CN1327229C - 用pH计检测牛奶中抗生素的方法 - Google Patents
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Abstract
用pH计检测牛奶中抗生素的方法。国际上通常采用的酶联免疫法适合现场的快速检验，但试剂都是从国外进口，价格昂贵。本发明的方法是：将被检测的奶样置于容器中，所述的容器为发酵容器，将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温，将奶样重量份数10%的乳酸菌接种于奶样中摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上，纪录结果再将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温30分钟，将奶样摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上，纪录结果，进行两次结果的对比，当pH变化小于0.03，则奶样中的抗生素含量在6ppb以上。本方法用于乳品的抗生素项目检测。
Description
技术领域：本发明涉及一种通过用pH计检测乳酸发酵的酸度的方法检测牛奶中抗生素含量是否超标的方法。
背景技术：没有优质的原料奶就没有办法生产出优质的乳制品，优质原料奶不仅仅是指其理化指标和卫生指标符合规定的标准，而且其中的抗生素含量也应当低于规定的最大残留量6ppb。根据国际标准要求，1剂量的治疗性抗生素药物(如青霉素类)足以污染200吨牛奶，若不能通过严格有效的管理和监测，将含有抗生素的牛奶分离开，会对乳品的出口质量造成极大影响，进而给企业造成巨大损失。
目前，有多种抗生素的检测方法大体上可以分为纯发酵法和酶联免疫法两类。我国通常采用发酵法，其检测费用低，但花费的时间长、不能配合生产及时控制，质量不能保证。国际上通常采用的酶联免疫法适合现场的快速检验，但试剂都是从国外进口，价格昂贵，每吨牛奶检测费用在100元以上，一家中型乳品企业每年的检测费用需要数千元，占了利润的大部分，内资企业由于乳品价格的限制难以承受。而在生产实际检测过程中，要求抗生素的检测要迅速，又不能大幅度的增加成本，寻找一种检测速度快、检测费用低的抗生素检测方法，对现阶段我国的乳品加工生产企业有着重大意义。
发明内容：本发明的目的是提供一种通过用pH计检测乳酸发酵的酸度的从而快速的低成本的检测牛奶中抗生素含量是否超标的方法。
上述的目的通过以下的技术方案实现：
用pH计检测牛奶中抗生素的方法，其过程包括：将被检测的奶样置于容器中，所述的容器为发酵容器，将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温，将奶样重量份数10％的乳酸菌接种于奶样中摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上，纪录结果再将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温30分钟，将奶样摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上，纪录结果，进行两次结果的对比，当pH变化小于0.03，则奶样中的抗生素含量在6ppb以上。
上述的用pH计检测牛奶中抗生素的方法，为了校正结果的误差，采用无抗生素的奶样同时做对比校正样。
上述的用pH计检测牛奶中抗生素的方法，所采用的pH计应定期进行酸度校验。
这个技术方案有以下有益效果：
1.本发明的方法是利用发酵法的原理，将牛奶中接种数量占绝对优势的乳酸菌，在适宜温度下，乳酸菌利用牛乳中的乳糖，将乳糖分解成乳酸等酸性物质，使牛乳中的酸度在短时间内明显的增高，利用对酸度反映较灵敏的pH计检测牛奶中的酸度变化情况，就可以间接地检测出牛奶中是否含有抗生素。本方法的检测原理清楚，操作简单易行，易于掌握，便于推广应用，具有较好的应用发展前景。
2.本方法切实可行，通过进行以下对比性发酵试验，可以证实乳酸菌和抗生素对牛奶中酸度变化有影响。
实验1：
由此可以认定，牛奶中的酸度值的变化，和加入牛奶中乳酸菌量和品种以及抗生素的含量有直接关系。
申请人提供以下实验以证实各因素之间的变化关系：
| 乳酸菌 | Franc菌 | |||||||||
| 实验编组 | 1 | 5 | 4 | 10 | 6 | 8 | 9 | 12 | 28 | |
| 试验处 | 复原乳ml | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 接菌量 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | |
| 理 | 抗生素 | 不加 | 0.3ml | 0.4ml | 0.5ml | 不加 | 0.3ml | 0.4ml | 0.5ml | 0.6ml |
| 酸度变化 | 发酵前pH | 6.58 | 6.58 | 6.58 | 6.58 | 6.67 | 6.67 | 6.67 | 6.67 | 6.67 |
| 发酵后 | 4.49 | 4.71 | 4.82 | 4.96 | 4.39 | 5.03 | 5.53 | 6.02 | 6.60 | |
| 本试验采用的脱脂奶浓度、抗生素的品种和培养温度同上表，其他条件相同。 | ||||||||||
通过以上检测可以看出，在牛奶中加入少量的乳酸菌，短时间牛奶中的酸度变化不大，当加入一定量的乳酸菌后，牛乳中的酸度在30分钟内发生了较明显的变化，乳酸菌加入的量越多，发酵的时间越长、酸度的变化越明显。
而在牛奶中含有抗生素时，因抗生素具有破坏微生物细胞壁的作用，抑制了乳酸菌的繁殖和活力，使牛奶中的酸度变化不大，而牛乳中的抗生素的含量越高，对乳酸菌的杀灭、抑制能力越强，牛乳的酸度变化越小。所以在牛乳中加入一定量的乳酸菌，在一定的条件下培养一定的时间后，根据牛奶中的酸度变化可以检测出其中是否含有抗生素。
下面的发酵试验数据能说明牛奶中的酸度和乳中的乳酸菌、抗生素含量的关系：
| 菌种名称 | 乳酸菌 | Franc菌 | ||||
| 实验编组 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 脱脂奶粉复原乳 | 30ml | 30ml | 30ml | 30ml | 30ml | 30ml |
| 菌种接菌量 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
| 抗生素加入量 | 0 | 0.1ml | 0.2ml | 0 | 0.1ml | 0.2ml |
| 初始pH值 | 6.54 | 6.54 | 6.54 | 6.54 | 6.54 | 6.54 |
| 20分钟后pH值 | 6.51 | 6.53 | 6.53 | 6.45 | 6.47 | 6.48 |
| 40分钟后pH值 | 6.48 | 6.53 | 6.53 | 6.43 | 6.45 | 6.46 |
通过以上检测可以看出，当牛乳中接种了乳酸菌，并在适宜的温度下培养一段时间以后，通过牛乳中的pH值得变化，可以认定其中是否含有抗生素。
4.本方法的检测结果准确，申请人提供以下对比试验记录，可以证实本方法检测的结果与国家标准规定的发酵法检测结果相吻合。
| 发酵试验 | pH计检测试验得到的pH值 | ||||||||
| 实验编组 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |
| 实验处理 | 脱脂奶粉复原乳 | 100ml | 100ml | 100ml | 100ml | 100ml | 100ml | 100ml | 100ml |
| 接菌量 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | |
| 抗生素 | 不加 | 0.3ml | 0.6ml | 不加 | 0.3ml | 0.6ml | 0.9ml | 1.2ml | |
| 酸度变化 | 发酵3小时后凝固状态 | 凝固 | 不凝固 | 不凝固 | 6.56初始 | 6.56初始 | 6.56初始 | 6.53初始 | 6.51初始 |
| 6.5120分钟后 | 6.5320分钟后 | 6.5520分钟后 | 6.5220分钟后 | 6.5020分钟后 | |||||
由此可以清楚地看出，该方法的结果与采用国家标准的方法得到的结果相符合，并且检测时间短，成本非常低，方法简便，由此解决了长期以来一直想解决而没有办法解决的问题。
5.采用本方法，有效的避免了有抗生素乳品的混入，使我们的产品快速与国际接轨，符合现阶段我国的现状，满足了企业要求，降低企业成本，对社会发展有着不可估量的作用。
本发明的具体实施方式：
实施例1：
用pH计检测牛奶中抗生素的方法，其过程包括：将被检测的奶样置于容器中，所述的容器为发酵容器，将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温，将奶样重量份数10％的乳酸菌接种于奶样中摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上时，纪录结果。
再将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温30分钟，将奶样摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上时，纪录结果，进行两次结果的对比，当pH变化小于0.03，根据统计数据得到的结果奶样中的抗生素含量在6ppb以上，可以判定为抗生素不合格。
实施例2：
使用实施例1所述的用pH计检测牛奶中抗生素的方法时，为了校正温度，时间和操作环境对结果的误差，采用无抗生素的奶样同时做对比校正样。
实施例3：
实施利1或者2所述的用pH计检测牛奶中抗生素的方法，所采用的pH计应定期进行酸度校验。以校正结果。
Claims (3)
1、一种用pH计检测牛奶中抗生素的方法，其过程包括：将被检测的奶样置于容器中，其特征是：所述的容器为发酵容器，将装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温，将奶样重量份数10％的乳酸菌接种于奶样中摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上，记录结果，再将所述装有奶样的容器置于35-37.5℃环境下保温30分钟，将奶样摇匀，在摇混状态下用pH计测定奶样中的pH值，检测结果稳定在2秒钟以上，记录结果，进行两次结果的对比，当pH变化小于0.03，则奶样中的抗生素含量在6ppb以上。
2、根据权利要求1所述的用pH计检测牛奶中抗生素的方法，其特征是：为了校正结果的误差，采用无抗生素的奶样同时做对比校正样。
3、根据权利要求1或2所述的用pH计检测牛奶中抗生素的方法，其特征是：所采用的pH计应定期进行酸度校验。
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