CN1491955A

CN1491955A - 一种提取细菌mRNA的方法

Info

Publication number: CN1491955A
Application number: CNA021460272A
Authority: CN
Inventors: 昕庞; 庞昕; 周冬生; 杨瑞馥
Original assignee: Institute of Microbiology and Epidemiology of AMMS
Current assignee: Institute of Microbiology and Epidemiology of AMMS
Priority date: 2002-10-25
Filing date: 2002-10-25
Publication date: 2004-04-28
Anticipated expiration: 2022-10-25
Also published as: CN1291997C

Abstract

本发明公开了一种新的提取细菌mRNA的方法，该方法是先设计针对5S、16S和23S rRNA的保守序列寡核苷酸探针，并进行生物素标记，标记的探针加入到包被链霉亲和素的顺磁颗粒中，再加入细菌总RNA提取液，5S、16S和23SrRNA与探针特异性杂交，形成的复合体被结合在固相上，使mRNA留在液相中，分离吸附复合体，收集上清，进行核酸沉淀，洗涤，即得富集的mRNA。

Description

一种提取细菌mRNA的方法

技术领域

本发明涉及一种提取细菌mRNA的方法，具体讲是从总RNA当中提取mRNA的方法。

背景技术

目前对真核生物mRNA的提取方法，一般使用亲和层析法或磁捕获杂交法，但由于大多数细菌mRNA无polyA尾，以上两种方法对细菌mRNA提取不能奏效。Affymetrix公司曾建立了一种大肠杆菌mRNA的富集方法，但这种方法不能除去5S rRNA，且步骤繁琐，成本较高，用时较长。本发明针对上述方法的缺陷，发明了一种新的提取mRNA的方法。

发明内容

本发明目的是提供一种提取细菌mRNA的新方法。

本发明提取细菌mRNA的技术方案如下：

首先设计针对5S、16S和23S rRNA的保守序列寡核苷酸探针，并在合成探针时进行生物素标记。将生物素标记的探针加入到包被链霉亲和素的顺磁颗粒(SA-PMPs)中，通过生物素(biotin)与链霉亲和素(streptavidin)的亲和性结合，这些探针和磁珠结合在一起。洗去未结合的探针后，再加入一定量的细菌的总RNA溶液。总RNA溶液中的5S、16S和23S rRNA就和与磁珠结合的生物素标记的寡核苷酸探针特异性杂交，形成rRNA-SA-PMP复合体，被顺磁颗粒捕获，结合在固相上。这样，mRNA就留在液相中。然后，用一个磁分离架吸附复合体，收集上清，然后再进行核酸沉淀，洗涤，即得富集的mRNA。

细菌mRNA提取方法技术路线流程图如图1所示。

由于16S和23S rRNA的保守性，本发明方法具有广谱性，设计16S和23S rRNA的保守序列的探针，就可从多种细菌总RNA中提取mRNA，对一些G⁺和G^-菌均适用。产量较高、时间较短、完整mRNA回收率高。纯化所得mRNA可用于RT-PCR反应、cDNA合成及生物芯片上的基因表达谱分析。

下面以鼠疫耶尔森氏菌为例，对本发明的方法进行更为具体地说明。

实验例1：鼠疫耶尔森氏菌总RNA的提取

实验材料：

鼠疫耶尔森氏菌EV76株；离心管；高速冷冻离心机；BECKMANDU-600紫外分光光度计；试剂及其他耗材等。

实验步骤：

第一步，核酸提取

1.取15mL离心管，加入1.25mL冰预冷苯酚/乙醇阻断液，加入

10mL过夜培养物；

2.4℃下8000rpm离心5min集菌，去尽上清；

3.加入800μL溶菌酶液，重悬沉淀，加入80μL10％SDS，混匀，

64℃水浴2min；

4.加入88μL1mol/L乙酸钠(pH5.2)，混匀；

5.加入1mL水饱和苯酚，混匀，64℃水浴中6min，每40s颠倒10

次；

6.冰浴上迅速冷却，4℃下12000rpm离心20min；

7.取2个1.5mL离心管中，水相均分至其中，加入与水相等体积

的氯仿，颠倒10次，4℃下12000rpm离心10min；

8.取上清，分别加入1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和1mmol/L

EDTA，加入2.5倍体积的预冷无水乙醇，-80℃下20min。4

℃下12000rpm离心30min，小心移去乙醇。

9.加入1mL预冷的80％乙醇洗涤沉淀，4℃下12000rpm离心

10min，小心移去乙醇，温箱中干燥沉淀。

10.加入100μL DEPC处理的水，重悬沉淀，两管样品收集于一起。

第二步，除DNA

1.200μL的样品中，依次加入0.5μL的RNA酶抑制剂(40U/μ

L)、25μL的10×DNA酶I缓冲液、2μL的无RNA酶的DNA

酶I(5U/μL)，37℃作用30min。

2.加入等体积的水饱和苯酚，颠倒10次，4℃下12000rpm离心

5min。

3.取水相，分别加入等体积的水饱和苯酚：氯仿，颠倒10次，4

℃下12000rpm离心5min。

4.取水相，加入等体积的氯仿，颠倒10次，4℃下12000rpm离

心5min。重复该步骤。

5.取水相，加入1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体

积的预冷无水乙醇，-70℃下放置1h。4℃下12000rpm离心

30min，小心移去乙醇。

6.加入1mL预冷的80％乙醇洗涤沉淀，4℃下12000rpm离心

10min，小心移去乙醇，温箱中干燥沉淀。

7.加入50μL的DEPC处理的水，重悬沉淀。-70℃贮存。

第三步，RNA定量和纯度检测

1.取2μL的RNA样品，用10mmol/LTris-HCl(pH7.0)进行100

倍稀释，测定A₂₆₀值，按下式计算RNA样品的浓度：

RNA浓度(μg/μL)＝A₂₆₀×100×40÷1000

2.取2μL的RNA样品，用10mmol/LTris-HCl(pH7.5)进行100

倍稀释，测定A₂₆₀和A₂₈₀值，计算A₂₆₀/A₂₈₀值。

结果如下：

1)提取的总RNA绝对量为223.465μg，浓度为4.4693μg/

μL。

2)A₂₆₀/A₂₈₀值为2.1。

第四步，总RNA提取物的电泳鉴定

提取的总RNA在65℃变性5分钟，冰浴上冷却，然后在含甲醛的1.2％琼脂糖凝胶上5-7V/cm下电泳。

结果如图3所示：

可见两条明亮的条带，分别代表16S rRNA和23S rRNA。

通过上述实验，从A₂₆₀/A₂₈₀值和电泳结果看，本实验得到了纯净完整的总RNA。

实验例2 从鼠疫耶尔森氏菌总RNA中富集mRNA

实验材料：链霉亲和素磁珠和磁分离架(New England BioLabs Inc.生产)；总RNA(由实验例1提取)；探针(上海生工合成)。

实验步骤：

1、合成生物素标记的寡核苷酸探针

用Primer Premier 5.0设计鼠疫耶尔森氏菌5S、16S和23S rRNA的探针，分别设计了1条(5S)、3条(16S)、5条(23S)，它们分别是CP-1，CP-2，CP-3，CP-4，CP-5，CP-6，CP-7，CP-8，CP-9。由发明人提供探针序列，委托上海生工合成生物素标记的寡核苷酸探针。本发明设计的寡核苷酸探针具体序列参见本说明书所附的序列表，其中CP-1，核苷酸序列号为SEQ No.1；CP-2，核苷酸序列号为SEQ No.2；CP-3，核苷酸序列号为SEQ No.3；CP-4，核苷酸序列号为SEQ No.4；CP-5，核苷酸序列号为SEQ No.5；CP-6，核苷酸序列号为SEQ No.6；CP-7，核苷酸序列号为SEQ No.7；CP-8，核苷酸序列号为SEQ No.8；CP-9，核苷酸序列号为SEQ No.9。

2、准备磁珠

1)于1.5mL离心管中加入250μL(1mg)的亲和素磁珠，将离心管

置于磁分离架上30s～1min，弃上清。

2)再加入200μL洗涤/结合缓冲液，悬起磁珠。将离心管置于磁分

离架上30s～1min，弃上清。重复该步骤。

3、结合生物素标记的捕获探针

1)将约1.08nmol生物素标记的捕获探针溶解于200μL的结合缓冲

液(0.5×SSC)中，90℃下变性5min，迅速冰浴3min。其中探

针浓度为0.6nmol/10μL，每种探针取2μL，9条探针共1.08nmol，

相比于磁珠的探针结合能力，探针过量1倍。

2)加入到含有磁珠的离心管中，悬浮磁珠，室温作用15min，并不

时用手摇动。

3)供应磁场，弃上清。

4)加入200μL的洗涤缓冲液(0.5×SSC)，悬浮磁珠，供应磁场，弃

上清。

4、磁捕获杂交与富集mRNA

1)将20μg总RNA溶解在200μL的杂交液中(6×SSC；10mmol/L

Tris-HCl，pH7.5；1mmol/LEDTA)。

2)加入到预先准备好的磁珠中，悬浮磁珠，68℃水浴30min，并不

时用手摇动。

3)供应磁场，收集上清。用200μL的洗涤缓冲液(0.5×SSC)洗涤

磁珠，收集所有上清于一起。

4)加入1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的预冷

无水乙醇，-70℃放置1h。4℃下12000rpm离心30min，小心移

去乙醇。

5)用预冷的80％乙醇洗涤沉淀两次，温箱中干燥沉淀。

6)加入20μL DEPC处理的水，充分溶解沉淀。-70℃保存备用。

5、磁珠的活化

1)于磁珠中加入200μL的新鲜0.1mol/L NaOH，悬浮磁珠，20-25

℃下4min(不得超时，否则引起DNA的脱嘌呤化)，供应磁场，

弃上清。要求操作迅速，否则引起DNA的脱嘌呤化。

2)加入200μL的洗脱缓冲液(10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；1mmol/L

EDTA)，悬浮磁珠，供应磁场，弃上清。重复此步骤。

3)加入200μL的洗涤缓冲液(0.5×SSC)，悬浮磁珠，供应磁场，弃

上清。

4)加入200μL的洗涤缓冲液(0.5×SSC)，悬浮磁珠，4℃下贮存备

用。

6、RNA定量

取4μL富集的mRNA，溶于76μLDEPC处理的水中(即进行20倍稀释)，混匀。用分光光度计测其OD₂₆₀值。

计算含量：RNA浓度(μg/μL)＝A₂₆₀×40÷1000×稀释倍数

结果：浓度＝0.11μg/μL；总量＝2.22μg。

即每20μg总RNA能除去17.78μg rRNA。

7、RNA电泳鉴定

将1μg总RNA和1μg富集mRNA同时电泳，结果如图4所示。从定量结果和电泳结果看：磁捕获杂交法适于细菌mRNA的提取和纯化。

实验例3：对富集的mRNA进行RT-PCR

实验目的：检验mRNA提取过程中有无降解

实验材料：引物(军科院八所合成)；mRNA(实验例2获得)；Marker(DL2000)；反转录试剂盒(SuperScript^TM First-Strand SynthesisSystem for RT-PCR(Life Technologies生产)。

实验步骤：

1、设计引物

选择鼠疫耶尔森氏菌染色体上的6个基因，代码分别为YPO0085、YPO0216、YPO2394、YPO3516、YPO3750和YPO4128；其ORF长度分别为768bp、699bp、635bp、237bp、939bp、705bp。基因选择的原则是：

(1)现有培养条件下表达的基因

(2)表达丰度不同的基因

(3)片段大小不同的基因

然后，用Array Designer 2.0软件进行引物设计，引物设计原则是尽量扩增全长。引物序列参见所附序列表。设计的引物分别是YPO0085F，序列号为SEQ No.10；YPO0085R，序列号为SEQ No.11，扩增片段682bp；YPO0216F，序列号为SEQNo.12；YPO0216R，序列号为SEQ No.13，扩增片段635bp；YPO2394F，序列号为SEQNo.14；YPO2394R，序列号为SEQNo.15，扩增片段206bp；YPO3516F，序列号为SEQ No.16；YPO3516R，序列号为SEQ No.17，扩增片段908bp；YPO3750F，序列号为SEQNo.18；YPO3750R，序列号为SEQ No.19，扩增片段691bp；YPO4128F，序列号为SEQNo.20；YPO4128R，序列号为SEQNo.21，扩增片段340bp。

2、对富集的mRNA进行RT-PCR

选用SuperScript^TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR(Life Technologies)试剂盒，用我们设计的6对引物，对富集的mRNA按试剂盒说明书进行反转录，即cDNA第一链合成。同时，做了Control RNA和No RT-Control的对照。在做PCR时，每一反应管都做了阴性对照。

3、对RT-PCR产物进行电泳鉴定

结果是除了阴性对照(No RT-Control及PCR的阴性对照)没有条带外，其它均见明亮的条带。可见，RNA提取和mRNA富集过程中没有发生降解。电泳图片如图5所示。

实验例4：磁珠的重复利用实验

将富集过mRNA的磁珠活化后(活化方法见本发明实验例2)再用来富集mRNA，同时用一份新磁珠做对照。由于活化过程就是用0.1MNaOH将探针和rRNA之间的键打开，去除rRNA。这样，探针还留在亲和素标记的磁珠上。所以，用活化之后的磁珠不必再结合探针。实验材料：实验例2中用过并活化的磁珠(标记为旧磁珠)以及NewEngland BioLabs Inc.生产的新磁珠各一份；磁分离架；总RNA各用20μg。

实验方法：同前。

实验结果：旧磁珠富集总量为7.2315μg；新磁珠富集总量为6.5765μg。电泳结果如图6所示。其中1代表新磁珠富集的1μg mRNA；2代表旧磁珠富集的1μg mRNA；3代表1μg总RNA。

从上述实验的定量和电泳结果看，旧磁珠不如新磁珠效果好，但也能除去大部分rRNA。所以，旧磁珠能重复利用，尤其在大量提取mRNA时。

本发明的方法与现有技术相比，具有操作快速、简单、产量高、完整mRNA回收率高的优点。而且，不需要一些酶的反应，反应条件易于控制，成本较低。

现有技术当中用于真核生物mRNA提取的方法一般是亲和层析法和磁捕获杂交法。但由于细菌mRNA的自身的特点，大多数细菌mRNA无polyA尾，使得以上两种方法对细菌mRNA提取不能奏效。

Affymetrix公司建立的大肠杆菌mRNA的富集方法，为一系列酶的反应，这种方法不能除去5S rRNA，且步骤繁琐，成本较高，用时较长。

本发明设计的磁捕获杂交法提取mRNA的方法，结合了真核生物的mRNA的磁捕获杂交法快速、简单的优点以及从总RNA中去除rRNA从而获得mRNA的思路，由于16S和23S rRNA的保守性，这种方法具有广谱性，设计16S和23S rRNA的保守序列的探针，就可从多种细菌总RNA中提取mRNA，对一些G⁺和G^-菌均适用。纯化所得mRNA可用于RT-PCR反应、cDNA合成及生物芯片上的基因表达谱分析。这将极大的促进原核生物的功能基因组学的研究。

附图说明

图1是细菌mRNA提取方法技术路线流程图；

图2是磁捕获杂交示意图，其中1代表磁珠，2代表亲和素，3代表生物素，4代表5′端生物素标记的探针；

图3是总RNA提取物的电泳图谱；

图4是将1μg总RNA和1μg富集mRNA同时电泳的图谱；

图5是对富集的mRNA进行RT-PCR，所得产物进行电泳鉴定的电泳图谱。

图6是对新磁珠富集的mRNA、旧磁珠富集的mRNA和总RNA进行电泳的图谱。

具体实施方式

实施例1大肠杆菌JM109株mRNA的提取

第一步，提取大肠杆菌JM109株总RNA。

取15mL离心管，加入1.25mL冰预冷苯酚/乙醇阻断液，加入10mL过夜培养物；4℃下8000rpm离心5分钟集菌，去尽上清；加入800μL溶菌酶液，重悬沉淀，加入80μL 10％SDS，混匀，64℃水浴2分钟；加入88μL 1mol/L乙酸钠(pH5.2)，混匀；加入1mL水饱和苯酚，混匀，64℃水浴中6分钟，每40s颠倒10次；冰浴上迅速冷却，4℃下12000rpm离心20min；取2个1.5mL离心管中，水相均分至其中，加入与水相等体积的氯仿，颠倒10次，4℃下12000rpm离心10min；取上清，分别加入1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和1mmol/L EDTA，加入2.5倍体积的预冷无水乙醇，-80℃下20min。4℃下12000rpm离心30min，小心移去乙醇。加入1mL预冷的80％乙醇洗涤沉淀，4℃下12000rpm离心10min，小心移去乙醇，温箱中干燥沉淀。加入100μLDEPC处理的水，重悬沉淀，两管样品收集于一起。

200μL的样品中，依次加入0.5μL的RNA酶抑制剂(40U/μL)、25μL的10×DNA酶I缓冲液、2μL的无RNA酶的DNA酶I(5U/μL)，37℃作用30分钟。加入等体积的水饱和苯酚，颠倒10次，4℃下12000rpm离心5分钟。取水相，分别加入等体积的水饱和苯酚：氯仿，颠倒10次，4℃下12000rpm离心5分钟。取水相，加入等体积的氯仿，颠倒10次，4℃下12000rpm离心5分钟。重复该步骤。取水相，加入1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的预冷无水乙醇，-70℃下放置1h。4℃下12000rpm离心30min，小心移去乙醇。加入1mL预冷的80％乙醇洗涤沉淀，4℃下12000rpm离心10min，小心移去乙醇，温箱中干燥沉淀。加入50μL的DEPC处理的水，重悬沉淀。-70℃贮存。

第二步，从大肠杆菌JM109株总RNA中富集mRNA

本实施例所用上述探针，仍然是委托上海生工合成。但是，通过BLAST发现，本发明设计的9条探针中，只有6条与大肠杆菌的rRNA同源。所以，本实施例只使用同源的6条探针。它们的代号和用量分别为：

16SrRNA探针：CP-2 2μL；CP-3 4μL；CP-6 4μL；

23SrRNA探针：CP-7 2μL；CP-8 4μL；CP-9 2μL。

共18μL，即1.08nmol。

这些探针的具体序列同前，即：CP-2，核苷酸序列号为SEQ No.2；CP-3，核苷酸序列号为SEQ No.3；CP-6，核苷酸序列号为SEQ No.6；CP-7，核苷酸序列号为SEQ No.7；CP-8，核苷酸序列号为SEQ No.8；CP-9，核苷酸序列号为SEQ No.9。

于1.5mL离心管中加入250μL(1mg)的亲和素磁珠，将离心管置于磁分离架(New England BioLabs Inc.生产)上30s～1min，弃上清。再加入200μL洗涤/结合缓冲液，悬起磁珠。将离心管置于磁分离架上30s～1min，弃上清。重复该步骤。

将约1.08nmol生物素标记的捕获探针溶解于200μL的结合缓冲液(0.5×SSC)中，90℃下变性5min，迅速冰浴3min。其中探针浓度为0.6nmol/10μL，每种探针取2μL，6条探针共1.08nmol，相比于磁珠的探针结合能力，探针过量1倍。加入到含有磁珠的离心管中，悬浮磁珠，室温作用15min，并不时用手摇动。供应磁场，弃上清。加入200μL的洗涤缓冲液(0.5×SSC)，悬浮磁珠，供应磁场，弃上清。

将25μg总RNA溶解在200μL的杂交液中(6×SSC；10mmol/LTris-HCl，pH7.5；1mmol/LEDTA)。加入到预先准备好的磁珠中，悬浮磁珠，68℃水浴30min，并不时用手摇动。供应磁场，收集上清。用200μL的洗涤缓冲液(0.5×SSC)洗涤磁珠，收集所有上清于一起。加入1/10体积的3mol/L乙酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的预冷无水乙醇，-70℃放置1h。4℃下12000rpm离心30min，小心移去乙醇。

用预冷的80％乙醇洗涤沉淀两次，温箱中干燥沉淀。加入20μL DEPC处理的水，充分溶解沉淀。-70℃保存备用，即得。富集mRNA的总量为6.5147μg。

序列表：

SEQ No.1：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTCGTTTCACTTCTGAGTTCGGCATGGGAT-3′

SEQ No.2：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGC-3′

SEQ No.3：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTCACATCTGACTTAACAAACCGCCTGCGT-3′

SEQ No.4：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTTCCCACCATTACGTGCTGGCAACAAAG-3′

SEQ No.5：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTGCGACTTTCCAGACGCTTCCACTAACA-3′

SEQ No.6：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTCATTAGTCGGTTCGGTCCTCCAGTTAGTGT-3′

SEQ No.7：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTCAACATTAGTCGGTTCGGTCCTCCAGT-3′

SEQ No.8：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTCATTCGCACTTCTGATACCTCCAGCAAC-3′

SEQ No.9：

5′-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTATTCGCACTTCTGATACCTCCAGCAACCC-3′

SEQ No.10：

5′-ATGCGACATCCATTAGTTATG-3′

SEQ No.11：

5′-CAATATCTGGCTGAGTGAAC-3′

SEQ No.12：

5′-AAGTACATCCTAATGGTATTC-3′

SEQ No.13：

5′-GTTCAACAGCAGCCATAC-3′

SEQ No.14：

5′-TAATTCTGGCTTCTACAATGC-3

SEQ No.1 5：

5′-TTACTTCTTGTAAGCTTGAGC-3′

SEQ No.16：

5′-CCGCTGGTGGGATTGG-3′

SEQ No.17：

5′-AACGAACTTCTCACCTAACTC-3′

SEQ No.18：

5′-ATGGCTAAGCTGACCAAG-3′

SEQ No.19：

5′-CAGTCAGGCCGCTTTG-3′

SEQ No.20：

5′-ATGCCTGTATCCCTTTAC-3′

SEQ No.21：

5′-CAATCAGCACCGATAAATAG-3′

Claims

1.一种提取细菌mRNA的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

首先，分别设计针对5S、16S和23S rRNA的保守序列寡核苷酸探针，并在合成探针时进行生物素标记；

然后，将生物素标记的探针加入到包裹着链霉亲和素的顺磁颗粒中，将探针和磁珠结合在一起；

再加入细菌总RNA溶液，其中的5S、16S和23S rRNA与磁珠结合的生物素标记的寡核苷酸探针特异性杂交，形成的复合体被顺磁颗粒捕获，结合在固定相上，使mRNA就留在液相中；

用一个磁分离架吸附复合体，收集上清，然后再进行核酸沉淀，洗涤，即得富集的mRNA。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于将富集过mRNA的磁珠活化后，再用于以后富集mRNA的过程，不必再结合探针。

3.根据权利要求2的方法，其特征在于所说的磁珠活化过程是于磁珠中加入0.1mol/L NaOH，悬浮磁珠，供应磁场，弃上清。

4.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所述的针对5S rRNA的探针是CP-1，核苷酸序列号为SEQ No.1。

5.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所述的针对16S rRNA的探针是CP-2，CP-3，CP-4，核苷酸序列号分别为SEQ No.2、SEQNo.3和SEQ No.4。

6.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所述的针对23S rRNA的探针是CP-5，CP-6，CP-7，CP-8，CP-9，核苷酸序列号分别为SEQ No.5、SEQ No.6、SEQ No.7、SEQ No.8和SEQ No.9。

7.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所使用的探针是只针对16S和23S rRNA的保守序列寡核苷酸探针。

8.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所说的细菌总RNA是从多种细菌中提取获得的。

9.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所说的细菌总RNA是从鼠疫耶尔森氏菌中提取获得的。

10.根据权利要求1所说的方法，其特征在于所说的细菌总RNA是从大肠杆菌中提取获得的。