CN1458165A - 一种多肽类物质及其制备方法和用途 - Google Patents
一种多肽类物质及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1458165A CN1458165A CN 02115480 CN02115480A CN1458165A CN 1458165 A CN1458165 A CN 1458165A CN 02115480 CN02115480 CN 02115480 CN 02115480 A CN02115480 A CN 02115480A CN 1458165 A CN1458165 A CN 1458165A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- amino acid
- polypeptides matter
- resin
- polypeptides
- matter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 134
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 125
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 125
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 92
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 82
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 82
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 37
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 37
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 19
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 10
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 7
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 7
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- ZNSMNVMLTJELDZ-UHFFFAOYSA-N Bis(2-chloroethyl)ether Chemical compound ClCCOCCCl ZNSMNVMLTJELDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 6
- 238000000247 postprecipitation Methods 0.000 claims description 6
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 9-fluorenylidene methoxycarbonyl Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 3
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 claims description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 8
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 11
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 description 1
- PBWZKZYHONABLN-UHFFFAOYSA-N difluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)F PBWZKZYHONABLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 239000012450 pharmaceutical intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Chemical group 0.000 description 1
- 125000006253 t-butylcarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(C(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种多肽类物质(IV)的结构、用途和制备方法，这类多肽物质在临床上用于检测、诊断病毒性疾病。特别是艾滋病等一些由病毒引起的疾病，也可以用以用做制备药物制剂的原料，多肽类物质(IV)可以用人工合成的方法制备得到，也可以用基因重组的方法制备得到。
Description
技术领域
本发明涉及一种医药中间体化合物，特别是一种多肽类物质(IV)的化学结构及其制备方法和用途。
背景技术
多肽是一类由各种单体氨基酸，按不同的顺序排列而组成的一种链状的蛋白质类化合物。此类化合物往往具有很强的生理活性和功能的特异性。因此，在医药领域里，此类化合物常被用来作为类激素、活性酶和疫苗等应用于临床，用于检测、诊断某些疾病。或者作为原料，被用来制成某些药物制剂，应用于临床。因此，目前人们对多肽物质引起了极大的关注，中国专利也公开了许多人工合成的多肽物质及其在检测、诊断疾病中的应用。
技术内容
本发明所公布的多肽类物质(IV)，是作为一种活性物质，用于检测、诊断一些病毒性疾病，特别是艾滋病等一些由病毒引起的病症。也可以作为原料，用来生产一些药物制剂，在临床上用来检测、诊断一些由病毒引起的疾病，特别是艾滋病病毒引起的疾病。
一种多肽类物质(IV)，其特征是由多种氨基酸聚合组成，其氨基酸的排列序列为：
REPRGSDIAGTTSTLQEQI*WMTGNPP**PVG***IYKK
其中：*为氨基酸A(丙氨酸)或氨基酸N(天冬酰氨)
**为氨基酸V(缬氨酸)或氨基酸I(异亮氨酸)
***为氨基酸D(天冬氨酸)或氨基酸E(谷氨酸)多肽类物质(IV)的制备方法(一)化学合成法：
在自然界中每一种多肽或蛋白质都是由游离的氨基酸通过多肽键的形式聚合而成。在蛋白质的翻译过程中，多肽链的延伸总是由氨基端(N-端)向羧基端(C-端)进行。在化学合成开始时，往往是先将羧基端的第一个氨基酸固定到活化的树脂上，然后经过氨基基团的去保护，再将羧基端的第二个氨基酸加入到反应器中，二个氨基酸经过相互反应后即可形成肽键。然后依照多肽的氨基酸排列序列依次加入第三个、第四个氨基酸等等，直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。
在多肽类物质(IV)的化学合成中，每个氨基酸的氨基可以由以下化学基团加以保护：
①苄酯基(Carbobenzoxyl)
②叔-丁基羧基(t-Butyloxycarbonyl)
③甲苯磺酰基(Tosyl)
④9-亚芴基甲酯基(Fmoc：9-Fluorenylmethoxycarbonyl)多肽类物质(IV)的化学合成步骤，具体操作如下：
1、合成：先用氯乙醚将树脂活化，然后在树脂中加入第一个氨基酸(氨基已被保护)，从而固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以由六氢吡啶脱保护。与此同时，将第二个氨基酸经过活化后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即形成肽键。然后按照多肽的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后第一个氨基酸结合到肽链上为止。
2、分离：合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及二氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取适量的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。
3、纯化：将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或适当浓度的碱溶液中(碱可以选用：碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的色谱方法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。
4、鉴定：纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。(二)基因重组法：
将多肽类物质(IV)的基因序列利用化学合成法合成之后，克隆到预先被内切酶(BamHI和EcoRI)处理过的PGEX-2载体中。重组的质粒再转化到BL21受体菌中，然后在培养基中大量繁殖、诱导。最后将细菌离心收集，再依靠层析柱将多肽类物质(IV)与GST(谷胱甘肽-S-转移酶)的融合蛋白纯化出来。
多肽类物质(IV)可以通过凝血因子蛋白酶从GST融合蛋白上切割下来。最后再浓缩即可制得多肽类物质(IV)的纯品。
具体实施方式：多肽制备实施例一：多肽的氨基酸序列为：REPRGSDIAGTTSTLQEQIAWMTGNPPVPVGDIYKK
1、合成：首先将树脂用氯乙醚活化(用量50-100毫升/克)，然后将羧基端的第一个氨基酸的氨基用氨基保护基团(9-亚芴基甲酯基)保护起来后(用量20-100克/克)，再加入到树脂中，从而使其固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以用六氢吡啶(用量10-80％，最好20-40％)脱保护。与此同时，将第二个氨基酸的羧基经过HBTU[2-(1氢-苯并三唑基)-1，1，3，3-四甲基糖醛-六氟合磷酸酯{[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium hexafluorophosphate]}活化和二异丙基乙胺中和后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即可形成肽键。然后按照多肽类物质(IV)的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸羧基的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。
2、分离：合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。
3、纯化：将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用：碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的液相色谱法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。
4、鉴定：纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过紫外分光光度法测得其浓度并可通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。多肽制备实施例二：多肽的氨基酸序列为：REPRGSDIAGTTSTLQEQIAWMTGNPPVPVGEIYKK
根据上述氨基酸的序列参照下列方法制备。
1、合成：首先将树脂用氯乙醚活化(用量50-100毫升/克，并且用量可以变化±5％)，然后将羧基端的第一个氨基酸的氨基用氨基保护基团(苄酯基)保护起来后(用量10-80克/克)，再加入到树脂中，从而使其固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以用六氢吡啶(用量10-80％，最好20-40％)脱保护。与此同时，将第二个氨基酸的羧基经过HBTU活化和二异丙基乙胺中和后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即可形成肽键。然后按照多肽类物质(IV)的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸羧基的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。
2、分离：合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。
3、纯化：将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用：碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的液相色谱法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。
4、鉴定：纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过紫外分光光度法测得其浓度并可通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。多肽制备实施例三：多肽的氨基酸序列为：
REPRGSDIAGTTSTLQEQIAWMTGNPPIPVGEIYKK
根据上述氨基酸的序列按下列方法制备。
1、合成：首先将树脂用氯乙醚活化(用量50-100毫升/克，并且用量可以变化±5％)，然后将羧基端的第一个氨基酸的氨基用氨基保护基团(叔-丁基羰基)保护起来后(用量10-100克/克)，再加入到树脂中，从而使其固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以用六氢吡啶(用量10-80％，最好20-40％)脱保护。与此同时，将第一个氨基酸的羧基经过HBTU活化和二异丙基乙胺中和后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即可形成肽键。然后按照多肽类物质(IV)的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸羧基的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。
2、分离：合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。
3、纯化：将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用：碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的液相色谱法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。
4、鉴定：纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过紫外分光光度法测得其浓度并可通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。多肽制备实施例四：多肽的氨基酸序列为：
REPRGSDIAGTTSTLQEQIAWMTGNPPIPVGDIYKK
根据上述氨基酸的序列按下列方法制备。
1、合成：首先将树脂用氯乙醚活化(用量50-100毫升/克，并且用量可以变化±5％)，然后将羧基端的第一个氨基酸的氨基用氨基保护基团(甲苯磺酰基)保护起来后(用量20-50克/克)，再加入到树脂中，从而使其固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以用六氢吡啶(用量10-80％，最好20-40％)脱保护。与此同时，将第二个氨基酸的羧基经过HBTU活化和二异丙基乙胺中和后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即可形成肽键。然后按照多肽类物质(IV)的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸羧基的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后一个氨基酸结合到肽链上为止。
2、分离：合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚，苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取10-80毫升的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌1-5小时，然后经过过滤便可得到多肽类物质(IV)混合液。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。
3、纯化：将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或10-40％的碱溶液中(碱可以选用：碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的液相色谱法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。
4、鉴定：纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过紫外分光光度法测得其浓度并可通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。多肽制备实施例五：多肽的氨基酸序列为：
REPRGSDLAGTTSTLQEQINWMTGNPPVPVGDIYKK
根据上述氨基酸的序列按照“多肽制备实施例一”的方法制备得到。多肽制备实施例六：多肽的氨基酸序列为：
REPRGSDIAGTTSTLQEQINWMTGNPPVPVGEIYKK
根据上述氨基酸的序列，按照“多肽制备实施例二”的方法制备得到。多肽制备实施例七：多肽的氨基酸序列为：
REPRGSDIAGTTSTLQEQINWMTGNPPIPVGDIYKK
根据上述氨基酸的序列，按照“多肽制备实施例一”的方法制备得到。多肽制备实施例八：多肽的氨基酸序列为：
REPRGSDIAGTTSTLQEQINWMTGNPPIPVGEIYKK
根据上述氨基酸的序列，按照“多肽制备实施例三”的方法制备得到。多肽制备实施例九：
分别按照“多肽制备实施例一”至“多肽制备实施例八”的多肽氨基酸的排列序列，利用化学合成多肽类物质(IV)的基因序列之后，克隆到预先被内切酶处理过的PGEX-2载体中。重组的质粒再转化到受体菌中，然后在培养基中大量繁殖、诱导。最后将细菌离心收集，再依靠层析柱将多肽类物质(IV)和与其结合的蛋白质纯化出来。
多肽类物质(IV)可以通过蛋白酶从与其融合的GST(谷胱甘肽-S-转移酶)的融合蛋白上切割下来。最后再浓缩即可制得多肽类物质(IV)的纯品。
上述制备的多肽类物质(IV)在临床上可以用于检测、诊断病毒性疾病，特别是艾滋病等一些由病毒引起的疾病，也可以用作制备药物制剂的原料。
Claims (7)
1、一种多肽类物质(IV)，其特征是由多种氨基酸组成，其氨基酸的排列序列为：REPRGSDIAGTTSTLQEQI*WMTGNPP**PVG***IYKK其中：*为氨基酸A(丙氨酸)或氨基酸N(天冬酰氨)
**为氨基酸V(缬氨酸)或氨基酸I(异亮氨酸)
***为氨基酸D(天冬氨酸)或氨基酸E(谷氨酸)
2、权利要求1所述的多肽类物质(IV)，其特征是用化学方法制备得到，合成的步骤为：
(1)合成：先用氯乙醚将树脂活化，然后在树脂中加入第一个氨基酸(氨基已被保护)，从而固定到树脂上。经过二氯甲烷洗涤后，氨基的保护基团可以由六氢吡啶脱保护。与此同时，第二个氨基酸经过活化后，加入到结合有第一个氨基酸的树脂中，二个氨基酸反应后即形成肽键。然后按照多肽的氨基酸排序，依次加入相应的氨基酸，重复上述的洗涤，氨基去保护，氨基酸的活化等步骤，从而使多肽链不断延长。直到最后第一个氨基酸结合到肽链上为止。
(2)分离：合成后的多肽仍然与树脂结合在一起，因此分离的过程就是利用分离液将多肽类物质(IV)从树脂上游离下来。分离液可以采用苯酚、苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物，取适量的分离液浸泡上述结合有多肽类物质(IV)的树脂，在室温下搅拌，然后经过滤便可得到多肽类物质(IV)。游离的多肽类物质(IV)经过沉淀后，即可分离出来。
(3)纯化：将分离出来的多肽类物质(IV)溶解在水或适当浓度的碱溶液中(碱可以选用：碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠)，然后用常规的色谱方法，即可将完整的多肽类物质(IV)进行纯化。
(4)鉴定：纯化后的多肽类物质(IV)，可以通过质谱分析重新核实所合成的多肽类物质(IV)的氨基酸序列是否正确。
3、根据权利要求2所述的多肽类物质(IV)的化学合成方法，其特征是氨基酸的氨基可以由以下化学性基团加以保护①苄酯基(Carbobenzoxyl)②叔-丁基羰基(t-Butyloxycarbonyl)③甲苯磺酰基(Tosyl)④9-亚芴基甲酯基(Fmoc：9-Fluorenylmethoxycarbonyl)
4、根据权利要求2所述的多肽类物质(IV)的化学合成方法，其特征是在分离过程中使用的分离液可以采用苯酚、苯硫基甲烷以及三氟乙酸其中的一种或几种的混合物。
5、根据权利要求2所述的多肽类物质(IV)的化学合成方法，其特征是纯化过程的的碱溶液可以选用；碳酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸钠的溶液。
6、根据权利要求1所述的多肽类物质(IV)，其特征是用基因重组的方法制备得到，其制备的步骤为：
(1)将多肽类物质(IV)的基因序列利用化学合成法合成之后，克隆到预先被内切酶(BamHI和EcoRI)处理过的PGEX-2载体中。重组的质粒再转化到BL21受体菌中，然后在培养基中大量繁殖、诱导。最后将细菌离心收集，再依靠层析柱将多肽类物质(IV)与GST(谷胱甘肽-S-转移酶)的融合蛋白纯化出来。
(2)多肽类物质(IV)可以通过凝血因子蛋白酶从GST融合蛋白上切割下来。最后再浓缩即可得到多肽类物质(IV)的纯品。
7、一种权利要求1所述的多肽类物质(IV)，其用途是在临床的检测、诊断艾滋病病毒方面的应用，或者作为药物制剂的生产原料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02115480 CN1458165A (zh) | 2002-01-26 | 2002-01-26 | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02115480 CN1458165A (zh) | 2002-01-26 | 2002-01-26 | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1458165A true CN1458165A (zh) | 2003-11-26 |
Family
ID=29426496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 02115480 Pending CN1458165A (zh) | 2002-01-26 | 2002-01-26 | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1458165A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2323681A4 (en) * | 2008-07-25 | 2012-11-14 | Univ Colorado | METHOD FOR TREATING VIRAL DISEASES |
| US8557764B2 (en) | 2007-01-26 | 2013-10-15 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Methods of modulating immune function |
| US8957031B2 (en) | 2007-10-23 | 2015-02-17 | Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Competitive inhibitors of invariant chain expression and/or ectopic clip binding |
-
2002
- 2002-01-26 CN CN 02115480 patent/CN1458165A/zh active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8557764B2 (en) | 2007-01-26 | 2013-10-15 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Methods of modulating immune function |
| US8957031B2 (en) | 2007-10-23 | 2015-02-17 | Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Competitive inhibitors of invariant chain expression and/or ectopic clip binding |
| US10420813B2 (en) | 2007-10-23 | 2019-09-24 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Competitive inhibitors of invariant chain expression and/or ectopic clip binding |
| EP2323681A4 (en) * | 2008-07-25 | 2012-11-14 | Univ Colorado | METHOD FOR TREATING VIRAL DISEASES |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3266311B2 (ja) | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤 | |
| Fischer | The design, synthesis and application of stereochemical and directional peptide isomers: a critical review | |
| JP5908478B2 (ja) | ｈ「Ｇｌｙ２」ＧＬＰ−２の固相合成 | |
| CA2332338A1 (en) | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties | |
| CA2377677A1 (en) | Hybrid polypeptides with enhanced pharmacokinetic properties | |
| JP3178835B2 (ja) | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤 | |
| CN103848910A (zh) | 一种萨摩鲁泰的固相合成方法 | |
| CN1222537C (zh) | 一种制备依非巴特的工艺 | |
| CN111675752B (zh) | 一种冠状病毒膜融合抑制剂及其药物用途 | |
| CN1458165A (zh) | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 | |
| Snyder et al. | Effect of modification of the basic residues of dynorphin A-(1-13) amide on opioid receptor selectivity and opioid activity | |
| CA2450548C (en) | Method for the recombinant production of peptidic antiviral fusion inhibitors, and acetylation of gb41 fragments | |
| CN113817026B (zh) | 靶向刺突蛋白hr1的订书肽、制备方法及抗新型冠状病毒应用 | |
| CN1435431A (zh) | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 | |
| CN1473844A (zh) | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 | |
| CN1473845A (zh) | 一种多肽类物质及其制备方法和用途 | |
| CN1260250C (zh) | 胸腺五肽的制备方法 | |
| CN109912709B (zh) | 一种酸敏感离子通道抑制剂的制备方法 | |
| CN104159914A (zh) | Hiv膜融合抑制剂 | |
| CN103897031A (zh) | 化学修饰的胸腺五肽及其合成方法 | |
| CN1693303A (zh) | 一种9－芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺的合成新工艺 | |
| AU604719B2 (en) | Small peptides which inhibit binding to t-4 receptors and act as immunogens | |
| CN1165521A (zh) | 苯基肽，该肽及含有所述肽的药物组合物的制备方法 | |
| JPH0687889A (ja) | 新規なデカペプチド及びその繰り返しから成るポリペプチド | |
| CN116082460A (zh) | 环肽GG-8-6-Lys1的化学制备方法与制药用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |