CN1440273A - 含黄连木树胶的化妆护肤组合物 - Google Patents

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Abstract

包括将含黄连木树胶的组合物施用到皮肤上的化妆护肤方法。本发明组合物提供对sebocyte的皮脂分泌的控制、改善的油控制和改善的皮肤感觉，防止光亮和油腻，同时也提供抗老化效能从而减轻皱纹和老化皮肤的外观、改善肤色、治疗光致老化皮肤、改善皮肤光泽、清洁性和美观性以及总体健康和年轻的皮肤外观。

Description

含黄连木树胶的化妆护肤组合物
本发明涉及通过局部施用含黄连木树胶的化妆组合物调理人皮肤的化妆护肤方法和组合物。
皮脂是由sebocyte(皮肤中皮脂腺的细胞)产生并分泌到皮肤表面的皮肤油。一种常见的不良皮肤状态是“油性皮肤”，该状态源于皮肤上存在的过量皮脂。油性皮肤伴随着发亮、不受欢迎的外观和令人不快的触感，影响着各个年龄段的人群。因此高度需要有可调理这种皮肤以提供皮脂控制的化妆品。
近年来，消费者对“天然”产品的需求导致了植物提取物在各种护肤组合物中的使用。先有技术公开了各种用途的来自植物的树胶/树脂和油。例如，授权予Parfums Christian Dior的WO 91/10196(下文称为“Dior的196”)公开了源于印度的各种形式的树脂guggul(一种没药属植物的提取物)的用途。Dior的196公开了guggul作为改善皮肤表面外观，特别是降低皱纹深度并使细纹消失的化妆剂的用途。
McCook等人的美国专利5,690,948号(下文称为“McCook的948”)公开了所谓gugulipid的树胶/树脂guggal的乙酸乙酯提取物的用途。McCook的948公开了gugulipid和其醇部分在抗皮脂和抗氧化剂组合物中的用途。
古代就已经在希腊的希俄斯岛上生产黄连木树胶，它可从一种漆树科的常青灌木Pistacia Lentisus L.种以树干提取物的形式获得。黄连木树胶的组分包括α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、桧烯、月桂烯、δ-3-蒈烯、柠檬烯、桉树脑、Yy-萜品烯、对伞花烃、萜品油烯、萜品烯-1-醇-4和α-萜品醇。参见 Fragrance Raw Materials Monographs，MasticAbsolute。某些黄连木树胶的萜类化合物已经鉴定和分离。参见“来自黄连木树胶的三萜类化合物，Pistacia Lentiscus的树脂(TriterpenoidsFrom Gum Mastic，The Resin of Pistacia Lentiscus)” Phytochemistry，30卷，11期，3709-3712页，1991。
Eliaz等人的美国专利5,422,100号(下文称为“Eliaz的100”)公开了黄连木树胶作为一种头发和皮肤护理方法和产品的载体的用途。具体而言，Eliaz的100描述了用于促进头发生长，防止、停止或减少脱发，调理头发和头皮、稠密头发、治疗头皮屑、润滑皮肤、治疗皮脂溢性皮炎、治疗牛皮癣和类似疾病的治疗剂在皮肤上的局部施用，并可能包括诸如皮肤伤口的治愈等用途。黄连木树胶载体为具有渗入皮肤和/或毛囊能力的治疗剂提供介质。
Sodis等人的美国专利5,637,290号公开了来自希俄斯岛的天然乳香、提取乳香油或合成乳香剂用于制备牙膏、漱口剂、口腔除臭剂、晒黑露、发用产品和化妆品的用途。
实际上所有进入皮肤的渗透和吸收均通过毛囊和皮脂腺进行。参见 Cosmetics Science and Technology，pp.46-47，Vol 1，KriegerPublishing Co.，1992。所以，将活性物供给皮肤的理想的化妆上有益的组合物能以使活性物粘附到皮肤或毛发上的形式提供活性物。本领域人们熟知使用乳液，因为它们具有将油和水均传递给皮肤和毛发的能力。通常，活性剂可以油包水或水包油乳液的形式提供，但优选水包油乳液，因为其具有所需的美学和优雅特性诸如浓重和奶油状、无油腻感觉。参见上面文献47页。
上面讨论的先有技术没有公开为抑制皮脂和抗老化双重益处提供了植物提取物向皮肤的增强的传递能力的化妆品介质。所以，对于这种包含便宜和易获的天然组分的化妆品仍存在需求。
本发明包括一种水包油化妆护肤乳液组合物，其包含：
(a)约0.001％(重量)-约10％(重量)的加溶黄连木树胶；
(b)一种挥发性可与水混溶的溶剂；和
(c)一种化妆上可接受的赋形剂。
除了操作实施例和对比例或其它具体指明之处外，本说明书中所有指示材料用量或反应条件、材料的物理性能和/或用途均应理解为被词“约”修饰。除非另加说明，否则所有量均以水包油乳液的重量计。
此中所用的术语“皮肤”包括面部、颈部、胸部、背部、手臂、手、腿和头皮处的皮肤。
此中所用的术语“黄连木树胶”是指来自在希腊希俄斯岛发现的一种漆树科常青灌木Pistacia lentiscus L.的树脂。
此中所用的术语“加溶的”是指在最终组合物中存在的至少90％的黄连木树胶被加溶。
此中所用的术语“可与水混溶”是指在最终组合物中存在的至少95％的溶剂可与水混溶。
按照本发明，加溶的黄连木树胶控制了皮脂分泌和/或控制油性皮肤并防止皮肤皱褶和松弛。
除非另加说明，否则所有量均以水包油乳液的重量计。
皮脂是通过皮脂腺的sebocyte产生的油。sebocyte脂肪形成的抑制减少了皮脂的分泌，从而减轻和/或控制了油性皮肤。或者，提高胶原蛋白的产生有助于防止皮肤皱褶和松弛。作为本发明的一部分，已经发现加溶的黄连木树胶出乎意料地通过抑制sebocyte脂肪形成而具有皮脂抑制活性以及通过提高胶原蛋白产生而提供了抗老化效能。
晶体形式的黄连木树胶可购自Sigma Chemicals或Spectrum。黄连木树胶的预混溶液(例如Lentisque Absolute)可购自BiolandesParfums。与浸膏诸如gugulipid相比，黄连木树胶比较便宜，因此在化妆护肤组合物中使用比较经济。
黄连木树胶是油溶性的并因此在本发明组合物中溶解于一种适合的溶剂中。在本发明优选的实施方案中，使用了可与水混溶的挥发性溶剂，因为这种溶剂在施用到皮肤后蒸发。因此在本发明组合物中的黄连木树胶在溶剂蒸发后仍保持与皮肤接触直到黄连木树胶渗入到皮肤和毛囊中，提供了皮脂的抑制和抗老化效能。相反，非挥发性的水不混溶溶剂诸如在Eliaz的100中公开的豆蔻酸异丙酯并不蒸发。所以，即使在施加到皮肤后，黄连木树胶仍存在于溶剂中从而只有最终所稀释量的黄连木树胶渗入到毛囊中。
适合的可与水混溶的挥发性溶剂包括乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇和它们的混合物。从商业可得性来说，优选乙醇。为了达到化妆效果，黄连木树胶与溶剂的比例可从1∶75起、优选从1∶50起，最优选从2∶1起。
在本发明的组合物中加溶黄连木树胶以占组合物0.001-10％(重量)、优选0.01-1％(重量)、最优选0.01-0.05％(重量)的量存在。
虽然本发明范围包括其它的形式，但是本发明组合物优选为水包油乳液，因为连续相是水相而在皮肤上产生较低油腻感。本领域人们熟知在水包油乳液的较大连续水相中的活性物具有更大可能性达到皮肤中的目标组织，因为水相在施加后立即直接与皮肤接触。总的可参见 Cosmetics Science and Technology的47页。相反，在水包油乳液油相中的活性物质必须首先渗入到水相中然后才进入皮肤。所以，加溶的黄连木树胶存在于本发明组合物的水相中。
本领域人们也熟知活性物的油溶性通过与存在于毛囊和皮脂腺中皮脂的相互混溶性提高了活性物向皮肤的渗透。参见 Cosmetics Science and Technology的47页。加溶的黄连木树胶可溶于油中。因此，在本发明的组合物中，加溶的黄连木树胶可溶解于可与水混溶的挥发性溶剂诸如乙醇中，从而仍存在于乳液的连续相中，一旦施用就立即与皮肤接触。可与水混溶的挥发性溶剂在施用到皮肤上后蒸发，留下在乳液水相中过渡饱和的黄连木树胶。尽管在施用后水相蒸发，其过渡饱和可让黄连木树胶保持与皮肤接触直到渗入。
优选所述乳液包含占赋形剂至少80％(重量)的水。优选水量占本发明组合物的至少50％(重量)，最优选占组合物的60-80％(重量)。
本发明的组合物还包括在组合物中用作黄连木树胶的稀释剂、分散剂或载体的化妆上可接受的赋形剂，以便于组合物在施用到皮肤时的分布。
所述赋形剂可以含水、无水或为乳液。优选所述组合物为含水的或为乳液，特别是油包水或水包油乳液。当水存在时，其量可为5-99％(重量)，优选40-90％(重量)，最好为60-90％(重量)。
除了水以外，较易挥发的溶剂也可在本发明的组合物中用作载体。最优选的是一元C1-C3链烷醇。它们包括乙醇、甲醇和异丙醇。一元链烷醇的量可为1-70％(重量)，优选为10-50％(重量)，最优选为15-40％(重量)。
润肤材料也可作为化妆上可接受的载体。它们可以是硅油形式和合成酯形式。润肤剂的量可为0.1-50％(重量)，优选为1-20％(重量)。
硅油可分成挥发性硅油和非挥发性硅油。此中所用的术语“挥发性”是指那些在室温下具有可测蒸汽压的物质。挥发性硅油优选选自含3-9，优选4-5个硅原子的环状或线性聚二甲基硅氧烷。线性挥发性硅氧烷物质通常具有低于约5厘沲(25℃)的粘度，而环状物质一般具有低于约10厘沲的粘度。可用作润肤材料的非挥发性硅油包括聚烷基硅氧烷、聚烷芳基硅氧烷和聚醚硅氧烷共聚物。此中可用的基本上非挥发性的聚烷基硅氧烷包括例如具有约5-约25百万厘沲(25℃)粘度的聚二甲基硅氧烷。可用于本发明组合物的优选非挥发性润肤剂为具有约10-约400厘沲(25℃)粘度的聚二甲基硅氧烷。
酯类润肤剂有：
(1)具有10到20个碳原子的脂肪酸的链烯基或烷基酯。其例子包括新戊酸异二十烷酯、异壬酸异壬酯、肉豆蔻酸油酯、硬脂酸油酯和油酸油酯。
(2)醚-酯诸如乙氧基化脂肪醇的脂肪酸酯。
(3)多元醇酯。乙二醇单和二脂肪酸酯、二甘醇单和二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)单和二脂肪酸酯、丙二醇单和二脂肪酸酯、聚丙二醇2000单油酸酯、聚丙二醇2000单硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇单硬脂酸酯、甘油单和二脂肪酸酯、聚甘油多脂肪酸酯、乙氧基化甘油单硬脂酸酯、1，3-丁二醇单硬脂酸酯、1，3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脱水山梨醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯是令人满意的多元醇酯。
(4)蜡酯诸如蜂蜡、鲸蜡、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、硬脂酸硬脂醇酯和山嵛酸花生酯。
(5)甾醇酯，其中胆甾醇脂肪酸酯是其例子。
具有10到30个碳原子的脂肪酸也可作为化妆上可接受的载体包括在本发明的组合物中。其例子有壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸、羟基硬脂酸、油酸、亚油酸、蓖麻酸、花生酸、山嵛酸和芥酸。
在本发明的组合物中也可使用多元醇类型的保湿剂作为化妆上可接受的载体。保湿剂有助于提高润肤剂的效力、减少积垢、促进积垢的去除和改善皮肤感觉。典型的多元醇包括甘油、聚亚烷基二醇，更优选亚烷基多元醇和它们的衍生物，包括丙二醇、一缩二丙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇和其衍生物、山梨糖醇、羟丙基山梨糖醇、己二醇、1，3-丁二醇、1，2，6-己三醇、乙氧基化甘油、丙氧基化甘油和其混合物。为达到最佳效果，优选保湿剂为丙二醇或透明质酸钠。保湿剂的量可为组合物的0.5-30％(重量)，并优选1-15％(重量)。
稠化剂也可用作本发明组合物化妆上可接受载体的一部分。典型的稠化剂包括交联丙烯酸酯(例如Carbopol 982)、疏水改性的丙烯酸酯(例如Carbopol 1382)、纤维素衍生物和天然树胶。其中可用的纤维素衍生物有羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、乙基纤维素和羟甲基纤维素。适用于本发明的天然树胶包括瓜耳胶、汉生胶、硬化体(sclerotium)、角叉菜胶、果胶和这些胶的混合物。稠化剂的用量可为组合物的0.0001-5％(重量)、通常为0.001-1％(重量)，最好为0.01-0.5％(重量)。
水、溶剂、硅氧烷、酯、脂肪酸、保湿剂和/或稠化剂一起将构成占组合物1-99.9％(重量)，优选80-99％(重量)的化妆上可接受的载体。
油或油性材料可与乳化剂一起存在以提供油包水或水包油乳液，这很大程度上取决于所用乳化剂的平均亲水-亲脂平衡(HLB)。
表面活性剂也可存在于本发明的化妆品组合物中。表面活性剂的总浓度为组合物的0.1-40％(重量)、优选为1-20％(重量)，最优选为1-5％(重量)。表面活性剂可选自阴离子、非离子、阳离子和两性表面活性剂。特别优选的非离子表面活性剂是具有C10-C20脂肪醇的非离子表面活性剂或者是每摩尔疏水物缩合了2-100摩尔环氧乙烷或环氧丙烷的酸疏水物；与2-20摩尔烯化氧缩合的C2-C10烷基酚；乙二醇的单和二脂肪酸酯；脂肪酸单甘油酯；脱水山梨醇、单和二C8-C20脂肪酸；嵌段共聚物(环氧乙烷/环氧丙烷)；和聚氧乙烯脱水山梨醇以及它们的组合。烷基多苷和糖脂肪酰胺(如甲基葡糖酰胺)也是适合的非离子表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂包括肥皂、烷基醚硫酸盐和磺酸盐、烷基硫酸盐和磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基和二烷基磺基琥珀酸盐、C8-C20酰基羟乙磺酸盐、酰基谷氨酸盐、C8-C20烷基醚磷酸盐和它们的组合。
各种类型的活性成分可存在于本发明的化妆品组合物中。活性物质被定义为润肤剂和/或只改善组合物物理特性的成分以外的益肤剂。虽然并不限于下述范畴，但其通常例子包括抗痤疮剂、另外的抗皮脂剂和防晒剂。
抗痤疮剂包括但不限于过氧化苯甲酰(其量最高可达20％(重量))、类维生素A(一般0.025％-0.05％)、水杨酸(通常最高为2％(重量))和硫(最高为8％(重量))。
类维生素A提高了皮肤成纤维细胞的胶原蛋白合成。这导致防止阳光的损害和平滑皱褶皮肤。此中所用的术语“类维生素A”包括视黄酸、视黄醇、视黄醛和视黄酯。术语“视黄酸”是13-顺视黄酸和全反式视黄酸。
此中所用的术语“视黄醇”包括下面视黄醇的异构体：全反式视黄醇、13-顺-视黄醇、11-顺-视黄醇、9-顺-视黄醇、3，4-二脱氢视黄醇。优选的异构体是全反式视黄醇、13-顺-视黄醇、3，4-二脱氢视黄醇、9-顺-视黄醇。最优选的是全反式视黄醇，因为其具有广泛的商业活力。
视黄酯是视黄醇的酯。术语“视黄醇”已在上面定义。适用于本发明的视黄酯是视黄醇的C1-C30酯，优选C2-C20酯，最优选C2、C3和C16酯，因为它们更容易买到。视黄酯的例子包括但不限于：棕榈酸视黄酯、甲酸视黄酯、乙酸视黄酯、丙酸视黄酯、丁酸视黄酯、戊酸视黄酯、异戊酸视黄酯、己酸视黄酯、庚酸视黄酯、辛酸视黄酯、壬酸视黄酯、癸酸视黄酯、十一烷酸视黄酯、月桂酸视黄酯、十三烷酸视黄酯、肉豆蔻酸视黄酯、十五烷酸视黄酯、十七烷酸视黄酯、硬脂酸视黄酯、异硬脂酸视黄酯、十九烷酸视黄酯、花生烯酸视黄酯、山嵛酸视黄酯、亚油酸视黄酯、油酸视黄酯、乳酸视黄酯、乙醇酸视黄酯、羟基辛酸视黄酯、羟基月桂酸视黄酯、酒石酸视黄酯。
防晒剂包括常用于遮蔽紫外光的那些材料。示例性的化合物为PABA、肉桂酸酯和水杨酸酯的衍生物。例如，可使用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯酮(也称为oxybenzone)。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯酮分别可以Parsol MCX和Benzophenone-3的商品名购置。在组合物中所用的防晒剂的准确量可根据所需的防太阳紫外光辐射的程度不同而不同。
许多化妆品组合物，特别是含水的化妆品组合物必须防止潜在有害的微生物的生长。所以需要使用防腐剂。适合的防腐剂包括对羟基苯甲酸的烷基酯、乙内酰脲衍生物、丙酸盐和各种季铵化合物。本发明特别优选的防腐剂为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯氧基乙醇和苯甲醇。防腐剂的用量通常为组合物的约0.1-2％(重量)。
各种粉末可混入到本发明的化装组合物中以助于油控制。这些粉末包括白垩、滑石、漂白土、高岭土、淀粉、绿土、化学改性硅酸铝镁、有机改性蒙脱土、水合硅酸铝、热解法二氧化硅、淀粉辛烯基琥珀酸铝(aluminum starch octenyl succinate)和它们的混合物。
其它辅助的少量成分也可混入到化妆品组合物中。这些成分可包括着色剂、遮光剂和香料。这些辅助少量成分的量可为组合物的0.001-20％(重量)。
本发明的组合物主要将作为局部施用于人皮肤的产品，特别是作为控制或预防油性皮肤、改善皮肤光亮度和清洁和优雅性、防止或减轻皱褶、干燥、老化或光致老化皮肤的外观的用剂。
使用时，将一定量如1-100ml的组合物从适合的容器或涂敷器具施用到皮肤的暴露区域，并且如果需要可用手或手指或适合的装置涂开和/或擦入到皮肤中。
本发明的化妆护肤组合物可配制成任何形式，诸如配制成化妆水、凝胶、粉末、面膜、固体棒、粘贴小块、摩丝、无纺或纺织基材(擦拭)、露、流体乳或乳霜。
所述组合物可包装在与其粘度及消费者预期用途相配的适合的容器中。例如，露或流体乳可包装在瓶中或滚珠涂敷器具或喷射剂驱动气溶胶装置或配有适合手指操作的泵的容器中。当组合物为乳霜形式时，可简单地保存在不变形的瓶或挤压容器诸如管或有盖的瓶中。本发明因此也提供了装有已在此中定义的化妆上可接受的组合物的密封容器。
所述组合物也可包含在胶囊中，诸如通过引用并入本文的美国专利5,063,057号中所述的胶囊中。
下面的具体实施例进一步说明本发明的情况，但是并不构成对本发明的限定。实施例1
本实施例提供对sebocyte脂肪生成的抑制的数据。
使从成年男性获得的人类sebocyte的继代培养物在48孔组织培养板(Costar Corp.；Cambridge，Mass)上生长直到融合。sebocyte生长培养基包含添加了14μg/ml牛粘液提取物、0.4μg/ml氢化可的松、5μg/ml胰岛素、10ng/ml表皮生长因子、1.2×10-10M霍乱毒素、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的Clonetics Keratinocyte BasalMedium(KBM)。所有培养物均在7.5％CO2存在下在37℃孵育。每周换三次培养基。
在实验时，除去生长培养基并将sebocyte用无菌Dulbecco’sModified Eagle Medium(DMEM；无酚红)洗涤3次。将新鲜DMEM加入到每种样品(三份)中，其具有5μL加溶于乙醇中的黄连木树胶。对照品包括只将乙醇加入到酚红中。将各板送回到孵育箱中保存20小时，随后加入14C-乙酸盐缓冲液(最终浓度5mM，比活性为56mCi/mmol)。将sebocyte送回到孵育箱4小时，然后将每个培养物用磷酸盐缓冲盐水洗涤三次以去除未结合的标记物。收集在sebocyte中残留的放射性标记物并使用Beckman闪烁计数器计数。
以下面表1所列浓度测试加溶于乙醇溶剂中的黄连木树胶(“黄连木树胶”)以及购置的黄连木树胶在50％丙二醇中的溶液(“LentisqueAbsolute”)。
对照品包括纯乙醇和酚红，其具有类似雌激素的活性。使用斯氏T-检验计算统计显著性。结果列于下面的表1。
表1
处理  降低率(％)  T-检验
0.00035％酚红  29.1  0.0055
0.0001％Lentisque Absolute  44.3  0.015
0.001％Lentisque Absolute  58.7  6.5×10-7
0.01％Lentisque Absolute  97.8  6.7×10-9
0.0001％黄连木树胶  44.3  1.0×10-5
0.001％黄连木树胶  94.0  7.0×10-6
如表1中所示，加溶的黄连木树胶改善了对sebocyte脂肪生成的抑制。
实施例2
本实施例测定用溶剂溶液形式的黄连木树胶处理以及用对照溶液处理后成纤维细胞的前胶原I的生产。
测试购自Sigma的加溶于乙醇溶剂的黄连木树胶(“黄连木树胶”)。
胶原蛋白是一种主要的皮肤蛋白。其合成随老化或光损伤减少。胶原蛋白的退化或破坏提高了皮肤的抗张强度而引起皱纹和松弛。许多对人类试验者的研究表明I型胶原蛋白伴随着光损伤的不断严重而降低(参见Kligman，A.，JAMA，(1969)，210，pp.2377-2380；Lavker，R.，J.Inv Derm.，(1979)，73，79-66；Smith J.等人，J.Inv.Derm.，(1962)，39，pp.347-350；和Shuster，S.等人，Br.J.Dermatol.，(1975)，93，pp.639-643)；并且报导了皱纹的组织学和在暴露于阳光的皮肤中胶原蛋白水平的降低之间存在某些关联。参见Chen，S.；Kiss，I.，J.Inv.Derm.，(1992)，98.pp.248-254。Voorhees和同事通过用维A酸局部处理所显示的在光致损伤人类皮肤中I型胶原蛋白的恢复支持了这些发现。参见Christopher，E.，等人，The New Eng.Jou.of Medicine(1993)，329，pp.530-535。前胶原I是胶原蛋白的前体。施加试验化合物后前胶原I生成的增加表明胶原蛋白水平增加。
Slot Blot的前胶原I染色方案
新生人类皮肤成纤维细胞购自Clonetics Corp.，San Diego，CA。所有用于细胞培养的物质均购自Life Technologies，NY，并在5-10代使用。细胞以约7500/孔的密度播种在96孔板的内部48孔的培养基中，所述培养基包含DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)、高葡萄糖，补充有2mM L-谷氨酰胺、10％牛胚胎血清和抗生素以及抗霉菌剂溶液。然后让细胞生长到融合2天。融合后，除去培养基并将细胞用无血清DMEM洗涤，每个孔加入200μl黄连木树胶在无血清DMEM中的溶液。在总共6孔中各重复添加步骤。黄连木树胶以下面表2所示的浓度使用。对照品不含黄连木树胶。24小时后，取出黄连木树胶/对照溶液并再向细胞供给100μl黄连木树胶在无血清DMEM中的溶液。24小时后，再次取出黄连木树胶/对照溶液，并在4℃以1∶200的抑肽酶/水比率用蛋白酶抑制剂(购自Sigma的抑肽酶)存贮过周末。
将硝基纤维素膜和3张滤纸浸渍于三羟甲基氨基甲烷缓冲的盐水(TBS，pH7.3)中。装配BioRad slot blot装置(BioRad Labs，CA)，滤纸置于底部，膜置于顶部，并拧紧。每孔加入100ml TBS。施加真空透过膜吸取孔中内容物。将稀释的黄连木树胶/对照溶液涡旋，然后每孔加入100μl并重力干燥。在该步骤中来自黄连木树胶的前胶原这时结合到膜上。从装置移出膜，切除多余部分，并在底部右角切口以定位。在振摇下将膜在4℃置于封阻溶液(在Dulbecco的磷酸盐缓冲盐水中的5％奶粉)中过夜。然后在室温、振摇下，将膜再在密封袋中用1.5mL在TBS(具0.1％ BSA)中的大鼠抗人体前胶原氨基末端Ab(Chemicon MAB1912)(抗体与缓冲液/BSA比率为1∶100)孵育1.5小时。然后取出膜；在TBS/0.1％吐温中洗涤5分钟3次。然后在振摇、室温下，在密封袋中在2mL具有0.1％BSA的TBS中的生物素化抗大鼠过氧化物酶缀合Ab(Vector Labs)(抗体与缓冲剂/BSA的比率为1∶1000)中孵育1小时。
在TBS/0.1％吐温中将膜再次洗涤5分钟3次。将3mL PBS与30μl来自Vectastain试剂盒(Vector Laboratories)的各种工作溶液一起温育30分钟。在振摇下将膜在密封袋中置于所得到的溶液中30分钟。然后取出膜并在TBS/0.1％吐温中洗涤5分钟2次。然后使用下面溶液将膜染色：
12.5mg 3-氨基-9-乙基咔唑(Sigma)
3.125mL DMF(N，N-二甲基甲酰胺，购自Sigma)
21.5mL 0.2M NaOAc缓冲液，pH5.2
12.5μL H2O2
将膜染色直到显色，并在自来水中洗涤10分钟2次终止反应。使用彩色复印机制备色斑的幻灯片。在Bio-Rad GS-700图象分析密度计上扫描色斑并使用分子分析软件测定(色彩/轨迹(slot)的大小(OD*mm2)。以用黄连木树胶浓缩物处理的细胞与对照品的密度计读数比率计算增加倍数。
所得到的对胶原蛋白生成的影响的结果列于下面的表2。所得到的对糖胺聚糖合成的影响结果列于下面的表3。表2
测试化合物(0.01％) 平均外径读数  标准偏差  p-值(对对照品)  相对于对照品的倍数增加
对照品 5400.5  610.0  -  -
TGF-b 7499.8  1023.0  0.011  1.4
0.005％黄连木树胶 5984.0  849.4  0.036  1.1
0.05％黄连木树胶 6008.0  468.7  0.0011  1.1
*TGF-b作为一个阳性对照加入
如在表2中所示，加溶的黄连木树胶增加了胶原蛋白的产出。
表3
测试化合物(0.01％) 平均外径读数  标准偏差  p-值(对对照品)  相对于对照品的倍数增加
对照 4531.8  290.8  -  -
TGF-b 6382.3  409.5  4.0×10-6  1.4
0.005％黄连木树胶 5594.7  522.2  1.4×10-4  1.2
0.05％黄连木树胶 4952.8  377.7  0.056  1.1
0.5％黄连木树胶 5463.3  206.5  7.9×10-5  1.2
*TGF-b作为一个阳性对照加入
如表3中所示，加溶的黄连木树胶增加了糖胺聚糖的合成。
实施例3
实施例3说明了本发明的局部用组合物。所述组合物可以常规方式加工。它们适合于化妆用途。具体而言，所述组合物适合施用于油性皮肤或皱纹、粗糙、易剥落、老化和/或紫外光损伤皮肤和/或干燥皮肤和绝经后皮肤以改善外观和其感觉以及适合施用于健康皮肤以防止或延迟其退化。水包油乳液
成分 ％(重量)
去离子水 79.40
丙烯酸聚合物 0.30
EDTA二钠 0.10
甘油 3.00
聚山梨酯20 2.50
丁二醇 2.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.30
三乙醇胺99％ 0.30
黄连木树胶 2.00
肉豆蔻酸异丙酯 5.00
棕榈酸辛酯 3.00
鲸蜡醇 1.00
聚二甲基硅氧烷，100cst 0.50
蜂蜡 0.30
对羟基苯甲酸丙酯 0.10
吉美尔II 0.10
香料 0.10
总计 100.00
水包油乳液
成分 ％(重量)
去离子水 77.20
汉生胶 0.20
EDTA二钠 0.10
甘油 5.00
丁二醇 2.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.30
黄连木树胶 2.00
肉豆蔻酸异丙酯 5.00
棕榈酸辛酯 3.00
鲸蜡醇 1.00
聚二甲基硅氧烷，100cst 0.50
Steareth-2 0.40
Steareth-21 3.00
对羟基苯甲酸丙酯 0.10
吉美尔II 0.10
香料 0.10
总计 100.00
油包水乳液
成分 ％(重量)
去离子水 66.30
EDTA二钠 0.10
甘油 3.00
丙二醇 2.00
氯化钠 0.70
对羟基苯甲酸甲酯 0.30
环二甲基硅酮 14.00
黄连木树胶 2.00
肉豆蔻酸异丙酯 5.00
棕榈酸辛酯 3.00
聚二甲基硅氧烷共聚醇 2.50
聚二甲基硅氧烷，100cst 0.50
蜂蜡 0.30
对羟基苯甲酸丙酯 0.10
吉美尔II 0.10
香料 0.10
总计 100.00
水凝胶
成分 ％(重量)
去离子水 80.85
丁二醇 5.00
PPG-5-Ceteth 20 5.00
甘油 3.00
丙烯酸聚合物 1.20
三乙醇胺99％ 1.20
黄连木树胶 2.00
抗坏血酸 1.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.30
聚山梨酯20 2.50
EDTA二钠 0.10
吉美尔II 0.10
总计 100.00
无水血清
成分 ％(重量)
环二甲基硅酮 76.40
黄连木树胶 1.00
肉豆蔻酸异丙酯 5.00
棕榈酸辛酯 3.00
聚甘油-6二油酸酯 5.00
丁二醇 4.00
聚二甲基硅氧烷，100cst 5.00
蜂蜡 0.30
对羟基苯甲酸丙酯 0.20
香料 0.10
总计 100.00
水-醇凝胶
成分 ％(重量)
去离子水 52.85
醇SDA40B 30.00
丁二醇 5.00
PPG-5-Ceteth 20 5.00
甘油 3.00
丙烯酸聚合物 1.20
三乙醇胺99％ 1.20
黄连木树胶 1.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.30
聚山梨酯20 0.25
EDTA二钠 0.10
吉美尔II 0.10
总计 100.00

Claims (10)

1.一种水包油化妆护肤乳液组合物，该组合物包含：
(a)约0.001％(重量)-约10％(重量)的加溶黄连木树胶；
(b)一种挥发性可与水混溶的溶剂；和
(c)一种化妆上可接受的赋形剂。
2.权利要求1的组合物，该组合物包含约0.01％(重量)-约3％(重量)的加溶黄连木树胶。
3.权利要求1或2的组合物，其中所述挥发性可与水混溶的溶剂为乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇或其混合物。
4.前述权利要求中任一项的组合物，其中黄连木树胶与挥发性可与水混溶的溶剂的比率为1∶75。
5.前述权利要求中任一项的组合物，该组合物还包含0.1-40％选自阴离子、非离子、阳离子和两性表面活性剂的表面活性剂。
6.前述权利要求中任一项的组合物，该组合物还包含一种防晒剂。
7.一种减轻或防止油性皮肤状态的化妆护肤方法，该方法包括将权利要求1的组合物施用到皮肤上。
8.一种刺激皮肤中成纤维细胞的胶原蛋白合成的化妆护肤方法，该方法包括将权利要求1的组合物施用到皮肤上。
9.一种治疗老化、光致老化、干燥、皱纹或皱褶皮肤的化妆护肤方法，该方法包括将权利要求1的组合物施用到皮肤上的步骤。
10.一种减轻或防止油性皮肤状态以及治疗老化、光致老化、干燥、皱纹或皱褶皮肤的化妆护肤方法，该方法包括将权利要求1的组合物施用到皮肤上的步骤。
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