CN104940981A - 具有生物活性的外用敷料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医学工程领域,具体涉及一种以丝素蛋白和成纤维细胞生长因子为原料制作的具有生物活性的外用敷料及其制备方法。本发明的具有生物活性的外用敷料是将丝素蛋白溶解于水中,然后加入链霉素、青霉素和成纤维细胞生长因子,混匀,0-8℃静置30-120分钟,制得具有生物活性的原液,将原液冷冻干燥得生物活性原料,生物活性原料用生理盐水溶解成水凝胶状即得外用敷料,该具有生物活性的外用敷料呈水凝胶状,FGF的使用可以有效缩短患者伤口愈合进程,涂布于创面,可以有效的发挥FGF的促创伤修复功能,使用方便。
Description
技术领域
本发明属于生物医学工程领域,具体涉及一种以丝素蛋白和成纤维细胞生长因子为原料制作的具有生物活性的外用敷料及其制备方法。
背景技术
人体体表开放性外伤一般涉及皮肤、皮下组织和肌肉等组织器官的损伤。如何促进人体体表开放性外伤伤口的愈合是日常生活中最常见的问题之一。对于这一问题的解决,在外科临床上有很多的方案。然而,随着社会的发展,人们对医疗健康的质量要求永无止境。对于经医疗机构如医院处理的病例,外伤愈合基本都有保障。但是,对于一些比较轻微程度的外伤,出于节省治疗费用等原因,人们一般选择自行愈合的态度。所以,寻求更简便、效果更好、成本更低的治疗措施是永远的发展方向。目前,生物活性物质如种子细胞和生长因子等的介入,是目前相关研究的前沿热点问题之一。
目前用于生物医用领域的天然高分子主要包括多糖类和蛋白质类等,其中壳聚糖、丝素蛋白等在创面修复领域应用最为广泛。近十年来,丝素蛋白在纯化方面取得显著成功,被广泛应用到了生物材料,它们不仅具有很好的强度,而且展现出极佳的生物相容性。因此,基于丝素蛋白和壳聚糖的生物材料应用于创面修复和人造皮肤的理论依据已经得到证实,具备很好的前景,将成为未来培养人造皮肤最好的支架之一。丝素蛋白,是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白,含量约占蚕丝的70%-80%,含有18种氨基酸,其中甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)和丝氨酸(Ser)约占总组成的80%以上。丝素本身具有良好的机械性能和理化性质,如良好的柔韧性和抗拉伸强度、透气透湿性、缓释性等,而且经过不同处理可以得到不同的形态,如纤维、溶液、粉、膜以及凝胶等。
在人体伤口愈合的过程中,成纤维细胞分泌胶原是伤口皮肤愈合的根本原因。所以,凡是促进皮肤成纤维细胞生长和分泌作用的因素均为备选的有利因素。成纤维细胞生长因子(FGF)不但可以有力的促进成纤维细胞的生长和分泌作用,同时,对肌肉等组织也有很强的促损伤修复功能。目前,FGF已经获我国Ⅰ类新药批文,这就为其在生物医药领域的广泛应用铺平了道路。
申请号为201310289812.8的发明专利公开了一种纳米仿生缓释型生物医用敷料及其制备方法,该纳米仿生缓释型生物医用敷料的原液,是含有丝素蛋白、人表皮细胞生长因子、成纤维细胞生长因子的水溶液,pH 值为5-8,其中丝素蛋白的质量百分浓度为2%-30%,人表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子的总浓度为0-200ppm;或者采用质量百分浓度为1%-10% 的壳聚糖替代所述丝素蛋白;采用静电纺技术,使纳米仿生缓释型纤维膜敷料的原液形成喷射流喷射至收集器上,即得纳米仿生缓释型生物医用敷料。
但FGF为生物活性物质,在水相介质中具有半衰期,生物活性保持时间较短。所以,承载了FGF等生长因子类物质的水凝胶在应用过程中,如何较长时间地保持生物活性是亟待解决的主要问题之一。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种具有生物活性的原液及其制备方法,该具有生物活性的原液免疫原性低,来源丰富,价格低廉,其制备方法简单;本发明的目的之二在于提供一种保质期长的生物活性原料,该生物活性原料保存及运输过程中是以干物质的形态存在,使得FGF生物活性长期保持;本发明的目的之三在于提供具有生物活性的外用敷料,该具有生物活性的外用敷料呈水凝胶状,使用方便。
为实现上述目的,本发明的技术方案为:
具有生物活性的原液,所述具有生物活性的原液是含有丝素蛋白、成纤维细胞生长因子、链霉素和青霉素的水溶液。
进一步,所述的具有生物活性的原液,所述原液中丝素蛋白的浓度为0.1-0.25g/ml。
进一步,所述的具有生物活性的原液,所述原液中成纤维细胞生长因子的浓度为0.01-0.05ug/ml。
进一步,所述的具有生物活性的原液,其特征在于,所述原液中,每100ml原液中含有链霉素和青霉素各2-3万个活性单位。
进一步,所述的具有生物活性的原液,所述丝素蛋白为家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白。家蚕后部丝腺来源丝素蛋白为FGF载体制作生物活性外用敷料的报道,与相近的其他研究相比,具有免疫原性低、来源丰富、价格低廉、制备方法简单等优点。
本发明所述的具有生物活性的原液的制备方法,将丝素蛋白溶解于水中,然后加入链霉素、青霉素和成纤维细胞生长因子,混匀,0-8℃静置30-120分钟,即得具有生物活性的原液。
本发明的保质期长的生物活性原料,将本发明所述的具有生物活性的原液冷冻干燥即得。
本发明所述的保质期长的生物活性原料真空密封包装,0-8℃保存。
本发明所述的具有生物活性的外用敷料呈水凝胶状,其制备方法为:取本发明所述的生物活性原料,用生理盐水溶解成水凝胶状即得。
进一步,所述的具有生物活性的外用敷料,每3-5ml生理盐水溶解1g所述的生物活性原料。
本发明的有益效果在于:
本发明的具有生物活性的原液是含有丝素蛋白、成纤维细胞生长因子、链霉素和青霉素的水溶液,该具有生物活性的原液免疫原性低,来源丰富,价格低廉,其制备方法简单;本发明的保质期长的生物活性原料,保存及运输过程中是以干物质的形态存在,使得FGF生物活性长期保持;本发明的具有生物活性的外用敷料,该具有生物活性的外用敷料呈水凝胶状,FGF的使用可以有效缩短患者伤口愈合进程,涂布于创面,可以有效的发挥FGF的促创伤修复功能,使用方便。
具体实施方式
下面将结合具体实施例,对本发明的优选实施例进行详细的描述。所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明,但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整,仍属于本发明的保护范围。实施例中未注明具体条件的实验方法或按照制造厂商所建议的条件。
本发明的具有生物活性的原液、生物活性原料及具有生物活性的外用敷料中因含有青霉素,对青霉素过敏患者慎用。
实施例1
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取10克家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入链霉素和青霉素各2万个活性单位,加入1微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制成FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
取将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期6个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。对青霉素过敏患者慎用。
实施例2
本实施例中以非丝腺来源的丝素蛋白为原料。
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取10克丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入链霉素和青霉素各2万个活性单位,加入1微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制成FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期6个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。对青霉素过敏患者慎用。
实施例3
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取25克家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入链霉素和青霉素各3万个活性单位,加入5微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期6个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。对青霉素过敏患者慎用。
实施例4
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取15克家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入链霉素和青霉素各2万个活性单位,加入2微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期6个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。对青霉素过敏患者慎用。
实施例5
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取15克家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入链霉素2万个活性单位,加入2微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期4个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。
实施例6
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取15克家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入青霉素2万个活性单位,加入2微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期4个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。
实施例7
(1)FGF与丝素蛋白的混合
取15克家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白,溶解于100毫升三蒸水中,加入2微克成纤维细胞生长因子(FGF),低温(0-8℃)静置1小时,即制FGF与丝素蛋白的混合物。
(2)混合物的脱水
将步骤(1)中所制备的FGF与丝素蛋白的混合物置于培养皿中,冷冻干燥成膜状。即制得一种具有生物活性的外用敷料。
(3)保存及运输
将步骤(2)中所制备的膜状材料1克,真空密封包装,低温(0-8℃)保存及运输,保质期2-3个月。
(4)使用方法
本发明为医学外用制品,是一种适用于轻微的体表创伤及外科手术伤口缝合后的敷料。在使用前,用5毫升生理盐水溶解成水凝胶,涂布于创部。即配即用。
实施例8
参照申请号为201310289812.8的发明专利中介绍的方法对使用本发明实施例1的外用敷料后的创面愈合效果、组织形态特征和细胞增殖情况进行验证,具体方法如下:
选取体重为180-220g的健康大鼠,在其腹腔注射3%戊巴比妥钠,随机分为治疗组和对照组。在大鼠背部脊柱中部两侧各切割两个直径为1.8cm的圆形创面,并破坏少许肌肉组织,止血后备用。随即将实施例1制备的外用敷料按照使用方法涂布于创面处,次日换药。对照组以生理盐水为阴性对照。于创面制成后3天、5天、7天拍照记录创面愈合情况,HE染色等观察创面组织形态特征和检测细胞增殖情况。
然后再按照上述相同的方法分别对实施例2、实施例5-7的外用敷料进行验证,结果如下:
以创面无明显积血积液,局部皮肤未见红肿为佳,表示外用敷料具有良好生物相容性,以有任何积血、积液及红肿为次之,生物相容性较差,按照该方法对实施例1-2及实施例5-7的外用敷料使用效果进行评价,实施例1效果最好,其他均次之。
HE染色结果以创面表皮结构完整,较厚,层次清晰,基底细胞成单层排列,结合紧密,表皮钉突较少,真皮层胶原纤维量多,横向排列有序,真皮内有大量的血管生成为效果佳,按照HE染色结果对实施例1-2及实施例5-7的外用敷料使用效果进行评价,实施例1效果最好,其他均次之。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.具有生物活性的原液,其特征在于,所述具有生物活性的原液是含有丝素蛋白、成纤维细胞生长因子、链霉素和青霉素的水溶液。
2.根据权利要求1所述的具有生物活性的原液,其特征在于,所述原液中丝素蛋白的浓度为0.1-0.25g/ml。
3.根据权利要求1所述的具有生物活性的原液,其特征在于,所述原液中成纤维细胞生长因子的浓度为0.01-0.05ug/ml。
4.根据权利要求1所述的具有生物活性的原液,其特征在于,所述原液中,每100ml原液中含有链霉素和青霉素各2-3万个活性单位。
5.根据权利要求1所述的具有生物活性的原液,其特征在于,所述丝素蛋白为家蚕后部丝腺来源的丝素蛋白。
6.权利要求1所述的具有生物活性的原液的制备方法,其特征在于,将丝素蛋白溶解于水中,然后加入链霉素、青霉素和成纤维细胞生长因子,混匀,0-8℃静置30-120分钟,即得具有生物活性的原液。
7.保质期长的生物活性原料,其特征在于,将权利要求1所述的具有生物活性的原液冷冻干燥即得。
8.根据权利要求7所述的保质期长的生物活性原料,其特征在于,所述保质期长的生物活性原料真空密封包装, 0-8℃保存。
9.具有生物活性的外用敷料,其特征在于,所述具有生物活性的外用敷料呈水凝胶状,其制备方法为:取权利要求7所述的生物活性原料,用生理盐水溶解成水凝胶状即得。
10.根据权利要求9所述的具有生物活性的外用敷料,其特征在于,每3-5ml生理盐水溶解1g所述的生物活性原料。
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