CN1310939C - 从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，其是在食用油中加入水或缓冲液，剧烈振荡混匀，离心；取下层水相，加入无水乙醇或异丙醇，轻缓颠倒混匀，离心；加入乙醇洗涤沉淀两次。本发明适宜于从DNA含量稀少的食用油中提取到DNA。应用该方法提取到的DNA，适宜于进行PCR扩增、检测。

Description

从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法
技术领域
本发明属于利用物理或化学的方法进行分离的技术领域，涉及一种从食用油中提取出所需成分的方法，特别是涉及一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法。
背景技术
脱氧核糖核酸(DNA)是遗传物质，通过分析检测DNA，可以鉴别基因及其生物种类。食用油经过一系列高温等特殊物理条件处理，DNA破坏严重，很难从食用油中提取足以检测的DNA，因此也很难鉴别食用油生产原料的品种或品系。
与本发明较相关的现有技术是《中国油脂》2002年第2期刊登的“PCR法定性检测食用油脂中转基因成分”。该文献提到了食用油中脱氧核糖核酸(DNA)提取方法，在2mL离心管中分2次加入0.5mL食用油及400μl TE溶液，颠倒混匀5min，室温下离心13000r/m、3min，去除上层油脂层；再次向同一支管中分2次加入0.5mL食用油，离心，去除上层油脂层，反复2～5次。在获取的约400μl的水相中，加入400μl CTAB提取液和2μlRNase酶溶液旋涡振荡1-3s，置于65℃水浴30min，加入等体积24∶1氯仿/异戊醇，轻缓颠倒数次后室温静置5min；13000r/m室温下离心5min(如果上清液比较浑浊，重复此步骤)；转移并等分上清液于2支1.5mL离心管中；于每支离心管中加入lμg-2μg担体(Carrier)，并加入0.6体积预冷的异丙醇，颠倒混匀后于-20℃静置1～2h沉淀DNA；13000r/m室温离心10min，弃去上清液；用70％乙醇洗涤沉淀2次，干燥沉淀物；每支离心管中加入30μl-50μl0.1×TE溶解沉淀，4℃保存备用。
上述方法过程概括如下：TE抽提DNA——CTAB提取液提取DNA(RNase酶降解RNA)——氯仿/异戊醇抽提蛋白——异丙醇和担体(Carrier)共沉淀DNA——乙醇洗涤DNA。
由此可见，该现有技术中所提及的方法较为烦琐，因此有必要提供一种简单、快速、有效的从食用油中提取DNA的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，应用这种方法，可有效地从食用油中提取DNA，以利于随后的DNA检测，该方法能够有效克服现有技术中存在上述缺陷。
本发明的目的是这样实现的：一种从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其关键在于，所述的提取方法具有如下工艺步骤：
A.首先在食用油中加入水或缓冲液，并分离出含脱氧核糖核酸的水相；
B.然后用乙醇或异丙醇沉淀水相中的脱氧核糖核酸；
C.最后用乙醇洗涤脱氧核糖核酸。
本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其中工艺步骤A所述的抽提过程需剧烈震荡(每分钟200次以上往复式运动)，并通过离心分离出水相。
本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，加入的缓冲液pH在5.0～9.0之间。
本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，乙醇最终浓度为60～80％，异丙醇最终浓度为30～50％。
也就是说，本发明提供了一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，其是在食用油中，加入水或缓冲液，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相，加入2.5倍体积无水乙醇或0.8倍体积的异丙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m，4℃离心20min，得DNA。
本发明适宜于从DNA含量稀少的食用油中提取到DNA。应用该方法提取到的DNA，适宜于进行PCR扩增、检测。
按照本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，采用以下简单过程：水或缓冲液抽提DNA——乙醇或异丙醇沉淀DNA——乙醇洗涤DNA，得到了适宜于进行PCR扩增、检测的DNA。DNA片段游离于食用油中，加入水或缓冲液后，剧烈震荡，使DNA片段和水或缓冲液充分接触，导致DNA片段溶于水或缓冲液中，由于食用油中几乎不含有蛋白质和RNA等杂质，因此直接加入2.5倍体积无水乙醇或0.8倍体积的异丙醇，沉淀DNA，最后用70％乙醇洗涤沉淀两次，即得到适宜于进行PCR扩增、检测的DNA。
使用本提取方法，能够简单、快速、高效地从食用油中提取到DNA。
下面，结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但它们并非用于对本发明的限定。
具体实施方法
实施例1：
取30ml食用油样品至50ml离心管中，加入15ml水，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相转至另一50ml离心管中，加入2.5倍体积无水乙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入500μl 70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m离心20min，得DNA。
实施例2：
取15ml食用油样品至50ml离心管中，加入10ml TE缓冲液[10mmol/LTris-HCl(pH 8.0)，1mmol/L EDTA(pH 8.0)]，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相转至另一50ml离心管中，加入1.5倍体积无水乙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入500μl 70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m离心20min，得DNA。
实施例3：
取50ml食用油样品至100ml离心管中，加入25ml磷酸钾缓冲液(100mmol/L、pH7.5)，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相转至另一100ml离心管中，加入0.8倍体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入500μl 70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m离心20min，得DNA。
与现有技术相比，本发明具有的优点为：可简单、快速、高效地从食用油中提取到DNA。

Claims (4)

1、一种从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，所述的提取方法具有如下工艺步骤：
A.首先在食用油中加入水或缓冲液，并分离出含脱氧核糖核酸的水相；
B.然后用乙醇或异丙醇沉淀水相中的脱氧核糖核酸；
C.最后用乙醇洗涤脱氧核糖核酸。
2、如权利要求1所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，工艺步骤A所述的抽提过程需剧烈震荡，并通过离心分离出水相。
3、如权利要求1或2所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，加入的缓冲液pH在5.0～9.0之间。
4、如权利要求1或2所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，乙醇最终浓度为60～80％，异丙醇最终浓度为30～50％。
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PCR法定性检测食用油脂中专基因成分 覃文等，中国油脂，第27卷第2期 2002 *

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