CN1544098A

CN1544098A - 高效神经生长因子生物胶及其制备和使用方法

Info

Publication number: CN1544098A
Application number: CNA2003101113757A
Authority: CN
Inventors: 邹金生
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2003-11-12
Filing date: 2003-11-12
Publication date: 2004-11-10

Abstract

高效神经生长因子生物胶及其制备和使用方法，涉及一种含有高效神经生长因子(NGF)的生物胶的制备和使用方法。它由人血生物胶及神经生长因子(NGF)混合而成。生物胶和NGF可分开制备，也可将NGF在生产时混合在生物胶的人血纤维蛋白原和凝血酶中的任一成分中。使用时将含NGF的生物胶，或分装的NGF与生物胶按比例混合，直接涂抹或覆盖到人体的各个创伤或手术部位，或用注射器直接推到创伤部位。本发明将生物胶和NGF混合为一，不但充分利用了生物胶的生物粘合剂的粘合与修复特点，而且改变了由注射途径使用NGF的传统低效率方法，而由人血生物胶携带更高剂量的NGF直接进入创伤神经组织部位，因而大大提高了NGF对创伤神经组织的修复、治疗效果。

Description

高效神经生长因子生物胶及其制备和使用方法

技术领域本发明涉及一种含有高效神经生长因子(NGF)的生物胶及其制备和使用方法。

背景技术生物胶又称纤维蛋白粘合剂(FS)，是一种人体蛋白胶，主要由人血纤维蛋白原和凝血酶组成，也可加入少量抑肽酶。纤维蛋白原是可溶性蛋白单体，受到凝血酶的激活，在凝血因子XIII的参与下转变成不溶性胶状多聚体，故称生物胶。纤维蛋白原的生产方法是：采用新鲜低温冰冻人血浆，融化后在0-6℃离心分离，可在离心前加1-8％乙醇。沉淀的纤维蛋白原再经进一步纯化，然后进行病毒灭活。人血凝血酶又称凝血因子II，由凝血酶原活化而成。生产时先从人血浆中提取凝血酶原，经微量钙激活成凝血酶。活化的凝血酶经过病毒灭活处理后便可进入成品制备过程。使用时将各成分按临床需要，按不同比例混合后涂置于人体局部位置，FS很快便凝固成为胶体而起到粘合作用。

目前，生物胶在国内外各种外科手术(包括神经外科手术)中，被广泛用作组织粘合、固定和修复的同源生物胶。除了能有效粘合伤口，加快伤口愈合生长和修复损伤的神经轴突外，生物胶最大的特点是能被人体渐渐吸收。如果将其它药物或生物体“包裹”其中，它们便会随着生物胶渐渐被人体吸收而进入人体。所以，生物胶还可作为生物载体，将其它药物或生物体缓慢释放到人体的各个特定部位。人血浆生物胶已经在临床使用多年，国内外市场均有销售。

神经生长因子(NGF)是人体或动物体内的一种小分子神经营养蛋白因子，可从人胎盘组织(包括脐带组织)中提取，也可从小鼠颌下腺组织中提取，经液相层析纯化后进行病毒灭活。它是目前世上唯一化学结构被清楚阐明的神经细胞生长调节因子。NGF对中枢神经和周围神经系统神经元的生长、发育、分化和再生以及神经功能的表达均具有重要的调控和促进作用。国内外在临床上越来越广泛地应用NGF作为各种神经损伤修复，包括外伤性、生理性(老年)神经损伤修复的手段，而且是目前国内外用于神经损伤治疗的唯一有效生物制剂。然而，在临床使用中，由于现行的肌肉注射方法导致NGF在通过肌肉→血液循环→神经元一系列过程中、大部分NGF生物活性都被降解失活而不能使NGF达到应有的最佳治疗效果。如果能将NGF直接使用在病变或创伤局部位置，然后大剂量缓慢释放，即能达到最佳治疗效果。

发明内容本发明的目的旨在提供一种能发挥生物胶和高效神经生长因子(NGF)的双重作用，由人血生物胶携带更高剂量的NGF直接进入创伤神经组织部位，因而大大提高NGF对创伤神经组织的修复、治疗效果的高效神经生长因子(NGF)生物胶的制备和使用方法。

本发明目的的实现方式为，高效神经生长因子生物胶，生物胶是由无动物成分的人血浆纤维蛋白原和凝血酶组成。高效神经生长因子生物胶由组成生物胶的纤维蛋白原、凝血酶及高效神经生长因子混合而成，具体混合比例为：每一毫克纤维蛋白元加0.25-30国际单位的凝血酶，加5-1000单位的高效神经生长因子。

高效神经生长因子生物胶的制备方法，生物胶和高效神经生长因子可分开制备，分开包装，也可将高效神经生长因子在生产时混合在生物胶的人血纤维蛋白原和凝血酶中的任一成分中，分装或混合分装的比例为：每一毫克纤维蛋白原加0.25-30国际单位的凝血酶，加5-1000单位的高效神经生长因子。

高效神经生长因子生物胶的使用方法，直接涂抹或覆盖到人体的各个创伤或手术部位，或用注射器直接推到创伤部位。

生物胶和高效神经生长因子(NGF)均有促进组织和神经生长，修复神经损伤和营养神经组织的相似功能，本发明将生物胶和NGF混合为一，不但充分利用了生物胶的生物粘合剂的粘合与修复特点，而且改变了由注射途径使用NGF的传统低效率方法，而由人血生物胶携带更高剂量的NGF直接进入创伤神经组织部位，因而大大提高了NGF对创伤神经组织的修复、治疗效果。

具体实施方式本发明的高效神经生长因子(NGF)生物胶由人血生物胶及高效神经生长因子(NGF)混合而成。生物胶和NGF可分开制备，也可将NGF在生产时混合在生物胶的人血纤维蛋白原和凝血酶中的任一成分中。使用时将含NGF的生物胶，或分装的NGF与生物胶按比例混合，直接涂抹或覆盖到人体的各个创伤或手术部位，或用注射器直接推到创伤部位。

本发明所用的生物胶是由无动物成分的人血浆纤维蛋白原和凝血酶组成。所用的凝血酶是由凝血酶原经微量钙离子激活而成。激活凝血酶原时加入2-20mM的CaCl2，然后放置于10-30℃，孵化4-48小时。

本发明所用的高效神经生长因子(NGF)为人源性或鼠源性NGF。

采用混合分装，包装中加入稳定剂进行冷冻干燥，其主要成分和最终含量应包含以下化学成分中之一，所含化学成分及百分含量如下：蔗糖1-5％、麦芽糖1-5％、谷氨酸0.5-3％、丙氨酸0.5-3％、EACA 0.01-0.25M、PEG1000 1-3％、PEG4000 1-3％、PEG6000 1-3％。

在本发明的生物胶中，人血浆纤维蛋白原的总量和浓度是决定生物胶强度和硬度的主要因素，凝血酶的总量和浓度是决定生物胶凝固时间快慢的主要因素根据生物胶强度、硬度要求不同，每剂量纤维蛋白原总量和浓度也不相同，生物胶强度、硬度要求越高，纤维蛋白原总量和浓度也越高。根据临床凝血时间要求不同，每一毫克纤维蛋白原中凝血酶的加量在0.3-30国际单位变化。凝血时间要求越快，凝血酶的加量越多。

动物实验研究证明，将生物胶作为NGF的生物载体，使NGF直接缓慢释放到人体的各个特定部位，能大大提高NGF的治疗效果。

如以大白鼠周围神经组织创伤的修复作为模型进行实验，比较显微缝合技术，用生物胶携带NGF、生物胶对大白鼠周围神经功能的恢复和治疗效果进行实验。结果表明：生物胶加NGF不仅产生极好的粘合效果，而且创伤组织和神经功能恢复的治疗效果远远优于单独使用缝合或生物胶的效果，具体结果见表1：

表1

检测指标	缝合	生物胶	生物胶加NGF
检测指标	缝合	生物胶	生物胶加NGF	神经潜伏期延迟率	178±32.45	178±32.45	178±32.45
吻合神经纤维通过率	55.56±7.88	55.56±7.88	55.56±7.88	神经潜伏期延迟率	178±32.45	178±32.45	178±32.45
吻合神经纤维通过率	55.56±7.88	55.56±7.88	55.56±7.88	创口组织愈合时间(天)	5.5±0.8	4.5±1.0	2.75±0.5

同样以大白鼠坐骨神经组织创伤的修复作为模型进行实验，用电生理学检测技术比较感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)的恢复情况。结果表明：生物胶加NGF的粘合效果和对创伤神经组织功能恢复的治疗效果远远优于单独使用缝合或生物胶。其结果见表2：

表2坐骨神经创伤后MEP、SEP恢复百分比

	SEP恢复时间(周)			MEP恢复时间(周)
	SEP恢复时间(周)			MEP恢复时间(周)			实验组	1周	2周	3周	1周	2周	3周
自然恢复	0	22	68	0	0	50	实验组	1周	2周	3周	1周	2周	3周
自然恢复	0	22	68	0	0	50	对照	0	24	76	0	0	65
注射NGF	6	76	100	0	72	100	对照	0	24	76	0	0	65
注射NGF	6	76	100	0	72	100	生物胶加NGF	11	100	100	5	100	100

由以上实验可见，由人血生物胶携带更高剂量的NGF直接进入创伤神经组织部位，相对单独使用缝合或生物胶，可大大提高了NGF对创伤神经组织的修复、治疗效果。

参考文献

1、Hock，K.Heese，C.Hulette et al.Region-Specific neurotrophin Imballances in AlzheimerDisease：Decreased Level of Brain-derived Neurotrophic Factor and Increase Levels of Nerve GrowthFactor in Hippocanmpus and Cortical Areas；Arch Neuro，2000，57(6)：846-851

2、Jinsheng Zou，Gerard Marx，John Hamman and Bernard Horowitz：Method for activatingprothrombin to thrombin美国专利号：5677162

3、扬志明，黄富国，易林等：生物粘合剂粘合神经的实验研究。修复重建外科杂志，1990；4(3)

4、Lambiase A，Rama P，Bonini S，et al：Topical treatment with nerve growth factor for comealneurotrophic ulcers.N Engl J Med，1998，338(17)：1174-1180

5、underland S.Nerve injuries and their repair.Churchill Livingston，London，1991：7-18

Claims

1、高效神经生长因子生物胶，生物胶是由无动物成分的人血浆纤维蛋白原和凝血酶组成，其特征在于由组成生物胶的纤维蛋白原、凝血酶及高效神经生长因子混合而成，具体混合比例为：每一毫克纤维蛋白元加0.25-30国际单位的凝血酶，加5-1000单位的神经生长因子。

2、权利要求1所述的高效神经生长因子生物胶的制备方法，其特征在于生物胶和高效神经生长因子可分开制备，分开包装，也可将高效神经生长因子在生产时混合在生物胶的人血纤维蛋白原和凝血酶中的任一成分中，分装或混合分装的比例为：每一毫克纤维蛋白原加0.25-30国际单位的凝血酶，加5-1000单位的高效神经生长因子。

3、根据权利要求2所述的生物胶的制备方法，其特征在于生物胶是由无动物成分的人血浆纤维蛋白原和凝血酶组成。

4、根据权利要求2、3所述的生物胶的制备方法，其特征在于凝血酶是由凝血酶原经微量钙离子激活而成。

5、根据权利要求4所述的生物胶的制备方法，其特征在于激活凝血酶原时加入2-20mM的CaCl₂，然后放置于10-30℃温度下，孵化4-48小时。

6、根据权利要求2所述的生物胶的制备方法，其特征在于高效神经生长因子为人源性或鼠源性NGF。

7、根据权利要求2所述的生物胶的制备方法，其特征在于采用混合分装，包装中加入稳定剂进行冷冻干燥，其主要成分和最终含量应包含以下化学成分中之一，所含化学成分及百分含量如下：蔗糖1-5％、麦芽糖1-5％、谷氨酸0.5-3％、丙氨酸0.5-3％、EACA 0.01-0.25M、PEG1000 1-3％、PEG4000 1-3％、PEG6000 1-3％。

8、权利要求1所述的高效神经生长因子生物胶的使用方法，其特征在于直接涂抹或覆盖到人体的各个创伤或手术部位，或用注射器直接推到创伤部位。