CN1329043C - 沙棘全果素及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种与天然沙棘果实有效活性成分更为接近的沙棘全果提取物，同时提供一种提取该全果素的方法，以及该全果素的一种药用用途。该方法包括:a.采用沙棘全果为原料，干燥、粉碎为10-60目；b.进行超临界CO2首次萃取，获得首次萃取物(即非极性、弱极性油状提取物)留取备用。c.将b步中首次萃取后的滤渣加90%以上食用乙醇，醇提，干燥得粗提物。d.将c步中粗提物进行二元超临界流体萃取，低温负压干燥得二次萃取物；e.将首次萃取物与二次萃取物混合，均质，得到油粉混悬的沙棘全果素。本发明沙棘全果素具有良好的生理活性，该方法使其有效成份全、且含量高、生物活性好，制备的沙棘全果素可在制备治疗肝炎药物中得到应用。
Description
技术领域
本发明涉及沙棘全果提取物以及制备该提取物的方法和该提取物的用途。
背景技术
沙棘果实含有多种生理活性成分，具有广泛的药用价值。中国药典就明确表达其具有“止咳、祛痰、消食化滞、活血散瘀”等功效。在长期的医疗实践中，人们常将它用于治疗咳嗽、慢性支气管炎、胸闷、消化不良、胃痛、跌打瘀肿、闭经等疾病。随着人们对沙棘果的深入研究发现，沙棘不仅具有以上传统的医药用途，它同时还具有调节人体免疫功能、抗肿瘤、抗辐射、抗脂肪肝及肝硬化、调节血脂、抗衰老等一系列药用功效。
目前生产制备沙棘制品：生产沙棘籽油有压榨法、浸出法、超临界CO2萃取法；生产沙棘果渣油有浸出法、超临界CO2萃取法；生产沙棘果油有离心法、溶剂沉淀离心法；生产沙棘黄酮有溶剂除油法(CN1055412C)、大孔树脂吸附法(CN1308084)。无疑，超临界CO2萃取沙棘籽油是最优的方法，除此而外以上方法都存在着严重的缺陷。沙棘果渣油浸出法有溶剂残留，根本不可取；沙棘果渣油常温下是固态，常规超临界CO2萃取出料困难，还必须在管道系统增加保温装置，同时也给系统的清洗带来了困难。沙棘果油离心法需将果汁加温到70℃以上，而且工艺路线长、工艺复杂；溶剂沉淀离心法同样工艺路线长、工艺复杂、生产效率低，更为重要的是会有溶剂残留。沙棘黄酮溶剂除油会使产品中有溶剂残留，而且除油的同时会丢掉很多活性成分；沙棘黄酮大孔树脂吸附法其树脂脱落会使产品中残留甲苯、二甲苯等有毒物质，同时也会丢掉很多活性成分；常规的超临界CO2萃取，无法有效提取沙棘中强极性活性成分(如沙棘黄酮)。再者，以上这些方法通常都是对沙棘果实的不同部位(如果肉、果渣、籽)作为原料进行提取，从而获得相应的果油、果渣油、籽油等。而在果油、果渣油、籽油内，其所含有效活性成分和含量是不同的。由于其有效活性成分不全以及含量上有显著差异，这些单一产品是不能与天然沙棘相提并论的。
从产品开发角度，为了得到一种有效成分更为全面的沙棘制品，ZL98103550.7公开了一种沙棘油复合胶囊。该复合胶囊是将沙棘籽油、沙棘果渣油、沙棘果油、沙棘黄酮粉、沙棘黄酮浸膏按一定的比例量进行混合后制成的。该方法仍存在一定问题。首先是简单地将各种提取物进行量化混合，破坏了天然物质的有机组成，故有碍于充分发挥天然植物特有的生理活性。其次，在前面介绍目前生产制备沙棘制品方法中，可以清楚的看到该专利产品中的成分沙棘果渣油、沙棘果油、沙棘黄酮不仅存在生产工艺上的缺陷，更为严重的是沙棘黄酮中会存在有机溶剂残留或大孔树脂脱落的甲苯、二甲苯等有毒物质，给产品造成了致命的问题。
发明内容
本发明的目的就是提供一种沙棘全果素，即一种与天然沙棘果实有效活性成分更为接近的沙棘全果提取物，同时提供一种提取该全果素的方法，以及该全果素的一种药用用途。
本发明的目的是这样实现的：本发明提供了一种以沙棘全果为原料，采用二元超临界流体萃取而获得的沙棘全果素，该沙棘全果素含有的有效成分为：十七种脂肪酸(即肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、月桂酸、月桂烯酸、棕榈酸、癸酸、花生四烯酸、花生烯酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、十五碳酸、芥酸、花生酸、十七碳酸)、维生素E(包括有α-Ve、β-Ve)、维生素C、β-胡萝卜素、黄酮类化合物(槲皮素、异鼠李素、山奈酚及其苷类、杨梅酮、儿茶酸等)，氨基酸十八种，非皂化物(包括胆甾烷、豆甾烷、豆甾醇系列、谷甾醇系列)、挥发油、微量元素。用以弥补现有沙棘果油、沙棘果渣油，沙棘黄酮生产工艺不合理，并完全避免了产品的有机溶剂残留，保证了产品的安全性。
为获得这种沙棘全果素，需采用一种二元超临界流体萃取方法进行沙棘全果提取，该方法含有以下步骤：
a、采用沙棘全果为原料，干燥、粉碎为10-60目；
b、进行超临界CO2首次萃取，即将a步中的粉碎物在萃取温度35-65℃、萃取压力20-40MPa条件下进行萃取，获得首次萃取物(即非极性、弱极性油状提取物)留取备用。
c、将b步中首次萃取后的滤渣加90％以上食用乙醇，在40-60℃保温罐中浸提8-20小时，离心得浸提液，回收乙醇，然后远红外微波组合负压干燥得粗提物(即中强极性粉状提取物)；为提取更加完全，可将滤渣按上述步骤再重复一次，以增加沙棘全果得率。
d、将c步中粗提物进行二元超临界流体萃取，萃取温度35-60℃，萃取压力25-45MPa，解析压力6-12MPa，解析温度35-50℃的条件下，萃取2-3小时，萃取过程中注入95％食用乙醇，其物料比为100％-200％，得萃取液，回收乙醇，低温负压干燥得二次萃取物(即中强极性粉状萃取物)；
e、将首次萃取物与二次萃取物混合，均质，得到油粉混悬的沙棘全果素。
本发明沙棘全果素具有良好的生理活性，可在制备治疗肝炎药物中得到应用。
本发明的创新点之一在于：采用的原料为沙棘全果，它包含有沙棘果肉、果皮、种子，因而首先从原料的选用上可以保持天然沙棘果实的完整性。无疑，本发明为沙棘全果，特别是为人工种植的大果沙棘全果的产品开发提供了最佳方法。
本发明的创新点之二在于：本发明方法采取二元超临界流体萃取使沙棘全果可以在超临界流体的极性有梯度变化状况下进行分级提取，使原料中的不同分子量、不同极性、不同结构的活性物质在其适合的状态下进行分级提取，再进一步均质，从而使提取物最大限度地包含了沙棘全果原料中所含有的活性成份。从而得到较为接近天然沙棘果实有效成份的沙棘全果素。
本发明的创新点之三在于：本发明方法的实施，完全克服了有机溶剂提取沙棘黄酮造成的溶剂残留，或大孔树脂吸附法提取沙棘黄酮造成的树脂脱落物甲苯、二甲苯等有害物质的残留，使沙棘产品真正做到了安全。
本发明制备的沙棘全果素，可以一并检测到十七种脂肪酸(即肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、月桂酸、月桂烯酸、棕榈酸、癸酸、花生四烯酸、花生烯酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、十五碳酸、芥酸、花生酸、十七碳酸)、维生素E(包括有α-Ve、β-Ve)、维生素C、β-胡萝卜素、黄酮类化合物(槲皮素、异鼠李素、山奈酚及其苷类、杨梅酮、儿茶酸等)，氨基酸十八种，非皂化物(包括胆甾烷、豆甾烷、豆甾醇系列、谷甾醇系列)、挥发油、微量元素等。
成分检测表明，本发明方法提取的沙棘全果素，包含了沙棘果皮、果肉、种子之中所有能够检测到的物质。由此可见本发明的沙棘全果素克服了现有沙棘产品有效成分不全、有效成分不均衡的弊端。
本发明是在超临界CO2萃取状态下进行的，故保持了超临界CO2萃取法固有的优点，低温萃取避免了提取过程对有效成份的破坏；萃取物中无有机溶剂残留物；对环境无污染。
用本发明方法提取的沙棘全果素其有效成份全、且含量高，生物活性好。其优异的效果通过下列实验得到了证实。
试验是针对沙棘全果素和沙棘籽油对化学性肝损伤作用进行的比较。其目的是观察沙棘全果素和沙棘籽油对小鼠化学性肝损伤保护作用有无差异，以探讨沙棘全果素的活性效力。
受试物：
沙棘全果素为油粉混悬棕黄色液体，沙棘籽油为棕黄色液体，由河北神兴沙棘研究院超临界CO2萃取实验室提供，沙棘籽油保肝人群推荐日摄入量为0.05g/kg.bw。
四氯化碳(CCl4)分析法，由北京化学试剂厂生产，批号990607。
试验动物：SPF级昆明种雄性小鼠，体重20～22g，共140只(其中20只动物备用)由河北医科大学实验动物中心提供，批号为冀动字第20020601号。
试验分组及剂量设计：将动物随机分成六组，每组20只，按沙棘籽油保肝人群日摄入量0.05g/kg.bw分别扩大5、10、20倍(即0.25、0.5、1.0g/kg.bw)作为受试物组的低、中、高剂量组，另设正常、沙棘籽油和肝损伤对照组，正常对照组和肝损伤对照组按0.20ml/10g.bw给予蒸馏水，沙棘籽油组按0.5g/kg.bw灌胃。
试验方法：每日经口灌胃给予，动物每周称重一次，按体重变化调整受试物剂量，于试验第31天将各组动物隔夜禁食16小时，肝损伤阳性组、沙棘籽油组及受试物组一次经腹腔注射给予0.15％的CCl4油溶液0.10ml/10g.bw，正常对照组给予等量蒸馏水，沙棘籽油组和受试物组继续受试物至试验结束时。给予CCl424小时和48小时后处死动物，进行各项指标的检测。
检测指标：
血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的测定，采用SABA-180型意大利产自动生化分析仪，上海长征生化试剂公司生产的相应试剂盒测定。
肝脏称重及脏体系数
试验结果：
各剂量组对小鼠体重的影响见表1
表1沙棘全果提取物对小鼠体重的影响(均数±标准差)
| 组别 | 动物数(只) | 初重(g) | 中期重(g) | 终重(g) |
| 正常对照组 | 10 | 22.2±1.8 | 35.4±3.1 | 40.1±5.1 |
| 肝损伤对照组 | 10 | 22.1±1.6 | 35.8±2.8 | 39.0±4.2 |
| 沙棘籽油组 | 10 | 22.4±1.5 | 36.5±3.6 | 38.0±3.0 |
| 低剂量组 | 10 | 22.1±1.6 | 33.1±3.0 | 38.6±2.9 |
| 中剂量组 | 10 | 22.5±1.0 | 32.4±2.6 | 38.6±2.9 |
| 高剂量组 | 10 | 22.5±1.2 | 35.0±3.4 | 38.0±4.2 |
小鼠血清中ALT、AST结果见表2
给予CCl4后肝损伤阳性对照组ALT和AST值明显升高。24小时后，沙棘籽油组动物血清中ALT和AST值与肝损伤阳性对照组比较，差异有显著性(P＜0.05)，受试物低、中、高剂量组与肝损伤阳性对照组比较，差异有极显著性(P＜0.01)。
表2各组小鼠血清ALT、AST测定值(均数±标准差)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 24hALT(V/L) | 24hAST(V/L) | 48hALT(V/L) | 48hAST(V/L) |
| 正常对照组 | 0 | 10 | 34.1±10.0 | 152.3±52.1 | 41.3±5.7 | 123.4±20.8 |
| 肝损伤对照组 | 0 | 10 | 321.0±69.0 | 350±105.0 | 188.9±19.5 | 198.0±42.3 |
| 沙棘籽油组 | 0.5 | 10 | 235.2±53.2* | 283±32.0* | 138.6±10.5 | 155.2±5.6 |
| 低剂量组 | 0.25 | 10 | 219.0±54.5** | 263.8±25.7** | 125.5±11.6 | 156.2±9.2 |
| 中剂量组 | 0.5 | 10 | 210.0±15.2** | 158.2±24.0** | 120.7±10.8 | 130.5±17.9 |
| 高剂量组 | 1.0 | 10 | 216.2±23.0** | 165.7±21.2** | 126.3±7.7 | 116.3±12.9 |
*与肝损伤对照组比较P＜0.05 **与肝损伤组比较P＜0.01小鼠体重、肝重和脏体系数见表3
表3沙棘全果提取物对小鼠脏器重量及系数的影响(均数±标准差)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 体重(g) | 肝重(g) | 脏体比 |
| 正常对照组 | 0 | 10 | 40.1±5.1 | 1.61±0.22 | 4.2±0.46 |
| 肝损伤对照组 | 0 | 10 | 39.0±4.2 | 1.65±0.13 | 4.6±0.35 |
| 沙棘籽油组 | 0.5 | 10 | 38.0±3.0 | 1.60±0.21 | 4.4±0.32 |
| 低剂量组 | 0.25 | 10 | 38.2±2.8 | 1.55±0.14 | 4.2±0.35 |
| 中剂量组 | 0.5 | 10 | 38.6±2.9 | 1.53±0.15 | 4.3±0.28 |
| 高剂量组 | 1.0 | 10 | 38.8±4.2 | 1.58±0.23 | 4.1±0.47 |
由表3可见沙棘籽油组、受试物各剂量组体重、肝重和脏体系数与肝损伤组及正常对照组比较均无明显差异。
实验表明
给予CCl4后，24小时转氨酶ALT和AST检验结果经统计处理，沙棘籽油组与肝损伤阳性对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)，沙棘全果素低、中、高剂量组与肝损伤阳性对照组比较，有极显著性差异(P＜0.01)。48小时后沙棘籽油组及沙棘全果素肝损伤恢复程度更为明显。可见沙棘全果素对小鼠化学性肝损伤保护作用要优于沙棘籽油。这也表明，沙棘全果素的生物活性要比沙棘种子油高。
具体实施方式：
实施例1：
含水8％的120公斤沙棘全果，经过SCC-10型远红外微波组合负压干燥设备，于60℃负压干燥10分钟，经粉碎机粉碎至40目，经过SFE-300型超临界CO2萃取设备，于26Mpa，45℃，流量1000kg/h进行超临界CO2萃取，得到非极性、弱极性油状提取物20公斤，留取备用。其余92公斤沙棘滤渣，用500升92％食用乙醇，于50℃保温罐中浸提10小时，离心，回收乙醇，经过SCC-10型远红外微波组合干燥设备，于60℃负压干燥25分钟，得到中强极性的粉状粗提物16公斤。粗提物经过SFE-100型超临界CO2萃取中试设备，于35MPa，60℃，流量300kg/h，解析压力8MPa，解析温度40℃进行二元超临界流体萃取，萃取过程中注入16公斤95％食用乙醇，时间为2小时，得到萃取液20升。回收乙醇，再经过SCC-10型远红外微波组合干燥设备于60℃负压干燥，得沙棘中强极性的粉状萃取物0.42公斤，其中沙棘黄酮以异鼠李素计检测，其含量达32％。
将以上两次超临界流体萃取物混合，过胶体磨得到油粉混悬的沙棘全果素。
实施例2：
含水8％的120公斤沙棘全果，经过SCC-10型远红外微波组合负压干燥设备，于60℃负压干燥10分钟，经粉碎机粉碎至20目，经过SFE-300型超临界CO2萃取设备，于26MPa，45℃，流量1000kg/h进行超临界CO2萃取，得到非极性、弱极性油状提取物20公斤，留取备用。其余92公斤沙棘滤渣，用500升95％食用乙醇，于50℃保温罐中浸提12小时，离心，回收乙醇，经过SCC-10型远红外微波组合干燥设备，于60℃负压干燥25分钟，得到中强极性的粉状粗提物16公斤。粗提物经过SFE-100型超临界CO2萃取中试设备，于35MPa，60℃，流量300kg/h，解析压力10MPa，解析温度35℃进行二元超临界流体萃取，萃取过程中注入30公斤95％食用乙醇，时间为2.5小时，得到萃取液20升。回收乙醇，再经过SCC-10型远红外微波组合干燥设备于60℃负压干燥，得沙棘中强极性的粉状萃取物0.54公斤，其中沙棘黄酮以异鼠李素计检测，其含量达41％。
将以上两次超临界流体萃取物混合，过胶体磨得到油粉混悬的沙棘全果素。
从以上实施例中得到的沙棘全果素可以用于制备治疗肝炎药物。例如，它可以制成沙棘全果素软胶囊，用作肝炎疾病的治疗药物。
Claims (3)
1、一种沙棘全果素，其特征在于它以沙棘的全果为原料，采用二元超临界流体萃取获得，该沙棘全果素含有的有效成分为：十七种脂肪酸即肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、月桂酸、月桂烯酸、棕榈酸、癸酸、花生四烯酸、花生烯酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、十五碳酸、芥酸、花生酸、十七碳酸，包括有α-Ve、β-Ve的维生素E，维生素C，β-胡萝卜素，包括槲皮素、异鼠李素、山奈酚及其苷类、杨梅酮、儿茶酸的黄酮类化合物，氨基酸十八种，包括胆甾烷、豆甾烷、豆甾醇系列、谷甾醇系列的非皂化物，挥发油，微量元素。
2、一种提取沙棘全果素的方法，其特征在于它含有以下步骤：
a、采用沙棘全果为原料，干燥、粉碎为10-60目；
b、进行超临界CO2首次萃取，即将a步中的粉碎物在萃取温度35-65℃、萃取压力20-40MPa条件下进行萃取，获得首次萃取物留取备用；
c、将b步中首次萃取后的滤渣加90％以上食用乙醇，在40-60℃保温罐中浸提8-20小时，离心得浸提液，回收乙醇，负压干燥得粗提物；
d、将c步中粗提物进行二元超临界流体萃取，萃取温度35-60℃，萃取压力25-45MPa，解析压力6-12MPa，解析温度35-50℃的条件下萃取2-3小时，萃取过程中注入95％食用乙醇，其物料比为100％-200％，得萃取液，回收乙醇，低温负压干燥得二次萃取物；
e、将首次萃取物与二次萃取物混合，均质，得到油粉混悬的沙棘全果素。
3、根据权利要求1所述的沙棘全果素作为制备治疗肝炎药物的应用。
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