CN1426420A - 新蛋白质以及编码该蛋白质的新基因 - Google Patents

Abstract

本发明概述了一组新蛋白质、编码该组蛋白质的新基因、分别含有上述新基因的质粒组、分别含有上述各个质粒的转化体、针对上述新的各个蛋白质的抗体或其片段、细菌感染症的检测方法以及新的多肽。上述各个新的蛋白质是对活化的人巨噬细胞特异的蛋白质。

Description

新蛋白质以及编码该蛋白质的新基因

技术领域

本发明涉及到多个新蛋白质、编码这些蛋白质的新基因、分别含有上述各新基因的质粒、分别含有上述各个质粒的转化体、针对上述新的各个蛋白质的抗体或其片段、细菌感染症的检测方法以及新的多肽。本发明的新蛋白质是活化的人巨噬细胞特异的蛋白质。

背景技术

人们已经知道脂多糖(Lipopolysaccharide；LPS)是存在于革兰氏阴性细菌外膜的糖脂，可以使巨噬细胞活化、诱导许多基因的表达。被LPS诱导表达的基因已知有表现出抗肿瘤作用和抗炎症作用(例如由细菌感染引起的炎症)的白细胞介素(interleukin；IL)-1。IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、肿瘤坏死因子(tumor necrosisfactor；TNF)、以及趋化因子(例如，IL-8或MCP)；表现出造血作用的粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulatingfactor；G-CSF)、单核细胞(monocyte；M)-CSF、或GM-CSF；或在炎症(例如由细菌感染引起的炎症)疾病中起着主要作用的胶原分解酶、环加氧酶(COX)、或一氧化氮(NO)合成酶(iNOS)等各个基因，这些基因编码的蛋白质几乎都是在生物体内起着重要作用的生理活性蛋白质[Annu.rev.Immunol.，2.283-318(1984)；Inflammation：BasicPrinciples and Clinical Correlates，637-662，Raven Press Ltd.，New York(1992)]。

人染色体中大约存在10万个基因，但现在只分离和鉴定了其中的1/10～1/5，大部分依然没有被分离和解析。可以认为被LPS刺激特异诱导表达的基因组中的大部分是未鉴定的新基因。

而败血病(septicemia)是在身体的某个地方存在化脓病灶，大量细菌从该病灶处断续地或连续地流入到血液中的全身性疾病。败血病的诊断可以通过培养血液、证明有细菌存在来确认。然而在该方法中不仅存在着花费时间，而且存在着在进行采血操作时通常存在于皮肤的细菌(例如，皮肤表面的葡萄球菌)混入、污染血液的缺点。

因此，本发明人将可在诊断炎症、变态反应、或癌症等疾病(特别是细菌感染症)的新型诊断和/或治疗药物的开发中应用作为目的，对通过LPS刺激在巨噬细胞中可特异诱导表达的基因进行了深入探索，探索结果可以对新的3种新基因进行分离和鉴定。另外本发明人发现任一个新基因是在健康人中都不能表达，但在细菌感染症患者中可进行表达的基因。本发明正是基于这样见解的发明。

发明概述

本发明涉及到

(1)含有序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或其片段(以下统称为「本发明第1种新蛋白质」)、

(2)含有序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或其片段(以下统称为「本发明第2种新蛋白质」)、

(3)含有序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或其片段(以下统称为「本发明第3种新蛋白质」)。

另外本发明还涉及到：

(1)编码上述「本发明第1种新蛋白质」的基因(以下统称为「本发明第1种新基因」)、

(2)编码上述「本发明第2种新蛋白质」的基因(以下统称为「本发明第2种新基因」)、

(3)编码上述「本发明第3种新蛋白质」的基因(以下统称为「本发明第3种新基因」)。

另外本发明还涉及到分别含有上述各个基因的质粒。

本发明还涉及到分别含有上述各个质粒的转化体。

本发明还涉及到抗体或其片段，其特征是它们可以分别与上述各种蛋白质或其功能等价的改变体进行特异反应。

本发明还涉及到细菌感染症的检测方法，其特征是：分析被检测样品中的上述各种蛋白质或其功能等价改变体或它们的mRNA。

另外本发明还涉及到：

(1)能够与由序列表中序列号1表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的多核苷酸(以下称为「本发明第1种探针」)、

(2)能够与由序列表中序列号3表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的多核苷酸(以下称为「本发明第2种探针」)、

(3)能够与由序列表中序列号5表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的多核苷酸(以下称为「本发明第3种探针」)。

在本说明书中所谓「功能等价的改变体」指的是含有在原来蛋白质的氨基酸序列中缺失、置换和/或附加1个或1个以上(最好是1个或数个)氨基酸的氨基酸序列，而且具有与原有的上述蛋白质同样活性的蛋白质。另外在本说明书的用语「附加」中包括在氨基酸序列的N末端和/或C末端附加1个或1个以上(最好是1个或数个)氨基酸和在氨基酸序列内部插入1个或1个以上(最好是1个或数个)氨基酸两方面意思。

在本说明书中所谓「同源蛋白质」指的是含有与原有蛋白质的氨基酸序列的同源性在90％以上(在95％以上比较理想，在98％以上更理想，在99％以上最理想)的氨基酸序列，而且具有与原有的上述蛋白质同样活性的蛋白质。另外本说明书中上述「同源性」指的是从BLAST[Basic local alingment search tool；Altschul，S.F.等人，J.Mol.Biol.，215，403-410，(1990)]得到的值。

另外本说明书中用语「基因」和用语「多核苷酸」中任一个用语都包括DNA和RNA。

附图的简单说明

图1是表示通过RNA印迹法检测本发明的新的3种基因在LPS刺激或未刺激下在人巨噬细胞中表达的电泳结果照片。

图2是表示通过RNA印迹法检测本发明的3种新基因组织特异表达的电泳结果照片。

图3是表示使本发明基因NLG-1-1在COS-1细胞中表达的显微镜照片。

图4是表示使本发明基因NLG-2在COS-1细胞中表达的显微镜照片。

图5是表示本发明基因NLG-1-1的FISH解析结果的显微镜照片。

图6是表示通过RNA印迹法检测本发明的新的3种基因在健康人和败血病患者中表达的电泳结果照片。

实施发明的最好方式

以下对本发明进行详细说明。

本发明第1种新蛋白质最好是含有(1)序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质、(2)与上述(1)蛋白质功能等价的改变体以及(3)与上述(1)蛋白质同源的蛋白质、以及(4)它们[即上述(1)蛋白质、上述(2)的功能等价的改变体、或上述(3)同源蛋白质]的片段、由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的蛋白质或与其功能等价改变体或同源的蛋白质。

由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的蛋白质是由481个氨基酸组成的。由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的蛋白质，由于与小鼠IRG-1(Immune-responsive protein-1)[Immunogenetics，41，263-270，(1995)]在氨基酸序列上表现出大约82％的高同源性，所以被认为是人IRG-1。

在序列表中序列号2表示的氨基酸序列中已知可被蛋白激酶C磷酸化的部位有8处，可被酪蛋白激酶(II)磷酸化的部位有10处、由此可以认为由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的蛋白质在传递LPS刺激的信息的细胞内信息传递系统中起着重要的作用。

由于在N末端不存在信号肽序列，所以认为由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的蛋白质在细胞中表现其生物活性。

而作为含有序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质诸如由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的蛋白质和与融合用配偶体融合的融合蛋白质。在上述融合蛋白质中可以使融合用配偶体结合在由序列表中序列号2表示的氨基酸序列构成的上述蛋白质N末端和/C末端。

作为融合用配偶体可以使用诸如纯化用蛋白质[例如谷胱甘肽S-转移酶(GST)的全部或一部分]、检测用蛋白质[例如β-半乳糖苷酶α肽(LacZ α)]的全部或一部分、或表达用蛋白质(例如信号序列)。

在上述融合蛋白质中，在由序列表中序列号2表示的氨基酸序列组成的上述蛋白质与上述融合用配偶体之间也可以适当地导入可被限定分解的蛋白质分解酶(例如，凝血酶或因子Xa)切断的氨基酸序列。

含有由序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质或与其在功能上等价的改变体或同源蛋白质的片段只要是可以用作制备本发明的第1抗体或其片段的免疫原即可，并没有特别限定，但由13个以上氨基酸残基构成的比较理想，由20个以上氨基酸残基构成的更好，由50个以上氨基酸残基构成的最理想。

这些本发明的第1种新蛋白质可以通过众所周知的方法获得，例如，使用本发明的第1种新基因按照众所周知的基因工程手法可以制备。

本发明的第1种新基因只要是编码本发明的第1种新蛋白质即可，并没有特别限定，例如，由序列表中序列号1表示的碱基序列中的第37位～第1479位碱基组成的碱基序列构成的基因。

由序列表中序列号1表示的碱基序列中的第37位～第1479位碱基组成的碱基序列构成的上述基因编码由序列表中序列号2表示的氨基酸序列组成的蛋白质。另外。由序列表中序列号1表示的碱基序列中的第37位～第1479位碱基组成的碱基序列构成的上述基因是在健康人中不表达，但在细菌感染症患者中表达的基因。

本发明的第1种探针只要是可与由序列表中序列号1表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的即可，并没有特别限定，例如，由与由序列表中序列号1表示的碱基序列互补的碱基序列或其部分碱基序列构成的单链或双链多核苷酸。本发明的第1种探针的碱基数的下限虽然没有特别限定，但本发明的第1种探针的碱基数在18个以上比较理想，26个以上更好，41个以上最理想。另外其上限也没有限定，但本发明的第1种探针的碱基数最好在2180个以下。而本说明书中所谓的「可与由序列表中序列号1表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交」指的是在后述的实施例1(4)中记载的条件下[即、含有0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)的2×SSC(standard sodium citrate)]于室温洗2次，每次20分钟，再于65℃下用含有0.1％SDS的0.2×SSC洗2次，每次20分钟，与来自健康人的mRNA不杂交，但与由序列表中序列号1表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交。

本发明第2种新蛋白质最好是含有(1)序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质、(2)在功能上与上述(1)蛋白质功能等价的改变体以及(3)与上述(1)蛋白质同源的蛋白质、以及(4)它们[即上述(1)蛋白质、上述(2)的功能上等价的改变体、或上述(3)同源蛋白质]的片段、由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质或与其功能等价的改变体或同源的蛋白质。

由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质是由390个氨基酸残基组成的。由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质由于与小鼠IRG-1(Immune-responsive protein-1)[Immnogenetics，41，263-270，(1995)]在氨基酸序列上表现出大约82％的高同源性，所以被认为人IRG-1。

在序列表中序列号4表示的氨基酸序列中已知可被蛋白激酶磷酸化的部位有6处，可被酪蛋白激酶II磷酸化的部位有8处、由此可以认为由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质在传递LPS刺激的信息的细胞内信息传递系统中起着重要的作用。

由于在N末端不存在信号肽序列，所以认为由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质在细胞中表现其生物活性。

而作为含有序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质诸如由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质和与融合用配偶体融合的融合蛋白质。在上述融合蛋白质中可以使融合用配偶体结合在由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的上述蛋白质N末端和/或C末端。

作为融合用配偶体可以使用诸如纯化用蛋白质[例如谷胱甘肽S-转移酶(GST)的全部或一部分]、检测用蛋白质[例如β-半乳糖苷酶α肽(LacZ α)]的全部或一部分、或表达用蛋白质(例如信号序列)。

另外在上述融合蛋白质中，在由序列表中序列号4表示的氨基酸序列组成的上述蛋白质与上述融合用配偶体之间也可以适当地导入可被限定分解的蛋白质分解酶(例如，凝血酶或因子Xa)切断的氨基酸序列。

含有由序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质或与其在功能上等价的改变体或同源蛋白质的片段只要是可以用作制备本发明的第2抗体或其片段的免疫原即可，并没有特别限定，但由13个以上氨基酸残基构成的比较理想，由20个以上氨基酸残基构成的更好，由50个以上氨基酸残基构成的最理想。

这些本发明的第2种新蛋白质可以通过众所周知的方法获得，例如，使用本发明的第2种新基因按照众所周知的基因工程手法可以制备。

本发明的第2种新基因只要是编码本发明的第2种新蛋白质的即可，并没有特别限定，例如，由序列表中序列号3表示的碱基序列中的第126位～第1295位碱基组成的碱基序列构成的基因。

由序列表中序列号3表示的碱基序列中的第126位～第1295位碱基组成的碱基序列构成的上述基因编码由序列表中序列号4表示的氨基酸序列组成的蛋白质。另外。由序列表中序列号3表示的碱基序列中的第126位～第1295位碱基组成的碱基序列构成的上述基因是在健康人中不表达，但在细菌感染症患者中表达的基因。

本发明的第2种探针只要是可与由序列表中序列号3表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的即可，并没有特别限定，例如，由与由序列表中序列号3表示的碱基序列互补的碱基序列或其部分碱基序列构成的单链或双链多核苷酸。本发明的第2种探针的碱基数的下限虽然没有特别限定，但本发明的第2种探针的碱基数在18个以上比较理想，26个以上更好，41个以上最理想。另外其上限也没有限定，但本发明的第2种探针的碱基数最好在1970个以下。而本说明书中所谓的「可与由序列表中序列号3表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交」指的是在后述的实施例1(4)中记载的条件下与来自健康人的mRNA不杂交，但与由序列表中序列号3表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交。

本发明第3种新蛋白质最好是含有序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质、(2)在与上述(1)蛋白质功能等价的改变体以及(3)与上述(1)蛋白质同源的蛋白质、以及(4)它们[即上述(1)蛋白质、上述(2)的功能上等价的改变体、或上述(3)同源蛋白质]的片段、由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质或与其功能等价改变体或同源的蛋白质。

由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质是由83个氨基酸组成的。由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质与小鼠NADH-泛醌氧化还原酶MLRQ亚基(CI-MLRQ)在氨基酸序列上表现出大约27％的同源性。据文献报道小鼠NADH-泛醌氧化还原酶MLRQ亚基存在于构成线粒体电子传递系统的4种复合物(I、II、II、IV)的一个复合物I(complex I)中，与活性氧的产生有关[Circulation Res.，85，357-363(1999)；Biochem.Mol.Biol.Int.，43，669-675(1997)]。在序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质就象其氨基酸序列所表明的那样，由于也没有间隙，与小鼠NADH-泛醌氧化还原酶MLRQ亚基的结构也比较类似，所以可能具有传递电子能力，与炎症发生时活性氧的产生有关。

由于在N末端不存在信号肽，所以认为由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质在细胞中表现其生物活性。

而作为含有序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质诸如由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质和与融合用配偶体融合的融合蛋白质。在上述融合蛋白质中可以使融合用配偶体结合在由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质N末端和/或C末端。

作为融合用配偶体可以使用诸如纯化用蛋白质[例如谷胱甘肽S-转移酶(GST)的全部或一部分]、检测用蛋白质[例如β-半乳糖苷酶α肽(LacZ α)]的全部或一部分、或表达用蛋白质(例如信号序列)。

另外在上述融合蛋白质中，在由序列表中序列号6表示的氨基酸序列组成的上述蛋白质与上述融合用配偶体之间也可以适当地导入可被限制分解的蛋白质分解酶(例如，凝血酶或因子Xa)切断的氨基酸序列。

含有由序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质或与其在功能上等价的改变体或同源蛋白质的片段只要是可以用作制备本发明的第3抗体或其片段的免疫原即可，并没有特别限定，但由13个以上氨基酸残基构成的比较理想，由20个以上氨基酸残基构成的更好，由50个以上氨基酸残基构成的最理想。

这些本发明的第3种新蛋白质可以通过众所周知的方法获得，例如，使用本发明的第3种新基因按照众所周知的基因工程手法可以制备。

本发明的第3种新基因只要是编码本发明的第3种新蛋白质的即可，并没有特别限定，例如，由序列表中序列号5表示的碱基序列中的第56位～第304位碱基组成的碱基序列构成的基因。

由序列表中序列号5表示的碱基序列中的第56位～第1304位碱基组成的碱基序列构成的上述基因编码由序列表中序列号6表示的氨基酸序列组成的蛋白质。另外。由序列表中序列号5表示的碱基序列中的第56位～第1304位碱基组成的碱基序列构成的上述基因是在健康人中不表达，但在细菌感染症患者中表达的基因。

本发明的第3种探针只要是可与由序列表中序列号5表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的即可，并没有特别限定，例如，由与由序列表中序列号5表示的碱基序列互补的碱基序列或其部分碱基序列构成的单链或双链多核苷酸。本发明的第3种探针的碱基数的下限虽然没有特别限定，但本发明的第3种探针的碱基数在18个以上比较理想，26个以上更好，41个以上最理想。另外其上限也没有限定，但本发明的第3种探针的碱基数最好在652个以下。而本说明书中所谓的「可与由序列表中序列号5表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交」指的是在后述的实施例1(4)中记载的条件下与来自健康人的mRNA不杂交，但与由序列表中序列号1表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交。

本发明的质粒只要是含有本发明的上述各个新基因(即本发明的第1种新基因、本发明的第2种新基因、或本发明的第3种新基因)即可，并没有特别限定，例如通过向按照所用的宿主细胞适当选择的众所周知的表达载体中分别插入本发明的上述各个基因得到的各个质粒(即、含有本发明的第1种新基因的本发明第1种质粒、含有本发明的第2种新基因的本发明第2种质粒、或含有本发明的第3种新基因的本发明第3种质粒)。

另外本发明的转化体只要是含有本发明的上述各个质粒(本发明第1种质粒、本发明第2种质粒、或本发明第3种质粒、)即可，也没有特别限定，例如使用本发明的上述各个质粒通过转化所希望的宿主细胞得到的各个转化体(即含有本发明第1种质粒的本发明第1种转化体、含有本发明第2种质粒的本发明第2种转化体、本发明第3种质粒的本发明第3种转化体)。

作为上述宿主细胞例如通常使用的众所周知的微生物，如大肠杆菌或酵母(Saccharomyces cerevisiae)、或众所周知的培养细胞，如动物细胞(如，CHO细胞或COS细胞)或昆虫细胞(例如BmN4细胞)。

而作为众所周知的上述表达载体如对于大肠杆菌使用pUC、pTV、pGEX、pKK或pTrcHis；对于酵母使用pEMBLY或pYES2；对于CHO细胞使用pMAMneo；对于COS细胞使用pcDNA3；对于BmN4细胞使用含有蚕核型多角体病毒(BmNPV)的多角体蛋白启动子的载体(例如，pBK283)。

本发明的第1种抗体或其片段分别与本发明的第1种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应。而本发明的第2种抗体或其片段分别与本发明的第2种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应。本发明的第3种抗体或其片段分别与本发明的第3种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应。

本发明的上述各个抗体中包括单克隆抗体和多克隆抗体。

本发明的单克隆抗体(即与本发明的第1种蛋白质或其功能等价的改变体分别进行特异反应的本发明的第1种单克隆抗体、与本发明的第2种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应的本发明的第2种单克隆抗体、与本发明的第3种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应的本发明的第3种单克隆抗体)可以通使用本发明的新的各个蛋白质或与其功能等价的改变体，或它们的片段作为免疫用抗原和筛选用抗原，以及按照公知的手段获得。

例如，使用上述免疫用抗原免疫小鼠，将从该小鼠摘取的脾脏细胞和小鼠骨髓瘤细胞按照Nature，256，495(1975)记载的细胞融合法，或J.Immunol.Method，100，181-189(1987)记载的电细胞融合法进行细胞融合，通过使用上述的筛选用抗原进行筛选，可以得到产生本发明单克隆抗体的杂交瘤。

作为培养上述杂交瘤的培养基只要是适于杂交瘤培养的培养基就可以，最好使用在Dulbecco改进的Eeagle的最小必需培养基(Dulbecco′s modified Eeagle′minimum essential medium)中含有胎牛血清、L-谷氨酰胺、L-丙酮酸以及抗生素(青霉素G和链霉素)的培养基。

上述杂交瘤在培养基中进行培养时，可以在5％CO₂浓度、37℃条件下大约培养3天。如在小鼠腹腔中进行培养时大约培养14天。

通过使用蛋白质的分离和纯化中一般常用的方法可以从上述得到的培养液或小鼠的腹水中分离和纯化上述单克隆抗体。

一般常用的方法如硫铵盐析、使用离子交换纤维素的离子交换柱层析、使用分子筛的分子筛柱层析、使用蛋白A结合多糖类的亲和柱层析、透析、或冷冻干燥等。

本发明的各多克隆抗体(与本发明的第1种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应的本发明的第1种多克隆抗体、与本发明的第2种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应的本发明的第2种多克隆抗体、与本发明的第3种蛋白质或其功能等价的改变体特异反应的本发明的第3种多克隆抗体)可以使用本发明的新的各个蛋白质或与其功能等价的改变体，或它们的片段作为免疫用抗原和筛选用抗原，以及使用众所周知的各自方法，例如按照以下给出的方法进行制备。

即将含有抗原的生理盐水与等量的弗氏完全佐剂或不完全佐剂、或其等价物，例如Hunter’s TiterMax^TM(Cat.No.YT001-00，日本国东京)乳化混合之后，注射到哺乳动物(特别是兔子或羊)的皮下、腹腔内、或肌肉内等任一处(初次免疫)。以后每隔2～4周进行同样操作，进行数次免疫。在最终免疫1～2周后从哺乳动物的颈动脉或心脏采血，通过使用硫酸铵对血清进行盐析可以制备抗体。

本发明的各个抗体片段是本发明的上述各个抗体(包括单克隆抗体和多克隆抗体)的部分片段，而只要具有与原有抗体同样反应特异性并没有特别限定。作为本发明的抗体片段如Fab、Fab’、F(ab’)₂、或Fv。本发明的抗体片段例如可以按照常规方法通过用蛋白分解酶对本发明的多克隆抗体或单克隆抗体进行消化，然后再通过蛋白质的分离和纯化的常规方法得到。

根据本发明人发现，本发明的蛋白质(特别是由序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质、由序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质、或由序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质)以及其mRNA在健康人中不表达，而在细菌感染症(例如败血病、肺炎、尿路感染症、骨髓炎、或中耳炎等)患者中表达，所以本发明的蛋白质及其mRNA可以用作细菌感染症的诊断标志。即，通过使用本发明的体外检测方法，在被检测对象采集的被检测样品中如果存在本发明的蛋白质和/或其mRNA，那么可以判定该被检测对象是细菌感染症患者，而如果不存在本发明的蛋白质和/或其mRNA，那么可以判定不是细菌感染症。

在本发明方法中可以使用的被检测样品只要含有本发明的蛋白质和/或其mRNA即可，并没有特别限定，生物样品，例如从动物，如哺乳动物、特别是人(尤其是患者)采集的细胞等组织或其提取物、或血液(例如血清或血浆)、尿、或脑脊髓液等体液。只要是通常临床检查等的被检测样品即可，并没有特别限定，都可以使用。

以下关于本发明方法首先对通过分析本发明的蛋白质的mRNA检测细菌感染症的方法进行说明，然后通过分析本发明的蛋白质来说明检测细菌感染症的方法。

本发明的方法内，通过分析本发明的蛋白质的mRNA检测细菌感染症的方法并没有特别限定，例如包括以下步骤的检测方法：使被检测样品与含有与本发明蛋白质的mRNA的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸接触的步骤；以及分析上述多核苷酸与本发明蛋白质的mRNA的结合物的步骤的方法(以下称之为「本发明的第1种检测方法」)、或包括将被检测样品中的mRNA转换为cDNA的逆转录步骤；使用上述逆转录步骤得到的反应液和以本发明蛋白质基因作为模板，可以扩增基因的引物，实施基因扩增反应[特别是聚合酶链式反应(PCR)]的基因扩增步骤；以及对在上述基因扩增步骤扩增的基因进行分析的步骤的方法(以下称为「本发明的第2种检测方法」)。

在本发明的第1检测方法中使被检测样品与包含与本发明蛋白质的mRNA的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸(例如本发明的探针)反应，通过检测生成的本发明蛋白质的mRNA-多核苷酸结合物的存在，或测定其含量分析本发明蛋白质的mRNA。

上述多核苷酸含有与由被选择的基因(DNA)转录的mRNA的一部分互补或实质上互补的序列，与由靶基因转录的mRNA之间形成双链。为了与其靶mRNA形成稳定的复合物，具有充分互补性的任一个多核苷酸都适用。本发明方法中可以使用的多核苷酸只要是实质上在靶mRNA内的哪一区域范围互补都可以。多核苷酸分子可以用作检测本发明蛋白质基因中特异的mRNA表达增减的DNA探针。即通过特异附着在作为目标的本发明蛋白质的mRNA，形成分子杂化体可以检测细胞内本发明蛋白质mRNA表达的程度。

在本发明第1种方法中可以使用的多核苷酸可以适当选择与本发明蛋白质的mRNA的特异碱基序列互补的碱基序列，例如使用众所周知的DNA合成装置、PCR装置或基因克隆等进行制备。虽然可以使用各种长度的多核苷酸，但长度在10个碱基以上比较理想，最好含有17个以上碱基的多核苷酸。

上述多核苷酸可以是没有修饰的多核苷酸或多核苷酸类似物。合适的类似物如乙基或甲基膦酸酯类似物、硫代磷酸酯修饰的多脱氧核苷酸[Nucleic Acids Res.，14，9081-9093，(1986)；J.Am.Chem.Soc.，106，6077-6079，(1984)]等。另外由于近年来在多核苷酸类似物的制造中的进步，例如也可以使用2′-O-甲基核糖核苷酸[Nucleic AcidsRes.，15，6131-6148，(1987)]或复合RNA-DNA类似物嵌合核糖核苷酸[FEBS Lett.，215，327-330，(1987)]等。

被选择的多核苷酸可以是带有电荷的，或不带电荷的任何一种。为了在体外或体内进行这样的实验，可以使用众所周知的标记试剂，例如放射性同位素或荧光物质等按照常规方法对多核苷酸进行标记。作为放射性同位素例如有¹²⁵I、¹³¹I、³H、¹⁴C、³²P、或³⁵S等。其中作为放射性同位素使用随机引物法[Anal.Biochem.，132，6-13，(1983)]用32P进行标记比较适用。而作为可以更容易且危险性小的操作的标记如可以形成衍生物的荧光色素。作为荧光色素可以使用与多核苷酸结合的所有色素，例如荧光素、若丹明、德克萨斯红(Texas Red)、4-氟-7-硝基苯并呋咱、香豆素、荧光胺、琥珀酰荧光素、或丹黄酰氯(ダンシル)等比较适用。

例如通过使用本发明蛋白质的cDNA的RNA印迹解析对本发明蛋白质mRNA量的测定可以象如下所示那样进行。即，从任意体细胞或组织提取、分离mRNA，对分离的mRNA进行琼脂糖凝胶电泳，转移到硝酸纤维素或尼龙膜上，然后通过与本发明蛋白质的cDNA探针反应，对本发明蛋白质mRNA量进行测定。使用的本发明蛋白质cDNA探针是与本发明蛋白质mRNA互补的DNA，希望其长度在17个碱基以上。

本发明第2种检测方法中的逆转录步骤和基因扩增步骤(特别是PCR步骤)的各个反应本身可以通过通常的逆转录反应和基因扩增反应，例如逆转录PCR(RT-PCR)法实施。即使用逆转录酶和寡(dT)引物，进行逆转录反应后，使用耐热性DNA聚合酶(例如，Taq聚合酶)，实施初期变性反应(例如，于97℃下保温2～3分钟)后，反复进行如下扩增循环(例如进行15～45次循环)，实施PCR：(1)DNA的变性过程(于90～94℃温育30秒)、(2)单链DNA和引物的退火过程(于50～55℃温育30秒)、以及(3)通过耐热性DNA聚合酶进行的DNA合成过程(于70～75℃温育1～2分钟)。

本发明第2种检测方法中的分析步骤也是通过DNA的通常分析方法、例如进行琼脂糖凝胶电泳后用适当的DNA结合性色素(例如溴乙锭)对凝胶进行染色的方法或DNA印迹法实施。

另外本发明的方法内通过分析本发明的蛋白质检测细菌感染症的方法并没有特别限定，例如包括以下步骤的检测方法(以下称之为「本发明的第3种检测方法」)：使被检测样品与和本发明蛋白质有免疫学反应性的免疫反应性物质接触的步骤；以及分析上述免疫反应物质与本发明蛋白质的结合物的步骤。

在本发明的第3种检测方法中首先使上述被检测样品与与本发明蛋白质有免疫学反应性的免疫反应性物质接触。在使用来自人的被检测样品时，最好使与由序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质、由序列表中序列号4表示的氨基酸序列构成的蛋白质、或由序列表中序列号6表示的氨基酸序列构成的蛋白质有免疫学反应性的免疫反应性物质与被检测样品接触。

在使被检测样品与和本发明蛋白质有免疫学反应性的免疫反应性物质接触时，假如在被检测物质中不存在本发明蛋白质，就不会发生与上述免疫反应性物质的反应，如果在被检测物质中存在本发明蛋白质，本发明的蛋白质与上述免疫反应性物质结合，本发明蛋白质与免疫反应性物质的结合物根据本发明蛋白质的存在量生成。该结合物由于可以根据众所周知的方法简单地进行检测，所以可以从结合物的存在或量检测上述被检测样品中的本发明蛋白质的存在，可以测定其存在的量。作为被检测样品可以使用组织切片或细胞，通过荧光抗体法或酶抗体法对组织或细胞中的本发明蛋白质进行测定也是有可能的。

作为与本发明蛋白质有免疫反应的免疫反应物质，例如有针对本发明蛋白质的抗血清、针对本发明蛋白质的多克隆抗体、或针对本发明蛋白质的单克隆抗体或这些抗体的片段等。以上这些抗体或片段既可以单独使用，也可以组合同时使用。上述抗体片段中包括如Fab、Fab’、F(ab’)₂、或Fv等片段。

在本发明的第3种检测方法中首先使被检测样品与与本发明蛋白质有免疫学反应性的免疫反应性物质接触，使本发明蛋白质-免疫反应性物质结合物生成。然后通过免疫化学测定法，检测与抗体结合的本发明蛋白质，测定其生成量，可以知道被检测样品中的本发明蛋白质水平。

作为免疫化学的测定方法原则上可以使用所有常用的免疫分析方法，例如EIA法、ELISA法、或RIA法等。这些免疫测定方法一般可大致分为以下一些方法。

(1)竞争法：使含有未知量抗原的被检测样品和用标记试剂标记的一定量的抗原与相对应的一定量抗体竞争反应，测定与抗体结合的标记抗原或没有与抗体结合的标记抗原的活性。

(2)夹心法：向含有未知量抗原的被检测样品中加入过量的搭载在载体上的抗体，使其反应(第1个反应)，然后加入用标记试剂标记的过量的一定量抗体使其反应(第2个反应)。测定载体上保持的带有标记抗体或载体上没有保持的带有标记抗体的活性。第1个反应和第2个反应同时进行，也可以错开时间进行。

当标记试剂是放射性同位素时可以用井型计数器或液体闪烁计数器进行测定。当标记试剂是酶时，可以加入底物后放置，用比色法或荧光法测定酶活性。标记试剂无论是荧光物质还是发光物质可以分别按照众所周知的方法进行测定。

除了上述方法以外，最近已经使用将电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维素等膜上，用抗体检测目的蛋白质的蛋白质印迹法，无论哪一种方法都可以用于本发明蛋白质的检测。

这些测定方法中使用的抗体可以通过众所周知的抗体标记法进行标记，例如预先用放射性同位素、酶、荧光物质、或发光性物质等的适当标记物进行标记。

作为放射性同位素例如可以使用¹²⁵I、¹³¹I、³H、¹⁴C、或³⁵S等。

作为酶是稳定、比活性高的比较好，例如可以使用糖苷酶(例如，β-半乳糖苷酶、β-糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-果糖苷酶、α-半乳糖苷酶、α-糖苷酶、或α-甘露糖苷酶)、淀粉酶(α-淀粉酶、β-淀粉酶、异淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、或高峰淀粉酶)、纤维素酶、或溶菌酶等碳水化合物酶；脲酶、或天冬酰胺酶等酰胺酶；胆碱酯酶(例如乙酰胆碱酯酶)、磷酸酶(例如碱性磷酸酶)、硫酸酯酶、或脂肪酶等酯酶；脱氧核糖核酸酶、或核糖核酸酶等核酸酶；过氧化氢酶、过氧化物酶、或细胞色素氧化酶等铁卟啉酶；酪氨酸酶、或天冬氨酸氧化酶等铜酶；或乙醇脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、或异柠檬酸脱氢酶等脱氢酶等。

作为荧光物质如荧光胺、或异硫氰酸荧光素等，作为发光性物质如氨基苯二酰肼、氨基苯二酰肼衍生物、荧光素、或光泽精等。

来自上述各种标记的信号检测可以通过众所周知的方法实施。

而作为使抗体和标记试剂结合的方法可以使用任何常规的方法，例如氯胺T法[Nature，194，495-496，(1962)]，过碘酸法[Journalof Histochemistry and Cytochemistry，22，1084-1091，(1974)]、或马来酰亚胺法[Journal of Biochemistry，79，233-236，(1976)]等。

在上述测定方法中，例如EIA法可以按如下所示那样进行。首先将被检测样品加到已经固定于载体(例如分析板)上的第1抗体中，使本发明蛋白质与第1抗体结合，生成结合物，向该结合物中加入结合酶标记试剂(例如过氧化物酶)的第2抗体，使上述结合物进一步结合第2抗体，生成「第1抗体-本发明蛋白质-第2抗体」结合物。向得到的「第1抗体-本发明蛋白质-第2抗体」结合物中加入上述标记酶(过氧化物酶)的底物，通过测定酶反应的生成物的吸光度或荧光强度测定附着于「第1抗体-本发明蛋白质-第2抗体」结合物上的标记酶的酶活性。就含有已知量的本发明蛋白质的标准溶液预先实施上述的一系列操作，将本发明蛋白质和吸光度或荧光强度之间的关系作成标准曲线。然后将含有未知量的本发明蛋白质的被检测样品得到的吸光度或荧光强度与标准曲线对照，可以测定被检测样品中的本发明蛋白质的量。

按照以下给出的方法也可以进行EIA法。即首先通过使载体(例如分析板)与被检测样品接触，将被检测样品内的本发明蛋白质固定于载体上，然后加入一次抗体，使本发明蛋白质与一次抗体结合生成结合物，然后向该结合物中加入结合酶标记试剂(例如过氧化物酶)的抗一次抗体抗体(二次抗体)，使二次抗体结合于上述结合物上，生成「本发明蛋白质-一次抗体-二次抗体」结合物。向得到的「本发明蛋白质-一次抗体-二次抗体」结合物中加入上述标记酶(过氧化物酶)的底物，通过测定酶反应的生成物的吸光度或荧光强度测定附着于上述「本发明蛋白质-一次抗体-二次抗体」结合物上的标记酶的酶活性。就含有已知量的本发明蛋白质的标准溶液预先实施上述的一系列操作，将本发明蛋白质和吸光度或荧光强度之间的关系作成标准曲线。然后将含有未知量的本发明蛋白质的被检测样品得到的吸光度或荧光强度与标准曲线对照，可以测定被检测样品中的本发明蛋白质的量。

而RIA法可以象如下那样进行。首先将被检测样品加到已经固定于载体(例如试管)上的第1抗体中，使本发明蛋白质与第1抗体结合，生成结合物，向该结合物中加入用放射性同位素标记试剂标识的(例如，¹²⁵I)的第2抗体，使上述结合物进一步结合第2抗体，生成「第1抗体-本发明蛋白质-第2抗体」结合物。测定得到的「第1抗体-本发明蛋白质-第2抗体」结合物的放射能活性(例如，γ-放射能活性)。就含有已知量的本发明蛋白质的标准溶液预先实施上述的一系列操作，将本发明蛋白质和放射能活性之间的关系作成标准曲线。然后将含有未知量的本发明蛋白质的被检测样品得到的放射能活性与标准曲线对照，可以测定被检测样品中的本发明蛋白质的量。

另外通过以下给出的方法也可以进行RIA法。即首先通过使载体(例如试管)与被检测样品接触，将被检测样品内的本发明蛋白质固定于载体上，然后加入一次抗体，使本发明蛋白质与一次抗体结合生成结合物，然后向该结合物中加入用放射性同位素标记试剂(例如，¹²⁵I)标识的抗一次抗体抗体(二次抗体)，使二次抗体结合于上述结合物上，生成「本发明蛋白质-一次抗体-二次抗体」结合物。然后测定得到的「本发明蛋白质-一次抗体-二次抗体」结合物的放射能活性(例如，γ-放射能活性)。就含有已知量的本发明蛋白质的标准溶液预先实施上述的一系列操作，将本发明蛋白质和放射能活性之间的关系作成标准曲线。然后将含有未知量的本发明蛋白质的被检测样品得到的放射能活性与标准曲线对照，可以测定被检测样品中的本发明蛋白质的量。实施例

以下通过实施例对本发明进行具体说明，但这些实施例并没有限定本发明的范围。实施例1：活性化人巨噬细胞特异的新基因的分离和鉴定(1)来自脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞的mRNA的分离

以1L健康人血液作为起始材料，使用市售的外周血单核细胞制备用试剂[Lymphoprep；Nycomed公司；ノルゥエ-，オスロ]制备外周血单核细胞。将得到的外周血单核细胞悬浮于含有10μg/mL-LPS(Difco Laboratories公司；美国密歇根州底特律)和10％胎牛血清(FCS)的RPMI 1640培养基中，使细胞浓度达到10⁶个/mL。将细胞悬浮液加到塑料培养皿中，每个皿加20mL，于37℃和5％CO₂条件下进行培养。

培养3个小时后，弃掉上清，用20mL磷酸缓冲液(phosphate-buffered saline；PBS)将附着细胞(即LPS活化的巨噬细胞)洗3次。加入细胞溶解用溶液[4mol/L异硫氰酸胍，30mmol/L醋酸钠(pH4.8)]3mL，用带有针头的注射器反复进行3次吸-排操作，铺到预先加有5.7mol/L氯化铯缓冲液(pH4.8)1.2mL的超离心5PA管(日立工机；日本国胜田市)。经18小时离心(20℃，38000rpm)后，除去离心管中的上清，用200μL灭菌水将离心管中的沉淀溶解，回收RNA。从1L血液中可以得到约1mg总RNA(即来自LPS刺激巨噬细胞的总RNA)。

然后使用市售的mRNA制备试剂盒[Poly(A)Quik mRNA Isolationkit；Stratagene公司；美国加利福尼亚州La Jolla]，从500μg总RNA中制备出15μg mRNA(即来自LPS刺激巨噬细胞的总RNA)。(2)噬菌体cDNA文库的制作

从得到的来自LPS刺激巨噬细胞的15μg mRNA取出5μg制作噬菌体cDNA文库。在cDNA文库的制作中使用市售的试剂盒(ZAP ExpresscDNA Synthesis Kit和ZAP Express cDNA Gigapack III Gold CloningKit；Stratagene公司)。(3)cDNA的部分碱基序列的解析

为了解析来自LPS刺激的巨噬细胞的cDNA的碱基序列，按照常规方法随机挑选大约1000个噬斑，作为噬菌粒回收cDNA。就回收的大约1000个来自LPS刺激的巨噬细胞的cDNA使用市售的碱基序列确定用试剂盒(Dye Terminator Cycle Sequencing kit；Perkin Elmer Japan公司；浦安市)分别解析cDNA的5′末端一侧以及3′末端一侧的400～500个碱基。就得到的各个序列通过NCBI(National Center for Biotechnology Information；http：//inhouse.ncbi.nlm.nih.gov)的BLAST(basic local alignmenttool)进行DNA同源性检索时，发现了63个未知的新基因。(4)通过RNA印迹法进行解析

按照上述实施例(1)记载的来自LPS刺激的巨噬细胞的总RNA制备过程制备来自LPS刺激的巨噬细胞的总RNA。另外除了用含有10％FCS的RPMI 1640培养基代替含有10μg/mL-LPS和10％FCS的RPMI1640培养基以外，按照上述实施例(1)记载的来自LPS刺激的巨噬细胞的总RNA制备过程制备来自未受LPS刺激的巨噬细胞的总RNA。按照常规方法对上述来自LPS(10μg/mL)刺激的巨噬细胞的总RNA和来自未受LPS刺激的巨噬细胞的总RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳后，将RNA转移到尼龙膜上。

将转移了RNA的上述膜于80℃和减压下热处理2小时后，浸入到市售的预杂交用溶液(Hybrisoll；Oncor公司；美国马里兰州Gaithersurg)，于42℃下进行3小时预杂交。然后使用随机引物标记试剂盒(Boehringer Mannheim公司；德国)，分别加入用同位素32P标记的上述实施例1(3)中得到的各个新基因，于42℃杂交过夜。第二天用含有0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)的2×SSC(标准柠檬酸钠)]于室温下洗2次，每次20分钟，再于65℃下用含有0.1％SDS的0.2×SSC洗2次，每次20分钟。将洗净的膜包起来于-80℃下进行一个晚上的自动放射自显影。

显影结果表明在上述实施例1(3)得到的63个新基因内由于LPS刺激其表达被诱导的基因有3个。3个新基因(NLG-1-1、NLG-1-2和NLG-2)的RNA印迹法的结果如图1所示。在图1中记号「+」指的是「LPS刺激」，而记号「-」指的是「LPS未刺激」，「Origin」指的是「泳动起始点」。3个新基因(NLG-1-1、NLG-1-2和NLG-2)的mRNA的长度大约分别是2.3kb、2.3kb、和0.7kb。

另外对组织特异性研究的结果就象图2所示那样，基因NLG-1-1和基因NLG-1-2在研究的所有组织[即脾脏(带1)、胸腺(带2)、前列腺(带3)、精巢(带4)、卵巢(带5)、小肠(带6)、大肠(带7)和外周血淋巴细胞(带8)]中虽然弱但都表达，与此相反基因NLG-2只在精巢(带4)和大肠(带7)中明显表达，而在其它组织看不到表达。(5)全碱基序列的确定

3个新基因(NLG-1-1、NLG-1-2和NLG-2)全碱基序列根据常规方法确定。

基因NLG-1-1和基因NLG-1-2分别由2180bp和1970bp组成，其具体的碱基序列分别为序列表中序列号1和序列号3表示的碱基序列。基因NLG-1-1和基因NLG-1-2同源性的检索结果表明基因NLG-1-1的第193位～第2139位的碱基序列与基因NLG-1-2的第9位～第1955位的碱基序列完全相同。这可以想象为通过有选择地剪接(alternative splicing)，2种mRNA是从一个染色体基因转录的。基因NLG-1-1编码由含有序列表中序列号2表示的氨基酸序列的481个氨基酸残基组成的蛋白质。而基因NLG-1-2编码由含有序列表中序列号4表示的氨基酸序列的390个氨基酸残基组成的蛋白质。

而基因NLG-2由652bp构成，其具体的碱基序列是序列表中序列号5表示的碱基序列。另外基因NLG-2编码由含有序列表中序列号6表示的氨基酸序列的83个氨基酸残基组成的蛋白质。实施例2：基因NLG-1-1和基因NLG-2在动物细胞中的表达

在本实施例中作为动物细胞使用COS-1(大日本制药；日本国大阪府吹田市)，作为载体使用pQB125-fN3rsGFP载体(Quantumbiotechnologies；加拿大魁北克州蒙特利尔市)，按照以下给出的过程使基因NLG-1-1和基因NLG-2表达。如果使用上述载体，由于可以作为与绿色荧光蛋白(GFP)融合的融合蛋白质表达目的基因，所以通过对绿色荧光进行跟踪可以观察目的基因的分布。

基因NLG-1-1和基因NLG-2的各个cDNA通过逆转录PCR(RT-PCR)按照以下给出的过程进行制备。即从LPS刺激3小时的人外周血单核细胞(PBMC)制备mRNA，将使用市售的cDNA合成试剂盒(SMARTPCR cDNA syhthesis kit；Clontech公司；美国加利福尼亚州帕泊阿尔托)从该mRNA合成的cDNA作为模板使用。

作为引物使用由序列：5’-C A C G G A T C C A T T C T T C G C T G A A G T C A T C A T G A GC-3’(序列号7)构成的NLG-2正向引物、由序列：5’-G T G G A A T T C T T T G G T C A C C C T T T G G A C A T T T T GC-3’(序列号8)NLG-2反向引物、由序列：5’-C A C G G A T C C T T C T T T A C A A C G A A A T G A T G C T C AAG-3’(序列号9)构成的NLG-1-1正向引物以及、由序列：5’-G T G G A A T T C G G A G A G A T T T G T G A T A G A A T T A T TA C A T G C-3’(序列号10)构成的NLG-1-1反向引物。

PCR使用市售的PCR用试剂(Advantage cDNA polymerase Mix；Clontech公司)，每一循环由变性步骤(94℃，30秒)、退火过程和延伸过程(68℃，2分钟)构成，反复进行30个循环。

得到的PCR产物经限制酶BamHI(宝酒造；日本国东京都中央区)和限制酶EcoRI(宝酒造)消化后，使用市售的试剂盒(DNA ligationkit Ver.2；宝酒造)与pQBI 25-fN3rsGFP载体连接进行克隆，用于以下实验。

在基因导入的前一天，将COS-1细胞加到6孔板中(1×10⁶细胞/孔)。这时将预先经高压灭菌锅灭菌的盖玻片放置在上述6孔板的各个孔中，于上述盖玻片的上面进行细胞培养。第二天使用市售的转移用试剂(LipofectAMINE reagent；GibcoBRL；美国马里兰Rockville)将先前得到的载体导入COS-1细胞。导入3日后用含有4％(v/v)甲醛的PBS将盖玻片上的细胞固定30分钟，用含有20％(v/v)屈立通X-100的PBS处理30分钟，再用含有20％(v/v)正常山羊血清(Vector Laboratories；美国加利福尼亚州Burlingame)的PBS处理30分钟。

在线粒体的染色中使用抗细胞色素c抗体(Santa CruzBiotechnology；美国加利福尼亚州Santa Cruz)和德克萨斯红(TexasRed)标记抗兔IgG抗体(Vector Laboratories)，在内质网的染色中使用抗(肌)钙网蛋白抗体(Upstate Biotechnology；美国纽约州Lake Placid)和德克萨斯红(Texas Red)标记抗兔IgG抗体(VectorLaboratories)，在高尔基体的染色中使用抗高尔基体58K蛋白质抗体(Sigma；美国密苏里州圣路易斯)和德克萨斯红(Texas Red)标记抗鼠IgG抗体(Kirkegaard & Perry Laboratories；美国马里兰州Gaithersburg)，分别进行免疫染色。

在核的染色中使用碘化丙锭(propidiumiodide；和光纯药工业；日本国大阪府大阪市)，在细胞质的染色中使用hydroethidine(Polysciences；美国宾夕法尼亚州Warrington)。

将盖玻片安装到载玻片上后，用共聚焦激光扫描显微镜FV500(Olinmpus；日本国东京都千代田区)进行观察。图3给出了使基因NLG-1-1表达的COS-1细胞的状态，图4给出了使基因NLG-2表达的COS-1细胞的状态。在图3和图4中A是表示基因NLG-1-1或基因NLG-2编码的蛋白质和GFP的融合蛋白质的表达状态的绿色荧光图像，而B是对线粒体进行染色的红色荧光图像，C是将上述A荧光图像和上述B的荧光图像重合在一起的图像，D是微分干涉图像。

就象图3A表示的那样，在核的周围可观察到基因NLG-1-1的表达。而图3A中的绿色荧光图像和图3B的红色荧光图像(对线粒体就象染色的荧光图像)非常一致，荧光图像一致时在图3C中观察到黄色。另外对内质网进行染色的荧光图像、对高尔基体进行染色的荧光图像、核的染色图像，或细胞质的染色图像中的无论哪一个图像都与图3A中的绿色荧光图像不一致。因此可以判明基因NLG-1-1编码的蛋白质分布于线粒体。

另外就象图4所表明的那样，可以判明基因NLG-2编码的蛋白质也和基因NLG-1-1编码的蛋白质一样分布于线粒体。实施例3：基因NLG-1-1的染色体座位的确定

通过FISH(荧光in situ杂交)解析[Chromosoma.，102，325-332(1993)]确定基因NLG-1-1的染色体座位时发现它存在于13号染色体的长臂22(13q22)。结果如图5所示。在图5中，A是DAPI(4′，6-二脒基-2-苯基吲哚)染色的结果，B是FISH信号的结果。图5A中的箭头表示基因NLG-1-1的染色体部位，图5B中的数字「13」表示第13号染色体。实施例4：在败血病患者中基因NLG-1-1、NLG-1-2和NLG-2表达的确认

将从4名健康人和4名败血病患者分别采集20mL血作为起始材料，按照上述实施例1(1)记载的顺序制备外周血单核细胞，再从上述外周血单核细胞分别制备约20μg的总RNA。

使用各个RNA 10μg按照上述实施例1(4)记载的顺序实施RNA印迹。结果如图6所示。在图6中，(A)表示使用基因NLG-1-1作为探针时的结果，以下同样，(B)表示使用基因NLG-1-2作为探针，而(C)表示使用NLG-2作为探针时的结果。而在图6中，带1～4表示来自健康人的RNA的结果，带5～8表示来自败血病患者的RNA的结果。

就象图6所表示的那样，本发明的3种新基因(NLG-1-1、NLG-1-2和NLG-2)的表达在4名健康人中都看不到，但在4名败血病患者中却表现非常明显。通过对本发明的这些基因的表达进行分析，从这些结果可以确认这些基因可以用于细菌感染症的诊断、或治疗后病况的判定。

产业上利用的可能性

已知由LPS刺激引起的生命现象与发炎时的现象同样。事实上在发炎时起主要作用的巨噬细胞中LPS刺激特异诱导表达的基因群中包括炎性细胞因子(TNF，IL-1、IL-6、IL-18)、趋化因子(IL-8、MCP)、作为炎性疾病的慢性风湿性关节的发炎部位引起产生异常的胶原等分泌性蛋白质、作为细胞内蛋白质引起炎症的产生NO(一氧化氮)的NO合成酶、产生前列腺素的环加氧酶(COXII)，而且包括与炎性蛋白质基因的表达有关的基因转录因子NF-kB等几乎所有的炎性疾病起因蛋白质基因。

有关针对这些蛋白质的抑制剂作为抗炎药物的临床开发正在深入进行，很多处于临床实验中。例如抗TNF抗体或NO合成酶抑制剂已经作为炎性疾病的治疗药使用了。另外胶原酶抑制剂作为癌转移抑制剂，COXII抑制剂作为治疗癌症药都分别处于临床开发中。从这些结果中可以认为通过LPS诱导表达的本发明的新基因及其蛋白质也都极有可能与炎性疾病、变态反应或癌的发生和/或进展有关系。

本发明的第1和第2种新蛋白质有可能与LPS的细胞内信息传递系统有关。而本发明的第3种新蛋白质有可能与细胞内电子传递和/或自由基产生有关。因此这些蛋白质与以往的消炎药开发的目标不同，上述蛋白质的抑制剂有可能成为新型消炎药。利用逆转录PCR(RT-PCR)法、RNA印迹法、点渍法、或DNA微点阵(microarray)，通过对来自人的临床样品中的上述蛋白质基因的表达的研究，也许可以用于炎症、变态反应、或癌的诊断中。或者使用上述蛋白质的抗体也许可以进行炎症、变态反应、或癌的诊断。另外上述蛋白质基因的反义DNA也有可能用于炎症、变态反应、或癌的治疗(包括基因治疗)。

通过本发明的探针或本发明的抗体可以进行细菌感染症(例如败血病、肺炎、尿路感染症、骨髓炎、或中耳炎)的诊断。本发明蛋白质在制备本发明抗体时是有用的，本发明的新基因、本发明的质粒、以及本发明的转化体在制备本发明的蛋白质中是有用的。

以上按照特定模式对本发明进行了说明，但本领域技术人员都清楚的变形和改良都包括在本发明的范围内。

                          序列表<110>吴羽化学工业株式会社<120>新蛋白质以及编码该蛋白的基因<130>KRH-647<150>JP 2000-042933<151>2000-02-21<160>10<210>1<211>2180<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(37)..(1482)<400>1ggcacgagct gaactgaacc tcttctttac aacgaa atg atg ctc aag tct atc   54

                                    Met Met Leu Lys Ser Ile

                                      1               5aca gaa agc ttt gcc aca gca atc cat ggc ttg aaa gtg gga cac ctg   102Thr Glu Ser Phe Ala Thr Ala Ile His Gly Leu Lys Val Gly His Leu

         10                  15                  20aca gat cgt gtt att cag agg agc aag agg atg att cta gac act ctg   150Thr Asp Arg Val Ile Gln Arg Ser Lys Arg Met Ile Leu Asp Thr Leu

     25                  30                  35ggt gct ggg ttc ctg gga acc act acg gaa gtg ttt cac ata gcc agc   198Gly Ala Gly Phe Leu Gly Thr Thr Thr Glu Val Phe His Ile Ala Ser

 40                  45                  50caa tat agc aag atc tac agt tcc aac ata tcc agc act gta tgg ggt   246Gln Tyr Ser Lys Ile Tyr Ser Ser Asn Ile Ser Ser Thr Val Trp Gly55                  60                  65                  70cag cca gac atc agg ctc ccg ccc aca tat gct gct ttt gtg aac ggt   294Gln Pro Asp Ile Arg Leu Pro Pro Thr Tyr Ala Ala Phe Val Asn Gly

             75                  80                  85gtg gct att cac tcc atg gat ttt gat gac acg tgg cac cct gcc acc   342Val Ala Ile His Ser Met Asp Phe Asp Asp Thr Trp His Pro Ala Thr

         90                      95             100cac cct tct ggg gct gtc ctt cct gtc ctc aca gct tta gca gaa gcc   390His Pro Ser Gly Ala Val Leu Pro Val Leu Thr Ala Leu Ala Glu Ala

    105                 110                 115ctg cca agg agt cca aag ttt tct ggc ctt gac ctg ctg ctg gct ttc   438Leu Pro Arg Ser Pro Lys Phe Ser Gly Leu Asp Leu Leu Leu Ala Phe

120                 125                 130aat gtt ggt att gaa gtg caa ggc cga tta ctg cat ttc gcc aag gag   486Ash Val Gly Ile Glu Val Gln Gly Arg Leu Leu His Phe Ala Lys Glu135                 140                 145                 150gcc aat gac atg cca aag aga ttc cat ccc cct tcc gtg gta gga acg   534Ala Asn Asp Met Pro Lys Arg Phe His Pro Pro Ser Val Val Gly Thr

            155                 160                 165ttg ggt agt gct gct gct gca tcc aag ttt tta gga ctt agc tcg aca   582Leu Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ser Lys Phe Leu Gly Leu Ser Ser Thr

        170                 175                 180aag tgc cga gaa gct ctg gcc att gct gtt tcc cat gct ggg gca ccc   630Lys Cys Arg Glu Ala Leu Ala Ile Ala Val Ser His Ala Gly Ala Pro

    185                 190                 195atg gcc aat gct gcc acc cag acc aag ccc ctc cac att ggc aat gct   678Met Ala Asn Ala Ala Thr Gln Thr Lys Pro Leu His Ile Gly Asn Ala

200                 205                 210gcc aag cat ggg ata gaa gct gca ttt ttg gca atg ttg ggt ctc caa   726Ala Lys His Gly Ile Glu Ala Ala Phe Leu Ala Met Leu Gly Leu Gln215                 220                 225                 230gga aac aag cag gtc ttg gac ttg gag gca gga ttt ggg gcc ttt tat   774Gly Asn Lys Gln Val Leu Asp Leu Glu Ala Gly Phe Gly Ala Phe Tyr

            235                 240                 245gcc aac tat tcc cca aaa gtc ctt cca agc ata gct tcc tac agt tgg   822Ala Asn Tyr Ser Pro Lys Val Leu Pro Ser Ile Ala Ser Tyr Ser Trp

        250                 255                 260ctg ctg gac cag cag gac gtg gcc ttt aag cgt ttt cct gca cat tta   870Leu Leu Asp Gln Gln Asp Val Ala Phe Lys Arg Phe Pro Ala His Leu

    265                 270                 275tct acc cac tgg gtg gca gac gca gct gca tct gtg aga aag cac ctt   918Ser Thr His Trp Val Ala Asp Ala Ala Ala Ser Val Arg Lys His Leu

280                 285                 290gta gca gag aga gcc ctg ctt cca act gac tac att aag aga att gtg   966Val Ala Glu Arg Ala Leu Leu Pro Thr Asp Tyr Ile Lys Arg Ile Val295                 300                 305                 310ctc agg ata cca aat gtc cag tat gta aac agg ccc ttt cca gtt tcg   1014Leu Arg Ile Pro Asn Val Gln Tyr Val Asn Arg Pro Phe Pro Val Ser

            315                 320                 325gag cat gaa gcc cgt cat tca ttc cag tat gtg gcc tgt gcc atg ctg   1062Glu His Glu Ala Arg His Ser Phe Gln Tyr Val Ala Cys Ala Met Leu

        330                 335                 340ctt gat ggt ggc atc act gtc ccc tca ttc cat gaa tgc cag atc aac   1110Leu Asp Gly Gly Ile Thr Val Pro Ser Phe His Glu Cys Gln Ile Asn

    345                 350                 355agg cca cag gtg aga gag ctg ctc agt aag gtg gag ctg gag tac cct   1158Arg Pro Gln Val Arg Glu Leu Leu Ser Lys Val Glu Leu Glu Tyr Pro

360                 365                 370ccg gac aac ttg cca agc ttc aac ata ctg tac tgt gaa ata agt gtc   1206Pro Asp Asn Leu Pro Ser Phe Asn Ile Leu Tyr Cys Glu Ile Ser Val375                 380                 385                 390acc ctc aag gat gga gcc acc ttc aca gat cgc tct gat acc ttc tat   1254Thr Leu Lys Asp Gly Ala Thr Phe Thr Asp Arg Ser Asp Thr Phe Tyr

            395                 400                 405ggg cac tgg aga aaa cca ctg agc cag gag gac cta gag gaa aag ttc   1302Gly His Trp Arg Lys Pro Leu Ser Gln Glu Asp Leu Glu Glu Lys Phe

        410                 415                 420aga gcc aat gcc tcc aag atg ctg tcc tgg gac aca gtg gaa agc ctt   1350Arg Ala Asn Ala Ser Lys Met Leu Ser Trp Asp Thr Val Glu Ser Leu

    425                 430                 435ata aag ata gtc aaa aat cta gaa gac cta gaa gac tgt tct gtg tta   1398Ile Lys Ile Val Lys Asn Leu Glu Asp Leu Glu Asp Cys Ser Val Leu

440                 445                 450act aca ctt ctc aaa gga ccc tct cca cca gag gta gct tca aac tct   1446Thr Thr Leu Leu Lys Gly Pro Ser Pro Pro Glu Val Ala Ser Ash Ser455                 460                465                  470cca gca tgt aat aat tct atc aca aat ctc tcc tgaggcttac caacatctaa 1499Pro Ala Cys Asn Asn Ser Ile Thr Asn Leu Ser

            475                 480atgactttgc atttggggag attcaatgat ttggtttgta aagcaagggt ctgctgcttg 1559gttttcccag gaaaaatgaa caaagatgga gagagtccag aaacagaact acatatatct 1619ggaaggagcc ttctcctgaa aattttgcag gacagttcca cttacctaaa tcaagatgaa 1679acacacacac aaaaatgagt ttgtaagcat tcacaagggt gaaattcaac tcacctgtga 1739tttacttata aaattaatct cttcatagga attatgtgtg gacttcatga gcctcaaggt 1799tttagaggga tgtgaacctg catgtatatt ttctgacagt ggagagggct ctggtgcatt 1859gtgtcaccaa cagatctcct agaccatggc ttattaccaa gccctccaca gtgcaagggg 1919tgctactggg gaatgggtgg gtttaaatcc tgcctctgcc attcactaga tgtagccttg 1979agcatgttac cattagccct ctgcctcagt ttccctattt gtcaagccga agtaaaaagc 2039agtctggaaa aatcgcattt tggctctaga acccatggtc ttaagcactg caatatatca 2099cctttcagta taaaaatatt tgaatcagag ttgcaataaa gaatgaaaag gaaaaaagag 2159aagtaaaaaa aaaaaaaaaa a                                           2180<210>2<211>481<212>PRT<213>人类<400>2Met Met Leu Lys Ser Ile Thr Glu Ser Phe Ala Thr Ala Ile His Gly1               5                  10                 15Leu Lys Val Gly His Leu Thr Asp Arg Val Ile Gln Arg Ser Lys Arg

         20                  25                  30Met Ile Leu Asp Thr Leu Gly Ala Gly Phe Leu Gly Thr Thr Thr Glu

     35                  40                  45Val Phe His Ile Ala Ser Gln Tyr Ser Lys Ile Tyr Ser Ser Asn Ile

 50                  55                  60Ser Ser Thr Val Trp Gly Gln Pro Asp Ile Arg Leu Pro Pro Thr Tyr65                 70                   75                  80Ala Ala Phe Val Asn Gly Val Ala Ile His Ser Met Asp Phe Asp Asp

             85                  90                  95Thr Trp His Pro Ala Thr His Pro Ser Gly Ala Val Leu Pro Val Leu

        100                 105                 110Thr Ala Leu Ala Glu Ala Leu Pro Arg Ser Pro Lys Phe Ser Gly Leu

    115                 120                 125Asp Leu Leu Leu Ala Phe Asn Val Gly Ile Glu Val Gln Gly Arg Leu

130                 135                 140Leu His Phe Ala Lys Glu Ala Asn Asp Met Pro Lys Arg Phe His Pro145                 150                 155                 160Pro Ser Val Val Gly Thr Leu Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ser Lys Phe

            165                 170                 175Leu Gly Leu Ser Ser Thr Lys Cys Arg Glu Ala Leu Ala Ile Ala Val

        180                 185                 190Ser His Ala Gly Ala Pro Met Ala Asn Ala Ala Thr Gln Thr Lys Pro

    195                 200                 205Leu His Ile Gly Asn Ala Ala Lys His Gly Ile Glu Ala Ala Phe Leu

210                  215                220Ala Met Leu Gly Leu Gln Gly Asn Lys Gln Val Leu Asp Leu Glu Ala225                 230                 235                 240Gly Phe Gly Ala Phe Tyr Ala Asn Tyr Ser Pro Lys Val Leu Pro Ser

            245                 250                 255Ile Ala Ser Tyr Ser Trp Leu Leu Asp Gln Gln Asp Val Ala Phe Lys

        260                 265                 270Arg Phe Pro Ala His Leu Ser Thr His Trp Val Ala Asp Ala Ala Ala

    275                 280                 285Ser Val Arg Lys His Leu Val Ala Glu Arg Ala Leu Leu Pro Thr Asp

290                 295                 300Tyr Ile Lys Arg Ile Val Leu Arg Ile Pro Asn Val Gln Tyr Val Asn305                 310                 315                 320Arg Pro Phe Pro Val Ser Glu His Glu Ala Arg His Ser Phe Gln Tyr

            325                 330                 335Val Ala Cys Ala Met Leu Leu Asp Gly Gly Ile Thr Val Pro Ser Phe

        340                 345                 350His Glu Cys Gln Ile Asn Arg Pro Gln Val Arg Glu Leu Leu Ser Lys

    355                 360                 365Val Glu Leu Glu Tyr Pro Pro Asp Asn Leu Pro Ser Phe Asn Ile Leu

370                 375                 380Tyr Cys Glu Ile Ser Val Thr Leu Lys Asp Gly Ala Thr Phe Thr Asp385                 390                 395                 400Arg Ser Asp Thr Phe Tyr Gly His Trp Arg Lys Pro Leu Ser Gln Glu

            405                 410                 415Asp Leu Glu Glu Lys Phe Arg Ala Asn Ala Ser Lys Met Leu Ser Trp

        420                 425                 430Asp Thr Val Glu Ser Leu Ile Lys Ile Val Lys Asn Leu Glu Asp Leu

    435                 440                 445Glu Asp Cys Ser Val Leu Thr Thr Leu Leu Lys Gly Pro Ser Pro Pro

450                 455                 460Glu Val Ala Ser Asn Ser Pro Ala Cys Asn Asn Ser Ile Thr Asn Leu465           470              475               480Ser<210>3<211>1970<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(126)..(1298)<400>3ggcacgaggc cagccaatat agcaagatct acagttccaa catatccagc actgtttggg 60gtcagccaga catcaggctc ccgcccacat atgctgcttt tgtgaacggt gtggctattc 120actcc atg gat ttt gat gac acg tgg cac cct gcc acc cac cct tct ggg 170

  Met Asp Phe Asp Asp Thr Trp His Pro Ala Thr His Pro Ser Gly

    1               5                  10                  15gct gtc ctt cct gtc ctc aca gct tta gca gaa gcc ctg cca agg agt   218Ala Val Leu Pro Val Leu Thr Ala Leu Ala Glu Ala Leu Pro Arg Ser

             20                  25                  30cca aag ttt tct ggc ctt gac ctg ctg ctg gct ttc aat gtt ggt att   266Pro Lys Phe Ser Gly Leu Asp Leu Leu Leu Ala Phe Asn Val Gly Ile

         35                  40                  45gaa gtg caa ggc cga tta ctg cat ttc gcc aag gag gcc aat gac atg   314Glu Val Gln Gly Arg Leu Leu His Phe Ala Lys Glu Ala Asn Asp Met

    50                   55                  60cca aag aga ttc cat ccc cct tcc gtg gta gga acg ttg ggt agt gct   362Pro Lys Arg Phe His Pro Pro Ser Val Val Gly Thr Leu Gly Ser Ala

 65              70                      75gct gct gca tcc aag ttt tta gga ctt agc tcg aca aag tgc cga gaa   410Ala Ala Ala Ser Lys Phe Leu Gly Leu Ser Ser Thr Lys Cys Arg Glu80                  85                  90                  95gct ctg gcc att gct gtt tcc cat gct ggg gca ccc atg gcc aat gct   458Ala Leu Ala Ile Ala Val Ser His Ala Gly Ala Pro Met Ala Asn Ala

            100                 105                 110gcc acc cag acc aag ccc ctc cac att ggc aat gct gcc aag cat ggg   506Ala Thr Gln Thr Lys Pro Leu His Ile Gly Asn Ala Ala Lys His Gly

        115                 120                 125ata gaa gct gca ttt ttg gca atg ttg ggt ctc caa gga aac aag cag   554Ile Glu Ala Ala Phe Leu Ala Met Leu Gly Leu Gln Gly Asn Lys Gln

    130                 135                 140gtc ttg gac ttg gag gca gga ttt ggg gcc ttt tat gcc aac tat tcc   602Val Leu Asp Leu Glu Ala Gly Phe Gly Ala Phe Tyr Ala Asn Tyr Ser

145                150                  155cca aaa gtc ctt cca agc ata gct tcc tac agt tgg ctg ctg gac cag   650Pro Lys Val Leu Pro Ser Ile Ala Ser Tyr Ser Trp Leu Leu Asp Gln160                 165                 170                 175cag gac gtg gcc ttt aag cgt ttt cct gca cat tta tct acc cac tgg   698Gln Asp Val Ala Phe Lys Arg Phe Pro Ala His Leu Ser Thr His Trp

            180                 185                 190gtg gca gac gca gct gca tct gtg aga aag cac ctt gta gca gag aga   746Val Ala Asp Ala Ala Ala Ser Val Arg Lys His Leu Val Ala Glu Arg

        195                 200                 205gcc ctg ctt cca act gac tac att aag aga att gtg ctc agg ata cca   794Ala Leu Leu Pro Thr Asp Tyr Ile Lys Arg Ile Val Leu Arg Ile Pro

    210                 215                 220aat gtc cag tat gta aac agg ccc ttt cca gtt tcg gag cat gaa gcc   842Asn Val Gln Tyr Val Asn Arg Pro Phe Pro Val Ser Glu His Glu Ala

225                 230                 235cgt cat tca ttc cag tat gtg gcc tgt gcc atg ctg ctt gat ggt ggc   890Arg His Ser Phe Gln Tyr Val Ala Cys Ala Met Leu Leu Asp Gly Gly240                 245                 250                 255atc act gtc ccc tca ttc cat gaa tgc cag atc aac agg cca cag gtg   938Ile Thr Val Pro Ser Phe His Glu Cys Gln Ile Asn Arg Pro Gln Val

            260                 265                 270aga gag ctg ctc agt aag gtg gag ctg gag tac cct ccg gac aac ttg   986Arg Glu Leu Leu Ser Lys Val Glu Leu Glu Tyr Pro Pro Asp Asn Leu

        275                 280                 285cca agc ttc aac ata ctg tac tgt gaa ata agt gtc acc ctc aag gat   1034Pro Ser Phe Asn Ile Leu Tyr Cys Glu Ile Ser Val Thr Leu Lys Asp

    290                 295                 300gga gcc acc ttc aca gat cgc tct gat acc ttc tat ggg cac tgg aga   1082Gly Ala Thr Phe Thr Asp Arg Ser Asp Thr Phe Tyr Gly His Trp Arg

305                 310                 315aaa cca ctg agc cag gag gac cta gag gaa aag ttc aga gcc aat gcc   1130Lys Pro Leu Ser Gln Glu Asp Leu Glu Glu Lys Phe Arg Ala Asn Ala320                 325                 330                 335tcc aag atg ctg tcc tgg gac aca gtg gaa agc ctt ata aag ata gtc   1178Ser Lys Met Leu Ser Trp Asp Thr Val Glu Ser Leu Ile Lys Ile Val

            340                 345                 350aaa aat cta gaa gac cta gaa gac tgt tct gtg tta act aca ctt ctc   1226Lys Asn Leu Glu Asp Leu Glu Asp Cys Ser Val Leu Thr Thr Leu Leu

        355                 360                 365aaa gga ccc tct cca cca gag gta gct tca aac tct cca gca tgt aat    1274Lys Gly Pro Ser Pro Pro Glu Val Ala Ser Asn Ser Pro Ala Cys Asn

    370                 375                 380aat tct atc aca aat ctc tcc tgaggcttac caacatctaa atgactttgc      1325Asn Ser Ile Thr Asn Leu Ser

385                 390atttggggag attcaatgat ttggtttgta aagcaagggt ctgctgcttg gttttcccag 1385gaaaaatgaa caaagatgga gagagtccag aaacagaact acatatatct ggaaggagcc 1445ttctcctgaa aattttgcag gacagttcca cttacctaaa tcaagatgaa acacacacac 1505aaaaatgagt ttgtaagcat tcacaagggt gaaattcaac tcacctgtga tttacttata 1565aaattaatct cttcatagga attatgtgtg gacttcatga gcctcaaggt tttagaggga 1625tgtgaacctg catgtatatt ttctgacagt ggagagggct ctggtgcatt gtgtcaccaa 1685cagatctcct agaccatggc ttattaccaa gccctccaca gtgcaagggg tgctactggg 1745gaatgggtgg gtttaaatcc tgcctctgcc attcactaga tgtagccttg agcatgttac 1805cattagccct ctgcctcagt ttccctattt gtcaagccga agtaaaaagc agtctggaaa 1865aatcgcattt tggctctaga acccatggtc ttaagcactg caatatatca cctttcagta 1925taaaaatatt tgaatcagag ttgcaataaa aaaaaaaaaa aaaaa                 1970<210>4<211>390<212>PRT<213>人类<400>4Met Asp Phe Asp Asp Thr Trp His Pro Ala Thr His Pro Ser Gly Ala1               5                  10                  15Val Leu Pro Val Leu Thr Ala Leu Ala Glu Ala Leu Pro Arg Ser Pro

         20                  25                  30Lys Phe Ser Gly Leu Asp Leu Leu Leu Ala Phe Asn Val Gly Ile Glu

     35                  40                  45Val Gln Gly Arg Leu Leu His Phe Ala Lys Glu Ala Asn Asp Met Pro

 50                  55                  60Lys Arg Phe His Pro Pro Ser Val Val Gly Thr Leu Gly Ser Ala Ala65                  70                  75                  80Ala Ala Ser Lys Phe Leu Gly Leu Ser Ser Thr Lys Cys Arg Glu Ala

             85                  90                  95Leu Ala Ile Ala Val Ser His Ala Gly Ala Pro Met Ala Asn Ala Ala

        100                 105                 110Thr Gln Thr Lys Pro Leu His Ile Gly Asn Ala Ala Lys His Gly Ile

    115                 120                 125Glu Ala Ala Phe Leu Ala Met Leu Gly Leu Gln Gly Asn Lys Gln Val

130                 135                 140Leu Asp Leu Glu Ala Gly Phe Gly Ala Phe Tyr Ala Asn Tyr Ser Pro145                 150                 155                 160Lys Val Leu Pro Ser Ile Ala Ser Tyr Ser Trp Leu Leu Asp Gln Gln

            165                 170                 175Asp Val Ala Phe Lys Arg Phe Pro Ala His Leu Ser Thr His Trp Val

        180                 185                 190Ala Asp Ala Ala Ala Ser Val Arg Lys His Leu Val Ala Glu Arg Ala

    195                 200                 205Leu Leu Pro Thr Asp Tyr Ile Lys Arg Ile Val Leu Arg Ile Pro Asn

210                 215                 220Val Gln Tyr Val Asn Arg Pro Phe Pro Val Ser Glu His Glu Ala Arg225                 230                 235                 240His Ser Phe Gln Tyr Val Ala Cys Ala Met Leu Leu Asp Gly Gly Ile

            245                 250                 255Thr Val Pro Ser Phe His Glu Cys Gln Ile Asn Arg Pro Gln Val Arg

        260                 265                 270Glu Leu Leu Ser Lys Val Glu Leu Glu Tyr Pro Pro Asp Asn Leu Pro

    275                 280                 285Ser Phe Asn Ile Leu Tyr Cys Glu Ile Ser Val Thr Leu Lys Asp Gly

290                 295                 300Ala Thr Phe Thr Asp Arg Ser Asp Thr Phe Tyr Gly His Trp Arg Lys305                 310                 315                 320Pro Leu Ser Gln Glu Asp Leu Glu Glu Lys Phe Arg Ala Asn Ala Ser

            325                 330                 335Lys Met Leu Ser Trp Asp Thr Val Glu Ser Leu Ile Lys Ile Val Lys

        340                 345                 350Asn Leu Glu Asp Leu Glu Asp Cys Ser Val Leu Thr Thr Leu Leu Lys

    355                 360                 365Gly Pro Ser Pro Pro Glu Val Ala Ser Asn Ser Pro Ala Cys Asn Asn

370                 375                 380Ser Ile Thr Asn Leu Ser385                 390<210>5<211>652<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(56)..(307)<400>5ggcaccaggc gcaccgcccg gcgtccagat ttggcaattc ttcgctgaag tcatc atg  58

                                                         Met

                                                           1agc ttt ttc caa ctc ctg atg aaa agg aag gaa ctc att ccc ttg gtg   106Ser Phe Phe Gln Leu Leu Met Lys Arg Lys Glu Leu Ile Pro Leu Val

          5                  10                  15gtg ttc atg act gtg gcg gcg ggt gga gcc tca tct ttc gct gtg tat   154Val Phe Met Thr Val Ala Ala Gly Gly Ala Ser Ser Phe Ala Val Tyr

     20                  25                  30tct ctt tgg aaa acc gat gtg atc ctt gat cga aaa aaa aat cca gaa   202Ser Leu Trp Lys Thr Asp Val Ile Leu Asp Arg Lys Lys Asn Pro Glu

 35                  40                  45cct tgg gaa act gtg gac cct act gta cct caa aag ctt ata aca atc   250Pro Trp Glu Thr Val Asp Pro Thr Val Pro Gln Lys Leu Ile Thr Ile50                  55                  60                  65aac caa caa tgg aaa ccc att gaa gag ttg caa aat gtc caa agg gtg   298Asn Gln Gln Trp Lys Pro Ile Glu Glu Leu Gln Asn Val Gln Arg Val

             70                  75                  80acc aaa tgacgagccc tcgcctcttt cttctgaaga gtactctata aatctagtgg    354Thr Lysaaacatttct gcacaaacta gattctggac accagtgtgc ggaaatgctt ctgctacatt 414tttagggttt gtctacattt tttgggctct ggataaggaa ttaaaggagt gcagcaataa 474ctgcactgtc taaaagtttg tgcttatttt cttgtaaatt tgaatattgc atattgaaat 534ttttgtttat gatctatgaa tgtttttctt aaaatttaca aagctttgta aattagattt 594tctttaataa aatgccattt gtgcaagatt tctcaaagaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa   652<210>6<211>83<212>PRT<213>人类<400>6Met Ser Phe Phe Gln Leu Leu Met Lys Arg Lys Glu Leu Ile Pro Leu1               5                  10                  15Val Val Phe Met Thr Val Ala Ala Gly Gly Ala Ser Ser Phe Ala Val

         20                  25                  30Tyr Ser Leu Trp Lys Thr Asp Val Ile Leu Asp Arg Lys Lys Asn Pro

     35                  40                  45Glu Pro Trp Glu Thr Val Asp Pro Thr Val Pro Gln Lys Leu Ile Thr

 50                  55                  60Ile Asn Gln Gln Trp Lys Pro Ile Glu Glu Leu Gln Asn Val Gln Arg65                  70                  75                  80Val Thr Lys<210>7<211>34<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列：NLG-2正向引物<400>7cacggatcca ttcttcgctg aagtcatcat gagc                           34<210>8<211>34<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列：NLG-2反向引物<400>8gtggaattct ttggtcaccc tttggacatt ttgc                           34<210>9<211>35<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列：NLG-1-1正向引物<400>9cacggatcct tctttacaac gaaatgatgc tcaag                          35<210>10<211>39<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列：NLG-1-1反向引物<400>10gtggaattcg gagagatttg tgatagaatt attacatgc                      39

Claims (27)

1.含有由序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或其片段。

2.编码权利要求1记载的蛋白质或其功能等价的改变体的基因。

3.权利要求2记载的基因，其是由序列表中序列号1表示的碱基序列中的第37位～1479位碱基组成的碱基序列构成的。

4.含有权利要求2或3记载的基因的质粒。

5.含有权利要求4记载的质粒的转化体。

6.抗体或其片段，其特征是可与权利要求1记载的蛋白质或其功能等价改变体进行特异反应。

7.细菌感染症的检测方法，其特征是分析被检测样品中的含有由序列表中序列号2表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或它们的mRNA。

8.权利要求7记载的检测方法，其中细菌感染症是败血病。

9.可以与序列表中序列号1表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的多核苷酸。

10.含有由序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或其片段。

11.编码权利要求10记载的蛋白质或其功能等价的改变体的基因。

12.权利要求11记载的基因，其是由序列表中序列号3表示的碱基序列中的第126位～1295位碱基组成的碱基序列构成的。

13.含有权利要求11或12记载的基因的质粒。

14.含有权利要求13记载的质粒的转化体。

15.抗体或其片段，其特征是可与权利要求10记载的蛋白质或其功能等价改变体进行特异反应。

16.细菌感染症的检测方法，其特征是分析被检测样品中的含有由序列表中序列号4表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或它们的mRNA。

17.权利要求16记载的检测方法，其中细菌感染症是败血病。

18.可以与序列表中序列号3表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的多核苷酸。

19.含有由序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或其片段。

20.编码权利要求19记载的蛋白质或其功能等价的改变体的基因。

21.权利要求20记载的基因，其是由序列表中序列号5表示的碱基序列中的第56位～第304位碱基组成的碱基序列构成的。

22.含有权利要求20或21记载的基因的质粒。

23.含有权利要求22记载的质粒的转化体。

24.抗体或其片段，其特征是可与权利要求19记载的蛋白质或其功能等价改变体进行特异反应。

25.细菌感染症的检测方法，其特征是分析被检测样品中的含有由序列表中序列号6表示的氨基酸序列的蛋白质或其功能等价的改变体或它们的mRNA。

26.权利要求25记载的检测方法，其中细菌感染症是败血病。

27.可以与序列表中序列号5表示的碱基序列构成的mRNA特异杂交的多核苷酸。

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