CN1396261A

CN1396261A - 人生长分化因子7、其编码序列、制法及用途

Info

Publication number: CN1396261A
Application number: CN 02112377
Authority: CN
Inventors: 余龙; 唐丽莎; 郭金虎
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2002-07-04
Filing date: 2002-07-04
Publication date: 2003-02-12

Abstract

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明提供了人生长分化因子7(hGDF7)，其编码序列、制法及用途。hGDF7蛋白具有TGFβ氨基端结构域和TGFβ家族成员的典型特征序列，与其他物种的hGDF7也有较高的同源度，是TGFβ亚家族的新成员，具有该家族成员的共性。将本发明的hGDF7核酸、其反义链及片段制成探针，可检测由于hGDF7基因异常而导致的疾病；将hGDF7蛋白序列制成试剂盒或药物，可调节细胞生长增殖，促进烫伤烧伤、组织切除乃至器官摘除后的伤口愈合。将本发明的hGDF7核酸反义链或hGDF7抗体制成试剂盒可用于减轻或辅助治疗由于hGDF7表达量过高而导致的疾病，也可辅助临床上肿瘤和癌症的诊断，预防及治疗。

Description

人生长分化因子7、其编码序列、制法及用途

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及一种新的人生长分化因子(hGDF7)的cDNA序列，该蛋白是hGDF7的变异剪切体。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

发明背景

转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)是约15年前采用生物化学方法发现的具有多种生物调节活性的蛋白质。其后不久，人们发现TGF-β代表了一类具有广泛功能的生长因子。在不同生物中，这些因子在包括细胞生长、分化以及组织形态发生等方面都发挥着重要的调节作用( Handbook of Experimental Pharmacology，1990，Vol.95，pp419-475，Springer Verlag，Geidelberg)。TGF-β与这些相关蛋白质构成了一个超家族，该家族被命名为TGF-β超家族。迄今为止，TGF-β超家族已经包括了超过30个不同的成员。在TGF-β超家族内又大致可以分成四个主要的家族(Proc Soc Exp Biol Med，1997，214(1)，27-40)，它们是：(1)穆勒氏抑制物MIS家族(Mullerian inhibitory substancefamily)——MIS蛋白能调节雄性胚胎中副肾管的退化；(2)抑制素/活化素家族(inhibin/activin family)——抑制素能抑制脑垂体细胞释放促卵泡激素，活化素则能刺激促卵泡激素的释放；(3)Vg-相关家族——包括骨形态发生蛋白BMP、dorsalin-1(该蛋白调节神经管的分化)、生长分化因子GDF-1、DPP、非洲爪蛙的Vg1和其在小鼠中的同系物Vgr-1等；(4)TGF-β家族——包括TGF-β的五种异构体(TGF-β1-5)。

TGF-β是该超家族中的代表者，对其的研究开展得十分广泛和深入。对其功能的研究表明，TGF-β受伤组织修复的有力的内源中介体，它通过在受伤组织中对趋化性、血管生成和胞外基质(ECM)沉积的刺激作用而发挥功能( Clin lmmunol Immunopathol，1997，83(1)，25-30)。TGF-β还对多种细胞的生长和分化有调节作用( Bioessays，1997，19(7)，581-591)，这种调节既可以是正调节，也可以是负调节。现有的大多数证据显示TGF-β是在细胞周期的G1期发挥其调控作用的。除此之外，还有报导称TGF-β可以诱导某些敏感细胞的死亡，这些细胞包括肝癌细胞、髓系和骨系细胞等。体外实验还发现，TGF-β对多种细胞株的分化有调控作用，虽然对其作用机理还不清楚。TGF-β对细胞生长分化的调控作用很自然使人联想到它在化疗中的防护作用以及在肿瘤治疗中可能的应用，有关这些方面的报导已有相当数量( Clin Immunol Immunopathol，1997，83(1)，25-30； Bioessays，1997，19(7)，581-591)。

在多种物种中(如非洲爪蛙、鸡、鼠、猪、牛等)中都已发现了TGF-β家族成员。人的TGF-β(-1，-2，-3)都是在80年代后期被克隆的。其中，TGF-β1是由Derynck R等于1985年完成测序( Nature，1985，316(6030)，701-705)，通过对TGF-β1的编码序列的分析，他们发现具有功能的TGF-β其实是由一个比成熟蛋白长得多的前体经剪切加工而成。这一特性后来被发现是TGF-β超家族的一个共性。TGF-β2和TGF-β3的核酸序列则是MadisenL等和ten Dijke P等人于1988年测得( Proc Natl Acad Sci U S A，1988，85(13)，4715-4719；DNA，1988，7(1)，1-8)。通过同源比较发现，TGF-β2和TGF-β3与TGF-β1的氨基酸的同源度达到了70％-80％。

90年代以来，随着基因克隆和测序技术的不断发展完善，越来越多TGF-β超家族成员被克隆。TGF-β超家族还有若干亚家族，GDF5，6，7亚家族就是其中之一。Storm EE等人报道了该亚家族中最初三个成员的从小鼠中被分离的结果(Nature 1994 Apr14；368(6472)：639-43)。该亚家族成员在软骨和关节中表达量高，可能与这类组织的生长发育有关。2001年，Watakabe A等人用Northern印迹和定量PCR的方法发现GDF-7表达量在非洲绿猴的大脑主运动区中比在皮层中其它区域高十倍，在成熟和新生恒河猴相似部位也有类似的表达量分别，从而认为，GDF7在灵长类动物新大脑皮层的主运动区发挥重要作用(J Neurochem，2001，77(5)：1422)。

但在本发明之前，还没有人分离出或公开过本发明所述的的人生长分化因子7。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种多核苷酸序列，该多核苷酸序列编码人生长分化因子7(hGDF7)。

本发明的另一个目的是提供一种蛋白，该蛋白被命名为人生长分化因子7(hGDF7)。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的人hGDF7蛋白的方法。

本发明还提供了这种人hGDF7核酸序列和蛋白的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人hGDF7蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ IDNO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的hGDF7蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.2序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有hGDF7蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有hGDF7蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hGDF7蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成hGDF7蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达hGDF7蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有hGDF7蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为1594个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.1，其中开放读框位于177-1529位核苷酸。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。

在本发明中，术语“hGDF7蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有HGDF7蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1中177-1529位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.1序列的编码框177-1529位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ IDNO.1中177-1529位核苷酸序列同源性低至约70％的简并序列也能编码出SEQ ID NO.2所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳地在高度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。此外，该术语还包括与SEQ IDNO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。

该术语还包括能编码具有与人HGDF7相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.1序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(通常为1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。

在本发明中，“基本纯的”蛋白质或多肽是指其至少占样品总物质的至少20％，较佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或湿重计)。纯度可以用任何合适的方法进行测量，如用柱层析、PAGE或HPLC法测量多肽的纯度。基本纯的多肽基本上不含天然状态下的伴随其的组分。

在本发明中，术语“hGDF7蛋白多肽”指具有hGDF7蛋白活性的SEQ ID NO.2序列的多肽。该术语还包括具有与人hGDF7相同功能的、SEQ ID NO.2序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括hGDF7蛋白的活性片段和活性衍生物。

该多肽的变异形式包括：同源序列、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨度条件下能与hGDF7 DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗hGDF7多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本发明还提供了其他多肽，如包含hGDF7多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本发明还包括了hGDF7多肽的可溶性片段。通常，该片段具有hGDF7多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。

发明还提供hGDF7蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然hGDF7多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或个成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。

修饰(通常不改变一级结构)形式包括：体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。

本发明还包括hGDF7多肽编码序列的反义序列。这种反义序列可用于抑制细胞内hGDF7的表达。

本发明还包括一种探针分子，该分子通常具有hGDF7多肽编码序列的8-100个，较佳地15-50个连续核苷酸。该探针可用于检测样品中是否存在编码hGDF7的核酸分子。

本发明还包括检测hGDF7核苷酸序列的方法，它包括用上述的探针与样品进行杂交，然后检测探针是否发生了结合。较佳地，该样品是PCR扩增后的产物，其中PCR扩增引物对应于hGDF7多肽的编码序列，并可位于该编码序列的两侧或中间。引物长度一般为20-50个核苷酸。

在本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体。

在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞，昆虫细胞、和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、COS细胞等。

另一方面，本发明还包括对hGDF7 DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于hGDF7基因产物或片段。较佳地，指那些能与hGDF7基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制hGDF7蛋白的分子，也包括那些并不影响hGDF7蛋白功能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的hGDF7基因产物结合的抗体。

本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab′或(Fab)₂片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利No.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的hGDF7基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达hGDF7或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人，Nature 256；495，1975；Kohler等人， Eur.J.Immuno1.6：511，1976；Kohler等人， Eur.J.Immunol.6：292，1976；Hammerling等人， In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.，1981)。本发明的抗体包括能阻断hGDF7功能的抗体以及不影响hGDF7功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用hGDF7基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与hGDF7基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。

在本发明中，人hGDF7的cDNA核苷酸序列是如此获得的，以人睾丸λgt10cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，用A1A2和B1B2两对寡核苷酸为引物：A1-TTC AAA AGGCGC CGG GGG ACT TC和B1-ACG AAT CGG CAG CCG AAA CAG GC为正向引物；A2：CCACCACCTCGTCTGCGTCGTTA和B2：TCG CGC TAC CTG CAG CCG CAG为反向引物，进行PCR。PCR条件为93℃ 4分钟，随之以93℃ 1分钟、64℃ 1分钟和72℃ 1分钟进行35个循环，最后72℃延伸5分钟。电泳检测得到的PCR片断，大小分别为约五百五和一千个碱基对的目的片段。然后用限制性酶AflIII对两者进行酶切、连接，得到目的cDNA序列及杂带，杂带可用电泳等方法去除，从而得到浓度较高的目的cDNA序列。

本发明的hGDF7蛋白在Non-redundant GenBank+EMBL+DDBJ+PDB数据库及Non-redundant GenBank CDS translations+PDB+SwissProt+Spupdate+PIR数据库中用BLAST软件进行核酸和蛋白同源检索，结果发现它具有TGFβ氨基端结构域和TGFβ家族成员的典型特征序列。hGDF7与其他物种中的hGDF7也有较高的同源度，如与Cercopithecus aethiops和Macaca fascicularis中的hGDF7同源度分别为66％和65％。这说明本发明的hGDF7具有TGFb家族成员共性，如对细胞的生长和增殖具有调控作用，对组织生长具有促进作用乃至对机体的生理活动具有协调作用。

将本发明的hGDF7核酸、其反义链及片段制成探针，可检测hGDF7基因异常；将hGDF7蛋白序列制成试剂盒或药物，可调节细胞生长增殖，促进烫伤烧伤、组织切除乃至器官摘除后的伤口愈合。将本发明的hGDF7核酸反义链或hGDF7抗体制成试剂盒可用于减轻或辅助治疗由于hGDF7表达量过高而导致的疾病，也可辅助临床上肿瘤和癌症的诊断，预防及治疗。此外，本发明hGDF7还可以与该家族的其他成员进行融合或交换片段，以产生新的蛋白，例如可将本发明hGDF7的N端与鼠GDF7的N端进行交换，以产生新的活性更高或具有新特性的蛋白。针对本发明hGDF7的抗体，用于筛选该家族的其他成员，或者用于亲和纯化相关蛋白(如该家族的其他成员)。

具体实施方式

实施例1

hGDF7的cDNA序列的克隆和测定

1.引物扩增

以人睾丸λgt10cDNA文库(购自Clontech公司)为模板，用两对寡核苷酸为引物：A1-TTC AAA AGG CGC CGG GGG ACT TC和B1-ACG AAT CGG CAG CCG AAACAG GC为正向引物；A2：CCACCACCTCGTCTGCGTCGTTA和B2：TCG CGC TACCTG CAG CCG CAG为反向引物，进行PCR。PCR条件为93℃ 4分钟，随之以93℃ 1分钟、64℃ 1分钟和72℃ 1分钟进行35个循环，最后72℃延伸5分钟。电泳检测得到的PCR片断，大小分别为约五百五和一千个碱基对的目的片段。然后用限制性酶AflIII对两者进行酶切、连接，得到目的cDNA序列及杂带，杂带可用电泳等方法去除，从而得到浓度较高的目的cDNA序列。

2.PCR产物的测序

将PCR扩增产物与pGEM-T^TM载体(Promega)连接，转化大肠杆菌JM103，用QIAprepPlasmid试剂盒(QIAGEN)提取质粒，用双链嵌套式缺失试剂盒(Pharmacia)对插入片段进行定向系列缺失，然后用PCR对缺失子进行快速鉴定及排序。用SequiTherm EXCEL^TM DNA测序试剂盒(Epicentre Technologies)对依次截短的缺失子进行测序，最后获得全长cDNA序列，共1594bp，详细序列见SEQ ID NO.1，其中开放读框位于177-1529位核苷酸。

根据得到的全长cDNA序列推导出hGDF7的氨基酸序列，共450个氨基酸残基，其氨基酸序列详见SEQ ID NO.2。

实施例2

hGDF7在大肠杆菌中的表达

在该实施例中，将编码hGDF7的cDNA序列，用对应于该DNA序列的5’和3’端的PCR寡核苷酸引物进行扩增，获得hGDF7 cDNA作为插入片段。

PCR反应中使用的5′寡核苷酸引物序列为：

5’-CACGGTCGACATGG ACCTGAGCGCCGCCG，该引物含有SalI限制性内切酶的酶切位点，在该酶切位点之后是由起始密码子开始的hGDF7的部分编码序列；

3’端引物序列为：

5’-CCTCAAGCTTCCTGCAGCCGCAGGCCTCC，该引物含有HindIII限制性内切酶的酶切位点、翻译终止子和hGDF7的部分编码序列。

引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于细菌表达载体pQE-9(Qiagen Inc.，Chatsworth，CA)上的限制性内切酶酶切位点，该质粒载体编码抗生素抗性(Amp^r)、一个细菌复制起点(ori)、一个IPTG-可调启动子/操纵子(P/O)、一个核糖体结合位点(RBS)、一个6-组氨酸标记物(6-His)以及限制性内切酶克隆位点。

用SalI和HindIII消化pQE-9载体和插入片段，随后将插入片段连接到pQE-9载体并保持开放读框在细菌RBS起始。随后用连接混合物转化购自Qiagen，商品名为M15/rep4的E.coli菌株，M15/rep4含有多拷贝的质粒pREP4，其表达lacI阻遏物并携带卡那霉素抗性(Kan^r)。在含有Amp和Kan的LB培养皿上筛选转化子，抽提质粒，用AflIII酶切鉴定插入片段大小及方向，并测序验证hGDF7的cDNA片段已正确插入了载体。

在补加Amp(100μg/ml)和Kan(25μg/ml)的LB液体培养基中过夜培养(O/N)含所需构建物的阳性转化子克隆。过夜(O/N)培养物以1∶100-1∶250的稀释率稀释，然后接种到大体积培养基中，培养细胞生长至600光密度(OD₆₀₀₎为0.4-0.6时，加入IPTG(“异丙基硫代-β-D-半乳糖苷”)至终浓度为1mM。通过使lacI阻遏物失活，IPTG诱导启动P/O导致基因表达水平提高。继续培养细胞3-4小时，随后离心(6000×g，20分钟)。超声裂解包涵体，收集细胞并将细胞沉淀溶于6M的盐酸胍中。澄清后，通过在能使含6-His标记物蛋白紧密结合的条件下，用镍-螯合柱层析从溶液中纯化溶解的hGDF7。用6M盐酸胍(pH5.0)从柱中洗脱hGDF7。可用几种方法从盐酸胍中变性沉淀蛋白。或者使用透析步骤除去盐酸胍，或者从镍-螯合柱中分离出纯化蛋白，纯化后的蛋白可以结合到第二个柱中，该柱中具有递减的线性盐酸胍梯度。在结合到该柱时蛋白质变性，随后用盐酸胍(pH5.0)洗脱。最后，将可溶的蛋白质对含PBS进行透析，然后将蛋白质保存在终浓度为10％(w/v)甘油的贮存液中。

此外，用常规方法对表达蛋白的N端和C端各10个氨基酸长度的氨基酸进行测序，发现与SEQ ID NO.3的序列一致。该序列与SEQ ID NO.2的区别在于，它不含SEQ ID NO.2中1-20位氨基酸。这是因为SEQ ID NO.2中1-20氨基酸是hGDF7的信号肽序列，在表达过程中该信号肽序列被切除。

实施例3

hGDF7在真核细胞(CHO细胞株)中的表达

在该实施例中，将编码hGDF7的cDNA序列下列寡核苷酸引物进行扩增，获得hGDF7cDNA作为插入片段。

PCR反应中使用的5’寡核苷酸引物序列为：

5’-CACGAAGCTTATGG ACCTGAGCGCCGCCG

该引物含有HindIII限制性内切酶的酶切位点，在该酶切位点之后是由起始密码子开始的hGDF7的部分编码序列；

3’端引物序列为：

5’-CCTCGATATCCCTGCAGCCGCAGGCCTCC

该引物含有EcoRV限制性内切酶的酶切位点、一个翻译终止子和hGDF7的部分编码序列。

引物上的限制性内切酶的酶切位点对应于CHO细胞表达载体pcDNA3上的限制性内切酶酶切位点，该质粒载体编码抗生素抗性(Amp^r和Neo^r)、一个噬菌体复制起点(f1 ori)、一个病毒复制起点(SV40 ori)、一个T7启动子、一个病毒启动子(P-CMV)、一个Sp6启动子、一个SV40启动子、一个SV40加尾信号和相应的polyA顺序、一个BGH加尾信号和相应的polyA顺序。

用HindIII及EcoRV消化pcDNA3载体和插入片段，随后将插入片段连接到pcDNA3载体。随后用连接混合物转化E.coli DH5α菌株。在含有Amp的LB培养皿上筛选转化子，在补加Amp(100μg/ml)的LB液体培养基中过夜培养(O/N)含所需构建物的克隆。抽提质粒，用Af1III酶切鉴定插入片段大小及方向，并测序验证hGDF7的cDNA片段已正确插入了载体。

质粒转染CHO细胞是用脂转染法，用Lipofectin(GiBco Life)进行，转染48小时后，经2-3周的持续G418加压筛选，收集细胞及细胞上清测定表达蛋白酶活力。去G418，连续传代培养；对混合克隆细胞极限稀释，选择具有较高蛋白活性的细胞亚克隆。按常规方法大量培养上述阳性亚克隆。48小时后，开始收集细胞及上清，用超声裂解方法破碎细胞。以含0.05％Triton的50mMTris·HCl(pH7.6)溶液为平衡液及洗脱液，用经预平衡的SuperdexG-75柱收集上述蛋白的活性峰。再用50mMTris·HCl(pH8.0)平衡的DEAE-Sepharose柱，以含0-1M NaCl的50mMTris·HCl(pH8.0)溶液为洗脱液进行梯度洗脱，收集上述蛋白的活性峰。然后以PBS(pH7.4)为透析液对表达蛋白溶液进行透析。最后冻干保存。

实施例4

同源比较

用实施例2和实施例3得到的hGDF7蛋白(SEQ ID NO.3)在Non-redundantGenBank+EMBL+DDBJ+PDB数据库及Non-redundant GenBank CDStranslations+PDB+SwissProt+Spupdate+PIR数据库中用BLAST软件进行核酸和蛋白同源检索。结果发现它具有TGFβ氨基端结构域和TGFβ家族成员的典型特征序列(http：//smart.embl-heidelberg.de/)。

本发明的hGDF7具有TGFb家族成员氨基末端结构域的典型特征。转化生长因子B氨基端功能域存在与许多蛋白中，包括转化生长因子B、DPP细胞和骨巨噬细胞等等。转化生长因子具有多种功能，如控制细胞增长、分化等等。DDP细胞作为胞外的成型素，主要负责胚胎脊下皮(dorsal hypoderm)的正常发育，幼虫的发育和成虫上皮细胞的发育。骨巨噬细胞则诱导软骨和骨的形成并与某些物种的骨膜生长有关(Saharinen J，Taipale J，Keski-Oia J.EMBO J 1996；15：245-253；Munger JS，Harpel JG，Gleizes PE，Mazzieri R，NunesI，Rifkin DB.Kidney Int 1997；51：1376-1382)。在hGDF7中，符合该特征的序列为：GGGGGRTLAQAAGAAAVPAAAVPRARAARRAAGSGFRNGSVVPHHFMMSLYRSLAGRAPAGAAAVSASGHGRADTITGFTDQATQDESAAETGQSFLFDVSSLNDADEVVGAELRVLRRGSPESGPGSWTSPPLLLLSTCPGAARAPRLLYSRAAEPLVGQRWEAFDVADAMRRHRREPRPPRAFCLLLRAVAGPVPSPLALRRLGFGWPGGGGSAAEERAVLVVSS(SEQID NO 3中26-252)。

此外，hGDF7的蛋白序列还中发现了TGF-β超家族的标志性的保守序列：(L/I/V/M)X₂PX₂(F/Y)X4CXGXC，其中(L/I/V/M)表示L、I、V、M中的任意一个氨基酸，X₂表示2个任意氨基酸。在hGDF7中，符合该特征的序列为：SRKPLHVDFKELGWDDWIIAPLDYEAYHCEGLCDFPLRSHLEPTNHAIIQTLLNSMAPDAAPASCCVPARLSFISILYIDAANNVVYKQYEDMVVEACGCR(SEQ ID NO 3中329-430)。

本发明的hGDF7与其他物种中的hGDF7也有较高的同源度，如与Cercopithecusaethiops和Macaca fascicularis中的hGDF7同源度分别为66％和65％。这进一步证明本发明的hGDF7具有TGFb家族成员共性，如对细胞的生长和增殖具有调控作用，对组织生长具有促进作用乃至对机体的生理活动具有协调作用。

本发明的hGDF7除了可作为该家族一员用于进一步的功能研究，还可用于与其他蛋白一起产生融合蛋白，比如与免疫球蛋白一起产生融合蛋白。此外，本发明hGDF7还可以与该家族的其他成员进行融合或交换片段，以产生新的蛋白，例如可将本发明hGDF7的N端与鼠GDF7的N端进行交换，以产生新的活性更高或具有新特性的蛋白。

针对本发明hGDF7的抗体，用于筛选该家族的其他成员，或者用于亲和纯化相关蛋白(如该家族的其他成员)。

实施例5

制备抗体

将实施例2或3获得的重组蛋白用来免疫动物以产生抗体，具体如下。重组分子用层析法进行分离后备用。也可用SDS-PAGE凝胶电泳法进行分离，将电泳条带从凝胶中切下，并用等体积的完全Freund’s佐剂乳化。用50-100μg/0.2ml乳化过的蛋白，对小鼠进行腹膜内注射。14天后，用非完全Freund’s佐剂乳化的同样抗原，对小鼠以50-100μg/0.2ml的剂量进行腹膜内注射以加强免疫。每隔14天进行一次加强免疫，至少进行三次。获得的抗血清的特异反应活性用它在体外沉淀hGDF7基因翻译产物的能力加以评估。

实例6

作为微矩阵的底物

微矩阵，又称为DNA芯片。通过使用一些著名的生物软件(如LASERGENESOFTWARE(DNASTAR)，来选择将hGDF7全长cDNA、EST、或基因片段作为微矩阵的底物样品。然后通过使用喷墨技术及一系列化学方法如射线、化学、热力学、机械方法等把样品固定在载体上，如玻璃上，得到芯片(Schena，M.et al.(1995)Science 270：467-470；and Shalon，D.et al.(1996)Genome Res.6：639-645.)，形成的元件有点状、条形等等。块典型的芯片通常含有一定数量的元件。杂交反应后，洗去未结合的探针，然后用扫描仪来检测发生杂交反应的元件及反应的程度。探针与每一个芯片元件的互补性和结合量都可通过对扫描出的图像的分析来判断。

杂交结果可用于检测出hDGF7基因变异、突变及多态现象，理解由于hDGF7表达不正常引起的疾病的分子基础，诊断疾病，并可改进及监测相关药剂的活性。

实施例7：

试剂盒的制备

试剂盒1：

它含有(1)特异性扩增hDGF7的引物对和使用说明。该试剂盒还可含有或不含有将mRNA逆转录成cDNA的所需试剂。其中，该特异性引物的序列衍生自SEQ ID NO：1的序列。对逆转录成的cDNA进行特异性扩增，以检测样品中是否含有hDGF7的核酸序列。该试剂盒还可含有进行PCR反应所需的其他试剂，例如缓冲液等。

此外，较佳地，至少一个所用的引物跨越了两个外显子，因为此时对应于hDGF7的基因组序列将不产生扩增产物。

试剂盒2：

该试剂盒含有针对hDGF7的特异性的抗体(例如实施例5中制备的多克隆抗体，或者用标准的杂交瘤技术产生的抗hDGF7的单克隆抗体)，和使用说明。该试剂盒用于直接检测样品中是否存在或缺失hDGF7蛋白。先通过特异性免疫反应形成免疫复合物，然后用常规技术检测免疫复合物。

试剂盒3：

该试剂盒含有可特异性地与hDGF7的mRNA杂交的探针。它还可含有或不含有杂交缓冲液。该试剂盒通过核酸分子与hDGF7特异性探针之间的杂交反应来检测样品中是否存在hDGF7的核酸分子。

试剂盒也可用于检测出基因变异、突变及多态现象，并检测出一系列与本发明的hDGF7相关的基因，从而对相关疾病的诊断、治疗起辅助作用。

实例8：

制成药物

本发明的hDGF7蛋白及其抗体、抑制剂、拮抗剂或受体等可作为药物，可促进烫伤烧伤、组织切除乃至器官摘除后的伤口愈合。将本发明的hGDF7核酸反义链或hGDF7抗体制成试剂盒可用于减轻或辅助治疗由于hGDF7表达量过高而导致的疾病，也可辅助临床上肿瘤和癌症的诊断，预防及治疗。

本发明蛋白及其抗体、抑制剂、拮抗剂或受体等，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常为约5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：肌内、腹膜内、皮下、皮内、或局部给药。

此外，本发明hDGF7核酸(编码序列或反义序列)可以直接引入细胞，以提高hDGF7的表达水平或者抑制hDGF7的过度表达。本发明的hDGF7蛋白或其活性多肽片段可以施用于病人，以治疗或减轻因hDGF7缺失、无功能或异常而导致的有关病症。此外，还可以用基于本发明的核酸序列或抗体进行有关的诊断或预后判断。

当本发明的hDGF7蛋白多肽被用作药物时，治疗有效剂量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

序列表<210>1<211>1594<212>核苷酸<213>人类<220><221>编码序列<222>(177)..(1529)<223><400>1ctttcagcag ggggcgctgc tccgggcgtt gggcgggggt ggggtgggcc aggagggggg 60gccgcgggct ggccgcgcac acttccccca ttattaaaca ctatgttcaa aaggcgccgg 120gggacttccc ggagccacgg agcccgcgcc gcccgcccgc ccggcccacg gagccc atg 179

Met

1gac ctg agc gcc gcc gcc gcg ctg tgc ctt tgg ctg ctg agc gcc tgc 227Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ala Leu Cys Leu Trp Leu Leu Ser Ala Cys

5 10 15cgc ccc cgc gac ggg ctg gaa gcg gcc gcc gtg ctg cga gcg gcg ggg 275Arg Pro Arg Asp Gly Leu Glu Ala Ala Ala Val Leu Arg Ala Ala Gly

20 25 30gct ggg ccg gtc cgg agc cca ggg ggc ggc ggc ggc ggc ggc ggc ggc 323Ala Gly Pro Val Arg Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

35 40 45ggg cgg act ctt gcc cag gct gcg ggc gcc gcg gct gtc ccg gcc gcc 371Gly Arg Thr Leu Ala Gln Ala Ala Gly Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala50 55 60 65gcg gtt ccc cgg gcc cgc gcc gcg cgc cgc gcc gcg ggc tcc ggc ttc 419Ala Val Pro Arg Ala Arg Ala Ala Arg Arg Ala Ala Gly Ser Gly Phe

70 75 80agg aac ggc tcg gtg gtg ccg cac cac ttc atg atg tcg ctt tac cgg 467Arg Asn Gly Ser Val Val Pro His His Phe Met Met Ser Leu Tyr Arg

85 90 95agc ctg gcc ggg agg gct ccg gcc ggg gca gcc gct gtc tcc gcc tcg 515Ser Leu Ala Gly Arg Ala Pro Ala Gly Ala Ala Ala Val Ser Ala Ser

100 105 110ggc cat ggt cgc gcg gac acg atc acc ggc ttc aca gac cag gcg acc 563Gly His Gly Arg Ala Asp Thr Ile Thr Gly Phe Thr Asp Gln Ala Thr

115 120 125caa gac gaa tcg gca gcc gaa aca ggc cag agc ttc ctg ttc gac gtg 611Gln Asp Glu Ser Ala Ala Glu Thr Gly Gln Ser Phe Leu Phe Asp Val130 135 140 145tcc agc ctt aac gac gca gac gag gtg gtg ggt gcc gag ctg cgc gtg 659Ser Ser Leu Asn Asp Ala Asp Glu Val Val Gly Ala Glu Leu Arg Val

150 155 160ctg cgc cgg gga tct cca gag tcg ggc cca ggc agc tgg act tct ccg 707Leu Arg Arg Gly Ser Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Trp Thr Ser Pro

165 170 175ccg ttg ctg ctg ctg tcc acg tgc ccg ggc gcc gcc cga gcg cca cgc 755Pro Leu Leu Leu Leu Ser Thr Cys Pro Gly Ala Ala Arg Ala Pro Arg

180 185 190ctg ctg tac tcg cgg gca gct gag ccc cta gtc ggt cag cgc tgg gag 803Leu Leu Tyr Ser Arg Ala Ala Glu Pro Leu Val Gly Gln Arg Trp Glu

195 200 205gcg ttc gac gtg gcg gac gcc atg agg cgc cac cgt cgt gaa ccg cgc 851Ala Phe Asp Val Ala Asp Ala Met Arg Arg His Arg Arg Glu Pro Arg210 215 220 225ccc ccc cgc gcg ttc tgc ctc ttg ctg cgc gca gtg gca ggc ccg gtg 899Pro Pro Arg Ala Phe Cys Leu Leu Leu Arg Ala Val Ala Gly Pro Val

230 235 240ccg agc ccg ttg gca ctg cgg cgg ctg ggc ttc ggc tgg ccg ggc gga 947Pro Ser Pro Leu Ala Leu Arg Arg Leu Gly Phe Gly Trp Pro Gly Gly

245 250 255ggg ggc tct gcg gca gag gag cgc gcg gtg cta gtc gtc tcc tcc cgc 995Gly Gly Ser Ala Ala Glu Glu Arg Ala Val Leu Val Val Ser Ser Arg

260 265 270acg cag agg aaa gag agc tta ttc cgg gag atc cgc gcc cag gcc cgc 1043Thr Gln Arg Lys Glu Ser Leu Phe Arg Glu Ile Arg Ala Gln Ala Arg

275 280 285gcg ctc ggg gcc gct ctg gcc tca gag ccg ctg ccc gac cca gga acc 1091Ala Leu Gly Ala Ala Leu Ala Ser Glu Pro Leu Pro Asp Pro Gly Thr290 295 300 305ggc acc gcg tcg cca agg gca gtc att ggc ggc cgc aga cgg agg agg 1139Gly Thr Ala Ser Pro Arg Ala Val Ile Gly Gly Arg Arg Arg Arg Arg

310 315 320acg gcg ttg gcc ggg acg cgg aca gcg cag ggc agc ggc ggg ggc gcg 1187Thr Ala Leu Ala Gly Thr Arg Thr Ala Gln Gly Ser Gly Gly Gly Ala

325 330 335ggc cgg ggc cac ggg cgc agg ggc cgg agc cgc tgc agc cgc aag ccg 1235Gly Arg Gly His Gly Arg Arg Gly Arg Ser Arg Cys Ser Arg Lys Pro

340 345 350ttg cac gtg gac ttc aag gag ctc ggc tgg gac gac tgg atc atc gcg 1283Leu His Val Asp Phe Lys Glu Leu Gly Trp Asp Asp Trp Ile Ile Ala

355 360 365ccg ctg gac tac gag gcg tac cac tgc gag ggc ctt tgc gac ttc cct 1331Pro Leu Asp Tyr Glu Ala Tyr His Cys Glu Gly Leu Cys Asp Phe Pro370 375 380 385ttg cgt tcg cac ctc gag ccc acc aac cat gcc atc att cag acg ctg 1379Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His Ala Ile Ile Gln Thr Leu

390 395 400ctc aac tcc atg gca cca gac gcg gcg ccg gcc tcc tgc tgt gtg cca 1427Leu Asn Ser Met Ala Pro Asp Ala Ala Pro Ala Ser Cys Cys Val Pro

405 410 415gcg cgc ctc agc ccc atc agc atc ctc tac atc gac gcc gcc aac aac 1475Ala Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Tyr Ile Asp Ala Ala Asn Asn

420 425 430gtt gtc tac aag caa tac gag gac atg gtg gtg gag gcc tgc ggc tgc 1523Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val Val Glu Ala Cys Gly Cys

435 440 445agg tag cgcgagggcc ggggaggggg cagccacgcg gccgaggatc cccagctgat 1579Arg450gagcagcagc gggcc 1594<210>2<211>450<212>氨基酸<213>人类<400>2Met Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ala Leu Cys Leu Trp Leu Leu Ser Ala1 5 10 15Cys Arg Pro Arg Asp Gly Leu Glu Ala Ala Ala Val Leu Arg Ala Ala

20 25 30Gly Ala Gly Pro Val Arg Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly

35 40 45Gly Gly Arg Thr Leu Ala Gln Ala Ala Gly Ala Ala Ala Val Pro Ala

50 55 60Ala Ala Val Pro Arg Ala Arg Ala Ala Arg Arg Ala Ala Gly Ser Gly65 70 75 80Phe Arg Asn Gly Ser Val Val Pro His His Phe Met Met Ser Leu Tyr

85 90 95Arg Ser Leu Ala Gly Arg Ala Pro Ala Gly Ala Ala Ala Val Ser Ala

100 105 110Ser Gly His Gly Arg Ala Asp Thr Ile Thr Gly Phe Thr Asp Gln Ala

115 120 125Thr Gln Asp Glu Ser Ala Ala Glu Thr Gly Gln Ser Phe Leu Phe Asp

130 135 140Val Ser Ser Leu Asn Asp Ala Asp Glu Val Val Gly Ala Glu Leu Arg145 150 155 160Val Leu Arg Arg Gly Ser Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Trp Thr Ser

165 170 175Pro Pro Leu Leu Leu Leu Ser Thr Cys Pro Gly Ala Ala Arg Ala Pro

180 185 190Arg Leu Leu Tyr Ser Arg Ala Ala Glu Pro Leu Val Gly Gln Arg Trp

195 200 205Glu Ala Phe Asp Val Ala Asp Ala Met Arg Arg His Arg Arg Glu Pro

210 215 220Arg Pro Pro Arg Ala Phc Cys Leu Leu Leu Arg Ala Val Ala Gly Pro225 230 235 240Val Pro Ser Pro Leu Ala Leu Arg Arg Leu Gly Phe Gly Trp Pro Gly

245 250 255Gly Gly Gly Ser Ala Ala Glu Glu Arg Ala Val Leu Val Val Ser Ser

260 265 270Arg Thr Gln Arg Lys Glu Ser Leu Phe Arg Glu Ile Arg Ala Gln Ala

275 280 285Arg Ala Leu Gly Ala Ala Leu Ala Ser Glu Pro Leu Pro Asp Pro Gly

290 295 300Thr Gly Thr Ala Ser Pro Arg Ala Val Ile Gly Gly Arg Arg Arg Arg305 310 315 320Arg Thr Ala Leu Ala Gly Thr Arg Thr Ala Gln Gly Ser Gly Gly Gly

325 330 335Ala Gly Arg Gly His Gly Arg Arg Gly Arg Ser Arg Cys Ser Arg Lys

340 345 350Pro Leu His Val Asp Phe Lys Glu Leu Gly Trp Asp Asp Trp Ile Ile

355 360 365Ala Pro Leu Asp Tyr Glu Ala Tyr His Cys Glu Gly Leu Cys Asp Phe

370 375 380Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His Ala Ile Ile Gln Thr385 390 395 400Leu Leu Asn Ser Met Ala Pro Asp Ala Ala Pro Ala Ser Cys Cys Val

405 410 415Pro Ala Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Tyr Ile Asp Ala Ala Asn

420 425 430Asn Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val Val Glu Ala Cys Gly

435 440 445Cys Arg

450<210>3<211>430<212>氨基酸<213>人类<400>1Asp Gly Leu Glu Ala Ala Ala Val Leu Arg Ala Ala Gly Ala Gly Pro1 5 10 15Val Arg Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg Thr

20 25 30Leu Ala Gln Ala Ala Gly Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala Ala Val Pro

35 40 45Arg Ala Arg Ala Ala Arg Arg Ala Ala Gly Ser Gly Phe Arg Asn Gly

50 55 60Ser Val Val Pro His His Phe Met Met Ser Leu Tyr Arg Ser Leu Ala65 70 75 80Gly Arg Ala Pro Ala Gly Ala Ala Ala Val Ser Ala Ser Gly His Gly

85 90 95Arg Ala Asp Thr Ile Thr Gly Phe Thr Asp Gln Ala Thr Gln Asp Glu

100 105 110Ser Ala Ala Glu Thr Gly Gln Ser Phe Leu Phe Asp Val Ser Ser Leu

115 120 125Asn Asp Ala Asp Glu Val Val Gly Ala Glu Leu Arg Val Leu Arg Arg

130 135 140Gly Ser Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Trp Thr Ser Pro Pro Leu Leu145 150 155 160Leu Leu Ser Thr Cys Pro Gly Ala Ala Arg Ala Pro Arg Leu Leu Tyr

165 170 175Ser Arg Ala Ala Glu Pro Leu Val Gly Gln Arg Trp Glu Ala Phe Asp

180 185 190Val Ala Asp Ala Met Arg Arg His Arg Arg Glu Pro Arg Pro Pro Arg

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210 215 220Leu Ala Leu Arg Arg Leu Gly Phe Gly Trp Pro Gly Gly Gly Gly Ser225 230 235 240Ala Ala Glu Glu Arg Ala Val Leu Val Val Ser Ser Arg Thr Gln Arg

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260 265 270Ala Ala Leu Ala Ser Glu Pro Leu Pro Asp Pro Gly Thr Gly Thr Ala

275 280 285Ser Pro Arg Ala Val Ile Gly Gly Arg Arg Arg Arg Arg Thr Ala Leu

290 295 300Ala Gly Thr Arg Thr Ala Gln Gly Ser Gly Gly Gly Ala Gly Arg Gly305 310 315 320His Gly Arg Arg Gly Arg Ser Arg Cys Ser Arg Lys Pro Leu His Val

325 330 335Asp Phe Lys Glu Leu Gly Trp Asp Asp Trp Ile lle Ala Pro Leu Asp

340 345 350Tyr Glu Ala Tyr His Cys Glu Gly Leu Cys Asp Phe Pro Leu Arg Ser

355 360 365His Leu Glu Pro Thr Asn His Ala Ile Ile Gln Thr Leu Leu Asn Ser

370 375 380Met Ala Pro Asp Ala Ala Pro Ala Ser Cys Cys Val Pro Ala Arg Leu385 390 395 400Ser Phe Ile Ser Ile Leu Tyr Ile Asp Ala Ala Asn Asn Val Val Tyr

405 410 415Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val Val Glu Ala Cys Gly Cys Arg

420 425 430

Claims

1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，它包括：编码具有人hGDF7蛋白活性的多肽的核苷酸序列，

所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者

所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位的核苷酸序列杂交。

2.如权利要求1所述的DNA分子，其特征在于，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQID NO.2所示的序列。

3.如权利要求1所述的DNA分子，其特征在于，该序列是SEQ ID NO.1中核苷酸177-1529位的序列。

4.一种分离的hGDF7蛋白多肽，其特征在于，它包括：具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。

5.如权利要求4所述的多肽，其特征在于，该多肽是具有SEQ ID NO.2序列的多肽。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的DNA。

7.一种用权利要求6所述载体转化的宿主细胞。

8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，该细胞是大肠杆菌。

9.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，该细胞是真核细胞。

10.一种产生具有hGDF7蛋白活性的多肽的方法，其特征在于，该方法包括：

(d)分离出具有hGDF7蛋白活性的多肽。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，该序列为SEQ ID NO.1中从核苷酸177-1529位。

12.一种能与权利要求4所述的hGDF7蛋白多肽特异性结合的抗体。

13.一种核苷酸分子，其特征在于，它是权利要求1所述DNA分子的反义序列。

14.一种探针分子，其特征在于，它含有权利要求1所述的DNA分子中8-100个连续核苷酸。