g，在60－80℃条件下保温1小时，放置冷却1周过滤后分装于容器内。本发明有益的效果是：黄芩素药理活性是多方面的，它在清除氧自由基，减轻组织缺血再灌注损伤，调节免疫功能，保肝利胆，抗感染，抗肿瘤等方面均有一定的作用，是多种中药注射液、口服液、胶囊、饮片、丸散、膏丹的组成成分，具有潜在的临床开发应用价值。

Description

一种黄芩素液的配制方法

技术领域

本发明涉及一种配制方法，尤其是一种黄芩素液的配制方法。

背景技术

黄芩素是中药黄芩的重要单体之一，化学结构属黄酮类，具有多种药理作用。它能抗菌、抗病毒、抑制炎症反应、保肝、利胆、利尿、抗癌等，因此具有较好的临床应用价值。黄芩素的主要药理作用如下：

1抗菌、抗病毒

黄芩抗菌范围较广，体外试验证明，其煎剂对多种革兰染色阳性菌、革兰染色阴性菌及螺旋体等均有抑制作用.黄芩也具有抗真菌活性，对多种致病性真菌，如白色念珠菌，许兰毛癣菌等有一定抑制作用。B是黄芩中抗菌的有效成分。近来研究显示，B还具有抗爱滋病病毒(HIV)的作用，能诱导感染HIV的细胞发生凋亡。有学者通过细胞培养发现B可抑制爱滋病病毒(HIV-1)，并抑制其逆转录酶(HIV-1RT)，但是，如果B的6-羟基被遮蔽，则丧失抑制HIV-1RT的活性，说明6-羟基为抑制HIV-1RT活性所必需。

2抑制炎症反应

2.1抗组胺释放  B对合成多胺诱导的大鼠腹膜肥大细胞组胺释放有抑制作用。

2.2抗花生四烯酸代谢  B可通过抑制有丝分裂原激活的蛋白激酶——细胞溶质的磷脂酶A₂通道(MAPK-cPLA₂)来减少花生四烯酸的释放。B对大鼠血小板花生四烯酸代谢中环氧酶与脂氧酶均有抑制作用，对脂氧酶更具选择性，还对大鼠白细胞花生四烯酸代谢中脂氧酶代谢产物5-羟基二十碳四烯酸(5-HETE)及环氧酶代谢产物12-羟基十七碳三烯酸(HHT)的生成有抑制作用。B在慢性炎症模型(大鼠佐剂性关节炎，ED₅₀＝120.6mg.kg^-1)中的抗炎活性大于爱兰苔胶诱导的大鼠足趾水肿，其抗炎机制可能是抑制花生四烯酸代谢中的5-脂氧合酶途径。

2.3抑制血管通透性  有学者用3个标准抗炎剂(保泰松、消炎痛、地塞米松)作对照，发现B可抑制由醋酸诱导的小鼠血管通透性的增加，并减轻合成多胺诱导的大鼠急性足趾水肿及抑制大鼠佐剂性关节炎的继发损害，表明其对急、慢性炎症均有效。

2.4抗过敏  通过B对抗原攻击后的致敏豚鼠肺内SRS-A和LT释放及气管平滑肌紧张度影响的研究，发现B可抑制SRS-A和LT释放，同时降低LTG₄和D₄的释放，并使豚鼠呈收缩状态的支气管平滑肌松弛。对豚鼠的过敏性气喘有缓解作用，能缓解整体动物的哮喘，而且与麻黄素有协同作用，拮抗过敏性浮肿及炎症。此外，对动物的被动全身性变态反应及皮肤变态反应，亦有一定抑制作用。

3保肝、利胆、利尿

B对培养大鼠肝星状细胞显示强的抗增殖作用，有可能成为一种抗肝纤维化形成的药物。B是一个很好的黄嘌呤氧化酶抑制剂，可用于治疗肝炎。B具有利胆作用，可使实验动物的胆汁分泌量增加。此外，它还具有利尿作用，对麻醉犬静脉注射10mg.kg^-1或20mg.kg^-1的B后有明显利尿作用。

4清除自由基及抗氧化作用

B可清除自由基，可预防诸如氢过氧化物酶、超氧化物阴离子等氧自由基引起的成纤维细胞的损伤。可通过形成铁螯合物抑制抗坏血酸诱导的大鼠肝微粒体脂质过氧化物酶。10μmol.L^-1的B可有效抑制Fe²⁺-Vitc，NAPH或NADPH诱导的大鼠脑皮质线粒体脂质过氧化，使细胞免受H₂O₂诱导的损伤。在4种黄芩的黄酮类成分中，B是最有效的抗氧化剂。在缺血再灌注模型中，B可使细胞避免致死量氧化剂的损伤。

5抗凝血和抗血栓形成

以标准抗血栓药阿司匹林和肝素作对照，B可抑制胶原诱导的大鼠血小板聚集作用，抑制凝血酶诱导的纤维蛋白原转化为纤维蛋白；对花生四烯酸诱导的血小板聚集也有抑制作用，并防止由内毒素诱导的DIC及大鼠血小板和纤维蛋白原的减少。B能抑制凝血酶及凝血酶受体紧张肽诱导的血纤维蛋白溶酶原激动剂抑制因子-1(PAI-1)的生成，其机制也许是降低Ca²⁺的升高，提示B可能成为一个治疗动脉硬化和抗血栓形成的药物。

6抑制胰酶活性

荻田善三朗证实黄芩的9种黄酮类成分中，B有较强的抗胰蛋白酶作用，其IC₅₀为5×10^-7M，而黄芩以外的其它6种黄酮类成分的抗胰蛋白酶作用弱，其IC₅₀为10^-5M，推测其抑制胰蛋白酶作用与其结构中黄酮骨架邻接的羟基有关。

7对生物膜的作用

金井成行探讨了B对红细胞膜的作用，方法：①按常规制备黄芩的甲醇提取物，经乙醚提取后溶于己烷，进而以SiO₂柱分离精制B后备用；②按阿部等的方法，从体重180g-200g的Wistar雄性大鼠采血，用生理盐水洗涤两次后，以等渗缓冲液稀释制备成体积分数为0.4的红细胞混悬液；③测定溶血活性，热溶血保护作用，低渗溶血保护作用。

7.1溶血活性B在10^-4mol.ml^-1以上浓度时对红细胞有损害性，引起溶血。

7.2热溶血作用B在10^-7mol.ml^-1-10^-5mol.ml^-1浓度时呈保护作用，但高于10^-5mol.ml^-1时反而有促溶血作用。

7.3低渗溶血保护作用在10^-8mol.ml^-1-10^-4mol.ml^-1浓度时具有低渗溶血保护作用。

8抗癌

B可抑制肿瘤生成，诱导人肝癌细胞株凋亡，B也许能成为一个治疗膀胱癌具有吸引力和前景的药物。

9对平滑肌的双重调节作用

B可强化离体大鼠肠系膜动脉对脱羟肾上腺素的收缩反应，可能是通过抑制内皮一氧化氮形成和/或释。有学者在研究B对游离大鼠肠系膜动脉的影响时发现，B有收缩、舒张血管平滑肌的双重作用，在0.3uM-10uM时引起收缩，30uM-300uM时引起舒张，认为低浓度时的血管收缩作用可能是通过抑制内皮细胞的一氧化氮合成或释放，高浓度时的舒张作用是通过抑制蛋白激酶C介导的收缩机制。通过研究B对培养兔血管平滑肌细胞增殖反应的影响，发现B对血小板源性生长因子刺激的增殖反应抑制作用强于血清刺激的增殖，B具有抗增殖和脂氧合酶抑制能力，也许是预防动脉粥样硬化和再狭窄病理改变的较好药物。

10降血压作用

B不能影响血压正常大鼠的血压，但可降低高血压大鼠的血压。

11抑制粘附分子的表达

通过观察B对培养人脐静脉内皮细胞IL-1β和TNF-α诱导的粘附分子表达的影响，发现B可抑制IL-1β和TNF-α诱导的白细胞粘附分子-1(ELAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达，对IL-1β诱导的ELAM-1和ICAM-1表达的IC₅₀分别为2.3×10^-5M和4.0×10^-5M，对TNF-α诱导的ELAM-1和ICAM-1表达的IC₅₀分别为1.5×10^-5M和3.1×10^-5M。

目前尚无国家药监局正式批准生产的黄芩素液用于临床，而黄芩素药理活性是多方面的，它在清除氧自由基，减轻组织缺血再灌注损伤，调节免疫功能，保肝利胆，抗感染，抗肿瘤等方面均有一定的作用，是多种中药注射液、口服液、胶囊、饮片、丸散、膏丹的组成成分，具有潜在的临床开发应用价值。

发明内容

本发明要解决上述所述的不足，提供一种黄芩素液的配制方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案。这种黄芩素液的配制方法，1)、称取黄芩素粉及抗氧化剂，其中黄芩素粉按所需体积及设定的浓度称取，抗氧化剂为每100ml加0.1-0.2g，然后添加注射用水至预配量体积的75-85％；2)、用2％-10％碱性溶液和2％-10％酸性溶液调节PH至6.5-8.5，按设定的浓度加水定容并静置72小时，即100毫升含设定值的黄芩素，测渗透压合格；3)、添加适量活性炭，按照每1000ml液体加0.05-0.5g，在60-80℃条件下保温1小时，放置冷却1周后，依次用滤纸、垂熔漏斗、0.22um微孔滤膜过滤，分装于玻璃容器内，115℃灭菌30分种，灯检提示澄明，静置无沉淀，并经动物实验证实其溶血、热原、血管脆性、无菌试验合格后即得。

本发明所提供的黄芩素液的配制方法还可以进行完善。所述的抗氧化剂为无水亚硫酸钠、硫代硫酸钠或其它抗氧化剂。所述的碱性溶液为NaOH、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠。所述的酸性溶液为盐酸、磷酸或其他酸性溶液。

在步骤2中可以加入0.2％-5％的助溶剂，所述的助溶剂可为聚乙二醇、乙醇、土温80或普郎尼克，以增加其稳定性。还可以在步骤2中添加氯化钠、葡萄糖粉或其它增量剂，调渗透压到等渗状态。

本发明有益的效果是：黄芩素药理活性是多方面的，它在清除氧自由基，减轻组织缺血再灌注损伤，调节免疫功能，保肝利胆，抗感染，抗肿瘤等方面均有一定的作用，是多种中药注射液、口服液、胶囊、饮片、丸散、膏丹的组成成分，具有潜在的临床开发应用价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述。

实施例1：

黄芩素的提取及LD₅₀测定

1、黄芩素的提取

取黄芩饮片5公斤，加8倍量水煮沸1小时，用纱布过滤，药渣再加6倍量水煮沸1小时，过滤。将两次滤液合并后，用浓盐酸调节PH至1-2，一边加盐酸一边搅拌，加热至80度，使黄芩素粗品析出。80度保温静置，放置30分钟，待上层液澄明，滤取沉淀。加入相当于沉淀物8倍量的水，在搅拌的同时加入40％的氢氧化钠溶液调节PH至7，使黄芩素成为钠盐而溶于水中。再加入等量的乙醇，搅拌，使淀粉及其糊化物沉淀，过滤。滤液加浓盐酸调PH至1-2，搅拌并加热至50度，使黄芩素沉淀析出，过滤。以乙醇洗涤沉淀至PH为4。再加入10倍量的蒸馏水，用40％的氢氧化钠溶液调节PH至6-7，使黄芩素溶解。加入适量活性碳，搅拌，于50度保温半小时后，加入等量的乙醇搅拌，再过滤。滤液用浓盐酸调节PH至2-3，于60度下保温半小时后，可见黄芩素析出。过滤，将所得沉淀用50％的乙醇洗涤1-2次，在60度下烘干，即得到黄芩素粗品。经薄层分析，发现有一条杂带。又反复重结晶，得到20克黄色针壮结晶。经高效液相及熔点测定，确定其为纯品，纯度＞98％。

2、黄芩素LD₅₀测定

2.1实验目的：观察黄芩素液静脉注射的急性毒性作用，以计算其LD₅₀。

2.2受试药物：黄芩素液，浓度为1％(0.01g/ml)。

2.3实验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重17-18克。

2.4实验方法：取出12只小鼠进行预试，雌雄各半，随机分为大、中、小三个剂量组，每组动物数分别为4、4、4只。以药物的最大浓度0.01g/ml设计为Dm，然后倍比稀释，静脉注射的容量为0.4ml/10g，大剂量给药后10小时100％死亡，其余组完全存活。因此，Dm为400mg/kg。

正式实验将50只小鼠分层随机分为5组，每组10只，雌雄各半，组间剂量比值为1∶0.8。各组动物按0.4ml/10g静脉注射，并逐日观察记录中毒反应，死亡数和死亡情况，对死亡动物逐一进行肉眼尸检，共连续观察7日。7日后清点各组小鼠死亡数，计算死亡率，用改良寇氏法计算LD₅₀。

2.5实验结果：第五组(剂量400mg/kg)的动物100％死亡。动物在给药后出安静、闭眼、不动，最后因窒息抽搐而死亡。尸检发现有轻微肝脏淤血症状。

                  用改良寇氏法计算结果如下

组别  动物数(n)   剂量(mg/kg)    对数剂量(x)    死亡率(P)    P²

1       10          163.84          2.214          0.1      0.01

2       10          204.80          2.311          0.3      0.09

3       10          256.00          2.408          0.6      0.36

4       10          320.00          2.505          0.8      0.64

5       10          400.00          2.602          1.0      1.00

2.5结论：1％黄芩素液的LD₅₀为240.75±71.57mg/kg。

3、1％黄芩素液配方：按所需体积5000ml称取纯度＞95％(如为98％)的黄芩素粉51克(5000ml*1％/98％)及抗氧化剂：硫代硫酸钠(每100ml加0.1-0.2g)，添加注射用水至预配量体积5000ml的80％左右，用2％-10％NaOH调节PH至6.5-8.5，必要时滴加或喷洒2％-10％HCL，或同时加入0.2％-5％的助溶剂聚乙二醇，以增加其稳定性。按1％浓度定容并静置72小时，依据等渗溶液的要求及所需用途，可分别添加氯化钠、葡萄糖粉或其它增量剂，调渗透压到等渗状态。然后再添加适量活性炭(每1000ml加0.1g)，于60-80℃保温1小时后放置冷却。1周后，依次用滤纸、垂熔漏斗、0.22um微孔滤膜过滤，分装于玻璃容器内，115℃灭菌30分钟，灯检提示澄明，静置无沉淀，并经动物实验证实其溶血、热原、血管脆性、无菌试验合格后即得。

2、保存方法：避光、阴凉保存

3、制剂用途：静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、口服、外用

Claims (7)

1、一种黄芩素液的配制方法，其特征在于：

1)、称取黄芩素粉及抗氧化剂，其中黄芩素粉按所需体积及设定的浓度称取，抗氧化剂为每100ml加0.1-0.2g，然后添加注射用水至预配量体积的75-85％；

2)、用2％-10％碱性溶液和2％-10％酸性溶液以滴加或喷洒方式调节PH至6.5～8.5，按设定的浓度加水定容并静置72小时，即100毫升含设定值的黄芩素，测渗透压合格；

3)、添加活性炭，按照每1000ml液体加0.05-0.5g，在60-80℃条件下保温1小时，放置冷却1周后，依次用滤纸、垂熔漏斗、0.22um微孔滤膜过滤，分装于玻璃容器内，115℃灭菌30分种，灯检提示澄明，静置无沉淀，并经动物实验证实其溶血、热原、血管脆性、无菌试验合格后即得。

2、根据权利要求1所述的黄芩素液配制方法，其特征在于：所述的抗氧化剂为无水亚硫酸钠、硫代硫酸钠或其它抗氧化剂。

3、根据权利要求1所述的黄芩素液配制方法，其特征在于：所述的碱性溶液为NaOH、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠。

4、根据权利要求1所述的黄芩素液配制方法，其特征在于：所述的酸性溶液为盐酸、磷酸或其他酸性溶液。

5、根据权利要求1所述的黄芩素液配制方法，其特征在于：在步骤2中可以加入0.2％-5％的助溶剂。

6、根据权利要求5所述的黄芩素液配制方法，其特征在于：所述的助溶剂可为聚乙二醇、乙醇、土温80、普郎尼克。

7、根据权利要求1或5或6所述的黄芩素液配制方法，其特征在于：可以在步骤2中添加精品氯化钠、精品葡萄糖粉或其它增量剂，调渗透压到等渗状态。