CN1452888A - 油菜花粉发酵破壁新方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种油菜花粉发酵破壁新方法。油菜花粉破壁的步骤如下:1)培养基制备:2)灭菌、接种;3)曲子制备;4)酶液制备:将已发酵完全的曲子放入温水,约为原料的70-100%,浸泡3-4小时,然后用外力积压曲子,收集发酵液,得酶液;5)发酵酶液:将油菜花粉真空烘干,粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液,按9-12∶14-16的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵,即可得破壁花粉。本发明的优点是:1)需要的设备简单,成本低,易实现产业化;2)生产工艺简捷、易操作;3)破壁率高,达98%以上,对营养成分破坏较小;4)能够改良花粉的脱敏、脱苦、脱涩等。
Description
技术领域
本发明涉及一种油菜花粉发酵破壁新方法。
背景技术
花粉(pollen)是植物雄性配子体,植物高度浓缩的“微型营养库”,其不仅含有人体生存所需的多种营养物质,而且含有多种生物活性物质,对肌体的各种生理功能具有奇妙的调节作用,可以增强体质、提高免疫力、延缓衰老、降低血压等,被誉为“完全营养品”。花粉是由花粉壁和内含物(或原生质,花粉主要营养物质)所组成,花粉壁可分为外壁与内壁,外壁主要由孢粉素和纤维素组成,内壁主要由纤维素和果胶组成;由于组成壁成分性质的独特性导致花粉细胞壁难于破损。这既影响了营养成分的吸收利用,也阻止了提取时营养物质的释放。据统计,我国目前花粉资源利用率仅是一般资源量的1/24,为最高资源量的1/240。因此花粉的破壁十分重要。许多研究都证明了破壁后花粉的营养效果较破壁前好的多。
迄今为止,有关油菜花粉破壁的工艺有过很多报道,目前常用的破壁方法多为物理法(如高压气流碰撞法、超声波法、冷冻加热法、膨化法等),主要存在的问题有:
1)对设备和工作条件要求高,投入大,不宜推广和实施产业化;
2)破壁率低;
3)利用温差法时,由于温度的变化过大,导致花粉营养物质的极大破坏。
发明内容
本发明目的是提供一种油菜花粉发酵破壁新方法。
油菜花粉破壁的步骤如下:
1)培养基制备:
(1)豆用粉碎机碾碎,按1∶8-12的比例加水,在高压锅中蒸煮60-80min,用纱布过滤,或将黄豆包在纱布中蒸煮,提取黄豆汁,按黄豆∶蔗糖∶琼脂=8-12∶2-4∶3-5的比例制备培养基;
(2)虎红培养基:按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g,葡萄糖8-12g,磷酸二氢钾1-2g,硫酸镁0.3-0.6g,琼脂18-22g,氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后,再加入1/3000虎红水溶液80-120ml,分装后,高压灭菌;
(3)霉菌培养基:按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g,酵母浸出液1-3g,磷酸氢二钾0.5-1.5g,硫酸镁0.3-0.6g,琼脂18-20g,氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微温),调pH为6.5-7.0,煮沸,加18-20g葡萄糖,溶解后,过滤调pH为6.0±0.5,使灭菌后pH为6.4±0.2,高压灭菌;
(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基:将马铃薯去皮切块,加蒸馏水,煮沸10-20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000ml,加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,高压灭菌;
2)灭菌、接种:将刚制备的培养基趁热分装于培养皿中(10-15ml),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌15-20min,冷却至室温,在超净工作台上接种试管菌种,置28-30℃的恒温培养箱中培养;
3)曲子制备:采用麦麸培养基,每100g原料加水40-45g,搅拌均匀后,分装于的三角瓶(每瓶30-40g原料),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌10-20min,冷却至室温,在超净工作台将培养皿中30-40%的菌种接入三角瓶,在28-30℃的恒温培养箱中发酵;
4)酶液制备:将已发酵完全的曲子方入适量的温水,约为原料的70-100%,浸泡3-4小时,然后用外力积压曲子,收集发酵液,得酶液;
5)发酵酶液:将油菜花粉真空烘干(含水量<5%),粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液=1-3∶1)按9-12∶14-16的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵11-14小时,pH为4-5,即可得破壁花粉。
本发明的优点是:
1)需要的设备简单,成本低,易实现产业化;
2)生产工艺简捷、易操作;
3)破壁率高,达98%以上,对营养成分破坏较小;
4)能够改良花粉的脱敏、脱苦、脱涩等。
具体实施方式
实施例1花粉发酵破壁方法步骤如下:
1、养基制备:
1)黄豆用粉碎机碾碎,按1∶10的比例加水,在高压锅中蒸煮65min,用纱布过滤,提取黄豆汁,按10mg黄豆,3mg蔗糖,4mg琼脂的比例制备培养基,pH自然状态。
2)虎红(孟加拉红)培养基:将蛋白胨5g,葡萄糖10g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g,琼脂20g,1/3000虎红水溶液100ml,氯霉素0.1g,加入1000ml蒸馏水中溶解后,再加入虎红溶液,分装后,高压灭菌(121℃,20min)。
3)霉菌培养基:将蛋白胨5g,酵母浸出液2g,磷酸氢二钾1g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g,琼脂20g,氯霉素0.1g,加入1000ml蒸馏水中,微温溶解,调pH为6.8,煮沸,加20g葡萄糖,溶解后,过滤调pH为6.6,使灭菌后pH为6.5,高压灭菌(115℃,20min)。
4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):将马铃薯去皮切块,加蒸馏水,煮沸20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000ml,加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,高压灭菌(121℃,20min)。
2、灭菌、接种:将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中,每个培养皿中10ml,在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌15min,冷却至室温,在超净工作台上接种试管菌种,置29℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、曲子制备:采用麦麸培养基,每100g原料加水40g,搅拌均匀后,分装于250ml的三角瓶(每瓶35g原料),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌15min,冷却至室温,在超净工作台将培养皿中35%的菌种接入三角瓶,在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4、酶液制备:将已发酵完全的曲子方入适量的温水,约为原料的90%,浸泡3小时,然后用手积压曲子,收集发酵液,得酶液。
5、发酵酶液:将油菜花粉真空烘干(含水量<5%),粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液=2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时,pH为4.5,即可得破壁花粉。
6、破壁效果:破壁率为100%。
实施例2
1、培养基制备:
1)黄豆用粉碎机碾碎,按1∶12的比例加水,将黄豆包在纱布中,在高压锅中蒸煮80min,提取黄豆汁,按12mg黄豆,4mg蔗糖,5mg琼脂的比例制备培养基,pH自然状态。
2)虎红(孟加拉红)培养基:将蛋白胨6g,葡萄糖12g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g,琼脂22g,氯霉素0.2g,加入1000ml蒸馏水中溶解后,再加1/3000虎红水溶液120ml,分装后,高压灭菌(121℃,30min)。
3)霉菌培养基:将蛋白胨6g,酵母浸出液3g,磷酸氢二钾1.5g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g,琼脂20g,氯霉素0.2g,加入1000ml蒸馏水中,微温溶解,调pH为6.8,煮沸,加20g葡萄糖,溶解后,过滤调pH为6.8,使灭菌后pH为6.4,高压灭菌(115℃,30min)。
4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):将马铃薯去皮切块,加蒸馏水,煮沸20min。用纱布过滤,用蒸馏水定容至1000ml,加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,高压灭菌(121℃,30min)。
2、灭菌、接种:将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中,每个培养皿加入15ml,在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌30min,冷却至室温,在超净工作台上接种试管菌种,置30℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、曲子制备:采用麦麸培养基,每100g原料加水45g,搅拌均匀后,分装于250ml的三角瓶(每瓶40g原料),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌20min,冷却至室温,在超净工作台将培养皿中40%的菌种接入三角瓶,在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4、酶液制备:将已发酵完全的曲子放入适量的温水,约为原料的100%,浸泡4小时,然后用手积压曲子,收集发酵液,得酶液。
5、发酵酶液:将油菜花粉真空烘干(含水量<5%),粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液=3∶1)按11∶16的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵14小时,pH为5.0,即可得破壁花粉。
6、破壁效果:破壁率为99.1%
实施例3
1)培养基制备:
(1)黄豆用粉碎机碾碎,按1∶8的比例加水,将黄豆包在纱布中,在高压锅中蒸煮80min,提取黄豆汁,按8mg黄豆,2mg蔗糖,4mg琼脂的比例制备培养基,pH自然状态;
(2)虎红(孟加拉红)培养基:将蛋白胨4g,葡萄糖8g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.3g,琼脂18g,氯霉素0.1g,加入1000ml蒸馏水中溶解后,再加入1/3000虎红水溶液80ml,分装后,高压灭菌(121℃,20min);
(3)霉菌培养基:将蛋白胨4g,酵母浸出液1g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g,琼脂18g,氯霉素0.1g,加入1000ml蒸馏水中,微温溶解,调pH为6.5,煮沸,加18g葡萄糖,溶解后,过滤调pH为6.0,高压灭菌(115℃,30min);
(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):将马铃薯去皮切块,加蒸馏水,煮沸10min。用纱布过滤,用蒸馏水定容至1000ml,加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,高压灭菌(121℃,20min);
2)灭菌、接种:将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中,每个培养皿加入15ml,在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌20min,冷却至室温,在超净工作台上接种试管菌种,置30℃的恒温培养箱中培养48小时;
3)曲子制备:采用麦麸培养基,每100g原料加水40g,搅拌均匀后,分装于250ml的三角瓶(每瓶30g原料),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌10min,冷却至室温,在超净工作台将培养皿中40%的菌种接入三角瓶,在30℃的恒温培养箱中发酵36小时;
4)液制备:将已发酵完全的曲子放入适量的温水,约为原料的80%,浸泡4小时,然后用手积压曲子,收集发酵液,得酶液;
5)酵酶液:将油菜花粉真空烘干(含水量<5%),粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用,将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液=2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时,pH为4.5,即可得破壁花粉。
6、破壁效果:破壁率为98.5%。
Claims (2)
1.一种油菜花粉发酵破壁新方法,其特征在于它的破壁步骤如下:
1)培养基制备:
(1)豆用粉碎机碾碎,按1∶8-12的比例加水,在高压锅中蒸煮60-80min,用纱布过滤,或将黄豆包在纱布中蒸煮,提取黄豆汁,按黄豆∶蔗糖∶琼脂=8-12∶2-4∶3-5的比例制备培养基;
(2)虎红培养基:按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g,葡萄糖8-12g,磷酸二氢钾1-2g,硫酸镁0.3-0.6g,琼脂18-22g,氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后,再加入1/3000虎红水溶液80-120ml,分装后,高压灭菌;
(3)霉菌培养基:按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g,酵母浸出液1-3g,磷酸氢二钾0.5-1.5g,硫酸镁0.3-0.6g,琼脂18-20g,氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微温),调pH为6.5-7.0,煮沸,加18-20g葡萄糖,溶解后,过滤调pH为6.0±0.5,使灭菌后pH为6.4±0.2,高压灭菌;
(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基:将马铃薯去皮切块,加蒸馏水,煮沸10-20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000ml,加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,高压灭菌;
2)灭菌、接种:将刚制备的培养基趁热分装于培养皿中(10-15ml),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌15-20min,冷却至室温,在超净工作台上接种试管菌种,置28-30℃的恒温培养箱中培养;
3)曲子制备:采用麦麸培养基,每100g原料加水40-45g,搅拌均匀后,分装于的三角瓶,在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌10-20min,冷却至室温,在超净工作台将培养皿中30-40%的菌种接入三角瓶,在28-30℃的恒温培养箱中发酵;
4)酶液制备:将已发酵完全的曲子方入适量的温水,约为原料的70-100%,浸泡3-4小时,然后用外力积压曲子,收集发酵液,得酶液;
5)发酵酶液:将油菜花粉真空烘干,粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用;将粉碎均匀的花粉和酶液按9-12∶14-16的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵11-14小时,pH为4-5,即可得破壁花粉。
2.根据权利要求1所述的一种油菜花粉发酵破壁新方法,其特征在于它的破壁步骤如下:
1)培养基制备:
(1)黄豆用粉碎机碾碎,按1∶10的比例加水,在高压锅中蒸煮65min,用纱布过滤,提取黄豆汁,按10mg黄豆,3mg蔗糖,4mg琼脂的比例制备培养基,pH自然状态。
(2)虎红(孟加拉红)培养基:将蛋白胨5g,葡萄糖10g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g,琼脂20g,1/3000虎红水溶液100ml,氯霉素0.1g,加入1000ml蒸馏水中溶解后,再加入虎红溶液,分装后,高压灭菌(121℃,20min)。
(3)霉菌培养基:将蛋白胨5g,酵母浸出液2g,磷酸氢二钾1g,硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g,琼脂20g,氯霉素0.1g,加入1000ml蒸馏水中,微温溶解,调pH为6.8,煮沸,加20g葡萄糖,溶解后,过滤调pH为6.6,使灭菌后pH为6.5,高压灭菌(115℃,20min)。
(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):将马铃薯去皮切块,加蒸馏水,煮沸20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000ml,加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,高压灭菌(121℃,20min)。
2)灭菌、接种:将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中,每个培养皿中10ml,在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌15min,冷却至室温,在超净工作台上接种试管菌种,置29℃的恒温培养箱中培养48小时。
3)曲子制备:采用麦麸培养基,每100g原料加水40g,搅拌均匀后,分装于250ml的三角瓶(每瓶35g原料),在1.4Kg/cm2,121℃条件下灭菌15min,冷却至室温,在超净工作台将培养皿中35%的菌种接入三角瓶,在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4)酶液制备:将已发酵完全的曲子方入适量的温水,约为原料的90%,浸泡3小时,然后用手积压曲子,收集发酵液,得酶液。
5)发酵酶液:将油菜花粉真空烘干(含水量<5%),粉碎过筛,得均匀花粉粒,用无水酒精喷洒灭菌,放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液=2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀,置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时,pH为4.5,即可得破壁花粉。
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