CN1528362A

CN1528362A - 复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法

Info

Publication number: CN1528362A
Application number: CNA031346286A
Authority: CN
Inventors: 刘陕西
Original assignee: Xian Jiaotong University
Current assignee: Xian Jiaotong University
Priority date: 2003-09-29
Filing date: 2003-09-29
Publication date: 2004-09-15
Anticipated expiration: 2023-09-29
Also published as: CN1283272C

Abstract

本发明公开了一种复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法，由纯化瑞尔康及甘草组成，其制备方法是将纯化瑞尔康通过胶体磨，使雄黄胶体化；加入稀盐酸浸泡后用水进行冲洗并干燥，加入甘草粉，进行灭菌；然后装入胶囊即成。本发明的复方瑞尔康治适应症广泛，对血液肿瘤及多种实体瘤均有效，对急性白血病M₃完全缓解率及长期缓解率均高达90％以上，可作为首选药物。可通过血脑屏障，不易并发中枢神经白血病。毒副作用轻微，不影响治疗，无DIC并发症，不引起严重出血。无交叉耐药性，对维甲酸耐药复发及难治性白血病M₃亦有效。选择性诱导瘤细胞凋亡，兼有轻度诱导分化作用，对骨髓造血无抑制作用。可门诊治疗，不需住院及化疗，无痛苦，费用低。

Description

复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药学，涉及一种中药，特别涉及一种复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法。

背景技术

血液肿瘤(急、慢性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤，骨髓增生异常综合症等)是一组严重危害青少年健康的常见难治病。化疗及骨髓移植(BMT)的长期缓解率(CCR)仅分别为15-17％、50％，且毒副作用大，经费高昂，成为严重社会问题，近10年来急性白血病M₃(亦称急性早幼粒细胞白血病，APL)的治疗有所改善，先后出现了维甲酸、三氧化二砷(亚砷酸)，前者虽完全缓解率(CR)可高达85％，但因其高耐药性和副作用而受限，CCR仅20％，亚砷酸CR可达88％，但CCR仍低(54％)，且毒副作用大，超过50％，若不及时处理常危及生命。

发明内容

本发明的目的在于克服化疗、维甲酸耐药而长期生存率低(20％)，氧化砷毒副作用大的缺陷，提供一种抗癌效率高，无毒，经济，方便的复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法。

1998年申请人经检索资料，发现砷元素本身无毒，与氧结合则形成三氧化二砷(As₂O₃)剧毒，与硫结合为硫化砷(AsS)则无毒或微毒，因此申请人瞄准AsS(雄黄、拉丁文Realgar)开展了制备及基础应用研究，对急性白血病M₃CR26/28例(92.89％)，中位缓解期已3.6年，CCR24/26例(92.31％)，居世界高水平，且无明显毒副作用，门诊用药，经济(400-800元/月)、方便，对其它血液肿瘤及癌症亦有一定疗效，属于广谱抗癌药。其机理与调控基因、抑制肿瘤血管生成，进而促进癌细胞凋亡及分化而达到治愈的目的，属于选择性抗癌凋亡剂，为肿瘤治疗带来新途径。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是：复方瑞尔康抗癌药物，其特点是，由纯化瑞尔康及甘草组成，其中纯化瑞尔康为：50％～80％，甘草为：20％～50％。

复方瑞尔康抗癌药物的制备方法，包括以下步骤：

1.按上述配方取纯化瑞尔康通过胶体磨，使雄黄胶体化，微粒直径＜20μm；

2.加入稀盐酸浸泡24h；

3.将盐酸浸泡后的胶体化纯化瑞尔康用水进行冲洗，置入恒温干燥箱进行烘干，温度为48℃，时间24h～48h；

4.对干燥后的胶体化纯化瑞尔康按配方加入甘草粉充分混合；

5.对混合后的配料进行常规的灭菌；

6.经灭菌后的材料装入胶囊即成。

本发明的复方瑞尔康抗癌药物有以下效果：

1.适应症广泛，对血液肿瘤及多种实体瘤均有效。

2.选择性诱导瘤细胞凋亡，兼有轻度诱导分化，而对骨髓造血无抑制作用。

3.无交叉耐药性，对复发、难治APL亦有效。

4.诱导缓解率及长期缓解率均高达90％以上。

5.无DIC并发症，不引起严重出血。

6.可通过血脑屏障，不易并发中枢神经白血病。

7.毒副作用轻微，对症处理可缓解。

8.可门诊治疗，不需住院及化疗，痛苦少，经费低。

附图说明

图1是本发明的复方瑞尔康抗癌药物制备工艺流程图。

具体实施方式

以下结合发明人依照上述技术方案进行的药理、毒理、药效试验和作用机理，对本发明作进一步的详细说明。

一、药学研究

1、方组：复方瑞尔康由纯化瑞尔康(中药雄黄的拉丁文Realgar音译)及甘草(Glycyrrhixae)组成，其成分为：瑞尔康：50％～80％，甘草：20％～50％，制成胶囊，瓶装0.25g/胶囊×40粒。

2、制备方法：按本发明的上述制备方法进行。因雄黄难溶于水，吸收率极低(0.04％)，且含氧化砷5％-10％，制备目的使雄黄胶体化，微粒直径＜20μm，便于吸收。为预防氧化砷中毒，通过酸洗水飞除去氧化砷。

3、成份分析及稳定性实验：瑞尔康(Realgar)湖南产。

分子式AsS(硫化砷)(As₄S₄、As₂S₃)，分子量427.93，经X线衍射分析，1998、2000、2003年3次样检，其中1998年测定As₄S₄ 93％、As₂S₃ 3％；其他4％；2000年测定As₄S₄ 93％、As₂S₃ 2％；其他5％；2003年测定As₄S₄ 92％、As₂S₃ 2％；其他6％；保存5年性能稳定。

二、药理研究

1、药效实验：纯化瑞尔康711μg·L^-1作用72小时，通过MTT检测，对各种瘤细胞的抑制率分别为：急性早幼粒细胞白血病细胞(NB₄)85％，耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR₂)69％，B细胞淋巴瘤细胞(Raji)79.34％；慢性粒细胞白血病细胞(K₅₆₂)30.57％(2844μg·L^-1为83.60％)；急性髓细胞白血病细胞(HL-60)26.25％(2844μg·L^-1为77％)；T细胞淋巴瘤细胞(Jurkat)17.22％(2844μg·L^-1为67％)(P＜0.01)，其效果依次为NB₄＞Raji＞MR₂＞K₅₆₂＞HL-60＞Jurkat，当药量成倍加大后，其疗效亦成倍增加。

2、药代动力学研究：纯化瑞尔康单次灌胃500mg·kg^-1后很快吸收进入血液，4h达高峰，且在血液中消除较快，不存在蓄积倾向，属一室模型。吸收后迅速分布至肝、脾、肺、肾、胃肠壁、骨、皮肤、心、脑组织等，与胃肠组织亲和力量大，其次为肾、骨骼、肺、肝、皮肤，在骨骼、皮肤、脾、脑组织中浓度下降较慢，提示有蓄积可能，尿砷排泄量不足给药剂量的0.04％，表明瑞尔康进入血液的量较少，且吸收后主要经胃肠道排泄。

3、毒理研究：纯化瑞尔康500mg·kg^-1对小白鼠的LD50测定结果(Bliss法)：半致死剂量(LD50)＝19.3262±1.0736g·kg^-1，可信限区间为18.2825g·kg^-1～20.4296g·kg^-1。毒理学规定≥10g·kg^-1为无毒制剂。

4、方解及作用机理研究：瑞尔康(雄黄)为选择性诱导瘤细胞凋亡的抗癌主药，主要成份为硫化砷；甘草为辅，主要成份是甘草甜素，具有解毒、保肝、抗过敏等作用，二者相配，相辅相乘。

(1)LDH释放试验：阴性对照、实验组和阳性对照经355μg·L^-1瑞尔康处理24h，三组分别为69±2.7U·L^-1、69±3.5U·L^-1、282±7.2U·L^-1，对NB4细胞膜完整性无影响(P＞0.05)，提示瑞尔康属非细胞毒作用。

(2)超微电镜和流式细胞仪(FCM)检测：瑞尔康作用NB4、MR2细胞后，细胞核边集，浓缩，碎裂，新月体形成，呈典型凋亡状态。瑞尔康作用36h后，MR2细胞基因DNA电泳出现特征性凋亡梯带，而对照组无此现象；NB4细胞APO2.7蛋白表达率对照组为0.2％，355μg·L^-1瑞尔康组为8.5％，提示凋亡作用。Annexin V-FITC/PI双标准检测NB4细胞中4区凋亡细胞比例显著增加，对照组为0.5％，加药组为10.4％，P＜0.005。细胞周期呈现各浓度瑞尔康作用NB4、MR2细胞24、36、60、72h后，均对细胞周期有影响，24h后G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，48h出现凋亡，且呈时间、剂量依赖性。

(3)透射电镜、分化抗原、NBT还原力检测：证明瑞尔对NB4和MR2细胞兼有部分诱导分化作用，CD11b表达增加，NBT还原力增强，呈剂量依赖性。

(4)凋亡机理实验：通过2048样点基因表达谱芯片检测，瑞尔康作用NB4细胞4h后，可使11条基因下调，2条基因上调；作用48h后，8条基因上调，33条基因下调，与细胞信号传递、蛋白翻译合成、DNA结合转录、血管生长等基因调控诱导癌细胞凋亡有关。

(5)抗凋亡基因检测：对K562抑制率低(30.57％)的原因，经检测与bcl-XL抗凋亡基因高表达有关，转染反义RNA封闭bcl-XL抗凋亡基因表达后再用瑞尔康，则可提高其敏感性。

三、药物有效性及安全性观察

1.临床资料：对1998年3月至2003年4月随机接诊，经骨髓、组化、免疫分型、PCR确诊的急性白血病M₃(APL)28例观察。男11例，女17例，平均年龄39(9～59)岁，初发21例，维甲酸耐药复发7例，急性早幼粒细胞白血病A型15例，急性早幼粒细胞白血病B型13例。

2.治疗方法：

诱导缓解：成人，复方瑞尔康4.5g·d^-1～6.0g·d^-1，分3次餐后服用，直至完全缓解(CR)。

维持治疗：成人，复方瑞尔康3.0g·d^-1～4.5g·d^-1，分3次餐后服用，维持5年。

3.结果：

28例APL经复方瑞尔康治疗30～60天，平均42天，缓解(CR)26/28例，占92.89％；未缓解(RN)2/28例，占7.11％。维持治疗0.5年～6年，平均为3.6年，复发2/26例，占7.69％，完全缓解(CCR)24/26例，占92.31％。治疗中ALT68U/L增高及皮肤色素沉着各1例，占3.5％。其余病例肝肾功、心电图均正常，无皮肤角化及脱色，未诱发DIC。通过原子吸收光谱监测患者血砷浓度，第3个月为3μg·L^-1，1年6.3μg·L^-1，均低于坤中毒的血砷浓度(0.1mg·L^-1～10mg·L^-1)。1例男性患者在服用复方瑞尔康5年时结婚，其爱人所生小孩健康无病，说明复方瑞尔康是一种安全、高效的抗癌药物。

另外，本组采用化疗间歇期服用复方瑞尔康，治疗多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、肾癌等疾病，亦有一定疗效。

复方瑞尔康治疗特点：适应症广泛，对血液肿瘤及多种实体瘤均有效，对急性白血病M₃完全缓解率及长期缓解率均高达90％以上，可作为首选药物。可通过血脑屏障，不易并发中枢神经白血病。毒副作用轻微，不影响治疗。无DIC并发症，不引起严重出血。无交叉耐药性，对维甲酸耐药复发及难治性白血病M₃亦有效。选择性诱导瘤细胞凋亡，兼有轻度诱导分化作用，对骨髓造血无抑制作用。可门诊治疗，不需住院及化疗，无痛苦，经费低。

下表是发明人给出的复方瑞尔康治疗APL疗效及其效果对照。

复方瑞尔康治疗APL疗效及其效果对照表

药物	N	CR	CCR	严重度	毒副作用表现
药物	N	CR	CCR	严重度	毒副作用表现	化疗	--	62	15～17	+++	骨髓抑制、合并感染、出血、贫血、心、肝、肾损害等
维甲酸	544	85	20	++	维甲酸综合症25％、高白细胞综合症80％、高颅压，高组胺血症等	化疗	--	62	15～17	+++	骨髓抑制、合并感染、出血、贫血、心、肝、肾损害等
维甲酸	544	85	20	++	维甲酸综合症25％、高白细胞综合症80％、高颅压，高组胺血症等	亚砷酸	1943	88	54	+++	严重副作用：APL分化综合症22％、高白细胞血症50％、ECG OT延长、心律紊乱40％、低钾、低镁血症各13％、高血糖、血小板减少13％、腹痛、骨痛、缺氧、呼吸困难、白细胞减少各10％、关节痛、发热、DIC各8％
硫化砷	129	100(26/26)	87.4(90/103)	+	ECG OT延长33％、ATL升高10.5％、肠胃不适、皮肤痒、眼脸肿胀各8％	亚砷酸	1943	88	54	+++
硫化砷	129	100(26/26)	87.4(90/103)	+	ECG OT延长33％、ATL升高10.5％、肠胃不适、皮肤痒、眼脸肿胀各8％	复方瑞尔康	28	92.89	92.31	0～±	所有患者均无明显不适，仅色素沉着、ALT升高1例，不影响治疗

Claims

1.一种复方瑞尔康抗癌药物，其特征在于，该复方瑞尔康抗癌药物由纯化瑞尔康及甘草组成，其配方为：纯化瑞尔康：50％～80％；甘草：20％～50％；其中，纯化瑞尔康的分子式为：硫化砷(AsS)92％～96％；其中：As₄S₄90％～93％；As₂S₃ 2％～3％。

2.一种实现权利要求1所述的复方瑞尔康抗癌药物的制备方法，包括以下步骤：

1)按配方取50％～80％的纯化瑞尔康通过胶体磨，使雄黄胶体化，微粒直径＜20μm；

2)加入稀盐酸浸泡24h；

3)将盐酸浸泡后的胶体化纯化瑞尔康用水进行冲洗，置入恒温干燥箱进行烘干，温度为48℃，时间24h～48h；

4)对干燥后的胶体化纯化瑞尔康按配方加入20％～50％的甘草粉充分混合；

5)对混合后的配料进行常规的灭菌；

6)经灭菌后的材料装入胶囊即成。

3.如权利要求2所述的复方瑞尔康抗癌药物的制备方法，其特征在于，所述的常规灭菌采用钴60照射。