CN1357617A

CN1357617A - 一种稠油污染土壤降解菌及使用方法

Info

Publication number: CN1357617A
Application number: CN 00134306
Authority: CN
Inventors: 许华夏; 张海荣; 姚德明; 杨桂芬
Original assignee: Institute of Applied Ecology of CAS
Current assignee: Institute of Applied Ecology of CAS
Priority date: 2000-12-13
Filing date: 2000-12-13
Publication date: 2002-07-10

Abstract

本发明涉及石油中稠油污染土壤降解菌及使用方法。本发明属真菌,名为镰刀菌属(Fusarium Lk.),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC No:0498)。使用方法:将上述菌液按2%～4%接菌量投加到稠油污染土壤里,再加入氮、磷,控制碳∶氮∶磷的比例在100∶5～10∶0.5～5范围内,保持湿度15～25%,温度25～35℃,pH为6～7,定时翻动至降解标准。它降解力强,速率快、易于繁殖培养。

Description

稠油污染土壤降解菌及使用方法

本发明涉及土壤污染的微生物处理技术，具体地说是石油中稠油污染土壤降解菌及使用方法。

随着经济发展，对石油资源的需求不断增加，石油污染日趋恶化，石油污染土壤已成为人们广泛关注的问题。石油污染土壤的治理主要有物理法、化学法、生物法等，其中物理、化学处理法受设备性能、处理费用高等因素影响，很少被采用，然而生物处理技术是具有发展前景的一种处理技术。在生物处理技术中微生物起重要作用，目前主要采用土著菌和投入菌方法。其中土著菌方法需加入其它营养，以满足污染环境中原土著微生物的生长条件，使之成为降解石油的微生物；投入菌方法一般选用白腐真菌为降解菌株，上述方法优点是无二次污染，费用较低。投入菌方法不足之处在于：在短时间内降解率低、速率较慢，在扩大培养上表现为生长得不好、繁殖率低。

为了克服上述不足，本发明提供一种降解稠油能力强、降解效率高、速率快、易于繁殖培养的石油中稠油污染土壤降解菌及使用方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：属真菌，名为镰刀菌属(FusariumLk.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC No：0498)；所述菌株来自于盘锦油田石油污染土壤中，经人工分离、筛选、纯化、驯化微生物技术而得，形态特征为：菌株在察氏培养基上，气生菌丝生长良好，棉絮状，有突起，稍扁，表面白色，背面颜色随时间推移而逐渐变深，由洋红、浅赭色、褐色至黑色，质地致密，边缘整齐，毛绒，无渗出物；菌丝分枝，有隔，透明，分出孢子梗短，分子孢子极少，为球形孢子；

使用方法是按常规微生物方法接种：试管斜面培养，采用马铃薯—葡萄糖琼脂培养基；移接：将上述生长的菌株移接到液体培养基中，温度30℃，振荡培养4～7天；其特征在于：投加：将上所述菌液按2％～4％接菌量投加到稠油污染土壤里，加入氮、磷成分，控制碳∶氮∶磷的比例在100∶5～10∶0.5～5范围内，保持湿度为15～25％，用水控制湿度，温度在25～35℃范围内，PH保持在6～7范围内，定时翻动，至降解标准；

所述碳为污染土壤中的稠油；所述氮为：尿素、硫酸铵、鸡粪；所述磷为：过磷酸钙、磷酸氢二钾；在所述污染土壤中投加2.5％的膨松剂；所述膨松剂由稻壳、麦麸和锯末组成，重量比为5～7∶2～3∶1～3。

本发明具有如下优点：

1.治理石油中稠油污染土壤降解率高、降解速率快，好于投加白腐真菌。稠油污染土壤降解实验证明，采用本发明(F2209)，与现有技术白腐真菌中黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium简称：P)和采绒革盖菌(Cviolusversicolor简称：C)比较，其本发明(F2209)降解率高于黄孢原毛平革菌，购于山东大学(P)约8％，降解速率表现为降解率20％时，平均提前4天；降解率高于采绒革盖菌，购于中国林科院(C)约12％，降解速率表现为降解率20％时，平均提前7.4天。

2.易于繁殖培养，抗逆性强，在扩大培养上表现为生长得好，繁殖率高。将此菌投加到稠油污染土壤中，降解速率表明，很快可成为优势菌。另外，处理费用较低。

图1为本发明一个实施例中二株菌液体油降解实验曲线图。

图2为本发明另一个实施例中二株菌稠油污染土壤降解实验曲线图。

图3为三株菌稠油污染土壤降解实验曲线图。

下面结合附图对本发明作进一步详细说明。

实施例1

本发明属真菌，名为镰刀菌属，拉丁名为Fusarium Lk.，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC No：0498)；所述菌株来自盘锦油田石油污染土壤，经人工稀释法分离、筛选、划线法纯化、并通过增加油浓度的驯化手段，以逐步提高降解能力等微生物技术而得，形态特征为：菌株在察氏培养基上，气生菌丝生长良好，棉絮状，有突起，稍扁，表面白色，背面颜色随时间推移而逐渐变深，由洋红、浅赭色、褐色至黑色，质地致密，边缘整齐，毛绒，无渗出物；菌丝分枝，有隔，透明，分出孢子梗短，分子孢子极少，为球形孢子；

其使用方法，先按常规微生物方法接种：试管斜面培养，采用马铃薯—葡萄糖琼脂培养基；然后移接：将上述生长的菌株移接到500ml三角瓶100ml液体培养基中，在30℃温度情况下，振荡培养7天，振荡转速控制在80～100转/分；投加：将上所述菌液按2％接菌量投加到稠油液体里，再加入硫酸铵、磷酸氢二钾，控制碳∶氮∶磷的比例为100∶5∶0.5，保持温度为25℃，PH保持为6(PH变化的调节可用投加NaOH和HCl来控制)，振荡培养，至实验完毕。

所述液体培养基为：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1升，煮沸30分钟，纱布过滤，葡萄糖20克，磷酸氢二钾1.2克，硫酸镁1克，V_B微量，PH值为6，体积为1升。

以石油中稠油为碳源，其稠油的理化性质：

密度0.97g/cm²；胶质加沥青38.7～32.7％

蜡含量5.8～6.6％；粘度(50℃)2639～3414mpa·s

如图1所示，用两株菌液体油降解实验，一株为本发明(F2209)，一株为白腐真菌中黄孢原毛平革菌(P)，购于山东大学，实验初始浓度为5％的含油量，时间为20天，本发明(F2209)降解率即可达41.2％，而黄孢原毛平革菌(P)降解率为28.1％。降解速率表现为降解率为20％时，本发明(F2209)只需6天，而黄孢原毛平革菌(P)需13.5天。

实施例2

与实施例1不同之处在于：

其使用方法，将培养5天后的上述液体菌液，按3％的接菌量混入稠油污染土壤，土壤中加入鸡粪、过磷酸钙，控制碳∶氮∶磷的比例为100∶10∶5，保持湿度为15％，温度在30℃，PH保持在6.5，定时翻动，至实验完毕。

如图2所示，二株菌稠油污染土壤降解实验，选用二株菌：一株为白腐真菌中黄孢原毛平革菌，购于山东大学(P)，与本发明(F2209)，作比较实验，时间为15天，其中本发明(F2209)降解率为40.24％，黄孢原毛平革菌，购于山东大学(P)为38.51％；降解速率表现为降解率为20％时，本发明(F2209)只需5天，而黄孢原毛平革菌(P)需6天。

实施例3

与实施例1不同之处在于：

其使用方法，将培养4天后的上述液体菌液，按4％的接菌量混入稠油污染土壤中，污染土壤中加入2.5％的膨松剂，膨松剂由稻壳、麦麸、锯末组成，比例为6∶3∶1，土壤中加入尿素、过磷酸钙，控制碳∶氮∶磷的比例为100∶8∶3，保持湿度为25％，温度在35℃，PH保持在7，定时翻动，至实验完毕。

如图3所示，三株菌稠油污染土壤降解实验，选用三株菌：一株为白腐真菌中黄孢原毛平革菌，购于山东大学(P)，另一株购于中国林科院(C)，加上本发明(F2209)，作20天比较实验，其中本发明(F2209)降解率为40.2％，黄孢原毛平革菌，购于山东大学(P)为31.0％，采绒革盖菌，购于中国林科院(C)为28.2％；降解速率表现为降解率为20％时，本发明(F2209)只需4天，而黄孢原毛平革菌(P)需12天，采绒革盖菌(C)需14天。

Claims

1.一种稠油污染土壤降解菌，其特征在于：菌名为镰刀菌属，拉丁名为FusariumLk.，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCCNo：0498)。

2.一种按照权利要求1所述稠油污染土壤降解菌的使用方法，先按常规微生物方法接种：试管斜面培养，采用马铃薯—葡萄糖琼脂培养基；移接：将上述生长的菌株移接到液体培养基中，温度30℃，振荡培养4～7天；其特征在于：投加：将上所述菌液按2％～4％接菌量投加到稠油污染土壤里，加入氮、磷成分，控制碳∶氮∶磷的比例在100∶5～10∶0.5～5范围内，保持湿度为15～25％，用水控制湿度，温度在25～35℃范围内，PH保持在6～7范围内，定时翻动，至降解标准。

3.按照权利要求2所述稠油污染土壤降解菌的使用方法，其特征在于：所述碳为污染土壤中的稠油。

4.按照权利要求2所述稠油污染土壤降解菌的使用方法，其特征在于：所述氮为：尿素、硫酸铵、鸡粪。

5.按照权利要求2所述稠油污染土壤降解菌的使用方法，其特征在于：所述磷为：过磷酸钙、磷酸氢二钾。

6.按照权利要求2所述稠油污染土壤降解菌的使用方法，其特征在于：在所述污染土壤中投加2.5％的膨松剂。

7.按照权利要求6所述稠油污染土壤降解菌的使用方法，其特征在于：所述膨松剂由稻壳、麦麸和锯末组成，重量比为5～7∶2～3∶1～3。